Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-03Bitstream added on 2014-06-13T19:07:16Z : No. of bitstreams: 1 macedo_mf_me_jabo.pdf: 610247 bytes, checksum: e83787380516ff046b849f0759fc1d31 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Objetivou-se desenvolver uma técnica de cultivo de folículos préantrais pelo auto-enxerto de tecido ovariano, avaliando a viabilidade cirúrgica e histopatológica desta técnica em função do tempo. Sessenta ratas Wistar foram submetidas à ovariosalpingectomia bilateral e enxerto de fragmento ovariano inserido sob a cápsula renal do rim direito. Os animais foram subdivididos em seis grupos experimentais baseados no tempo de pós-cirúrgico. Transcorridas 24 h (grupo 24H), 72 h (grupo 72H), 1 semana (grupo 1 S), 2 semanas (grupo 28), 3 semanas (grupo 3S), e 4 semanas (grupo 4S), os animais foram sacrificados. As peças cirúrgicas, compostas por enxerto ovariano e parênquima renal subjacente, foram imersas em solução de Bouin durante 24 horas, sendo processadas histologicamente, e coradas por hematoxilina-eosina e tricrômico de Masson. Aspectos técnicos cirúrgicos, morfológicos e histopatológicos foram avaliados. Os procedimentos cirúrgicos foram de fácil execução e a avaliação morfológica revelou facilidade de localização, poucos casos de migração e neovascularização do enxerto após 1 semana. Não houve sinais de rejeição do enxerto, e o aspecto macroscópico do útero foi normal na maioria dos animais. A histopatologia mostrou diferentes proporções entre as categorias foliculares em função do tempo de enxerto sem alterações no parênquima renal. Concluiu-se que a técnica de enxerto do tecido ovariano sob a cápsula renal é exeqüível e viável tanto cirúrgica quanto histopatologicamente permitindo o desenvolvimento de folículos a estágios antrais num curto espaço de tempo / This study aims to develop a technique to culture preantral follicles using ovarian autograft, and to evaluate surgically and histopathologically the viability of this technique regarding the time. 8ixty Wistar rats were submitted to bilateral ovariosalpingectomy and her ovarian tissue grafted under renal capsule of the right kidney. The animals were divided into six groups based on the post surgical time. After 24 h (group 24H), 72 h (group 72H), 1 week (group 18), 2 weeks (group 28), 3 weeks (group 38), e 4 weeks (group 48), the animals were sacrificed. The surgical samples, composed by ovarian graft and the near renal parenchyma, were fixed in Bouin solution for 24 hours, submitted to semi-serially sections, and stained with hematoxiline-eosine and Masson tricromic. Surgical, morphological and histopathological aspects were evaluated. The surgical procedures were performed easily and the morphological evaluation resulted easily located, few cases of migration with neovascularization of the graft after one week. No signals of graft rejection and the uterine macroscopy was normal in the majority of the animals. The histology showed different proportions between follicular categories during the graft period and no alterations in the renal parenchyma. In conclusion, grafting of ovarian tissue under renal capsule is easy to execute, viable of the surgical and histopathological points of view, allowing follicular development in a short time

Made available in DSpace on 2015-10-31T01:10:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475957-Texto+Completo-0.pdf: 569 bytes, checksum: 2cdb6fc6685966971856596fa6e6fd78 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction: One of the main postoperative complications of kidney transplant is delayed graft function (DGF), which means absence of graft function after transplant or the need for dialysis during the first week post procedure. The occurrence of DGF currently in our hospital is high and has been attributed to a combination of many factors. Objective: to evaluate the factors associated to DGF and their influence in the outcome of kidney transplants. Methods: historical cohort of 150 patients transplanted with live or deceased donor kidneys from 2011 to 2013. RESULTS: DGF was associated to time in dialysis and the number of recipient pre-transplant transfusions, donors age, serum creatinine level, use of vasoactive drugs in the donor, distance from place of organ retrieval and transplant center, and duration of cold ischemia time. DGF influenced post-transplantation outcome in regard to length of stay in intensive care, length of hospital stay, acute rejection episodes, and higher creatinine levels at discharge. Patients and graft survival were shorter in the DGF group. Conclusion: There are multiple factors related to DGF, the most important being those related to donors, and organ storage. The most important factor related to the recipient was the dialysis vintage. We did not find a correlation between DGF and HLA-compatibility. DGF consequences are important, including worse graft function and survival, as well as impact in recipient morbidity and mortality. / Introdução: Uma das principais complicações do pós-operatório de transplante de rim é a disfunção precoce do enxerto (DPE) que significa a ausência de função do enxerto após o transplante ou a necessidade de diálise na primeira semana após o procedimento. A ocorrência de DPE em nosso Hospital, atualmente, é elevada e tem sido atribuída ao longo dos anos à combinação de diversos fatores. MÉTODOS: coorte histórica com 150 pacientes transplantados de rim de doador vivo ou falecido de 2011-2013.Objetivos: verificar os fatores associados à DPE e a sua influência na evolução do transplante de rim. Resultados: DPE foi associada com o tempo de diálise e o número de transfusões realizadas pelo receptor no pré-transplante, idade, valor da creatinina e utilização de drogas vasoativas pelo doador, distância do órgão doado e tempo de isquemia fria. Os valores de creatinina e potássio no pós-operatório, assim como o volume urinário foram determinantes para a realização de diálise após o transplante. DPE influenciou na evolução do transplante em maior tempo de internação na UTI e no tempo de internação, episódios de rejeição aguda e maior nível de creatinina no momento da alta hospitalar. A sobrevida do enxerto e do paciente foi menor no grupo de pacientes que apresentou DPE. Conclusão: Vários são os fatores relacionados à DPE, em especial os relacionados aos doadores e com a preservação do órgão. O principal fator atrelado ao receptor foi o tempo de diálise. Não encontramos relação na ocorrência de DPE com a compatibilidade HLA. As consequências da DPE são importantes incluindo pior função e sobrevida do enxerto, e também o impacto na morbidade e da mortalidade dos receptores.

Orientador: João Luiz Amaro / Banca: José Carlos Souza Trindade Filho / Banca: Cássio Luiz Z. Riccetto / Banca: Silvio Tucci Junior / Banca: Miguel Zeratti Filho / Resumo: A estenose uretral complexa, frequentemente, requer tecidos extragenitais para seu adequado tratamento. Estudos recentes têm sugerido, nestes casos, a utilização de um novo biomaterial à base de colágeno acelular derivado da submucosa intestinal suína (SIS). O objetivo deste estudo foi comparar os resultados da matriz de colágeno acelular (SIS) em uma ou quatro camadas à mucosa oral na substituição parcial da uretra em coelhos. Material e Métodos: Realizou-se um estudo prospectivo e randomizado utilizando-se 36 coelhos machos da raça North Folk divididos em 3 grupos. Os animais foram submetidos à ressecção padronizada da uretra ventral (segmento de 0,5 x 1 cm) que foi substituído por um enxerto tipo ilha de SIS com 1 camada no Grupo I (G1), SIS com 4 camadas no Grupo II (G2) e mucosa oral no Grupo III (G3). Nenhuma derivação urinária foi utilizada no pós-operatório. A uretrografia foi realizada no pré-operatório e antes do sacrifício. Os enxertos obtidos a partir da uretra regenerada foram avaliados 12 semanas após o implante por meio de exames histológicos de rotina. A retração do enxerto foi caracterizada objetivamente pelo cálculo matemático da área e pela análise computadorizada utilizando-se o software Scion Image®. A quantificação do colágeno foi obtida Resumo pela análise da coloração pelo Picrosirius red sob luz polarizada que permitiu a diferenciação das fibras de colágeno tipos I e III. Resultados: A uretrografia confirmou a manutenção de um calibre uretral adequado sem sinais de estenose. Fístulas uretrais foram diagnosticadas por meio de exame radiológico em 8,3% dos casos nos diferentes grupos (1 animal por grupo). A análise da área do enxerto pós-sacrifício pelos métodos matemático e computadorizado foi significativamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several urethral conditions often require nongenital tissues for reconstruction. One collagen-based biomaterial that has recently emerged is small intestinal submucosa (SIS). The aim of our study was to compare the results between SIS and oral mucosa membrane in the partial substitution of the urethra in rabbits. Material and Methods: A prospective and randomized study was performed using 36 North Folk male rabbits divided into 3 equal groups. The animals were submitted to a ventral urethral defect (resection of 0,5 x 1 cm segment of the urethra) that was replaced by a patch graft of 1 layer SIS in group I (G1), 4 layers SIS in Group II (G2) and buccal mucosa in Group III (G3). No urethral catheter was left behind. Urethrography was performed pre-operatively and before sacrificing. The grafts of regenerated urethras were harvested at 12 weeks after implantation. The urethra was excised and evaluated by Hematoxylin and eosin stained sections. The patch retraction was objectively measured using mathematic calculation and Scion Image® computer analysis. The quantification of collagen was obtained by Picrosirius red analysis under polarized light. This technique allowed the differentiation of collagen fibers types I and III. Urethrograms confirmed the maintenance of a wide urethral caliber without any signs of strictures. Urethral fistulae was diagnosed by radiology in 8,3% of all groups (1 animal each group). Average graft shrinkage evaluated by computer analysis was significantly lower in G2 (p<0.05). The intensity of chronic inflammation, neovascularization, fibrosis and epithelium regeneration was similar among the three groups (p>0.05). The analysis of type III:I collagen index was higher in the animals of group II. Conclusions: The patch area analyzed by computer or mathematic method was smaller in group III (buccal mucosa) which showed a high percentage of retraction. Histological parameters were similar among the three groups. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-22Bitstream added on 2014-06-13T20:40:19Z : No. of bitstreams: 1 chiquito_gcm_dr_botfm.pdf: 519392 bytes, checksum: d24af1dc24abca95f3a571e391642cf3 (MD5) / O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar as características pós-operatórias de superfícies radiculares expostas tratadas com enxerto de tecido conjuntivo, com duas técnicas de fixação do enxerto. O estudo envolveu 42 pacientes, que de maneira randomizada constituíram dois grupos iguais de estudo, denominados teste e controle, com 21 pacientes em cada um deles. No grupo teste o enxerto foi fixado ao leito receptor com adesivo de fibrina derivado de veneno de serpente e no grupo controle a fixação dos tecidos foi realizada com fio de sutura poligalactina 910. A idade dos pacientes variou entre 19 e 49 anos e estes apresentavam defeitos de recessão gengival incluídos nas classes I e II de Miller. Os controles foram realizados avaliando-se parâmetros clínicos tais como: tempo cirúrgico, tempo de hemostasia, presença de eritema, alteração de hálito e sabor, grau de recobrimento radicular, altura da recessão, profundidade de sondagem vestibular, nível de inserção clínica, índice de placa, índice gengival, quantidade de gengiva inserida, mucosa ceratinizada e a estética, com registros no momento pré-operatório, trans-operatório e aos 7, 14, 21, 30, 60 e 90 dias de pós-operatório. A análise comparativa entre o momento inicial e o final em cada um dos grupos mostrou resultados estatisticamente significantes, com melhores resultados ao término do estudo para todas as variáveis estudadas. Ao final do estudo, observamos entre os grupos, resultados estatisticamente significantes para as variáveis; tempo cirúrgico, quantidade de gengiva inserida e profundidade de sondagem vestibular, com melhores resultados nos pacientes do grupo teste. Com as demais variáveis não foram observadas diferenças significantes, inclusive para a estética alcançada. / The present study aimed to evaluate the postoperative characteristics of exposed root surfaces treated with connective tissue graft, with two different techniques to fix it. The study involved 42 patients, randomly of two equal groups named test and control, each one with 21 patients. In the test group, the graft was fixed to exposed root surfaces with fibrin adhesive derived from serpent venom and in the control group this graft was accomplished with a conventional suture. The age of the patients ranged between 19 and 49 years old and they presented this defect named Millerþs class I and II. Controls were carried out by assessing clinical parameters such as: surgical time, hemostasis time, presence of erythema, breath and taste alteration, root coverage degree, recession height, vestibular probing depth, clinical insertion level, plaque index, gingival index, amount of attached gum, keratinized mucosa and aesthetics, with records at preoperative and trans-operative moments and at 7, 14, 21, 30, 60 and 90 days, postoperatively. The comparative analysis between the initial and final moments in each group showed statistically significant results, with the best results at the end of the study for all variables studied. Statistically significant results were observed at the end of the study between the groups only for the following variables; surgical time, amount of attached gum and vestibular probing depth, with the best results for patients in the test group. Significant differences were not observed in the remaining variables, including aesthetics. This study concluded that the fibrin adhesive derived from serpent venom presented favorable characteristics when applied in periodontal surgery for root coverage in recessions of marginal tissue, Millerþs Class I and II, as a suture substitute.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:00:27Z : No. of bitstreams: 1 quitzan_jg_dr_botfm.pdf: 1219663 bytes, checksum: 12cff8c4cb83129b04576882d16ebf97 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Deformidades uretrais e estenoses severas geralmente requerem técnicas de uretroplastia com tecido adicional. Dentre as diversas possibilidades, destaca-se recentemente a utilização de matrizes acelulares desenvolvidas por bioengenharia. O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento funcional e histológico da matriz acelular arterial heteróloga, quando implantada na uretra de coelhos. Para o preparo da matriz, a artéria aorta abdominal de suíno foi coletada e submetida a tratamento com SDS, sendo posteriormente armazenada em álcool 70º. Foram utilizados doze coelhos, machos, com peso médio de 3 kg, distribuídos por sorteio em dois grupos: (AO) – secção completa da uretra e implante de segmento tubular de matriz acelular de aorta, com 1 cm de extensão e (TT) - secção completa da uretra e sutura término-terminal. Uretrografia retrógrada foi realizada após 15 (M2) e 90 dias (M3), quando os animais foram eutanasiados. As radiografias foram analisadas quanto à presença de fístula e/ou estenose. A avaliação histopatológica por Hematoxilina-eosina, Tricrômico de Masson e Calleja caracterizou a presença de inflamação, hiperplasia epitelial, vasos sanguíneos, tecido conjuntivo, muscular e elástico nos diferentes grupos. Foram registrados 2 óbitos em cada grupo, sendo estes animais excluídos do estudo. Em M2, 36,3% de estenose foi observada nos animais do Grupo AO (p<0,05). Em M3, animais dos Grupos AO e TT apresentaram estenose, sendo que a diferença entre os grupos não foi significante (p>0,05). Maior porcetagem de fístula ocorreu no Grupo AO, em M3 (p<0,05). A avaliação macro e microscópica não nos permitiu identificar a região da matriz acelular nos animais deste grupo. Ausência de células gigantes tipo corpo estranho bem como maior presença de hiperplasia epitelial (p<0,001) e vasos sanguíneos (p<0,005) foram observadas nas lâminas... / Severe urethral deformities and stenosis usually require urethroplasty with additional tissue. Among various possibilities, use of acellular matrix is a recent advance developed by bioengineering. The aim of this study was to evaluate the histological and functional behavior of heterologous acellular aortic matrix, when implanted in the urethra of rabbits. Abdominal aorta was taken from swine, processed with SDS and stored in alcohol, in order to obtain tubular acellular matrix. Twenty-four male rabbits, weighing 3 kg, were randomly divided in two groups: (AO)- complete urethral section and replacement with a 1 cm acellular aortc matrix tubular graft and (TT)- complete urethral section and end-to-end anastomosis. A retrograde urethrogram was performed at 15 (M2) and 90 (M3) days after surgery, when the animals were euthanized. The exams were analised for presence of fistula and/or strictures. Standard histological analysis with Hematoxylin-eosin, Masson’s Trichrome and Calleja characterized the inflammation, epithelial hyperplasia, blood vessels, muscle fibers, collagen and elastic fibers content, in different groups. Two animals of each group died during the study and were excluded. In M2, 36.3% of strictures was observed in the animals of Group AO (p <0,05). In M3, strictures occurred in both groups, but this difference was not significant (p> 0,05). A greater percentage of fistula occurred in Group AO, in M3 (p <0,05). The gross and microscopic evaluations did not allow us to identify the acellular matrix region in this group. Absence of foreign body giant cells, increased presence of epithelial hyperplasia (p <0,001) and blood vessels (p <0,005) were observed. Muscle fibers were abundant in lamina propria of the animals in the Group TT (p <0,01). There was no statistical difference between the amount of elastic fibers in the two groups... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo não disponível.

A citricultura brasileira é um dos setores mais competitivos do agronegócio mundial, contudo, o setor de produção de mudas de citros apresenta inúmeras limitações. A produção de porta-enxertos cítricos carece de substratos de qualidade, opções para diversificação de variedades porta-enxerto e plantas bem formadas num breve período para que o pomar alcance o sucesso. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de porta-enxertos cítricos cultivados em diferentes substratos, submetidos ou não à desinfestação e à inoculação micorrízica. Desenvolveu-se dois estudos: o primeiro, verificando o desenvolvimento de seis porta-enxertos (tangerineira ‘Sunki’, citrumeleiro ‘Swingle’, citrangeiro ‘Fepagro C 37’, ‘Flying Dragon’, limoeiro ‘Volkameriano’ e Poncirus trifoliata) em dois substratos comerciais. O segundo estudo, compreendendo 3 experimentos, que avaliaram duas variedades porta-enxerto (tangerineira ‘Sunki’ e citrangeiro ‘Fepagro C 37’) cultivadas em dois substratos comerciais (denominados Comercial 1 e 2) submetidos ou não a desinfestação e inoculação micorrízica (nos experimentos 1 e 2 utilizou-se Scutellospora heterogama e no experimento 3 inoculou-se Glomus etunicatum, S. heterogama e Gigaspora margarita). Avaliou-se a emergência de plântulas e o seu desenvolvimento vegetativo durante todo o experimento, além da colonização micorrízica em cada fase de crescimento. O substrato Comercial 1, em geral, proporcionou mais rápida emergência das variedades porta-enxerto. Os substratos Comercial 1 e 2, autoclavados e manejados adequadamente, proporcionaram desenvolvimento satisfatório às plantas, sendo recomendados, para citricultura. Altos teores de sais solúveis (TTSS (g.L-1) dos substratos podem prejudicar a emergência das plântulas. P. trifoliata foi pouco vigoroso, o limoeiro ‘Volkameriano’ foi altamente vigoroso; o citrumeleiro ‘Swingle’ e a tangerineira ‘Sunki’ apresentaram vigor intermediário. A desinfestação do substrato do substrato foi fundamental para o bom desenvolvimento das plantas. / The Brazilian citrus industry is one of the most competitive sectors of the agribusiness world, however, the production sector of citrus seedlings has several limitations. The citrus production rootstocks lacks quality of substrates, options for diversification of rootstock varieties and plants well-formed in a short time to reach success of the orchard. The objective was evaluate the development of citrus rootstocks grown on different substrates, submitted or not to disinfection and mycorrhizal fungi. There were developed two studies: first, checking the development of six rootstocks ('Sunki' mandarin, citrumelo, citrange ‘Fepagro C 37', 'Flying Dragon' lemon 'Volkameriano’ and Poncirus trifoliata) in two commercial substrates and the second, comprising 3 experiments that evaluated two rootstock varieties ('Sunki' mandarin and ‘Fepagro citrange C 37') growned in two commercial substrates (called Commercial 1 and 2) subjected or not to disinfestation and mycorrhizal inoculation (experiments 1 and 2 was used Scutellospora heterogama and in experiment 3 was inoculated Glomus etunicatum, Gigaspora margarita and S. heterogama). We have evaluated the seedling emergence and vegetative development throughout the experiment, besides the mycorrhizal colonization at each stage of growth. The substrate Commercial 1, in general, provided faster emergence of varieties rootstock. The substrates 1 and Commercial 2, autoclaved and handled properly, provided satisfactory development of the plants, being recommended for citrus. High levels of soluble salts (TTSS (gL-1) of the substrates may hinder seedling emergence. P. trifoliata was little vigorous, lemon trees 'Volkameriano' was highly vigorous, the citrumelo and 'Sunki' mandarin showed an intermediary effect. The sterilization of the substrate was essential for the good plant growth.

O transplante de Células Tronco Hematopoéticas alogênico é o tratamento curativo para diversas doenças hematológicas malignas, benignas e imunodeficiências, porém é acompanhado de grande morbidade e mortalidade. Uma das principais complicações é a doença do enxerto contra hospedeiro aguda que, se não controlada rapidamente, pode ser fatal. A Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda tem como tratamento o uso de esteróides, no entanto, em cerca de 30 a 50% dos casos se revela resistente à esta terapia, sendo considerados com Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda refratária ou resistente. O tratamento para Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda refratária ou resistente à esteróides não está ainda estabelecido sendo alta a mortalidade desses pacientes. Nesse contexto, começou-se a pesquisar o papel das células-tronco mesenquimais em pacientes com Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda resistente a esteróides, devido a capacidade de imunomodulação que aquelas possuem. As células-tronco mesenquimais são células-tronco adultas, com capacidade de autorrenovação, proliferação e diferenciação em diferentes linhagens celulares. As propriedades imunomoduladoras das células-tronco mesenquimais ainda não são totalmente conhecidas, mas sabe-se por estudos in vitro que elas interagem com diversos tipos celulares e citocinas, sendo sua aplicabilidade terapêutica muito pesquisada em diversas doenças inflamatórias; ainda assim, poucos se conhece sobre o efeito modulador das células-tronco mesenquimais in vivo. Inúmeros estudos piloto ou séries de casos sobre a aplicabilidade de célula-tronco mesenquimal para o tratamento da Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda foram publicados com resultados animadores, no entanto, não há até o momento na literatura estudo prospectivo randomizado em pacientes com Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda refratária comparando célula-tronco mesenquimal com o tratamento padrão. Finalmente, dentre os problemas decorrentes da intensa imunossupressão necessária para controlar a Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda resistente a esteroides, se destacam o aumento da incidência de infecções graves e a possibilidade da diminuição do Efeito Enxerto Versus Leucemia, ao qual se atribui o poder curativo do transplante de células-tronco hematopoético alogênico. As células Natural Killer com sua capacidade anti-tumoral inata, parecem ser os principais linfócitos envolvidos no Enxerto Versus Leucemia. Esse estudo teve como objetivo determinar o papel das células-tronco mesenquimais no tratamento da Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda resistente a esteroides comparando, de forma randomizada, com a terapia com anticorpos monoclonais padrão; e estudar aspectos relacionados à imunomodulação decorrente da terapia com célulatronco mesenquimal, in vivo, com particular atenção à citocinas a ao comportamento das células Natural Killer neste contexto. Nossos resultados confirmam que a infusão de célula-tronco mesenquimal levam a um aumento significativo da Interleucina 10 de efeito anti-inflamatório, e indicam pela primeira vez, que as células Natural Killer aumentam gradativamente durante e após as infusões de células-tronco mesenquimais tanto em proporção dentre os linfócitos, como no seu grau de ativação, resultando em uma atividade citotóxica significativamente elevada no 280 dia após o início das infusões. Postulamos, inclusive, que a ativação das células Natural Killer seria o mecanismo pelo qual não se observa aumento de recidiva ou das infecções com o emprego de infusões de células-tronco mesenquimais para o tratamento da Doença do Enxerto contra Hospedeiro aguda resistente a esteróides. / Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation is the curative therapy for several malignant and non-malignant hematological diseases as well as for immunodeficiences. Although curative, morbidity and mortality are high, been acute Graft versus Host Disease and infections amongst the most frequent life threatening complications. Treatment for acute Graft versus Host Disease is high dose steroids, however, 30 to 50% of the cases are resistant or refractory to it. Steroid resistant or refractory Graft versus Host Disease is a very difficult condition to treat and effective treatment strategies are still to be defined. In this scenario, the intravenous infusion of Mesenchymal Stem Cells has emerged as a tool to rescue patients from that condition because of its immunomodulatory potential. Mesenchymal Stem Cells are adult stem cells with capacity for self-renewal, proliferation and differentiation in mesodermal tissues, particularly chondrocytes, osteoblasts and fibroblasts. Its immunomodulatory proprieties and effectiveness in several inflammatory diseases are still a matter of intense debate and mostly studied in in vitro conditions. There are several published or ongoing studies on the role of Mesenchymal Stem Cells for steroid resistant acute Graft versus Host Disease, but none randomizing it with monoclonal antibody therapy frequently utilized as treatment with variable results, and complicated by an intense cellular immunodeficiency and severe infections. Since hematologic malignancies are the number one indication for allogeneic hematopoietic stem cell transplantation and the secondary Graft versus Leukemia effect mediated by immune effector cells recognized as responsible for its curative potential, an intense cellular immunodeficiency is not desirable in this scenario. In the last few years, Natural Killer cells have emerged as an effector involved in Graft versus Leukemia sparing the patient of Graft versus Host Disease, however, in vivo Mesenchymal Stem Cells and Natural Killer crosstalk have not been studied although severe infections and relapse are not increased after Mesenchymal Stem Cells cellular therapy. Here we show that, in spite of the results of most of the in vitro studies suggesting that Mesenchymal Stem Cells inhibits Natural Killer cell activity, in vivo evidences points to an increment of Natural Killer cells number and activity during the several Mesenchymal Stem Cells infusions, particularly at the 28th day after the beginning of infusions, thereby explaining the apparent infection and relapse protection promoted by Mesenchymal Stem Cells.

Introdução: O fator de transcrição FOXP3 está aumentado em pacientes com rejeição aguda do transplante renal, mas a sua influência na função e sobrevida do enxerto ainda não é clara. O objetivo deste estudo foi correlacionar a expressão gênica e protéica de FOXP3 com os desfechos do enxerto renal, e avaliar a sua associação com células apresentadoras do antígeno em biópsias do enxerto renal. Métodos: Foram avaliados 91 receptores de transplante renal submetidos à biópsia do enxerto por disfunção aguda ou crônica, classificados pela histologia de Banff. O RNAm de FOXP3 foi analisado por PCR em tempo real, e a proteína de FOXP3 e as células dendríticas CD83+ (CDs) por imuno-histoquímica. Todas as análises foram feitas em tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina. A magnitude de expressão de FOXP3 foi estabelecida por curva ROC. A função e a sobrevida do enxerto em 5 anos pós-transplante foram avaliados, assim como fatores preditores de perda do enxerto. Resultados: A correlação da expressão intra-enxerto do gene e da proteína de FOXP3 foi positiva e significativa (r=0.541, p<0.001). Tanto o RNAm quanto a proteína de FOXP3 estavam aumentados em pacientes com rejeição aguda (RA), em comparação com aqueles sem rejeição (SR) (p=0,039 e p<0,001, respectivamente) ou fibrose intersticial/atrofia tubular (FI/AT) (p=0,035 e p=0,034, respectivamente). Níveis elevados do RNAm de FOXP3 (≥ 2,36 log10 RNAm) ou da proteína (≥ 2,5 células FOXP3+/mm2) não se correlacionaram com variáveis demográficas ou do transplante, mas pacientes com FOXP3 RNAm elevado tiveram maiores taxas de filtração glomerular estimada (TFGe) e uma tendência de variação positiva da TFG ao final do seguimento. O número de CDs CD83+ tendeu a ser maior nas biópsias com FI/AT em comparação com SR (p=0,065), mas não na RA. Pacientes com alta expressão de FOXP3 apresentaram maior número de CDs CD83+ na biópsia: 0,86 (0,25-4,0) vs. 0,44 (0-1,12) células/mm2, p=0,032. A sobrevida cumulativa do enxerto em 5 anos não foi influenciada pela expressão do RNAm de FOXP3 (p = 0,69, log-rank test). Na análise de regressão Cox, RNAm e proteína de FOXP3 não foram preditores independentes da perda do enxerto, somente maior TFGe foi fator protetor contra perda do enxerto. Conclusões: Este estudo mostra que a análise molecular de FOXP3 em tecido parafinado do enxerto renal é possível, uma vez que o RNAm e proteína correlacionaram-se positiva e significativamente. Como esperado, houve uma expressão aumentada de FOXP3 em biópsias com RA. Bióspias com alta expressão de FOX3 tiveram maior densidade de células dendríticas. Nesta coorte, o FOXP3 não foi associado à melhor função ou sobrevida do enxerto renal. / Background. The transcription factor FOXP3 is increased in acute rejection in renal transplant recipients, but its influence in graft function and survival is not clear yet. The aim of this study was to correlate FOXP3 gene and protein expression with graft outcomes, and to evaluate its association with antigen presenting cells in kidney graft biopsies. Methods. We assessed 91 kidney transplant recipients undergoing allograft biopsy for acute or chronic dysfunction, classified by Banff histology. FOXP3 mRNA was analyzed by real-time PCR, and FOXP3 protein and dendritic cells (CD83+ DCs) by immunohistochemistry. All analyzes were done in formalinfixed, paraffin-embedded tissue. The magnitude of FOXP3 expression was established by the receiver operating characteristics (ROC) curve. Graft function and survival at 5 years post transplantation were assessed, as well as independent predictors of graft loss. Results. Intra-graft FOXP3 gene and protein expression were significantly correlated (r=0.541, p<0.001). Both FOXP3 mRNA and protein were increased in patients with acute rejection (AR) as compared to those with no rejection (NR) (p=0.039 and p<0.001, respectively) or interstitial fibrosis/tubular atrophy (IF/TA) (p=0.035 and p=0.034, respectively). FOXP3-RNAmhigh (≥ 2.36 log10RNAm ) or FOXP3-proteinhigh (≥ 2.5 FOXP3+ cells/mm2) did not correlate with demographic or transplant variables, but patients with FOXP3-RNAmhigh had higher glomerular filtration rates (GFR) and tended to have a positive delta of GFR at last follow up. CD83+ DCs tended to be increased in biopsies with IF/TA as compared to NR (p=0.065), but were not associated to AR. Patients with FOXP3-RNAmhigh had more CD83+ DCs on biopsy: 0.86 (0.25-4.0) vs. 0.44 (0-1.12) cells/mm2, p=0.032. The cumulative 5-year graft survival of these renal allografts was not influenced by FOXP3 mRNA expression (p=0.69, log-rank test). Neither FOXP3 mRNA or protein were predictors of graft survival, only higher eGFR at biopsy was a protective factor against graft loss. Conclusions: This study gives support for performing FOXP3 molecular analysis in archival tissue of renal graft biopsies, where FOXP3 mRNA and protein had a good correlation. As expected, there was an increased FOXP3 expression in biopsies with AR, and biopsies with FOXP3-RNAmhigh associated with greater number of dendritic cells. In this cohort, FOXP3 was not associated with better renal graft outcomes.

Introdução. A rejeição aguda (RA) permanece entre as principais causas de perda de enxertos renais. A disponibilidade de biomarcadores prognósticos de RA no período pré-transplante poderia ser útil na individualização do tratamento destes pacientes. Neste estudo avaliamos o potencial da mensuração do RNA mensageiro de diferentes genes envolvidos na resposta alogênica como biomarcadores prognósticos pré-transplante. Material. Foram coletadas amostras pré-transplante de 51 pacientes que receberam enxertos renais entre 2008 a 2009. Realizou-se a mensuração da expressão do mRNA dos genes TIM3, FOXP3, Perforina, CXCL-9, CXCL-10 e Granulisina, em células mononucleares do sangue periférico através da técnica de PCR em tempo real. Os resultados da expressão gênica foram correlacionados com a ocorrência de RA, presença de infecções virais e bacterianas em até 1 ano e com a função do enxerto renal aos 1, 6 e 12 meses pós-transplante. Resultados. Os genes TIM3, FOXP3, Perforina e CXCL-9, não apresentaram significância estatística nos grupos que apresentaram ou não episódios de rejeição aguda. A expressão gênica de CXCL-10 e Granulisina foi significativamente menor no grupo que apresentou rejeição aguda (P<0,05). Não houve diferença significativa na correlação entre pacientes que desenvolveram infecção viral ou bacteriana no pós-transplante renal. O mesmo resultado foi encontrado na avaliação da função renal do enxerto. Conclusão. A análise da expressão dos genes avaliados neste estudo no momento prévio ao transplante renal não foi preditor da ocorrência de rejeição aguda, infecções virais ou bacterianas ou da função do enxerto até um ano pós-transplante. / Background. Acute rejection (AR) remains a significant risk factor for kidney-graft failure. Availability of AR prognostic biomarkers during pre-transplant could be helpful to individualize patient´s immunosuppressive treatment. In this study we evaluated the measurement of RNA messenger of different genes involved in the allogeneic response as potential biomarkers of kidney graft rejection. Methods. Pre-transplant samples were obtained from 51 kidney-grafted patients between 2008 and 2009. Expression of the messenger RNA from peripheral blood mononuclear cells of the TIM3, FOXP3, Perforin, CXCL-9, CXCL-10, and Granulisine genes was measured by real-time PCR technique. Gene expression results were associated with AR occurrence, the presence of bacterial and viral infections up to one year after grafting , and with kidney-graft function at 1, 6, and 12 months. Results. Expression of the TIM3, FOXP3, Perforin and CXCL-9 genes were not correlated with episodes of acute rejection. CXCL-10 and Granulisine gene expressions were significantly lower in the group that presented acute rejection (P<0.05). No significant differences in mRNA expression were observed in patients with infections after kidney transplantation and kidney graft function was not correlated with gene expression. Conclusions. As evaluated in the present study pre-transplant gene expression profiles were not predictive of acute rejection, infection or graft function.