Orientador: Elizabeth Moreira dos Santos Schmidt / Resumo: A coccidiose é uma das doenças mais importantes que acometem leitões lactentes no Brasil. A administração de toltrazuril é usada no mundo todo para a prevenção de coccidiose em leitões, entretanto, não foram encontradas pesquisas sobre a correta profilaxia da doença no Brasil. Sendo assim, este estudo tem como objetivo investigar diferentes protocolos de administração de toltrazuril (FARMACOX® 5%, suspensão oral, Farmabase Saúde Animal, SP, Brasil) sob as condições de campo no estado de São Paulo. Para isso, 495 leitões foram aleatoriamente divididos em quatro diferentes grupos: 125 leitões (grupo controle) que não receberam toltrazuril; 127 leitões que receberam toltrazuril no terceiro dia de vida (grupo dois); 116 leitões que receberam toltrazuril no quinto dia de vida (grupo três), e 127 leitões que receberam duas doses de toltrazuril, uma com três e outra com sete dias de idade (grupo quatro). A excreção de oocistos foi avaliada por análises coproparasitológicas quando os animais tinham cinco, sete, 12, 21 e 63 dias de idade e as pesagens individuais foram realizadas aos três, 21 e 132 dias de idade. Os dados foram analisados usando o peso ao terceiro dia como uma covariável independente. Os resultados foram separados por médias e ajustados por Tukey (p ≤ 0,05). Os animais dos grupos dois e quatro não excretaram Cystoisospora suis, mas um animal do grupo controle e um do grupo três (aos 63 dias de idade) excretaram oocistos de C. suis. Os leitões do grupo controle apresen... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Leticia Scherer Koester / Banca: Ian Castro Gamboa / Banca: Luis Vitor Silva do Sacramento / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: Objetivou-se, neste trabalho, realizar um estudo químico-farmacológico, bem como o desenvolvimento de uma formulação galênica das folhas de Spondias dulcis Forst., conhecida popularmente como cajarana. Está planta apresenta uso popular como antiinflamatório e antisséptico. Inicialmente, foi feita uma avaliação farmacognóstica e microbiológica da droga. Em seguida, foram produzidos extratos hidroalcoólicos utilizando delineamento experimental e desenvolvido e validado um método para quantificação de polifenóis totais. O extrato hidroalcoólico foi avaliado em ensaios in vitro (atividade antimicrobiana e antioxidante) e in vivo (atividade laxante e toxicidade aguda). O componente majoritário foi identificado e isolado, utilizando técnicas de cromatografia em contracorrente e de espectroscopia. Por fim, foi desenvolvida e caracterizada uma dispersão sólida obtida com extrato e o polímero PVP K30 e avaliada sua estabilidade, utilizando cinética não isótermica. A droga vegetal foi caraterizada pela densidade aparente, tamanho de partícula, perda por dessecação, pH e teor de extrativos e controle microbiológico. A espectroscopia na região do infravermelho permitiu a identificação de grupamentos específicos provenientes de diversos metabólitos e a análise térmica identificou seis etapas de degradação. O extrato escolhido foi obtid por turboextração, utilizando a solução de 50% de etanol com 20% de droga vegetal. O método desenvolvido e validado para polifenóis totais apresentoi-se de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this work was to conduct a chemical-pharmacological study, as well as the development of a galenic formulation of the leaves of Spondias dulcis Forst., known as cajarana. This plant presents popular use as antiinflammatory and antiseptic. Initially, a pharmacological and microbiological evaluation of the herbal drug. Hydroalcoholic extracts were produced using experimental design and developed and validated a method for quantification of total polyphenols. The hydroalcoholic extract was evaluated in vitro tests (antimicrobial and antioxidant activity) and in vivo (laxative activity and acute toxicity). The main component, identified and isolated, countercurrent chromatography and spectroscopy techniques. Finally, a solid dispersion obtained with extract and the polymer PVP K30 was developed and characterized and its stability evaluated using non-isothermal kinetics. The herbal drug was characterized by apparent density, part size, desiccation loss, pH and extractive content and microbiological control. The infrared spectroscopy identified of specific data of several metabolites and a thermal analysis identified six stages of degradation. The extract were produced by turboextraction, use a solution of 50% ethanol with 20% plant drug. The method developed and validated for total polyphenols presented within the conformities in the figures of merit (selectivity, linearity, precision, accuracy and robustness). The pharmacological activity verified in the case of ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O Vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) é um dos patógenos mais importantes na pecuária bovina em todo mundo, principalmente por desencadear manifestações clínicas relacionadas à esfera reprodutiva. A infecção em fêmeas gestantes pode resultar em abortamentos, reabsorções embrionárias, mumificações fetais, má formações e nascimento de bezerros fracos além do aparecimento de animais persistentemente infectados e imunotolerantes ao vírus, que são a principal fonte de infecção e disseminação da doença nos rebanhos. Atualmente, a complexidade do diagnóstico e consequentemente a patogenia, estão relacionados às diferenças genotípicas do agente. Por isso, a presente pesquisa teve como objetivo verificar a ocorrência dos genótipos BVDV-1 (Singer) e BVDV-2 (VS-253) em vacas, e respectivos fetos, abatidas em um frigorífico no Estado de São Paulo por meio da análise do soro sanguineo por meio da técnica de virusneutralização. No contexto geral, 52,51% (115/219) das vacas testadas foram reagentes, mas nenhum feto (0/219) reagiu na virusneutralização. Pela análise cruzada conforme a estirpe viral, observou-se que 42% (92/219) das vacas foram reagentes tanto para o genótipo BVDV-1 como para o genótipo do BVDV-2. Por outro lado 4,10% (9/219) reagiram apenas para o genótipo BVDV-1 e 6,39% (14/219) reagiram apenas para o genótipo do BVDV 2. Notou-se portanto que ambas as estirpes estão disseminadas nas regiões estudadas, fato que justifica o emprego de antígenos diferentes para evitar diagnóstico falso-negativo. Por fim, não foi observado qualquer alteração nos fetos que pudessem ser caracterizada como patologia da enfermidade. / Abstract: The Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is one of the pathogens in bovine livestock worldwide most important mainly triggered by clinical manifestations related to the reproductive sphere. The infection in pregnant females may result in abortions, embryonic resorptions, fetal mummification, poor training, birth of weak calves in addition to persistently infected and virus immunotolerant animals, which are the main source of infection and spread of the disease. Currently, the complexity to diagnosis and consequently to the pathogenesis are related genotypic differences that he presents. Therefore, this research aimed to verify the occurrence of BVDV- 1 (Singer) and BVDV-2 (VS-253) genotypes in cows and their respective fetuses slaughtered in a abattoir at the state of São Paulo by analyzing the blood serum using virusneutralization technique. In the general context, 52.51% (115/219) of cows were reagents, but no fetus (0/219) reacted in virusneutralization. After a cross-examination we observed that 42% (92/219) of cows reacted for both BVDV-1 and BVDV-2 genotype. Furthermore 4,10% (9/219) reacted only to the genotype BVDV-1 and 6,39% (14/219) responded only to the genotype 2 of BVDV. It was noted therefore that both strains are widespread in the regions studied, which also justifies the use of different antigens to avoid false-negative diagnosis. Finally, there was no change in fetuses that could be characterized as a pathology of the disease. / Orientador: Samir Issa Samara / Coorientador: Fabio Carvalho Dias / Banca: José Gabriel Amoril / Banca: Sandra Possebon Gatti / Mestre

Orientadora: Maria da Glória Buzinaro / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Resumo: O presente estudo teve como objetivo determinar a ocorrência de rotavírus do grupo A e a genotipagem G e P de estirpes detectadas em bezerros de rebanhos leiteiros e gado de corte, durante o período de julho de 2006 a setembro de 2008, em propriedades rurais do Estado de São Paulo, Brasil. Foram amostrados 395 bezerros, na faixa etária entre 1 e 60 dias, independentemente da manifestação clínica de diarréia, de 18 rebanhos bovinos, sendo nove de exploração leiteira e nove de gado de corte. Por meio da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), determinou-se a ocorrência de rotavírus em 33,3% (06/18) entre os rebanhos e de 8,6% (34/395) na população amostrada. A maior freqüência de infecção foi detectada em animais com idade entre 16 e 30 dias (p < 0,01). Foram diagnosticados bezerros infectados por rotavírus tanto em animais com sinais clínicos de diarréia (22%;29/133) quanto naqueles clinicamente normais (1,9%;05/262), existindo, porém, uma correlação entre a presença da infecção e a manifestação clínica da diarréia (p<0,01). Em relação ao tipo de exploração, nos rebanhos leiteiros 0 percentual de ocorrência foi de 5,3% (14/264), enquanto que nos rebanhos de gado de corte o rotavírus teve maior ocorrência (15,3%; 20/131). A análise do perfil do genoma de rotavírus por EGPA identificou dois eletroferótipos distintos, cujas diferenças estavam localizadas na posição de migração dos segmentos 2, 3, 7, 8 e 9. A genotipagem pela reação em cadeia pela polimerase (RT-SNMPCR) das amostras de rotavírus revelou a que as estirpes circulantes nos rebanhos eram G6P[5], G10P[5], não foi possível fazer associação com o genotipo P[1]. / Abstract: The present study aimed to determine the Group A rotavirus and G/P genotyping in detected virus strains in dairy and beef cattle calves from July 2006 to September 2008 in São Paulo State-Brazil farms. 395 calves in 18 flocks (9 dairy cattle and 9 beef cattle) from 1 to 60-day-old were sampled, independently whether manifesting clinically diarrhea or not. By using Poliacrylamide Gel Electrophoresis Technique (PAGE), the rotavirus occurrence of 33.3% (06/18) among flocks and 8.6% (34/395) among the population sampled were determined. The higher infection frequency was detected in 16-to-30-day-old calves (P<0.01). Rotavirus-infected flocks rotavirus-infected were diagnosticated as much the ones having clinical symptoms of diarrhea (22%, 29/133) as the ones clinically normal (1.9%, 05/262), shawing a correlation between the presence of infection and the diarrhea manifestation (p<0.01). Related to the kind of exploration, the occurrence in dairy cattle was 5.3% (14/264) while in the beef cattle the occurrence was higher (15.3%, 20/131). The rotavirus genome profile analysis by PAGE identified two distinct electroferotypes, in which differences were located in the following segment migration positions: 2, 3, 7, 8 and 9. The genotyping of the Rotavirus sample by polymerase chain reaction (RT-snmPCR) revealed that the circulating strains among the flocks were G6P[5], G10P[5] e G?P[1]. / Mestre

Houve um crescimento no consumo de alimentos fora do domicílio nas últimas décadas, impulsionado pela urbanização, economia, fatores demográficos e participação das mulheres no mercado de trabalho. O consumo em restaurantes de hotéis passou de 1,4 kg para 7,2 kg per capita entre 2005 e 2014 e apesar de seguir as orientações sanitárias, pode ser risco à saúde humana, devido ao tipo de prato, matéria prima ou cozimento. Assim, foram avaliados os cardápios de hotéis através de um índice de risco sanitário para os usuários, e comparou-se este índice médio do cardápio com características organizacionais e demográficas dos hotéis, seu sucesso midiático e a percepção do pessoal de problemas sanitários. Foi possível mostrar que há um conhecimento de risco pelo maior preço de pratos com risco mais alto. Os hotéis com mais risco têm cardápios mais variados e taxa de ocupação mais alta, sem diferença nos demais critérios demográficos. O pessoal de atendimento tem mais consciência de riscos que a gerência e avaliações midiáticas são menores nos hotéis de maior risco. Quanto à gestão do restaurante pelo hotel, este se mostrou mais segura para os hóspedes na gestão, sendo os restaurantes independentes mais ativos em número de pratos e turismo gastronômico, o que leva a uma melhor avaliação midiática, independente do maior risco. A avaliação do risco médio do cardápio pode levar uma melhor segurança sanitária do hóspede, mas existem outros fatores mercadológicos que podem interferir no cardápio do restaurante. Este conhecimento de risco sanitário pode orientar a escolha mercadológica do restaurante do hotel, provendo um elemento de julgamento da oferta de alimentos que podendo aumentar a fidelização e a segurança sanitária dos hóspedes. A alimentação segura de hóspedes é um processo extremamente importante para o sucesso da hotelaria, já que estes são associados a problemas pelos clientes, o que implica em maior cuidado sanitário na atual expansão do turismo de negócio e lazer no Brasil. / There has been an increase in consumption of food outside the home in the last decades, driven by urbanization, economy, demographic factors and women\'s participation in the labor market. The consumption in hotel restaurants went from 1.4 kg to 7.2 kg per capita between 2005 and 2014 and despite following the sanitary guidelines, can be risk to human health, by type of dish, raw food or cooking. Thus, we evaluated the hotel menus through a sanitary risk index for the users, and compared this average menu index with organizational and demographic characteristics of the hotels, their media success and the staff\'s perception of health problems. It was possible to show that there is a knowledge of risk by the higher price of dishes with higher risk. The hotels with more risk have more varied menus and higher occupancy rate, with no difference in the other demographic criteria. Service staff are more aware of risks that management and media reviews are lower in hotels at higher risk. As for the management of the restaurant by the hotel, this is safer for guests in hotel management, with independent restaurants more active in number of dishes and gastronomic tourism, which leads to a better media assessment, regardless of the greater risk. The evaluation of the average risk of the menu may lead to a better sanitary security of the guest, but there are other marketing factors that can interfere with the menu of the restaurant. This knowledge of sanitary risk can guide the market choice of the hotel restaurant, providing an element of judgment of the food supply that can increase the loyalty and sanitary security of the guests. The safe feeding of guests is an extremely important process for the success of the hotel industry, since these are associated with problems by the clients, which implies in greater health care in the current expansion of business and leisure tourism in Brazil.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-03-17T14:18:06Z No. of bitstreams: 1 PDF - Katharina Rodrigues de Lima Porto Ramos.pdf: 2185372 bytes, checksum: d2b102a4f6ef6b42be28bada2852f309 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-22T13:36:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Katharina Rodrigues de Lima Porto Ramos.pdf: 2185372 bytes, checksum: d2b102a4f6ef6b42be28bada2852f309 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-22T13:36:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Katharina Rodrigues de Lima Porto Ramos.pdf: 2185372 bytes, checksum: d2b102a4f6ef6b42be28bada2852f309 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:36:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Katharina Rodrigues de Lima Porto Ramos.pdf: 2185372 bytes, checksum: d2b102a4f6ef6b42be28bada2852f309 (MD5) Previous issue date: 2013-09-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Diarrhea is often associated with excessive defecation caused by increased motility and secretion. Spondias purpurea L. belongs to the genus Spondias, used by the population as gastroprotecti ve, antidiarrheal and antimicrobial. The objecti ve of this work was to evaluate the antidiarrheal acti vity of crude ethanol extract and dichloromethane phase of S. purpurea L., in animal models. Were obtained from the ethanol extract (Sp-EtOHE) and phase dichloromethane (Sp-DCPM) of the leaves of S. purpurea. In determi ning phytochemical noted that Sp-EtOHE was approximately 6.70% of total flavonoids, polyphenols and 3.17%. Toxicological evaluation by the method of Artemia salina Leach, the samples showed values of 50% lethal concentration (LC50) of 2300.67 ± 196.66 mg / mL for Sp-EtOHE and 1106.17 ± 102.24 mg / mL for Sp-DCPM, indicating not present toxicity. In Test Toxicology Preclinical acute was administered 2000 mg / kg Sp-EtOHE was observed only irritability reversed in females after the 2nd hour, this being a given insufficient for inferri ng toxicity, also did not cause variations i n the height or i n the macroscopic structure bodies, water consumption, diet and biochemical and hematological parameters. Unable to determine the LD50, as there were no deaths at the end of the 14 days of observation. With respect to antimicrobial acti vity by microdilution, there was no activity Sp-EtOHE and Sp-DCPM concentrations tested against the tested microorganisms. In determini ng the gastrointestinal motility through the model of induced diarrhea i n rats castor oil, the inhibition was 33, 54 and 63% Sp-EtOHE and 63, 68 and 85% for Sp-DCPM, both at doses of 125 , 250 and 500 mg/kg (po). It was observed a decrease i n the number of liquid stools at 41, 67 and 25% for Sp-EtOHE and 48, 68 and 65 for Sp-DCPM. In relation to the total number of feces both Sp- EtOHE and Sp-DCPM as presented similar behavior. The CRP-ultrasensitive was quantified and reduced levels of acute inflammation. There was an increase in the concentrations of ionograms. The study confirmed that Sp-DCPM minimized the histological damage in the ileum. The model to assess changes in gastric emptying and i ntesti nal motility values Sp-EtOHE and Sp-DCPM not statistically significant . These results show that S. purpurea may be possible antidiarrheal as indicated by the traditional medicine that does not cause constipation not reach the intesti nal bacterial flora and anti-inflammatory acti vity. / A diarreia está associada à frequência excessiva de defecação, provocada pelo aumento da motilidade e secreção. Spondias purpurea L. pertence ao gênero Spondias, utilizado pela população como gastroprotetora, antidiarreica e antimicrobiana. Assim, o objeti vo deste trabalho foi avaliar a atividade antidiarreica do extrato etanólico bruto e da fase diclorometano de S. purpurea L., em modelos animais. Foram obtidos o extrato etanólico (EEtOH-Sp) e a fase diclorometano (FaDCM-Sp) das folhas de S. purpurea. Na determi nação fitoquímica foi observado que o EEtOH-Sp apresentou aproximadamente 6.70% de flavonóides totais, e 3,17% de polifenóis. Na avaliação toxicológica, pelo método da Artemia salina Leach, as amostras apresentaram valores de Concentração Letal 50% (CL ) de 2300,67±196,66 µg/mL para o EEtOH-Sp e 1106,17±102,24 µg/mL para a FaDCM- Sp, indicando não apresentarem toxicidade. No Ensaio Toxicológico Pré-clínico Agudo, foi administrada 2000 mg/kg do EEtOH-Sp e foi observada apenas irritabilidade revertida nas fêmeas após a 2ª hora, sendo este um dado insufi ciente para inferir toxicidade, também não provocou variações no peso nem na estrutura macroscópica dos órgãos, no consumo de água, ração e nos parâmetros bioquímicos e hematológicos. Não foi possível determinar a DL , visto que não houve mortes, ao fi nal dos 14 dias de observação. Com relação à ati vidade 50 antimicrobiana pela técnica de microdiluição, não foi observada atividade de EEtOHSp e FaDCM-Sp nas concentrações testadas frente aos microorganismos testados. Na determi nação da motilidade gastri ntesti nal, através do modelo de diarreia induzida por óleo de rícino em ratos, a inibição foi de 33, 54 e 63% para EEtOH-Sp e 63, 68 e 85% para FaDCM-Sp, ambos nas doses de 125, 250 e 500 mg/kg (v.o.). Foi observada uma diminuição do número de fezes líquidas em 41, 67 e 25% para EEtOH-Sp e 48, 68 e 65% para FaDCM-Sp. Em relação ao número total de fezes tanto o EEtOH-Sp quanto a FaDCM-Sp apresentaram comportamento semelhante. A PCR-ultrassensível foi quantificada e reduziu os níveis de inflamação aguda. Houve um aumento nas concentrações dos ionogramas. O estudo histopatológico confirmou que FaDCM-Sp minimizou o dano histológico no íleo. No modelo para avaliar alterações no esvaziamento gástrico e na motilidade intestinal, os valores do EEtOH-Sp e FaDCM-Sp não apresentaram significância estatística. Estes resultados mostram que S. purpurea pode ser um possível antidiarreico, como indicado pela medicina tradicional, que não causa constipação, não atinge a flora bacteriana intestinal e com atividade anti-inflamatória.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Rui Gilberto 2009.pdf: 494103 bytes, checksum: 0ea918294e089c1e485f3cfae166b190 (MD5) Previous issue date: 2009-04-30 / The gastroenteric viruses are important etiological agents of gastroenteritis in individuals of all ages. It is believed that individuals with deficits in the immune system (humoral and/or cellular), among them pregnant women and human immune deficiency virus (HIV)-seropositive women, are more susceptible to these viral infections. The rotaviruses, adenoviruses, astroviruses, and caliciviruses constitute are among the main causes of acute gastroenteritis in the world, and are accounted for high morbi-mortality rates, especially among children under five years of age. It is believed that, by the age of three, approximately 90% of all children in developing countries have antibodies to one or more of these agents. Neonatal infection does not exclude the possibility of re-infection, with different viral serotypes, however it protects the individual against severe disease. This study aimed at the detection of rotavirus, adenovirus, astrovirus e calicivirus in women seeing at the Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Goiás (HC-UFG) and at the investigation of as association between the positivity to this viruses and the low immune status, characteristic in pregnant women and/or HIV-seropositive women. This was a prospective follow-up study of women seeing at the Gynecology and obstetrics (OB-GYN) sector of the HC-UFG aiming at the detection of gastroenteric viruses (rotavirus, adenovirus, astrovirus e calicivirus). For this, fecal samples were collected from 84 women, in the period from July-2006 to June-2007. For rotavirus detection, fecal samples were screened by polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE) and by an immunoenzimatic assay (IEA). The calicivirus and astrovirus were detected by polymerase chain reaction post-reverse transcription (RT-PCR), and adenovirus detection was performed by an EIE. The astrovirus genotyping was conducted by Nested-PCR. Three-hundred and fourteen fecal samples were collected from a total of 84 women. From those 84 women, 29 were HIV-seropositive, 55 HIVseronegative, 45 were pregnant at the time, and 39 were not pregnant. The patients were aged between 16 and 67 years-old, and 47% of them had up to 30 years of age. From the total 84 patients, 19 (22.6%) were positive for calicivirus and/or astrovirus in at least one of the collected samples, as follows: calicivirus (14/19) and astrovírus (6/19), with the highest positivity rates being detected in the months of July and August (astrovirus) and September and October (calicivirus). None of the collected samples were positive for rotavirus or adenovirus. The association index between gastroenteric virus positivity and pregnancy, in the presence or not of HIV-seropositivity, was of 68.4% (13/19); however, there was no significant difference between the group of women that were not pregnant and the ones that were HIV-seronegative. The gastroenteric viruses were detected in a significant parcel (22.6%) of this population of adult women, and were represented by the caliciviruses (16.7%) and astroviruses (7.1%). Under the conditions of the present study, no association was found between pregnancy and/or positivity for HIV, as reducing factors for the immunological capacity of the women, and the detection of gastroenteric viruses; in conclusion, the pregnancy and/or HIV-seropositivity did not increase the chances of these women to be infected by these gastroenteric viruses. / Os vírus gastroentéricos são importantes agentes etiológicos das gastroenterites afetando indivíduos de todas as idades. Acredita-se que os indivíduos com deficiência do sistema imunitário (humoral e/ou celular) encontram-se mais susceptíveis ao desenvolvimento destas viroses, dentre elas as mulheres grávidas e as portadoras do vírus da imunodeficiência humana (HIV). Os rotavírus, adenovírus, astrovírus e calicivírus constituem uma das principais causas de gastroenterite aguda em todo o mundo, sendo responsáveis por elevada morbi-mortalidade principalmente entre crianças com até cinco anos de idade. Acredita-se que aos três anos de idade, cerca de 90% das crianças dos países em desenvolvimento apresentam anticorpos contra um ou mais tipos destes vírus. A infecção neonatal não impede a ocorrência de reinfecção com diferentes sorotipos, porém protege o indivíduo contra o desenvolvimento das formas severas da doença. Este trabalho teve com objetivo identificar rotavírus, adenovírus, astrovírus e calicivírus em mulheres atendidas no Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Goiás (HCUFG) e buscar a associação entre a presença destes vírus e a baixa imunidade característica em gestantes e/ou portadoras do vírus HIV. O estudo foi um seguimento prospectivo de mulheres atendidas no setor de ginecologia e obstetrícia do HC-UFG visando detecção de vírus gastroentéricos (rotavírus, adenovirus, astrovírus e calicivirus). Os espécimes clínicos utilizados foram fezes, colhidas no período de 01 de julho de 2006 a 30 de junho de 2007. Para detecção de rotavírus foi utilizado a eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) e o ensaio imunoenzimático (EIE). Para detecção de calicivirus e astrovirus foi utilizada a reação em cadeia pela polimerase pós-transcrição reversa (RT-PCR) e o EIE para adenovírus. A genotipagem de astrovirus foi feita por Nested-PCR. Foram estudadas 84 mulheres das quais foram analisadas 314 amostras fecais. Do total de mulheres, 29 eram pacientes soropositivas para HIV, 55 soronegativas, 45 e 39 eram gestantes e não gestantes, respectivamente. As pacientes tinham idade variando de 16 a 67 anos, sendo que 47% delas tinham até 30 anos. Das 84 pacientes, 19 (22,6%) foram positivas para algum dos vírus gastroentéricos pesquisados - calicivirus (14/19) e astrovírus (6/19), com predominância de positividade nas amostras fecais colhidas nos meses julho e agosto (astrovírus) e setembro e outubro (calicivírus). Não foram identificadas amostras fecais positivas para rotavírus ou adenovírus. A associação da presença dos vírus gastroentéricos com a gestação, acrescida ou não do vírus HIV, foi de 68,4% (13/19), no entanto não houve diferença estatística significativa com o grupo de mulheres que não se encontrava grávida e nem eram portadoras do vírus HIV. Os vírus gastroentéricos estiveram presentes numa parcela relevante (22,6%) desta população de mulheres adultas estudadas, representados pelos calicivírus (16,7%) e astrovírus (7,1%). Não foram encontrados rotavírus e adenovírus. Nas condições do presente estudo, não houve associação entre a gestação acrescida ou não da presença do HIV como fator redutor da capacidade imunológica e a presença dos vírus gastroentéricos; ou seja, o estado gravídico e/ou ser portadora do HIV não aumentou a chance destas mulheres serem portadoras destes vírus gastroentéricos.

Em uma unidade produtora de matrizes pesadas, localizada no Estado de São Paulo, foram colhidas duas amostras de conteúdo intestinal de aves com duas semanas de idade, quatro amostras de fezes da cama do mesmo lote às 18 semanas e uma amostra da cama às 30 semanas para pesquisa de coronavirus por uma técnica de nested RT-PCR dirigida a um segmento do gene codificador da RNA–polimerase RNA-dependente (gene pol). Destas, foram positivas 6 amostras correspondentes às duas aves de duas semanas, 3 às aves com 18 semanas e 1 às aves com 30 semanas. A análise filogenética da seqüência do c-DNA correspondente a uma das amostras das aves de duas semanas agrupou este vírus entre os coronavirus do grupo 2. Quando inoculado pelas vias ocular e oral em aves White Leghorn SPF, evidenciou-se diarréia moderada, despigmentação e atraso no crescimento. Os exames anátomo e histopatológicos dos órgãos colhidos revelaram predominantemente enterite e atrofia de vilosidades no reto e duodeno, com infiltração de células mononucleares e exposição de lâmina própria. Aves sentinela SPF alocadas entre os grupos inoculados apresentaram os mesmos sinais clínicos e achados anátomo e histopatógicos. O coronavírus inoculado foi evidenciado em todos os grupos experimentais em intestino delgado, reto, pâncreas e pulmão, assim como em conteúdo entérico. Seqüenciamento e analise filogenética foram realizados com uma amostra positiva por PCR em cada um dos grupos experimentais, confirmando a identidade entres os vírus recuperados e o vírus inoculado e a proximidade deste vírus com os coronavirus do grupo 2, considerando-se o fragmento estudado. Estes resultados demonstram que o coronavirus encontrado, causa doença entérica nas aves, com tropismo predominante por reto e intestino delgado, transmitindo-se horizontalmente de modo eficiente poucas horas após a inoculação e que o segmento do gene pol estudado aproxima este vírus dos coronavirus do grupo 2. / In a broiler breeder farm located at São Paulo State two samples of intestinal contents of 2-week old birds, four fecal samples of the floor from the same flock at 18 weeks of age and one at 30 weeks of age were surveyed to coronavirus by a nested RT-PCR assay targeted to the RNA-dependent RNA-polymerase gene (pol gene). Six out of these samples were positive, two of which from the 2-week old birds, 3 from the 18-week old birds and 1 from the 30-week old birds. Phylogenetic analysis of the c-DNA sequence from one positive sample of a 2-week old bird showed that the virus clustered among group 2 coronaviruses. Oral and ocular inoculation of White Leghorn SPF birds with this coronavirus led to mild diarrhea, depigmentation and growth delay. Gross and histopatological examinations of collected tissues showed enteritis and atrophy of the villi on the small gut and rectum with mononuclear cells infiltration and exposition of the lamina propria. SPF sentinel birds placed between inoculated groups showed the same clinical signs and gross and histological findings. The inoculated coronavirus was evidenced in all experimental groups in the small gut, rectum, pancreas and lungs and also in intestinal contents. DNA sequencing and phylogenetic analysis was carried out with one positive sample per group, confirming the identity between the recovered viruses and the close relationship between this virus and group 2 coronaviruses taking into account the studied fragment. These results show that the coronavirus here found causes enteric disease in birds, with a predominant tropism by the rectum and the small gut, being horizontally transmitted in a few hours and that the pol gene studied segment bring this virus close to group 2 coronaviruses.

Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é caracterizada pela expressão do padrão de adesão agregativa (AA) em células HEp-2 e sua classificação em típica e atípica se baseia na presença ou ausência de aggR, respectivamente. O gene shf de EAEC codifica uma proteína com similaridade a IcaB, relacionada à formação de biofilme. Os objetivos deste estudo foram verificar a prevalência de shf em 113 amostras de EAEC isoladas no Brasil e investigar o envolvimento de Shf na formação de biofilme e no padrão AA de EAEC típica e atípica. O gene shf foi detectado em 25 EAEC típicas e em 16 atípicas. As amostras shf+ foram analisadas quanto ao sorogrupo, adesão em células HEp-2 e formação de biofilme. Nenhuma dessas características foi associada a shf e a formação de biofilme foi detectada em todas essas amostras. A mutagênese em shf resultou na diminuição da capacidade de formação de biofilme e na incapacidade de adesão. Foi demonstrado que o gene shf é prevalente e que Shf participa do estabelecimento do padrão AA e de formação de biofilme em EAEC típica e atípica. / Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is characterized by the expression of the aggregative adherence (AA) pattern to HEp-2 cells. The classification of EAEC in typical and atypical is based on the presence or absence of aggR, respectively. The shf gene encodes a protein with similarity to IcaB, associated with biofilm formation. The objectives of this study were to verify the prevalence of shf in 113 EAEC strains isolated in Brazil and investigate the role of the Shf in the establishment of the AA pattern and biofilm of typical and atypical EAEC. The shf gene was detected in 25 typical and in 16 atypical EAEC. The shf+ strains were analyzed regarding serogroups, adherence to HEp-2 cells and the ability to form biofilm. None of these characteristics was associated with the presence of shf and all strains were able to produce biofilm. The mutagenesis in shf reduced the biofilm formation and abolished the adherence to HEp-2 cells. This study demonstrated that shf is prevalent and Shf is involved in the AA and biofilm formation of typical and atypical EAEC.

Orientador: Rodrigo Tavanelli Herandes / Banca: Josias Rodrigues / Banca: Ricardo Seiti Yamatogi / Resumo: Escherichia coli diarreiogênica (ECD) representa uma das principais causas da diarreia infantil. Com base em seus mecanismos de virulência, podemos classificá-la em seis patotipos distintos: E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli produtora da toxina Shiga (STEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli que adere difusamente (DAEC). O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de ECD, entre crianças diarreicas (Pacientes) e crianças saudáveis (Controles), menores de cinco anos de idade, na cidade de Botucatu/SP. Foram analisadas amostras de fezes de 200 crianças com diarreia, atendidas no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, entre os meses de Março de 2013 a Setembro de 2014, e 200 crianças saudáveis. Isolados de E. coli foram classificados nos distintos patotipos de ECD pela pesquisa de marcadores de virulência específicos através de PCR e, posteriormente, foram caracterizados quanto ao padrão de aderência em células HeLa e resistência à drogas antimicrobianas. Os isolados portadores do locus of enterocyte effacement (eae+) foram submetidos ao teste de FAS (Fluorescence Actin Staining), para avaliar a capacidade desses isolados em induzir a lesão attaching and effacing (AE). Ademais, os isolados de EPEC e STEC tiveram seu antígeno somático (O), e flagelar (H) determinados. ECD foi isolada de 18,0% das crianças diarreicas, e em 19,0% das crianças saudáveis, sendo que nenhum patotipo de ECD pode ser individualmente associado com a doença diarreica (P0,05). O patotipo EAEC foi o mais frequente, tendo sido detectado em igual proporção entre crianças diarreicas e saudáveis (10,0%). Dentre os isolados de EPEC, 16 provenientes das fezes de crianças com diarreia e 18 provenientes de crianças saudáveis, somente um foi capaz de aderir às células HeLa no padrão localizado (AL), sendo esse o único isolado classificado... / Abstract: Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) comprises a major cause of child hood diarrhea. Based on their virulence mechanisms, DEC can be classified into six distinct pathotypes: enteropathogenic E. coli (EPEC), enterotoxigenic E. coli (ETEC), enteroinvasive E. coli (EIEC), enteroaggregative E. coli (EAEC), enterohemorrhagic E. coli (EHEC) and diffusely adherent E. coli (DAEC). This study aims to investigate the prevalence of DEC among diarrheal children (patients) and healthy children (controls), up to five years of age in Botucatu/SP. We analyzed stool samples from 200 children with diarrhea attended at Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, between March/2013 and September/2014, and 200 healthy children. E. coli isolates were classified in different pathotypes by detection of virulence markers (by PCR) and then, characterized regarding its adherence pattern to HeLa cells and antimicrobial resistance drugs. Isolates carrying the locus of enterocyte effacement (eae+) were submitted to FAS test (Fluorescence Actin Staining), to evaluate the ability of these isolates to induce attaching and effacing lesion (AE). In addition, EPEC and STEC isolates, had their somatic (O) and flagellar (H) antigens determined. DEC was isolated from 18.0% of diarrheal children, and 19.0% of healthy children, and none of the DEC pathotypes could be individually associated with the diarrheal disease (P>0.05). EAEC was the most frequent DEC pathotype, being detected in equal proportion between patients and controls (10.0%). Among the EPEC isolates, 16 from patients and 18 from controls, only one was able to produce the localized adherence (LA) pattern to HeLa cells, being this isolate the only typical EPEC (tEPEC) identified in this study. The remains EPEC isolates were classified as aEPEC (atypical EPEC), and detected in 8.0 and 8.5% of the patients and controls, respectively. STEC and ETEC were detected in only one child from each studied ... / Mestre