La contamination des zones littorales par des bactéries entériques potentiellement pathogènes pour l’Homme constitue un problème majeur pour la pérennité de certains usages tel que la conchyliculture. Ces bactéries provenant de rejets agricoles ou urbains peuvent atteindre les zones conchylicoles et être impliquées dans des toxi-infections alimentaires collectives (TIAC). Actuellement, très peu de données sont disponibles sur la présence et la diversité des bactéries entériques telles que les Escherichia coli (E. coli) pathogènes de type E. coli producteurs de Shiga-toxines (STEC) et E.coli entéropathogènes (EPEC) dans les coquillages en France.La présence de ces E. coli pathogènes a été recherchée pendant deux ans, dans trois zones conchylicoles françaises et leurs bassins versants. Un total de 28 souches STEC et 89 souches EPEC différentes ont été isolées dans des coquillages, des eaux aux exutoires, le sédiment et l’eau de mer, représentant 1% de la totalité des souches E. coli isolées (n=12016). Ces souches isolées présentaient néanmoins une grande diversité. Elles étaient réparties au sein de 73 profils de virulence différents dont une souche STEC de sérotype O26 :H11 présentant 47 gènes de virulence isolée dans un lot de moule. Soixante-quinze pourcents des souches EPEC présentaient des gènes de virulence associés à des îlots de pathogénicités caractéristiques de souches pathogènes responsables d’infection grave chez l’Homme, révélant le potentiel pouvoir pathogène de certaines souches. Enfin, l’étude de la cinétique de contamination, décontamination d’huîtres au contact de souches STEC, n’a pas montré de différence comparée à un E. coli non STEC.Les travaux réalisés au cours de cette thèse sont à notre connaissance les premiers de ce genre. Ils ont permis de mettre en évidence la faible présence de STEC et de EPEC au niveau des zones conchylicoles françaises étudiées ainsi que le potentiel pouvoir pathogène de certaines souches. La faible prévalence des souches sur ces sites de catégorie B ou C (purification des coquillages avant commercialisation) reste néanmoins plutôt en faveur d’un risque faible de contamination dans les zones sélectionnées. Les résultats acquis au cours de cette thèse sont des éléments importants pour mieux appréhender le risque sanitaire potentiel lié aux STEC et aux EPEC en zone littorale. / The contamination of coastal areas by potentially pathogenic enteric bacteria is of concern for the sustainability of some uses, such as shellfish farming, recreational shellfish harvesting and bathing. The contamination of these environments may occur through the land-spreading of livestock wastes, animal feces deposited on pastures, wastewaters from slaughterhouses. The presence of these bacteria in coastal environment may present a potential risk to human health. In fact, shellfish-borne outbreaks may occur by the consumption of shellfish from contaminated areas. To date, few studies focusing on the presence and the diversity of enteric bacteria, such as pathogenic Escherichia coli (E. coli) more precisely, Shiga-toxin-producing E. coli (STEC) and enteropathogenic E. coli (EPEC) in coastal environments and shellfish have been reported.For this purpose, during a 2-year study, shellfish batches, freshwater, seawater, and surface sediment samples from three French selected shellfish-harvesting areas and their upstream catchments, were analyzed to evaluate the presence of STEC and EPEC strains. Twenty-eight STEC and 89 EPEC strains were isolated representing 1% of the total E. coli(n=12 016). The isolated STEC and EPEC strains belonged to a high diversity. One STEC strain isolated from a mussel batch, belonging to the serotype O26:H11 displayed 47 additional virulence genes. Seventy-five percent of EPEC strains displayed several virulence genes associated with pathogenicity islands specific to pathogenic E. coli involved in human infections.No difference in the kinetics of the contamination and depuration of oysters by STEC and non-STEC E. coli was found.To our knowledge, this study is the first to focus on the diversity of STEC and EPEC strains isolated from coastal environments. This study highlights the weak presence of STECs and EPECs in the French shellfish-harvesting areas studied and a potential pathogenicity of some strains. The low prevalence of STEC and EPEC strains in shellfish fromB- and C-categories (depuration of shellfish before commercialization), is rather in favor of a limited risk of contamination of shellfish in the studied areas. The results obtained during this study are important to better understand the health risk associated with STEC and EPEC in coastal areas.

As Escherichia coli enteropatogênica atípicas (EPECa) são capazes de causar a lesão A/E e não transportam o pEAF. Biofilmes microbianos são definidos como comunidades complexas formadas por microrganismos aderidos a superfícies envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de formação de biofilme de 92 amostras de EPEC atípicas em superfícies abióticas e células pré-fixadas, utilizando três metodologias (contagem de UFC/cm2), ensaio colorimétrico com cristal violeta e CLSM). O gene shf e bfpA parecem não ter relação com a formação de biofilme. Não houve diferença significativa de formação de biofilme nas superfícies testadas. Através de CLSM foi possível verificar a formação de biofilme em EPECa. Os biofilmes visualizados em CLSM revelaram uma grande heterogeneidade das amostras. Uma metodologia qualitativa, como CLSM deve ser empregada para indicar a formação de biofilme. A adesão e formação de biofilme por EPEC atípica de longo período pode ser uma possível explicação para os casos de diarréia persistente. / The atypical Escherichia coli enteropathogenic (EPECa) are capable to cause the lesion A/E and they don\'t transport the pEAF. Microbial biofilms are defined as complex communities formed by microrganisms adhered to surfaces embedded in an exopolysacharidic matrix. The objective of this study was to verify the capacity of formation of biofilm of 92 strains of atypical EPEC in abiotics and pre-fixed cells surfaces, using three methodologies (counting of UFC/cm2), colorimetric assay with violet crystal and CLSM). The gene shf and bfpA seem not to have relationship with the biofilm formation. There was not significant difference of biofilm formation in the tested surfaces. Through CLSM it was possible to verify the biofilm formation in EPECa. The biofilms visualized in CLSM revealed a great heterogeneity of the strains. A qualitative methodology, like CLSM should be used to indicate the biofilm formation. The adhesion and biofilm formation for atypical EPEC of long period can be a possible explanation for the cases of persistent diarrhea.

Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é um dos principais agentes de diarréia em crianças nos países em desenvolvimento. Esse patótipo pode ser classificado em dois grupos: EPEC típica (t-EPEC) e EPEC atípica (a-EPEC). O objetivo principal deste estudo foi traçar o perfil plasmidial de 78 amostras de a-EPEC bem como investigar em 72 amostras a presença de genes de virulência descritos em outros patótipos de DEC para procura de um marcador de virulência específico deste grupo de amostras. Foi detectada a presença de alguns genes de virulência como: pet (5,5%), pic (2,7%), astA (18%), efa1/lifA, toxB (2,7%), ldaH (8,3%) e ehly1 (4,2%). Os perfis plasmidiais obtidos permitiram verificar que entre as 78 amostras analisadas, 12 não possuem plasmídio, 33 possuem plasmídios entre 50 a 90 kb e 38 possuem plasmídios entre 90 a 124 kb. A pesquisa dos grupos de incompatibilidade revelou que os grupos IncFIB e IncF são os mais freqüentes entre as amostras de a-EPEC. Os resultados de RFLP do DNA plasmidial das amostras do sorotipo O55:H7 sugeriu que existem seqüências de nucleotídeos comuns entre os plasmídios. Os dados obtidos também permitiram inferir a existência de fragmentos de DNA plasmidial comum entre amostras de EHEC O157:H7 e amostras de a-EPEC O55:H7. A função biológica dos plasmídios de a-EPEC e a relação com o plasmídio pO157 necessitam de estudos complementares. / Escherichia coli (EPEC) is one of the main agents of diarrhea in children in developing countries. This pathotype can be classified in two groups: typical EPEC (t-EPEC) and atypical EPEC (a-EPEC). The aim of this study was to determine the plasmid profile of 78 strains of a-EPEC and investigate 72 strains for the presence of virulence genes described in other DEC. It was detected the presence of some virulence genes: pet (5,5%), pic (2,7%), astA (18%), efa1/lifA, toxB (2,7%), ldaH (8,3%) e ehly1 (4,2%). The plasmid profiles obtained allowed us to verify that among the 78 samples analyzed, 12 did not have plasmids, 33 strains have plasmids ranging between 50 and 90 kb, and 38 have plasmids ranging between 90 to 124 kb. Incompatibility groups analysis revealed that IncFIB and IncF groups are the most frequent among the samples of a-EPEC. RFLP analysis of plasmid DNA of strains of serotype O55:H7 suggested that there are nucleotide sequences common to the plasmids. The data also allowed inferring the existence of fragments of plasmid DNA common to EHEC O157:H7 and a-EPEC O55:H7. The biological function of aEPEC plasmid and the relationship with pO157 requires further studies.

Yes / Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is usually associated with outbreaks and sporadic cases of severe infantile diarrhoea in the developing world, and less commonly with sporadic cases in developed countries. Very little evidence indicates that EPEC is a food-borne pathogen for adults. In a previous study, two groups of adult travellers became ill, and eae+ E. coli of serogroup O111 was isolated from affected individuals and epidemiologically linked to food consumption. Here the strain responsible was further investigated and characterized as an unusual atypical EPEC. PCR analysis of the designated type isolate showed the presence of the rorf1 and espB genes of the LEE pathogenicity island, which was inserted at the chromosomal selC locus. The isolate was negative for the enteroaggregative E. coli EAST-1 toxin present in other strains of EPEC associated with food-borne outbreaks. The strain adhered sparsely to HEp-2 cell monolayers in a diffuse manner, but fluorescent actin staining demonstrated that it was capable of inducing polymerization of actin at the sites of bacterial attachment. Strain P2583 is the first EAST-negative EPEC to be confirmed as a cause of outbreaks of infection in adults following the consumption of contaminated food or water.

Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is an enteric pathogen that causes potentially fatal infantile diarrhea. A type III secretion system is employed by EPEC to inject bacterial effector proteins directly into host intestinal epithelial cells. The multivalent chaperone, CesT, interacts with nine effectors and is a significant contributor to EPEC pathogenesis. A putative transcriptional promoter region was identified directly upstream of cesT. In silico analyses identified conserved elements that suggest the cesT promoter is recognized by ?70. Using transcriptional fusions to lux reporter genes I showed that the cesT promoter region is active under conditions known to induce virulence-gene expression. I conclude that the cesT promoter is active early during an in vitro assay, and regulated by different mechanisms than those affecting the Ptir operon promoter.

Submitted by Letícia Fernanda Lavezzo (leticialavezzo.unesp@hotmail.com) on 2016-03-23T20:23:19Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Letícia_Fernanda_Lavezzo.pdf: 1419993 bytes, checksum: 8e337d69094b988dba50c9a0bee85085 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-24T18:21:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lavezzo_lf_me_jabo.pdf: 1419993 bytes, checksum: 8e337d69094b988dba50c9a0bee85085 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-24T18:21:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lavezzo_lf_me_jabo.pdf: 1419993 bytes, checksum: 8e337d69094b988dba50c9a0bee85085 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O lodo de esgoto é uma alternativa como fertilizante orgânico na agricultura, porém em sua composição pode apresentar patógenos que oferecem risco ao homem e ao ambiente. Objetivou-se, com o presente estudo, avaliar a fertilidade do solo, e a presença de ovos viáveis de helmintos, coliformes termotolerantes, Escherichia coli para os patótipos EHEC, EPEC e STEC e a atividade enzimática das enzimas protease, redutase do nitrato e urease no solo após dezoito anos de aplicações anuais de lodo de esgoto em um Latossolo Vermelho eutroférrico (LVef) e Latossolo Vermelho distrófico (LVd). O lodo utilizado foi obtido na SABESP de Franca, São Paulo e o experimento foi instalado em delineamento de blocos cazualiados, sendo 4 tratamentos e 5 repetições. Os tratamentos foram T1: controle, apenas com aplicação de adubação mineral, T2: 5, T3: 10 e T4: 20 Mg ha-1 de LE. Antes de ser incorporado ao solo, realizou-se análise do lodo para ovos viáveis de helmintos e coliformes termotolerantes. Aos 40 dias, coletou-se amostras de solo na profundidade de 0-10 cm para avalição de ovos viáveis de helmintos no solo. Aos 70 dias, coletou-se amostras de solo na profundidade de 0-20cm para a análise da fertilidade. Para a análise de coliformes termotolerantes, seguindo a técnica de tubos múltiplos, as amostras foram coletadas no dia 0, 26, 40 e aos 78 dias. Para a realização da reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificar a presença de Escherichia coli, coletou-se amostras de solo antes do início do experimento, no dia 0, aos 26 dias, 40, 58, 78, 110 e 146 dias. Para a avaliação da atividade enzimática, as amostras foram coletadas em profundidade de 0-10cm, nos dias 0, 40, 78 e aos 146 dias. Os atributos químicos do solo apresentaram efeito significativo entre os tratamentos utilizados. A análise do solo incorporado com o resíduo apresentou ausência total de ovos viáveis de helmintos no solo após 40 dias da aplicação do LE. Os valores de termotolerantes nos solos variaram entre zero a 1,1x106 Número Mais Provável de Sólidos Totais durante o período de 0 a 26 dias. Para análise de Escherichia coli do lodo e do solo, mostrou ausência dos patótipos de EHEC, EPEC e STEC por meio dos primers para os genes stx1, stx2 e aea. A atividade enzimática das enzimas proteases, redutase do nitrato e urease, ao londo do experimento, não apresentaram diferença estatística entre tratamentos. A aplicação do lodo de esgoto por 18 anos consecutivos influenciou nos atributos químicos do solo, não apresentou risco potencial de contaminação do solo por ovos de helmintos e Escherichia coli e não diferiu na atividade enzimática do solo. / The sewage sludge is an alternative as organic fertilizer to use in agriculture, but in its composition may have pathogens that offer to humans and the environment risks. The present study objective was to evaluate soil fertility, and the presence of viable helminth eggs, fecal coliforms, Escherichia coli for pathotypes EHEC, EPEC and STEC and the enzymatic activity of protease enzymes, nitrate reductase and urease in the soil after eighteen years of annual applications of sewage sludge in an Oxisol (LVef) and Oxisol (LVd). The sludge used was obtained in SABESP Franca, São Paulo and the experiment was installed in designing cazualiados blocks, 4 treatments and 5 repetitions. Treatments were T1: control, only with application of mineral fertilizer, T2: 5, T3: T4 10 and 20 Mg ha-1 LE. Before being incorporated into the soil, there was sludge analysis for viable helminth eggs and fecal coliforms. At 40 days, it is collected soil samples at a depth of 0-10 cm for viable helminth eggs evaluation in the soil. After 70 days it is collected soil samples at a depth of 0-20cm for fertility analysis. For fecal coliforms analysis, following the technique of multiple pipes, the samples were collected at day 0, 26, 40 and 78 days. To carry out the polymerase chain reaction (PCR) for the presence of Escherichia coli was collected from soil samples before the beginning of the experiment at day 0, after 26 days 40, 58, 78, 110 and 146 days . For the evaluation of enzyme activity, samples were collected at a depth of 0-10cm, on days 0, 40, 78 and 146 days. The soil chemical properties showed significant effects between treatments. Soil testing embedded with the residue showed complete absence of viable helminth eggs in the soil 40 days after the application of the LE. The values in thermotolerant soil ranged from zero to 1,1x106 Most Probable Number of total solids during the period from 0 to 26 days. For Escherichia coli analysis sludge and soil, showed absence of pathotypes EHEC, EPEC and STEC through primers for stx1, stx2 and aea. The enzymatic activity of protease enzymes, nitrate reductase and urease to the experiment, showed no statistical difference between treatments. The application for 18 consecutive years sewage sludge influenced the soil chemical properties, showed no potential risk of soil contamination by helminth eggs and Escherichia coli and did not differ in the enzymatic activity of the soil.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaLSP_DISSERT_1-12.pdf: 307341 bytes, checksum: 501d00488698b866628dca8bc24c0c6e (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / Trata-se de um coorte prospectivo com amostras de leite de 28 m?es da zona rural da Para?ba, durante diferentes dias de amamenta??o exclusiva, com objetivo de avaliar atrav?s do ensaio imunoenzim?tico a presen?a de imunoglobulina A secretora (sIgA) total e espec?fica contra ant?genos de Escherichia coli enteropatog?nica (EPEC) e Shigella flexneri. A reatividade dos anticorpos foi analisada pelo Western blot . Os resultados mostram presen?a da sIgA em todas as amostras, com medianas no colostro de 8,092 g/L(4,546-17,252) e leite de 0,695g/L (0,020-2,830). As medianas nos t?tulos de colostro de IgA anti-EPEC foi 41 (1-659) e anti-Shigella flexneri de 18 (1-4727) enquanto no leite anti-EPEC foi de 8 (1-288) e anti-Shigella flexneri de 6 (1-450). Houve grandes varia??es entre as m?es e entre os dias de amamenta??o. No Western blot os anticorpos sIgA reagiram com prote?nas de EPEC e Shigella flexneri, destacando-se a fra??o antig?nica de 94kDa, correspondente a intimina. Os resultados mostram que a presen?a de sIgA total e de anticorpos IgA contra EPEC e Shigella flexneri no colostro e leite de m?es residentes em zona rural, com prec?rias condi??es s?cioecon?mica e sanit?rias, n?o diferem de estudos realizados com popula??es de ?rea urbana e refor?am a import?ncia do leite materno na defesa contra infec??es ent?ricas. Apesar da aus?ncia na literatura de estudos avaliando o perfil de anticorpos sIgA no leite de m?es residentes em zona rural do Brasil, os resultados demonstraram que a presen?a de sIgA total e de anticorpos IgA contra EPEC e Shigella flexneri no colostro e leite de m?es residentes em zona rural, com prec?rias condi??es s?cio-econ?mica e sanit?rias, n?o diferem de estudos realizados com popula??es de ?rea urbana e refor?am a import?ncia do leite materno na defesa contra infec??es ent?ricas

O aumento dos casos de diarreia causados por EPECa evoca a sua capacidade de adaptação e patogenicidade. O objetivo deste estudo foi investigar o comportamento da EPECa na interação com macrófagos (fagocitose e antifagocitose). O estudo da fagocitose das cepas LB7 (O55:H7), LB13 (O111:abH9) e BA487 (O55:H7) em macrófagos J774A1 mostrou sobrevivência intracelular em presença de NO. EPECa impede a maturação do vacúolo parasitóforo. A sobrevivência em macrófago derivado de C3H/HeJ, mutante do tlr4, foi reduzida e em macrófago de C57BL/6 não foi observada. O fator antigagocítico (Fa) secretado pela LB7, já detectado pelo grupo, apresenta natureza peptídica e a sua ação não é específica de EPEC, pois inibe também a fagocitose de Shigella e látex. A secreção do Fa foi avaliada em M9 e DMEM. O produto do fracionamento do sobrenadante do cultivo por SPE apresentou Fa em ambos meios. No entanto, a secreção em M9 é baixa e não foi detectada por HPLC. O Fa do DMEM obtido por HPLC mostrou-se citotóxico. Novos meios de cultivo deverão ser estudados para a identificação do Fa. / The increase in the numbers of diarrhea cases caused by aEPEC denotes its adaptability and pathogenicity. The objective of this study was to investigate the behavior of aEPEC in the interaction with macrophages (phagocytosis and anti-phagocytosis). Strains LB7 (O55:H7), LB13 (O111:abH9) and BA487 (O55:H7) were shown to survive within J774A1 macrophages in the presence of NO. aEPEC prevents maturation of the parasitophorus vacuole. Survival inside C3H/HeJ derived macrophages, mutant for tlr4, decreased and was not observed in C57BL/6 derived macrophages. The anti-phagocytic factor (AF), secreted by LB7 and previously detected by our group, is peptidic and its action is not specific to EPEC as it also inhibits phagocytosis of Shigella and latex. Secretion of AF was evaluated in M9 and DMEM. AF was detected after SPE fractionation of both culture media. However, the secretion in M9 is low and was not detected by HPLC. The DMEM HPLC fraction containing AF was cytotoxic. New culture media will be studied for the identification of AF.

O objetivo deste trabalho foi a construção de linhagens geneticamente modificadas de B. subtilis capazes de expressar porções de intimina, principal componente envolvido na capacidade de colonização de linhagens enteropatogênicas de Escherichia coli (EPEC), como estratégia vacinal de administração oral contra diarréias infecciosas. As vacinas desenvolvidas empregaram cinco regiões da intimina de EPEC e linhagens de B. subtilis capazes de expressar e acumular proteínas recombinantes no citoplasma. Além disso, avaliamos o uso de esporos e células vegetativas como veículos vacinais para a entrega de antígenos recombinantes a partir de sistema de expressão epissomal. A eficácia do modelo vacinal foi demonstrada pela: (i) produção de anticorpos sistêmicos (IgG) e secretados (sIgA) contra intimina, (ii) capacidade de neutralização das intiminas expressas por diferentes linhagens de EPEC pelos anticorpos específicos gerados nos animais imunizados; e (iii) proteção a desafio com linhagens de EPEC a partir de modelo experimental que emprega camundongos recém-nascidos. Os resultados representam uma etapa importante na validação de uma nova estratégia vacinal para o controle de patógenos entéricos. Além disto, propomos a utilização de um modelo animal como uma nova ferramenta para se avaliar o potencial protetor de vacinas contra EPEC. / The objective of this work was the construction of genetically modified strains of B. subtilis able to express portions of intimin, the main component involved in colonization by enteropathogenic Escherichia coli strains (EPEC) as a strategy of oral vaccination against infectious diarrhea. The vaccines employed five regions of EPEC intimin and B. subtilis strains expressing recombinant proteins in the cytoplasm. Furthermore, we evaluated the use of spores and vegetative cells as vaccine vehicles for the delivery of recombinant antigens based on an epissomal expression system. The efficacy of the vaccines was demonstrated by: (i) production of systemic (IgG) and mucosal (sIgA) antibody responses to intimin, (ii) neutralizing of intimin expressed by different strains of EPEC by the antibodies generated in immunized animals, and (iii) protection to lethal challenges carried out with EPEC strains using an experimental model based in newborn mice. The results represent an important step in the validation of a new vaccine strategy for the control of enteric pathogens. Moreover, we propose the use of an animal model as a new tool to evaluate the protective potential of vaccines against EPEC.

EPECa tem sido identificada como o principal agente de diarreia aguda em crianças de países em desenvolvimento. Biofilmes são estruturas bacterianas envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a influência de diferentes condições de cultivo na formação de biofilme por EPECa isoladas de crianças com diarreia e pesquisar a presença de genes relacionados com a formação de biofilme. As sequências genéticas dos genes csgA, crl, fimH e bcsA foram pesquisadas através da PCR e verificadas em 6 (26%), 23 (100%), 22 (95,6%) e 23 (100%) das amostras respectivamente. A formação de biofilme em placas de MTP por EPECa foi melhor evidenciada em meio LB sem sal a 26 °C e em caldo E. coli a 37 °C, tanto em número de amostras quanto em intensidade da formação de biofilme. As microscopias confocal e de varredura propiciaram uma análise qualitativa de microcolônias e pilares, além de EPS respectivamente. As condições de cultivo devem ser usadas com precaução para realmente aferir a capacidade de formação de biofilme por amostras de EPECa. / aEPEC has been identified as the main agent of acute diarrhea in children in developing countries. Biofilms are bacterial structures which are surrounded by a matrix of exopolysaccharides. The aim of this study was investigate the influence of different culture conditions on biofilm formation by 23 aEPEC strains isolated from children with diarrhea and search for the presence of genes related to biofilm formation. The genetic sequences of the csgA, crl, fimH and bcsA genes were screened by PCR and were found in 6 (26%), 23 (100%) 22 (95.6%) and 23 (100%) of the strains respectively. Biofilm formation in MTP plates for aEPEC strains was better evidenced in LB medium without NaCl at 26 ° C and in E. coli broth at 37 ° C, both in number and intensity of biofilm formation. The confocal and scanning electron microscopy provided a qualitative analysis of structures such as microcolonies and pillars, and respectively EPS. The growing conditions should be used with caution to measure the real ability of biofilm formation by strains of aEPEC.