Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-26Bitstream added on 2015-03-03T12:06:22Z : No. of bitstreams: 1 000807047.pdf: 1677952 bytes, checksum: 417cb575a3e9673087d078f47474ca67 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Com a expansão da agroindústria e comercialização manga tem demonstrado grande potencial econômico, podendo ser utilizada na formulação de polpa, néctares, sucos, geléias e compotas. Em contrapartida, a industrialização gera uma grande quantidade de resíduos que equivale a aproximadamente 35 a 60% do peso bruto da materia prima. Por razões sanitárias, a deposição do resíduo deve ser feita em locais distantes da unidade de processamento, o que agrega custo adicional e gera problemas ambientais. Dentro deste contexto o principal objetivo deste trabalho foi obter etanol a partir da amêndoa do caroço de manga e desenvolver uma nova metodologia de desidratação e retificação. Por meio do processo de preparação da matéria prima, hidrólise seguida por fermentação e destilação, obteve-se um resultado por cromatografia gasosa de 275 litros de etanol hidratado para cada tonelada de amêncoa de caroço de manga. Na metodologia desenvolvida para desidratação do etanol hidratado em amostras fortificadas, foram empregados os solventes: glicerina, etilenoglicol e polietilenoglicol como agentes desidratantes, aplicados num processo de destilação com arraste de vapor, obtendo uma relação de agente desidratante/etanol anidro de 1:1,7, 1:1,8 e 1:2, respectivamente. Simultaneamente ao processo de desidratação avaliou-se a retificação do etanol, observando reduções dos componentes presentes no etanol hidratado, da ordem de 90,6, 91,7 e 97,0% (m/v) para glicerina, etilenoglicol e polietilenoglicol, respectivamente. No processo de retificação obteve-se uma redução de 75,0% na acidez de 92,2% na condutividade do etanol retificado. O etanol produzido a partir da amêndoa do coroço da manga foi submetido ao mesmo processo de desidratação e retificação desenvolvido, obtendo índices de desidratação de 99,9%(m/v), em um álcool com teor de 88%(m/v). Com relação a eliminação dos demais componentes presentes na referida... / With the expansion of agribusiness marketing the manga has shown great economic potential and can be used in the formulation of pulp, nectars, juices, jellies and jams. In contrast, the manufacturing generates a large amount of waste which is approximately 35 to 60% of the gross weight of the feedstock. For health reasons, the deposition of waste should be carried out in remote locations of the processing unit, which adds additional cost and creates environmental problems. Within this context the main objective of this work was to obtain ethanol from mango seed almond and develop a new methodology for dehydration and rectification. By means of the preparation of the feedstock, hydrolysis followed by fermentation and distillation process obtained theoretical results by gas chromatography of 275 liters of hydrous ethanol spiked samples, the solvents were employed: glycerin, ethylene glycol and polyethylene glycol as dehydrating agents, applied in a process of steam distillation drag, showed a ratio of dehydrating agent/anhydrous ethanol 1:1,7, 1:1.8 and 1:2 respectively. Simultaneously, the dehydration process was evaluated rectification of ethanol observing reductions of the components present in hydrous ethanol, in the order of 90.6, 91.7 and 97.0% (w/v) glycerine, ethylene glycol and polyethylene glycol, respectively. In the grinding process yielded a reduction of 75.0% in the acidity of 92.2% in the conductivity of ethanol rectified. The ethanol produced from almond core sleeve was subjected to the same process of dehydration and grinding developed and obtained from dehydration of 99,9% (m/v) with an alcohol content of 88% (w/v). Regarding the removal of other components present in said sample to ethanol, there was a reduction of 94.8; 91,5; 97.0 and 100% (w/v) for acetaldehyde, methanol, isoamy alcohol and acetic acid, respectively, promoting the reduction of acidity and condutivity. Thus it can be inferred that the new method was...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-10T16:58:11Z No. of bitstreams: 1 2017_GuilhermeBentoSperandio.pdf: 4590164 bytes, checksum: 08bd686ada6b96e58af9f6c50907a0f2 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-29T20:09:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_GuilhermeBentoSperandio.pdf: 4590164 bytes, checksum: 08bd686ada6b96e58af9f6c50907a0f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-29T20:09:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_GuilhermeBentoSperandio.pdf: 4590164 bytes, checksum: 08bd686ada6b96e58af9f6c50907a0f2 (MD5) Previous issue date: 2018-05-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF). / A crescente demanda energética global e a necessidade ambiental de se afastar do modelo econômico linear baseado na indústria petroquímica são incentivos para o aprimoramento das biorrefinarias lignocelulósicas. Enzimas hidrolíticas ainda são uma porção considerável dos custos de funcionamento das biorrefinarias. Neste trabalho propõem-se a análise do potencial de co-cultivos fúngicos na produção de enzimas hidrolíticas atuantes em material lignocelulósico. Foram realizadas co-culturas do fungo Trichoderma reesei RUT-C30 com Aspergillus niger, Aspergillus tamarii e Phanerochaete chrysosporium em fermentação submersa (SmF) utilizando bagaço de cana-de-açúcar como fonte de carbono. Também foi avaliado o co-cultivo de T. reesei QM 9414 com A. niger nas mesmas condições. Ao serem cultivados com A. niger, T. reesei RUT-C30 e QM 9414 apresentaram um aumento de 142% e 140% na atividade de β-glicosidase, respectivamente. O perfil enzimático total variou significativamente em cada combinação, com determinadas atividades sendo aumentadas e outras sendo diminuídas pelos co-cultivos. O aumento das atividades enzimáticas individuais como β-glicosidase, por exemplo, não se refletiu em maior atividade de celulases totais (FPAse) e nem em maior eficiência na hidrólise de bagaço de cana-de-açúcar, sendo o monocultivo de T. reesei RUT-C30 o que liberou mais açúcares redutores em ambos os ensaios. / The growing global energy demand and the environmental need to move away from the linear economic model based on the petrochemical industry are incentives for the improvement of lignocellulosic biorefineries. Hydrolytic enzymes are still a considerable portion of the running costs of biorefineries. In this work we propose the analysis of the potential of fungal cocultures in the production of hydrolytic enzymes active on lignocellulosic material. Cocultures of the fungus Trichoderma reesei RUT-C30 with Aspergillus niger, Aspergillus tamarii and Phanerochaete chrysosporium were carried out in submerged fermentation (SmF) using sugarcane bagasse as carbon source. Co-cultivation of T. reesei QM 9414 with A. niger under the same conditions was also evaluated. When cultivated with A. niger, T. reesei RUT-C30 and QM 9414 presented a 142% and 140% increase in β-glucosidase activity, respectively. The total enzymatic profile varied significantly in each combination, with certain activities being increased and others being decreased by the cocultures. The increase in individual enzymatic activities such as βglycosidase, for example, was not reflected in higher total cellulase activity (FPAse) or in higher efficiency in the hydrolysis of sugarcane bagasse, with monocultures of T. reesei RUT -C30 releasing more reducing sugars in both assays.

Metarhizium anisopliae é um fungo filamentoso entomopatogênico muito versátil que infecta, aproximadamente, 300 espécies de artrópodes, e também é adaptado à vida na rizosfera de plantas, sendo de extrema importância para o controle biológico de pragas na agricultura e pecuária. De acordo com o comportamento promíscuo desse fungo, pesquisadores têm identificado um grande número de genes relacionados à interação com o hospedeiro, e que são regulados de acordo com a sua indução. Em sua maioria, são genes que codificam para enzimas hidrolíticas. O número e a diversidade desses genes podem ser a chave para a habilidade desse patógeno em infectar uma larga variedade de artrópodes, podendo expressar genes diferentemente para cada tipo de hospedeiro. M. anisopliae secreta, entre outros, complexos quitinolítico e proteolítico para a degradação da quitina e proteínas presentes na cutícula do hospedeiro.Desse modo, o estudo da regulação dessas enzimas é de fundamental importância para o entendimento do processo de infecção; sendo assim, através desse trabalho foi observada e analisada a especialização na expressão de proteínas, especialmente de quitinases e proteases, secretadas por uma linhagem selvagem de M. anisopliae, na presença de cutículas de diferentes artrópodes, particularmente, de Dysdercus peruvianus, Boophilus microplus, Anticarsia gemmatalis e de quitina cristalina, através de ensaios de detecção enzimática e eletroforese uni e bidimensional. Em todos os experimentos, variando-se as condições de fonte de carbono e tempo de cultivo, a secreção de proteínas se mostrou altamente diferenciada, demonstrando comportamento diferencial do fungo a vários hospedeiros, o que seria um sinal da versatilidade do entomopatógeno, aqui estudado, para a capacidade de infectar centenas de hospedeiros. / Metarhizium anisopliae is a very versatile entomopathogenic filamentous fungus that infects, approximately, 300 species of arthropods, and is also adapted to the life in the rhizosphere of plants, being of extreme importance for the biological control of pests in agriculture and pecuary. In accordance with this promiscuous behavior of this fungus, researchers have identified a great number of genes related to the interaction with the host, and that they are regulated in accordance with its induction. In their majority, these genes encode for hydrolytic enzymes. The diversity of these genes can be the key for the ability of this pathogen in infect a wide variety of arthropods, being able to differently express genes for each type of host. M. anisopliae secretes chitinolytic and proteolytic complexes for the degradation of the chitin and proteins present in the cuticle of the host. In this way, the study of the regulation of these enzymes is of up fundamental importance for the understanding of the infection process. Through this research, the specialization in the expression of proteins, especially chitinases and proteases, secreted by a wild strain of M. anisopliae, in the presence of cuticles of different arthropods, particularly, of Dysdercus peruvianus, Boophilus microplus, Anticarsia gemmatalis and crystalline chitin, was observed and analyzed through enzymatic assays and one- and two-dimensional electrophoresis. In all the experiments, the conditions of the carbon source and time of culture, the protein secretion showed highly differentiated, demonstrating distinguishing fungus behavior to various hosts, which would be a sign of the versatility of this entomopathogen for the capacity of infecting hundreds of hosts.

aumento do número de casos de tuberculose e o surgimento de cepas de Mycobacterium tuberculosis (MTB) resistentes a múltiplas drogas, entre elas a isoniazida (INH) representa um sério problema de saúde pública. A enzima InhA, ou 2-trans-Enoil-ACP (CoA) redutase de MTB, catalisa a redução NADHdependente de ácidos graxos α,β-insaturados, precursores dos ácidos micólicos (importantes componentes do envelope celular do MTB). Mutações no gene estrutural da InhA estão associadas à resistência in vivo à INH devido a uma menor afinidade pela molécula de NADH, sugerindo que o mecanismo de resistência deva estar relacionado com interações específicas entre a enzima e o cofator. Para verificar os eventos moleculares associados à afinidade da enzima pelo ligante e identificar os aspectos moleculares relacionados com a resistência, foram realizados estudos de simulação por dinâmica molecular (DM) dos sistemas InhA-NADH (espécie selvagem wt e mutantes) completamente solvatados.Todos os sistemas enzimáticos apresentaram grande flexibilidade durante as trajetórias por DM. Apesar da flexibilidade, no complexo wt InhA-NADH, a molécula de NADH permanece firmemente ligada ao sítio da enzima numa conformação estendida. Nos complexos mutantes I21V e I16T, onde as mutações ocorrem na alça rica em glicina, as interações entre enzima e cofator são menos efetivas, permitindo que a porção pirofosfato do NADH experimente importantes mudanças conformacionais e se afaste de sua região de ligação, indicando, provavelmente, um estágio inicial da dissociação do ligante. No mutante I47T, a substituição da Ile por Thr causa uma contração no sítio de ligação do NADH, que é refletida no rearranjo conformacional do NADH e na expulsão de moléculas de água importantes para a associação do cofator O mutante S94A apresentacomportamento muito semelhante à enzima selvagem, como esperado a partir dos experimentos cristalográficos. As afinidades das enzimas pelo NADH foram avaliadas por experimentos de docking molecular, onde as estruturas instantâneas geradas durante as trajetórias da DM foram utilizadas como forma de considerar explicitamente a flexibilidade da macromolécula. Os resultados do docking molecular mostraram que todos os mutantes apresentam menor afinidade pelo NADH, exceto o mutante S94A, cuja energia livre de ligação do NADH foi estatisticamente igual à observada para a enzima selvagem. Os resultados apresentados neste trabalho devem contribuir para o entendimento do mecanismo molecular específico de resistência à INH, que é crucial para o desenvolvimento de novos fármacos para o controle da tuberculose. / The increasing prevalence of tuberculosis in many areas of the world, coupled with the rise in drug-resistant Mycobacterium tuberculosis (MTB) strains presents a major threat to global health. InhA, the enoyl-ACP reductase from MTB, catalyzes the NADH-dependent reduction of long chain trans-2-enoyl-ACP fatty acids, an intermediate in mycolic acids biosynthesis. Mutations in the structural gene for InhA are associated with isoniazid resistance in vivo due to a reduced affinity for NADH, suggesting that the mechanism of drug resistance may be related to specific interactions between enzyme and cofactor within the NADH binding site. In order to compare the molecular events underlying this ligand affinity in the wild type and S94A, I21V, I16T and I47T clinical mutant enzymes, and to identify the molecular aspects related to resistance, molecular dynamics (MD) simulations of fully solvated NADH-InhA (wt and mutants) systems were performed.All InhA-NADH systems showed a large flexibility during the MD trajectories. Although very flexible, in the wt InhA-NADH complex, the NADH molecule keeps its extended conformation firmly bounded to the enzyme’s binding site. In the I21V and I16T mutant complexes, where mutated residues were located in the glycine rich loop, interactions between enzyme and cofactor became more labile, and the NADH pyrophosphate moiety undergoes to considerable conformational changes, becoming more hydrated and moving apart from its binding site, probably indicating the initial phase of ligand expulsion. In the I47T mutant, the substitution of an Ile residue for Thr causes a binding site contraction with conformational changes of the NADH molecule and expulsion of water molecules important for cofactor binding to the enzyme. The S94A mutant showed to be very similar to the wt enzyme, in agreement to crystallographic experiments observations. The enzyme-ligand affinities were evaluated by molecular docking experiments which were performed in the trajectory ensembles of MD snapshots asa way to explicit consider the macromolecular flexibility. All mutant enzymes had lower affinities for the NADH molecule, except the S94A mutant, whose free energy of NADH binding was statistically similar to that of the wild type enzyme. This results presented here should contribute to our understanding of specific molecular mechanisms of drug resistance, which is crucial for designing more potent antimycobacterial agents for controlling tuberculosis.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-12-18T17:05:33Z No. of bitstreams: 1 2017_HelderAndreyRochaGomes.pdf: 9717796 bytes, checksum: 867d9ecbaf434e11f556f56ee7be8f83 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-02-15T16:54:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_HelderAndreyRochaGomes.pdf: 9717796 bytes, checksum: 867d9ecbaf434e11f556f56ee7be8f83 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-15T16:54:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_HelderAndreyRochaGomes.pdf: 9717796 bytes, checksum: 867d9ecbaf434e11f556f56ee7be8f83 (MD5) Previous issue date: 2018-02-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / Os fungos filamentosos saprofíticos representam fontes promissoras de enzimas holocelulolíticas, e o cultivo desses organismos em fontes de carbono indutoras baratas, como resíduos agrícolas, permitiria a obtenção de coquetéis enzimáticos com custos reduzidos. Neste trabalho, o potencial de um isolado de Clonostachys byssicola para a produção de enzimas holocelulolíticas é descrito. A avaliação do secretoma produzido pelo fungo em cultivo submerso com diversas fontes de carbono lignicelulósicas através de eletroforese em BN-PAGE revelou a presença de bandas de alta massa molecular, correspondentes à complexos proteicos putativos. A partir da identificação desses complexos por LC-MS/MS, verificou-se que os complexos abrigam diversas enzimas envolvidas na degradação de holocelulose, como celulases, mananases, xilanases e pectinases. Os complexos também são cataliticamente ativos, uma vez que foi possível identificar atividade enzimática in gel. Em outra etapa do trabalho, o secretoma do fungo obtido em fontes de carbono comerciais (Avicel, carboximetilcelulose-CMC e xilana de aveia) e agroindustriais (sabugo de milho, casca do grão de soja, engaço de bananeira e bagaço de cana-de-açúcar) foi caracterizado por LC-MS/MS. A maior diversidade de proteínas foi identificada no secretoma obtido em Avicel, seguido pelo secretoma obtido em sabugo de milho. Foram identificadas várias enzimas relacionadas à degradação da lignocelulose, o que evidencia que o fungo é capaz de produzir sistemas enzimáticos completos específicos para cada uma das principais frações da holocelulose: celulose, hemiceluloses e pectina. Os secretomas obtidos em resíduos agroindustriais foram empregados para sacarificar sabugo de milho e bagaço de cana-de-açúcar parcialmente delignificados. Os extratos brutos produziram mais açúcares a partir da hidrólise do sabugo, revelando uma maior digestibilidade deste substrato quando comparado ao bagaço, o que pode decorrer do menor teor de lignina observado após o tratamento do sabugo de milho. Os secretomas permitiram a solubilização de grande parte da xilana presente no sabugo de milho, com a liberação de xilobiose como principal produto de hidrólise. O isolado de C. byssicola foi ainda avaliado quanto à capacidade de produção de enzimas pectinolíticas quando cultivado em meio contendo casca de laranja como única fonte de carbono. O fungo foi capaz de secretar pectinases e pectato liases. A caracterização do secretoma feita por LCMS/MS revelou uma grande diversidade de enzimas atuantes na cadeia principal e sobre substituintes laterais. Uma fração parcialmente purificada foi caracterizada quanto ao efeito da temperatura e pH, e a atividade de pectinase foi máxima a 50ºC, e na faixa de pH entre 4,5 e 6,0. Estas características sugerem a aplicação da enzima para o tratamento de sucos de frutas com baixa acidez. Uma das enzimas parcialmente purificada foi identificada por LC-MS/MS, e a partir desta identificação, o transcrito correspondente foi clonado com sucesso em Escherichia coli, e a etapa de expressão em Pichia pastoris se encontra em andamento. Todos os resultados deste trabalho revelam C. byssicola como uma nova fonte de enzimas holocelulolíticas, que ainda precisa ser explorada. / Saprophytic filamentous fungi represent promising sources of holocellulolytic enzymes, and the cultivation of these organisms in inexpensive inducing carbon sources, such as agricultural residues, would allow the production of enzymatic cocktails at reduced costs. In this work, the potential of a Clonostachys byssicola strain for the production of holocellulolytic enzymes is described. The evaluation of the secretome produced by the fungus in submerged culture with several lignicellulosic carbon sources through BN-PAGE electrophoresis revealed the presence of bands of high molecular mass, corresponding to the putative protein complexes. From the identification of these bands by LC-MS / MS, the complexes were found to harbor several enzymes involved in the degradation of holocellulose, such as cellulases, mannanases, xylanases and pectinases. The complexes are also catalytically active, since it was possible to identify in gel enzymatic activity. In another stepe of the work, the secretome of the fungus obtained in commercial (Avicel, carboxymethylcellulose-CMC and oat spealt xylan) and agroindustrial (corn cob, soybean hull, banana and sugarcane bagasse, sugar) carbon sources was characterized by LC-MS / MS. The greatest diversity of proteins was identified in the secretome obtained from Avicel and corn cob, respectively. Several enzymes related to the degradation of lignocellulose were identified, which shows that the fungus is able to produce complete enzymatic systems specific to each of the main holocellulose fractions: cellulose, hemicelluloses and pectin. The secretomes obtained from agroindustrial residues were used to saccharify partially-delignified corn cob and sugarcane bagasse. The crude extracts released more sugars from the hydrolysis of corn cob, revealing a higher digestibility of this substrate when compared to the bagasse, which may be due to the lower lignin content observed after corn cob treatment. The secretomes allowed the solubilization of a large part of the xylan present in the corn cob, with the release of xylobiose as the main hydrolysis product. C. byssicola strain was also evaluated for the production of pectinolytic enzymes when grown in medium containing orange peel as the sole carbon source. The fungus was able to secrete pectinases and pectate lyases. The characterization of the secretome by LC-MS / MS revealed a large diversity of enzymes acting on the main chain and side substituents. A partially purified fraction was characterized regarding the effect of temperature and pH, and the pectinase activity was maximal at 50 ° C and in the pH range between 4.5 and 6.0. These characteristics suggest the application of the enzyme for the treatment of fruit juices with low acidity. One of the partially purified enzymes was identified by LCMS / MS, and from this identification, the corresponding transcript was successfully cloned in Escherichia coli, and the expression step in Pichia pastoris is underway. All the results of this work reveal C. byssicola as a new source of holocellulolytic enzymes, which still needs to be explored.

Vários estudos têm sugerido que seres vivos podem ser suscetíveis aos campos eletromagnéticos (CEMs). Os supostos efeitos dos Campos Eletromagnéticos de Ultra Alta Freqüência (CEMUAFs) em sistemas biológicos são pouco conhecidos. Os relatos de um possível efeito biológico dependente da alteração de estados de oxidação entre pares de radicais sugerem um mecanismo de transdução orgânica para os campos. Outros trabalhos obtiveram alterações na sinalização celular e defesas antioxidantes após a exposição CEMUAFs e, tais alterações, poderiam ser um agente causador de doenças como, por exemplo, a leucemia infantil, esta já correlacionada com a exposição aos CEMs. Desta forma o objetivo deste estudo foi investigar se o CEMUAF (834 MHz) poderia interferir com o balanço oxidativo de planárias e ratos, assim como, estudar a participação de enzimas responsáveis pela hidrólise de nucleotídeos, enzimas estas reconhecidas por serem influenciadas pela ação de radicais livres. As planárias foram expostas por 1, 3 e 6 dias (8 h/dia). Após a exposição foi feito um homogenato de todo o corpo de cada animal. Foi encontrado um aumento na atividade da superóxido desmutase (SOD) e um decréscimo na atividade da catalase (CAT) e na defesa antioxidante não-enzimática (TRAP) após 6 dias de exposição. Adicionalmente, houve um aumento na freqüência de micronúcleos (MN) após 3 e 6 dias de exposição. Não houve alteração nos parâmetros de dano oxidativo a lipídios (TBARS) e proteínas (Carbonil) em nenhum dos tempos de exposição. Estes resultados sugerem um aumento nos níveis de radicais livres e de danos aos ácidos nucléicos. Estudos posteriores deverão determinar se estes efeitos apresentam ou não associações do tipo causa e efeito. Foram utilizados três modelos com ratos. No primeiro modelo, animais com idades de 30, 80 e 210 dias foram expostos por 6 dias (7:30 h/dia). Não foram encontradas mudanças nos parâmetros de TRAP, TBARS e Carbonil em nenhuma das idades expostas ao CEMUAF. Estes resultados sugerem que os tempos de exposição utilizados não foram suficientes para causar alguma mudança perceptível nos parâmetros de estresse oxidativo. No segundo modelo, utilizou-se o sangue e fígado dos neonatos expostos ao CEMUAF ainda no útero de suas mães durante todo o seu desenvolvimento embrionário (8:30 h/dia). Não foram encontradas mudanças em nenhum parâmetro oxidativo. Foi encontrado um aumento na freqüência de MN nas hemácias, sugerindo um efeito genotóxico da irradiação do celular afetando o tecido hematopoiético dos fetos. No terceiro modelo, utilizou-se o sangue de ratos adultos (180 dias) expostos por 12 dias (8:30 h/dia). Os níveis da hidrólise de ATP e ADP estavam aumentados no grupo irradiado. Nenhum efeito foi observado nas atividades da SOD e da CAT, sugerindo nenhuma participação de radicais livres nestes resultados. Ainda são necessários muitíssimos estudos para determinar quais os mecanismos transdutores dos CEMUAFs em sistemas biológicos e de que forma esta interação ocorre, porém estes resultados sugerem: (a) um papel para os radicais livres sobre, pelo menos, alguns dos efeitos atribuídos aos CEMUAFs e (b) que os organismos em fase de formação podem ser mais sensíveis aos campos. Por fim, sugerimos que sistemas biológicos podem sofrer a ação da irradiação com uma quantidade de energia muito menor do que a esperada para promover algum efeito no metabolismo. / Several studies have suggested that living being could be susceptible to the electromagnetic fields (EMFs). The supposed effects of ultra high frequency electromagnetic fields (UHF-EMFs) in biological systems are not very well-known. The reports of a possible effect biological dependent of the alteration of oxidation states among radical pairs suggest a mechanism of organic transduction for the EMFs. Other works have obtained alterations in the cellular signaling and antioxidant defenses after the UHF-EMFs exposure and, such alterations could be a diseases causative agent as, e.g., the infantile leukemia, this already correlated to EMF exposure. This way we have investigated if the non thermal UHF-EMF (834 MHz) could interfere with the planarians and rats oxidative balance, as well as, to study the participation of responsible enzymes for the nucleotides hydrolysis. Nucleotide hydrolysis is known be influenced by the free radicals action. Planarians were exposed for 1, 3 and 6 days (8 h/day). After the exposure was made a whole body homogenate of each animal. It was found an increase in the superoxide dimutase (SOD) activity, a decrease in the catalase (CAT) activity and a decrease in the non-enzymatic antioxidant defense (TRAP) after 6-day exposure. It was also found an increase in the micronúcleos frequency (MN) after 3 and 6 days of exposure. It was not found changes in the parameters of lipid and protein oxidative damage (TBARS and Carbonyl, respectively) in none of the exposure times. These results suggest an increase in the levels of free radicals and of nucleic acids damages. Future studies would determine if these effects show or not cause and effect associations. Three models were used with rats. In the first model, animals with ages of 30, 80 and 210 days were exposed for 6 days (7:30 h/day). It was not found changes in the TRAP, TBARS and Carbonil parameters in none of the UHF-EMF exposed ages. Three models were used with rats. In the first model, animals with ages of 30, 80 and 210 days were exposed for 6 days (7:30 h/day). It was not found changes in the TRAP, TBARS and Carbonil parameters in none of the UHF-EMF exposed ages. These results suggest the exposure times used were not enough to cause some perceptible changes in the oxidative stress parameters. In the second model, it were used the blood and liver of offspring exposed to UHF-EMF (8:30 h/day) still inside of mothers' uterus during all its embryonic development. It was not found changes in any oxidative parameters. It was found an increase in the erythrocytes MN frequency suggesting a cellular irradiation genotoxic effect in the fetus hematopoietic tissue. In the third model, the blood of adult rats (180 days) was used after 12 days UHF-EMF exposure (8:30 h/day). The levels of the ATP and ADP hydrolysis were increased in the UHF-EMF group and no effect was observed in the activities of SOD and of CAT, suggesting no free radicals participation in these results. It is still necessary a lot of studies to determine which the UHF-EMF transductions mechanisms in biological systems and that forms this interaction happens, but these results suggest: (a) a role for the free radicals in, at least, some of the effects attributed to UHFEMFs and (b) that the organisms in formation phase may be more sensitive to these fields. Finally, we suggested that biological systems may suffer the irradiation action with an amount of energy lesser than the energy believed to promote some effect in the metabolism.

O aumento na prevalência da tuberculose (TB), a emergência de cepas resistentes a múltiplas drogas de Mycobacterium tuberculosis, o agente etiológico da TB, e o efeito devastador da coinfecção pelo HIV têm enfatizado a urgente necessidade no desenvolvimento de novos agentes antimicobacterianos. A análise completa da seqüência genômica do M. tuberculosis H37Rv mostrou a existência de genes envolvidos na via de biossíntese de aminoácidos aromáticos, a via do chiquimato, e evidências experimentais indicam que esta via é essencial para o M. tuberculosis e apresenta-se ausente no homem. Os produtos dos genes que são essenciais para o crescimento dos microrganismos fazem deles alvos atrativos para a ação de drogas, pois a inibição de sua função pode matar o bacilo. Previamente, nosso grupo relatou a clonagem do gene aroE de M. tuberculosis e a expressão do seu produto na forma solúvel, a enzima chiquimato desidrogenase (MtbSD), que catalisa o quarto passo na via do chiquimato. Neste trabalho apresentamos, no primeiro artigo, intitulado “Functional shikimate dehydrogenase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: purification and characterization”, a purificação da MtbSD solúvel e ativa por cromatografia líquida, o seqüenciamento do Nterminal, a espectrometria de massas, a determinação do estado oligomérico por cromatografia em gel filtração, a estabilidade térmica, a determinação de parâmetros cinéticos aparentes em estado estacionário para as reações direta e reversa, a constante de equilíbrio aparente e energia de ativação para a reação química catalisada pela MtbSD. No segundo artigo, intitulado “Shikimate Dehydrogenase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: Kinetic and Chemical Mechanisms”, descrevemos os parâmetros de velocidade inicial na reação direta, os estudos de inibição pelos produtos, os efeitos isotópicos cinéticos primários do deutério, os efeitos isotópicos cinéticos do solvente, os efeitos isotópicos cinéticos múltiplos, proton inventory, o efeito de pH na química ácido/base para a ligação e catálise dos substratos, e a estrutura 3D da MtbSD obtida in silicon pela modelagem por homologia. Esses resultados servem como base para os estudos cinéticos e estruturais que podem auxiliar no desenho racional de inibidores a serem testados como agentes antimicobacterianos. / The increasing prevalence of tuberculosis (TB), the emergence of multidrug-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of TB, and the devastating effect of coinfection with HIV have highlighted the urgent need for the development of new antimycobacterial agents. Analysis of the complete genome sequence of M. tuberculosis H37Rv shows the presence of genes involved in the aromatic amino acid biosynthetic pathway, the shikimate pathway, and experimental evidence showed that this pathway is essential for M. tuberculosis and it is absent in humans. The gene products that are essential for the growth of the microorganisms make them attractive drug targets since inhibiting their function may kill the bacilli. Our group has previously reported the cloning of M. tuberculosis aroE gene and the expression of the product in the soluble form, the shikimate dehydrogenase (MtbSD) enzyme, that catalysis the fourth reaction in the shikimate pathway. Currently, in the first manuscript “Functional shikimate dehydrogenase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: purification and characterization”, we present the purification of soluble and active MtbSD, N-terminal sequencing, mass spectrometry, assessment of the oligomeric state by gel filtration chromatography, thermal stability, determination of apparent steady-state kinetic parameters for both forward and reverse directions, apparent equilibrium constant, and energy of activation for the enzyme-catalyzed chemical reaction. In the second manuscript “Shikimate Dehydrogenase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: Kinetic and Chemical Mechanisms”, we describe the kinetic mechanism, initial velocity patterns in the forward direction, product inhibition studies, primary deuterium kinetic isotope effects, solvent kinetic isotope effects, multiple isotope effects, proton inventory, pH rate profile and the MtbSD 3D structure obtained in silicon by homology modeling. These results should be useful as a solid base for structural and kinetic studies, which can aid in the rational design of inhibitors to be tested as antimycobacterial agents.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-07-01T12:53:13Z No. of bitstreams: 1 2016_ElonhaRodriguesdosSantos.pdf: 1709458 bytes, checksum: 80ecf5b6705ab5bc678b1b48e81bd39e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-07-26T22:10:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_ElonhaRodriguesdosSantos.pdf: 1709458 bytes, checksum: 80ecf5b6705ab5bc678b1b48e81bd39e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T22:10:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_ElonhaRodriguesdosSantos.pdf: 1709458 bytes, checksum: 80ecf5b6705ab5bc678b1b48e81bd39e (MD5) / A soja (Glycine max. (L.) Merrill) é uma importante alternativa alimentar na nutrição humana, apresenta alto teor e qualidade proteica, lipídios e vitaminas, além de ser considerada um alimento funcional. Entretanto, esse alimento é pouco usado pelos brasileiros devido ao sabor desagradável “beany flavor” atribuído pelas enzimas lipoxigenases. As lipoxigenases são dioxigenases que catalisam o oxigênio molecular aos ácidos graxos polinsaturados, formando compostos voláteis de cadeias curtas como aldeídos e cetonas, responsáveis pelos sabores indesejáveis. A inativação genética das lipoxigenases é considerada a alternativa mais eficiente de reduzir o sabor indesejável. Assim, a obtenção de cultivares de soja desprovidas dessas enzimas é um método interessante por manter as propriedades funcionais, contribuindo para otimização do sabor e aumentando sua aceitabilidade. Este trabalho teve como objetivo, obter genótipos de soja, com ausência das enzimas de lipoxigenases e que apresentem período juvenil longo com potencial para serem empregados no cultivo comercial, em regiões de baixa latitude no Cerrado Brasileiro. A etapa que analisou a introdução, crescimento e desenvolvimento da soja em baixa latitude foi realizada em Gurupi, TO. O desenho experimental foi de blocos ao acaso com quatro tratamentos e quatro repetições. Os tratamentos foram BRSMG 790A e BRS 257, cultivares de soja do tipo alimento: destinadas a alimentação; A7002 e M 8585, do tipo comum de grão, destinadas a produção de óleo e farelo. Avaliaram-se o crescimento e os componentes agronômicos. A análise de crescimento foi eficaz em avaliar a resposta biológica da soja do tipo de alimento, quando introduzida em baixas latitudes. As etapas seguintes que incluíram as hibridações, avanço das gerações F1 e F2 foram conduzidas em Brasília, DF. Os cruzamentos foram realizados em casa de vegetação usando genitores com período juvenil longo e genitores com ausência das enzimas lipoxigenases (destinadas ao consumo na alimentação humana). A geração F1 foi cultivada em canteiros na Estação de Biologia da UnB. Para realizar as avaliações agronômicas e determinação dos parâmetros genéticos foi instalado um experimento, na Fazenda Água Limpa (FAL), para avaliar as plantas da geração F2. Para determinar a presença e ausência das lipoxigenases foram realizadas analises, em laboratório, usando o método colorimétrico, nas progênies F2 com altura igual e superior a 70 cm. A análise dos componentes genéticos demostraram elevada probabilidade de ganhos por seleção evidenciada pelos elevados valores de herdabilidade, CVg/CVe nas populações F2, com seleção favorável para número de dias à maturação, altura de plantas, número de vagens por planta e rendimento. Entretanto, a influência ambiental elevada dificulta a seleção por altura de inserção de vagem. As correlações demostraram que é possível realizar seleções indiretas daqueles caracteres com menor herdabilidade para obter genótipos desejáveis. As hibridações entre cultivares de soja com período juvenil longo e cultivares com ausência de lipoxigenase, originaram na geração F2, 35 progênies de soja com período juvenil longo, com altura superior a 70 cm e ausência de lipoxigenases, com potencial de serem avançadas e lançadas como cultivar para a região do Cerrado. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Soybean (Glycine max. (L.) Merrill) is an important alternative food in human nutrition, has high content and quality protein, lipids and vitamins, and is considered a functional food. However, this food is rarely used by Brazilians due to the unpleasant taste "beany flavor" provided by lipoxygenase. The lipoxygenases are dioxygenase catalyzing the molecular oxygen to polyunsaturated fatty acids, forming volatile compounds such as short chain aldehydes and ketones, responsible for undesirable tastes. Genetic inactivation of lipoxygenase is considered the most efficient alternative to reduce the undesirable taste. Thus, to obtain soybean cultivars lacking these enzymes is an interesting method for maintaining the functional properties, contributing to optimize the flavor and increasing their acceptability. This study aimed to obtain soybean genotypes with absence of the enzyme lipoxygenase and present long juvenile period with potential to be used in commercial cultivation in low-latitude regions in the Brazilian Cerrado. The step which analyzed the introduction, growth and soybean development in low latitude was held in Gurupi, TO. The experimental design was a randomized block design with four treatments and four replications. The treatments were BRSMG 790A and BRS 257, food type soybean cultivars intended for food; A 7002 and M 8585, the common type of grain intended for production of oil and meal. They evaluated growth and agronomic components. Growth analysis is effective in evaluating the biological response of soybean food type, when inserted in the lower latitudes. The following steps that included hybridizations, advancement of F1 and F2 generations were conducted in Brasilia, DF. The crosses were carried out in a greenhouse using parents with long juvenile period and parents with the free-lipoxygenase (intended for consumption as food). The F1 generation was grown in flower beds in the UNB Biology Station. To perform the agronomic evaluations and determination of genetic parameters was installed an experiment in, Água Limpa Farm (ALF), to evaluate plant of the F2 generation. To determine the presence and absence of lipoxygenase analyzes were performed in the laboratory using the colorimetric method, the F2 progeny in height and more than 70 cm. Analysis of genetic components demonstrated high probability of selection gains evidenced by the high heritability values, CVg / CVe in F2 populations with a favorable selection for number of days to maturity, plant height, number of pods per plant and yield. However, the high environmental influence difficult selection by pod insertion height. The correlations demonstrated that it is possible to indirect selections of those characters with lower heritability for desirable genotypes. Hybridizations between soybean cultivars with long juvenile period and cultivars free-lipoxygenase, originated in the F2 generation, 35 soybean progenies with long juvenile period, taller than 70 cm and free-lipoxygenase, with potential to be advanced and released as cultivate for the Cerrado region.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-09-20T16:47:37Z No. of bitstreams: 1 2016_LorenaCardosoCintra.pdf: 15762332 bytes, checksum: de12e23f747150193dbbfe502dc41117 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-12-01T12:27:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LorenaCardosoCintra.pdf: 15762332 bytes, checksum: de12e23f747150193dbbfe502dc41117 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-01T12:27:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LorenaCardosoCintra.pdf: 15762332 bytes, checksum: de12e23f747150193dbbfe502dc41117 (MD5) / A lignocelulose é o principal componente da biomassa vegetal, sendo constituída por celulose, hemicelulose e lignina. A xilana é o principal componente da hemicelulose e para a sua completa degradação é necessário a ação cooperativa de um sistema composto por várias enzimas, incluindo endo-xilanases (XYN), β-xilosidases (XYL) e α-L-arabinofuranosidases (ABF). No presente trabalho, foi realizada a produção de hemicelulases recombinantes e a aplicação na hidrólise do bagaço de cana-de-açúcar (BCA) pré-tratado por explosão a vapor. As primeiras enzimas produzidas foram duas XYLs do fungo Humicola grisea var. thermoidea, sendo esse o primeiro trabalho a reportar a caracterização de genes de XYLs de H. grisea, bem como, a sua expressão heteróloga e caracterização bioquímica. Os dois genes, hxylA e hxylB, foram identificados a partir do genoma de H. grisea, um com 984 pb e outro com 1617 pb, respectivamente. Nenhum íntron e peptídio sinal foi encontrado e o domínio catalítico de GH43 estava presente em ambas. Os cDNAs correspondente as duas enzimas foram utilizados para a transformar duas linhagens de Pichia pastoris, GS115 e SMD1168. Uma otimização da produção da enzima denominada HXYLA foi realizada por meio de planejamento experimental 23. A influência da densidade celular inicial, concentração de metanol e fonte de nitrogênio foi avaliada e o parâmetro mais significativo para a produção foi a concentração de metanol. A enzima HXYLA purificada foi utilizada para a realização da caracterização enzimática quanto ao pH e temperatura ótimos (7,0 e 50 °C), efeito de íons e reagentes químicos na atividade de HXYLA, substrato específico e parâmetros cinéticos. A enzima HXYLA apresentou atividade de β- xilosidase e α-L-arabinofuranosidase, sendo uma enzima bifuncional e altamente tolerante a xilose, com elevado valor de Ki (350 mM). Além das β-xilosidases, foi produzida e purificada uma endoxilanase (HXYN2) recombinante de H. grisea a partir de um clone de P. pastoris obtido pelo grupo de pesquisa do laboratório de Biotecnologia de Fungos (LBF/UFG). Além dessas hemicelulases, uma α- L-arabinofuranosidase (ABF3) de Penicillium purpurogenum teve seu cDNA introduzido em P. pastoris e a enzima foi produzida com sucesso. Após a produção hetoróloga das enzimas, foi utilizado um planejamento experimental 23 para avaliar a melhor formulação contendo as três hemicelulases recombinantes (HXYN2, ABF3 e HXYLA) para a hidrólise do BCA pré-tratado por explosão a vapor, sendo possível estabelecer uma mistura capaz de realizar a conversão da fração residual de xilana em xilose, sendo a bioconversão eficiente da fração de xilana do BCA uma etapa imprescindível para o aproveitamento da xilose. A melhor formulação contendo as três hemicelulases recombinantes foi obtido com a menor concentração de ABF3, sendo que essa enzima foi a que exerceu efeito mais significativo durante a hidrólise do BCA. Além disso, o coquetel contendo as hemicelulases recombinantes foi utilizado para suplementar uma mistura de celulases comerciais aumentando significativamente a liberação de glicose a partir do BCA, o que mostrou a capacidade das hemicelulases de melhorar a digestibilidade de celulose e tornar o processo de hidrólise mais eficiente. Nossos resultados mostram o potencial de atividades acessórias para aumentar a hidrólise enzimática, tais como XYNs, ABFs e XYLs, que estão ausentes ou presentes em pequenas proporções nas celulases comerciais. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Lignocellulose is the main component of plant biomass, which consists of cellulose, hemicellulose and lignin. Xylan is the main component of hemicellulose and for its complete degradation is required cooperative action of a system consisting of several enzymes including endo-xylanases (XYN), β- xylosidases (XYL) and α-L-arabinofuranosidases (ABF). In the present work, the production of recombinant hemicellulases and its application in the hydrolysis of sugarcane bagasse (SCB) pretreated by steam explosion was performed. The first enzymes produced were two XYLs from Humicola grisea var thermoidea and this was the first study to report the genes characterization of XYLs from H. grisea, as well its heterologous expression and biochemical characterization. The two genes, hxylA and hxylB, were identified from the H. grisea genome, with 984 bp and 1617 bp, respectively. No intron and signal peptide were found and the GH43 catalytic domain was present in both. The cDNAs of both enzymes were used to transform two strains of Pichia pastoris, GS115 and SMD1168. A production optimization of enzyme denominated HXYLA was performed by a 23 factorial design. The influence of the initial cell density, methanol concentration and nitrogen source was assessed and the most significant parameter for the HXYLA production was methanol concentration. The purified enzyme was used to carry out the enzymatic characterization as optimal pH and temperature (7.0 and 50 °C), effect of ions and chemical reagents in HXYLA activity, substrate specific and kinetic parameters. HXYLA is a bifunctional enzyme, displaying β-xylosidases and α-Larabinofuranosidases activity, also that enzyme was highly tolerant xylose with high Ki value (350 mM). In addition to β-xylosidases, a recombinant endo-xylanase (HXYN2) from H. grisea was produced and purifield from a P. pastoris clone obtained by the research group from Fungal Biotechnology Laboratory (LBF/UFG). It was also produced one α-L-arabinofuranosidases (ABF3) from Penicillium purpurogenum which had its cDNA introduced in P. pastoris and the enzyme has been successfully produced. After the production of these enzymes, a 23 factorial design was used to evaluate the best formulation containing the three recombinant hemicellulases (HXYN2, ABF3 and HXYLA) for the SCB pretreated by steam explosion hydrolysis. It was possible to formulate a mixture capable to performing the conversion of the xylan fraction in the xylose, being efficient bioconversion of SCB xylan fraction an essential step for the utilization of xylose. The best formulation containing these three recombinant hemicellulases was obtained with the lowest concentration of ABF3, and it had most significant effect exerted during SCB hydrolysis. Also, the cocktail containing recombinant hemicellulases was used to supplement a mixture of commercial cellulase and it showed significantly increasing the release of glucose from the SCB hydrolysis, which showed the ability of hemicellulases to improve the digestibility of cellulose and make the hydrolysis process more efficient. Our results showed the potential for auxiliary activities to increase the enzymatic hydrolysis, such as XYNs, ABFs and XYLs who are absent or present in small amounts in comercial cellulases.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-10-04T15:58:08Z No. of bitstreams: 1 2016_JulianaCarvalhoRochaAlvesdaSilva.pdf: 855628 bytes, checksum: 823ea873caefea29e8d4a65f4c6465a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-16T17:57:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JulianaCarvalhoRochaAlvesdaSilva.pdf: 855628 bytes, checksum: 823ea873caefea29e8d4a65f4c6465a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T17:57:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JulianaCarvalhoRochaAlvesdaSilva.pdf: 855628 bytes, checksum: 823ea873caefea29e8d4a65f4c6465a6 (MD5) / A leucemia linfoide crônica (LLC) é uma doença linfoproliferativa que resulta no acúmulo de células B monoclonais na medula óssea, sangue periférico, linfonodos e baço. O diagnóstico dessa doença costuma ocorrer após os 70 anos de idade, sendo mais frequente em homens do que em mulheres. Além disso, esta é a leucemia mais prevalente nos países ocidentais. Embora a etiologia da doença seja desconhecida, alguns fatores prognósticos são bem conhecidos como a expressão da proteína ZAP-70, alta contagem de células malignas (leucocitose) associado ao tempo de duplicação linfocitária e alterações cariotípicas específicas ou aquisição de cariótipo complexo (3 ou mais alterações cariotípicas). Atualmente, a fisiopatologia de diversos tipos de neoplasias tem sido relacionada a mecanismos epigenéticos. Nesse sentido, foi demonstrado que a expressão das enzimas Histona Metiltransferases (HMTs) das famílias Euchromatic Histone-Lysine N-Methyltransferase (EHMT) e Suppressor Of Variegation (SUV) podem estar relacionadas à instabilidade genômica e ao pior prognóstico de alguns tipos de câncer. Considerando essas associações, investigamos nesse trabalho a expressão dos genes membros das famílias EHMT e SUV em pacientes com LLC e associamos esses achados a marcadores de prognóstico, como: expressão da proteína ZAP-70, cariótipo e leucometria desses pacientes. Nesse trabalho, observamos que a baixa expressão do gene SUV39H1 está associada à aquisição de anormalidades citogenéticas em pacientes com LLC. A expressão elevada de SUV39H2 está associada à baixa contagem de plaquetas e a um maior número de casos com alterações cariotípicas. A baixa expressão de SUV4-20H1 está relacionada com maior leucometria, enquanto que a baixa expressão de SUV4-20H2 está associada à expressão elevada de ZAP-70. EHMT1 se mostrou com expressão elevada nas amostras de LLC, enquanto que EHMT2, embora não tenha apresentado expressão diferencial entre LLC e pacientes saudáveis, está associado à aquisição de cariótipo complexo nessa doença. Nossos dados evidenciam que as famílias de metiltransferases SUV e EHMT estão associadas à aquisição de indicadores de mau prognóstico na LLC, como contagem de plaquetas, maior número de células malignas, expressão de ZAP-70 e aquisição de cariótipo complexo. Esses dados contribuem para a área de epigenética e câncer, podendo servir de base para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas que visem controlar processos epigenéticos na LLC. / Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a lymphoproliferative disease that results in accumulation of monoclonal B cells in bone marrow, peripheral blood, lymph nodes and spleen. The diagnosis of LLC occurs, normally, after 70 years, affects slightly more men and this disease is the most common leukemia in Western countries. Although the etiology of the CLL is unknown, some prognostic factors are well known as the expression of ZAP-70, the high quantity of malignant cells (leukocytosis) associated with lymphocyte duplicating time and karyotype changes or acquisition of complex karyotype (three or more karyotype alterations). Currently, the pathophysiology of various types of cancers has been linked to epigenetic mechanisms. In this line, it was shown that the expression of the enzymes histone methyl Transferases (HMTs) of Euchromatic Histone-Lysine N-Methyltransferase (EHMT) and Suppressor Of Variegation (SUV) families may be related to genomic instability and to bad prognosis markers of some cancers. Considering these associations, we investigated in this study the expression of EHMT and SUV members in CLL samples. Furthermore, we investigated the association of gene expression analysis and prognosis markers, like: ZAP-70 expression, karyotype and white blood cell count of these patients. In this study, we found that low expression of SUV39H1 gene is associated with the presence of cytogenetic abnormalities in patients with CLL. The high expression of SUV39H2 is associated with low platelet count and with the presence of cytogenetic abnormalities. Low SUV4-20H1 expression is related to the accumulation of leukocytes, while the low SUV4-20H2 expression influences the expression of ZAP-70. EHMT1 was high expressed in LLC, while EHMT2 was associated with the presence of complex karyotype in this disease. Our data clearly show that the methyltransferases SUV and EHMT influence generally in CLL, being associated with the presence of bad prognosis markers in this disease, including platelet count, accumulation of malignant cells, expression of ZAP-70 and abnormal karyotype. These results may provide the basis for the development of new therapeutic strategies to prevent CLL progression.