A utilização de plantas na cura dos mais diversos males é tradicionalmente conhecida e utilizada há centenas de anos pela humanidade. As células vegetais produzem uma grande variedade de compostos químicos entre o metabolismo primário e secundário. Os produtos do metabolismo secundário são de especial interesse, pois são responsáveis por diversas ações biológicas. Informações etnobotânicas indicam que mais de 800 plantas são usadas como remédios tradicionais para o tratamento da diabetes. Muitas espécies pertencentes ao gênero Salacia têm sido descritas com atividade antidiabética, entre elas Salacia impressifolia. É uma espécie pertencente à família Celastraceae, conhecida popularmente no Brasil como miraruíra. Este trabalho visou desvendar a composição química desta espécie, utilizando para isso extratos obtidos a partir da casca e do caule. Em seguida, realizou-se análise química dos extratos por espectrometria de massas de alta resolução (EMAR). Nestes foram identificados 32 compostos, os quais haviam sido previamente descritos na literatura para o mesmo gênero. Entre eles destacam-se o kotalanol, salacinol e o mangiferina, com ação hipoglicemiante previamente descrita por outros autores. Para análise in vivo do potencial hipoglicemiante, realizou-se ensaio com o extrato hidroalcoólico do caule da planta em ratos com diabetes induzida por estreptozotocina. O extrato apresentou ação semelhante ao fármaco controle glibenclamida. Também foi avaliado o perfil lipídico (triglicerídeos, colesterol total e HDL) e as enzimas hepáticas TGO e TGP, onde pode-se observar aumento de HDL. / The use of plants in various ailments healing is traditionally known and used for centuries by mankind. Plant cells produce a large variety of chemical compounds between the primary and secondary metabolism. The secondary metabolism products are of special interest, as they are responsible for several biological activities. Ethnobotanic information indicates that more than 800 plants are used as traditional remedies in the treatment of diabetes. Many species of Salacia genus have been described with antidiabetic activity, including Salacia impressifolia. This specie belongs to Celastraceae family, popularly known as miraruíra in Brazil. This work aimed to develop the chemical composition of this specie through stem and stem bark extracts. Chemical analysis of the extracts was carried out by high resolution mass spectrometry (HRMS). In these extracts, 32 compounds were identified, previously described for the same genus. Among them, were identified kotalanol, salacinol and mangiferina, with hypoglycemic action previously described by others authors. For in vivo analysis of hypoglycemic activity, it was performed the hydroalcoholic stem extract in streptozotocin induced diabetics rats. The extract presented similar action to control drug glibenclamide. It was also assessed the lipid profile (triglycerides, total cholesterol and HDL) and liver enzymes AST and ALT, and it was observed an increase in HDL level.

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-04-08T20:23:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Lilian Valadares Tose.pdf: 22786688 bytes, checksum: 4b658f7b5444bc01ea9bd4002e47455e (MD5) / Approved for entry into archive by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-04-14T19:21:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Lilian Valadares Tose.pdf: 22786688 bytes, checksum: 4b658f7b5444bc01ea9bd4002e47455e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T19:21:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Lilian Valadares Tose.pdf: 22786688 bytes, checksum: 4b658f7b5444bc01ea9bd4002e47455e (MD5) Previous issue date: 2014-12 / A análise de hidrocarbonetos por técnicas de ionização a pressão atmosférica ou ambiente continua a ser um desafio na espectrometria de massas. Normalmente, a ionização ocorre através de mecanismos de protonação e desprotonação. Para isso, as moléculas de interesse devem apresentar um grupo básico ou ácido que proporcionem a geração de íons [M+H]+ ou [M-H]-. Para superar essa limitação, um método analítico simples, fácil, rápido e poderoso foi desenvolvido com sucesso, adaptado a partir da literatura, para ionizar saturado e insaturado, linear, ramificado, e hidrocarbonetos cíclicos, bem como hidrocarbonetos poliaromáticos e heteroaromáticos presentes em frações de hidrocarbonetos e de misturas de parafina/petróleo bruto utilizando ionização química à pressão atmosférica (APCI), favorecido pela utilização de solventes alifáticos de cadeia curta em um espectrômetro de massas FT-ICR. Entre os reagentes alifáticos estudados, isoctano proporcionou os melhores resultados quando comparado com outros solventes. Além disso, foram estudados outros interferentes do processo de ionização, como concentração da solução injetada e misturas parafina/óleo, que influenciavam desde o perfil dos espectros até as principais classes de compostos identificados. O método torna possível a ionização de hidrocarbonetos pela produção de íons [M -H]+ sem ocorrência de fragmentação. / The analysis of hydrocarbon using atmospheric or ambient ionization techniques still remains a challenge in mass spectrometry. Traditionally, the ionization occurs via protonation or deprotonation. The molecules of interest must have a basic or acidic group to generated [M + H]+ or [M - H]- ions. To overcome such limitation, it is proposed a simple, easy, fast and powerful analytical methodology to ionize saturated (linear and branched), unsaturated, and cyclic hydrocarbons as well as polyaromatic and heteroaromatic hydrocarbonsby atmospheric pressure chemical ionization (APCI) using small hydrocarbons as reagents in a FT-ICR mass spectrometer. These molecules may be present in hydrocarbon fraction samples and paraffin/crude oil blends. Among the APCI hydrocarbon reagents studied, isooctane provided the best results when compared to pentane, hexane, cyclohexane and heptane. The method renders the ionization of hydrocarbons to yield [M – H]+ ions with no associated fragmentation using nitrogen as sheath gas.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A lectina de sementes de Dioclea virgata (Dvir) foi purificada e submetida a experimentos de cristalizaÃÃo, determinaÃÃo da massa molecular e sequÃncia protÃica por espectrometria de massa Os cristais da proteÃna foram obtidos complexados com X-man e utilizando o mÃtodo de difusÃo de vapor a uma temperatura constante de 293 K, e cresceu em uma condiÃÃo contendo 0,5 M de sulfato de amÃnio, 0,1 M de citrato de sÃdio tribÃsico dihidratado pH 5,6 e 1,0 M de sulfato de lÃtio monohidratado. Um completo conjunto de dados foi coletado em 1,8 à de resoluÃÃo usando uma fonte de radiaÃÃo sÃncrotron. O cristal de Dvir pertence a um grupo espacial I222 ortorrÃmbico centrado, com parÃmetros de cÃlula unitÃria a = 647.5 Ã, b = 86.6 Ã, c = 90.2 à e os Ãngulos α = 90 0 β = 90 γ = 90.0Â.A melhor soluÃÃo para a pesquisa de substituiÃÃo molecular teve um coeficiente de correlaÃÃo de 77,1% e um Rfactor de 44,6%. A lectina possui massa molecular de 25412 Da  2 (cadeia α) em pH 6,5 ou superior, se encontra em um arranjo tetramÃrico e se apresenta como dÃmero na unidade assimÃtrica sugerindo um empacotamento cristalino similar a outra lectina da subtribo Diocleinae, D. guianensis, D. rostrata, a respeito do sÃtio de ligaÃÃo a carboidrato e os contatos dimÃricos / The lectin from Dioclea virgata (Dvir) was purified and subjected to crystallization experiments, determination of protein molecular weight and sequence by mass spectrometry. The crystals of the protein complexes were obtained by X-man and using the vapor diffusion method at a constant temperature of 293 K and grew in a condition containing 0.5 M ammonium sulphate, 0.1 M sodium citrate tribasic dihydrate pH 5.6 and 1.0 M lithium sulphate monohydrate. A complete data set was collected at 1.8 à resolution using a synchrotron radiation source. Dvir The crystal belongs to a centered orthorhombic space group I222, with unit cell parameters a = 647.5 Ã, b = 86.6 Ã, c = 90.2 à and angles α = 90.0  β = 90  γ = 90.0 Â. The best solution for the detection of molecular replacement had a correlation coefficient of 77.1% and 44.6% of rfactor. The lectin has a molecular mass of 25 412 Da  2 (α chain) at pH 6.5 or higher, is in a tetrameric arrangement and presents as a dimer in the asymmetric unit suggests a crystal packing similar to other lectin subtribe Diocleinae, D. guianensis, D. rostrata, regarding the carbohydrate-binding site and contacts dimeric

Orientador : Concetta Kascheres / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:31:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lago_ClaudimirLuciodo_D.pdf: 7304422 bytes, checksum: 5699a74f9b745d96d6fc664189876d72 (MD5) Previous issue date: 1991 / Doutorado

Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Luciana Polese / Banca: Clélia Akiko Hiruma Lima / Banca: Daniel Rinaldo / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Resumo: Terminalia catappa Linn. pertence à Família Combretaceae e é comumente chamada amendoeira-da-praia ou chapéu de sol. A família Combretaceae reúne numerosas espécies que têm sido estudadas por seu uso pela população para fins medicinais. É originária da Malásia, mas, muitas vezes, cultivada e muito característica da costa brasileira. A partir do extrato hidroalcoólico das folhas, foram detectados como constituintes principais a substância majoritária punicalagina (anômeros α e β), o composto punicalina, ácido galágico e ácido elágico. Identificouse, também, as substâncias 1,2,3-Tri-O-galoil-β-D-glicose e possíveis isômeros, 1,6- Di-O-galoil-β-D-glicose, HHDP-acetilglicosídeo, HHDP-hexosídeo, ácido elágico hexosídeo, ácido galágico e apigenina 8-C-(2'-galoil)-β-D-glicopiranosil. Estes metabolitos foram confirmados por experimentos FIA-ESI-IT-MSn (Direct Flow Analysis-Electrospray ionization-Íon Trap-Tandem Mass Spectrometry) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC) acoplada a arranjo de fotodiodos (PDA). Ácido elágico, ácido gálico e galato de metila foram confirmados por experimentos de co-injecção de padrão. Punicalagina foi detectada e isolada da fração hidrometanólica como uma mistura de anômeros e confirmada por experimentos de RMN 1H e 13C, mono e bidimensionais. O fracionamento da fração acetato proveniente do extrato hidroalcoólico por MPLC (Medium Pressure Liquid Chromatography) permitiu o isolamento dos metabólitos ácido galágico e apigenina 8-C-(2'-galoil)-β-D-glicopiranosil. A configuração absoluta dos anômeros da punicalagina e do composto apigenina 8-C-(2'-galoil)-β-D-glicopiranosideo foi estabelecida por experimentos de dicroísmo circular (DC). A determinação quantitativa dos principais metabolitos secundários foi realizada por HPLC-PDA, possibilitando, assim, a determinação da concentração e teor (%) de... / Abstract: Terminalia catappa Linn. belongs to Combretaceae family and is commonly called almond-the-beach or sun hat.The Combretaceae family gathers numerous species that has been studied for its use by the population for medicinal purposes. It is from Malaysia, but often cultivated and very characteristic of the Brazilian coast. From the alcoholic extract of the leaves were detected as main constituents the major substance punicalagin (α and β anomers), the punicalin compound, gallagic acid and ellagic acid. It was identified as well, the 1,2,3-Tri-O-galloyl-β-D-glucose substances, and possible isomers, 1,6-Di-O-galloyl-β-D-glucose, HHDP acetilglicoside, HHDPhesoside, ellagic acid hexoside, gallagic acid and apigenin 8-C (2 '-galloyl)-β-Dglucopyranosyl. These metabolites were confirmed by FIA-ESI-IT-MSn experiments (Direct Flow Analysis Electrospray ionization-Ion-Trap Tandem Mass Spectrometry) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC) coupled with diode array (PDA). Ellagic acid, gallic acid and methyl gallate were confirmed by standard coinjection experiments. Punicalagin was detected and isolated from the hydromethanol fraction as a mixture of anomers experiments and confirmed by 1H and 13C NMR, mono- and bi-dimensional. The ethyl acetate fraction from fractionation of the hydroalcoholic extract by MPLC (Medium Pressure Liquid Chromatography) allowed the isolation of galágico acid metabolites and 8 apigenin-C (2'- galloyl) -β-Dglucopyranosyl. The absolute configuration of anomers of the compound of punicalagin and apigenin 8-C (2'-galloyl) -β-D- glucopyranosyl was established by experiments circular dichroism (CD). Quantitative determination of the main secondary metabolites was performed by HPLC-PDA, thus allowing the determination of concentration and content (%) of metabolites present in the alcoholic extract. They were first quantified in hydroalcoholic extract of this species, the... / Doutor

Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Paulo Cesar Gomes / Banca: Mario Sergio Palma / Banca: Claudia Vianna Maurer Morelli / Banca: Tais Maria Bauab / Banca: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Resumo: Devido ao aumento das doenças fúngicas, do uso indiscriminado de antimicrobianos, associados ao aparecimento de cepas resistentes e formadoras de biofilmes, é essencial a busca pelo desenvolvimento de novos antifúngicos mais eficientes. As espécies de Candida são conhecidas pela capacidade de infectar humanos, sendo a formação de biofilmes um dos fatores de virulência mais importantes. No estudo interação patógeno-hospedeiro, bem como para eficácia terapêutica e segurança, algumas vantagens no uso de modelos animais alternativos são a redução de tempo de resposta em experimentos, eficiência e baixo custo quando comparado ao uso de camundongos. Desta forma, moléculas antifúngicas estão sendo testadas nestes animais alternativos, como Danio rerio (Zebrafish), um vertebrado que apresenta rápida reprodução e homologia genética e funcional com os mamíferos. Em relação às moléculas em testes, há um crescente estudo de peptídeos oriundos de venenos e da hemolinfa de insetos, como novos compostos antifúngicos, os quais possam apresentar além de boa atividade, baixa toxicidade e não-teratogenicidade. Neste trabalho, foram estudados peptídeos análogos de Mastoparanos de vespas (MKs) cuja atividade antimicrobiana já é conhecida, previamente sintetizados com modificações nas suas características estruturais, como número de resíduos de Lisina e carga líquida. Levando em consideração as características estruturais dos MKs, outros quatro peptídeos foram sintetizados e estudados, dos quais d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Due to the increase of fungal diseases, indiscriminate use of antimicrobial linked to occurrence of resistance and biofilm - forming strains, the search for the development of new efficient antifungals is essential. Candida species are known for their ability to infect humans, and biofilm formation is one of the most important virulence factors. In respect pathogen - host interaction, as well as for therapeutic efficacy and safety, some advantages in the use of alternative animal models are the reduction of response time in experiments, efficiency and low cost when compared to the use of mice. Thus, antifungal molecules are being tested in these alternative animals, such as Danio rerio (Zebrafish), a vertebrate that exhibits rapid reproduction and genetic and functional homology with mammals. Regarding molecules under test, there is a growing study of peptides from poisons and insect hemolymph, as new antifungal compounds, which may present aside from to good activity, low toxicity and non-teratogenicity. In this work, it was studied was mastoparan analog peptides (MKs), whose antimicrobial activity is already known, previously synthesized with modifications in their structural characteristics, such as Lysine residues number and net charge. Taking into account the structural characteristics of MKs, four other peptides were synthesized and studied, of which two peptides (PepM1; PepM2) are analogues of the antimicrobial Moricin C3, derived from Galleria mellonella hemolymph, an... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luis Vitor Silva do Sacramento / Coorientador: Marcos José Marques / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Banca: Sérgio de Albuquerque / Resumo: Infecções causadas por tripanosomatídeos do gênero Leishmania representam um dos maiores problemas de saúde pública mundial, com alta endemicidade, sobretudo em países em desenvolvimento. As substâncias de escolha para o tratamento destas parasitoses, de modo geral, causam notória toxicidade renal e cardíaca, além de induzirem resistência no parasito e muitas vezes apresentarem eficácia insuficiente. As plantas são utilizadas no tratamento e cura de enfermidades desde a antiguidade, quando o homem começou a utilizar a natureza em seu favor. Estas plantas, pela sua riqueza química e farmacológica, têm sido estudadas no intuito de comprovar atividades atribuídas pela crença popular e obtenção de novos compostos ativos. Neste contexto, destaca-se a família Bignoniaceae, típica do Cerrado brasileiro, que compreende mais de cem gêneros, entre eles o gênero Arrabidaea, que é rico em uma considerável diversidade de compostos, porém muito pouco estudado até o momento, especialmente quando se fala da espécie A. brachypoda. Este trabalho visou estudar o extrato das folhas de A. brachypoda e determinar suas atividades leishmanicida, antiproteolítica e antioxidante. Após obtido, por percolação, o extrato hidro-etanólico das folhas de A. brachypoda, este foi fracionado por partição líquido-líquido em hexânico, acetato-etílico, butanólico e aquoso, e analisados por UFLC-MS para determinação das massas moleculares dos principais constituintes de cada fração, em seguida, o extrato bruto e frações foram avaliados quanto a sua atividade leishmanicida in vitro, sua citotoxicidade, e também quanto ao seu potencial inibitório perante proteases obtidas de promastigotas e amastigotas (pool), assim como proteases purificadas (oligopeptidases B e C, Catepsina-L e Cruzaína) e recombinantes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Infections caused by trypanosomatids of the genus Leishmania represent one of the largest global public health problems, with high endemicity, especially in developing countries. The drugs of choice for the treatment of these parasitic infections generally cause notorious heart and kidney toxicity, and induce resistance in parasite and often have insufficient effectiveness. The plants are used in the treatment and cure of illnesses since antiquity, when the man has begum to use nature in his favor. These plants by their chemical and pharmacological wealth, have been studied in order to prove the activities assigned by the popular belief and obtaining new active compounds. In this context, highlight the family Bignoniaceae, typical of the Brazilian Cerrado, which comprises more than a hundred genera, among them the Arrabidaea genus, which is rich in a considerable diversity of compounds, however very little studied so far, especially when talking of the specie A. brachypoda. This work aimed to study the extract from leaves of A. brachypoda and evaluate its leishmanicidal, antiproteolitic and antioxidant activities. After obtained by maceration, the hidro-etanolic extract from leaves of A. brachypoda, this was fractioned by liquid-liquid partition in hexanic, ethyl-acetate, butanolic and watery, and analyzed by HPLC-MS for molecular weights determination of the main constituents from each fraction, then the crude extract and fractions were evaluated on their leishmanicidal activity in vitro, their cytotoxicity, and also regarding its potential as protease inhibitor obtained from amastigotes and promastigotes (pool), as well as purified proteases (oligopeptidases B and C, Cathepsin-L and Cruzain) and recombinants proteases (rCPB2.8, rCPB3.0 and rH84Y), additionally evaluated the antioxidant activity of... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Carmem Silvia Fontanetti Christofoletti / Coorientador: Lucilene Delazari dos Santos / Banca: Ana Maria Costa Leonardo / Banca: Roberta Cornelio Ferreira Nocelli / Resumo: Diplópodos são animais intimamente envolvidos com a manutenção do ecossistema, pois apresentam uma contribuição bastante significativa para o meio ambiente; revolvem o solo durante a locomoção, o que ocasiona aeração do mesmo e melhora a ação de microrganismos, na medida em que auxiliam no aumento da microflora através de suas fezes e através da alimentação de matéria orgânica em decomposição. Estes animais não apresentam populações numerosas, mas podem ocorrer explosões populacionais, decorrentes de mudanças climáticas, utilização de pesticidas entre outros desequilíbrios ambientais. Apresentam poucos predadores devido ao exoesqueleto resistente que os tornam impalatáveis, além da presença de glândulas de defesa que liberam fortes substâncias de ação repulsiva. As estratégias de defesa dos milípedes podem ser classificadas em físicas e químicas, onde se destacam o ato de enrolar-se e o fluído defensivo, respectivamente. O milípede Urostreptus atrobrunneus tem apresentado pontos de infestação em centros urbanos do estado de São Paulo, causando muitos transtornos à população humana. Por se tratar de uma espécie pouco conhecida, realizar um estudo sobre as glândulas de defesa destes animais é interessante, uma vez que a mesma vem apresentando um maior contato com populações humanas e de outros animais. Face ao exposto foi objetivo deste trabalho: 1) Realizar uma revisão sobre os mecanismos de defesa dos milípedes, comparando-os com os encontrados nos artrópodes e correlacionando as semelhanças observadas entre os grupos. 2) Descrever a morfologia da glândula de defesa do milípede U. atrobrunneus por meio de técnicas histológica, histoquímica e ultraestrutural. 3) Analisar os compostos voláteis presentes na secreção defensiva do milípede por meio da cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS). As análises permitiram verificar que a glândula de defesa... / Abstract: Diplopods are animals intimately involved in ecosystem maintaining since they show a very significant contribution to the environment; revolve the ground during transportation, which leads to aeration of the same and improves the action of microorganisms, to the extent that assist in the microflora increase a through their feces and by feeding on decaying organic matter. These animals do not have large populations, but population explosions resulting from climate change, use of pesticides and other environmental imbalances. Have few predators due to the tough exoskeleton that make them unpalatable, and the presence of defensive glands that release substances of strong repulsive action. The defense strategies of millipedes can be classified into physical and chemical, which highlights the act of rolling up and defensive fluid, respectively. The millipede Urostreptus atrobrunneus have presented points of infestation in urban centers of the São Paulo state, Brazil, causing much disruption to the human population. Because it is a little-known species, conduct a study on the defense glands of these animals is interesting, since it has shown greater contact with human populations and other animals. Given the above, the objective of this study was: 1) Conduct a review of the millipedes defense mechanisms, comparing them with those found in arthropods and correlating the similarities observed between the groups. 2) Describe the morphology of the defense gland millipede U. atrobrunneus by histological, histochemical and ultrastructural techniques. 3) Analyze the volatile compounds present in the defensive secretion of the millipede by coupled mass spectrometry gas chromatography (GC- MS). The analysis allows to verify that the gland 's defense of U. atrobrunneus is of type 2, according to the classification proposed in the literature by Eisner et al. (1978) for glands defense diplopods; this gland is composed of a spherical glandular bag fitted... / Mestre

Orientador: Humberto Márcio Santos Milagre / Banca: Saulo Santesso Garrido / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Moacir Rossi Forin / Banca: João Henrique Ghilardi Lago / Resumo: Neste trabalho, a técnica Matrix Assisted Laser Dersoption/Ionization - Mass Spectrometry (MALDI-MS) foi utilizada em diferentes aplicações para a análise de peptídeos produzidos por cianobactérias. Esta técnica é extremamente rápida, possui alta resolução, requer pouquíssimo preparo de amostra e não permite que possíveis contaminantes presentes na amostra interfiram na análise. Por estes motivos MALDI- MS tem sido amplamente utilizada não somente na detecção de diferentes variantes de cianopeptídeos, mas também para quantificação das cianotoxinas. Este trabalho utilizou um sistema binário de matriz para a quantificação de microcistinas, utilizando as matrizes ácido α-ciano-4-hidroxicinamico e o ácido sinapínico (50/50, v/v) para obter uma mistura homogênea de matriz/analito, superando a baixa reprodutibilidade inerente da técnica MALDI-MS. Paralelamente, foi realizado o imageamento de espécies de cianobactérias de água doce cultivadas em meio sólido por MALDI-TOF-MS. Os resultados obtidos apresentaram novas perspectivas com relação à distribuição espacial dos peptídeos produzidos pelas espécies de cianobactérias estudadas, como a nodularina-R (m/z 825) e nodularina-[Har] (m/z 839) produzida pela espécie Nodularia harveyana PCC 7804, os peptídeos MC-LR (m/z 995) produzidos pela espécie Microcystis aeruginosa PCC 7820, e o sideróforo anaquelina (m/z 761.3) produzidos pela espécie Anabaena Cylindrica PCC 7122. Além disto, amostras da floração de cianobactérias, que ocorre na ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work, the technique Matrix Assisted Laser Dersoption/Ionization - Mass Spectrometry (MALDI-MS) were used in different application for analysis of peptides produces by cyanobacteria. This technique is extremely fast, has high resolution, requires very little sample preparation and does not allow any contaminants present in the sample to interfere with the analysis. For these reasons, MALDI-MS has been widely used not only in the detection of different variants of cyanopeptides, but also for the quantification of cyanotoxins. This work utilized a matrix binary system for the quantification of microcystins, using the α-cyano-4-hydroxynamic matrix and sinapinic acid (50/20, v/v) to obtain a homogeneous matrix/analyte mixture, overcoming the low reproducibility inherent to the MALDI-MS technique. Simultaneously, we performed the imaging of freshwater cyanobacteria cultivated in solid medium by MALDI-TOF-MS. The results obtained presented new perspectives regarding the spatial distribution of the peptides produced by the studied cyanobacteria species, for exemple the nodularin-R (m/z 825), nodularin-[Har] (m/z 839) for the species Nodularia harveyana PCC 7804, MC-LR peptides (m/z 995) for the species Microcystis aeruginosa PCC 7820, and the siderophore anaquelin (m/z 761.3) for the species Anabaena cylindrica PCC 7122. In addition, samples of cianobacteria's bloom, present in Salto Grande Lagoon, located in Americana-SP, were analyzed and were identified some peptides, being four microcystins (MC-YR, MC-YR, MC-Hil and MC-RR), four aeruginosins (602, 298 A, 644 and 968), two cyanopeptolins (972 and 986), and one variant of microviridin(1707) ... (Full abstract, click on electronic access below). / Doutor

Orientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Luis Vitor Silva do Sacramento / Banca: Cíntia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Mônica Tallarico Pupo / Banca: Christopher Scott Jeffrey / Resumo: Senna spectabilis é uma planta medicinal detentora de inumeras aplicações terapêuticas tradicionais. Como uma fonte rica de metabólitos com atividades biológicas a rizosfera de S. spectabilis foi o objeto de estudo neste trabalho. O conhecimento da população da microbiota da rizosfera contribuiu para a compreensão das interações que poderiam ocorrer nessa região dinâmica e rica do solo. Um número de métodos moleculares têm sido desenvolvidos nos últimos anos para o estudo da comunidade microbiana utilizando PCR no sequenciamento das regiões de rRNA 16S e ITS. Os objetivos deste estudo foram identificar a população microbiana da rizosfera de mudas de S. spectabilis e em sequência selecionar algumas linhagens e submetê-las a cultivos mistos em meio sólido. A identificação foi conseguida através do 454-pyrosequenciamento das raízes e sequenciamento por iluminaseq das soluções nutritivas em que as plantas foram cultivadas. Os resultados mostraram uma população rica e variada de bactérias e fungos, com destaque aos filos Verrucomicrobia, Proteobacterias, Firmicutes para as bactérias e para os fungos os filos Basidiomycota e Ascomycota. Espécies selecionadas de fungos foram cultivados em meio Czapek-dox líquido e uma análise do perfil metabólico foi conduzido utilizando HPLC-DAD e HPLC-DAD/MS. Entre os metabólitos detectados nessa pré-avaliação estão os derivados policetidicos produzidos por Fusarium: zearalenonas, conhecidas micotoxinas produzidas por uma grande quantidade de espécies deste gênero. Estes resultados induziram a seleção de cinco fungos de Fusarium, Paecilomyces e uma espécie de bactéria, Burkholderia sp para o cultivo misto em meio de agar sólido. O objetivo foi detectar mudanças na produção metabólica e analisar as alterações esperadas por RMN de 1H associados aos métodos quimiométricos de análise PCA e PLS e tambem por LC/MS. Uma série de... / Abstract: Senna spectabilis is a medicinal plant with innumeral traditional therapeutic applications. As a source of rich metabolites with biological activities S. spectabilis' rhizosphere was the object of study in this work. The knowledge of the population of the microbiota of the rhizosphere contributes to the understanding of the interactions that may occur in this dynamic and rich region of the soil. A number of molecular methods have been developed in recent years to study the microbial community using PCR associated in the sequencing of 16S and ITS regions of rRNA. The objectives of this study were to identify the microbial population of rhizosphere seedlings of S. spectabilis and in sequence to select a few strains and submit them to co-cultures in a solid medium. Identification was achieved with 454- pyrosequencing of roots and iluminaseq sequencing of the hydroponic solutions, in which the seedlings were cultivated. Results showed a rich and varied population of bacteria and fungi notably the bacteria phyla Verrucromiobia, Proteobacteria, Firmicutes and for the fungi the phyla Basidiomycota and Ascomycota. Selected species of fungi were cultivated in liquid Czapek-dox medium and a screening of the metabolic profile was conducted using HPLC-DAD and HPLC-DAD/MS. Among the metabolites detected in this previous evaluation are the polyketides derivates produced by Fusarium: zearalenones known as mycotoxins produced by many species of this genus. These results have induced to the selection of five fungi from Fusarium, Paecilomyces and one specie of bacteria, Burkholderia sp for mix cultivation in agar solid medium. The aim was to detect changes in the metabolic production and analyse the expected alterations by 1H NMR associated with chemometric method PCA and PLS and LC/MS. A series of enniatin could be detected by LC/MS indicating that co-culturing induced the modifications in the... / Doutor