Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-19Bitstream added on 2014-06-13T20:03:22Z : No. of bitstreams: 1 ebaid_gmx_dr_botfm.pdf: 1264184 bytes, checksum: daa1de14991327d1b14b47a86e0084da (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve por objetivo determinar os efeitos da suplementação nutricional de azeite de oliva extra-virgem e seus fenóis, oleuropeína e ácido caféico, sobre os parâmetros morfométricos, calorimétricos e estresse oxidativo no músculo cardíaco de ratos normais e obesos. Para tanto, foram utilizados 48 ratos, Wistar, 180,52 ± 21,05g, divididos inicialmente em 2 grupos. O grupo P (n=24) foi mantido com ração padrão e água ad libitum e o grupo H (n=24) foi mantido com ração rica em colesterol e sacarose e água ad libitum. Após 21 dias de tratamento os dois grupos foram divididos em 4 subgrupos cada (n=6): (C) considerados controles, mantidos com as respectivas dietas P, ou H e sem suplementação; (AO) receberam respectivamente ração P ou H e suplementação nutricional com azeite de oliva extra-virgem (Colavita, Itália) (3mL/Kg/dia); (O) receberam ração P ou H, respectivamente e suplementação nutricional com oleuropeína (Genay, France) (0,023mg/Kg/dia); (AC) receberam respectivamente ração P ou H e suplementação nutricional com ácido caféico (Sigma, USA) (2,66mg/Kg/dia). O experimento teve duração de 43 dias. Ingestão de ração hipercalórica induziu obesidade. A análise calorimétrica permitiu sugerir que os efeitos da suplementação nutricional com azeite de oliva foram similares à suplementação com ácido cafeico, tanto o azeite de oliva como o ácido cafeico induziram elevação na oxidação de lipídios, independentemente da dieta utilizada. Administração de azeite de oliva e oleuropeína apresentaram atividade antioxidante evidenciada pela elevação nas substâncias antioxidantes totais e redução nas concentrações de hidroperóxido de lipídio, no tecido cardíaco de animais mantidos... / Not Available

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-19Bitstream added on 2014-06-13T18:43:55Z : No. of bitstreams: 1 silva_es_dr_botfca.pdf: 738395 bytes, checksum: 0c7c355dfdb886f7eb857e0ec77c1fb6 (MD5) / A enxertia é uma técnica utilizada com a finalidade de controlar patógenos de solo, como a R. solanacearum, porém em porta-enxerto resistente tem-se observado sintomas da doença no enxerto, devido a passagem do patógeno. A enxertia e a bactéria podem causar estresse na planta de tomateiro e algumas enzimas e o teor de fenóis podem ser usados como respostas bioquímicas a estes estresses. Para avaliar a eficiência desta técnica sobre a bactéria e na produção de tomateiro foram medidas, a incidência da doença, trocas gasosas das plantas, a atividade de algumas enzimas como superoxido dismutase (SOD), catalase (CAT), peroxidase (POD), fenilalanina amônia-liase (PAL), polifenoloxidase (PPO), teor de fenóis e produção em plantas de tomateiro ‘Pizadoro’ pé-franco e enxertadas no porta-enxerto ‘Guardião’. Para tanto foram realizados dois experimentos na Faculdade de Ciências Agronômicas da UNESP de Botucatu-SP e um experimento na Fazenda de ensino, pesquisa e produção (FEPP) em São Manuel, SP. No primeiro experimento foi avaliada a variação da atividade enzimática (SOD, CAT, POD, PPO) e teor de fenóis em mudas do tomateiro, em função dos métodos de enxertia Contato em bisel, Fenda garfagem, Encostia, enxerto pé-franco e cinco coletas das plantas, aos 0, 3, 6, 9 e 12 dias após a enxertia (DAE). No segundo, foram avaliadas a incidência da murcha bacteriana, trocas gasosas nas folhas, além da atividade das enzimas SOD, CAT, POD, PAL, PPO e teor de fenóis, aos 0, 2, 4, 6, 8 e 15 dias após a inoculação com R. solanacearum, em plantas enxertadas de tomateiro conduzidas em casa de vegetação. No terceiro experimento foram avaliados três métodos de enxertia (Contato em bisel, Fenda garfagem e Encostia) e pé-franco na produção de tomateiro sob ambiente protegido. O método Fenda garfagem é melhor... / Grafting is a technique used in order to control soil pathogens, such as R. solanacearum bacteria. The symptoms of the disease, however, have been observed in resistant rootstock, due to the passage of the pathogen to the graft. Both grafting and the bacteria can cause stress in tomato plant and some enzymes and phenols can be used as biochemical marker to this stress. In order to evaluate the efficiency of grafting to control the bacteria in the tomato yield, the disease incidence, plant gas exchange, phenol contents and the activity the enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), peroxidase (POD), phenylalanine ammonia lyase (PAL), polyphenoloxidase (PPO), as well as tomato fruit yield were measured. The study considered ungrafted and grafted tomato plants 'Pizzadoro' on rootstock 'Guardian' in two experiments carried out at the College of Agricultural Sciences, UNESP, in Botucatu-SP, and one experiment at the Farm of Teaching, Research and Production (FEPP), in São Manuel-SP. The enzymes activity of SOD, CAT, POD, PPO and phenol content in tomato seedlings were evaluated in the first experiment, as a function of the grafting methods Contact bevel, Cleft grafting, Supported grafting, graft ungrafted in five harvests at 0, 3, 6, 9 and 12 days after grafting (DAG). In the second experiment, the incidence of bacterial wilt, leaf gas exchange, as well as the activity of enzymes SOD, CAT, POD, PAL, PPO and phenol content were evaluated, at 0, 2, 4, 6, 8 and 15 days after inoculation with R. Solanacearum, in grafted tomato plants growing at greenhouse. In the third experiment, three grafting methods (Contact bevel, Cleft grafting and Supported grafting) and ungrafted tomato were evaluated considering the production under protected environment. The Cleft grafting method was the best for the site... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador : Prof. Dr. Silvio Marques Zanata / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 29/08/2016 / Inclui referências : f. 81-84 / Área de concentração: Patologia / Resumo: USP2a é uma importante enzima deubiquitinase (DUB) capaz de remover a ubiquitina de diferentes substratos, como da enzima FASN e do receptor de fator de crescimento epidermal (EGFR). Em tumores de próstata observa-se uma correlação positiva entre a expressão de USP2a e a tumorigênese, caracterizando-a como uma proteína oncogênica. Essa característica da DUB está principalmente relacionada com sua função estabilizadora da enzima FASN, responsável pela síntese de ácidos graxos na célula. A USP2a também resgata o EGFR da degradação, mantendo seus níveis celulares elevados. Sabe-se que o direcionamento de proteínas da membrana plasmática para a via do corpo multivesicular requer a ação dos complexos proteicos ESCRTs. Um deles, o ESCRT-0, possui duas subunidades: Hrs, responsável por direcionar o complexo aos endossomos precoces, e a subunidade STAM, capaz de interagir com diferentes DUBs. Sabe-se que a USP2a co-localiza com EEA1, um marcador de endossomos precoces, então decidiu-se analisar se a USP2a interage também com STAM, e identificar o sítio dessa interação. Para isso, linhagens celulares normais e tumorais de próstata foram modificadas para expressar permanentemente a forma selvagem e o mutante cataliticamente inativo de USP2a, e também foram silenciadas para a expressão de STAM. As sequências de STAM, de sua região SH3 e do mutante STAM SH3 foram clonadas, com o intuito de se obter plasmídeos de superexpressão para esses construtos. A primeira evidência de interação entre USP2a e STAM foi observada em ensaio de co-imunoprecipitação com células tumorais de próstata superexpressando USP2a, mas esse resultado ainda não foi totalmente confirmado. A região de STAM que pode contribuir para essa interação não foi identificada devido a baixos níveis de expressão dos construtos. Uma relação indireta entre USP2a e STAM foi observada, com o aumento da ubiquitinação de STAM com a superexpressão da forma selvagem da enzima em células de próstata, sem alterar os níveis celulares da proteína. Observou-se também que STAM é capaz de modular a reciclagem de EGFR em linhagens celulares de próstata, uma vez que seu silenciamento aumenta a taxa de degradação de EGFR. Analisou-se também o efeito fenotípico da deleção do gene fasn em camundongos com tumores de próstata induzidos pela perda de Pten. Verificou-se que a inibição genética de FASN reduz a incidência de formas agressivas de tumores de próstata nos animais. Os resultados obtidos sugerem que FASN, assim como USP2a, pode ser um importante alvo farmacológico para o tratamento de tumores de próstata. Palavras-chave: USP2a. ESCRT-0. STAM. EGFR. FASN. / Abstract: USP2a is an important deubiquitinating enzyme (DUB) capable of removing ubiquitin from different substrate proteins, like FASN and epidermal growth factor receptor (EGFR). In prostate tumors there is a positive correlation between USP2a expression level and tumorigenesis, which makes it an oncogenic protein. This characteristic is mainly related with its ability to stabilize FASN, the enzyme that synthesizes fatty acids in cells. USP2a also rescues EGFR from lysosomal degradation, keeping its cellular levels raised. orting of plasma membrane proteins into multivesicular body pathway requires the ESCRTs complexes. One of these, the ESCRT-0, has two subunits: the subunit Hrs, that is responsible for targeting the complex to early endosome, and the subunit STAM, which interacts with different DUBs. -localizes with EEA1, a marker of early endosomes, so we decided to analyze if USP2a also interacts with STAM, whether this interaction is needed to taking USP2a to early endosome and identify the protein site required for this interaction. For this, normal and tumoral prostate cell lines were modified to permanently overexpress USP2a wild type and its catalytically inactive mutant, these cell lines also had the STAM expression knocked down. Molecular cloning of STAM, its SH3 region and a mutant lacking SH3, all tagged with GFP, were performed in order to obtain plasmids for overexpression of this constructs. The first sign of interaction between USP2a and STAM was observed with a co-immunoprecipitation assay in prostate tumoral cells overexpressing USP2a, but it was not fully confirmed. The region of STAM constructs. Indirect relationship between USP2a and STAM was observed, since overexpression of wild type USP2a is related with enhanced ubiquitination of STAM in prostate cell lines, even though the protein level remains the same. STAM is also capable of affect EGFR recycling in prostate cell lines, since STAM knocked down cells shown enhanced degradation of EGFR. It was also analyzed the effect of fasn gene deletion on Pten loss driven prostate tumors. The genetic ablation of FASN reduced the incidence of aggressive prostate tumors in mice, suggesting that FASN, as well as USP2a, could be an important pharmacological target for treatment of prostate cancer. Key words: USP2a. ESCRT-0. STAM. EGFR. FASN.

Orientador: Nadia Krieger / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Química / Inclui bibliografia / Resumo: As lipases fazem parte da classe de hidrolases, cuja classificação internacional é "glicerol éster hidrolases E.C. 3.1.1.3 ". De origem bacteriana, fúngica ou de mamíferos e propriedades diversas, estas enzimas podem catalisar a hidrólise e a síntese de um grande número de compostos em diferentes meios e condições reacionais. O objetivo deste trabalho foi estudar a biocatálise em sistemas bifásicos micro-heterogêneos e macro-heterogêneos, utilizando o extrato lipolítico de Penicillium corylophilum (IOC 4211). Para tanto, foram estudadas a reação de hidrólise de ésteres em meio aquoso e em micelas reversas AOT/n-heptano, bem como, a síntese do oleato de n-butila no sistema micro-heterogêneos (micelas reversas) e em sistemas macro-heterogêneos (bifásicos). Foi estudada a eficiência de várias preparações enzimáticas nos sistemas, usando n-heptano como meio reacional, a saber: 1) adição direta da enzima liofilizada; 2) adição direta da enzima co-liofilizada com (3-ciclodextrina e 3) adição da enzima imobilizada em gel hidrofóbico. Inicialmente, investigou-se a produção da enzima e as propriedades do extrato lipolítico, como o efeito do pH e da temperatura na atividade enzimática, e a estabilidade da enzima à temperatura e em presença de solventes orgânicos. Verificou-se que a produção máxima da enzima foi de 6,8 U.mL"1, após 144 h, a 29°C e agitação orbital de 120 rpm, em um meio composto por sais minerais, glucose e 2 % (v/v) de óleo de oliva. O extrato lipolítico apresentou maior atividade na faixa de pH entre 6,0 e 8,0, e na faixa de temperatura entre 45 e 60 °C. As lipases contidas no extrato bruto não são termoestáveis, mas apresentam estabilidade quando incubadas em presença de solventes orgânicos apoiares, de fato, quando o extrato lipolítico foi incubado em n-heptano, a enzima mostrou ativação de 14 e 30 % com atividade de água (aw) inicial no sistema de 0,53 e 0,95, respectivamente. As maiores atividades enzimáticas do extrato bruto de P. corylophilum foram encontradas para o pNPP em meio aquoso e para a trioleína em meio micelar. No meio aquoso foi observada ainda uma ativação da enzima de aproximadamente 7 vezes após a coliofilização com (3-ciclodextrina, e 2 vezes após a imobilização no gel hidrofóbico. Nas reações de esterificação, a reação modelo utilizada foi a síntese do oleato de n-butila. A síntese foi acompanhada por CCD e por CLAE, e os rendimentos foram determinados pelo método de Lowry-Tinsley. O melhor sistema para a síntese do oleato de n-butila foi de micelas reversas com Wo (teor de água) de 10 e 100 % de rendimento (12 h), seguido do sistema onde se adicionou a enzima liofilizada, com 100 % de rendimento (48 h) obtido com a"- inicial no meio reacional de 0,11. Para o sistema onde a enzima foi co-liofilizada com (3-ciclodextrina, o rendimento foi de 63 % (48 h), em aw inicial de 0,11. O sistema menos eficiente foi o que utilizou a enzima imobilizada em gel hidrofóbico, com 14 % (48 h) e aw inicial de 0,11. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que o extrato lipolítico de P. corylophilum, um fiingo isolado localmente, pode ser utilizado em reações de síntese em meios aquo-restritos, e sugerem a importância da continuidade dos estudos no sentido de purificação e caracterização bioquímica das lipases produzidas por P. corylophilum, e uma investigação em profundidade do potencial de uso das enzimas purificadas para a produção de compostos de química fina. Palavras-chave: Lipases, Penicilium corylophilum, biocatálise, sistemas aquo-restritos, micelas reversas. / Abstract: Lipases belong to the class of hydrolases, and are classified as "glycerol ester hydrolases E C 3.1.1.3". This group includes bacterial, fungal and mammalian enzymes with diverse characteristics, united by their ability to catalyze the hydrolysis and the synthesis of a large number of compounds in different reaction media and under different conditions. The objective of this work was to study biocatalysis in macroheterogeneous and micro-heterogeneous biphasic systems, utilizing the lipolytic extract from Penicillium curylophilum (IOC 4211). The following aspects were studied: the hydrolysis of esters in aqueous solution and in AOT/n-heptano reversed micelles, and the synthesis of butyl oleate ester in a micro-heterogeneous system (reversed micelles), and in macro-heterogeneous systems (biphasic) systems. The performance of various enzyme preparations in these systems, using n-heptane as the reaction media, was studied: 1) direct addition of the lyophilized enzyme; 2) direct addition of the enzyme co-lyophilized with P-cyclodextrin and 3) addition of the enzyme immobilized on a hydrophobic support. The initial studies were undertaken to characterize the production of the enzyme and the properties of the lipolytic extract, such as the effect of pH and temperature on enzyme activity and the stability of the enzyme at elevated temperatures and in the presence of organic solvents. The maximum enzyme concentration obtained in the production studies was 6.80 U.mL"1, after 144 h of incubation on a rotary shaker at 29 °C and 120 rpm, in a medium containing mineral salts, glucose e 2 % (v/v) olive oil. The lipolytic extract showed greatest activity in the pH range 6.0-8.0 and in the temperature range 45 - 60 °C. The lipases within the crude extract are not thermostable, but do show stability when incubated in the presence of organic apolar solvents: in fact, when the extract was incubated in n-heptane, the enzyme was activated by 14 to 30 % for an initial water activity of the system (aw) of 0,53 and 0,95, respectively. The highest activities measured for the crude lipolytic extract were for the hydrolysis of pNPP in aqueous solution and for the hydrolysis of triolein in the reversed micelle system. In aqueous solution the enzyme was activated approximately seven-fold after colyophilization with p-cyclodextrin, and approximately 2-fold after immobilization in hydrophobic gel. In the esterification reactions the model reaction used was the synthesis of butyl oleate ester, with the reaction being followed by TLC and HPLC, and the yields being determined by the Lowry-Tinsley method. The best system for the synthesis of butyl oleate ester was the reversed micellar system with a Wo (water content) of 10, which gave a yield of 100 % (12 h), followed by the system in which the enzyme lyophilized was added to the medium, with a yield of 100 % (48 h), obtained at an initial aw of 0.11 in the reaction medium. For the system in which the enzyme was co-lyophilized with P-cyclodextrin, the yield was 63 % (48 h), also obtained at an initial a", of 0.11. The least efficient system was the enzyme immobilized on hydrophobic gel, with a 14 % (48 h) yield, obtained at the same initial aw of 0.11. The results obtained in this study show that the lipolytic extract of P. corylophihim, a locally-isolated fungus, can be used in synthesis reactions in low-water systems, and suggest that the studies should now proceed to the purification of lipases from the crude extract, the biochemical characterization of these lipases and an in-depth investigation of the potential for the use of purified enzymes in biocatalysis, for the production of fine chemicals. Palavras-chave: Lipases, Pemcilium corylophihim, biocatalysis, low-water systems, reversed micelles.

Orientador : Prof. Dr. Leandro Piovan / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Química. Defesa: Curitiba, 13/03/2015 / Inclui referências : f. 65-75 / Resumo: As técnicas convencionais de obtenção de enzimas baseiam-se no isolamento e cultivo de microrganismos. No entanto, estima-se que somente 1% deles sejam cultiváveis em laboratório, o que limita o espectro de enzimas potencialmente acessíveis. Um método alternativo e eficiente para obter catalisadores de interesse biotecnológico é a prospecção metagenômica, que consiste na extração de material genético de uma amostra do meio ambiente, com posterior clonagem em um microrganismo cultivável em laboratório, resultando em uma coleção de clones denominada biblioteca metagenômica, a qual é sequenciada e analisada por técnicas específicas. Embora várias enzimas já tenham sido isoladas de bibliotecas metagenômicas construídas a partir de diferentes ambientes, pouco é descrito a respeito da aplicabilidade delas em síntese orgânica. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo a avaliação do desempenho de uma lipase obtida a partir de uma biblioteca metagenômica, a LipG9, em reações de resolução cinética enzimática (RCE) de uma série de álcoois alifáticos quirais. A série de álcoois sintetizada foi planejada de forma que o desempenho desta lipase inédita fosse investigado frente a reações de transesterificação de álcoois alifáticos com diferentes tamanhos de cadeias carbônicas ligadas ao centro estereogênico. Também avaliou-se a influência de parâmetros reacionais, tais como temperatura e solvente orgânico e a tentativa de RCE via reação de hidrólise dos ésteres correspondentes. Os álcoois de configuração absoluta S foram obtidos com excessos enantioméricos de 26% a 81% e, após otimização das condições reacionais, foi possível obter o álcool (S)-pentan-2-ol com elevada pureza óptica (ee = 96%) e taxa de conversão de 58%, apesar de ainda ser necessária a otimização do tempo de reação para obtenção deste composto com rendimento elevado. Este foi o primeiro estudo descrevendo a RCE de álcoois alifáticos mediada pela enzima LipG9, sendo que esta lipase se mostrou promissora, uma vez que apresentou, para o tipo de reação explorada, atividade e seletividade comparáveis a enzimas disponíveis comercialmente. Também é importante ressaltar que a lipase LipG9 não possui qualquer modificação genética dirigida e ainda precisa passar por estudos adicionais de imobilização, com objetivo de aumentar a estabilidade e atividade enzimática e alcançar reprodutibilidade para este processo. Palavras-chave: lipase, metagenômica, álcoois alifáticos, resolução cinética. / Abstract: Conventional techniques for obtaining microbial enzymes are based on the isolation and cultivation of microorganisms. However, it is estimated that only 1% of them can be cultivated in the laboratory, which limits the range of potentially available enzymes. An alternative and efficient method to obtaining new catalysts of biotechnological interest is the metagenomic prospection, which consists in extracting genetic material from environmental sample, with subsequent cloning into a host, resulting in a collection of clones called metagenomic library, which is sequenced and analyzed by specific techniques. Several enzymes have been isolated from metagenomic libraries constructed from different environments, however few reports are described about their applicability in organic synthesis. In this context, this work presents an evaluation of a lipase obtained from a metagenomic library, LipG9, in enzymatic kinetic resolution (EKR) of chiral aliphatic sec-alcohols. The series of synthesized alcohols was designed so that the performance of LipG9 was investigated in transesterification reactions of alcohols with different sizes of carbon chain bonded to the stereogenic center. It was evaluated the influence of reaction parameters, such as temperature and organic solvent, and hydrolysis reactions of the corresponding esters. The S alcohols were obtained with 26% and 81% of enantiomeric excesses and, after the optimization of reaction conditions, the (S)-pentan-2-ol was obtained in high optical purity (ee = 96%) and conversion rate of 58%, although it is necessary the optimization of reaction time to obtain this compound with higher yield. This research was the first study describing the EKR of aliphatic alcohols mediated by LipG9, and this lipase has shown promising biocatalyst since it showed activity and selectivity comparable to commercially available enzymes for the explored reactions. It is worth mentioning that LipG9 lipase has no direct genetic modification and additional studies of immobilization are needed, in order to increase the enzyme stability and activity and achieve reproducibility for this process. Key-words: lipase, metagenomics, aliphatic alcohols, kinetic resolution.

Orientador : Prof. Dr. Agnes de Paula Scheer / Coorientador : Profª. Drª. Michele Rigon Spier / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos. Defesa : Curitiba, 13/09/2016 / Inclui referências : f. 97-107 / Resumo: Amilases são utilizadas como agentes de anti-endurecimento de produtos panificáveis, proporcionando maior maciez durante a vida útil, o que é especialmente interessante para pães industrializados, tais como o pão de forma. Vários tipos de equipamentos têm sido utilizados para prever o comportamento da massa durante a panificação. A complexidade dos requisitos significa que nenhum dispositivo é capaz de prever todas as propriedades e, portanto, novos testes são lançados continuamente. O equipamento Mixolab® Chopin realiza a mistura da massa em diferentes temperaturas, permitindo o estudo das propriedades da massa, tais como enfraquecimento, gelatinização, estabilidade do gel e retrogradação em um único teste. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito das enzimas comerciais ?-amilase fúngica e ?-amilase maltogênica na qualidade dos pães de forma durante o armazenamento (1º, 4º, 7º, 10º e 14º dias após a produção) e usando testes reológicos prévios com a inovadora ferramenta Mixolab®. O delineamento composto central rotacional (DCCR) 2², foi utilizado para avaliar a influência das enzimas comerciais ?- amilase fúngica (0 a 40 ppm) e ?-amilase maltogênica (0 a 120 ppm) nos pães e parâmetros reológicos, aplicando a metodologia de superfície de resposta. Superfícies de resposta e modelos matemáticos foram obtidos analisando as respostas: parâmetro C5 (Nm) do Mixolab, que corresponde a retrogradação, volume específco (cm³/g) e firmeza (N) dos pães. Os resultados mostraram efeito positivo na adição das enzimas ?-amilase fúngica e ?-amilase maltogênica (p<0,05) na redução do parâmetro C5 (Nm), aumento no volume específico (cm³/g) e diminuição da firmeza no 14º dia após a produção, utilizando o blend 40 ppm da ?-amilase fúngica + 60 ppm da ?-amilase maltogência. Palavras-chave: Pão de forma, amilases fúngica e maltogênica comerciais, firmeza de pães, reologia Mixolab®, produção de pães. / Abstract: Amylases are used as anti-staling agents in bakery products, providing increased softness during the shelf life, which is especially interesting for industrialized breads, such as pan bread. Several types of equipment have been used to predict dough behavior during breadmaking. The complexity of requirements means that no device is able to predict all the properties, and therefore, new tests are launched continuously. The equipment Chopin Mixolab® mixes the dough at different temperatures, allowing the study of dough mixing properties such as weakening, gelatinization, gel stability and retrogradation in one test. The objective of this study was to evaluate the effect of the commercial enzymes fungal amylase and maltogenic amylase on the quality of pan bread during storage (1st, 4th, 7th, 10th and 14th days after the production), and using the previous rheological analysis with the innovative tool Mixolab®. A 2² central composite rotational design (CCRD) was used to evaluate the influence of the commercial fungal (0 to 40 ppm) and maltogenic (0 to 120 ppm) enzymes on bread and rheological parameters, applying the response surface methodology. Surface responses and mathematical models were obtained analyzing the responses: the parameter C5 (Nm), that correspond to retrogradation, from Mixolab®, specific volume (cm³/g), and bread firmness (N). The results showed the positive effect of the addition of fungal ?-amylase and maltogenic ?-amylase (p<0.05) on reduction of C5 (Nm) parameter, increase of bread volume (cm³/g) on 14th day after the production, using the blend 40 ppm of fungal ?-amylase + 60 ppm maltogenic ?-amylase. Key-words: Pan bread, commercial fungal and maltogenic amylases, bread firmness, Mixolab® rheology, bread making

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-18Bitstream added on 2014-06-13T20:26:09Z : No. of bitstreams: 1 silva_rb_dr_botfmvz.pdf: 496820 bytes, checksum: 055e35414ee23830cc537670a4ae215b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Durante o desenvolvimento ovariano fetal, a formação folicular inicial é decisiva para a fertilidade da fêmea, pois define sua reserva gametogênica. Tem sido proposto que a progesterona e o estradiol desempenham papel regulatório na foliculogênese pré-antral, de forma que sua produção reduzida em ovários fetais bovinos antecede o surgimento de folículos primordiais e primários. Recentemente, os FGFs 10 e 18 foram reportados em folículos ovarianos bovinos como redutores dos níveis de esteróides, o que parece envolver a inibição da expressão de enzimas necessárias à esteroidogênese. Em adição, a expressão do FGF10 foi observada durante o desenvolvimento ovariano fetal bovino, e esteve positivamente associada ao aumento no número de folículos primários. O presente estudo investigou primeiramente o padrão de expressão do RNAm das enzimas esteroidogênicas (StAR, CYP11A1, 3β-HSD, CYP17A1, CYP19A1 e 17β-HSD) em ovários de fetos bovinos em idades gestacionais específicas (60, 75, 90, 120, 150 e 210 dias). Todos os genes investigados se mostraram expressos e regulados ao longo da gestação. Os níveis de RNAm da CYP19A1 diminuíram dos 60 para os 90 dias, sugerindo envolvimento desta enzima com a produção decrescente de estradiol observada previamente durante este período gestacional. A expressão das demais enzimas foi elevada ao longo da gestação, coincidente com o aumento da competência esteroidogênica descrito preliminarmente durante o desenvolvimento folicular inicial. Em adição, foi investigada a participação dos FGFs 10 e 18 na esteroidogênese ovariana fetal bovina. A expressão do FGF18 e de seus receptores (FGFR2C, FGFR3C e FGFR4) foi detectada em ovários fetais bovinos ao longo da gestação (60, 75, 90, 120, 150 e 210 dias). A abundância de RNAm do FGF18 aumentou... / During fetal ovarian development, early follicular formation is essential to female fertility, when the gametogenic reserve is defined. It has been proposed that progesterone and estradiol play regulatory role on preantral folliculogenesis, once its reduced production in bovine fetal ovaries precedes primordial and primary follicle assembly. Recentlly, FGFs 10 and 18 were reported in bovine ovarian follicles as reducers of steroids levels, and this seems to involve the inhibition of enzymes necessary to steroidogenesis. In addition, FGF10 expression was observed during bovine fetal ovary development, and it was positively associated with the elevation on primary follicles number. The present study first investigated the mRNA expression patterns for steroidogenic enzymes (StAR, CYP11A1, HSD3B1, CYP17A1, CYP19A1 and HSD17B1) in bovine fetal ovaries at specific gestational ages (60, 75, 90, 120, 150 e 210 days). Expression of all investigated genes was detected and regulated through gestation. Messenger RNA levels of CYP19A1 decreased from days 60 to 90 of gestation, suggesting involvement of this enzyme on decrescent estradiol production previously observed during this gestational period. The expression of other enzymes was elevated during gestational period, which was coincident with the enhance of steroidogenic competence previously described during early follicular development. In addition, the participation of FGFs 10 and 18 on steroidogenesis in bovine fetal ovaries was investigated. The expression of FGF18 and its receptors (FGFR2C, FGFR3C and FGFR4) was detected in bovine fetal ovaries through gestation (60, 75, 90, 120, 150 e 210 days). The mRNA abundance of FGF18 enhanced between 90 and 120 days and decreased at 210 days. The expression of FGFR2C and FGFR4 did not vary during... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-19Bitstream added on 2015-04-09T12:47:49Z : No. of bitstreams: 1 000817170.pdf: 893124 bytes, checksum: ec79ee6704498c3749ce75120e54f120 (MD5) / A metagenômica é uma ferramenta poderosa na descoberta de novos genes microbianos com potencial biotecnológico, pois não são necessárias as técnicas tradicionais de cultivo. Para suprir as necessidades de enzimas no mercado esta técnica tem sido muito utilizada para a descoberta de novos genes codificadores de lipases e esterases microbianas muito utilizadas em processos biotecnológicos como produção de detergentes, biodiesel e biorremediação. Em trabalhos anteriores, foram prospectadas sequências codificadoras para enzimas lipolíticas em uma biblioteca metagenômica de DNA com 4224 clones, de um consórcio microbiano obtido de solo contaminado com hidrocarbonetos de petróleo, localizado na cidade de Ribeirão Preto – São Paulo - Brasil, obtendo-se 30 clones com possível atividade lipolítica em Tributirina. No presente trabalho, um dos clones foi selecionado após ensaio em placa de Petri com Tributirina para a construção de uma sub-biblioteca, com 480 subclones. O sequenciamento foi realizado em aparelho ABI Prism 3100 e o “contig” obtido analisado no ORF Finder do National Center for Biotechnology Information (NCBI, Bethesda, Maryland, USA). Foi possível identificar um gene de 1032 pb, 344 aminoácidos , denominado ORF2, que codifica uma enzima lipolítica com identidade de 94 % com uma hidrolase de Pseudomonas denitrificans (YP_007656829.1). As sequências que representam as oito famílias de enzimas lipolíticas propostas por Arpying e Jaeger (1999) foram extraídas do banco de dados do NCBI e comparadas com a sequência da ORF2, possibilitando afirmar que esta enzima é um novo membro da família V de enzimas lipolíticas bacteriana. O gene codificador da ORF2 foi clonado em vetor de expressão pET28a e superexpressado em Escherichia coli BL21(D3). A fração solúvel da proteína foi analisada em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), em condição desnaturante. A atividade lipolítica das bandas da proteína ... / The metagenomics is a powerful tool in the discovery of new microbial genes with biotechnological potential, they are not necessary traditional cultivation techniques. With increasing demand for enzymes in the market this technique has been widely used for the discovery of new genes encoding microbial lipases and esterases widely used in biotechnological processes such as the production of detergents, biodiesel and bioremediation. In previous work, coding sequences for lipolytic enzymes were prospected in 4224 clones from a metagenomic DNA library from a microbial consortium obtained from soil contaminated with petroleum hydrocarbons, located in the city of Ribeirão Preto - São Paulo - Brazil, obtaining 30 clones with possible lipase activity on tributyrin. In this study, one clone was selected after testing in a Petri dish with Tributyrin to build a sub-library, with 480 subclones. Sequencing was performed on ABI PRISM 3100 instrument and analyzed “contig”s obtained in the ORF finder from the National Center for Biotechnology Information (NCBI, Bethesda, Maryland, USA). It was possible to identify a gene of 1032 bp, 344 amino acids, termed ORF2, encoding a lipolytic enzyme with 94% identity with a hydrolase from Pseudomonas denitrificans (YP_007656829.1). The sequences representing eight families of lipolytic enzymes and Arpying proposed by Jaeger (1999) were extracted from the NCBI database and compared with the sequence of ORF2, allowing affirm that this enzyme is a new member of the family V bacterial lipolytic enzymes . The encoder ORF2 gene was cloned into pET28a expression vector and overexpressed in Escherichia coli BL21 (D3). The soluble protein fraction was analyzed by polyacrylamide (SDS-PAGE) gel in denaturing condition. The lipolytic activity of the recombinant protein bands on the SDS-PAGE gel was confirmed by a zymogram indicating its functionality in a specific substrate. Three-dimensional modeling was also ...

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:38Z : No. of bitstreams: 1 000820066_20161127.pdf: 260582 bytes, checksum: 1214c1d5961a88abe2c27c0ce6a9c3b6 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-11-28T18:47:38Z: 000820066_20161127.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-11-28T18:48:22Z : No. of bitstreams: 1 000820066.pdf: 710399 bytes, checksum: 3b7031e74bc8974ce386cc7d807c7bc9 (MD5) / Atualmente, a biotecnologia é acompanhada dos estudos sobre o funcionamento, estrutura e utilização, principalmente na indústria, das enzimas obtidas a partir de microorganismos, o que têm despertado grandes interesses em pesquisadores da área. De modo especial, os fungos filamentosos vêm se destacando como grandes produtores de enzimas, principalmente o gênero Aspergillus, pertencente aos ascomicetos. Dentre as enzimas de interesse biotecnológico encontramos a tanino acil hidrolase (EC 3.1.1.20),, também conhecida como tanase, a qual pode ser produzida por fungos filamentosos, leveduras e bactérias. Desta forma, foi objetivo deste trabalho o estudo da produção de tanases pelo fungo filamentoso Aspergillus carbonarius padronizando-se as melhores condições físico-químicas para o crescimento do micro-organismo, visando a obtenção de tanases em níveis elevados assim purificando e caracterizando-as bioquimicamente. Os maiores níveis enzimáticos em FSS foram obtidos utilizando folhas de chá verde trituradas como fonte de carbono umedecidas com água de torneira (1:1 m/v) a 30°C por 3 dias.A tanase foi purificada 11,3 vezes com recuperação de 98%, após dois passos cromatográficos, DEAE-Celulose e Sepharose CL-6B. A enzima possui massa molar de 134,89 kDa com 50% de carboidratos. A temperatura ótima de atividade foi de 60°C e o pH ótimo foi 5,0. A tanase se mostrou bastante estável entre as temperaturas de 40°C a 65°C e em pH ácido. A atividade enzimática foi aumentada em 32% na presença de Ag+, e foi inibida por Mg+ , Fe2+, Zn2+, Al3+ e Cu2+ . Os parâmetros cinéticos foram analisados, sendo que a enzima apresentou maior afinidade pelo substrato metil galato (Km de 1,42mM) se comparado acido tânico (Km de 2,2mM). Portanto conclui-se que a tanase produzida por Aspergillus carbonarius possui um bom potencial biotecnológico e é promissora para o emprego industrial. / Nowadays, biotechnology is accompanied by functional, structural and application studies, mainly in industry, of microbial enzymes, which have aroused great interest in researchers around the world. Specially filamentous fungi have been highlighted as the major enzymes producers, mostly Aspergillus genera, an ascomycete. Among the enzymes of biotechnological interest we can found the tannin acyl hydrolase (EC 3.1.1.20), also known as tannase that can be produced by filamentous fungi, yeasts and bacterias. Acoording to the this objective of this work was to study the production of tannase by Aspergillus carbonarius standardizing the best physico-chemical conditions for the microorganism growth, in order to obtain high levels of tannase, purifying and characterizing them biochemically. The higher enzymes levels in SSF were obtained when it was used green tea leaves as carbon source moistured with tap water (1: 1 w / v) at 30° C for 3 days. Tannase was purified 11,3 fold with 98% of recover after two chromatographic steps: DEAE-celulose and Sepharose CL-6B. The enzyme has a molecular weight of 134,89 kDa with 50% of carbohydrates. The optimal temperature of activity was 60ºC and the optimal pH was 5.0. Tannase showed quite stability to temperatures between 40ºC and 65ºC and under acid pH. The enzyme activity was strongly inhibited by Mg+, Fe2+, Zn2+, Al3+ e Cu2+. The kinetic parameters were analyzed and the enzyme showed higher affinity to the substrate methyl gallate (Km 1.42mM) in it compared to tannic acid (Km 2.2mM). Therefore it is concluded that the tannase produced by Aspergillus carbonarius has great biotechnological potential and it is promising for industrial use.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-31. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:27Z : No. of bitstreams: 1 000844568_20160515.pdf: 199146 bytes, checksum: 785ac7ae23e9a6daf857eda3559e3e2a (MD5) Bitstreams deleted on 2016-05-16T14:18:37Z: 000844568_20160515.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-16T14:19:20Z : No. of bitstreams: 1 000844568.pdf: 3066451 bytes, checksum: 8b94c7990192bea97bc21ea9d22b2bee (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nanozeólitas têm sido exploradas como suporte para a imobilização de enzimas e proteínas devido as suas propriedades físico-químicas, tais como a grande área de superfície externa, a alta dispersibilidade e a facilidade de modulação das suas características de superfície, especialmente, em relação à carga da superfície e propriedades de hidrofilicidade/hidrofobicidade. O presente trabalho teve como objetivos principais as sínteses e caracterização das nanozeólitas (titanosilicalita (Nano-TS1), gismondina (Nano-GIS), A (Nano-LTA), beta (Nano-BEA) e faujasita (Nano-X)) e a modulação de suas propriedades físico-químicas por meio de experimentos de troca iônica com cátions de metais de transição (Mn2+, Cu2+, Co2+, Zn2+ e Ni2+) ou funcionalização de suas superfícies por agentes orgânicos como aminosilanos ou glutaraldeído. Na sequência, foi realizado o estudo desses suportes zeolíticos como matrizes sólidas para a imobilização de lipases e o estudo do potencial catalítico desses complexos nanozeólitas-enzimas na reação de transesterificação para a produção de biodiesel usando diferentes fontes de matérias primas, tais como o óleo de palma e o óleo de microalgas via rota etílica com o uso das lipases de Rhizomucor miehei (RML) e Thermomyces lanuginosus (TLL), os resultados indicaram que as espécies de cátions divalentes e a concentração molar da troca iônica dos suportes nanozeolíticos influenciaram na interação da enzima com a matriz de imobilização e, consequentemente, a atividade enzimática. Em termos catalíticos, os resultados mais relevantes foram obtidos para a enzima TLL, imobilizada no suporte Nano-X e trocada com 0,5 mol.L-1 de sulfato de níquel (Nano-X/Ni/0.5M-TLL). Os rendimentos de ésteres etílicos de ácidos graxos (FAEE) foram acima de 94%, ao passo que, para a mesma quantidade de enzima na sua forma livre, o teor obtido foi de apenas... / Nanozeolites have been used as solid supports for enzymes and proteins immobilization, mainly due to their physicochemical properties such as large external surface area, high dispersibility and easy adjustment of their tunable surface properties, especially regarding the surface charge and hydrophilicity/hydrophobicity properties. The main goals of this research work were the syntheses and physicochemical characterization using specific spectroscopic techniques of the nanozeolites (titanosilicalite (Nano-TS1), gismondine (Nano-GIS), (Nano-LTA), beta (Nano-BEA), and faujasite (Nano-X) and also the modulation of their surface physicochemical properties by ion exchange experiments with transition metal cations (Mn2+, Cu2+, Co2+, Zn2+ e Ni2+) and/or by functionalization of their surfaces with organic agents such as aminosilanes and glutaraldehyde. The zeolitic materials were used as a solid supports for the immobilization of fungal Rhizomucor miehei (RML) and Thermomyces lanuginosus (TLL) lipases and the catalytic potential of these nanozeolite-enzyme complexes were explored in the transesterification reactions of oil palm oil and microalgae aiming the biodiesel production for biodiesel production using ethanol as solvent. The results have indicated the nature and concentration of the divalent cations solutions have played a significant role and strongly affected the amount and the enzymatic activity of the immobilized enzymes. The best catalytic performance were obtained with the TLL enzyme immobilized on Nano-X supports ion exchanged with nickel sulfate 0.5 mol.L-1 (Nano-X/Ni/0.5M-TLL). The FAEE yields obtained with Nano-X/Ni/0.5M/TLL complexes were above 94% and a strong synergetic effect was detected for this system, since the equivalent amount of the TLL enzyme in its free form has yielded only 9.1% of ethyl esters. Physicochemical characterization of the zeolite-enzyme complexes by transmission ... / FAPESP: 2011/10092-4