Orientador: Eunice Oba / Resumo: Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos de diferentes concentrações de Bis-carboxietil sesquióxido germânio (Ge132), adicionado ao meio de congelamento de sêmen bovino, mantido ou não sob prévia incubação, sobre as características espermáticas avaliadas, pós-descongelamento. Nove ejaculados de três touros foram misturados e divididos em grupo D (sêmen diluído e incubado a 33 °C por 30 minutos antes da refrigeração) e R (sêmen refrigerado a 4 °C imediatamente após a diluição). Ambos o grupos foram suplementados com 0, 500 e 1000 μg/mL de Ge132, resultando nos subgrupos experimentais D0, R0,D500, D1000, R500 e R1000. Após congelamento, as amostras de sêmen foram descongeladas e avaliadas aos 5 e 60 minutos, quanto a motilidade, velocidade e alterações morfofuncionais espermáticas. Os dados foram analisados, considerando-se a diferença entre os grupos e entre os momentos de avaliação. Maior valor para motilidade total (P<0,05) foi obtido no R0 em comparação com o R1000, D500 e D0. As análises realizadas aos 5 e 60 minutos revelaram diminuição dos valores da motilidade total no R500 e no R1000 e no D0, D500 e R500 para a ALH. Além disso, os valores da LIN aumentaram (P<0,05) no D1000, da mesma forma que a diferença para a STR entre os momentos foi maior no R500, R1000 e D1000. Maior porcentagem (P<0,05) de células com integridade de membrana foi observada no R500 do que no D0, D1000 e R1000, assim como para células sem desestabilização de membrana, a qual R500 aprese... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to investigate the effects of different concentrations of Bis-carboxietil sesquioxide germanium (Ge132) added to a bovine freezing medium, maintained or not under previous incubation, on frozen/thawed sperm characters. Nine bull ejaculates were pooled and divided into group D (ejaculate was diluted and kept at 33 °C for 30 min before cooling) and R (ejaculate was diluted and immediately cooled at 4 °C). Both of groups were added with 0, 500, and 1000 μg/mL of Ge132, forming the experimental groups D0, R0, D500, D1000, R500, and R1000. After freezing, the sperm samples were thawed and assessed at 5 and 60 minutes for motility, velocity and morphological/functional characteristics. The data were expressed taking into account a difference between the groups and between the moments of analysis. Higher (P<0.05) mean values were obtained in R0 for total motility in comparison to R1000, D500, and D0. The analyzes at 5 and 60 minutes revealed a significant decreased for total motility in R500 and R1000, as well as, in D0, D500 and R500 for ALH. However, mean values for LIN increased (P<0.05) in D1000, similarly that the difference for STR between moments was higher in R500, R1000 and D1000. Greater proportions (P<0.05) for acrossomal and plasmatic membrane integrity were observed in R500 than in D0, D1000 and R1000, as well as for without membrane destabilization than in D1000. Lower production of O2-. occurred in R0, with no significant differences among groups for ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eunice Oba / Resumo: A congelação de sêmen é uma ferramenta de grande importância na reprodução de animais domésticos, auxiliando na difusão do do material genético, preservando-o por tempo indeterminado, além do maior aproveitamento do uso de reprodutores com genética superior comprovada. Para que a congelação de sêmen seja eficiente e alcance resultados satisfatórios com a inseminação, utiliza-se no processo o emprego de diluentes, que tem como função proteger a célula contra o choque térmico e manter o espermatozoide viável até o momento da inseminação. O uso de frações de leite como meio diluidor tem se tornado muito conhecida e de grande importância no processo, usando, por exemplo, as micelas de caseína que conferem função de proteção da membrana plasmática e manutenção da viabilidade espermática. Levando em conta essas informações, este trabalho teve como objetivo avaliar a ação do caseinato de sódio nas características seminais pós descongelação do sêmen utilizando diluentes a base de gema de ovo (BB) e o mesmo diluente acrescido de caseinato de sódio 2% (BC).No experimento I, foram colhidos 3 ejaculados de 8 animais (n=24) por eletroejaculação, este sêmen foi divido em duas alíquotas, uma era diluída em meio comercial a base de gema de ovo e a outra alíquota diluída no mesmo meio mas acrescido de 2% de caseinato de sódio, em seguida foram envasadas em palhetas francesas com volume de 0,25 ml e refrigerado 4 horas á 5 °C em seguida congelado em nitrogênio líquido. Após a congelação as amo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The reproduction of domestic animals, helping in the diffusion of the genetic material, preserving it indefinitely, in addition to the greater use of reproducers with proven superior genetics. In order for semen freezing to be efficient and achieve satisfactory results with insemination, the use of diluents is used in the process, which has the function of protecting the cell against thermal shock and keeping the sperm viable until the time of insemination. The use of milk fractions as a diluting medium has become very well known and of great importance in the process, using, for example, the casein micelles that provide a protective function of the plasma membrane and maintenance of sperm viability. Taking this information into account, this study aimed to evaluate the action of sodium caseinate on semen characteristics after semen thawed using egg yolk (BB) diluents and the same diluent plus 2% sodium caseinate (BC) In experiment I, 3 ejaculates were collected from 8 animals (n = 24) by electroejaculation, this semen was divided into two aliquots, one was diluted in commercial medium based on egg yolk and the other diluted in the same medium but added of 2% sodium caseinate, then they were packaged in French straws with a volume of 0.25 ml and refrigerated 4 hours at 5 ° C then frozen in liquid nitrogen. After freezing, the samples were evaluated by computerized analysis of sperm movement (CASA), integrity of plasma and acrosomal membranes and generation of superoxide anion... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.

Submitted by EDWIN SANTIAGO RIOS ESCALANTE null (esre_2808@hotmail.com) on 2016-09-12T20:28:02Z No. of bitstreams: 1 template-feg-2016-VERSÃO FINAL.pdf: 3419531 bytes, checksum: 2e6eca3a01fecef269a3334812ba75d2 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-09-14T19:40:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 escalante_esr_me_guara.pdf: 3419531 bytes, checksum: 2e6eca3a01fecef269a3334812ba75d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-14T19:40:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 escalante_esr_me_guara.pdf: 3419531 bytes, checksum: 2e6eca3a01fecef269a3334812ba75d2 (MD5) Previous issue date: 2016-07-12 / Agência Nacional de Petróleo, Gás Natural e Biocombustíveis (ANP) / Os limites superior e inferior de inflamabilidade são as concentrações máximas e mínimas de um combustível no ar, respectivamente, na qual uma chama pode se propagar, eles são considerados ferramentas chaves na predição do fogo, avaliando a possibilidade de explosão e projeto de sistemas de proteção. Existe interesse em encontrar os limites de inflamabilidade do etanol misturado com um diluente para pressões reduzidas para o futuro uso desse biocombustível em aplicações aeronáuticas tendo em conta a altitude típica de um avião comercial (<40 000 ft.). Neste trabalho foi desenvolvido experimentalmente a inflamabilidade do combustível líquido: Etanol hidratado e utilizou-se como gás diluente o nitrogênio. A bancada experimental usada, consiste de um recipiente esférico de 20 litros como câmara de aquecimento, uma fonte de ignição por faísca localizada na parte central da câmara. O líquido foi injetado com uma seringa de precisão de 1ml de volume para logo se evaporar no interior da câmara, o nitrogênio e ar foram injetados usando pressões parciais. O método para medir a inflamabilidade foi baseado na ignição elétrica e observação visual da propagação da chama conforme norma ASTM E-681. Primeiro os limites superior e inferior de inflamabilidade foram determinados para elevada temperatura (60℃) e pressão ambiente (101,325 kPa) para comparar os resultados com os dados publicados na literatura científica. Depois procedeu-se trabalhar com pressões reduzidas (80, 60, 40 e 20 kPa) para essa mesma temperatura, finalmente foram realizados testes para uma temperatura maior (110℃) para avaliar a influência da temperatura sobre os limites de inflamabilidade de misturas etanol-ar-diluente, os resultados foram plotados como função da relação e adição de nitrogênio e esses gráficos seguem a mesma tendência de trabalhos publicados na literatura científica. / The upper and lower limits of flammability are the maximum and minimum concentrations of a fuel in the air, respectively, in which the flame can spread; they are considered key tools for predicting fire, evaluating the possibility of explosion and protection system design. There is interest in finding the flammability limits of ethanol mixed with a diluent to reduced pressure for future use this biofuel in aeronautical applications having regard the typical height of a commercial aircraft (<40, 000 ft.). In this experimental work was carried flammability of the liquid fuel: Ethanol hydrate and used as a diluent gas nitrogen. The experimental apparatus consists of a 20 liters spherical vessel as heating chamber, a spark ignition source located in the central part of the chamber. The liquid was injected with a 1 ml syringe precision volume immediately evaporates in the chamber; nitrogen and air were injected using partial pressures. The method for flammability measuring was based in both visual observation electric ignition and flame propagation as defined by ASTM E-681. First, the upper and lower flammability limits were determined to a high temperature (60 ℃) and ambient pressure (101.325 kPa) to compare the results with data published in the scientific literature. After, we proceeded to work at reduced pressures (80, 60, 40 and 20 kPa) to same temperature. Finally, tests were carried out for a higher temperature (110 ℃) to evaluate the influence of temperature on the flammability limits ethanol-air-diluent mixtures, the results were plotted as a function of the relationship and adding nitrogen and these graphs follow the same trend of papers published in scientific literature.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-09T12:30:04Z No. of bitstreams: 1 Zoraide Fernandes Coleto.pdf: 876143 bytes, checksum: b13d1564a69ff252704812c9a3bbebcd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-09T12:30:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zoraide Fernandes Coleto.pdf: 876143 bytes, checksum: b13d1564a69ff252704812c9a3bbebcd (MD5) Previous issue date: 2006-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Antioxidants act as protective agents of spermatozoa preventing the reactive oxygen species formation and consequent lipidic peroxidation rising the motility and the vigor and avoiding the damage provoked to the DNA. The aiming of this work was to study the effect of different concentrations of vitamin C and Trolox (water soluble analogue of vitamin E) on the viability of dog sperm cells submitted to the cryopreservation process. The Pool with the second semen fraction of four dogs, harvested through digital manipulation was supplemented with vitamin C and Trolox on the concentration of 200 X 106 sperm cells/dose, according to each group: Exp 1: G1= Tris- egg yolk (Control); G2 = Tris-egg yolk + 1200M of vitamin C; G3= Tris-egg yolk + 2400M of vitamin C; G4= Tris-egg yolk + 100M of Trolox e G5= Tris-egg yolk + 200M of Trolox; Exp 2: G1 = Tris-egg yolk (Control); G2 = Tris-egg yolk + vitamin C (1200M); G3 = Tris-egg yolk + Trolox (200M) and G4 = Tris-egg yolk + vitamin C (1200M) + Trolox (200M); Exp 3: G1 = Tris-egg yolk or Kenney (Control); G2 = Tris-egg yolk or Kenney + vitamin C (1200 M); G3= Tris-egg yolk or Kenney + Trolox (200 M); G4= Tris-egg yolk or Kenney + vitamin C (1200 M) + Trolox (200 M). The samples were frozen using two freezing curves (Curve 1 = -0,25oC/min until 5 oC, -15 oC/min until -5 oC, -10 oC/min until –120 oC; Curve 2 = -0,25 oC/min until 5 oC, -20 oC/min until -5 oC, -20 oC/min until –120 oC), being C1 on the 1, 2, and 3 Experiments and C2 on the 3 Experiment. The samples were stored in liquid nitrogen. After thawed, it was obshigher (P<0.05) among Control, vitamin C (1200M) and Trolox (200M) groups. The vigor, motility, acrosomal and DNA integrity, as well as the percentage of sperm cells stained with nitroblue tetrazolium were not different among experimental groups. On the Exp. 2, the spermatic motility after thawing did not differ among the groups or between the two freezing curves. On the C1, the group diluted with vitamin C + Trolox showed more acrosomal integrity, but on the C2 there was no difference among groups. The percentage of intact acrosome from curve 1, did not differ between the control group (G1) and with vitamin C (G2), but were inferior (P < 0,05) than the vitamin C + Trolox (G4), meanwhile in the Curve 2, there was no difference among the groups. Comparing the freezing curves, it was found a difference (P < 0,05) on the percentage of acrosome prevailed from G2 (vitamin C). Big percentages of sperm cells showed no oxidative stress or, when it occurred, it was concentrated in the middle section of the cells. On the Exp. 3, the sperm motility of the group diluted with Tris- egg yolk supplemented with vitamin C + Trolox were higher than the others. Higher percentage of the cells with intact acrosome were observed on the group supplemented with vitamin C + Trolox. Samples diluted with Kenney (no antioxidant) showed higher percentage of intact acrosome than the diluted on the Tris-egg yolk (no antioxidant). It was observed higher percentage of cells (P<0.05) with head and tail showing the formation of formazana ++ on the samples added with Trolox (G3) and diluted with Tris – egg yolk than those diluted in Kenney. It is concluded that vitamin C (1200M) and Trolox (200M) cab be used to freeze dog semen; The addition of vitamin C and Trolox in Tris – egg yolk diluted samples rise the viability of the spermatic cellserved on the Exp.1 that the frozen at -150 oC/min and -10 oC/min on the negative curves; the addition of vitamin C associated with Trolox minimize the deleterious effects of the cryopreservation of semen on the sperm acrosomal integrity on the diluted samples in Tris – egg yolk. / Anti-oxidantes funcionam como agentes protetores dos espermatozóides impedindo a formação de espécies de oxigênio reativo (ROS) e conseqüente peroxidação lipidica, aumentando a motilidade e o vigor espermático, e evitando os danos provocados ao DNA. Objetivou-se com este trabalho estudar o efeito da adição de vitamina C e Trolox na congelação de sêmen de cão da raça Cocker Americano. O Pool da segunda fração do sêmen de quatro cães, colhida através de manipulação peniana, foi diluído e suplementado com vitamina C e Trolox na concentração de 200 x 106 espermatozóides/dose, de acordo com cada grupo. Exp. 1: G1= Tris-gema (Controle); G2= Tris-gema + 1200M de vitamina C ; G3= Tris-gema + 2400M de vitamina C; G4= Tris-gema + 100M de Trolox e G5= Tris-gema + 200M de Trolox; Exp. 2: G1= Tris-gema (Controle); G2= Tris-gema + vitamina C (1200M); G3= Tris-gema + vitamina E (200M); G4= Tris-gema + vitamina C (1200M) + E (200M); Exp. 3: G1= Tris-gema ou Kenney (Controle); G2 = Tris-gema ou Kenney + vitamina C (1200 M); G3= Tris-gema ou Kenney + Trolox (200 M); G4= Tris-gema ou Kenney + vitamina C (1200 M) + Trolox (200 M). As amostras foram congeladas utilizando duas curvas (C1 = -0,25 oC/min até 5 oC, -15 oC/min até -5 oC, -10 oC/min até –120 oC; C2 = -0,25 oC/min até 5 oC, -20 oC/min até -5 oC, -20 oC/min até –120 oC), sendo C1 nos Exp. 1, 2 e 3, e C2 no Exp. 2, e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 oC durante 30 segundos, observou-se no Exp.1, motilidade espermática significativamente superior (P<0,05) nos grupos controle e tratados com vitamina C (1200M) ou Trolox (200M). O vigor, a integridade do acrossoma e do DNA, bem como o percentual de células espermáticas coradas com Nitroblue tetrazolium não diferiram entre os grupos experimentais. No Exp. 2, a motilidade não diferiu entre grupos ou entre curvas de congelação. Na curva C1, o grupo adicionado de vitamina C + Trolox apresentou mais células com acrossomas intactos, enquanto na C2 não houve diferença entre os grupos. O porcentual de acrossomas íntegros da curva 1, não diferiu entre os grupos controle (G1) e com vitamina C (G2), mas foram inferiores (P < 0,05) ao de vitamina C + Trolox (G4), enquanto na curva 2, não houve diferença entre os grupos. Ao se comparar curvas de congelação encontrou-se diferença (P<0,05) no porcentual de acrossomas reagidos do G2 (vitamina C). Grandes porcentuais de espermatozóides apresentaram-se sem estresse oxidativo ou, quando ocorria, concentrava-se na peça intermediária das células. No Exp. 3, a motilidade espermática dos grupos diluídos com Tris-gema e Tris-gema + vitamina C + Trolox foram superiores aos demais grupos. Maior porcentual de células com acrossomas íntegros foi observado no grupo suplementado com vitamina C + Trolox. Amostras diluídas em Kenney (sem anti-oxidante) apresentaram maior porcentual de acrossomas íntegros do que as diluídas em Tris-gema (sem anti-oxidante). Observou-se maior formação de formazana na cabeça e cauda de células diluídas em Tris-gema + Trolox, do que nas diluídas em Kenney. Conclui-se que a vitamina C (1200M) e Trolox (200M de Trolox) podem ser utilizadas para congelação de sêmen de cão; A adição de vitamina C e Trolox em amostras diluídas em Tris-gema aumenta a viabilidade das células espermáticas congeladas a -15 oC/min e -10 oC/min nas curvas negativas; A suplementação de vitamina C + Trolox minimiza os efeitos deletérios da criopreservação do sêmen sobre a integridade do acrossoma espermático de amostras diluídas em Tris-gema.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_elisangela_madeira.pdf: 269361 bytes, checksum: 0f80449efc17473198ff8837f06f02f4 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / The objectives of this study were to determine the main bacteria present in ram semen and to evaluate the efficiency of distinct antibiotics in controlling such microorganisms and on sperm viability. Ejaculates were collected from five rams and extended in TRIS-egg yolk. In Experiment 1, the following treatments were tested: control, with no antibiotics; GTLS, with 500 μg/ml of gentamicin, 100 μg/ml of tylosin, 300 μg/ml of lincomycin and 600 μg/ml of spectinomycin; PENSTREP, with 500 μg/ml of penicillin and 100 μg/ml of streptomycin; CEFT, with 50 μg/ml of sodium ceftiofur; and ENRO, with 1000 μg/ml of enrofloxacin. For bacteria identification, samples were collected: the preputial ostium; the artificial vagina; the ejaculates; the semen pool from the five rams; after treatments allocation and stabilization at 5°C; and after thawing. In Experiment 2, variation in the antibiotics concentrations used in Experiment 1 were tested: 25% higher (GTLS+25, PENSTREP+25, CEFT+25 and ENRO+25); 50% higher (GTLS+50, PENSTREP+50, CEFT+50 and ENRO+50); 25% lower (GTLS-25, PENSTREP-25, CEFT-25 and ENRO-25); and 50% lower (GTLS-50, PENSTREP-50, CEFT-50 and ENRO-50). Samples of ram semen were used for counting colony forming units (CFU). The isolated microorganisms were Staphylococcus sp., Klebsiella sp., Corynebacterium sp. and Bacillus sp. The ENRO treatment presented the lowest sperm motility for semen cooled at 5°C and after thawing (P < 0.05), although the post-thawing motility did not differ from that observed for the CEFT and GTLS treatments (P > 0.05). No differences were observed among treatments regarding sperm membrane, acrosome and sperm DNA integrity (P > 0.05). The post-thawing proportion of sperm having DNA integrity was greater for the PENSTREP than for the GTLS treatment (P < 0.05), although sperm DNA integrity may have been impaired by the freezing-thawing process. In experiment 2, the GTLS+50, PENSTREP, ENRO+25 and ENRO+50 treatments presented reduced sperm motility (P < 0.05). All treatments reduced the number of CFU in comparison with the control treatment (P < 0.05). The CFU for the GTLS+50, ENRO+25 and ENRO+50 treatments and the concentrations tested for both those treatments did not differ (P < 0.05), although both were more effective than the PENSTREP and CEFT treatments (P < 0.05). However, the ENRO treatment was associated with reduced sperm motility, especially with high antibiotic concentrations. The treatments did not influence sperm morphology and the integrity of sperm membrane, acrosome and DNA. / Este estudo tem como objetivos determinar os principais gêneros bacterianos presentes no sêmen ovino e avaliar a ação de diferentes antibióticos no controle destes microrganismos e o seu impacto sobre a viabilidade espermática. Todos os ejaculados foram coletados de cinco machos ovinos e diluídos em Tris-gema de ovo. No experimento 1 foram testados os seguintes tratamentos: Controle sem antibiótico; GTLS, com 500 μg/ml de gentamicina, 100 μg/ml de tilosina, 300 μg/ml de lincomicina e 600 μg/ml de espectinomicina; PENSTREP, com 500 μg/ml de penicilina e 100 μg/ml de estreptomicina; CEFT, com 50 μg/ml de ceftiofur sódico; e ENRO, com 1000 μg/ml de enrofloxacina. Para a identificação dos gêneros bacterianos presentes, amostras foram colhidas do óstio prepucial, da vagina artificial, dos ejaculados carneiros, do pool de sêmen dos cinco carneiros e após a inclusão dos tratamentos e estabilização a 5 °C e após o descongelamento. No experimento 2, foram testadas variações nas concentrações de antibióticos avaliadas no Experimento 1: 25% acima (GTLS+25; PENSTREP+25; CEFT+25; ENRO+25), 50% acima (GTLS+50; PENSTREP+50; CEFT+50; ENRO+50), 25% abaixo (GTLS-25; PENSTREP-25; CEFT-25; ENRO-25) e 50% abaixo (GTLS-50; PENSTREP-50; CEFT-50; ENRO-50). Amostras de sêmen dos carneiros foram utilizadas para contagem das unidades formadoras de colônias (UFC). Os microrganismos isolados foram Staphylococcus sp., Klebsiella sp., Corynebacterium sp. e Bacillus sp. O tratamento com enrofloxacina apresentou a motilidade espermática mais baixa para o sêmen refrigerado a 5 °C e após o descongelamento (P<0,05), no entanto a motilidade pósdescongelamento não diferiu (P>0,05) dos tratamentos CEFT e GTLS. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos quanto à integridade da membrana plasmática, do acrossoma e do DNA espermático (P>0,05). Após o descongelamento, o percentual de espermatozóides com DNA íntegro foi maior (P<0,05) no tratamento PENSTREP em relação ao GTLS, apesar de que este parâmetro pode ter sido afetado pelo processo de criopreservação. No experimento 2, GTLS+50, PENSTREP, ENRO+25 e ENRO+50 foram os tratamentos que apresentaram redução na motilidade espermática (P<0,05). Todos os tratamentos reduziram consideravelmente o número de UFC em relação ao grupo controle. A contagem de UFC para os tratamentos GTLS+50, ENRO+25 e ENRO+50 e as variações de concentração para ambos não foram diferentes entre si (P>0,05), porém ambos foram mais efetivos que os tratamentos PENSTREP e CEFT (P<0,05). Porém, o tratamento com enrofloxacina prejudicou a motilidade espermática, especialmente quando se elevou a concentração Os tratamentos não influenciaram a morfologia, integridade da membrana plasmática, integridade de acrossoma e integridade de DNA dos espermatozóides.

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Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.