O Penicillium echinulatwn linhagem 9A02Sl é um fungo filamentoso que apresenta um sistema celulolítico com potencial para aplicaqão em processos de degradação de materiais lignocelulósicos para produção de etanol. O crescente interesse nesse combustível e a abundância de materiais lignocelulósicos que podem ser usados como matéria-prima fez aumentar o interesse no estudo de celulases. Neste estudo, a linhagem 9A02Sl de Penicillium echinulatum foi cultivada em cultivos submersos em frascos mantidos sob agitação recíproca, com variações quanto às fontes de carbono. Além de crescimento, foram avaliadas as produções de celulases, ~-glicosidases e xilanases e a expressão das enzimas através ale zimogramas em géis de poliacrilamida para detemlinação da massa molecular. Observou-se que o crescimento micelial provocou a redução do pH do meio de cultivo, e que não está relacionado a produção de enzimas. A celulose apresentou-se como indutora para todas as enzimas analisadas. A carboximetilcelulose mostrou-se uma eficiente fonte de carbono para a produção de atividade sobre papel filtro, endoglicanases e xilanases, apesar do baixo crescimento micelial. Celobiose, glicerol e glicose estimularam a produção de ~glicosidases. Uma banda de atividade endoglicanêlsica de 74 kDa foi detectada nos zimogramas de todos os caldos enzimáticas obtidos na presença d1e diferentes fontes de carbono, sugerindo esta seja uma enzima constitutiva. A expressão da ~-glicosidase oconeu ao fmal do cultivo (5° e 6° dias), sendo que em todos os cultivos avaliados houve a expressão de uma banda de 220 kDa, indicando tratar-se de uma enzima constitutiva. A expressão de outras bandas com diferentes massas moleculares sugerem que diferentes genes, fotmats multiméricas ou modificações pós-traducionais estão envolvidos no perfil destas enzimas em Peni'cillium echinulatum. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-09-22T17:54:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Denise Zampieri.pdf: 18671785 bytes, checksum: 0c85c4e913bd6377f21bfe2a1fe9e8ff (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-22T17:54:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Denise Zampieri.pdf: 18671785 bytes, checksum: 0c85c4e913bd6377f21bfe2a1fe9e8ff (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq / The st:rain of Penicillium echinulatum 9A02Sl is a filamentous fungus that presents a cellulolytic system with potential application in processes of degradation of lignocellulosic materiais for ethanol production. The growing interest in fhel and the abundance of lignocellulosic materiais that can be used as raw material has inc:reased the interest in cellulases. In this study, the strain P echinulatum 9A02Sl was grown in submerged cultivation in agitated flasks in presence of different carbon sources. In addition to growth, it was evaluated the production of cellula.ses, Pglucosidases and xylanases, and enzyme expres:sion in activity polyacrylamide gels in order to detemlinate the molecular ma.ss. The mycelial growth decreased pH o f the medium and this fact was not related to enzyme production. The cellulose was an inducer for all the enzymes ana.lyzed. The carboximetilcellulose was found to be an effi[cient carbon source for production o f filter paper a.ctivity, endogluca.nases and xylanases, despite the low mycelial growth. Cellobiose, glycerol and glucose stimulated the production of P-glucosidases. An endoglucanase band of 74 kDa was detected in zymograms o f all enzyme broths obtained in the presence o f different carbon sources, suggesting it is a constitutive enzyme. The expression of P-glucosidase occuned at the end of cultivation (5 and 6 days), and in all medium that was evaluated was observed a 250 kDa band, indica.ting that this is a. constitutive enzyme. The expression of other bands with different molecular mass suggest that different genes, multimeric fonns or post-translational modifications are involved in the expression ofthese enzymes in P echinulatum.

Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-06-28T19:23:07Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Analia Borges Folle.pdf: 186844 bytes, checksum: 69bcf521f0587de7f849e1ff68ab8974 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Analia Borges Folle.pdf: 186844 bytes, checksum: 69bcf521f0587de7f849e1ff68ab8974 (MD5) Previous issue date: 2017-06-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES.

Ácidos maltobiônico e lactobiônico são formados pela oxidação de maltose ou lactose, ao passo que, em base equimolar, sorbitol é formado pela redução de frutose, por meio da ação catalítica do complexo enzimático glicose-frutose oxidorredutase (GFOR) e glicono-δ-lactonase (GL), enzimas periplasmáticas de Zymomonas mobilis, os quais têm importantes aplicações na indústria farmacêutica e de cosméticos. Este trabalho objetivou avaliar a síntese biocatalítica de sorbitol e dos ácidos maltobiônico e lactobiônico pelo complexo enzimático GFOR/GL utilizando células/enzimas de Z. mobilis permeabilizadas livres ou imobilizadas em alginato de cálcio e empregando, além de maltose e lactose, matérias-primas complexas como xarope de maltose (42% maltose) e soro do leite (79% de lactose). Em ensaios enzimáticos utilizando maltose e frutose, 0,19 e 0,22mol/L foram obtidos, respectivamente, como constantes de Michaelis-Menten e Vmáx de 25 unidades de GFOR/GL por grama de células secas (U/g), onde U corresponde a mmol de produto formado por hora. As constantes cinéticas foram também definidas para xarope de maltose e frutose, com a obtenção de KM de 0,03 e 0,39 mol/L, respectivamente, e Vmáx de 56 U/g, indicando o efeito da maior afinidade relativa à presença de glicose no xarope. Em bioconversões de maltose e xarope de maltose com células permeabilizadas livres, foram atingidas concentrações dos ácidos orgânicos de 550 e 600 mmol/L, com rendimentos médios de 80 e 90%, respectivamente. Utilizando-se lactose ou soro do leite liofilizado, nas mesmas condições de processo, foram atingidas concentrações finais de ácidos orgânicos de 490 e 430 mmol/L, nessa ordem, com rendimentos aproximados de 76 e 66%. Foram conduzidas, também, bioconversões com células imobilizadas, a partir de maltose e xarope de maltose, resultando 570 e 580 mmol/L em concentração de produto e rendimentos aproximados de 90%. Empregando-se lactose e soro do leite, nas mesmas condições operacionais, obteve-se 490 e 430mmol/L de ácidos orgânicos com conversões de 76 e 65%, respectivamente. Frente aos resultados obtidos com maltose, avaliou-se o efeito do pH (entre 6,0 e 7,2) e da temperatura (de 36 a 47°C), com o sistema GFOR/GL imobilizado em alginato de cálcio. Condições mais favoráveis em termos de formação de produto foram pH 6,4 e 39°C. O controle do pH da bioconversão, por meio da adição de NaOH, resultou na formação dos sais de sódio, maltobionato ou lactobionato, de acordo com o substrato empregado. Esses sais foram precipitados com o uso de etanol, procedimento que demonstrou-se eficiente, favorecendo a recuperação/purificação dos produtos finais. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-09-18T12:32:55Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Diogenes Lunardi Garin.pdf: 2633403 bytes, checksum: 14c2837fea00c40d79c5669b9dc71a4a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-18T12:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Diogenes Lunardi Garin.pdf: 2633403 bytes, checksum: 14c2837fea00c40d79c5669b9dc71a4a (MD5) Previous issue date: 2017-09-18 / Maltobionic and lactobionic acid are formed through the oxidation of maltose and lactose, whereas sorbitol is formed in equimolar amount through the reduction of fructose, by means of the catalytic action of the glucose-fructose oxidoreductase (GFOR) and glucono-δ-lactonase (GL) enzymatic complex, periplasmic enzymes from Zymomonas mobilis, which have important applications in the pharmaceutic and cosmetic industries. This work aimed to evaluate the biocatalytic synthesis of sorbitol and maltobionic and lactobionic acids by the enzymatic complex GFOR/GL using permeabilized cells/enzymes of Z. mobilis, free or immobilized in calcium alginate, and employing, besides maltose and lactose, complex raw materials such as maltose syrup (42% maltose) and whey (79% lactose). In enzymatic assays using maltose and fructose, 0.19 and 0.22 mol/L were obtained, respectively, as Michaelis-Menten constants, and a Vmax of 25 units of GFOR/GL per dry cell gram (U/g) was obtained, where U corresponds to mol of product formed per hour. Kinetic constants for maltose and fructose syrups were also defined, with the attainment of KM of 0.03 and 0.39 mol/L, respectively, and Vmax of 56 U/g, indicating the effect of higher affinity related to the presence of glucose syrup. In bioconversions of maltose and glucose syrup with free permeabilized cells, concentrations of organic acids of 550 and 600 mmol/L were achieved, with mean yields of 80 and 90 %, respectively. Using lactose or lyophilized whey, under the same process conditions, final concentrations of organic acids of 490 and 430 mmol/L were achieved, in this sequence, with aproximate yields of 76 and 66%. Bioconversions with immobilized cells were also performed from maltose and maltose syrup, resulting in 570 and 580 mmol/L of products and a yield of approximately 90%. Employing lactose and whey, under the same operational conditions, 490 and 430 mmol/L of organic acids were obtained with conversions of 76 and 65%, respectively. In face of the results obtained with maltose, the effect of pH (between 6.0 and 7.2) and temperature (from 36 to 47°C) were evaluated, with the GFOR/GL system immobilized in calcium alginate. The most favorable conditions in terms of product formation were pH 6.4 and 39°C. The pH control of the bioconversion, through NaOH addition, resulted in the formation of maltobionic and lactobionic sodic salts, in accordance with the substrate employed. These salts were precipitated with ethanol, procedure that was demonstrated to be efficient, promoting the recuperation/purification of final products.

Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-12-21T17:27:11Z No. of bitstreams: 1 Tese Jucimar Zacaria.pdf: 61122 bytes, checksum: 4603918c3fbf4006c7f568c9be645324 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-21T17:27:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Jucimar Zacaria.pdf: 61122 bytes, checksum: 4603918c3fbf4006c7f568c9be645324 (MD5) Previous issue date: 2017-12-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES.

Submitted by cmquadros@ucs.br (cmquadros@ucs.br) on 2018-02-02T10:31:31Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Simone Zaccaria.pdf: 993465 bytes, checksum: 0a1335797da601a4322d237b9b0aee3a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-02T10:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Simone Zaccaria.pdf: 993465 bytes, checksum: 0a1335797da601a4322d237b9b0aee3a (MD5) Previous issue date: 2018-02-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES

Submitted by GIOVANNA ALENCAR LUNDGREN null (giolundgren@gmail.com) on 2017-04-03T13:32:35Z No. of bitstreams: 1 GIOVANNA LUNDGREN - DISSERTAÇÃO.pdf: 3870598 bytes, checksum: 7581ab6f530188ee4e1822bbc2367d32 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-11T19:44:38Z (GMT) / Submitted by GIOVANNA ALENCAR LUNDGREN null (giolundgren@gmail.com) on 2017-04-11T19:50:15Z No. of bitstreams: 1 GIOVANNA LUNDGREN - DISSERTAÇÃO.pdf: 3870598 bytes, checksum: 7581ab6f530188ee4e1822bbc2367d32 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-11T20:00:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lundgren_ga_me_bot.pdf: 3870598 bytes, checksum: 7581ab6f530188ee4e1822bbc2367d32 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T20:00:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lundgren_ga_me_bot.pdf: 3870598 bytes, checksum: 7581ab6f530188ee4e1822bbc2367d32 (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A atemoia é um fruto climatérico altamente perecível, e para sua comercialização é necessário que se faça uso de métodos de conservação pós colheita. O presente trabalho teve como objetivo a conservação da Atemoia com a utilização de 1-metilciclopropeno (1-MCP). Os frutos após a colheita foram selecionados e submetidos a diferentes concentrações de 1-MCP (200 µL.L-1, 300 µL.L-1 e 400 µL.L-1) e após o procedimento foram armazenados sob refrigeração em câmara fria a 15ºC±1 e 90±5% de UR. Foram avaliados pH, acidez titulável (AT), sólidos solúveis (SS), índice de maturação, perda de massa fresca, atividade respiratória, açúcares redutores, amido, coloração, ácido ascórbico, compostos fenólicos totais, capacidade antioxidante, atividade das enzimas polifenoloxidase (PFO), peroxidase (POD), poligalacturonase (PG) e pectinametilesterase (PME), análise visual e sensorial. As análises foram realizadas nos frutos em triplicata a cada 3 dias, durante 18 dias. O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado em esquema fatorial (4x7), com 3 repetições por tratamento. O uso de 1-metilciclopropeno na maior dose, de 400 µL.L-1 juntamente com o armazenamento refrigerado é recomendado para conservação e aumento da vida de prateleira. / The atemoya is a highly perishable climacteric fruit, and marketing is necessary to make use of post harvest conservation methods. This work aimed at the conservation of atemóia with the use of 1-methylcyclopropene (1-MCP). The fruits after harvest were selected and subjected to different concentrations of 1-MCP (200 ppm, 300 ppm and 400 ppm) and after the procedure were stored under refrigeration in cold storage at 15 ° C ± 1 and 90 ± 5% RH. pH were evaluated, titratable acidity (TA), soluble solids (SS), maturation index, loss of weight, respiratory activity, reducing sugars, starch, coloring, ascorbic acid, total phenolic compounds, antioxidant capacity determined by DPPH, activity enzyme polyphenol oxidase (PPO), peroxidase (POD), polygalacturonase (PG) and pectin methyl esterase (PME), visual and sensory analysis. The analyzes were performed in triplicate in fruits every 3 days for 18 days. The design was completely randomized with three replicates per treatment. The use of 1-methylcyclopropene at all doses along with the refrigerated refrigerator is recommended for shelf life and shelf life.

Submitted by MEIRIELE MAZZO null (meiriele.mazzo01@etec.sp.gov.br) on 2017-04-20T22:08:30Z No. of bitstreams: 1 mazzo_m_me_dra.pdf: 1614379 bytes, checksum: 8636b12167680e3d5e0c7f98f5feadd0 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-25T18:29:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mazzo_m_me_ilha.pdf: 1614379 bytes, checksum: 8636b12167680e3d5e0c7f98f5feadd0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T18:29:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mazzo_m_me_ilha.pdf: 1614379 bytes, checksum: 8636b12167680e3d5e0c7f98f5feadd0 (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Fipronil é um inseticida de amplo-espectro de ação, utilizado para o controle de pragas nas lavouras e de ectoparasitas na medicina veterinária. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos tóxicos do fipronil sobre a fertilidade de ratos machos por meio da avaliação da produção de espermatozoides e de danos oxidativos causados no homogenato de testículos, além de avaliar a ação protetora da vitamina E. Ratos Wistar machos pesando aproximadamente 200 g foram divididos em três grupos (n = 6): controle: DMSO (60%) mais salina (40%) por via intraperitoneal (i.p.); fipronil 5: fipronil dissolvido em DMSO (60%) mais salina (40%) (5 mg/kg de peso corporal i.p.); fipronil 5 + vitamina E: fipronil dissolvido em DMSO (60%) mais salina (40%) (5 mg/kg de peso corporal i.p.) e vitamina E (100 mg/kg de peso vivo via oral).Durante 14 dias os animais foram pesados e cada grupo recebeu seu respectivo tratamento conforme citado, sendo que no 15º dia os animais foram eutanasiados e os testículos e epidídimos foram isolados para realização das seguintes análises: concentração de espermatozoides nos epidídimos, atividade das enzimas glutationa peroxidase (GPx) e catalase (CAT), determinação das concentrações de glutationa reduzida (GSH), grupos tióis de proteínas e malondialdeído (MDA) no homogenato dos testículos. Os dados foram analisados por ANOVA seguido pelo teste de Tukey. O fipronil reduziu significantemente a produção de espermatozoides (P < 0,01) e a vitamina E apresentou efeito protetor sobre esse parâmetro. A atividade da enzima GPx aumentou e a da CAT foi significantemente reduzida pelo fipronil (P < 0,001 e P < 0,05, respectivamente) e a vitamina E reestabeleceu as atividades das enzimas para níveis similares aos do grupo controle. Observou-se uma redução significante na concentração de GSH nos testículos dos ratos tratados com fipronil (P < 0,001) em relação ao grupo controle e a vitamina E apresentou uma proteção parcial deste efeito. Não houve alteração na concentração de grupos tióis de proteínas. Houve um aumento significante na concentração de MDA (P < 0,05), indicador de lipoperoxidação, nos animais tratados com fipronil e esse efeito foi diminuído pela vitamina E. Conclui-se que o fipronil afetou a produção de espermatozoides em ratos por apresentar atividade oxidante e que este efeito foi revertido pela vitamina E. / Fipronil is an insecticide with a broad-spectrum of action, used largely in both agricultural crops and veterinary medicine to control pests and ectoparasites. The objective of this study was to evaluate the toxic effects of fipronil on the fertility of male rats by evaluating sperm production and oxidative damage caused in the testis homogenate, as well as the protective action of vitamin E. Male Wistar rats weighing approximately 200 g were divided into three groups (n = 6): control: corn oil orally and DMSO (60%) plus saline (40%) intraperitoneally (i.p.); fipronil 5: fipronil dissolved in DMSO (60%) plus saline (40%) (5 mg/kg body weight i.p.); fipronil 5 + vitamin E: fipronil dissolved in DMSO (60%) plus saline (40%) (5 mg/kg body weight i.p.) and vitamin E dissolved in corn oil (100 mg/kg body weight orally). During 14 days the animals were weighed and each group received its respective treatment as mentioned, and on the 15th day the animals were euthanized and the testicles and epididymis were isolated for the following analysis: sperm concentration in the epididymis, activity of the glutathione peroxidase (GPx) and catalase (CAT) enzymes, concentrations of reduced glutathione (GSH), protein thiol groups and malondialdehyde (MDA) in the homogenate of testicles. Data were analyzed by ANOVA followed by the Tukey test. Fipronil significantly reduced sperm production (P < 0.01) and vitamin E had a protective effect on this parameter. The activity of the GPx enzyme increased and that of CAT was significantly reduced by fipronil (P < 0.001 and P < 0.05, respectively) but the vitamin E reestablished the enzyme activities to levels similar to those of the control group. A significant reduction in GSH concentration was observed in the testis of rats treated with fipronil (P < 0.001) compared to the control group and vitamin E showed partial protection against this effect. There was no change in the concentration of thiol groups of proteins. There was a significant increase in the concentration of MDA (P < 0.05), indicative of lipoperoxidation, in the animals treated with fipronil and this effect was reduced by vitamin E. It was concluded that fipronil declined the sperm production of the rats because its oxidant activity and that this effect was reversed by vitamin E.

Made available in DSpace on 2015-07-09T02:04:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000471802-Texto+Parcial-0.pdf: 3735530 bytes, checksum: 4d5d2bdf0acc100c891cf110e11d4904 (MD5) Previous issue date: 2015 / Biomolecular recognition processes are intrinsically related to protein flexibility. To understand how ligands interact with its partners, how proteins can cooperate with each other, or why aggregation process occurs, are particularly important, not only to biophysics, but also in the rational drug design process. X-ray crystallography, nuclear magnetic resonance, and molecular dynamics simulations are broadcasted approaches used to try to comprehend flexibility in biological macromolecules, although, this is not an easy task. This Ph. D. thesis will discuss the role of the flexibility using two different systems, (i) Mycobacterium tuberculosis EPSP synthase and (ii) Calmodulin from Mus musculus. Our main goal with this first system was to analyse in detail the structural information of the EPSP synthase, using molecular dynamics simulation. As a result, we have hypothesised how EPSP synthase flexibility could affect its activity, as well as its implications in the process of molecular docking experiments. Calmodulin project was developed during a ten month internship at the University of Cambridge. Our main goal was to study the influence of peptide mutated sequences in the process of molecular recognition, using nuclear magnetic resonance and isothermal titration calorimetry. As a product of this work, we have observed the impact of the linker domain to the peptide recognition, as well as, we have presented the importance of the entropy‐ enthalpy balance in the association with Calmodulin. / O reconhecimento biomolecular está diretamente ligado à capacidade de uma proteína a suportar mudanças conformacionais, ou seja sua plasticidade. Compreender como ocorre a associação de ligantes com seus receptores, como proteínas se interrelacionam, porque ocorrem os processos de agregação, são de extrema importância, não apenas para a área da biofísica, como também para o desenho racional de fármacos. Técnica como cristalografia por difração de raios X, ressonância magnética nuclear e dinâmica molecular, são algumas das principais abordagens para o estudo da flexibilidade em macromoléculas biológicas. No entanto, esta não é uma tarefa simples. Esta tese de doutorado versará sobre o papel da flexibilidade em dois sistemas distintos, (i) a enzima EPSP sintase de Mycobacterium tuberculosis e (ii) a proteína Calmodulina de Mus musculus.A Parte 1 trará como modelo de estudo a enzima EPSP sintase de Mycobacterium tuberculosis. O nosso objetivo com esta parte foi analisar em detalhes as informações estruturais desta enzima, por meio da técnica de dinâmica molecular. Como resultados, propomos como a flexibilidade pode atuar na modulação da atividade enzimática, a hipótese dos cinco mínimos locais de energia, bem como, suas implicações para o processo de docagem molecular a partir de uma estrutura. A Parte 2 foi desenvolvida durante o período de doutorado sanduíche e teve como alvo a proteína Calmodulina de Mus musculus. O objetivo na Parte 2 desta tese foi estudar a influência de mutações no processo de reconhecimento molecular com a Calmodulina, por meio das técnicas de ressonância magnética nuclear e calorimetria por titulação isotérmica. Como resultados, observamos a influência da região de dobradiça para o reconhecimento dos peptídeos avaliados, bem como, um processo de balanço entrópico‐entálpico na associação destas moléculas.

Made available in DSpace on 2015-08-08T02:02:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000473096-Texto+Completo-0.pdf: 2207642 bytes, checksum: 9ee9b0c79e127b7c20d678ca27a8ae17 (MD5) Previous issue date: 2015 / Background – Recent studies have demonstrated that the chromatin structure proteins named histones have an important role in gene expression. Acetylation, deacetylation and fosforylation of such proteins may result in upregulation or repression of transcription genes. An imbalance of these systems may result in the development of many diseases, including cancer. Sirtuin 1 (SIRT1) is a member of the family of histone deacetylases NAD – dependents and is involved in the regulation of transcription and apoptosis activation related to p53 gene. There are several changes in the expression of hormone receptors and p53 in endometrial cancer, but the role of SIRT1 in these tumors is still to be defined. Objective - To identify, quantify and compare SIRT1, p53, estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) expression in normal and neoplastic endometrial tissue. Methods – Case-control study comparing 96 cases of endometrial cancer and 128 control samples comprised of normal endometrium. All samples were selected from the Pathology Service, Hospital Sao Lucas of PUCRS between January, 2000 and June, 2012. The factors studied in this paper were analyzed in paraffin specimens by immunohistochemistry technique. Results – Expression of SIRT1 was assessed by the mean percentage of cells with positive nuclear staining was higher in the cancer group as compared to the control group. Expression of ER and PR was higher in the normal endometrium. There is no difference between case and control groups regarding the expression of p53. More aggressive cancers (high grade and stage III-IV) have a reduction on the expression of PR. Conclusion – The immunohistochemical expression of SIRT1 histone deacetylase was significantly higher in endometrial cancer samples, suggesting a possible new target therapy. / Introdução – Estudos recentes têm demonstrado que as histonas, proteínas da estrutura da cromatina, exercem um papel importante na expressão gênica. Modificações como acetilação, desacetilação e fosforilação de histonas podem resultar em um aumento ou repressão de genes de transcrição. Um desbalanço nestes sistemas pode levar ao desenvolvimento de diversas doenças, incluindo câncer. A Sirtuina 1 (SIRT1) pertence a família de histonas desacetilases NAD – dependentes e está envolvida com a regulação da ativação da transcrição e apoptose relacionada ao gene p53 (gene supressor tumoral). Há várias alterações na expressão de receptores hormonais e p53 em câncer de endométrio, mas o papel de SIRT1 nestes tumores ainda está para ser definido. Objetivos - Identificar, quantificar e comparar a expressão da enzima SIRT1, p53 e receptores hormonais de estrogênio (RE) e progesterona (RP) em amostras de endométrio tumoral e normal. População e Métodos – Estudo de caso-controle comparando 96 casos de câncer de endométrio e 128 controles (endométrio sadio) a partir de amostras do banco de dados do Setor de Patologia do Hospital São Lucas da PUCRS no período de janeiro de 2000 a junho de 2012. Os espécimes em parafina foram submetidos à pesquisa dos fatores em estudo através da técnica de imunohistoquímica. Resultados – A expressão de SIRT1 avaliada pelo percentual médio de positividade nuclear de células foi significativamente maior nos tumores em comparação com os controles, ao passo que a expressão de RE e RP foi maior no endométrio sadio. Não houve diferença na expressão de p53 entre casos e controles. Os tumores mais agressivos (maior grau e estadiamento III-IV) tiveram redução significativa na expressão de RP. Conclusão – A expressão de SIRT1 foi maior nos tumores de endométrio, sugerindo um possível alvo terapêutico.

Orientador: Rubens Monti / Banca: Edwil Aparecida de Lucca Gattás / Banca: Adriane Maria Ferreira Milagres / Banca: Raquel de Lima Camargo Giordano / Banca: Benevides Costa Chitunda Pessela / Resumo: Neste trabalho estudou-se a possibilidade de imobilização de uma amilase produzida por cepa de Neurospora crassa (mutante exo-1), e produção de derivados ativos e estabilizados. Foram testados diferentes suportes sólidos, incluindo-se diferentes suportes de agarose e suportes epóxidos preparados com Eupergit e Sepabeads. Além da agarose 10BCL foi utilizada a agarose 4BCL para que se verificasse possíveis dificuldades difusionais do substrato desta enzima, o amido. O acompanhamento das cinéticas de imobilização com a maltose como alternativa ao amido, também colaborou em evidenciar a dificuldade de difusão do amido através de ambos os suportes glioxil-agarose. O derivado obtido com agarose 10BCL, assim como aquele produzido com uso de suporte Eupergit foram os derivados mais estáveis, capazes de manter 100% de suas atividades após 12 horas de incubação à temperatura de 60°C, quando na forma solúvel a enzima conservou apenas 12% de sua atividade inicial. Quando incubados a 70°C destacou-se o derivado de glioxil-agarose (10BCL) como mais estável, mantendo cerca de 30% de sua atividade inicial após 4 horas de incubação. Quando testada a utilização de uma agarose comercial alternativa, sem percentual de crosslink conhecido, de menor custo, sua aplicação mostrou-se promissora e os derivados produzidos além de ativos se apresentam estáveis frente à temperatura. Em conjunto, as informações contidas no presente estudo indicam que a amilase de Neurospora crassa apresenta-se promissora em comparação às amilases de mercado aqui estudadas, tanto em sua utilização na forma solúvel quanto no que se relaciona a produção de derivados estáveis. / Abstract: In this work were studied the immobilization of amylase from Neurospora crassa (Mutant Exo-1). This amylase showed easily production, purification and high capacity of immobilization on agarose and epoxy supports. It was used crosslinked agarose with two polymer concentration: 4 and 10%. The 4BCL agarose presents bigger porous diameter than 10 BCL agarose, so, in this case, possible diffusion problems of the starch across the supports could be reduced. Also, in this study, we have tested two epoxy supports for this amylase immobilization, using Eupergit and Sephabeads supports. The activies of the obtained derivatives were measured using two substrates - maltose and starch. Both glyoxyl agarose support prepared with 4BCl and 10BCL agarose present diffusion problems when the starch was used as substrate to measure the immobilization course. The 10BCL glyoxyl derivative presented the highest thermal stability when comparing the others derivatives. Among the epoxy derivatives the Eupergit one were better than the derivatives obtained using Sepabeads as support. In a confrontation between the two best derivatives, that is, the glyoxyl 10 BCL and Eupergit derivatives, both of them were stable at 60º incubation, maintaining 100% of activities for 12 hours, while the soluble amylase preserved about 12% of initial activity. These two amylase derivatives only showed differences at 70ºC incubation, when the glyoxyl 10BCL amylase derivative was more thermally stable, preserving about 30% of the initial activity after 4 hours. / Doutor