Realizou-se revisão bibliográfica sobre a utilização do teste imunoenzimático, ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) na Vigilância Epidemiológica de infecções causadas por arbovírus da Família Flaviviridae, gênero Flavivirus e da Família Togaviridae, gênero Alphavirus. Foram consultados trabalhos publicados a partir de 1979, ano da introdução do teste em pesquisas de arboviroses. Observou-se que o teste tem sido empregado na pesquisa de anticorpos em humanos, de anticorpos e antígenos em reservatórios não humanos e na identificação de antígenos e da fonte alimentar de mosquitos vetores. Analisou-se o desempenho de ELISA comparando-o a técnicas tradicionalmente empregadas para identificação de anticorpos e antígenos de arbovírus. O teste apresentou 100,0 por cento de sensibilidade e especificidade média de 84,5 por cento na identificação de anticorpos anti-Alphayirus em humanos. A técnica também foi muito sensível para Flavivirus, com valor médio de 95,2 por cento e apresentou especificidade média de 77,6 por cento. Na identificação de anticorpos anti-arbovírus em resevatórios não humanos, ELISA mostrou sensibilidade de 100,0 por cento e especificidade de 97,4 por cento. Na pesquisa de antígenos vir ais em mosquitos vetores a técnica apresentou especificidade média de 93,6 por cento e sensibilidade média de 76,5 por cento. A técnica apresentou alto valor preditivo positivo, o que foi observado quando calculou-se a média dos valores apresentados em cada um dos trabalhos em que esse parâmetro foi pesquisado e obteve-se um resultado de 89,0 por cento. Nos trabalhos em que foi estudada a reprodutibilidade do teste observou-se coeficiente de variação de 3,0 a 14,0 por cento nos resultados. Observou-se grande diversidade quanto aos critérios de positividade adotados, impossibilitando a comparação dos resultados. Notou-se uma tendência a encurtar o tempo de realização do teste e torná-lo factível em condições de trabalho de campo. Verificou-se que o teste já está incorporado à rotina da Vigilância Epidemiológica de algumas arboviroses como encefalite Japonesa nos países asiáticos e encefalites do Leste, Oeste e de St.Louis, nos Estados Unidos da América. Os autores estudados foram unânimes em concluir que trata-se de teste rápido, apresenta simplicidade dos procedimentos técnicos e permite diagnóstico presuntivo de infecção aguda com apenas uma amostra de soro, características que o capacitam para uso na Vigilância Epidemiológica de arboviroses. / The author makes a review of the use of enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA, in the surveillance of infections caused by arbovirus belonging to the Flaviviridae family (genus Flavivirus) and to the Togaviridae family (genus Alphavirus). Publications dating since 1979, when the use of ELISA in arbovirus research began, were consulted. It was noted that this assay was used for antibody identification on not human reservoirs, and for antigen and blood meal identification on mosquito vectors. ELISA\'s perfomance was compared to standard tests used for laboratorial diagnosis of arboviruses. The test presented 100.0 per cent sensitivity and an average specificity of 84.5 per cent in Alphavirus antibody identification in humans; and was also sensitive for Flavivirus with average values of 95.2 per cent and specificity average values of 77.6 per cent. ELISA furthermore showed 100.0 per cent sensitivity and 97.4 per cent specificity for antibody identification in not human reservoirs. For the antigen identification in mosquito vectors, the assay presented an average specificity of 93.6 per cent and an average sensitivity of 76.5 per cent. The immunoassay presented high predictive values (average of 89.0 per cent) and it was reproducible when this characteristic was studied with a coefficient variation index ranging from 3.0 to 14.0 per cent There was a great variety in the positivity criteria, making the comparison of results difficult. An attempt to process the test in the shortest time and in field conditions is noted in many publications. The assay is used routinely on surveillance of Japanese encephalitis in Asian countries and in eastern and western equine encephalitis and St.Louis encephalitis in the USA. ELISA was considered a rapid assay with sirnple procedures when it is cornpared to tradicional tests and provides presuntive diagnosis of an acute infection with a single serurn sarnple. These characteristics suggest that the test is a useful tool for arbovirus surveillance.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kerlita Kyarely Goncalves.pdf: 1802020 bytes, checksum: c89e713a3c5e49161a0f905b69790e4a (MD5) Previous issue date: 2005-02-03 / Hepatitis C (HCV) is considered to be an important problem of public health, affecting millions of people all over the world; it is the most frequent cause of a chronic evolution resulting in grave and long term consequences. Prisoners are currently considered to be an important group of risk for diseases like Hepatitis C due to the conditions of confinement, social margination, drug dependence, low social-economic level, and precarious conditions of medical assistance in the prison atmosphere. The objective of this study was to identify the prevalence of Hepatitis C among the male population of a prison complex in the State of Goiás (Brazil) to try to detect any relation between the prison atmosphere and social factors which may contribute to the risk behavior of such a population. During the period of February to September of 2004, a universe of 270 inmates answered a questionnaire, soliciting social-economic and behavioral information; they then passed through examinations for the detection of anti-HCV antibodies. The prison population sampled in the correctional facilty of Goias was composed principally of white detainees, ranging in age from 21 to 30 years of age, in legal or common-law marriages, who studied up to the fourth grade and earned an average of one minimum salary (<US$100.00) per month before prison. Of the tested prisoners, 14,8% were positive for anti-HCV antibodies; 17,5% of these presented co-infection HCV-HIV. The statistically significant risk factors observed were: age equal to or greater than 31 years of age; the use of drugs, either injected or not; tattoos; sexual relations with a drug user and the occurrence of sexually transmitted diseases. These results suggest the importance of establishment a continuous health programs to make possible measures of control and prevention of HCV infection in the prison atmosphere. / A hepatite C (HCV) é considerada um importante problema de saúde pública, afetando milhões de pessoas em todo o mundo; é a causa mais freqüente de evolução crônica resultando em graves seqüelas a longo prazo. Na atualidade, os detentos são considerados um importante grupo de risco para doenças como a hepatite C, devido às condições de confinamento, marginalização social, dependência de drogas, baixo nível sócio-econômico e precárias condições de assistência médica nesse ambiente. Este estudo teve por objetivo identificar a prevalência de hepatite C na população masculina de detentos em regime fechado de um complexo prisional de Goiás, buscando detectar a relação entre o ambiente prisional e fatores sociais que possam contribuir para o comportamento de risco de tal população. No período de fevereiro a setembro de 2004, um universo de 270 detentos, responderam uma ficha cadastro/formulário contendo informações sócio-econômicas e comportamentais; depois eles passaram por exames para a detecção de anticorpos anti-HCV. A população carcerária da Agência Prisional de Goiás se caracteriza, principalmente, por detentos brancos variando em idade de 21 a 30 anos, casados/amasiados, que estudaram por até 4 anos e recebiam antes da prisão em média 1 salário mínimo mensalmente. Foi encontrada uma prevalência de 14,8% de detentos com anticorpos anti-HCV e 17,5% destes apresentaram coinfecção HCV-HIV. Os fatores de risco estatisticamente significantes observados foram: a idade maior ou igual a 31 anos; o uso de drogas, injetáveis ou não; tatuagem; prática de sexo com usuário(a) de drogas e a ocorrência de doenças sexualmente transmissíveis. Esses resultados sugerem a importância do estabelecimento de programas de saúde contínuos a fim de possibilitar medidas de controle e prevenção dessa infecção no ambiente prisional.

Orientador: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Júlio Cesar de Freitas / Banca: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Raul José Silva Girio / Banca: Samir Issa Samara / Resumo: Foi avaliado pelo teste de ELISA indireto a resposta humoral para as toxinas botulínicas tipos C e D em animais vacinados com quatro diferentes produtos comerciais. Empregou-se duas vacinas bivalentes C e D (vacina 1 e vacina 2) e duas polivalentes contendo ainda os toxóides botulínicos tipos C e D (vacina 3 e vacina 4). Para análise foram realizadas seis colheitas de sangue ao longo do experimento, nos dias 0, 42, 75, 160, 250 e 342 após a vacinação. A imunidade passiva em bezerros até os 90 dias de idade, filhos de mães vacinadas com diferentes toxóides comerciais foram avaliados em 75 bezerros, agrupados de acordo com a vacina utilizada na mãe (B1, B2, B3 e B4). Para análise foram realizadas 3 colheitas de sangue, nos dias 5 (± 2), 45 e 90 dias após o nascimento. A avaliação da resposta humoral de bovinos vacinados em diferentes faixas etárias também foi realizada empregando-se uma vacina antibotulínica bivalente (C e D) comercial. Para análise, 90 bovinos foram divididos em 3 grupos de acordo com a faixa etária; animais com idade inferior a 2 anos, entre 2 e 5 anos e superior a 5 anos. Na avaliação da resposta humoral de animais vacinados com quatro diferentes produtos comerciais, para a toxina tipo C, as vacinas 1, 2, 3 e 4 não apresentaram diferenças significativas aos 42 dias da primeira dose. Aos 75 dias, a vacina 1, foi superior às vacinas 3 e 4, induzindo maior produção de anticorpos nos animais, porém não diferiu da vacina 2. Aos 160 dias houve queda na quantidade de anticorpos em todos os grupos, não havendo mais diferenças significativas entre as quatro vacinas testadas. Para a toxina tipo D, aos 42 dias da vacinação, não houve diferenças significativas entre as vacinas 1, 2 e 4, que apresentaram neste momento, valores superiores a vacina 3. No entanto, quando avaliadas aos 75 dias, a vacina 1 apresentou maior produção de anticorpos, diferindo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: To compare the efficiency of an "in house" ELISA test, standardized to measure antibody C and D from Clostridium botulinum, a survey to analysis four different commercial vaccines was conducted. The vaccines used were two commercial, bivalent botulinum containing subtypes C and D (vaccine 1 and vaccine 2) and other two polyvalent including subtypes C and D. The first trial was blood samples taken at 0, 42, 75, 160, 250 and 342 days after vaccination, whereas the booster was performed at day 42. The second trial, maternal antibodies were also measured taken blood samples from 1-3 months age steers obtained from vaccinated heifers with the same vaccines described above, and divided into four different groups (B1, B2, B3, B4). The blood samples were taken at days 5, 45 and 90 after birth. Third and last trial was humoral response from vaccinated cattle with different age evaluation performed using the commercial Clostridium botulinum vaccine subtype C and D. For this purpose, 90 animals never vaccinated, were divided into 3 groups: 1 - 2 years old; 2 - animals aged between 2 and 5 years old; 3 - animals 5 years old. The blood samples were taken 30 days after vaccination after second dose of the vaccine. From the first trial, no significant difference was observed when subtype C was search in sera from animals at 42 days after vaccination. However, at 75 days after vaccination, vaccine 1 was able to induce higher levels of antibodies when compared to vaccine 3 and 4. The antibody level was declining after 160 days post vaccination. For subtype D antigen, at 42 days after vaccination, no differences could be observed. However, at 75 day after vaccination, higher levels of antibodies were observed from animals vaccinated with vaccine 1. Comparing the bivalent vaccines, these were able to induce higher antibodies levels at 75 days after vaccination (toxoid C). In addition, the same... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-03-28T12:27:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Fernando_Bandeira.pdf: 1564177 bytes, checksum: 8d086e34d835408a590bd8a69d5aa73a (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-03-28T20:58:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Fernando_Bandeira.pdf: 1564177 bytes, checksum: 8d086e34d835408a590bd8a69d5aa73a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T20:58:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Fernando_Bandeira.pdf: 1564177 bytes, checksum: 8d086e34d835408a590bd8a69d5aa73a (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Sem bolsa / A mastite bovina é um problema sanitário mundial, com medidas de tratamento e prevenção insatisfatórias. Paralelamente, vem crescendo o interesse no uso de própolis como alternativa para tratamento das mastites, sendo ainda, objeto de estudos com finalidade de uso como adjuvante. Até o momento, porém, não foi descrito seu uso em vacinas para controle da mastite bovina. A importância do gênero Staphylococcus como agente da enfermidade é bem documentada, crescendo a necessidade de identificação da espécie do agente etiológico. A pesquisa identificou 12,6% de estafilococos coagulase positiva em mastites subclínicas na região sul do Brasil, sendo que S. aureus estando presente em 17,6% dos animais pesquisados. Dentre os isolados coagulase positiva, a frequência de S. aureus foi de 85,7%, a de S. intermedius foi de 8,5% e de S. hyicus foi 5,8%. A bactéria S. aureus utiliza vários fatores de patogenicidade para causar a infecção no hospedeiro. Foi pesquisado em bases de dados, as informações recentes sobre os principais produtos expressos e forma de atuação. Descreveu-se os principais mecanismos ligados a penetração do micro-organismo na glândula mamária, os processos que medeiam a formação do biofilme e suas estratégias de sobrevivência as respostas do hospedeiro, resultando em processos que muitas vezes tornam-se crônicos. Finalmente, é desejável a utilização de uma vacina eficiente para colaborar no controle da mastite, e dessa forma foi proposta a utilização de uma bacterina contendo extrato hidro-alcoólico de própolis verde na formulação. Comparou-se o seu efeito com uma formulação sem adição de própolis, vacina comercial e PBS esterilizado, em um trabalho conduzido em 63 bovinos. De forma semelhante, com os mesmos grupos de tratamento, mas com a adição de um grupo que recebeu apenas o extrato hidroalcoólico de própolis verde, foi conduzida uma pesquisa em 30 camundongos BALB/c. A pesquisa de anticorpos IgG em bovinos, demonstrou que tanto o tratamento contendo extrato hidroalcóolico de própolis verde quanto a bacterina sem própolis apresentaram resultados semelhantes, superiores aos tratamentos utilizando a vacina comercial e PBS, sendo que nos mesmos tratamentos, foi observada uma resposta com característica humoral inicialmente, tendendo a celular ao longo do experimento. Nos bovinos, a expressão relativa de RNAm para INF-γ, IL-2 e CXCR5 foi elevada para o grupo que recebeu a bacterina contendo extrato hidroalcoólico de própolis verde. Os resultados do teste de ELISA em camundongos, foram semelhantes aos encontrados para os bovinos. O grupo que recebeu apenas o extrato hidroalcoólico de própolis verde sem nenhuma combinação bacteriana, demonstrou resposta com predominância de IgG1 ao longo da pesquisa, semelhante aos grupos de vacina comercial e PBS. No modelo murino, a vacina comercial apresentou índices maiores de expressão de RNAm para as citocinas pesquisadas em esplenócitos. Os resultados obtidos sugerem que a bacterina contendo extrato hidroalcoólico de própolis verde apresenta potencial para atuar como ferramenta no controle da mastite bovina. / Bovine mastitis is a global health problem and many scientific advances have occurred, but the treatment and prevention of disease with existing techniques do not present satisfactory results. Similarly, there is growing interest in the use of propolis as an alternative for treatment of mastitis, also being the object of studies in order to use as an adjuvant, although so far it has not been described their use in vaccines for the control of bovine mastitis. The importance of Staphylococcus gender as disease agent is well documented, growing need for species identification of the etiologic agent. In a survey of coagulase-positive staphylococci in subclinical mastitis in southern Brazil, was finding its presence in 12.6% of cases with S. aureus was present in 17.6% of animal researched. Among the considered coagulase positive S. aureus is 85.7%, 8.5%, were S. intermedius and 5.8% were identified as S. hyicus. For the S. aureus penetrate, multiply and keep the host uses multiple pathogenic factors. Was researched in the literature to-date information on the main mechanisms expressed by the bacteria and how they operate, alone or integrated to ensure the penetration of micro-organism in the mammary gland, the processes that mediate the formation of biofilms and their coping strategies the host responses, their internalization in the cells and its continuation mechanisms, resulting in processes that often become chronic. To assist in the control of mastitis, is desirable the use of an effective vaccine and thus has been proposed the use of a bacterin containing hydroalcoholic extract of green propolis in the formulation is desirable, being compared to a similar bacterin without propolis, commercial vaccine and sterile PBS on a work carried out on 63 bovines. Similarly, with the same treatment groups and the addition of a group that received only the hydroalcoholic extract of propolis, a study was conducted on 30 BALB/c mice. The research of IgG antibodies in bovines showed that both treatment containing hydroalcoholic extract of propolis as the bacterin without propolis showed similar results and superior to commercial and PBS treatments, and the same treatment, we observed initially characteristic a humoral response with tending to cellular during throughout the experiment. In bovines, the relative expression of mRNA for INF-γ, IL-2 and CXCR5 was raised to the group receiving bacterin containing hidroalcoholic extract of green propolis. The ELISA results were similar to those of bovine in BALB/c still with the group that received only the the alcoholic extract of propolis without any bacterial combination, behaving similarly commercial and PBS, and the response was predominantly IgG1 to during the research. In the murine model, the commercial vaccine showed higher levels of mRNA expression for the studied cytokines. The results indicate that the bacterin containing alcoholic extract of propolis has the potential to act as a tool in the control of bovine mastitis in the target especie, requiring minor adjustments and a job to prove the efficiency in a challenge.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-04-25T16:24:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Alessandra_Teles.pdf: 1310415 bytes, checksum: 2a8a7ced00fb9f290b5c86dd180ecfb6 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-04-25T17:24:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Alessandra_Teles.pdf: 1310415 bytes, checksum: 2a8a7ced00fb9f290b5c86dd180ecfb6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T17:24:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Alessandra_Teles.pdf: 1310415 bytes, checksum: 2a8a7ced00fb9f290b5c86dd180ecfb6 (MD5) Previous issue date: 2015-04-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / O fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o principal causador da paracoccidioidomicose, micose sistêmica restrita à América Latina e endêmica no Brasil. No extremo sul do país a enfermidade é diagnosticada em humanos desde a década de 60 com crescimento do número de casos a partir dos anos 90. Com o propósito de detectar a presença do agente em áreas urbanas, alertando para a possibilidade da exposição de indivíduos suscetíveis à doença, este estudo teve como objetivo investigar a infecção por P. brasiliensis em cães no sul do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram avaliados 196 caninos, errantes e semidomiciliados, participantes de um programa de controle populacional dos municípios de Pelotas e Capão do Leão localizados na zona sul do Rio Grande do Sul. Utilizou-se a técnica de ELISA indireto para detecção de anticorpos anti-gp43 de P. brasiliensis no soro dos animais. Na técnica sorológica foram testados e comparados dois conjugados diferentes, anti-IgG canina-peroxidase e proteína G-peroxidase, estes foram avaliados quanto à concordância dos resultados nos testes (índice Kappa) e a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo do conjugado porteína G-peroxidase foram calculados considerando o conjugado específico para cães como padrão ouro. A infecção fúngica foi constatada em 58 animais (29,6%), sem diferença significativa quanto ao sexo, idade e raça dos cães (P>0,05). Foram detectados animais soropositivos procedentes de todos os bairros do Distrito Sede de Pelotas, bem como do município vizinho Capão do Leão. Os resultados dos testes com os dois conjugados diferentes resultaram em fraca concordância (Kappa=0,140; P< 0,001). A proteína G-peroxidase apresentou baixa sensibilidade e ocorrência de falsos negativos em relação ao conjugado específico, demonstrando não ser uma alternativa viável para realização do imunoensaio na espécie canina. A detecção de anticorpos específicos nos cães do presente estudo comprova a presença e ampla distribuição de P. brasiliensis na área urbana da cidade de Pelotas e no município Capão do Leão, e alerta para ocorrência da PCM em indivíduos suscetíveis, bem como a possibilidade da doença em pequenos animais nesta região. / The thermally dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensisis the main agent that triggers the paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic infectious disease restricted to Latin America and endemic in Brazil. In southern Brazil, this disease has been diagnosed in humans since the 60s and the number of cases has increased since the 90s. In order to detect the presence of the agent in urban areas and warn about the possibility of the exposion of susceptibles individuals to the disease, this study aimed to investigate the infection by P. brasiliensis in dogs in Rio Grande do Sul, southern state of Brazil. 196 dogs which participated in a program of animal population control in the cities of Pelotas and Capão do Leão were evaluated. The indirect ELISA technique was used in order to detect the presence of anti-gp43 antibodies in the animal serum. Two different conjugates were tested and compared in this serological technique, the dog anti-IgG peroxidase and the protein Gperoxidase, that were evaluated for the concordance of the test results (Kappa index). The sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of protein Gperoxidase were calculated considering the specific conjugate of dog as a gold standard. The fungal infection was confirmed in 58 animals (29,6%), and no significant difference was found between the gender, age and breed of the dogs (P>0,05). Seropositive animals could be detected coming from the two cities, both Pelotas and Capão do Leão. The result of the tests made with the different conjugate showed poor concordance (Kappa=0,140; P< 0,001). The protein G-peroxidase presented low sensitivity and occurrence of false negatives regarding to the specific conjugate, what demonstrated not being a viable alternative to realize an immunoassay in dogs. The detection of specific antibodies in the dogs serum in this study proved the presence and a wide distribution of P. brasiliensis in the urban areas of Pelotas and Capão do Leão city and alerted to the occurrence of PCM in susceptible individuals, as well as the possibility of the disease in small animals in the region.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-06-07T14:31:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Ana Muñoz Vianna.pdf: 2420695 bytes, checksum: 23ce0fe8a151274827065f7b3c62e03a (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-06-08T13:00:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Ana Muñoz Vianna.pdf: 2420695 bytes, checksum: 23ce0fe8a151274827065f7b3c62e03a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-08T13:00:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Ana Muñoz Vianna.pdf: 2420695 bytes, checksum: 23ce0fe8a151274827065f7b3c62e03a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A theileriose, doença endêmica no Brasil, é uma piroplasmose causada pelo protozoário intraeritrocitário, Theileria equi. Provoca perdas associadas tanto a fatores clínicos como a restrição ao trânsito de animais soropositivos. A transmissão de T. equi ocorre principalmente no repasto do carrapato, o qual inocula suas formas infectantes (esporozoítos) nos equídeos, que são os hospedeiros vertebrados. O diagnóstico e a prevenção desta enfermidade se fazem necessários em áreas endêmicas e não endêmicas devido à disseminação dos vetores e do protozoário e de sua alta prevalência. Diferentes plataformas de ELISAs têm sido desenvolvidas com a utilização de antígenos recombinantes. A proteína de superfície de merozoíto EMA-2 é liberada no citoplasma e na membrana do eritrócito, sugerindo ser um dos primeiros antígenos reconhecidos pelo sistema imune. O objetivo desse estudo foi avaliar a proteína EMA-2 de Theileria equi, expressa em Pichia pastoris, como imunobiológico. Após expressão da glicoproteína EMA-2 foi desenvolvido um ELISA indireto. O ELISA demonstrou sensibilidade de 90,9% e especificidade de 83,3% quando comparado ao kit comercial de cELISA. A proteína também demonstrou imunogenicidade ao testarmos soros de camundongos imunizados com EMA-2 recombinante, por imunofluorescência. Sendo a proteína EMA-2 antigênica e imunogênica, poderá ser usada, além dos testes de diagnóstico, como antígeno para o desenvolvimento de vacinas de subunidade. / Theileriosis, endemic disease in Brazil, is a piroplasmosis caused by intra-erythrocytic protozoan, Theileria equi. Causes losses associated with both clinical factors and restriction on the movement of positive animals. Transmission of T. equi occurs mainly during tick feeding which inoculates their infective forms (sporozoites) in horses, which are the vertebrate hosts. The diagnosis and prevention of this disease is needed in endemic and non endemic areas due to the presence of vectors and protozoa. Different ELISAs platforms have been developed using recombinant antigens. EMA-2 is released into the cytoplasm and erythrocyte membrane, suggesting that one of the first antigens recognized by the immune system. The aim of this study was to evaluate the EMA-2 protein of Theileria equi, expressed in Pichia pastoris, as immunobiological. After expression of EMA-2 glycoprotein, an indirect ELISA was developed. The ELISA demonstrated sensitivity of 90.9% and specificity of 83.3% when compared to the commercial kit cELISA. The protein also showed immunogenicity when test the sera of immunized mice with recombinant EMA-2 by immunofluorescence. As the EMA-2 protein antigenic and immunogenic, it may be used diagnostic tests as well as a promising antigen for the development of subunit vaccines.

A importância em conhecer o padrão alimentar em mosquitos da Família Culicidae permite esclarecer alguns aspectos relacionados à transmissão de zoonoses e estimar o grau de contato humano-vetor que é fator relevante em estudos epidemiológicos. Com o objetivo de explorar o comportamento alimentar dessa Família, em área epizoótica de febre amarela silvestre, foram coletados exemplares nos municípios de Santo Antônio das Missões e Garruchos, Estado do Rio Grande do Sul. Fêmeas ingurgitadas foram obtidas por aspiração em ambiente de mata, no período de setembro de 2005 a abril de 2007 e identificadas segundo fonte de sangue ingerido através da técnica imunoenzimática ELISA de captura no sistema avidinabiotina. Foram testadas seis fontes de alimento: ave, bovino, eqüino, humano, macaco e rato. Os resultados obtidos mediante a padronização de anticorpos monoclonais possibilitaram demonstrar pela primeira vez o reconhecimento de sangue humano ingerido nesses mosquitos pelo emprego da subclasse IgG1 e comprovar a sensibilidade e especificidade da técnica ELISA de captura. No município de Santo Antônio das Missões, de um total de 190 amostras, 60,9% reagiram para sangue de boi, 23,6% para humano, 9,9% para ave, 1,9% para macaco e 3,7% para combinações de dois hospedeiros. Quanto às amostras referentes ao município de Garruchos, das 158 fêmeas capturadas na área Cachoeirinha pode-se observar reatividade para ave (16%), boi (29,6%), humano (36,8%), cavalo (4%), macaco (0,8%) e combinações de hospedeiros (12,8%), enquanto que para as 149 fêmeas pertencentes à área de São José, detectou-se sangue ingerido de boi em (51,5%), ave e humano (11,5%), macaco (6,2%), cavalo (0,8%) e mistos (18,5%). Aedes scapularis, Aedes crinifer, Culex (Culex) spp., Haemagogus leucocelaenus apresentaram maior número de fêmeas ingurgitadas nos dois municípios. Os resultados obtidos com Aedes scapularis sugerem ecletismo, conforme combinações detectadas em amostras de sangue de diferentes fontes. Haemagogus leucocelaenus apresentou a maior proporção de amostras contendo sangue humano em relação às demais fontes e essa característica traz implicações, por ser espécie incriminada na transmissão e por se tratar de área de ocorrência de epizootias de febre amarela. / The knowledge of mosquitoes Culicidae host feeding patterns permits to clarify some aspects related to zoonosis transmission and to estimate the degree of human-vector contact which is relevant in epidemiological studies. Aiming to explore the feeding behavior of these mosquitoes, specimens were collected in the municipalities of Santo Antônio das Missões and Garruchos, Rio Grande do Sul, an epizootic area of sylvatic yellow fever. Engorged females were collected by aspiration from forested areas from September 2005-April 2007 and their blood meals were identified using the avidin-biotin system of immunoenzymatic ELISA capture. Six blood meal sources were tested: bird, cattle, horse, human, monkey and rat. The result achieved with the species-specific IgG1 mAb was unprecedented for mosquito blood meal identification and reinforced the sensibility and specificity of the immunoenzymatic ELISA capture. Of the 190 samples from Santo Antônio das Missões, 60.9% reacted to cattle, 23.6% to human, 9.9% to bird, 1.9% to monkey and 3.7% to mixed blood meals. In Garruchos, of the 158 females collected in Cachoeirinha, 16.0% reacted to bird, 29.6% to cattle, 36.8% to human, 4.0% to horse, 0.8% to monkey and 12.8% to mixed blood, while of the 149 engorged females from São José, blood from cattle accounted for 51.5%, of blood identified, bird and human 11.5%, monkey 6.2%, horse 0.8% and mixed blood 18.5%. Blood engorged females of Aedes scapularis, Aedes crinifer, Culex (Culex) spp., Haemagogus leucocelaenus predominated in the two municipalities. The results obtained with Aedes scapularis suggests its eclecticism, according to the combinations of blood which were detected from different sources. Haemagogus leucocelaenus was found to have the highest proportion of samples containing human blood in comparison with other sources, which has implications, on account of being incriminated in the transmission and also for taking into consideration the outbreaks reported that underline the risk of yellow fever.

INTRODUÇÃO E OBJETIVOS: A a-Glutathiona-S-transferase (aGST) vem sendo proposta como um marcador sensível e não-invasivo de lesão hepática em pacientes com Hepatite pelo vírus C. Avaliamos neste trabalho como a (aGST) se correlaciona com características bioquímicas e histológicas em pacientes com HCV. MATERIAL E MÉTODOS: Realizamos a determinação da concentração plasmática das aGST, alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) e gama-glutamyltransferase (gGT) em 114 pacientes com HCV, dos quais 97 foram submetidos à biópsia hepática em até 6 meses da realização dos testes bioquímicos. Avaliamos também os níveis de aGST em 66 doadores de sangue sadios, que serviram como controles. Comparamos os níveis de aGST com as demais provas bioquímicas e a histologia hepática. RESULTADOS: A aGST estava elevada em 85.96% dos pacientes com HCV e mostrou associação com a elevação das aminotransferases (p<0.01). O valor de 4mg/dL mostrou as melhores sensibilidade (85,96%) e especificidade (92,42%) para determinar a normalidade do teste aGST. aGST ³ 8mg/dL mostrou a melhor especificidade para determinar lesão histológica hepática mais agressiva e o melhor valor preditivo positivo e razão de verossimilhança positiva para inflamação portal e atividade parenquimatosa mais agressiva nos pacientes com HCV. CONCLUSÕES: A aGST está relacionada à lesão hepática na infecção pelo HCV (valor de corte = 4mg/dL) e lesões histológicas hepáticas mais agressivas (valor de corte = 8mg/dL). Neste contexto, a aGST poderia ser utilizada em pacientes com Hepatite pelo HCV com ALT elevada, como um indicador complementar de lesão histopatológica mais agressiva. Entretanto, seu valor preditivo positivo não é suficientemente elevado para evitar a necessidade de realizar a biópsia hepática, mesmo quando está acima de 8mg/dL. / BACKGROUND/AIMS: a-Glutathione-S-transferase (aGST) has been proposed as a sensitive non-invasive indicator of hepatocellular injury due to Hepatitis C virus (HCV) infection. In this work, we evaluate how alpha-GST concentration correlates with biochemical and histological features in HCV patients. METHODS: We assayed plasma aGST, alanine aminotransferase (ALT), spartate aminotransferase (AST) and gama-glutamyl-transferase (gGT) in 114 HCV+ patients, among whom liver biopsy was performed in 97, within 6 months of the biochemical evaluation. We also assessed aGST levels in 66 health blood donors, aimed to serve as control. We compared aGST levels with other biochemical tests and liver histology. RESULTS: In 85.96% of HCV patients aGST was elevated and showed association with serum aminotransferases (p<0.01). The value of 4mg/dL (or lower) showed the best sensitivity (85.96%) and specificity (92.42%) to determine normality on the aGST test. aGST levels 8mg/dL and higher showed the best specificity to determine the presence of more aggressive liver histological damage among HCV patients and the best predictive positive value and positive likelihood for more aggressive portal inflammation and lobular activity. CONCLUSION: aGST is related to HCV infection (cut-off = 4mg/dL) and more aggressive liver histological damage (cut-off = 8mg/dL). In this sense, aGST could be used in HCV patients with altered ALT levels as an indicator of more aggressive hystopathological damage. However, its positive predictive value (PPV) is not high enough to preclude the decision of performing hepatic biopsy, even when it is above 8mg/dL.

O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é um dos principais patógenos virais dos bovinos e sua infecção causa importantes perdas na produção dos rebanhos afetados. O presente trabalho contém os estudos realizados para esclarecer determinados aspectos da epidemiologia e da detecção da infecção causada pelo BVDV no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. O primeiro artigo consistiu de um estudo transversal onde os níveis de anticorpos contra o BVDV em amostras de tanque de leite que foram correlacionados com os aspectos produtivos dos rebanhos. As amostras e as informações foram coletadas de 300 criações escolhidas aleatoriamente entre 1.656 associados de uma cooperativa de leite na região central do Estado do Rio Grande do Sul e que não utilizaram vacina contra BVDV nos últimos 12 meses anteriores ao experimento. Dessas, 80 foram consideradas positivas para BVDV pela detecção de anticorpos contra vírus em níveis superiores ao ponto de corte do teste de ELISA comercial utilizado. A prevalência aparente estimada foi de 26,7% e, usando um intervalo de confiança de 95%, apresentou uma variação entre 22 e 31%. Os parâmetros de produção mensal de leite, densidade de bovinos (relação vacas/hectare), tipo de armazenamento do leite e origem do sêmen não apresentaram associação com a infecção pelo BVDV, mas o aumento do número total de animais por rebanho foi correlacionado positivamente com a infecção. A prevalência estimada foi considerada baixa para uma população de rebanhos, criados em sistema semi-intensivo de produção de leite, que não usava medidas específicas de controle contra a infecção. A hipótese proposta no presente artigo é que o pequeno número de animais por rebanho está favorecendo a uma provável limpeza ou erradicação da infecção nas criações e que a prevalência encontrada deve corresponder ao ponto de equilíbrio entre a pressão de infecção e a limpeza da infecção destes rebanhos. A baixa prevalência estimada pode ser uma condição favorável para iniciar um programa de controle para BVDV na população estudada. No segundo artigo, um teste da transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) foi estabelecido para detecção do vírus nas amostras de tanque de leite dos rebanhos suspeitos de infecção ativa pelo BVDV identificados no primeiro artigo. O teste foi capaz de detectar até 0,001 TCID50 de BVDV por mL de leite. Esses resultados demonstraram uma sensibilidade analítica 100 ou 1000 vezes superior aos testes de RTPCR convencionais descritos anteriormente para leite e são semelhantes aos resultados obtidos em testes de RT-PCR em tempo real para BVDV. Na análise das amostras de campo, o teste detectou RNA viral em dois rebanhos entre os 59 analisados. Esses resultados comprovaram a capacidade do teste para identificar amostras naturalmente infectadas e a presença de vacas adultas produtivas e virêmicas em 3% dos rebanhos suspeitos de infecção. Este teste é uma alternativa rápida e sensível para monitorar a infecção pelo vírus em rebanhos leiteiros, a partir de amostras coletivas. O terceiro artigo tratou da detecção do BVDV em carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus alimentados em bovino persistentemente infectado (PI). Seu objetivo foi investigar o papel do carrapato bovino R. microplus na transmissão do BVDV. O RNA viral foi detectado nas teleóginas alimentadas no bovino PI, mas não pode ser identificado em sua progênie (ovos e larvas). Esses resultados sugeriram não haver transmissão transovariana do BVDV nos carrapatos. Por outro lado, a infestação experimental de um segundo bovino com as larvas oriundas das teleóginas contaminadas com BVDV não resultou em manifestação clínica e o animal foi negativo no teste de RT-PCR. O experimento demonstrou que o carrapato R. microplus pode ser contaminado com BVDV durante o repasto sanguíneo, reforçando a idéia de que vetores hematófagos possam estar envolvidos na disseminação da doença e merecem mais investigações. / Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is one of the main pathogenic agents in cattle and the infection with the agent causes important production losses in the affected herds. The present work contains studies carried out to clarify some aspects of the epidemiology and detection of the infection caused by BVDV in the State of Rio Grande do Sul, Brazil. The first paper consisted of a transversal study, where antibody levels against BVDV in samples of bulk milk tank were correlated with some aspects of milk production in the herds. Samples and information were collected from 300 herds randomly chosen between 1656 associates of a dairy cooperative in the region of the central area of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, that were not using routine vaccination against BVDV in the last 12 months previous to the experiment. Among them, 80 were considered positive to BVDV by detection of antibodies against the virus in levels above the cut off point of the commercial ELISA test used. The apparent estimated prevalence was 26.7% and, using a confidence interval of 95%, showed a range between 22 and 31%. The parameters of average milk production, bovine density (relationship cattle/hectare), milk storing process and origin of the semen were not significantly associated with BVDV infection, but the increase in the total number of cows in the herds was positively correlated with the infection. The prevalence was considered low for a population of herds raised in a semi-intensive milk production system that was not using specific measures to control the viral infection. The hypothesis proposed in the present study is that the small number of animals present in the analyzed herds would favors a likely virus clearance in the herd and that the prevalence found would correspond to a point of balance between the pressure of infection and the virus clearance. The low prevalence detected can be a favorable condition to launch a control program for BVDV in the studied population. In the second paper, a reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was established for BVDV detection in bulk tank milk samples of the herds suspected of active infection with BVDV in the first paper. The test detected up to 0.001 TCID50 of BVDV per mL of milk. These results demonstrated an analytical sensitivity 100 to 1000 times higher than conventional RT-PCR tests described previously for milk and are similar to results obtained by the use of real time RT-PCR already published. In the analysis of field samples, the test detected viral RNA in 2 out of 59 analyzed herds. These results demonstrated the relationship between the ability of the test to identify samples naturally infected and the presence of viremic adult cows in 3% of the herds suspected of the infection. This test represents a fast and sensitive alternative for monitoring virus infection in dairy herds, through the analysis of collective samples. The third article dealt with the detection of BVDV in the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus fed in a bovine persistently infected (PI). The objective was to investigate the role of the cattle tick R. microplus in the transmission of BVDV. Viral RNA was detected in adult females fed on the PI bovine, but could not be identified in its progeny (eggs and larvae). These results suggest that there is no transovarial transmission of BVDV in ticks. On the other side, experimental infestation of a second bovine with larvae derived from adult cattle contaminated with BVDV did not result in clinical manifestations and the animal was negative in the RT-PCR test. The study demonstrated that the tick R. microplus can be contaminated with BVDV during blood feeding, strengthening the idea that haematophagous vectors could be involved in the dissemination of the disease and would deserve further consideration.

Master of Veterinary Clinical Studies / Summary Canine Neural Angiostrongyliasis (CNA) is caused by the obligatory neural migration of Angiostrongylus cantonensis larvae in dogs. Characteristically, cases are juvenile dogs with progressive CNS dysfunction characterised by hyperaesthesia and often associated with eosinophilic pleocytosis of the CSF. In Australia, most cases occur between March and June. The rat lungworm, A cantonensis was first described by Chen in 1935 in Canton, China. While initially called Pulmonema cantonensis the parasite was later reclassified as A cantonensis. A disease diagnosed as eosinophilic meningoencephalitis was first described in 1944 in Taiwan. The same disease was reported in 1948 in the East Caroline Islands but it was not until 1961 that A cantonensis was confirmed as the aetiological agent when a patient in a Hawaiian mental institution, who had died of eosinophilic meningoencephalitis, had A cantonensis larvae recovered from the brain and spinal cord. The first reports of animals infected with A cantonensis were made by Mason in 1976 when he described a syndrome occurring in puppies in the Brisbane area, characterised by urinary incontinence, hind limb paresis and hyperaesthesia, often associated with eosinophilic pleocytosis of the CSF. Reports of infection in other species followed including macropods, bats, horses, primates and birds. Twenty-two cases of suspected CNA were collected prospectively to compare with those previously described, including 37 cases published by Mason in 1983, and to examine the accuracy of an ELISA used to diagnose human neural angiostrongyliasis in Australia. Samples were collected from two control populations in an attempt to validate the ELISA results. In the prospective series of cases, there was a significantly older subpopulation of dogs in addition to “classical” young dogs, suggesting that this syndrome can occur at any age and should be considered a differential in any dog with progressive neurological disease. The mortality rate in the prospective group was lower than in the published group, which is a reflection of the severity of the disease in younger animals as is the case with human patients. Definitive diagnosis of neural angiostrongyliasis in human patients has been achieved by identifying A cantonensis larvae within the CSF or aqueous humour. In dogs, the only definitive way to diagnose CNA has been via necropsy. While many cases of CNA are characteristic and presumptive diagnosis can be made based on typical history, signalment, clinical signs, CSF analysis and response to glucocorticoids, there appear to be an increasing number of cases occurring in older dogs, that displaying focal, atypical clinical signs or that develop permanent sequelae. Serology has been a useful tool in diagnosing neural angiostrongyliasis in humans. In its current form the ELISA is not sensitive or specific enough to allow a definitive diagnosis of CNA to be made using serum but is useful when applied to CSF specimens. Further refinement of the antigen or using monoclonal rather than polyclonal antibodies may improve the accuracy of the serology. Alternatively, methods such as Western Blot, Immuno-PCR or dot-blot ELISA, which have been successfully used to diagnoses angiostrongyliasis in humans, may be worthy of investigation The major differential diagnosis for CNA is neosporosis. Other differential diagnoses include idiopathic eosinophilic meningoencephalitis, parasitic infections including Toxoplasma gondii, Taenia solium, Gnathostoma spinigerum, visceral larval migrans (Toxocara canis) and schistosomiasis, fungal, bacterial, viral and rickettsial infections as well as neoplasia, trauma, drug reactions and toxicities. Treatment of CNA has been limited to glucocorticoids, however there may be adjunct therapies including anthelmintices, cyclosporine, and matrix metalloproteinase inhibitors. In Mason’s series of cases the use of anthelmintics significantly worsened the clinical outcome for patients. It does not appear, however, that the use of these agents in species other than the dog exacerbates clinical signs. Acquired immunity is short lived in rats and mice, which would suggest the same is true in dogs. Routine heartworm and intestinal parasite prophylaxis appears to have no influence on the occurrence of CNA.