As Escherichia coli enteropatogênica atípicas (EPECa) são capazes de causar a lesão A/E e não transportam o pEAF. Biofilmes microbianos são definidos como comunidades complexas formadas por microrganismos aderidos a superfícies envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de formação de biofilme de 92 amostras de EPEC atípicas em superfícies abióticas e células pré-fixadas, utilizando três metodologias (contagem de UFC/cm2), ensaio colorimétrico com cristal violeta e CLSM). O gene shf e bfpA parecem não ter relação com a formação de biofilme. Não houve diferença significativa de formação de biofilme nas superfícies testadas. Através de CLSM foi possível verificar a formação de biofilme em EPECa. Os biofilmes visualizados em CLSM revelaram uma grande heterogeneidade das amostras. Uma metodologia qualitativa, como CLSM deve ser empregada para indicar a formação de biofilme. A adesão e formação de biofilme por EPEC atípica de longo período pode ser uma possível explicação para os casos de diarréia persistente. / The atypical Escherichia coli enteropathogenic (EPECa) are capable to cause the lesion A/E and they don\'t transport the pEAF. Microbial biofilms are defined as complex communities formed by microrganisms adhered to surfaces embedded in an exopolysacharidic matrix. The objective of this study was to verify the capacity of formation of biofilm of 92 strains of atypical EPEC in abiotics and pre-fixed cells surfaces, using three methodologies (counting of UFC/cm2), colorimetric assay with violet crystal and CLSM). The gene shf and bfpA seem not to have relationship with the biofilm formation. There was not significant difference of biofilm formation in the tested surfaces. Through CLSM it was possible to verify the biofilm formation in EPECa. The biofilms visualized in CLSM revealed a great heterogeneity of the strains. A qualitative methodology, like CLSM should be used to indicate the biofilm formation. The adhesion and biofilm formation for atypical EPEC of long period can be a possible explanation for the cases of persistent diarrhea.

Escherichia coli enteropatogênica causa uma lesão denominada attaching and effacing, codificadas por genes presentes na região LEE, que está sujeita a regulação por diferentes fatores incluindo por quorum sensing. O veneno de Bothrops jararaca é uma mistura de vários componentes com diferentes efeitos biológicos. Para analisar o efeito de suas frações na interação de EPEC com HEp-2, o veneno foi ultrafiltrado. Testes mostraram que a concentração de 100 ng de fração causou um aumento de adesão bacteriana, sugerindo componente no veneno que potencializa a adesão até certa concentração. Fenótipo das amostras com concentração mais alta foi parecido ao do controle, exceto com 1000 ng da menor fração, onde a adesão foi menor, sugerindo que há componente que afeta negativamente a adesão bacteriana em concentração maior. Estes resultados mostram como diferentes componentes de veneno de serpentes afetam a interação bactéria-célula hospedeira, e apresentam potencial biológico de componentes de baixo peso molecular no veneno. / Enteropathogenic Escherichia coli causes a lesion named attaching and effacing, encoded by genes present in LEE region, which is subject to regulation by different factors including quorum sensing. Bothrops jararaca venom is a mixture of different components with different biological effects. To analyze the effect of its fractions in interactions between EPEC and HEp-2, venom was ultrafiltered. Tests showed that a fraction concentration of 100 ng caused an increase of adherence when compared to the control, suggesting that there is a component in the venom that potentiates the adherence up to a certain concentration. Phenotype of samples with higher concentration were similar to that of the control, except the one with 1000 ng of the lowest fraction, where adherence decreased, indicating that there is a component able to negatively affect adherence when in higher concentration. These results show how different snake venom components can affect a bacteria-host cell interaction, and present biological potential of components of low molecular weight present in venom.

Pombos (Columba livia) são aves exóticas, sinantrópicas, reservatórios de algumas doenças de caráter zoonótico. O presente trabalho teve por objetivo caracterizar genotipicamente isolados de Salmonella spp. e Escherichia coli diarreiogênicas de pombos domésticos. Foram coletados suabes de 118 pombos provenientes de dois zoológicos de São Paulo. Para a identificação de Salmonella spp, as amostras foram submetidas ao pré-enriquecimento em água peptonada 0,1% e incubadas a 37º C por 24-48 horas, seguida do enriquecimento seletivo em caldo de tetrationato de sódio, com incubação a 37º C por 24-48h e plaqueamento em meio seletivo XLT4, a 37º C por 24-48h. Para o isolamento de E. coli, as amostras foram semeadas em ágar MacConkey, com incubação a 37º C por 24 h. As colônias suspeitas foram identificadas por série bioquímica. A técnica de PCR foi utilizada para a confirmação do gênero Salmonella spp, identificação dos sorovares de S. Enteritidis e S. Typhimurium e para a determinação dos fatores de virulência de Escherichia coli. Dentre os 118 animais analisados, 4,23% (5/118) foram positivos para Salmonella spp, sendo todos do sorovar S. Typhimurium. Foram identificadas estirpes diarreiogênicas de E. coli, positivas para os fatores de virulência eae (8/118), bfp (4/118) e stx2f (3/118). Na análise filogenética pela técnica de AFLP, as estirpes de E. coli diarreiogênicas apresentaram uma diversidade genética, mas as estirpes de S. Typhimurium foram consideradas clonais. Os dados deste trabalho destacam o risco sanitário relacionado ao forrageamento da espécie Columba livia em zoológicos, por meio da confirmação da presença de Salmonella Typhimurium, EPEC típica, EPEC atípica e STEC nas excretas destas aves / Pigeons (Columba livia) are exotic birds, synanthropic and reservoirs of some zoonotic diseases. The aim of this study was to characterize genotypically isolates of Salmonella spp. and diarrheagenic strains of Escherichia coli isolated from domestic pigeons. Fecal swabs of 118 pigeons were collected from two zoos in São Paulo. The samples were subjected to a pre-enrichment step being placed in peptone water solution of 0.1% and incubated for 24-48 h at 37º C. Thereafter it was performed selective enrichment step where the samples were transferred in sodium tetrathionate broth with incubation for 24-48 h at 37º C, followed by plating on selective medium XLT4 incubation for 24-48h at 37º C for isolation and identification of Salmonella spp. The samples were also placed in BHI broth for a period of 24 h and then plated on MacConkey medium with incubation for 24h at 37º C for isolation of E. coli. Subsequent microbiological step, the isolates were subjected to DNA extraction using the methodology described by Boom for PCR. Polymerase chain reaction (PCR) was employed for identification of the Salmonella serovar Enteritidis and Typhimurium and virulence factors of E. coli. Of the 118 animals tested, 4.23% (5/118) were positive for Salmonella spp., all characterized as being serovar S. Typhimurium. Some E. coli strains (8/118) were positive for virulence factors: eae, 3,38% (4/118), bfp and 2.54% (3/118) to stx2f. In phylogenetic analysis by AFLP, strains of diarrheagenic E. coli showed a genetic diversity, but S. Typhimurium presented a clonal relationship. Data from this study highlight the health risk related to the foraging of Columba livia in zoos, because they can be reservoirs of Salmonella Typhimurium, typical and atypical EPEC and STEC

Pombos (Columba livia) são aves exóticas, sinantrópicas, reservatórios de algumas doenças de caráter zoonótico. O presente trabalho teve por objetivo caracterizar genotipicamente isolados de Salmonella spp. e Escherichia coli diarreiogênicas de pombos domésticos. Foram coletados suabes de 118 pombos provenientes de dois zoológicos de São Paulo. Para a identificação de Salmonella spp, as amostras foram submetidas ao pré-enriquecimento em água peptonada 0,1% e incubadas a 37º C por 24-48 horas, seguida do enriquecimento seletivo em caldo de tetrationato de sódio, com incubação a 37º C por 24-48h e plaqueamento em meio seletivo XLT4, a 37º C por 24-48h. Para o isolamento de E. coli, as amostras foram semeadas em ágar MacConkey, com incubação a 37º C por 24 h. As colônias suspeitas foram identificadas por série bioquímica. A técnica de PCR foi utilizada para a confirmação do gênero Salmonella spp, identificação dos sorovares de S. Enteritidis e S. Typhimurium e para a determinação dos fatores de virulência de Escherichia coli. Dentre os 118 animais analisados, 4,23% (5/118) foram positivos para Salmonella spp, sendo todos do sorovar S. Typhimurium. Foram identificadas estirpes diarreiogênicas de E. coli, positivas para os fatores de virulência eae (8/118), bfp (4/118) e stx2f (3/118). Na análise filogenética pela técnica de AFLP, as estirpes de E. coli diarreiogênicas apresentaram uma diversidade genética, mas as estirpes de S. Typhimurium foram consideradas clonais. Os dados deste trabalho destacam o risco sanitário relacionado ao forrageamento da espécie Columba livia em zoológicos, por meio da confirmação da presença de Salmonella Typhimurium, EPEC típica, EPEC atípica e STEC nas excretas destas aves / Pigeons (Columba livia) are exotic birds, synanthropic and reservoirs of some zoonotic diseases. The aim of this study was to characterize genotypically isolates of Salmonella spp. and diarrheagenic strains of Escherichia coli isolated from domestic pigeons. Fecal swabs of 118 pigeons were collected from two zoos in São Paulo. The samples were subjected to a pre-enrichment step being placed in peptone water solution of 0.1% and incubated for 24-48 h at 37º C. Thereafter it was performed selective enrichment step where the samples were transferred in sodium tetrathionate broth with incubation for 24-48 h at 37º C, followed by plating on selective medium XLT4 incubation for 24-48h at 37º C for isolation and identification of Salmonella spp. The samples were also placed in BHI broth for a period of 24 h and then plated on MacConkey medium with incubation for 24h at 37º C for isolation of E. coli. Subsequent microbiological step, the isolates were subjected to DNA extraction using the methodology described by Boom for PCR. Polymerase chain reaction (PCR) was employed for identification of the Salmonella serovar Enteritidis and Typhimurium and virulence factors of E. coli. Of the 118 animals tested, 4.23% (5/118) were positive for Salmonella spp., all characterized as being serovar S. Typhimurium. Some E. coli strains (8/118) were positive for virulence factors: eae, 3,38% (4/118), bfp and 2.54% (3/118) to stx2f. In phylogenetic analysis by AFLP, strains of diarrheagenic E. coli showed a genetic diversity, but S. Typhimurium presented a clonal relationship. Data from this study highlight the health risk related to the foraging of Columba livia in zoos, because they can be reservoirs of Salmonella Typhimurium, typical and atypical EPEC and STEC

Escherichia coli enteropatogênica causa uma lesão denominada attaching and effacing, codificadas por genes presentes na região LEE, que está sujeita a regulação por diferentes fatores incluindo por quorum sensing. O veneno de Bothrops jararaca é uma mistura de vários componentes com diferentes efeitos biológicos. Para analisar o efeito de suas frações na interação de EPEC com HEp-2, o veneno foi ultrafiltrado. Testes mostraram que a concentração de 100 ng de fração causou um aumento de adesão bacteriana, sugerindo componente no veneno que potencializa a adesão até certa concentração. Fenótipo das amostras com concentração mais alta foi parecido ao do controle, exceto com 1000 ng da menor fração, onde a adesão foi menor, sugerindo que há componente que afeta negativamente a adesão bacteriana em concentração maior. Estes resultados mostram como diferentes componentes de veneno de serpentes afetam a interação bactéria-célula hospedeira, e apresentam potencial biológico de componentes de baixo peso molecular no veneno. / Enteropathogenic Escherichia coli causes a lesion named attaching and effacing, encoded by genes present in LEE region, which is subject to regulation by different factors including quorum sensing. Bothrops jararaca venom is a mixture of different components with different biological effects. To analyze the effect of its fractions in interactions between EPEC and HEp-2, venom was ultrafiltered. Tests showed that a fraction concentration of 100 ng caused an increase of adherence when compared to the control, suggesting that there is a component in the venom that potentiates the adherence up to a certain concentration. Phenotype of samples with higher concentration were similar to that of the control, except the one with 1000 ng of the lowest fraction, where adherence decreased, indicating that there is a component able to negatively affect adherence when in higher concentration. These results show how different snake venom components can affect a bacteria-host cell interaction, and present biological potential of components of low molecular weight present in venom.

Dentre os psitacídeos criados como pets, destacam-se as calopsitas (Nymphicus hollandicus), os periquitos-australianos (Melopsittacus undulatus) e agapornis (Agapornis spp.). Os benefícios decorrentes da presença destas aves em ambiente doméstico são reconhecidos, porém pouco se conhece sobre os riscos de transmissão de zoonoses. E. coli pode ser isolada em diversos sítios do corpo humano e animal. Alguns sorotipos são considerados patogênicos e, nestes casos, a infecção pode estar associada à ocorrência de diversas manifestações clínicas. O presente estudo tem como objetivo a caracterização fenotípica e genotípica de Escherichia coli diarreiogênicas isoladas de pequenos psitacídeos mantidos como pets. 171 amostras de fezes de aves domiciliadas na cidade de São Paulo foram colhidas com auxílio de suabes estéreis, sendo 67 de calopsitas, 59 de periquitos australianos e 45 agapornis. Das 171 amostras, foram identificadas 42 colônias de Escherichia coli (22 de calopsitas, 10 de periquitos e 10 de agapornis), submetidas à extração de DNA e pesquisa dos genes eae, bfpA, stx1, stx2, LT, ST e aggR ; aaiA ; aatA ; aaiG pela Reac?a?o em Cadeia da Polimerase (PCR). Os resultados apontaram positividade em dez isolados: eae+, bfpA+, Stx2f+ de três calopsitas e cinco periquitos australianos (8/10); ST de uma calopsita (1/10) e eae+ de um periquito australiano (1/10). As oito estirpes de STEC/tEPEC foram classificadas como O137:HNM e nenhuma das estirpes exibiu um perfil de multirresistência. Apenas um isolado foi positivo para formação de biofilme (DO de 0,064), sendo classificado como fracamente aderente. A análise filogenética dos 4 grupos de Clermont et al. (2013) classificou três estirpes como B2, duas como F, e uma como Clado II. Duas estirpes foram classificadas como \"não tipável\". Os resultados para o AFLP foram: 7/8 estirpes (três de calopsitas e quatro de periquitos) foram agrupadas em um mesmo cluster, apresentando 90-100% de similaridade. Os resultados do sequenciamento de fragmentos internos de genes house-keeping - Multi-locus Sequence Typing (MLST) revelou que as oito estirpes pertenciam ao ST 3072. Neste estudo, nenhuma das estirpes apresentou atividade hemolítica, mas produziram toxinas in vitro. Aderiram in vitro em células HeLa e causaram lesões A/E em modelo de alça intestinal de coelho. As estirpes induziram processo inflamatório e aumento de muco intestinal. Os dados deste trabalho revelaram o potencial zoonótico dos híbridos STEC/tEPEC sorogrupo O137:HNM; ST 3072 isolados de psitacídeos de pequeno porte criados como \"pet\". / Among the parrots (psittacidae family) kept as pets, the cockatiels (Nymphicus hollandicus), budgerigars (Melopsittacus undulatus) and lovebirds (Lovebirds spp.) stand out. Although the benefits from the presence of these birds in a household environment are acknowledged, little is known about the risks of transmission of zoonoses. E. coli can be isolated in various sites of the human and animal body. Some serotypes are considered as pathogenic, and in such cases, the infection may be associated with the occurrence of several clinical manifestations. The aim of the present study is to characterize, phenotypically and genotypically, diarrheagenic Escherichia coli, isolated from the small parrots kept as pets. One hundred and seventy-one fecal samples of birds living in households in the city of Sa?o Paulo were collected with the aid of sterile swabs, with 67 being from cockatiels, 59 from budgerigars, and 45 from lovebirds. From the 171 samples, 42 (22 from cockatiels, 10 from budgerigars and 10 from lovebirds) Escherichia coli colonies were identified, which had their DNA extracted, and the eae, bfpA, stx1, stx2, LT, ST and aggR; aaiA; aatA; aaiG genes were investigated, through Polymerase Chain Reaction (PCR). The results indicated positivity in ten isolates: eae+, bfpA+, Stx2f+ from three cockatiels and five budgerigars (8/10), ST from one cockatiel (1/10), and eae+ from one budgerigar (1/10). The eight STEC/tEPEC lineages were classified as O137:HNM, and none of the lineages showed a multiresistance antibiotic profile. Only one isolate was positive for biofilm formation (DO, 0.064), which was classified as weakly adherent. The phylogenetic analysis of the 4 groups by Clermont et al. (2013) classified three lineages as B2, two as F, and one as Clade II. Two lineages were classified as \"non-typeable.\" The results for AFLP were: 7/8 lineages (three of cockatiels and four of budgerigars) were clustered together, with 90-100% of similarity being observed. The results of the internal fragment sequencing of house- keeping genes - Multi-locus Sequence Typing (MLST) revealed that the eight lineages belonged in to ST 3072. In this study, although none of the lineages showed hemolytic activity, they produced toxins in vitro. They adhered, in vitro, to HeLa cells and caused A/E lesions in an intestinal loop model of rabbits. The lineages induced an inflammatory process and an increase of intestinal mucus. This study data revealed the zoonotic potential of STEC/tEPEC hybrids, O137:HNM; ST 3072 serogroup, isolated from small-sized parrots kept as pets

Ovinos são considerados reservatórios de Escherichia coli produtora da toxina Shiga (STEC). Este estudo pesquisou amostras de 100 carneiros no Estado de São Paulo. PCR foi empregada para detecção de stx1, stx2, eae, ehx, e intiminas. RFLP-PCR foi realizado para identificação das variantes de stx1/stx2 e fliC. Cinco isolados eae+stx- de sorotipos O128:H2, O145:H2, O153:H7 e O178:H7 apresentaram intiminas b, g e e. Cinqüenta e seis STEC foram obtidos e os genótipos foram stx1cstx2d-O118 (56,1%), stx1c (33,3%), stx2d-O118 (7,6%), e stx1cstx2dOX3a (3%). Os sorotipos mais freqüentes foram ONT:H8, ONT:H-, O75:H-, O174:H8 e O5:H-. Gene fliC codificando para H2, H8, H14, H16, H19, H21 ou H28 foi identificado em 25/33 isolados. ehx foi detectado em três/cinco EPEC Atípicas e em 38 (57,6%) STEC. Sensibilidade aos antimicrobianos foi observada em 77,2% dos isolados STEC. A análise da similaridade genética por PFGE revelou 24 perfis entre 40 isolados STEC e EPEC atípicas. O estudo demonstrou que ovinos saudáveis podem se comportar como reservatórios de STEC e EPEC atípica. / Lambs are reported as carriers of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) worldwide. This study surveyed 100 sheep in São Paulo, Brazil. PCR was used for detection of stx1, stx2, eae, ehx, and intimins. RFLP-PCR investigated the stx1/stx2 variants and flagellar antigen (fliC). Five isolates were eae+/stx-, belonging to serotypes O128:H2, O145:H2, O153:H7 and O178:H7, harboring b, g and e intimins. Fifty-six STEC isolates were recovered, and stx genotypes were stx1cstx2d-O118 (56.1%), stx1c (33.3%), stx2d-O118 (7.6%), and stx1cstx2dOX3a (3%). A diversity of STEC serotypes was observed, but most frequent were ONT:H8, ONT:H-, O75:H-, O174:H8 and O5:H-. fliC gene coding for H2, H8, H14, H16, H19, H21 or H28 was identified in 25/33 isolates. ehx gene was detected in three Atypical EPEC and in 38 (57,6%) STEC. Fifty-one (77.2%) STEC were susceptible to antimicrobials tested. Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) revealed 24/40 profiles. The study showed that healthy ovine can be carrier of STEC and atypical EPEC in Brazil.

Dentre os psitacídeos criados como pets, destacam-se as calopsitas (Nymphicus hollandicus), os periquitos-australianos (Melopsittacus undulatus) e agapornis (Agapornis spp.). Os benefícios decorrentes da presença destas aves em ambiente doméstico são reconhecidos, porém pouco se conhece sobre os riscos de transmissão de zoonoses. E. coli pode ser isolada em diversos sítios do corpo humano e animal. Alguns sorotipos são considerados patogênicos e, nestes casos, a infecção pode estar associada à ocorrência de diversas manifestações clínicas. O presente estudo tem como objetivo a caracterização fenotípica e genotípica de Escherichia coli diarreiogênicas isoladas de pequenos psitacídeos mantidos como pets. 171 amostras de fezes de aves domiciliadas na cidade de São Paulo foram colhidas com auxílio de suabes estéreis, sendo 67 de calopsitas, 59 de periquitos australianos e 45 agapornis. Das 171 amostras, foram identificadas 42 colônias de Escherichia coli (22 de calopsitas, 10 de periquitos e 10 de agapornis), submetidas à extração de DNA e pesquisa dos genes eae, bfpA, stx1, stx2, LT, ST e aggR ; aaiA ; aatA ; aaiG pela Reac?a?o em Cadeia da Polimerase (PCR). Os resultados apontaram positividade em dez isolados: eae+, bfpA+, Stx2f+ de três calopsitas e cinco periquitos australianos (8/10); ST de uma calopsita (1/10) e eae+ de um periquito australiano (1/10). As oito estirpes de STEC/tEPEC foram classificadas como O137:HNM e nenhuma das estirpes exibiu um perfil de multirresistência. Apenas um isolado foi positivo para formação de biofilme (DO de 0,064), sendo classificado como fracamente aderente. A análise filogenética dos 4 grupos de Clermont et al. (2013) classificou três estirpes como B2, duas como F, e uma como Clado II. Duas estirpes foram classificadas como \"não tipável\". Os resultados para o AFLP foram: 7/8 estirpes (três de calopsitas e quatro de periquitos) foram agrupadas em um mesmo cluster, apresentando 90-100% de similaridade. Os resultados do sequenciamento de fragmentos internos de genes house-keeping - Multi-locus Sequence Typing (MLST) revelou que as oito estirpes pertenciam ao ST 3072. Neste estudo, nenhuma das estirpes apresentou atividade hemolítica, mas produziram toxinas in vitro. Aderiram in vitro em células HeLa e causaram lesões A/E em modelo de alça intestinal de coelho. As estirpes induziram processo inflamatório e aumento de muco intestinal. Os dados deste trabalho revelaram o potencial zoonótico dos híbridos STEC/tEPEC sorogrupo O137:HNM; ST 3072 isolados de psitacídeos de pequeno porte criados como \"pet\". / Among the parrots (psittacidae family) kept as pets, the cockatiels (Nymphicus hollandicus), budgerigars (Melopsittacus undulatus) and lovebirds (Lovebirds spp.) stand out. Although the benefits from the presence of these birds in a household environment are acknowledged, little is known about the risks of transmission of zoonoses. E. coli can be isolated in various sites of the human and animal body. Some serotypes are considered as pathogenic, and in such cases, the infection may be associated with the occurrence of several clinical manifestations. The aim of the present study is to characterize, phenotypically and genotypically, diarrheagenic Escherichia coli, isolated from the small parrots kept as pets. One hundred and seventy-one fecal samples of birds living in households in the city of Sa?o Paulo were collected with the aid of sterile swabs, with 67 being from cockatiels, 59 from budgerigars, and 45 from lovebirds. From the 171 samples, 42 (22 from cockatiels, 10 from budgerigars and 10 from lovebirds) Escherichia coli colonies were identified, which had their DNA extracted, and the eae, bfpA, stx1, stx2, LT, ST and aggR; aaiA; aatA; aaiG genes were investigated, through Polymerase Chain Reaction (PCR). The results indicated positivity in ten isolates: eae+, bfpA+, Stx2f+ from three cockatiels and five budgerigars (8/10), ST from one cockatiel (1/10), and eae+ from one budgerigar (1/10). The eight STEC/tEPEC lineages were classified as O137:HNM, and none of the lineages showed a multiresistance antibiotic profile. Only one isolate was positive for biofilm formation (DO, 0.064), which was classified as weakly adherent. The phylogenetic analysis of the 4 groups by Clermont et al. (2013) classified three lineages as B2, two as F, and one as Clade II. Two lineages were classified as \"non-typeable.\" The results for AFLP were: 7/8 lineages (three of cockatiels and four of budgerigars) were clustered together, with 90-100% of similarity being observed. The results of the internal fragment sequencing of house- keeping genes - Multi-locus Sequence Typing (MLST) revealed that the eight lineages belonged in to ST 3072. In this study, although none of the lineages showed hemolytic activity, they produced toxins in vitro. They adhered, in vitro, to HeLa cells and caused A/E lesions in an intestinal loop model of rabbits. The lineages induced an inflammatory process and an increase of intestinal mucus. This study data revealed the zoonotic potential of STEC/tEPEC hybrids, O137:HNM; ST 3072 serogroup, isolated from small-sized parrots kept as pets

Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é um dos principais agentes de diarréia em crianças nos países em desenvolvimento. Esse patótipo pode ser classificado em dois grupos: EPEC típica (t-EPEC) e EPEC atípica (a-EPEC). O objetivo principal deste estudo foi traçar o perfil plasmidial de 78 amostras de a-EPEC bem como investigar em 72 amostras a presença de genes de virulência descritos em outros patótipos de DEC para procura de um marcador de virulência específico deste grupo de amostras. Foi detectada a presença de alguns genes de virulência como: pet (5,5%), pic (2,7%), astA (18%), efa1/lifA, toxB (2,7%), ldaH (8,3%) e ehly1 (4,2%). Os perfis plasmidiais obtidos permitiram verificar que entre as 78 amostras analisadas, 12 não possuem plasmídio, 33 possuem plasmídios entre 50 a 90 kb e 38 possuem plasmídios entre 90 a 124 kb. A pesquisa dos grupos de incompatibilidade revelou que os grupos IncFIB e IncF são os mais freqüentes entre as amostras de a-EPEC. Os resultados de RFLP do DNA plasmidial das amostras do sorotipo O55:H7 sugeriu que existem seqüências de nucleotídeos comuns entre os plasmídios. Os dados obtidos também permitiram inferir a existência de fragmentos de DNA plasmidial comum entre amostras de EHEC O157:H7 e amostras de a-EPEC O55:H7. A função biológica dos plasmídios de a-EPEC e a relação com o plasmídio pO157 necessitam de estudos complementares. / Escherichia coli (EPEC) is one of the main agents of diarrhea in children in developing countries. This pathotype can be classified in two groups: typical EPEC (t-EPEC) and atypical EPEC (a-EPEC). The aim of this study was to determine the plasmid profile of 78 strains of a-EPEC and investigate 72 strains for the presence of virulence genes described in other DEC. It was detected the presence of some virulence genes: pet (5,5%), pic (2,7%), astA (18%), efa1/lifA, toxB (2,7%), ldaH (8,3%) e ehly1 (4,2%). The plasmid profiles obtained allowed us to verify that among the 78 samples analyzed, 12 did not have plasmids, 33 strains have plasmids ranging between 50 and 90 kb, and 38 have plasmids ranging between 90 to 124 kb. Incompatibility groups analysis revealed that IncFIB and IncF groups are the most frequent among the samples of a-EPEC. RFLP analysis of plasmid DNA of strains of serotype O55:H7 suggested that there are nucleotide sequences common to the plasmids. The data also allowed inferring the existence of fragments of plasmid DNA common to EHEC O157:H7 and a-EPEC O55:H7. The biological function of aEPEC plasmid and the relationship with pO157 requires further studies.

Ovinos são considerados reservatórios de Escherichia coli produtora da toxina Shiga (STEC). Este estudo pesquisou amostras de 100 carneiros no Estado de São Paulo. PCR foi empregada para detecção de stx1, stx2, eae, ehx, e intiminas. RFLP-PCR foi realizado para identificação das variantes de stx1/stx2 e fliC. Cinco isolados eae+stx- de sorotipos O128:H2, O145:H2, O153:H7 e O178:H7 apresentaram intiminas b, g e e. Cinqüenta e seis STEC foram obtidos e os genótipos foram stx1cstx2d-O118 (56,1%), stx1c (33,3%), stx2d-O118 (7,6%), e stx1cstx2dOX3a (3%). Os sorotipos mais freqüentes foram ONT:H8, ONT:H-, O75:H-, O174:H8 e O5:H-. Gene fliC codificando para H2, H8, H14, H16, H19, H21 ou H28 foi identificado em 25/33 isolados. ehx foi detectado em três/cinco EPEC Atípicas e em 38 (57,6%) STEC. Sensibilidade aos antimicrobianos foi observada em 77,2% dos isolados STEC. A análise da similaridade genética por PFGE revelou 24 perfis entre 40 isolados STEC e EPEC atípicas. O estudo demonstrou que ovinos saudáveis podem se comportar como reservatórios de STEC e EPEC atípica. / Lambs are reported as carriers of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) worldwide. This study surveyed 100 sheep in São Paulo, Brazil. PCR was used for detection of stx1, stx2, eae, ehx, and intimins. RFLP-PCR investigated the stx1/stx2 variants and flagellar antigen (fliC). Five isolates were eae+/stx-, belonging to serotypes O128:H2, O145:H2, O153:H7 and O178:H7, harboring b, g and e intimins. Fifty-six STEC isolates were recovered, and stx genotypes were stx1cstx2d-O118 (56.1%), stx1c (33.3%), stx2d-O118 (7.6%), and stx1cstx2dOX3a (3%). A diversity of STEC serotypes was observed, but most frequent were ONT:H8, ONT:H-, O75:H-, O174:H8 and O5:H-. fliC gene coding for H2, H8, H14, H16, H19, H21 or H28 was identified in 25/33 isolates. ehx gene was detected in three Atypical EPEC and in 38 (57,6%) STEC. Fifty-one (77.2%) STEC were susceptible to antimicrobials tested. Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) revealed 24/40 profiles. The study showed that healthy ovine can be carrier of STEC and atypical EPEC in Brazil.