Objetivos: Testar a hipótese de que a mucosa do intestino delgado proximal de crianças com diarréia persistente apresenta alterações morfométricas e estereológicas proporcionais ao estado nutricional. Métodos: estudo transversal, incluindo 65 pacientes pediátricos internados no período de maio de 1989 a novembro de 1991, com idade entre 4 meses e 5 anos , com diarréia de mais de 14 dias de duração, que necessitaram realizar biópsia de intestino delgado como parte do protocolo de investigação. A avaliação nutricional foi realizada pelos métodos de Gomez, Waterlow e pelos escores z para peso/ idade (P/I), peso/estatura (P/E) e estatura/idade (E/I), divididos em: eutróficos = z ≥ 2 DP e desnutridos z < -2dp; eutróficos = z ≥ 2 DP, risco nutricional = z < -1DP e desnutridos = z < -2DP; e de maneira contínua em ordem decrescente, utilizando-se as tabelas do NCHS. A captura e análise das imagens por programa de computador foi efetuada com o auxílio do patologista. Nos fragmentos de mucosa do intestino delgado, foram medidas a altura dos vilos, a profundidade das criptas, a espessura da mucosa, a espessura total da mucosa e a relação vilo/cripta, com aumento de 100 vezes. Com aumento de 500 vezes, foram medidas a altura do enterócito, a altura do núcleo e do bordo em escova. O programa computadorizado utilizado foi o Scion Image. A análise estereológica, foi feita com o uso de arcos ciclóides. Resultados: Para os escores z P/I, P/E e E/I, divididos em duas categorias de estado nutricional, não houve diferença estatisticamente significante quanto às medidas da altura dos vilos, profundidade das criptas, espessura da mucosa, espessura total da mucosa e relação vilo/cripta. A altura do enterócito foi a característica que apresentou maior diferença entre os grupos eutrófico e desnutrido, para os índices P/I e P/E, em 500 aumentos, sem atingir significância estatística. Quando os escores z foram divididos em 3 categorias de estado nutricional, a análise morfométrica digitalizada mostrou diferença estatisticamente significante para a relação vilo/cripta entre eutróficos e desnutridos leves e entre eutróficos e desnutridos moderados e graves (p=0,048). A relação vilo/cripta foi maior nos eutróficos. A avaliação nutricional pelos critérios de Waterlow e a análise estereológica não mostraram associação com o estado nutricional. Pelo método de Gomez, houve diferença estatisticamente significante para a altura do enterócito entre eutróficos e desnutridos de Grau III: quanto maior o grau de desnutrição, menor a altura do enterócito (r= -.3330; p = 0,005). As variáveis altura do enterócito, altura do núcleo do enterócito e do bordo em escova apresentaram uma clara associação com os índices P/I (r=0,25;p=0,038), P/E (r=0,029;p=0,019) e com o critério de avaliação nutricional de Gomez (r=-0,33;p=0,007), quando foram avaliadas pelo coeficiente de correlação de Pearson. A altura do núcleo mostrou associação com o índice P/I (r=0,24;p=0,054). A altura do bordo em escova mostrou associação com o índice P/I (r=0,26;p=0,032) e a avaliação nutricional de Gomez (r=-0,28;p=0,020). Conclusões: As associações encontradas entre o estado nutricional - avaliado de acordo com Gomez e os índices P/I e P/E - e as variáveis da mucosa do intestino delgado mostraram relação com o peso dos pacientes. Embora estas associações tenham sido de magnitude fraca a moderada, há uma tendência à diminuição do tamanho do enterócito, seu núcleo e seu bordo em escova à medida que aumenta o grau de desnutrição. / Objectives: To test the hypothesis that the proximal small intestinal mucosa of children with persistent diarrhea presents morphometric and stereologic changes, proportional to their nutritional status. Methods: We performed a cross-sectional study with 65 pediatric patients, with ages varying from 4 months to 5 years, who were admitted between May 1989 and November 1991 with persistent diarrhea for over 14 days. These patients were submitted to small intestinal biopsy, as part of the investigation protocol. The nutritional assessment was performed according to the methods proposed by Gomez, Waterlow, and through z-scores for weight/age (W/A), weight/height (W/H) and height/age (H/A) ratios, divided into: eutrophic = z ≥ 2SD and malnourished z < -2SD; eutrophic = z ≥ 2SD, nutritional risk z < -1SD and malnourished = z < -2SD; and continuously, in descending order, using the NCHS charts. Computer images were obtained and analyzed with a pathologist assistance. Villous height, crypt depth, mucosal thickness, total mucosal thickness, and villous/crypt ratio were measured in the fragments of the small intestinal mucosa, enlarged 100 times. When images were enlarged 500 times, enterocyte height, nuclear height and brush-border height were measured. The software used was Scion Image. Stereologic analysis was performed using cycloid arcs. Results: For W/A, W/H and H/A z-scores, divided into two nutritional status categories, no statistically significant difference was observed in regard to villous height, crypt depth, mucosal thickness, total mucosal thickness and villous/crypt ratio. Enterocyte height presented the most significant difference between eutrophic and malnourished groups, for the W/A and W/H ratios, with a 500x enlargement, although this difference was not statistically significant. When z-scores were subdivided into three nutritional status categories, a digital morphometric analysis showed a statistically significant difference for the villous/crypt ratio between the eutrophic and slightly malnourished group and the eutrophic and mild to severe malnourished group (P=0.048). The villous/crypt ratio was higher among eutrophic children. Nutritional assessment, according to Waterlow criteria, and stereologic analysis were not associated with nutritional status. According to Gomez’s method, a statistically significant difference in enterocyte height was observed between eutrophic and level III malnourished children: the higher the level of malnutrition, the more reduced the height of the enterocyte (r= -.3330; P=0.005). The variables enterocyte height, height of enterocyte nucleus and brush-border height presented a clear association with the W/A ratio (r=0.25; P=0.038), W/H ratio (r=0.029; P=0.019), as well as with Gomez’s criterion for nutritional status (r=-0.33; P=0.007), when evaluated through Pearson’s correlation coefficient. The height of the nucleus was associated with W/A ratio (r=0.24; p=0.054). Brush-border height was associated with W/A ratio and with Gomez’s nutritional assessment (r=-0.28; P=0.020). Conclusions: The observed associations between nutritional status – evaluated according to Gomez and W/A and W/H ratios – and the analyzed small intestinal mucosa variables showed a positive correlation with patients’ weight. Although these associations were of a slight to moderate magnitude, we observed a tendency of enterocyte size reduction, as well as a reduction in the size of its nucleus and brush-border, as the level of malnutrition increases.

A diarréia em bezerros é comprovadamente uma das principais causas de perdas econômicas em rebanhos de corte, sendo os prejuízos diretamente derivados da redução do ganho de peso e custos com tratamento. Considerando-se que, para o delineamento de medidas profiláticas adequadas ao controle de uma doença é necessário o conhecimento de suas causas, o presente trabalho teve por objetivo estudar de modo longitudinal a freqüência de ocorrência de coronavírus bovino (BCoV), rotavírus do grupo A (RV-A), protozoários, helmintos e enterobactérias em uma propriedade com casos esporádicos e em outra com casos recorrentes de diarréia em bezerros. Investigou-se, ainda, a presença de genes codificadores de para as toxinas shiga-like 1 e 2 , para as adesinas K99 e F41 e para a intimina (eae) nas E. coli isoladas. Para a detecção de BCoV, utilizou-se uma nested-RT-PCR direcionada ao gene codificador da RNA polimerase RNA dependente, e para a detecção de RV-A utilizou-se ELISA direto duplo sanduíche. O isolamento e caracterização bioquímica das colônias de bactérias foram conduzidos de acordo com técnicas de bacteriologia clássica. A caracterização genotípica das colônias de E. coli isoladas foi realizada através de uma Multiplex-PCR, utilizando primers para os genes codificadores dos seguintes fatores de virulência: Stx1, Stx2, Sta, K99, F41 e eae. A detecção de parasitas foi realizada por centrífugo sedimentação em água-eter e centrífugo-flutuação em solução supersaturada de sacarose, considerando-se como resultado final do exame coproparasitológico todos os parasitas encontrados em ambas as técnicas em sua maior contagem. A freqüência de ocorrência de coronavírus bovino e rotavírus do grupo A foi baixa, restrita a animais com até quatro meses de idade, enquanto que protozoários, helmintos e enterobactérias apresentaram tendência crescente em freqüência relacionada à progressão da idade dos animais. Foram identificados os patotipos STEC, AEEC e um padrão atípico com os genes de K99 e eae. Além disso, encontrou-se associação entre baixo padrão sanitário e maior freqüência de ocorrência de Eimeria spp, Strongyloidea, Strongyloides spp, Trichuris spp e Escherichia coli portadora de fatores de virulência Stx1, Stx2, K99 e eae. O presente trabalho colabora para a caracterização da microbiota entérica de bezerros, mas mantém abertas as questões relativas às diferenças específicas entre as biotas entéricas de bezerros sadios e com diarréia, enfatizando a importância de se realizarem mais estudos que investiguem simultaneamente diversos enteropatógenos potenciais nestes animais / Diarrhea in calves is proved to be one of the main causes of economic loss in beef herds, which is direct originated by reduction of weight gain and increment of treatment costs. It is known that the determination of appropriate preventive measures to control a disease depends on the knowledge of its causes. In this manner, the present work aimed to study longitudinally the frequency of occurrence of bovine coronavirus (BCoV), group A rotavirus (RV-A), protozoa, helminths and enterobacteria in a beef farm presenting sporadic cases and other with recurrent cases of diarrhea. Moreover, the presence of genes that express the following virulence factors were investigated in the isolated E. coli: shiga-like toxins 1 and 2, adhesins K99 and F41 and intimin (eae). A nested-RT-PCR targeted to the RNA-dependent RNA polimerase gene was conducted to detect BCoV, and a double-sandwich direct ELISA was used to detect RV-A. Classical bacteriology techniques were used to isolate and indentify bacterial colonies. A Multiplex-PCR, with primers designed to previously described E. coli genes, was used to genotype these colonies. Centrifuge sedimentation in water-ether and centrifuge flotation in sucrose supersaturated solution were used to detect the presence of parasites. The final result was achieved by the highest count of all the parasites found. The observed frequency of occurrence of both BCoV and RV-A was low and restricted to animals up to 4 months of age whereas protozoa, helminths and enterobacteria showed an increasing tendency on its frequency related to progression of animals aging. STEC, AEEC and an atypical pathotype of E. coli, with K99 and eae genes were found. Moreover, an association between low sanitary pattern and a higher frequency of Eimeria spp, Strongyloidea, Strongyloides spp, Trichuris spp and Escherichia coli bearing Stx1, Stx2, K99 and eae genes was observed. The present study contributes to the characterization of calf enteric microbiota. However, the points related to the specific differences between healthy and diarrheic calves enteric microbiota remain unclear, emphasizing the importance of future studies to investigate different potential enteropathogens in beef calves simultaneously

Introdução - A diarréia ainda se apresenta como uma das principais causas de morbimortalidade em crianças menores de um ano de idade em países em desenvolvimento. Disparidades nas taxas globais de morbimortalidade entre regiões têm sido observadas em todo o mundo. Estudos recentes apontam redução na mortalidade associada à diarréia. Entretanto, a morbidade pela doença não seguiu a mesma tendência. Considerando a existência de poucos estudos em território nacional a respeito do comportamento da mortalidade e internações por diarréia, considerou-se oportuna a análise da tendência das diarréias sob este ponto de vista. Objetivo - Analisar a tendência das internações e da mortalidade por diarréia em crianças menores de um ano, nas capitais do Brasil, no período de 1995 a 2005, e encontrar possíveis padrões no comportamento dos indicadores. Métodos - Foi realizado um estudo ecológico de séries temporais utilizando dados secundários do Sistema de Informação Hospitalar (SIH) e do Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM) do Ministério da Saúde. Para as análises das tendências das taxas de internações e de mortalidade foram utilizados modelos de regressão polinomial. Resultados - O Brasil e treze capitais brasileiras apresentaram redução tanto nas internações por diarréia quanto na mortalidade infantil por diarréia. Oito capitais tiveram queda somente na mortalidade por diarréia enquanto que três capitais apresentaram decréscimo somente nas taxas de internação por diarréia. Na análise conjunta dos indicadores de diarréia e dos indicadores gerais, observou-se que somente no Brasil e em quatro capitais houve um decréscimo em todas as séries históricas. Conclusões Os resultados encontrados indicam que as medidas empregadas para prevenção e controle da diarréia parecem ter efeito positivo na internação e mortalidade por esta doença em algumas das capitais brasileiras e no Brasil como um todo, necessitando, ainda, de reforço nas ações de prevenção. / Introduction The diarrhea still is presented as one of main causes of morbidity and mortality in children under one year old in developing countries. Differences in the global morbidity and mortality rates among regions have been observed in the whole world. Recent global studies point out a reduction in the mortality associated with the diarrhea. However, the morbidity for the illness did not follow the same trend. There are few studies witches analyzing the trends of the hospitalization and mortality rates by diarrhea in Brazil. Objectives To analyze the trend of hospital admission rates and mortality rates for diarrhea in children under one year old in Brazil as a whole and in its capitals between 1995 and 2005 and to find standards behaviors. Methods This was an ecological study using time-series analysis. The date of hospital admission and mortality rates were collected from Ministry of Health\'s Hospitalization Data System (SIH-SUS) and from Mortality Data System (SIM-MS). Trends were estimated using polynomial regression models. Results Trends for hospital admission rates as well as mortality rates for Brazil as a whole and in thirteen capitals had decreased. Eight capitals had only had reduction in diarrhea mortality rates whereas three capitals had only presented decrease in diarrhea hospitalization rates. The combined analysis of diarrhea indicators and general indicators revealed that only in Brazil as a whole and in four capitals there was a decrease in all the historical series. Conclusions The results indicate that the official measures for prevention and control of the diarrhea seem to have positive effect in the hospital admission rates and mortality rates for the disease in some of the Brazilian capitals and in Brazil as a whole.

A diarréia aguda é a segunda causa de morte em crianças < 5 anos em países emergentes. Anaeróbios estritos intestinais como B. fragilis enterotoxigênico e Clostridium difficile estão associados a este quadro infeccioso, assim como Escherichia coli diarreiogênica, Salmonella spp., Shigella spp. e Yersinia enterocolitica. Neste estudo, foi avaliada quantitativamente a presença de enteropatógenos diretamente das fezes. Amostras fecais de crianças com (110) e sem (150) diarréia foram analisadas. Todos os enteropatógenos avaliados foram detectados nas crianças com e sem diarréia, à exceção de Salmonella spp. e Y. enterocolitica que foram observados somente em fezes diarréicas. Os resultados sugerem uma relação bacteriana estreita e presentes em casos diarréicos ou não diarréicos. A presença de espécies EPEC/EHEC e de Shigella spp./EIEC mostraram valores estatisticamente significativos. / Diarrhea is a major cause of mortality and morbidity worldwide achieving children < 5 years old, and is second cause of death in emerging countries. Intestinal anaerobes like enterotoxigenic B. fragilis and Clostridium difficile are associated to acute diarrhea, as well as diarreiogenic Escherichia coli, Salmonella spp., Shigella spp. and Yersinia enterocolitica. In this study, it was evaluated quantitatively the presence of enteropathogens directly from fezes. Stools specimens from children with (110) and without (150) diarrhea were collected. All enteropathogens were detected in children with and without diarrhea except Salmonella spp. and Y. enterocolitica that were only observed in diarrheal fezes. This results suggest a tight bacterial relationship in both groups evaluated. The presence of EPEH/EHEC and Shigella spp./EIEC show statistically significant values.

De um total de 187 amostras fecais coletadas no ambulatório do Hospital Universitário/USP, entre 1994 a 1996, 54 (28,9%) foram positivas para rotavírus. Entre as amostras caracterizadas por EGPA foram identificados nove perfis eletroforéticos longos, dois curtos e um tipo não usual. O subgrupo II e o sorotipo G2 foram os mais freqüentemente identificados. Foram caracterizadas três amostras com misturas de sorotipos. As amostras positivas e mais 163 amostras, coletadas em um laboratório particular, em 2000, foram genotipadas. Os genótipos G2P[4] e G1P[8] foram os mais freqüentes nos anos de 1994-1996 e G1P[8] e G9P[8], os mais freqüentes em 2000. Os genótipos G3 e G4 foram detectado em menor freqüência. No HU, 20 (38,5%) amostras foram caracterizadas como misturas de genótipos G e 16 (29,6%), como misturas de genótipos P; não foram identificadas misturas em 2000. Dezoito amostras foram caracterizadas como P[10] por RT-PCR mas a análise da seqüência de nucleotídeos mostrou uma homologia de 90,7 a 98,0% com a amostra padrão P[8]. / From 187 fecal samples collected from outpatients at Hospital Universitário (HU)/ USP, between 1994 to 1996, 54 (28,9%) were positive for rotavirus. Positive samples were submitted to electropherotyping, subgrouping, and G serotype. Electropherotypes were characterized as nine different long genome profiles, one short and one unusual profile. Subgroup II and G2 serotype were the most frequently found and three samples showed mixed serotypes. Rotavirus samples and an additional 163 positive fecal samples, collected in a private laboratory in 2000, were G and P genotyped. Genotypes G2P[4] and G1P[8] were the most frequently found in 1994-1996 and, in 2000, G1P[8] and G9P[8] were the most frequent. Genotype G3 and G4 were detected as minor strains in both years. For HU, G genotype mixtures were found in 20 (38.5%) samples and P mixtures were found in 16 (29.6%). No mixtures were identified in 2000. Nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of 18 P[10] samples by RT-PCR showed 90.7 to 98.0% homology with the P[8] prototype.

Intimina é o principal fator de virulência envolvido na lesão attaching/effacing em E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli enterohemorrágica (EHEC), que são responsáveis pela diarreia infantil e colite hemorrágica/síndrome hemolítico-urêmica, respectivamente. Nos países em desenvolvimento, o diagnóstico desses patógenos ou é demorado e caro, ou não é realizado em laboratórios de rotina. No entanto, a detecção é essencial para definição do tratamento da infecção. O objetivo do presente trabalho foi definir o vetor de expressão mais apropriado e avaliar a sensibilidade e especificidade do scFv-intimina obtido. O gene scFv-intimina anteriormente obtido foi clonado nos vetores de expressão pAE e pSMT3, transformados em uma E. coli BL21 (DE3). A expressão foi induzida com 1 mM de IPTG. Em ambos os vetores, a proteína expressa foi direcionada para o citoplasma bacteriano, dessa forma a construção pAE-scFv-intimina foi utilizada na obtenção do anticorpo recombinante. Após cromatografia de afinidade ao níquel o scFv-intimina foi empregado no ensaio de imunofluorescência indireta para definir um teste de ensaio rápido e confiável, analisando-se 199 isolados de E. coli e isolados de outras Enterobactérias, dos quais 132 resultaram em isolados eae-positivos e 67 isolados eae-negativos. O teste de imunofluorescência mostrou a detecção de 132 isolados eae-positivos (100% de sensibilidade) e a não detecção de 67 isolados eae-negativos (100% especificidade). Assim, o ensaio de imunofluorescência é um método eficaz e rápido, e o scFv-intimina é uma excelente ferramenta para o imunodiagnóstico de EPEC e EHEC. / Intimin is the main virulence factor involved in the attaching/effacing lesion of enteropathogenic E. coli (EPEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC), which are responsible for infantile diarrhea and hemorrhagic colitis/hemolytic uremic syndrome, respectively. In developing countries, their diagnosis is either time-consuming and expensive or is not done in the routine laboratory. Nevertheless, their detection is essential in defining the infection treatment. The aim of the study was to define the most suitable expression vector and evaluate the sensitivity and specificity of the scFv-intimin obtained. The scFv-intimin gene previously obtained was cloned into pAE and pSMT3 expression vectors and transformed into an E. coli BL21 (DE3) strain. Expression was induced with 1 mM IPTG. In both vectors, recombinant protein was expressed as inclusion bodies, so pAE was chosen as the expression vector for nickel affinity chromatography. Once purified, scFv-intimin was employed in an indirect immunofluorescence assay to define a rapid and reliable assay testing 199 E. coli strains and other Enterobacteriaceae isolates, of which 132 isolates were eae-positive and 67 isolates were eae-negative. The immunofluorescence assay showed the detection of 132 eae-positive isolates (100% sensitive) and no detection in the 67 eae-negative isolates (100% specific). Thus, immunofluorescence is an effective and rapid method and scFv-intimin an excellent tool for the immunodiagnosis of EPEC and EHEC.

E. coli pertencentes ao sorogrupo O111 são incluem amostras com diferentes fatores de virulência que são responsáveis por gastroenterites por todo o mundo e surtos de diarreia com sangue e síndrome hemolítico-urêmica em países desenvolvidos. Resultados obtidos anteriormente mostraram que o LPS O111 é um bom candidato a antígeno para a formulação de uma vacina contra E. coli O111. Desta forma, o polissacarídeo O111 foi conjugado com proteínas arreadoras. Coelhos foram imunizados pela via subcutânea com o conjugado O111-citocromo c incorporado em sílica SBA-15 como adjuvante, os resultados mostraram que os anticorpos obtidos foram capazes de reconhecer e inibir a adesão de todas as categorias de E. coli pertencentes ao sorogrupo O111. O veículo carreador de antígeno, VaxcineTM , foi incorporado no conjugado O111-EtxB e camundongos foram imunizados pela via oral, o que resultou em resposta imune sistêmica e de mucosa contra o LPS O111. Os anticorpos obtidos foram capazes de reconhecer amostras de todas as categorias de E. coli O111. Os dados obtidos neste trabalho sugerem que a utilização do polissacarídeo O111 em uma formulação conjugada é capaz de prevenir surtos de diarreia causada por E. coli O111 independente do seu mecanismo de virulência. / The E. coli serogroup O111 include samples with different virulence factors that are responsible for enteritis throughout the world and for outbreaks of bloody diarrhea and hemolytic uremic syndrome in developed countries. Previous results obtained have shown that O111 LPS is a good candidate antigen for the development of a vaccine against E. coli O111. Therefore, the polysaccharide was conjugated with carrier proteins. Rabbits were immunized subcutaneously with the O111-cytochrome c conjugate incorporated in silica SBA-15 as an adjuvant, the results obtained show that the antibodies were able to recognize and inhibit the adhesion of all types of E. coli belonging to serogroup O111. The antigen delivery vehicle, VaxcineTM was incorporated into the O111-EtxB conjugate, and mice were immunized by gavage, resulting in systemic and mucosal immune response against O111 LPS. These antibodies were able to recognize all categories of E. coli O111. The results presented in this work indicate that an oral conjugated vaccine that targets the O111 antigen has the potencial to prevent diarrhea by O111 E. coli strains, regardless their mechanism of virulence.

As Escherichia coli enteropatogênica atípicas (EPECa) são capazes de causar a lesão A/E e não transportam o pEAF. Biofilmes microbianos são definidos como comunidades complexas formadas por microrganismos aderidos a superfícies envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de formação de biofilme de 92 amostras de EPEC atípicas em superfícies abióticas e células pré-fixadas, utilizando três metodologias (contagem de UFC/cm2), ensaio colorimétrico com cristal violeta e CLSM). O gene shf e bfpA parecem não ter relação com a formação de biofilme. Não houve diferença significativa de formação de biofilme nas superfícies testadas. Através de CLSM foi possível verificar a formação de biofilme em EPECa. Os biofilmes visualizados em CLSM revelaram uma grande heterogeneidade das amostras. Uma metodologia qualitativa, como CLSM deve ser empregada para indicar a formação de biofilme. A adesão e formação de biofilme por EPEC atípica de longo período pode ser uma possível explicação para os casos de diarréia persistente. / The atypical Escherichia coli enteropathogenic (EPECa) are capable to cause the lesion A/E and they don\'t transport the pEAF. Microbial biofilms are defined as complex communities formed by microrganisms adhered to surfaces embedded in an exopolysacharidic matrix. The objective of this study was to verify the capacity of formation of biofilm of 92 strains of atypical EPEC in abiotics and pre-fixed cells surfaces, using three methodologies (counting of UFC/cm2), colorimetric assay with violet crystal and CLSM). The gene shf and bfpA seem not to have relationship with the biofilm formation. There was not significant difference of biofilm formation in the tested surfaces. Through CLSM it was possible to verify the biofilm formation in EPECa. The biofilms visualized in CLSM revealed a great heterogeneity of the strains. A qualitative methodology, like CLSM should be used to indicate the biofilm formation. The adhesion and biofilm formation for atypical EPEC of long period can be a possible explanation for the cases of persistent diarrhea.

Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é um dos principais agentes de diarréia em crianças nos países em desenvolvimento. Esse patótipo pode ser classificado em dois grupos: EPEC típica (t-EPEC) e EPEC atípica (a-EPEC). O objetivo principal deste estudo foi traçar o perfil plasmidial de 78 amostras de a-EPEC bem como investigar em 72 amostras a presença de genes de virulência descritos em outros patótipos de DEC para procura de um marcador de virulência específico deste grupo de amostras. Foi detectada a presença de alguns genes de virulência como: pet (5,5%), pic (2,7%), astA (18%), efa1/lifA, toxB (2,7%), ldaH (8,3%) e ehly1 (4,2%). Os perfis plasmidiais obtidos permitiram verificar que entre as 78 amostras analisadas, 12 não possuem plasmídio, 33 possuem plasmídios entre 50 a 90 kb e 38 possuem plasmídios entre 90 a 124 kb. A pesquisa dos grupos de incompatibilidade revelou que os grupos IncFIB e IncF são os mais freqüentes entre as amostras de a-EPEC. Os resultados de RFLP do DNA plasmidial das amostras do sorotipo O55:H7 sugeriu que existem seqüências de nucleotídeos comuns entre os plasmídios. Os dados obtidos também permitiram inferir a existência de fragmentos de DNA plasmidial comum entre amostras de EHEC O157:H7 e amostras de a-EPEC O55:H7. A função biológica dos plasmídios de a-EPEC e a relação com o plasmídio pO157 necessitam de estudos complementares. / Escherichia coli (EPEC) is one of the main agents of diarrhea in children in developing countries. This pathotype can be classified in two groups: typical EPEC (t-EPEC) and atypical EPEC (a-EPEC). The aim of this study was to determine the plasmid profile of 78 strains of a-EPEC and investigate 72 strains for the presence of virulence genes described in other DEC. It was detected the presence of some virulence genes: pet (5,5%), pic (2,7%), astA (18%), efa1/lifA, toxB (2,7%), ldaH (8,3%) e ehly1 (4,2%). The plasmid profiles obtained allowed us to verify that among the 78 samples analyzed, 12 did not have plasmids, 33 strains have plasmids ranging between 50 and 90 kb, and 38 have plasmids ranging between 90 to 124 kb. Incompatibility groups analysis revealed that IncFIB and IncF groups are the most frequent among the samples of a-EPEC. RFLP analysis of plasmid DNA of strains of serotype O55:H7 suggested that there are nucleotide sequences common to the plasmids. The data also allowed inferring the existence of fragments of plasmid DNA common to EHEC O157:H7 and a-EPEC O55:H7. The biological function of aEPEC plasmid and the relationship with pO157 requires further studies.

O objetivo deste trabalho foi avaliar misturas (blends) de acidificantes e seus sais como alternativas aos antimicrobianos melhoradores do desempenho de leitões na fase de creche. Foi realizado um experimento em blocos casualizados, com 34 dias de duração para testar cinco tratamentos. Para o período de 1 a 14 dias, os tratamentos foram: Am (antimicrobiano) - dieta pré-inicial com 0,004% de sulfato de colistina (40 ppm); A1 (acidificante 1) - pré-inicial com 0,5% do blend 1 (contendo ácido fórmico, 145.000 ppm; ácido fosfórico, 85.000 ppm); A2 (acidificante 2) - pré-inicial com 0,15% do blend 2 (butirato de sódio, 64.000 ppm) e 0,4% do blend 3 (ácido láctico, 620.000 ppm; ácido fórmico, 40.000 ppm); A3 (acidificante 3) - pré-inicial com 0,8% do blend 4 (ácido propiônico, 198.000 ppm; ácido acético, 196.000 ppm; ácido fórmico, 196.000 ppm; ácido fosfórico, 21.000 ppm; ácido cítrico, 8.500 ppm); A4 (acidificante 4) - dieta basal com 0,6% do blend 4 e 0,15% do blend 5 (ácido benzóico, 590.000 ppm; ácido fórmico, 70.000 ppm; ácido fosfórico, 50.000 ppm; ácido cítrico, 40.000 ppm). Para o período de 14 a 34 dias, os tratamentos foram: Am - dieta inicial com 0,004% de sulfato de colistina; A1 - inicial com 0,3% do blend 1; A2 - inicial com 0,1% do blend 2 e 0,3% do blend 3; A3 - inicial com 0,6% do blend 4; A4 - inicial com 0,5% do blend 4 e 0,1% do blend 5. Foram utilizados 160 leitões Topigs recém-desmamados, com idade média em torno de 24 dias e peso inicial de 6,69±1,82 kg. Foram alocados quatro leitões (dois machos castrados e duas fêmeas) em cada baia (unidade experimental). Para os dados de desempenho e freqüência de diarréia, foram utilizadas 8 repetições (blocos) por tratamento. Ao final do experimento, um animal de cada baia, dos 4 primeiros blocos, foi abatido para análise da morfologia intestinal, pH estomacal e cecal e morfometria de órgãos. Durante a fase pré-inicial, o tratamento A2 (combinação dos blends 2 e 3) proporcionou melhor peso aos 14 dias (P14) (P=0,03) e ganho diário de peso (GDP) (P=0,04) que o tratamento A3 (blend 4), e melhor conversão alimentar (CA) (P=0,004) que o tratamento Am (antimicrobiano). Para o período total, o tratamento A4 (blends 4 e 5) apresentou melhor CA (P=0,0006) que o tratamento Am (antimicrobiano). Os tratamentos não afetaram (P>0,05) a freqüência de diarréia e o pH estomacal. O tratamento A4 (blends 4 e 5) apresentou menor valor de pH cecal (P=0,015) que o tratamento Am e menor valor de peso relativo do pâncreas (P=0,013), comparado aos tratamentos Am e A2. Para morfologia intestinal, o tratamento A2 proporcionou menores valores de profundidade de cripta (PC) (P=0,03) do jejuno que os tratamentos A3 e Am e maior relação altura de vilosidade:profundidade de cripta (P=0,04) do jejuno que os tratamentos A1 e A3. A análise econômica, no período de 1 a 14 dias, mostrou que os acidificantes propiciaram custos por kg de GDP, no mínimo, 4,09% inferiores ao antimicrobiano (Am). No período de 1 a 34 dias, os tratamentos A1 e A4 apresentaram custos por kg de GDP até 1,08% menores que o Am. Assim, o presente estudo mostrou que misturas de ácidos orgânicos, inorgânicos e seus sais podem ser uma alternativa viável aos antimicrobianos melhoradores do desempenho de leitões na fase de creche. / The purpose of this work was to evaluate several acidifier blends as alternatives to antimicrobial growth promoters of weanling pigs. A 34-d randomized complete block design experiment was carried out to compare five treatments. For 1-14 d experimental period, the treatments were: Am (antimicrobial) - pre-starter diet with 0.004% of colistin sulfate (40 ppm); A1 (acidifier 1) - pre-starter diet with 0.5% of blend 1 (containing formic acid, 145,000 ppm; phosphoric acid, 85,000 ppm); A2 (acidifier 2) - pre-starter diet with 0.15% of blend 2 (butyric acid, 64,000 ppm) and 0.4% of blend 3 (lactic acid, 620,000 ppm; formic acid, 40,000 ppm); A3 (acidifier 3) - pre-starter diet with 0.8% of blend 4 (propionic acid, 198,000 ppm; acetic acid, 196,000 ppm; formic acid, 196,000 ppm; phosphoric acid, 21,000 ppm; citric acid, 8,500 ppm); and A4 (acidifier 4) - pre-starter diet with 0.6% of blend 4 and 0.15% of blend 5 (benzoic acid, 590,000 ppm; formic acid, 70,000 ppm; phosphoric acid, 50,000 ppm; citric acid, 40,000 ppm). For 14-34 d experimental period, the treatments were: Am - starter diet with 0.004% of colistin sulfate; A1 - starter diet with 0.3% of blend 1; A2 - starter diet with 0.1% of blend 2 and 0.3% of blend 3; A3 - starter diet with 0.6% of blend 4; and A4 - starter diet with 0.5% of blend 4 and 0.1% of blend 5. One hundred and sixty Topigs 24-d-weaned pigs, with 6.69±1.82 kg live weight were allotted to 20 suspended pens, with four pigs (two castrated male and two female) per pen (experimental unit). For performance and diarrhea incidence data, 8 replications per treatment were used. On 34th day of experimental period, an animal of each pen of first 4 blocks was slaughtered for small intestine morphology, stomach and caecum pH and organs morphometry. For 1-14 d experimental period, treatment A2 (combination of blends 2 and 3) gave better body weight at 14th day (BW14) (P=.03) and average daily gain (ADG) (P=.04) than treatment A3 (blend 4), and better feed conversion (FC) (P=.004) than treatment Am (antimicrobial). For total experimental period (1-34 d), treatment A4 (blends 4 and 5) gave better FC (P=.0006) than treatment Am (antimicrobial). Treatments did not affect (P>.05) diarrhea frequency and stomach pH. Treatment A4 (blends 4 and 5) gave lower pH value (P=.015) than treatment Am and smaller relative pancreas weight (P=.013) than treatments Am and A2. For intestinal morphology, treatment A2 provided smaller (P=.003) jejunum crypt depth (CD) than treatments A3 and Am, and bigger (P=.04) ratio of jejunum villus height:crypt depth than treatments A1 and A3. Economical analysis showed, for 1-14 d experimental period, that the acidifiers provided cost per kg of ADG at least 4.09% lower than antimicrobial (Am). For 1-34 d experimental period, treatments A1 and A4 showed cost per kg of ADG until 1.08% lower than Am. Therefore, this study showed that blends of organic and inorganic acids and their salts can be viable alternatives to antimicrobial growth promoters of weanling pigs.