La Cisticercosis por Tenia solium es una enfermedad zoonótica común en países en desarrollo y un grave problema de salud pública a nivel mundial. En la actualidad es posible tratarla mediante el uso de cisticidas, pero una vez aplicado el tratamiento el monitoreo de la evolución del animal es limitado por el alto costo de las técnicas de radioimagen. Las pruebas diagnosticas disponibles no son útiles en el monitoreo pues detectan la presencia de anticuerpos contra los C. cellulosae, los cuales se mantienen en circulación aun después de muertos los quistes. Por ello, el objetivo del presente estudio fue demostrar la utilidad del ELISA captura de antígeno en el monitoreo de la persistencia de antígeno parasitario circulante en animales tratados contra cisticercosis. Para este fin, se tomó un grupo de sueros que corresponden al seguimiento pre y post tratamiento de 6 cerdos naturalmente infectados con cisticercosis y tratados con oxfendazol. Se utilizó también el archivo de necropsias y las fichas de evaginación. Se encontró que el tiempo en el que los títulos de antígeno fueron inferiores al punto de corte ocurrió el día 59 post tratamiento y la media de supervivencia fue de 71.5 (59.25 – 83.75) días, también que los animales con escasa carga parasitaria poseen escasa cantidad de antígeno parasitario final. Este resultado demostró que el ELISA – Ag permitiría el monitoreo cuantitativo del comportamiento y persistencia de los antígenos circulantes en animales infectados naturalmente y tratados con una droga cisticida. Finalmente se recomienda el uso de esta prueba en el monitoreo de tratamientos a humanos. / -- Taenia solium cysticercosis is a serious public health problem in developing countries. At the present time it is possible to treat this disease using antiparasitic drugs, but once the treatment is administered, monitoring the disease status of animals is limited by the high cost of radiological techniques. Currently available diagnostic assays are not useful in this respect because they detect the presence of antibodies against the C. cellulosae, which are still in circulation after the cysts have died. The objective of the present study was to demonstrate the utility of a monoclonal antibody-based capture ELISA (Ag-ELISA) in the monitoring of the persistence of circulating parasite antigens in animals treated for cysticercosis. Serum samples of six pigs naturally infected with cysticercosis and treated with oxfendazol were evaluated both before and after treatment. Records of necropsies and evagination tests were also used. It was found that the time for antigen titres to fall to less than the cut off ELISA optical density (OD) occurred on day 59 post-treatment and the mean survival time of C. cellulosae antigens as determined by Kaplan Meier analysis was 71.5 (59.25–83.75) days. It was also found that animals with a small number of cysts had small quantities of parasite antigen. This result demonstrated that this Ag–ELISA would allow the quantitative monitoring of the persistence of circulating antigens of C.cellulosae in animals infected naturally and treated with an antiparasitic drug. Finally, the use of this assay is recommended in the monitoring of human cysticercosis treatment.

En el presente estudio, se llevó a cabo la hidrólisis enzimática de carbohidratos, fibras (celulosa) y de proteínas contenidas en la maca, un recurso natural de uso muy difundido a nivel mundial, con el fin de desdoblar los componentes y nutrientes de la maca a unidades más simples y asimilables por los seres humanos. Se utilizaron las siguientes enzimas comerciales: celulasa (Celluclast® 1,5 L), amilasa (Fungamyl® BG), multienzima (Viscozyme® L) y peptidasa (Neutrase®), las mismas que fueron proporcionadas por Novo Nordisk. Se diseño un ensayo preliminar utilizando doce condiciones de ensayo o tratamiento del polvo de maca con una enzima o combinaciones de estas. Cuando se empleó dos o tres enzimas, en algunos casos estas se aplicaron en forma secuencial y en otros simultáneamente. Las condiciones de reacción se estandarizaron para todos los sistemas preliminares. Luego se seleccionaron cinco por presentar mejores condiciones de reacción y mayor cantidad de azúcares reductores y proteínas. Los resultados analíticos en los cinco sistemas ensayados nos muestran que la concentración de azúcares reductores, producto del desdoblamiento de los carbohidratos alcanza concentraciones entre 77 a 90 g %, en los sub productos de la hidrólisis. De otro lado la concentración en proteínas alcanza valores entre 20 a 33 g %; estas por acción de la proteasa, nos han permitido identificar hasta 13 aminoácidos por cromatografía en capa fina bidimensional. Así mismo se demostró la presencia de dos alcaloides en el polvo de maca, los cuales también fueron identificados en los sub productos de las hidrólisis, demostrando que estos procesos no afectan la estructura de estos metabolitos. Palabras clave: Maca en polvo, hidrólisis enzimática, enzimas industriales, componentes asimilables. / In the present study was carried out the enzymatic hydrolysis of carbohydrates, fibers (cellulose) and of proteins contained in Maca, natural resource very diffused at world level, with the purpose of unfolding the components and nutritious of Maca to simpler and more assimilable units for the human beings. The following commercial enzymes were used: cellulase (Celluclast® 1.5 L), amylase (Fungamyl® BG), multienzyme (Viscozyme® L) and peptidase (Neutrase ®), the same ones that were provided by Novo Nordisk. It was designed a preliminary test using twelve evaluation or treatment of Maca´s powder with an enzyme or combinations of these. When it was used two or three enzymes, in some cases these they were applied in sequential form and in other they were applied simultaneously. The reaction conditions were standardized for all the preliminary systems. Then, five were selected to present better reaction conditions and bigger quantity of sugars reducers and proteins. The analytic results in the five tested systems show us that the concentration of sugars reducers, product of the unfolding of carbohydrates reaches concentrations among 77 to 90 g %, in the sub products of hydrolysis. However the protein concentration reaches values among 20 to 33 g % for action of the protease, there being identified 13 amino acids by chromatography in two-dimensional fine layer. Likewise the presence of two alkaloids was demonstrated in Maca´s powder, which were identified also in the sub products of hydrolyses, demonstrating that these hydrolysis processes don't affect the structure of these metabolites. Key words: Maca´s powder, enzymatic hydrolysis, industrial enzymes, assimilable components.

Orientador: Flávio Dutra de Resende / Banca: João Marcos Beltrame Benatti / Banca: Suélen Capa de Ávila / Banca: Laura Franco Prados / Banca: Marcia Helena Machado da Rocha Fernandes / Resumo: Em dietas com teores elevados teores de amido, fornecidas a ruminantes podem apresentar subaproveitamento em relação ao tempo de permanência da digesta no rúmen, assim, considerando que a digestão é mediada por enzimas presentes na composição dos microorganismos ruminais, a adição de isoenzimas exógenas pode potencializar o aproveitamento da dieta. Desta forma, o objetivo do trabalhofoi avaliar os efeitos da adição de extrato de Aspergillus oryzae contendo alfa - amilase em dietas com elevada inclusão de concentrado no metabolismo e desempenho de bovinos Nelore. O experimento foi conduzido no confinamento individual da estação experimental APTA - Colina / SP / Brasil. Foram utilizados dois delineamentos distintos para avaliar o metabolismo (Exp. 1), e o desempenho (Exp. 2). No Exp. 1 (Metabolismo) foram utilizados dez bovinos Nelore, (5 animais por tratamento), canulados no rúmen, com peso corporal inicial (PCI) 400 ± 25 kg e idade média 24 meses, em um delineamento em esquema crossover e distribuídos em dois tratamentos: Controle (ausência de alfa-amilase) e adição de Amilase (5g/animal/dia de extrato de Aspergillus oryzae alfa-amilase - Amaize®, Alltech, Inc). A dieta foi isoprotéica fornecida ad libitum foi formulada para conter 2,96 Mcal/kg de Energia Metabolizáve (EM)l. A fermentação ruminal foi mensurada a partir de amostras de flúido ruminal coletadas ao final de cada período de 25 dias do total de 125 dias de período experimental. Enquanto que as amostras de sangue fo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In diets with high levels of starch supplied to ruminants, the strategy to improve reduce underutilization of the concentrate is to optimize the digestibility. The digestion is enzyme-mediated by the rumen microorganisms, the addition of exogenous isoenzymes can enhance the use of diet. The objective of this study was to evaluate the effects use of Aspergillus oryzae extract containing alpha-amylase in feedlot diets on metabolism and performance of Nellore cattle. The study was in feedlot at the APTA experimental facility - Colina / SP / Brazil. Two distinct designs were used to evaluate metabolism (Exp. 1) and performance (Exp. 2). Exp. 1: Ten Nellore bulls, rumen cannulated (initial body weight between 400 ± 25 kg and age of 24 months) were housed in individual pens. The experimental design was crossover, in which the animals were randomized between two treatments 1: Control - absence of amylase and 2: Amylase -Aspergillus oryzae extract containing alpha amylase activity (Amaize®, Alltech, Inc,), 5 g/animal daily. The diet was isoprotein provided ad libitum, formulated to contain 2,96 Mcal/kg ME. Ruminal fermentation was measured from rumen fluid samples collected at the end of a 25 day period, while blood samples were collected at the beginning and end of this period. The digestibility and nitrogen balance were measured concomitantly, through total collection of feces and urine, respectively (3 consecutive days). Exp. 2 (performance): Forty-two bulls Nellore (initial body ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Leonardo Susumu Takahashi / Resumo: O objetivo do trabalho foi determinar a exigência proteica e os efeitos da proteína da dieta em indicadores fisiológicos e bioquímicos da piapara (Megaleporinus obtusidens). Para tanto, 300 juvenis (24 ± 1,26 g) foram distribuídos em 20 caixas de 130 L, totalizando 15 peixes/caixa. Foram formuladas 5 dietas isoenergéticas e com níveis crescentes de proteína digestível (21, 24, 27, 30 e 33% PD). Após 77 dias de alimentação, foi realizada a biometria dos peixes para avaliação dos parâmetros de desempenho produtivo e os indicadores fisiológicos: concentração de metabólitos no sangue (amônia sérica e triglicerídeos), relações somáticas, atividade hepática da alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) e atividade da enzima málica e glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH). A cada sete dias, foram determinadas a concentração de amônia total, pH, condutividade elétrica e concentração de oxigênio dissolvido na água das caixas. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com 5 tratamentos e 3 repetições. Os resultados de desempenho produtivo foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e à regressão polinomial. No peso final, taxa de crescimento específico, ganho de peso e conversão alimentar foi observado efeito linear (p<0,05) e no consumo não houve efeito significativo. Na concentração de amônia na água foi observada diferença (p<0,05), sendo observado efeito linear com o aumento de proteína. Na concentração de triglicerídeos sérico, amônia sér... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this work was to determine the protein requirement and the effects of dietary protein on physiological and biochemical indicators of piapara (Megaleporinus obtusidens). For this, 300 juveniles (24 ± 1.26 g) were distributed in 20 boxes of 130 L, totaling 15 fish / box. Five diets were formulated isoenergetic and with increasing levels of digestible protein (21, 24, 27, 30 and 33% PD). After 77 days of feeding, the fish biometry was performed to evaluate the parameters of productive performance and the physiological indicators: concentration of metabolites in the blood (serum ammonia and triglycerides), somatic relations, liver enzymatic activity of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) activity and lipogenesis, malic enzyme and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH). Every 7 days, the concentration of total ammonia, pH, electrical conductivity and oxygen concentration dissolved in the water of the boxes were determined. The experimental design was completely randomized, with 5 treatments and 3 replicates. The results of productive performance were submitted to analysis of variance (ANOVA) and polynomial regression. In the final weight, specific growth rate, weight gain and feed conversion was observed linear effect (p<0,05) and in consumption there was no significant effect (p>0,05). At the concentration of ammonia in the water, a significant difference (p <0.05) was observed with a linear effect. In the serum triglycerides co... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Mario de Oliveira Neto / Resumo: A busca por fontes de energias renováveis vêm ganhando cada vez mais importância, pois, com a eminente escassez dos combustíveis fósseis, que são as principais fontes energéticas utilizadas mundialmente e ao mesmo tempo com os problemas ambientais causados por esses combustíveis, o etanol de segunda geração (2G) surge como uma alternativa de energia renovável já que é obtido a partir de biomassa lignocelulósica. Entretanto, as tecnologias para a conversão desta biomassa em açúcares fermentáveis ainda possuem fatores limitantes. Um dos grandes problemas do processo de obtenção do etanol 2G está relacionado ao custo das enzimas celulolíticas. Sendo assim, desenvolver estratégias para a recuperação dessas enzimas é necessário para assegurar a viabilidade econômica do processo de conversão de biomassa. Diversas técnicas estão sendo estudadas e colocadas em prática para promover a recuperação, reciclagem e imobilização enzimática. Entretanto, nenhuma das metodologias utilizadas demonstram, de maneira geral, alta eficiência, custo baixo, rapidez e manutenção da atividade enzimática. A partir da lignina, subproduto da indústria de papel e celulose, pode-se sintetizar o lignocresol. Este, apresenta grandes expectativas de interação enzimática uma vez que apresenta características físico-químicas favoráveis à adsorção. Frente a isto, propusemos a produção deste composto para promover a interação com enzimas para promover recuperação enzimática. A síntese de lignocresol, oriundo da lig... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The search for renewable energy sources is gaining increasing importance because, with the imminent shortage of fossil fuels, which are the main energy sources used worldwide and at the same time with the environmental problems caused by these fuels, second-generation ethanol (2G) arises as a renewable energy alternative since it is obtained from lignocellulosic biomass. However, the technologies for the conversion of this biomass to fermentable sugars still have limiting factors. One of the major problems in the process of obtaining 2G ethanol is related to the cost of cellulolytic enzymes. Thus, developing strategies for the recovery of these enzymes is necessary to ensure the economic viability of the biomass conversion process. Several techniques are being studied and put into practice to promote recovery, recycling, and enzymatic immobilization. However, none of the methodologies used shows, in general, high efficiency, low cost, fastness and maintenance of the enzymatic activity. From lignin, a byproduct of the pulp and paper industry, lignocresol can be synthesized. This one presents high expectations of enzymatic interaction since it presents physicochemical characteristics favorable to the adsorption. In view of this, we proposed the production of this compound to promote interaction with enzymes to promote enzymatic recovery. The lignocresol synthesis from Pinus spp. Kraft lignin was made by adapting to the phase separation system methodology. In this process, more ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

As sementes do gênero Brachiaria apresentam desuniformidade de maturação, degrana natural e dormência, causando problemas para a colheita e estabelecimento de estande uniforme de plantas em campo; a desuniformidade de maturação acarreta a produção de sementes com grau de dormência diferenciado. Por outro lado, o condicionamento fisiológico é uma opção interessante para uniformizar o processo germinativo. O objetivo desta pesquisa foi verificar os efeitos do condicionamento fisiológico com bioestimulantes, em sementes de Brachiaria humidicola colhidas de diferentes maneiras, armazenadas sob diferentes condições de temperatura e umidade relativa do ar, procurando, também, identificar a possível superação da dormência e verificar a atividade enzimática das sementes durante esse período. As sementes foram obtidas mediante dois procedimentos de colheita: a) sementes colhidas das inflorescências inteiras e b) sementes caídas ao solo. Após a colheita foi realizada a escarificação com H2SO4, obtendo sementes sem escarificação e escarificadas de cada procedimento de colheita. Foram realizados cinco tratamentos nas sementes escarificadas ou não, para os dois procedimentos de colheita: 1- sem condicionamento e papel umedecido com água; 2- sem condicionamento e papel umedecido com KNO3; 3- biocondicionamento com 24-EpiBL, na concentração de 10-8 M; 4- biocondicionamento com GA3, na concentração de 10-4 M e 5- biocondicionamento com 24-EpiBL + GA3, nas concentrações de 10-8 e 10-4 M, respectivamente. Após os tratamentos as sementes foram armazenadas em câmara fria e seca e ambiente natural e realizadas avaliações em quatro épocas (zero, três, seis e nove meses de armazenamento), mediante os testes de germinação e vigor (primeira contagem, velocidade de germinação e, análise computadorizada de imagens de plântulas - SVIS&#174;) e emergência de plântulas, além da determinação da atividade das enzimas &#945;-amilase e polifenoloxidase no início e aos nove meses de armazenamento. Os resultados indicam que o armazenamento das sementes de Brachiaria humidicola, em câmara fria e seca reduz a porcentagem de sementes dormentes; o biocondicionamento com ácido giberélico e 24-EpiBL + ácido giberélico, favorece a velocidade de germinação e o crescimento de plântulas; o condicionamento fisiológico com ácido giberélico isolado ou combinado com 24-epibrassinolídeo, é vantajoso para sementes de Brachiaria humidicola, armazenadas em câmara fria e seca ou ambiente natural e, a atividade da enzima &#945;-amilase aumenta e da polifenoloxidase diminui à medida que a dormência das sementes de Brachiaria é superada durante o armazenamento. / Seeds from the genus Brachiaria present uneven maturation, natural threshing and dormancy, leading to issues during harvest and in the establishment of a uniform plant stand; the uneven maturation entails to the production of seeds with different degrees of dormancy. On the other hand, physiological priming is an interesting option to uniform the germination process. The aim of this research was to verify the effects of physiological priming with biostimulants, on seeds of Brachiaria humidicola harvested by different methods, stored under different conditions of temperature and air relative humidity, also looking to identify the possibility of dormancy breakage and verify seed enzymatic activity during this period. Seeds were obtained through two harvest procedures: a) seeds harvested from whole inflorescences and b) dropped seeds on the ground. After harvest, scarification was performed with H2SO4, obtaining seeds with or without scarification for each harvest procedure. Five treatments were performed on seeds scarified or not, for the two harvest procedures: 1- without priming and paper moistened with water; 2- without priming and paper moistened with KNO3; 3- Bio-priming with 24-EpiBL, in the concentration of 10-8 M; 4- Bio-priming with GA3, in the concentration of 10-4 M and bio-priming with 24-EpiBL + GA3, in the concentrations of 10-8 and 10-4 M, respectively. After treatment seeds were stored in a dry cold chamber and natural environment and evaluations were performed on four periods (zero, three, six and nine months of storage), through germination and vigor tests (first count of germination, speed of germination, computerized image analysis of seedlings - SVIS&#174; and seedling emergence), besides the determination of the activity of the &#945;-amylase and polyphenol oxidase enzymes at the beginning and at the ninth month of storage. The results indicate that the storage of Brachiaria humidicola seeds, in a dry cold chamber reduces the percentage of dormant seeds; bio-priming with 24-EpiBL + gibberellic acid accelerates germination and favors seedling growth; the physiological priming with gibberellic acid alone or combined with 24-epibrassinolide is advantageous for Brachiaria humidicola seeds, stored in dry cold chambers or natural environments and, the activity of the &#945;-amylase enzyme increases and of the polyphenol oxidase decreases as the dormancy of Brachiaria seeds is broken during storage.

Tesis entregada a la Universidad De Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al grado de Magíster en Ciencias Biológicas. / El aumento en la aparición de microrganismos resistentes a los antibióticos es de gran preocupación en el ámbito de salud pública debido al aumento de la mortalidad y costos de tratamiento causado por las enfermedades que provocan. Se han detectado concentraciones de residuos de antibióticos sobre los niveles inhibitorios en aguas residuales, y los tratamientos actuales no son capaces de eliminar estos residuos. En relación con todo esto, los antibióticos de tipo tetraciclina son de gran interés debido a su alto uso, alto nivel de excreción y a su alta persistencia en el medio ambiente. Se ha reportado el uso de enzimas de tipo laccasa de hongos basidiomicetos para la oxidación de diferentes tetraciclinas mostrando distintas eficiencias. Sin embargo, las propiedades observadas aún están por debajo de lo requerido para una aplicación industrial y la optimización ha sido hasta ahora afrontada desde el ámbito de la Biocatálisis y no desde la Ingeniería de Enzimas. En este trabajo se estudió el uso de la laccasa del hongo ascomiceto Botrytis aclada expresada en P. pastoris para la oxidación de tetraciclinas, enzima que presenta una alta tolerancia a inhibición por iones cloruro y alta producción heteróloga. Se produjo y purificó la enzima y se probó su capacidad para oxidar oxitetraciclina e inactivar oxitetraciclina, clortetraciclina y tetraciclina. Bajo la hipótesis de que el sitio de unión de tetraciclinas corresponde al sitio canónico de las Laccasas y con la información disponible sobre el mecanismo catalítico, se modeló la interacción con estos 3 antibióticos y se calculó su energía de unión por métodos in silico. Además, las constantes de disociación de los distintos complejos fueron estudiadas in vitro mediante análisis de la inhibición competitiva ejercida por el antibiótico sobre la actividad de oxidación de ABTS de la laccasa. Observamos que la energía calculada correlaciona con la constante de disociación determinada para los tres antibióticos, mostrando una afinidad por Clortetraciclina > Tetraciclina > Oxitetraciclina. / The high apparition rate of antimicrobial resistant bacteria is of great concern for public health care due to the rise in mortality and the high cost associated to treat the illnesses caused by them. Antibiotic residual concentrations highly over the inhibitory levels have been detected in wastewaters. Now, wastewater treatment plants are not able to remove this kind of residues. In this matter, tetracycline antibiotics are of great concern due to their high use, high excretion rates and persistence in the environment. The use of Laccases from basidiomycetes for the oxidation of a variety of tetracyclines has been reported, showing variable performance. However, the observed oxidation rates are still under the required for industrial applications. Antibiotics removal has been optimized using approaches from the biocatalysis field and not from rational design enzyme engineer. In this work, we studied the use of laccase from Botrytis aclada, an ascomycete fungus, for the oxidation of tetracyclines. This enzyme shows high tolerance to chloride inhibition and high heterologous production rates. The enzyme was expressed and purified, and we proved its capacity to oxidase oxytetracycline and to inactivate oxytetracycline, and tetracycline. Having in mind the hypothesis that the binding site of tetracyclines is the canonical laccase active site, we modeled the interaction with those three antibiotics and calculated the energy of binding using in silico approaches. Also, we determined in vitro the dissociation constants of the complexes by analyzing inhibition kinetics using the antibiotic as a competitive inhibitor of the enzymatic ABTS oxidation. We observed a good correlation between the calculated Energy and the dissociation constants, showing higher affinity for Chlortetracycline > Tetracycline > Oxytetracycline. / CONICYT-PCHA/MagísterNacional/2016 – folio 22160435 y proyecto FONDEF-VIU16E0084. / Agosto 2019

Orientador: Ben-Hur Mattiuz / Banca: Kelly Magalhães Marques / Banca: Teresinha de Jesus Deleo Rodrigues / Resumo: A berinjela é uma olerícola de grande importância em diversos países e seu consumo tem aumentado no Brasil devido às características nutricionais para a alimentação humana. No entanto, esse vegetal apresenta limitações de comercialização como produto minimamente processado devido ao rápido escurecimento enzimático após o corte. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos do recobrimento comestível a base de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) combinado, ou não, com agentes antiescurecimento sobre a qualidade de berinjelas minimamente processadas (BMP). Foram utilizadas berinjelas da cv Nápoli higienizadas e processadas em cubos, com posterior aplicação os recobrimentos por aspersão. Na primeira etapa foram testadas três formulações de HPMC + Cera de Abelha (CA) nas concentrações de 20, 40 e 60%. No segundo experimento testou-se o efeito do HPMC associado ao ácido cítrico (0,5; 1 e 1,5 %) e no terceiro experimento, ao ácido ascórbico (0,5; 1 e 1,5 %). As BPM foram acondicionadas em embalagens de PET (Polietileno tereftalato) e armazenadas em expositores refrigerados a 5°C. As análises foram realizadas a cada 3 dias até 12 dias, determinando-se a perda acumulada de massa fresca, firmeza, índice de brancura, composição gasosa do interior da embalagem, determinação de acetaldeído e etanol, compostos fenólicos totais, atividade das enzimas polifenoloxidase (PPO), peroxidase (POD) e fenilalanina amônia-liase (PAL), e contagem microbiana (microrganismos aeróbios mesófilos, colif... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The eggplant is a vegetable of great importance in many countries and it has an increasing consumption in Brazil thanks to nutritional benefits for human health. Nevertheless, it presents limitations to commercialization due to fast enzymatic browning after cutting. The aim of this Project was to study the effects of an edible coating Hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) based in association, or not, with food aditives on the quality of fresh-cut eggplant (FCE). Eggplants cv. "Napoli" were sanitised and processed in cubes of 2,5 x 2,5 x 2,5 cm and later sprayed with the coatings. In the first step, three HPMC and Beewax (BW), 20, 40 and 60% emulsions were tested. In the second experiment, the effect of HPMC+40% BW associated with citric acid (0,5; 1 e 1,5 %) were assessed and in a third experiment, in association with ascorbic acid (0,5; 1 e 1,5 %). The FCE was packed in PET trays and stored at 5°C. Analysis were carried out each 3 days until 12 days. It was assessed the accumulated loss of fresh matter, firmness, whiteness index, atmosphere inside packaging, acetaldehyde and ethanol determination, total phenols, enzyme activity of polyphenol oxidase (PPO), peroxidase (POD), phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and microbiology counting (total mesophilic aerobic count, total coliforms and E. coli). The coating with HPMC+40% BW reduced the activity of enzymes responsible for browning and the addition of 0,5% of citric acid or 1% of ascorbic acid to the coating led to a lower synt... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Elisabete Jorge Amaral / Coorientador: Nedenia Bonvino Stafuzza / Banca: Danísio Prado Munari / Banca: Luciane Madureira de Almeida / Resumo: O Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC) é uma região do genoma com um denso agrupamento de genes que apresentam alto grau de polimorfismo. Os genes do MHC estão divididos em regiões que apresentam similaridades funcionais, contendo genes da classe I, II e III, sendo que em bovídeos a classe II é subdividida em dois agrupamentos denominados IIa e IIb. Genes da classe II do MHC têm chamado muito a atenção, se tratando de animais de produção, diante da necessidade de melhorar métodos de controle de doenças, por meio do desenvolvimento de novas vacinas e seleção de animais resistentes. Desta forma, o presente trabalho visou à realização de um estudo da diversidade alélica do gene DRB3 em três raças de búfalo de rio criadas no Brasil (Mediterrâneo, Jafarabadi e Murrah) utilizando a técnica de PCR-RFLP. As amostras de DNA foram extraídas de bulbo folicular de 24 animais da raça Mediterrâneo, 23 animais da raça Jafarabadi e 18 animais da raça Murrah. As reações de PCR foram realizadas com volume total de 30 μl e o produto de PCR obtido foi digerido com três enzimas de restrição: RsaI, HaeIII e PstI. Os pares de iniciadores de PCR produziram produto de PCR de aproximadamente 300 bp de tamanho. A digestão com a enzima de restrição RsaI apresentou oito alelos, com tamanhos aproximados: O (300 bp), RsaI-A (230+70 bp), RsaI-B (180+120 bp), RsaI-C (130+90+70 bp), RsaI-D (140+90+70 bp), RsaI-E (120+70+60 bp), RsaI-F (120+110+70 bp) e RsaI-G (110+70+60+55 bp), sendo cinco alelos (O, RsaI-A, RsaI-B, RsaI-C, RsaI-E) na raça Mediterrâneo, quatro alelos (O, RsaI-A, RsaI-F e RsaI-G) na raça Jafarabadi e três alelos (O, RsaI-A e RsaI-D) na raça Murrah. Em todos os produtos de PCR, das três raças, o genótipo homozigoto para o alelo O foi o mais frequente (300bp/300bp). Com a enzima de restrição HaeIII foram observados quatro alelos, com tamanhos aproximados ... / Abstract: The Major Histocompatibility Complex (MHC) is a genome region with have a dense clusters of genes that showing a high degree of polymorphism. The genes of the MHC are divided in regions that show similar functions, and contain genes of the classe I, II and III. The class II, in bovides is subdivided in two clusters called IIa and IIb. Much attention has been given to class II genes, especially to the livestock, because the production animal has a need of more efficient methods to control diseases through the development of vaccines and selection of resistant animals. Therefore, the present work aimed study the allelic diversity of the DRB3 gene in three breeds of river buffaloes raised in Brazil (Mediterranean, Jafarabadi and Murrah) by PCR-RFLP. DNA samples were extracted from follicle bulb of 24 Mediterranean, 23 Jafarabadi and 18 Murrah buffaloes breeds. The PCR reactions have 30 μl of volume and the PCR product was digested with three restriction enzymes: RsaI, HaeIII and PstI. The primers pairs produced a PCR product with 300 bp size proximally. Digestion with the restriction enzyme RsaI presented eight alleles, with proximally sizes: O (300 bp), RsaI-A (230+70 bp), RsaI-B (180+120 bp), RsaI-C (130+90+70 bp), RsaI-D (140+90+70 bp), RsaI-E (120+70+60 bp), RsaI-F (120+110+70 bp) and RsaI-G (110+70+60+55 bp), and were five alleles (O, RsaI-A, RsaI-B, RsaI-C and RsaI-E) in the Mediterranean breed, four alleles (O, RsaI-A, RsaI-F and RsaI-G) in the Jafarabadi breed and three alleles (O, RsaIA and RsaI-D) in the Murrah breed. In all of the PCR products, of the three breeds, the homozygote genotype for the allele O was the most frequent (300bp/300bp). Digestion with the HaeIII restriction enzyme produced four alleles, with proximally sizes: HaeIII-A (220+80 bp), HaeIII-B (170+80+50 bp), HaeIII-C (210+80 bp) and HaeIII-D (170+130 bp), where the Mediterranean breed presented the four alleles ... / Mestre

Orientador: Janete Apparecida Desidério / Banca: Sonia Marli Zingaretti / Banca: Liliane Marcia Mertz Henning / Resumo: Com o atual cenário de mudanças climáticas, observa-se a tendência a eventos de seca mais longos e recorrentes, desta forma a obtenção de plantas mais tolerantes à seca figura como um dos principais investimentos dentro da ciência e tecnologia nacional. Os oligossacarídeos da família das rafinoses (RFOs) desempenham múltiplas funções nas plantas e sabe-se que estes são acumulados nos tecidos vegetais em situações de déficit hídrico, garantindo a estabilidade das membranas celulares, consequentemente mantendo as funções vitais da planta. Por sua vez, a enzima galactinol sintase (GolS, EC 2.4.1.123), catalisa o primeiro passo na biossíntese dos oligossacarídeos dos RFOs desempenhando um importante papel regulador na partição do carbono entre sacarose e RFOs. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi introduzir em soja, via Agrobacterium tumefaciens, a construção gênica 35S:AtGolS2 e caracterizar molecularmente e fisiologicamente os eventos obtidos sob déficit hídrico. Para o processo de transformação, a cultivar convencional de soja BRS 184 foi utilizada e os eventos obtidos foram caracterizados quanto ao número de cópias através da técnica de qPCR. Para a análise da expressão gênica constitutiva o RNA total dos eventos, em condições bem irrigadas, foi extraído e a expressão determinada via RT-qPCR. A taxa de segregação foi calculada através do teste do X2 (p≤ 0.05). Com base nos resultados obtidos, dois eventos (2Ia1 e 2Ia4) foram selecionados para serem analisados quanto a respostas moleculares e fisiológicas sob déficit hídrico induzido em condições de casa de vegetação. Os resultados mostraram que nas plantas do evento 2Ia4 o maior acumulo de água associado a menor área foliar na condição controle levou a manutenção das trocas gasosas causado pela redução na transpiração foliar, maior acúmulo de água no substrato e acúmulo de transcritos de rafinose e galactinol nos tecidos / Abstract: With the current scenario of climate change, there is a tendency to longer and recurrent drought events, thus obtaining more drought tolerant plants figure as a major investment in the national science and technology. Raffinose family oligosaccharides (RFOs) plays multiple functions in plants and it is known that these are accumulated in plant tissues in water deficit situations, guaranteeing the stability of cell membranes, thus maintaining the vital functions of the plant. In turn, galactinol synthase (GolS, EC 2.4.1.123) catalyzes the first step in the biosynthesis of RFOs plays an important regulatory role in carbon partitioning between sucrose and orphans. Thus, our objective was to introduce gene construction 35S:AtGolS2 via Agrobacterium tumefaciens in soybean plants and characterize molecularly and physiologically events obtained under water deficit. In this context, the conventional soybean BRS 184 was used in the transformation process and the soybean events were molecularly characterized in regard to the transgene copy number by qPCR technique. For the analysis of constitutive gene expression total RNA of events, well-watered conditions, was extracted and the expression determined by RT-qPCR. The segregation rate was calculated using the X2 test (p ≤ 0.05). Based on our results, two events (2Ia1 and 2Ia4) were selected to be analyzed for physiological responses under drought simulated under greenhouse conditions. The results showed that the plants 2Ia4 event the largest accumulation of water associated with lower leaf area in the control condition led to maintenance of gas exchange caused by the reduction in leaf transpiration, increased water accumulation in the substrate and accumulation of raffinose and galactinol transcripts in tissues. Thus, the increased levels of these carbohydrates would have made these act as osmoprotectors, enabling the recommendation of 2Ia4 plants breeding programs aimed at tolerance to drought / Mestre