Made available in DSpace on 2016-03-15T14:24:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luiz_sangenis_ioc_dout_2013.pdf: 6266422 bytes, checksum: 27e01a2cd899212302255997269467d6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O estado do Rio de Janeiro nunca foi considerado endêmico para doença de Chagas. Porém, 3,7% dos pacientes acompanhados no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas da Fundação Oswaldo Cruz são naturais do estado do Rio de Janeiro. O objetivo deste trabalho é esclarecer as formas de exposição a Trypanosoma cruzi nos pacientes portadores de doença de Chagas naturais do estado do Rio de Janeiro, bem como identificar as formas de apresentação clínica e suas respectivas progressões. O estudo foi dividido em quatro etapas, sendo as duas primeiras caracterizadas como um delineamento série de casos e as duas últimas como estudos seccionais de campo. Foram estudados 69 pacientes com doença de Chagas naturais do Rio de janeiro no período de 1986 a 2011 (média de 12,5 anos de observação), sendo 67% oriundos de áreas urbanas do estado e 33% de áreas rurais. A transmissão congênita foi a mais frequente, 40% dos casos, seguida daqueles que adquiriram a infecção autóctone de forma natural (22%) e transfusional (15%). Houve predomínio do sexo masculino (67%) e de brancos (56,5%). A média de idade ao diagnóstico foi de 38 anos. A maior parte dos pacientes oriundos das áreas rurais residiu em casas de pau a pique, tinham o hábito de consumir animais silvestres e caldo de cana in natura. O conhecimento de barbeiros foi referido por 19% dos casos. A forma indeterminada foi a mais prevalente (56,5%), seguida da forma cardíaca (42%) e digestiva (10,5%). O bloqueio do ramo direito, o hemibloqueio anterior esquerdo e as extrassístoles ventriculares foram alterações eletrocardiográficas comuns A hipertensão arterial estava presente em 23,2% e a diabetes mellitus em 7,2%. O tratamento etiológico foi realizado por 35% dos pacientes, sendo que nenhum paciente apresentou negativação sorológica. A progressão para formas clínicas mais graves foi observada em 12% dos pacientes, sendo inferior a 1% ao ano entre os indeterminados. A insuficiência cardíaca congestiva foi a causa de óbito mais comum. Entre os 15 casos autóctones, a maior parte era oriunda de municípios do Norte Fluminense (87%). Além das sorologias positivas, 1 (8,3%) apresentou positividade ao xenodiagnóstico e 4 (36,3%) à PCR, sendo identificada infecção mista pelo genótipo (TcI/TcVI). A forma cardíaca estava presente em 54% dos casos. No estudo seccional de campo foram visitadas 245 propriedades rurais de São Sebastião do Alto e São Fidélis, sendo 84% de paredes de tijolos e 16% de pau a pique. O consumo de animais silvestres foi referido por 78% dos moradores e de caldo de cana por 88%. O conhecimento do barbeiro era comum a 34% dos habitantes, correspondendo a 31% das casas visitadas. Das 404 amostras de sangue coletadas, três revelaram positividade para a doença de Chagas (0,74% de prevalência). Foram capturados 49 triatomíneos da espécie Triatoma vitticeps no intradomicílio e 73% apresentaram positividade para T. cruzi do genótipo I pela PCR multiplex do gene do mini-exon. Trinta e quatro mamíferos silvestres foram capturados e a infecção pelo T. cruzi estava presente em 8,8%, sendo identificado o genótipo I em um roedor da espécie Akodon cursor. Constatou-se dois padrões epidemiológicos da doença de Chagas humana no Rio de Janeiro, um urbano com predomínio de infecções pela via congênita e outro rural com mecanismo de transmissão vetorial A presença de reservatórios silvestres sinantrópicos, triatomíneos autóctones invadindo os domicílios e o hábito da caça são condições que propiciam o surgimento de casos humanos da doença no Rio de Janeiro / Rio de Janeiro State was never considered to be a Chagas disease endemic area . H owever, 3.7% of patients followed at the Evandro Chagas Clinical Research Institute of the Oswaldo Cruz Foundation were born at Rio de Janeiro State. The aim of this study was to clarify the Chagas disease mode of transmission faced by the patients born at Rio de Janeiro State and their clinical presentation and disease progressions . The study was perform ed in four steps: characterization of a case se ries and environmental studies . We retrospec tively identified 69 patients with Chagas d isease born at Rio de Janeiro followed at our institution between 1986 and 2011 . From those, 67% lived in urban areas and 33% i n rural areas. Most patients from rural areas lived in mud and wattle houses and used to consume wild animals’ meat and drink fresh sugar cane juice. Most of the patients were males (67%) and whites (56.5%). The average age at diagnosis was 38 years . Hyper tension was present in 23.2% and diabetes mellitus in 7.2% of the patients . Nineteen percent of the patients reported to know “ kissing bugs ” . The most frequent transmission mechanism was congenital (40%), followed by autochthonous cases (22%) and transfusi on (15%). The most prevalent clinical presentation was the indetermi nate form (56.5%), followed by cardiac form (42%) and gastrointestinal (10.5%). The most common electrocardiographic changes present in patients with cardiac form were right bundle branch block, left anterior hemiblock and vent ricular extrasystoles . Thirty - five percent of the patients received antitrypanosomal therapy , but none of them presented a negative serology afterwards . The mean follow - up time was 12.5 years. Disease progression occurred in 12% of the patients, but the progression rate per year was less than 1% among patients with the indeterminate form. H eart failure was the most common cause of death. Among the 15 autochtho nous cases, most were born at the N o rth Region of the Rio de Janeiro State (87%) and 54% them presented cardiac form . Besides the positive serological tests for Chagas disease, one (8 . 3%) of them presented a positive xenodiagnosis and 4 (36.3%) positive PCR. PCR identified mi xed infection by genotype TcI and TcVI. In the environment al study , 245 dwellings (84 % of brick wall ed houses and 16% mud and wattle houses) were visited in São Sebastião do Alto and São Fidé lis. Most of the residents reported to consu me wild animals ’ meat ( 78% ) and sug ar cane juice ( 88% ) . Thirty - four percent of the inhabitants, which represented 31% of the visited homes, reported to know “k issing bugs ” . The prevalence of positive serology for Chagas disease was 0.74% among 404 samples . Among 49 species of Triatoma vitti ceps captured indoors, 73% were positive for T. cruzi I genotype. Among 34 wild mammals captured , T. cruzi infection wa s present in 8.8% and the genotype I was identified in a rodent species Akodon cursor . Therefore , two epidemiological patterns of human Chagas disease were found in Rio de Janeiro: an urban pattern with predominance of the congenital mode transmission and a rural one with a vector ial mode transmission. W ild reservoirs, autochthonous triatomines inside households and hunting habit s are c onditions that favor the occurren ce of human Chagas disease in Rio de Janeiro

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:47:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 nathalia_correia_ioc_mest_2015.pdf: 2323287 bytes, checksum: cd639a3b9f983d6d6bdd5bea1e8bcf4d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Triatoma b. brasiliensis, considerado um dos principais vetores da doença de Chagas nas áreas do semiárido nordestino brasileiro, faz parte de um complexo de espécies proposto por estudos multidisciplinares. Atualmente, neste complexo estão incluídos Triatoma b. macromelasoma e Triatoma juazeirensis, apresentando um padrão de distribuição parapátrico nos estados de Pernambuco e Bahia, respectivamente. Todas as espécies do complexo T. Brasiliensis foram encontradas infectadas naturalmente por Trypanosoma cruzi e podem invadir e/ou colonizar as habitações demonstrando diferentes graus de adaptação aos ecótopos artificiais. Em laboratório, estas espécies podem se reproduzir e gerar obtidos híbridos férteis. Assim, a hipótese de existirem híbridos naturais foi testada porestudos morfométricos comparativos das asas e também do padrão cromático do pronoto. Os resultados sugeriram a existência de uma área de hibridação natural no estado de Pernambuco onde posteriormente uma alta variabilidade fenotípica foi registrada,corroborando a hipótese levantada. Pernambuco apresenta altos índices de infestação domiciliar por triatomíneos os quais podem ser encontrados em ecótopos naturais, portanto, os riscos de transmissão do agente etiológico e as possibilidades de reinfestação das casas demandam um constante monitoramento e controle dos vetores nas áreas habitadas. Este trabalho teve por objetivo comparar parâmetros relacionados à competência vetorial de ninfas de 5º estádio de T. b. Brasiliensis e T. juazeirensis e de seus híbridos experimentais(Hjb -\2640T. Juazeirensis x \2642T. b. Brasiliensis e Hbj -\2640T. b. Brasiliensis x \2642T. juazeirensis), obtidos por cruzamentos recíprocos entre as espécies. A suscetibilidade dos híbridos e parentais à infecção por T. cruzi foi analisada pela alimentação artificial com a cepa TcI 0354, e posteriormente dissecados nos períodos de 10, 20 e 30 dias Os comportamentos alimentar e de defecação foram analisados comparativamente pelo:1-registro do tempo de início do repasto sanguíneo em camundongos,2-tempo de duração da alimentação, 3-tempo do término da alimentação e tempo e comportamento de defecação. Os insetos foram pesados antes e após a alimentação nos dois experimentos. Híbridos e parentais apresentaram-se infectados por T. cruzi durante os 30 dias após a alimentação infectante, predominantemente com epimastigotas. A quantidade de epimastigotas no estômago e no intestino de T. Juazeirensis foi significativamente menor do que híbridos e T. b. brasiliensis. A população de tripomastigota metacíclica foi significativamente maior em híbridos no intestino e ampola retal. Os híbridos demonstraram-se mais suscetíveis à infecção por apresentarem estatisticamente um padrão da infecção ao longo do tempo mais homogêneo do que seus parentais. Não foi encontrada relação entre volume de sangue ingerido e taxa de infecção. Híbridos e parentais apresentaram voracidade, pois procuraram avidamente a fonte alimentar nas primeiras semanas. Após a segunda semana, os híbridos levaram mais tempo para iniciarem o repasto sanguíneo e ainda na primeira semana levaram mais tempo para defecar após a alimentação quando comparados aos parentais. T. b. brasiliensis, apresentou as menores médias de tempo para se aproximar da fonte alimentar e iniciar a alimentação, porém não foi estatisticamente diferente de T. juazeirensis. Todos os grupos defecaram próximo do camundongo,T. b. brasiliensis defecou mais vezes em menos de um minuto Este trabalho ressalta a importância epidemiológica desta área em que são encontrados os fenótipos de T. b. brasiliensis, pois híbridos e parentais apresentaram características de bons vetores, sendo os híbridos mais suscetíveis à infecção pela cepa 0354 do que as espécies parentais, enquanto que os parentais apresentaram melhor comportamento alimentar e de defecação / Triatoma b. brasiliensisis consider one of the main vectors of Chagas disease in the Northeast Region of Brazil and belongs to a species complex proposed by multidisciplinar studies. In this species complex, is also included Triatoma b. macromelasoma and Triatoma juazeirensis, geographically distributed in a parapatric form in Pernambuco and Bahia States, respectively. All species of Triatoma brasiliensis complex can be found infected by Trypanosoma cruzi in nature and invading and/or colonizing human habitations with different degrees of adaptation to each artificial ecotope. Since experimental crossings between all of those species can result in fertile hybrids, there was a question whether those hybrids could naturally exist that was tested by morphometric comparisons of the wings and chromatic pattern of pronotum. It was latter suggested the existence of a natural hybridization zone in Pernambuco State in which there is a high phenotypic variability, in corroboration with the hypothesis raised. There are high rates of house infestation by triatomine in Pernambuco State, and it is also find insects in natural ecotopes, therefore there is a high risk of transmission of the etiological agent caused by the possibility of domiciliary reinfestations by insect vector, which demands constant monitoring and control of vectors. This study aimed to compare some of the parameters related to the vector competence of T. b. brasiliensis, T. juazeirensis and their experimental hybrids(Hjb -\2640T. juazeirensis x \2642T. b. brasiliensis and Hbj -\2640T. b. brasiliensis x \2642T. juazeirensis) in the5thnymphal stage, obtained through reciprocal crosses. It was analyzed their susceptibility to infection with T. cruzi through artificial feeding with TcI 0354strain, and then dissected in the10th, 20th and 30th days after infection The feeding and defecation behaviors were comparatively analyzed by the parameters: 1-the elapsed time for the insect to start feeding in mice, 2-the elapsed time between the end of feeding, 3-the defecation time and behavior were registered. We weighed the insects before and after both feeding experiments. Hybrids and parental species maintained infected with the 0354 strain of T. cruzi in the 30 days after the infective of experiment and the epimastigote was the most found form of the parasite. It was significantly lower the number of epimastigotes in the stomach and intestine of T. juazeirensis in comparison to hybrids and T. b. brasiliensis. It was detected a significantly higher percentage of metacyclic trypomastigotes in the intestine and rectum of hybrids. These hybrids demonstrated higher susceptibility to this strain because they present statistically a homogenous pattern of infection. It wasn\2019t found any relationship between ingested blood volume and rates of infection. Hybrids and parental species showed feeding voraciously as they eagerly sought food source in the first weeks of feeding. After two weeks, hybrid stook longer time to begin the blood meal. In addition, in the first week of observation the hybrids took more time for defecation after feeding when compared with parental species. T. b. brasiliensis showed the lowest average time to approach the food source and start feeding, but it was not statistically different from T. juazeirensis All groups of insects defecated near or directly in the mouse but T. b. brasiliensis did it more times in less than 1 minute. This work stress the epidemiological importance in this geographical area of the phenotypes of T. b. brasiliensis, since either hybrids and their parental species presented vector capacity, although hybrids seem to be more susceptible to infection with 0354 T. cruzi strain than parental species, the latter presented better feeding and defecation behavior

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 rafaela_rymer_ioc_mest_2008.pdf: 24426174 bytes, checksum: b883213aabb48fb7bd040264314153b8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Uma das principais patologias relacionadas à Doença de Chagas é a cardiopatia chagásica, sendo uma das principais causas de morte durante a fase aguda da infecção. A cardiopatia aguda difere da crônica, devido ao processo inflamatório intenso e a presença de ninhos de parasitas, diferente do processo fibrótico e praticamente ausência de parasitas, observando durante a fase crônica. As cininas são um grupo de proteínas vasoativas que apresentam uma relação estreita com a infectividade do Trypasonoma cruzi. Diversos autores descrevem a capacidade do T. cruzi em ativar o sistema de cininas e infectar células, sendo sua infectividade, potencializada, pela inibição da degradação dessas moléculas. Cininas podem induzir resistência à infecção pelo T. cruzi através da ativação de células dendríticas, pela via de sinalização dependente de B2R. Recentemente, foi demonstrado que camundongos tratados com captopril durante o curso da infecção desenvolvem menos fibrose e necrose do tecido cardíaco e redução da inflamação Assim, nós decidimos investigar o papel do sistema de cininas na formação da cardiopatia chagásica, durante a fase da infecção experimental pelo T. cruzi. Nossos resultados demonstram que o sistema de cininas não é capaz de modular a curva de parasitemia, nem a celularidade de órgãos linfóides primários e secundários durante a fase aguda da infecção experimental, com a exceção de HOE-140, que foi capaz de inibir o aumento da celularidade descrito para linfonodos subcutâneos durante a fase aguda. Por outro lado, as cininas são capazes de modular a expressão de moléculas de matriz extracelular no coração. Nós observamos que a potencialização do sistema de cininas aumenta o infiltrado inflamatório na fase aguda, e que o bloqueio do B2R parece agravar essa situação, enquanto que o processo de formação da fibrose é inversamente proporcional ao aporte celular. Nossos dados sugerem que a via de cininas participa da formação da cardiopatia, durante a fase aguda da infecção e que possivelmente existe um mecanismo compensatório agindo através de B1R, para assumir parte da atividade vasoativa de B2R / One of the major pathologies related to Chaga`s Disease is the cardiomyopathy, being one of the main cause of death during the acute phase of the infection. The acute cardiomyopathy differs from the chronic, due to the intense inflammatory process and the presence of parasite’s nests, opposed to the fibrotic and almost absence of parasite’s observed during the chronic phase. Kinins are a group of vasoactive proteins that have a tight relationship with Trypanosoma cruzi’s infection. Authors described the T. cruzi’s capacity to activate the kinin system and infect cells, and that its infectivity is potentiated by the inhibition of kinin’s degradation. Kinins may induce acquired resistance to T. cruzi infection through the activation of dendritic cells via B2R/kinin signaling pathway. A recent work demonstrated that mice treated with captopril during the course of infection, present less fibrosis and necrosis of the cardiac tissue and reduction of inflammation. Thus, we decided to investigate the role of the kinin system on the formation of the chagasic cardiomyopathy. Our results demonstrate that the kinin system can’t modulate the parasitemy curve nor the cellularity of primary and secondary lymphoid organs during the acute phase of the experimental infection, with the exception of HOE-140, who down modulated the increased cellularity described in subcutaneous lymph nodes during the acute phase. On the other hand, kinins can modulate the expression of extracellular matrix molecules on the heart. We observed that the potentiation of the kinin system increases the inflammatory infiltrate during the acute phase, and the blockage of the B2R seems to aggravate it, while the fibrosis process is inversely proportional to the inflammation. Our data suggests that the kinin system participates in the formation of the cardiopathy, during the acute phase of the infection, and there might be compensatory mechanism acting through the B1R to assume some of B2R’s vasoactive activity during B2R blockage

Made available in DSpace on 2016-04-07T13:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 desio_oliveira_ioc_dout_2011.pdf: 1175865 bytes, checksum: f838717ed871f60759465b1b71ebee3c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A infecção pelo Trypanosoma cruzi promove alterações em órgãos linfóides. O timo apresenta-se atrofiado com depleção de células CD4+CD8+ (DP) na fase aguda. Em órgãos linfóides periféricos, os linfonodos subcutâneos (LSC) e o baço apresentam-se hipertrofiados com aumento de células T e B, enquanto os linfonodos mesentéricos (LM) apresentam-se atrofiados devido à morte dessas células. Nesse trabalho estudamos os efeitos da infecção pelo T. cruzi sobre células epiteliais tímicas (TEC) e timócitos, bem como o papel do timo no comportamento de órgãos linfóides periféricos. Em experimentos de infecção in vitro, avaliamos TEC, abordando a expressão de ligantes e receptores da matriz extracelular (ECM), e ainda, as possíveis conseqüências desse aumento de ECM sobre a interação de TEC/timócitos ou TEC/parasita. Nossos resultados demonstram que a infecção promove diminuição do número de TEC, alterações morfológicas e aumento de ECM em culturas infectadas. Observamos também que componentes da ECM são requeridos na interação entre TEC/parasita. Curiosamente, o menor crescimento de TEC em culturas infectadas está associada com a inibição do ciclo celular e não com apoptose No que se refere à interação TEC/timócitos, observamos que a adesão foi maior nas culturas infectadas, especialmente sobre TEC parasitadas. Esse aumento de adesão entre TEC/timócitos corrobora a hipótese descrita anteriormente pelo nosso grupo que a infecção favorece a migração de timócitos para periferia. Estendendo nossa análise ao compartimento linfóide do timo, investigamos a apoptose de timócitos na infecção. Observamos que a celularidade do timo diminui viii durante a infecção, juntamente com aumento de apoptose de timócitos CD4-CD8- (DN), DP, CD4 e CD8. Procurando entender a via envolvida na apoptose desses timócitos, demonstramos que a atividade de caspases total, caspase 8, caspase 9 e caspase 3 estão aumentadas na infecção. Observamos que ambas caspases iniciadoras caspase 8 (via extrínseca, Fas, TNF, TRAIL) e caspase 9 (via intrínseca, privação de fatores) parecem estar envolvidas na depleção desses timócitos Esse dado foi confirmado nos experimentos de bloqueio de morte com inibidores de caspases, onde observamos que o tratamento in vivo (injeção intratímica) e in vitro com zVAD (inibidor geral de caspases) em timócitos de animais infectados foi mais eficaz no bloqueio da morte do que os inibidores de caspase-8 (zIETD) ou caspase-9 (zLEHD). Além disso, animais infectados e tratados com zVAD apresentaram a celularidade do timo parcialmente recuperada, mais especificamente em timócitos DN e DP. Finalmente, procurando entender o papel do timo na resposta imune regional de órgãos linfóides periféricos na infecção, camundongos foram timectomizados antes da infecção para avaliação da celularidade dos LSC, LM e baço. Nossos dados demonstram que, mesmo com a ausência do timo, a hipertrofia dos LSC e a atrofia dos LM permaneciam inalterados, entretanto, encontramos significativo acúmulo de linfócitos T e B no baço de animais infectados. Em conjunto, nossos resultados demonstram que as alterações observadas no componente epitelial do microambiente tímico, assim como em timócitos de animais infectados favorecem a migração e morte destes timócitos e a atrofia desse tecido. Além disso, demonstramos que células do timo possuem papel imunoregulatório no baço durante a infecção / Trypanosoma cruzi infection promotes lymphoid organ alterations. The thymus is atroph ied with CD4 + CD8 + (DP) thymocyte depletion in the acute phase of infection. In p eripheral lymphoid organs, subcuta neous lymph nodes (LSC) and spleen present hypertrophy, with increase of T and B cells, whereas mesenteric lymph nodes (LM) are atrophied due to the death of these cells . In this work, we studied the effects of T. cruzi infec tion in thymic epithelial cells (TEC) and thymocytes , as well as the role of thymus in the behavior of peripheral lymphoid organs . In experiments of in vitro infection, we evaluated TEC, concerning the expression of extracellular matrix (ECM) ligands and receptor s , and also the possible conseq uences of ECM increase in TEC /thymocyte or TEC/parasit e intera ctions . Our data demonstrate that T. cruzi infection promotes a decrease of TEC number , morphological alterations and ECM increase in infected cultures . We observed that ECM components ar e required in the interaction between TEC and parasit es . Curiously, the decrease in TE C number in infected cultures is associated to cell cycle inhibition but not to apoptos is . Concerning TEC/thymocyte interactions, we observed that adhesion was greater in infected cultures, especially on parasitized TEC . This increase in TEC/thymocyte adhesion corroborates the hypothesis previously described by our group that the infection favors migration of thymocyte s to the periphery . Extending our analysis to th ymic ly mphoid compartment, we investigated thymocyte apoptosis following infection . We observed that thymus cellulari ty decreases during infection, together with the increase of apopt osis in CD4 - CD8 - (DN), DP, CD4 and CD8 thymocyte s. Searching to understand what death pathway is involved in thymocyte apoptosis, we demonstrated that the activity of total cas pases, caspase - 8, caspase - 9 and caspase-3 (ef f e c tor caspase ) are increased in infection . We observ ed that both initiator ca spase - 8 (extrinsic pathway, Fas, TNF , TRAIL) and caspase - 9 (intrinsic pathway, factor deprivation) seem to be involved in thymocyte deple tion. These data were confirmed in death blocking experiments with caspase inhibitors , in which w e showed that in vivo (intrat hy mic inje ction ) and in vitro treatment s with zVAD ( general caspase in hibitor ) were more effective in blocking thymocyte death than the in hibitors of caspase - 8 (zIETD) or caspase - 9 (zLEHD) separately . Moreover , infected animals treated with zVAD showed a partial recovery of thymus cellularity , more specifica lly in DN and DP thymocytes . Finally, searching to understand the role of the thymus in the regional immune response of peripheral lymphoid organs in infection , mice were t hy mectomiz e d prior to infection to evaluation of LSC, LM and spleen cellularity. Our data demonstrate d that, even in the absence of the thymus, LSC hypertrophy and LM atrophy were not altered ; however , we found a significant accumulation of T and B lymphocytes in the spleen of infected animals. Conjointl y , our results show that the alterations observed in the epithelial component of the thymus microenvironment, as well as in thymocyte s of infected animals favor the migration and death of thymocyte s and the atrophy of this tissue . Besides that , we demonstr at ed that thymic cells have an immunoregulatory role in the spleen during infection .

Made available in DSpace on 2016-04-12T12:39:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 priscila_santos_ioc_dout_2014.pdf: 1883245 bytes, checksum: 6b4536877c226a48076cdf5e3735943b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A alimentação é básica para a saúde, auxiliando no enfrentamento de doenças, sendo os alimentos funcionais especialmente importantes nesse contexto. Alimentos funcionais são definidos como qualquer substância ou componente de um alimento que proporcione benefícios para a saúde, inclusive a prevenção e o tratamento de doenças. Os subprodutos alimentares provenientes da agroindústria possuem potencial para serem usados como alimentos funcionais, mas tal abordagem ainda é escassa, particularmente em aplicações em doenças negligenciadas. Considerando a facilidade de acesso a esses alimentos e seu baixo custo, o uso terapêutico desses subprodutos poderia se constituir como um complemento no tratamento de doenças negligenciadas, como a doença de Chagas. A doença de Chagas é um importante problema de saúde pública na América Latina, sendo a forma digestiva a segunda principal manifestação dessa doença. O presente trabalho objetivou avaliar o efeito de uma dieta a base de subproduto com propriedade funcional (semente de abóbora) na infecção experimental por T. cruzi com alteração intestinal, em associação ou não ao tratamento com selênio. O subproduto foi avaliado quimicamente quanto à composição centesimal, perfil lipídico, de minerais, de aminoácidos, atividade de água, capacidade antioxidante e análise microbiológica O ensaio pré-clinico foi realizado em camundongos, tendo sido analisados os seguintes parâmetros: parasitemia, peso corporal, consumo de ração, trânsito intestinal e análise histopatológica. Os resultados mostraram que a semente de abóbora apresenta um alto teor de fibras, lipídios e proteínas, além de baixa atividade de água e qualidade microbiológica, conforme legislação vigente para humanos. Inserida na ração dos camundongos, comparativamente a rações normais, verificamos que no curso da infecção em fase aguda não houve efeito na parasitemia dos animais infectados. Todos os animais infectados apresentaram redução no consumo alimentar e peso corporal, entretanto, os infectados tratados com a dieta com inserção de semente de abóbora tiveram redução significativa do tempo de transito intestinal (no 15º dia após a infecção), assim como no número de células inflamatórias no tecido intestinal, confirmando a hipótese de que a semente de abóbora pode exercer um efeito funcional. Os animais infectados tratados com essa dieta em teste se mostraram mais resistentes à alteração do transito intestinal do que os alimentados com ração normal. Também a inflamação no coração foi reduzida no grupo alimentado com a dieta com semente de abóbora. Os resultados são encorajadores para que se possa abordar a questão nutricional em pacientes portadores de doença de Chagas com o intuito de melhorar a qualidade de vida e a saúde de pacientes / Food is essential for health and helps fighting diseases . F unctional foods are especially important in this context and are defined as any food substance or component that provides he alth benefits, including disease prevention and treatment. Food sub - products derived from the agro - industry have the potentia l to be used as functional food. H owever, it is still incipient this approach , especially on neglected diseases. Taking into accoun t the easy access to these foods and their low cost, the therapeutic use of functional sub - products could complement the treatment of neglected diseases, as Chagas disease. Chagas disease is an important public health problem in Latin America, and its gast ro - intestinal form is the second main manifestation. T his work aimed to evaluate the effect of a sub - product with functional properties ( pumpkin seed - based diet) on the experimental infection with T. cruzi , a model of intestinal dysfunction , associated or not to selenium treatment . Th e sub - product was chemically analyzed by determining its centesimal composition, lipid, amino acids and mineral profiles, water activity, anti - oxidant capacity, and microbiological analysis. A pre - clinic assay was done using mi ce and evaluating the following parameters: parasitemia, body weight, food consume, intestinal transit and histopathology. The results showed that the pumpkin seed has a high content of fibers, lipids and proteins, in addition to low water activity and mic robiologic quality, in conformity with the legislation for human patients. When inserted in mice diet, compared to normal diet, we observed no effect on the parasitemia of infected animals. All infected animals showed reductions in food consume and body wei ght, but those treated with pumpkin seed had their intestinal transit time recovered on the15 th day post - infection, as well as a significant reduction in intestinal inflammatory infiltration, confirming the hypothesis that t he pumpkin seed can present a fu nctional effect. Infected animals treated with the test diet showed higher resistance to alterations in the intestinal transit when compared to those fed regular feed. Inflammation in the heart was also reduced in the group of mice fed with pumpkin seed based diet. These results encourag e the nutritional approach in Chagas disease patients in order to improve their quality of life and health

PEREIRA, Ticiana Praciano. Efeito tripanocida da L-amino ácido oxidaseisolada do veneno da Bothrops marajoensis. 2015. 84 f. Tese (Doutorado em Ciências Farmacêuticas) – Faculdade de Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-19T13:13:10Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_tppereira.pdf: 8126214 bytes, checksum: 9f53ffec393de789a339481a46476c8f (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-19T13:50:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_tppereira.pdf: 8126214 bytes, checksum: 9f53ffec393de789a339481a46476c8f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-19T13:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_tppereira.pdf: 8126214 bytes, checksum: 9f53ffec393de789a339481a46476c8f (MD5) Previous issue date: 2015 / Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, remains a p ublic health problem in the Americas. In the present study, we evaluated th e effects of L-amino acid oxidase from Bothrops marajoensis venom (BmLAAO) on the all evolutive forms of T. cruzi . Epimastigote forms of T. cruzi , were cultived in LIT medium, at 28ºC in BmLAAO pr esence for 48 and 72h. Trypomastigote were obtained from the supernat ants of infected LLC-MK 2 cells, resuspended in MEM with 2% FBS and treated for 24 h . BmLAAO showed significant activity against the epimastigote (IC 50 48h = 6.31μ g/mL; IC 50 72h = 5,85μ g μ g/mL.) and trypomastigote (LC 50 24h= 0.17μ g/mL) forms and decrease the amastigote s urvival within LLC-MK 2 . Analysis of the possible involvement of hydrogen peroxide was performed by catalase addition in medium, an enzyme that acts as H 2 O 2 scavenger. The cell death showed that the cytotoxic effect of BmLAAO is reduced but not completely abolished by the catalase presence. Confocal microscopy analysis of epimastig otes treated with BmLAAO showed staining with propidium iodide (PI), indicative of loss of membrane integrity, and loss of mitochondrial membrane potential, as observed by st aining of treated cells with Rhodamine 123 (Rho123). Besides, the flow cytometry with anne xin V and propidium iodide suggest decrease of membrane permeability. Ultrastructural analysis showed drastic morphological changes on the parasite mitochondrion with ruptured kDNA network. Increase of endoplasmic reticulum profiles, enhanced electrondensity of mit ochondrion and endoplasmic reticulum membranes, loss of the parasite inner organization, swelling of cell body with the appearance of dismantling organelles, formation of myelin-like structures indicative of autophagic activity, were also observed in treated parasites. In conclusion, the BmLAAO showed cytotoxic effects on T. cruzi and this action is only partially dependent on H 2 O 2 production by the BmLAAO. In addition, BmLAAO induced morphologic al and physiological alterations compatible with loss of viability and cell death / Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas, continua a ser um problema de saúde pública nas Américas. No presente estudo, foram avaliados os efeitos da L-aminoácido oxidase isolatada do veneno da Bothrops marajoensis (LAAOBmar) sobre todas as formas evolutivas do T. cruzi. A atividade antiparasitária foi avaliada através da cultura de parasitas tratados com diferentes concentrações da fração em estudo. Epimastigotas foram cultivados em meio LIT, a 28ºC na presença LAAOBmar por 48 e 72 horas. Tripomastigotas foram obtidos a partir dos sobrenadantes de células LLC-MK2 infectadas, ressuspensos em meio MEM com 2% de FBS e tratados durante 24 h. LAAOBmar mostrou uma atividade significativa contra epimastigota (CI50 48h = 6,31μg/mL; CI50 72 h = 5,85μg/ml) e tripomastigotas (CL50 24h = 0,17μg/mL) e diminuiu a sobrevivência das formas amastigotas intracelular em células LLC-MK2. A análise do possível envolvimento do peróxido de hidrogênio foi realizada por adição de catalase no meio, uma enzima que atua como retirador de H2O2. A morte celular mostrou que o efeito citotóxico da LAAOBmar é reduzido, mas não completamente abolido pela presença da catalase. A análise por microscopia confocal de epimastigota tratados com LAAOBmar mostrou coloração com iodeto de propídio (IP), indicativo de perda de integridade da membrana, e perda do potencial de membrana mitocondrial, observado por coloração de células tratadas com rodamina 123 (Rod123) . Além disso, nos ensaios de citometria de fluxo com anexina V e iodeto de propídio sugerem diminuição da permeabilidade da membrana. A análise ultraestrutural de epimastigotas e tripomastigotas, mostrou alterações morfológicas drásticas na mitocôndria do parasita com a rede de kDNA rompido. O aumento de perfis de retículo endoplasmático, aumento da eletrondensidade das membranas mitocondriais, a perda da organização interna do parasita, inchaço do corpo da célula com o aparecimento de organelas deformada, formação de estruturas de mielina-like indicativo de atividade autofágica, também foram observados nos parasitas tratados. Em conclusão, o LAAOBmar mostrou efeitos citotóxicos em T. cruzi e esta ação é apenas parcialmente dependente da produção de H2O2 pela LAAOBmar. Além disso, LAAOBmar induziu alterações morfológicas e fisiológicas compatíveis com perda de viabilidade e a morte.

TESSAROLO, L. D. Estudo in vitro da atividade tripanocida de nanopartículas de benzonidazol em carbonato de cálcio sobre cepa y de Trypanosoma cruzi. 2016. 83 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-05-24T12:51:25Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_lstessarolo.pdf: 3165613 bytes, checksum: 6ddc54bf2a20e523a76900a0fe202bd4 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-05-24T12:51:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_lstessarolo.pdf: 3165613 bytes, checksum: 6ddc54bf2a20e523a76900a0fe202bd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-24T12:51:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_lstessarolo.pdf: 3165613 bytes, checksum: 6ddc54bf2a20e523a76900a0fe202bd4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / The Chagas disease is a major public health problem, affecting about 6 million people worldwide and causes high morbidity and mortality in affected populations. The benznidazole (BZ), the drug used in the treatment has limited effectiveness and cause serious adverse effects. The drug transport by nanoparticles has demonstrated efficacy as the controlled and targeted release of pharmacological molecules, in addition to its desirable properties such as good biocompatibility and biodegradability. The objective of this study was to evaluate the cytotoxicity of benznidazole nanoparticles of calcium carbonate (CaCO3 @ BZ) on host cells LLC-MK2; determining the trypanocidal effect on epimastigotes, trypomastigote and amastigotes of T. cruzi Y strain and comparing the effect of BZ as well as to characterize the mechanism of death. The cytotoxicity tests using the MTT method conducted with LLC-MK2 cells grown in DMEM with 10% FBS showed IC50 of 55 ug / ml for BZ @ CaCO3 and 160 g / mL for BZ. epimastigotes were cultured in LIT 10% FBS at 28 ° C in the presence of CaCO3 @ BZ for 24, 48 and 72 hours. BZ @ CaCO3 showed trypanocidal activity against epimastigotes the three treatment times (24h IC50 = 8.72 mg / ml, 48 h IC50 = 8 ug / ml, 72 h IC50 = 4.8 ug / ml) this being more significant effect the BZ (IC50 = 24h 56.7 g / ml IC50 = 48h 15.9 g / ml, 72 h IC50 = 4.3 ug / ml). trypomastigotes were obtained from LLC-MK2 cells infected supernatants, resuspended in DMEM with 2% FCS and treated for 24 h. The trypomastigotes were more likely BZ @ CaCO3 (IC50 = 1.8 ug / ml) than the BZ (IC50 = 67 ug / ml). These assays were also performed with calcium carbonate nanoparticles free drug (@ CaCO3) used as negative control. In the tests with the amastigote forms obtained by infecting LLC-MK2 cells BZ @ CaCO3 was able to reduce the% of infected cells, the number of amastigotes per infected cells and the survival rate at 24 hours of incubation. Flow cytometric assays using fluorescence markers 7-amino actinomycin D, annexin V-PE and rhodamine 123 demonstrated that the trypanocidal effect of both BZ @ CaCO3 as BZ associated death by necrosis with altered mitochondrial potential. Thus, it is concluded that the CaCO3 has BZ @ trypanocidal effect in vitro on the three forms of Trypanosoma cruzi, this being potentially greater effect than that observed for BZ. / A doença de chagas é um grande problema de saúde pública, afeta cerca de 6 milhões de pessoas em todo o mundo e causa altos índices de morbidade e mortalidade nas populações afetadas. O benzonidazol (BZ), fármaco utilizado no tratamento apresenta eficácia limitada e provoca sérios efeitos adversos. O transporte de fármacos por meio de nanopartículas tem demonstrado eficiência quanto à liberação controlada e direcionada de moléculas farmacológicas, além de apresentar propriedades desejáveis, como boa biocompatibilidade e biodegradabilidade. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a citoxicidade de nanopartículas de benzonidazol em carbonato de cálcio (BZ@CaCO3) sobre células de hospedeiras LLC-MK2; determinar o efeito tripanocida sobre as formas epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas da cepa Y de T. cruzi e comparar ao efeito do BZ, bem como, caracterizar o mecanismo de morte. Os testes de citotoxicidade utilizando o método do MTT realizados com células LLC-MK2 cultivadas com meio DMEM a 10% de SBF demonstraram IC50 de 55 µg/mL para BZ@CaCO3 e 160 µg/mL para BZ. Formas epimastigotas foram cultivadas em meio LIT a 10% de SBF a 28ºC na presença de BZ@CaCO3 por 24, 48 e 72 horas. BZ@CaCO3 mostrou atividade tripanocida sobre formas epimastigotas nos três tempos de tratamento (CI50 24h = 8,72 µg/mL; CI50 48h = 8 µg/mL; CI50 72 h = 4,8 µg/ml) sendo esse efeito mais significativo que o do BZ (CI50 24h = 56,7 µg/mL CI50 48h = 15,9 µg/mL; CI50 72h = 4,3 µg/ml). Formas tripomastigotas foram obtidas a partir dos sobrenadantes de células LLC-MK2 infectadas, ressuspensas em meio DMEM com 2% de SBF e tratadas durante 24 h. As formas tripomastigotas foram mais susceptíveis a BZ@CaCO3 (IC50 = 1,8 µg/mL) do que ao BZ (CI50= 67 µg/mL). Esses ensaios também foram realizados com nanopartículas de carbonato de cálcio livres de fármacos (@CaCO3) utilizadas como controle negativo. Nos ensaios com as formas amastigotas obtidas por infecção de células LLC-MK2 BZ@CaCO3 foi capaz de reduzir o % de células infectadas, o número de amastigotas por células infectadas e o índice de sobrevivência em 24h de incubação. Ensaios de citometria de fluxo utilizando os marcadores de fluorescência 7- amino actinomicina D, anexina V- PE e rodamina 123 mostraram que o efeito tripanocida tanto da BZ@CaCO3 quanto do BZ está relacionado a morte por necrose com alteração do potencial mitocondrial. Assim, conclui-se que a BZ@CaCO3 apresenta efeito tripanocida in vitro sobre as três formas de Trypanossoma cruzi, sendo esse efeito potencialmente maior do que o observado para BZ.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-09-23T21:13:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_PerfisInflamaçãoCitocinas.pdf: 1861113 bytes, checksum: 382f39fca6707f1a59d56311026cead8 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-07T12:46:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_PerfisInflamaçãoCitocinas.pdf: 1861113 bytes, checksum: 382f39fca6707f1a59d56311026cead8 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T12:46:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_PerfisInflamaçãoCitocinas.pdf: 1861113 bytes, checksum: 382f39fca6707f1a59d56311026cead8 (MD5) Previous issue date: 2011 / O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, apresenta ampla variabilidade intra-específica e sua interação com o hospedeiro pode resultar no desenvolvimento de diferentes manifestações clínicas, que podem ser relacionadas a determinadas características do parasito e do hospedeiro. Em relação ao hospedeiro, fatores genéticos e imunológicos também podem se relacionar às manifestações patológicas. Dessa maneira a avaliação do perfil de células inflamatórias, bem como de citocinas produzidas por estas, podem permitir uma melhor compreensão da gênese das lesões crônicas, determinando quais fatores direcionam para as distintas formas clínicas da doença. Nesse trabalho, cães da raça Beagle foram infectados pelas cepas Y ou Berenice-78 (Be-78), que apresentam tropismo tecidual distinto. Posteriormente estes animais foram necropsiados durante as fases aguda (30 dias após infecção) ou crônica (730 dias após infecção) da doença de Chagas experimental e fragmentos do esôfago foram coletados para quantificação do processo inflamatório, realização de reações imuno-histoquímicas (linfócitos T CD4+ e CD8+) e de PCR em tempo real para quantificação das citocinas IL-6, IL-12, TNF-, IFN-, IL-4, IL-10, TGF-e iNOS. Na fase aguda o processo inflamatório foi predominantemente mononuclear, significativamente maior nos animais infectados quando comparado aos animais não infectados, com distribuição focal ou difusa nos animais infectados pelas cepas Y e Be- 78, respectivamente. Na avaliação imuno-histoquímica, nos cortes histológicos dos animais infectados pelas cepas Y ou Be-78, a maioria das células inflamatórias foram positivas para linfócitos T CD4+ ou CD8+ sendo observados em proporções semelhantes. Entretanto, na fase crônica, o infiltrado inflamatório mostrou-se focal e reduzido em relação à fase aguda, sendo observado apenas nos animais infectados pela cepa Be-78, constituído predominantemente por linfócitos e também com proporções semelhantes das subpopulações de células T. Na fase aguda da infecção também foi observado um aumento na expressão do mRNA das citocinas pró-inflamatórias TNF-e IFN-nos animais infectados pela cepa Y do T. cruzi em relação aos demais grupos. Já na fase crônica houve um aumento na expressão do mRNA das citocinas IL-6, IL-12 e TNF-e da enzima iNOSnos animais infectados pela cepa Be-78 tanto em relação ao grupo de animais infectados pela cepa Y quanto ao grupo de animais não-infectados. Em relação às citocinas anti-inflamatórias, observou-se um aumento significativo apenas na expressão do mRNA da IL-10 nos animais infectados pela cepa Y em relação ao grupo de animais não-infectados na fase aguda. Na fase crônica da infecção não foi observado aumento de nenhuma das citocinas anti-inflamatórias avaliadas nesse trabalho em ambos os grupos infectados. Portanto, conclui-se que a infecção experimental de cães da raça Beagle pelas cepas Y ou Be-78 do T. cruzi promove uma resposta inflamatória aguda, predominantemente linfocítica com proporções similares de linfócitos TCD4+ e TCD8+ restrita, na fase crônica, à infecção pela cepa Be-78. Além disso, foi observado um perfil distinto de citocinas, sendo que nos animais infectados pela cepa Y a inflamação focal aguda está associada à expressão de citocinas próinflamatórias, enquanto que nos animais infectados pela cepa Be-78 a inflamação difusa aguda não está associada à expressão de citocinas pró-inflamatórias, mas evolui para uma inflamação focal crônica associada à expressão destas citocinas, bem como da enzima iNOS. ___________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Trypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease, presents a wide intraspecific variability and its interaction with the host may result in the development of clinical manifestations, which may be related to certain characteristics of the parasite and host. In relation to the host, genetic and immunological factors may be related to pathological manifestations. Thus the evaluation of inflammatory cells and cytokines produced by them, may allow a better understanding of the genesis of chronic injuries, determining what factors lead to the different clinical forms of the disease. In this study, Beagle dogs were infected with Y or Berenice-78 (Be-78) strains, which have distinct tissue tropism. Subsequently, these animals were necropsied during the acute phase (30 days after infection) or chronic phase (two years after infection) of experimental Chagas disease and esophagus fragments were collected to perform inflammation quantification, immunohistochemistry to detect T lymphocytes (CD4+ and CD8+) and real-time PCR for quantification of cytokines IL-6, IL-12, TNF-, IFN-, IL-4, IL-10, TGF-, and iNOS. In the acute phase inflammatory process observed was predominantly mononuclear and the quantification of the inflammatory infiltrate demonstrated that it was significantly higher in the infected groups compared to uninfected animals, with focal or diffuse distribution in animals infected by Y and Be-78 strains, respectively. In immunohistochemical analysis tissue sections of animals infected by Y or Be-78 strains, the vast majority of inflammatory cells were positive for CD4+ or CD8+ and was observed in similar proportions. However, in the chronic phase, the inflammatory infiltrate was focal, showing a reduction when compared to the acute phase and it was observed only in animals infected with Be-78 strain, consisting predominantly of lymphocytes and also with similar proportions of T cells subpopulations. Data analysis revealed that in the acute phase of infection was observed an increase in mRNA expression of proinflammatory cytokines TNF- and IFN- in animals infected with the Y strain of T. cruzi compared to the other groups. In the chronic phase there was an increase in mRNA expression of IL-6, IL-12 and TNF- and iNOS enzyme in animals infected with Be-78 strain in relation to the groups of animals infected with the Y strain and the uninfected animals. Regarding anti-inflammatory cytokines, there was only a significant increase in mRNA expression of IL-10 in animals infected with the Y strain compared to the group of uninfected animals in the acute phase. We did not observe any increase of the anti-inflammatory cytokines evaluated in this work, at the chronic phase of infection, on both infected groups. Thus we may conclude that the experimental infection of Beagle dogs with the Y or Be-78 strains of T. cruzi showed that both promote an acute inflammatory response, predominantly lymphocytic with similar proportions of T cells CD4+ and CD8+, restricted, in the chronic phase of infection, to the Be-78 strain. In addition, there was a distinct profile of cytokines, and the animals infected with the Y strain the focal acute inflammation was associated with expression of proinflammatory cytokines, whereas in animals infected with Be-78 strain the diffuse acute inflammation is not associated with expression of proinflammatory cytokines evolving to chronic focal inflammation associated with expression of these cytokines and iNOS enzyme.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-11-10T17:02:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InovaçõesDiagnósticoMonitoração.pdf: 2809852 bytes, checksum: 5e2dc6ce18b064089906e87dc171d3a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-18T14:41:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InovaçõesDiagnósticoMonitoração.pdf: 2809852 bytes, checksum: 5e2dc6ce18b064089906e87dc171d3a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-18T14:41:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InovaçõesDiagnósticoMonitoração.pdf: 2809852 bytes, checksum: 5e2dc6ce18b064089906e87dc171d3a6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Um dos desafios em relação ao tratamento na fase crônica da doença de Chagas (DCh) são as limitações dos métodos disponíveis para detectar a cura parasitológica nessa fase da infecção. Sendo assim, esse trabalho visa estabelecer uma inovação metodológica na monitoração da cura parasitológica pós-tratamento etiológico da DCh, por meio da técnica de FC-ATE-Triplex, analisando IgG1 anti-T. cruzi. Como metodologia desse trabalho, foi proposto um modelo de pesquisa de anticorpos IgG1 anti-formas evolutivas vivas do T. cruzi (amastigota (AMA), tripomastigota (TRIPO) e epimastigota (EPI) fixada) por citometria de fluxo, empregando um modelo de segregação fluorescente diferencial (fluorescência 1- isotiacianto de fluoresceína) e um sistema de revelação fluorescente complementar (fluorescência 2- estreptoavidina-ficoeritrina). Avaliando a reatividade de IgG1 anti-AMA, TRIPO e EPI em amostras de soros dos grupos tratado curado (TC) e tratado não curado (TNC), as amostras do grupo TC apresentaram uma baixa reatividade e as dos grupo TNC uma alta reatividade com as três formas evolutivas do T. cruzi. Após análise de desempenho dessa nova metodologia, os critérios de interpretação foram: diluição 1:000 e ponto de corte de 40% para AMA e diluição 1:250 e ponto de corte de 20% para TRIPO e EPI. Avaliando a reatividade de IgG1 anti-AMA, TRIPO e EPI pela técnica proposta, em amostras de soros dos grupos não tratado (NT) e não infectado (NI), as amostras do grupo NT apresentaram valores de reatividade positivo e as do grupo NI valores de reatividade negativos com as três formas evolutivas. A reatividade de 28 amostras de soro do grupo tratado em avaliação (TEA) pela técnica de FC-ATE-Triplex revelou que 15 (53,6%) foram negativas com AMA, 11 (39,3%) com TRIPO e 8 (28,6%) com EPI. Avaliando a reatividade de IgG1 anti-AMA, TRIPO e EPI, em amostras de soros dos grupos TC e TNC em novas amostragens populacionais, todas as amostras do grupo TNC foram positivas com as três formas evolutivas, enquanto todas as amostras do grupo TC foram negativas com AMA, 5 das 7 amostras foram negativas com TRIPO e 6 das 7 foram negativas com EPI. Das 24 amostras do grupo TEA de uma nova amostragem populacional testadas pela FC-ATE-Triplex, 7 (29,2%) foram negativas com AMA, 1 foi negativa com TRIPO (4,2%) e 7 foram negativas com EPI (29,2%). A reatividade da FC-ATE-Triplex com o soro de pacientes com leishmaniose visceral (LV) e leishmaniose tegumentar americana (LTA) revelou que das 10 amostras de pacientes com LV, uma (10%) foi positiva com AMA, uma (10%) com TRIPO e duas (20%) com EPI, enquanto que dos 20 pacientes com LTA, 4 (20%) foram positivas com AMA, 6 (30%) com TRIPO e 10 (50%) com EPI. Sendo assim, a técnica de FC-ATE-Triplex apresentou um excelente desempenho na monitoração de cura parasitológica pós-tratamento etiológico, no diagnóstico e no controle de cura parasitológica precoce da doença de Chagas, mesmo quando testada em novas amostragens populacionais. Além do mais, essa nova metodologia, mesmo apresentando resultados falso-positivos, mostrou ser útil na segregação sorológica de pacientes chagásicos e de pacientes portadores de LV e de LTA. A reatividade diferencial observada em AMA, TRIPO e EPI sugere que na técnica de FC-ATE-Triplex existe a segregação de anticorpos pela afinidade pelo antígeno. As formas amastigotas do T. cruzi apresentaram uma maior reatividade, especificidade e mostraram ser boas fontes antigênicas na monitoração da cura parasitológica pós-tratamento etiológico e no controle de cura parasitológica precoce da doença de Chagas. _________________________________________________________________________ / ABSTRACT: One of the challenges regarding treatment in the chronic phase of Chagas disease (DCH) are the limitations of methods available to detect the parasitological cure at this stage of infection. In the present study, we have developed an innovative method to monitoring the parasitological cure after Chagas’ disease etiologic treatment. This method, named FC-ATE-Triplex, is based in simultaneous detection of IgG1 anti-T. cruzi by flow cytometry. It was proposed a model of antibody IgG1anti-live T. cruzi evolutive forms (live amastigotes (AMA) + live trypomastigotes (TRYPO) + fixed epimastigotes (EPI) fixed, using a model of differential segregation fluorescent (Fluorescence 1 - isotiacianto fluorescein) and a system of complementary fluorescence revelation (fluorescence 2 - streptavidin-phycoerythrin). The patients used in this study were divided in five groups: uninfected (NI), untreated (NT), treated cured (TC), treated not-cured (TNC) and treated under evaluation (TUE). The TC group samples showed a low reactivity and the TNC group a high reactivity with the three evolutive forms of T. cruzi. After performance analysis of this new approach, the interpretation criteria established were: 1:000 dilution and cutoff of 40% for AMA and 1:250 dilution and cutoff of 20% for EPI and TRYPO. The NT group samples showed values of positive reactivity and the NI group values of negative reactivity with the three evolutive forms of T. cruzi. The reactivity of 28 sera samples from the group TUE through the technique FC-ATE-Triplex revealed that 15 (53.6%) were negative with AMA, 11 (39.3%) with TRYPO and 8 (28.6%) with EPI. Assessing the reactivity of IgG1anti-AMA, TRYPO and EPI in sera samples of groups TC and TNC in new population samples, all samples of TNC group were positive with the three T. cruzi evolutive forms, while all samples of TC group were negative with AMA, 5 of 7 samples were negative with TRYPO and 6 of 7 were negative with EPI. Of the 24 samples of TUE group of a new population tested by FC-ATE-Triplex, 7 (29.2%) were negative with AMA, 1 was negative with TRYPO (4.2%) and 7 were negative with EPI (29.2%).). The reactivity of FC-ATETriplex with sera from patients with visceral leishmaniasis (VL) and American cutaneous leishmaniasis (ACL) revealed that of the 10 samples from patients with VL one (10%) was positive with AMA, one (10%) with TRYPO and two (20%) with EPI, while from 20 patients with ACL tested, 4 (20%) were positive with AMA, 6 (30%) with TRYPO and 10 (50%) with EPI. Thus, these results showed that FC-ATE-Triplex presented an excellent performance in monitoring of the parasitological cure after etiological treatment, in diagnosis and control of early parasitological cure of Chagas disease, even when tested on new sampling population. Moreover, this new methodology, even with false-positive results, proved to be useful in serological segregation of chagasic patients and patients with VL and ACL. The differential reactivity observed in AMA, TRYPO and EPI suggests that in the technique of FCATE-Triplex there is segregation of antibodies by antigenic affinity. The amastigotes of T. cruzi showed greater reactivity, specificity and to be good antigenic sources in monitoring parasitological cure after etiological treatment and control of early parasitological cure of Chagas disease.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-10-14T18:41:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_ProdutionExpressionInflamattion.pdf: 3309907 bytes, checksum: 979c5e6d2df78ca5fd04916f54b09924 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-10-15T16:02:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_ProdutionExpressionInflamattion.pdf: 3309907 bytes, checksum: 979c5e6d2df78ca5fd04916f54b09924 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-15T16:02:30Z (GMT). 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Assim, o objetivo desse estudo é estudar a participação do T.cruzi na produção de fatores inflamatórios e angiogênicos em animais C57BL/6 infectados com diferentes cepas desse parasito. Demonstrou-se a formação de novos vasos sanguíneos na matriz da esponja culminando no 14º dia pos-implante dorsal. Demonstrou-se, ainda, alta produção de mediadores inflamatórios no plasma de animais infectados com as cepas Y e Colombiana do T.cruzi. Esses animais também apresentaram elevados níveis plasmáticos de VEGF. Além disso, observou-se que a cepa Colombiana do T.cruzi foi capaz de induzir elevado infiltrado leucocitário e parasitos no tecido cardíaco. Possivelmente, devido ao alto parasitismo induzido pela cepa Colombiando do parasito, houve baixa produção (VEGF, ANG-1 e ANG-2) e expressão (VEGF) de fatores angiogênicos no tecido cardíaco. De forma interessante, animais infectados pela cepa VL-10 do T.cruzi demonstraram reduzida parasitemia, produção de citocinas inflamatórias e quimiocinas, bem como de infiltrado celular no tecido cardíaco. Além disso, o Benznidazol, a droga de escolha para o tratamento da doença de Chagas com alta citotoxicidade, foi capaz de manter os parâmetros angiogênicos similares aos animais não infectados. Também, o Enalapril e a Sinvastatina (fármacos utilizados para o tratamento de doenças cardioavasculares) foram capazes de reduzir citocinas inflamatóras em camundongos infectados, mas não a produção e a expressão de VEGF que mostrou-se similar aos animais infectados não tratados. Em suma, este estudo apresenta mediadores da angiogênese locais (coração) e sistêmicos durante a infecção pelo T.cruzi, sendo esses mediadores definidos pela genética e pela quantidade de parasitos presente no tecido cardíaco. _____________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Inflammation is a key immune-pathophysiological characteristic of cardiomyopathy induced by Trypanosoma cruzi. Different inflammatory cells can contribute to the release of pro- and anti-inflammatory mediators which can directly or indirectly promote inflammatory angiogenesis. Mammalian cardiac cells are important targets to the protozoan T. cruzi driving an immune system that attempts to eliminate parasites. This inflammation culminates in cellular destruction, fibrosis, hypoxia and heart disturbances. Hypoxia and releasing of inflammatory mediators are well-defined stimuli to initiate angiogenesis. Therefore, we aimed to study the participation of T. cruzi in the production of inflammatory and angiogenesis mediators in C57BL/6 mice infected with different strains of this parasite. We found that in sponge matrix from infected mice, formation of new blood vessels were abrogated on day 14. Our data also demonstrated higher production of inflammatory mediators in plasma from mice infected with Y and Colombian strains of T.cruzi. These mice also demonstrated increase plasma VEGF. In addition, Colombian strain induced higher leukocyte infiltration and tissue parasites in cardiac tissue. However, possibly by the Colombian strain-associated higher tissue parasites, there were low production (VEGF, ANG-1 and ANG-2) and mRNA expression (VEGF) of angiogenic factors in cardiac tissue. It is very interesting that VL-10 infected C57BL/6 mice demonstrated decreased circulating parasite, production of inflammatory cytokines and chemokines, cellular infiltration in cardiac tissue. Furthermore, Benznidazole, a drug of choice for the treatment of Chagas disease, although exhibits numerous side effects, we observed that treament with this drug maintained angiogenic parameters similar to uninfected mice. Enalapril and Simvastatin (used for the treatment of cardiovascular diasease) treatment to infected mice diminished inflammatory cytokines but not VEGF expression and production which was similar to untreated infected mice. In summary, this study demonstrates angiogenesis mediators in local tissue (heart) and systemically during T. cruzi infection may be defined by the genetic and the load of tissue parasites.