Orientador: José Buratini Junior / Banca: José Antonio Visitin / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: Durante o desenvolvimento ovariano fetal, a formação folicular inicial é decisiva para a fertilidade da fêmea, pois define sua reserva gametogênica. Tem sido proposto que a progesterona e o estradiol desempenham papel regulatório na foliculogênese pré-antral, de forma que sua produção reduzida em ovários fetais bovinos antecede o surgimento de folículos primordiais e primários. Recentemente, os FGFs 10 e 18 foram reportados em folículos ovarianos bovinos como redutores dos níveis de esteróides, o que parece envolver a inibição da expressão de enzimas necessárias à esteroidogênese. Em adição, a expressão do FGF10 foi observada durante o desenvolvimento ovariano fetal bovino, e esteve positivamente associada ao aumento no número de folículos primários. O presente estudo investigou primeiramente o padrão de expressão do RNAm das enzimas esteroidogênicas (StAR, CYP11A1, 3β-HSD, CYP17A1, CYP19A1 e 17β-HSD) em ovários de fetos bovinos em idades gestacionais específicas (60, 75, 90, 120, 150 e 210 dias). Todos os genes investigados se mostraram expressos e regulados ao longo da gestação. Os níveis de RNAm da CYP19A1 diminuíram dos 60 para os 90 dias, sugerindo envolvimento desta enzima com a produção decrescente de estradiol observada previamente durante este período gestacional. A expressão das demais enzimas foi elevada ao longo da gestação, coincidente com o aumento da competência esteroidogênica descrito preliminarmente durante o desenvolvimento folicular inicial. Em adição, foi investigada a participação dos FGFs 10 e 18 na esteroidogênese ovariana fetal bovina. A expressão do FGF18 e de seus receptores (FGFR2C, FGFR3C e FGFR4) foi detectada em ovários fetais bovinos ao longo da gestação (60, 75, 90, 120, 150 e 210 dias). A abundância de RNAm do FGF18 aumentou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: During fetal ovarian development, early follicular formation is essential to female fertility, when the gametogenic reserve is defined. It has been proposed that progesterone and estradiol play regulatory role on preantral folliculogenesis, once its reduced production in bovine fetal ovaries precedes primordial and primary follicle assembly. Recentlly, FGFs 10 and 18 were reported in bovine ovarian follicles as reducers of steroids levels, and this seems to involve the inhibition of enzymes necessary to steroidogenesis. In addition, FGF10 expression was observed during bovine fetal ovary development, and it was positively associated with the elevation on primary follicles number. The present study first investigated the mRNA expression patterns for steroidogenic enzymes (StAR, CYP11A1, HSD3B1, CYP17A1, CYP19A1 and HSD17B1) in bovine fetal ovaries at specific gestational ages (60, 75, 90, 120, 150 e 210 days). Expression of all investigated genes was detected and regulated through gestation. Messenger RNA levels of CYP19A1 decreased from days 60 to 90 of gestation, suggesting involvement of this enzyme on decrescent estradiol production previously observed during this gestational period. The expression of other enzymes was elevated during gestational period, which was coincident with the enhance of steroidogenic competence previously described during early follicular development. In addition, the participation of FGFs 10 and 18 on steroidogenesis in bovine fetal ovaries was investigated. The expression of FGF18 and its receptors (FGFR2C, FGFR3C and FGFR4) was detected in bovine fetal ovaries through gestation (60, 75, 90, 120, 150 e 210 days). The mRNA abundance of FGF18 enhanced between 90 and 120 days and decreased at 210 days. The expression of FGFR2C and FGFR4 did not vary during... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

El invertebrats constitueixen el 95% de les espècies animals i, com en el cas dels vertebrats, són susceptibles a l'efecte dels disruptors endocrins (DEs). Tot i això, la comprensió d'aquest fenomen està limitada pel desconeixement del sistema endocrí dels invertebrats. L'alteració de la síntesis i metabolisme d'hormones esteroides és un dels possibles mecanismes d'acció dels DEs. En aquesta tesi s'ha caracteritzat el metabolisme d'hormones esteroides en diferents espècies d'invertebrats per tal d'avaluar l'efecte in vitro de DEs en aquestes espècies, i finalment investigar l'efecte in vivo de DEs en els nivells i el metabolisme d'esteroides en espècies d'un filum seleccionat (Mol·lusca). Les espècies investigades (Mollusca: Marisa cornuarietis, Mytilus sp., i/o Crassostrea virginica; Crustacea: Hyalella azteca; i Echinoderma: Paracentrotus lividus) van metabolitzar la testosterona a una sèrie de metabolits de fase I que també són formats per vertebrats, amb l'excepció de 4-androstene-3?,17?-diol, un metabolit format per P. lividus i H. azteca. Una de les diferències més importants amb els vertebrats va ser la baixa contribució de les hidroxilacions en el metabolisme de testosterona, i en el cas dels mol·luscs, el metabolisme d'androstenediona (reducció en 5??en comptes de reducció en 17?). Pel que fa al metabolisme de testosterona de fase II, les sulfotransferases es trobaven en nivells alts en P. lividus, però baixos o indetectables en H. azteca i totes les espècies de mol·luscs investigades. En canvi, tots els invertebrats estudiats presentaven una gran capacitat de conjugació d'hormones esteroides amb àcid grassos, una via que sembla que ha estat ben conservada al llarg de l'evolució. Els nivells d'hormones esteroides i algunes de les vies enzimàtiques que les metabolitzen van mostrar diferències estacionals, entre diferents teixits i entre sexes, fet que recolza la possible funció fisiològica de les hormones esteroides en invertebrats. Alguns xenobiòtics van interferir in vitro amb els enzims que metabolitzen les hormones esteroides. Entre les vies investigades, la 5?-reductasa i la sulfotransferasa, van mostrar la sensibilitat més alta a inhibició/activació per tributilestany (TBT), trifenilestany (TPT) i fenarimol. Per últim es va investigar l'efecte de l'exposició a estradiol, petroli, i la barreja de petroli i compostos alquilfenòlics en bivalves Mytilus sp., i l'exposició a metiltestosterona, TBT, TPT i fenarimol en el gasteròpode M. cornuarietis. El tipus d'efectes induïts per l'estradiol van dependre en gran mesura de la seva concentració. Algunes de les respostes observades en els musclos exposats a petroli o la barreja de petroli i alquilfenols, van ser similars a les que s'havien observat per concentracions altes d'estradiol. En aquests experiments es va observar també el possible rol que juga la conjugació d'esteroides amb àcid grassos en la regulació dels nivells d'esteroides lliures. L'exposició als compostos organoestànnics (TBT i TPT) va causar l'aparició d'imposex i va resultar en una reducció del nivell d'esteroides en forma esterificada en femelles de M. cornuarietis, però no en mascles. Els altres compostos avaluats (metiltestosterona i fenarimol) van induir imposex en femelles, però no van mostrar alteracions en els nivells d'esteroides esterificats, de manera que no es va poder demostrar la connexió entre la davallada dels nivells d'esteroides conjugats amb àcids grassos i el fenomen de l'imposex. L'exposició a TPT va inhibir 5?-reductasa en femelles de M. cornuarietis. Tot i així, cap dels dos organoestànnics va alterar el dimorfisme sexual en el metabolisme d'androstenedione que existeix en el complex glàndula digestiva/gònada d'aquest gasteròpode. En resum, aquesta tesi contribueix al coneixement del metabolisme d'andrògens en invertebrats i identifica dianes on poden actuar els disruptors endocrins. / Ninety-five percent of all animal species are invertebrates, and like vertebrates, they are susceptible to endocrine disruption. Nevertheless, there are important gaps on the knowledge of the endocrine system of invertebrates that hinder the understanding of the endocrine disruption phenomena in those species. Steroid synthesis and metabolism is one of several possible targets of endocrine disruptors. This thesis aimed to characterize sex steroid metabolism in different invertebrate species, to test the in vitro effect of model endocrine disruptors in those species, and to test the in vivo effect of model endocrine disruptors on steroid levels and metabolism in species from a selected phyla (Mollusca). The species investigated (Mollusca: Marisa cornuarietis, Mytilus sp., and/or Crassostrea virginica; Crustacea: Hyalella azteca; and Echinoderma: Paracentrotus lividus) were able to form a series of phase I metabolites of testosterone that are also formed by vertebrates, with the exception of 4-androstene-3?,17?-diol, a metabolite formed by P. lividus and H. azteca. One of the major differences with vertebrate species was the lower contribution of hydroxylases in the metabolism of testosterone, and the metabolic fate of androstenedione in molluscs (5?-reduction instead of 17?-reduction). Regarding phase II metabolism of testosterone, sulfotransferases were found at high levels in P. lividus, but low or undetectable levels were present in H. azteca and the molluscan species investigated. In contrast, the conjugation of steroids with fatty acid moieties was present in all invertebrates investigated, showing that acyl-CoA:steroid acyltransferases are well-conserved through evolution. Steroid levels and the enzymatic activities for some metabolic pathways showed differences between males and females, among tissues, and between seasons in some invertebrate species, which adds further evidence for a physiological role of sex steroids in invertebrates. Some xenobiotics modulated steroid metabolic pathways in invertebrates in vitro. Among the pathways investigated, 5?-reductase and sulfotransferase showed the highest sensitivity to inhibition/activation by tributyltin (TBT), triphenyltin (TPT) and fenarimol. Finally, the effects of the exposure to estradiol, crude oil, and the mixture of crude oil and alkylphenolic compounds in Mytilus sp. and the exposure to methyltestosterone, TBT, TPT and fenarimol in the gastropod M. cornuarietis were investigated. The type of effects induced by estradiol depended greatly on the concentration. Some of the responses observed in mussels exposed to crude oil and the mixture of crude oil and alkylphenols were similar to those observed in mussels exposed to the highest concentrations of estradiol. Those experiments also showed that esterification seems to play a key role in the regulation of free steroid levels in bivalve molluscs. The exposure to the organotin compounds (TBT and TPT) caused imposex and decreased esterified steroid levels in females of M. cornuarietis, but not in males. Methyltestosterone and fenarimol induced imposex in females, but did not lead to alterations in esterified steroid levels. Therefore, the connection between a decrease of esterified steroids and the phenomena of imposex could not be proved. The exposure to TPT inhibited???-reductase in female M. cornuarietis. However, neither TPT nor TBT altered the sexual dimorphism in androstenedione metabolism that exists in the digestive gland/gonad complex of this snail species. Overall, this thesis contributes to the knowledge of androgen metabolism in invertebrate species and identifies possible targets of endocrine disruption.

A amígdala medial (AMe) é um núcleo superficial do complexo amigdalóide e que ocupa seu aspecto rostromedial. A AMe modula uma série de comportamentos além de modular a memória e o aprendizado associado a estímulos olfativos e visuais. Em ratos é uma estrutura sexualmente dimórfica e está dividida em quatro subnúcleos: ântero-dorsal (AMeAD), ântero-ventral (AMeAV), póstero-dorsal (AMePD) e pósteroventral (AMePV). A AMe apresenta células com características morfológicas variadas e receptores para hormônios gonadais amplamente distribuídos entre todos os seus subnúcleos, mas principalmente na AMePD. O presente trabalho teve por objetivo estudar a ação dos esteróides sexuais na densidade de espinhos dendríticos na AMePD de ratas ovariectomizadas e se sua ação pode ser mediada pelos receptores do tipo NMDA. Para tanto, foram utilizadas ratas Wistar adultas (n = 6 por grupo experimental, descritos a seguir) que foram ovariectomizadas e injetadas com veículo oleoso (“O”; 0,1ml s.c.); benzoato de estradiol (“BE”; 10μg/0,1ml s.c.); benzoato de estradiol e progesterona (“BE+P”; 10μg/0,1ml e 500μg/0,1ml s.c.). Adicionalmente, foram estudadas fêmeas ovariectomizadas e que receberam benzoato de estradiol e salina (“BE+S”; 10μg/0,1ml s.c. e 0,2 ml i.p.) ou benzoato de estradiol e LY235959, antagonista específico dos receptores do tipo NMDA para o glutamato (“BE+LY235959”; 10μg/0,1ml s.c. e 3mg/Kg i.p.). Todas as injeções foram feitas ao longo de 4 dias. Cinco horas após a última injeção, os animais foram anestesiados e submetidos à técnica de Golgi do tipo “single-section”. Os encéfalos foram seccionados em vibrátomo e os cortes foram colocados, após fixação, em solução de bicromato de potássio e, a seguir, em nitrato de prata. Neurônios bem impregnados e indubitavelmente presentes na AMePD foram selecionados para estudo. Os espinhos presentes nos primeiros 40 μm dendríticos foram desenhados com auxílio de uma câmara clara acoplada a microscópio óptico em aumento de 1000X. Cada animal teve 8 ramos dendríticos selecionados, um por neurônio diferente, perfazendo 48 ramos ao total em cada grupo experimental. Os valores obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) de uma via e ao teste post hoc de Bonferroni (primeiros 3 grupos) ou ao teste “t” de Student não-pareado (últimos 2 grupos), ambos com α = 5%. Os resultados indicaram que as ratas que foram ovariectomizadas e tratadas com O, BE e BE+P apresentaram uma diferença estatisticamente significante entre si [F(2,143) = 104,24; p < 0,001]. Os grupos BE e BE+P (média ± epm = 1,91 ± 0,04 e 2,67 ± 0,05, respectivamente) apresentaram maior densidade de espinhos dendríticos na AMePD quando comparados ao grupo controle injetado com óleo (1,60 ± 0,05; p < 0,001). Adicionalmente, nos grupos BE+S e BE+LY235959, a densidade de espinhos dendríticos diminuiu no grupo que recebeu o antagonista dos receptores do tipo NMDA (2,02 ± 0,04) em relação ao que recebeu salina (2,15 ± 0,04; p = 0,04). O presente estudo sugere que a densidade de espinhos dendríticos na AMePD é afetada pelos hormônios gonadais femininos, sendo que a progesterona potencializa o efeito do estradiol. De forma muito interessante, a ação do estradiol parece ocorrer, pelo menos em parte, pela interação com receptores do tipo NMDA. Esses resultados podem contribuir para o entendimento da plasticidade morfológica e sináptica representada pela densidade de espinhos dendríticos na AMePD, a qual parece ser mediada pelos esteróides sexuais e em área do sistema nervoso relacionada com a modulação de comportamento reprodutivo feminino.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-04-29T20:59:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333080.pdf: 7679469 bytes, checksum: 8eb994e8e8bd6bcdb187d0312c7a1489 (MD5) Previous issue date: 2014 / Visando à obtenção de novos compostos de interesse terapêutico, o trabalho tem como objetivo o isolamento e elucidação estrutural de substâncias obtidas de organismos marinhos de ocorrência no sul do Brasil e Argentina. O estudo químico das espécies do Brasil foi guiado pela avaliação da atividade anti-herpética, antimicrobiana, antiprotozoária e atividade citotóxica dos extratos e frações. Foram selecionados para investigação o octocoral Leptogorgia punicea coletado em ilhas da costa de Florianópolis, outro octocoral ainda não identificado e duas esponjas coletadas no sul da Argentina. O extrato em hexano (HE) do octocoral L. punicea inibiu o crescimento das cepas de S. aureus e C. albicans no ensaio de difusão em disco e ainda, o extrato em diclorometano apresentou uma inibição de 38,8% para as formas epimastigotas de T. cruzi. Cinco novas substâncias, 6ß-acetóxi-colestan- 3ß,5a,19-triol, 6ß-acetóxi-colestan-3ß, 5a,11ß?triol, 6ß-acetóxi-colest- 22-en-3ß,5a,11ß-triol, 24-nor-6ß-acetóxi-colest-22-en-3ß,5a,11ß-triol e 6ß-acetóxi-colest-22-en-3ß,5a,18-triol, denominadas de punicinóis A-E, foram isoladas do extrato etanólico do octocoral L. punicea e suas estruturas elucidadas por métodos espectroscópicos e espectrometria de massas de alta resolução. As substâncias isoladas apresentaram atividade citotóxica para a linhagem de câncer de pulmão de células não-pequenas (A549), com atividades mais promissoras para as substâncias, punicinol A e punicinol B com CI50 de 9,7 µM e 9,6 µM. Das espécies coletadas na Argentina, foram isolados cinco substâncias, dentre elas um bromoindol (6-bromo-1H-indol-3-carboxaldeído), o phidróxi benzaldeído, o nucleosídeo timidina em mistura com uracila e um sesquiterpeno denominado (+)-aromadendran-5-ol.<br> / Abstract : Marine organisms have provided a wide range of new compounds with diverse carbon skeletons and valuable biological activities. Aiming to obtain new compounds of therapeutic interest, the isolation and structural elucidation of substances obtained from marine organisms occurring in southern Brazil and Argentina was performed. The isolation was guided by the evaluation of antiviral, antimicrobial and antiprotozoal activity of the extracts, fractions and isolated compounds obtained in the process. The octocoral Leptogorgia punicea was selected for the research, collected on islands off the coast of Florianópolis, besides another unidentified octocoral and two sponges collected in Southern Argentina. As a result of the octocoral L. punicea, the hexane extract (HE) inhibited the growth of strains of S. aureus and C. albicans in the disk diffusion assay and also the dichloromethane extract showed an inhibition of 38.8% for epimastigotes of T. cruzi. Five new substances, 6ß-acetoxycholestan-3ß,5a,11ß-triol; 6ß-acetoxycholestan- 3ß,5a,18-triol; 6ß-acetoxycholest-22E-en-3ß,5a,11ß -triol; 24-nor-6ß- acetoxycholest-22E-en-3ß,5a,11ß-triol and 6ß-acetoxycholest-22E-en- 3ß,5a,18-triol, named punicinols A-E, were isolated from ethanol extract of octocoral Leptogorgia punicea. The five compounds induced in vitro cytotoxic effects against lung cancer A549 cells, while punicinols A and B were the most active, with IC50 values of 9.7 µM and 9.6 µM, respectively. The study with marine organisms from Argentina resulted in the isolation of five substances including one bromoindole (6-bromo-1H-indole-3-carboxaldehyde), p-hydroxy benzaldehyde, the thymidine nucleoside, uracil and a sesquiterpene called (+)aromadendran-5-ol.

SILVA, W. M. B. Contribuição ao conhecimento químico de Calliandra mucugeana e Calliandra sessilis. 2012. 93 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-28T21:23:02Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_wmbsilva.pdf: 3534414 bytes, checksum: 9e4a8961d96e9314ae0e27c71aa94d1e (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-12-07T23:05:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_wmbsilva.pdf: 3534414 bytes, checksum: 9e4a8961d96e9314ae0e27c71aa94d1e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-07T23:05:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_wmbsilva.pdf: 3534414 bytes, checksum: 9e4a8961d96e9314ae0e27c71aa94d1e (MD5) Previous issue date: 2012 / This work describes the chemical investigation of Calliandra sessilis and Calliandra mucungeana (Fabaceae). The Chemical prospection of the root extracts of the two species resulted in the isolation and characterization of steroids, diterpenes and fatty esters. From the hexane extract were isolated a ternary mixture of the steroids β-sitosterol, espinasterol and estigmasterol, the pentacyclic triterpene lupeol, besides a diterpene of skeleton cassane, 2,12-dioxo-3- hydroxy-15,17-epoxy-cassa-13(15),14(17)-diene. From the ethanol extract were isolated a binary mixture of bis-(2,3-dihydroxypropil) tetracosanodioate and bis-(2,3- dihydroxypropil) docosanodioate, as well as, a glucosidal steroidal mixture constituted of β-sitosterol, espinasterol and estigmasterol. The structural determinations of isolated compounds were performed by spectrometric techniques, such as: infrared (IR), mass spectrometry (IES-MS) and proton nuclear magnetic resonance (1H NMR) 13-carbon ( 13C NMR), including dimensional techniques (COSY, HSQC and HMBC), besides comparison with described data / Este trabalho descreve a investigação química das espécies Calliandra sessilis e Calliandra mucungeana (Fabaceae). A Prospecção química dos extratos das raízes das respectivas espécies permitiu o isolamento e caracterização de esteroides, diterpenos e ésteres graxos. Do extrato hexânico foram isolados a mistura ternárias dos esteroides, β-sitosterol, espinasterol e estigmasterol, o triterpeno pentacíclico lupeol, além de um diterpeno de esqueleto cassano 2,12-dioxo-3-hidróxi-15,17-epóxi-cassa-13(15),14(17)-dieno. Do extrato etanólico foram isolados uma mistura binária dos ésteres tetracosanodioato de bis-(2,3-diidroxipropila) e docosanodioato de bis-(2,3-diidroxipropila) e ainda, a mistura dos esteroides glicosilados, β-sitosterol, espinasterol e estigmasterol. Na determinação estrutural dos compostos isolados, utilizou-se técnicas espectométricas como: infravermelho (IV), espectrometria de massas (EM-IES) e ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN 1H) e carbono-13 (RMN 13C), incluindo técnicas bidimensionais (COSY, HSQC e HMBC ) além de comparação com dados descritos na literatura

A concentração intratesticular de andrógenos no período fetal e neonatal é elevada, entretanto as células de Sertoli não expressam o receptor intracelular de andrógenos (iAR). Assim, neste período as células de Sertoli não respondem aos andrógenos através dos mecanismos clássicos. A importância fisiológica da elevada concentração de andrógenos ainda não é compreendida, acredita-se ser em virtude de sua ação através de mecanismos não-clássicos. Os hormônios T (testosterona) e FSH atuam sinergicamente para aumentar a eficiência da espermatogênese, entretanto estudos mostram que o FSH bloqueia a fosforilação ERK mediada pela ação não-clássica da T. Este estudo teve por objetivos: avaliar a expressão de iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn; avaliar o efeito da T e da EpiT sobre a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn; avaliar o efeito da T sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn; e avaliar a interação entre os efeitos eletrofisiológicos da T e epitestosterona (EpiT) com o FSH em células de Sertoli de ratos no 14º dpn. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para a avaliação a imunorreatividade ao iAR (n=5 por grupo). Na técnica de captação de 45Ca2+ testículos inteiros de ratos no 4º dpn foram pré-incubados com 45Ca2+ por 60 minutos e incubados com T (1 μM) ou EpiT (1 μM) por 5 minutos (n=5 por grupo). O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos testículos de animais no 5º dpn foi realizada a aplicação de T (1 μM), n=4. Nos animais no 14º dpn foi realizada a aplicação de FSH (4 mU) seguida da aplicação de T (1 μM) ou e EpiT (1 μM), após 30 segundos (n=7 e 6, respectivamente); e EpiT (1μM) após 5 minutos (n=6). Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos, ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni e teste de Friedmann, seguido do pós-teste de Dunn. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA/UFRGS n° 22635. A imunorreação ao iAR foi observa nas células de Leydig e células peritubulares em todas as idades. Não foi observada marcação referente a iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn. T e EpiT estimularam a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn. A aplicação tópica de T promoveu a despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 4º dpn. A aplicação de FSH seguida da aplicação de T e EpiT promoveu uma redução da reposta dos dois hormônios. Já aplicação de EpiT 5 minutos após a aplicação do FSH resultou em um retardo da despolarização promovida pela EpiT. A resistência da célula também foi reduzida, em comparação com a resistência da aplicação isolada da EpiT. Concluímos que: as células de Sertoli de ratos Wistar não expressam iAR no 4º e 5º dpn; T e EpiT atuam através do mecanismo de ação não clássico estimulado a captação de cálcio em testículos inteiros de ratos no 4º dpn; e a T produz um efeito despolarizante sobre a membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn similar ao já observado aos 15 dias. Este efeito não-clássico produzido pelos andrógenos é mediado por um receptor, ainda não identificado, localizado na membrana celular ou próximo a ela, estruturalmente diferente do iAR. A interação entre os efeitos do FSH e andrógenos sobre o potencial de membrana de células de Sertoli resulta na redução da resposta despolarizante desencadeada pelos hormônios. / The intratesticular testosterone concentration is high in the early postnatal period, but the intracellular androgen receptor expression is still absent in Sertoli cells. Thus, these cells do not respond to androgens, through classical mechanisms. The physiological importance of the high concentration of androgens in the testes is not fully understood, it is believed to be due to its action through non-classical mechanisms. Both FSH and T (testosterone) increase the spermatogenic efficiency, however studies show that FSH blocks testosterone-mediated activation of ERK mediated by non-classic action. This study aimed to evaluate iAR expression in Sertoli cells from Wistar rats on post-natal day (pnd) 4 and 5; the non-classical effects of testosterone and epitestosterone on calcium uptake and the electrophysiological effects of testosterone (1 μM) on Sertoli cells from rats on pdn 4 and 5 with lack of expression of intracellular androgen receptor (iAR), and evaluate the crosstalk on electrophysiological effects of testosterone and epitestosterone with FSH in Sertoli cells from rats on pnd 14. Immunohistochemistry was used to evaluate iAR immunoreactivity in Sertoli cells from Wistar rats (n = 5 each group). Calcium uptake was investigated using whole testes from rats on pdn 4. The testicular tissue was pre-incubated in Hank’s balanced salt solution (HBSS) with 45Ca2+ for 60 min (n=5 in each group). Then, testes were incubated in HBSS with 45Ca2+, with or without T (1 μM) or EpiT (1 μM) for five minutes. The membrane potential of Sertoli cells was recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. T (1 μM) it was apply in testis of rats on pnd 5 (n=5). In animals on pnd 14 FSH (4 mU) injection was followed by the application of T (1 μM) or EpiT (1 μM) after 30 seconds (n = 7 and 6, respectively) and EpiT (1μM), after 5 minutes (n = 6). The results are given as mean ± SEM. For statistical analyses it was used Student T-test, ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test and Friedman test followed by Dunn's post-test. This study was approved by the Ethics Committee for animal research of UFRGS (process number CEUA/UFRGS n° 22635). The iAR immunoreactivity was observed in Leydig and peritubular cells at all ages. No immunoreaction concerning of iAR was observed in Sertoli cells on pnd 4 and 5. At this age both, testosterone and epitestosterone increased 45Ca2+ uptake, within 5 minutes of incubation. Testosterone promoted membrane potential depolarization of Sertoli cells on pnd 5. FSH application followed by testosterone and epitestosterone reduced the depolarization of the two hormones. Application of epitestosterone five minutes after FSH resulted in a delay of epitestosterone-promoted depolarization. The cell resistance was also reduced in comparison with the resistance of the isolated application EpiT. Sertoli cells from rats on pnd 4 and 5 do not express iAR. Both T and EpiT act through non-classical mechanism stimulating calcium uptake in whole rat testes on dpn 4. T produces a depolarizing effect on the Sertoli cell membrane of rats on pnd 5 similar to observed at 15-day-old rats. This non classical action of androgens is mediated by a receptor, not yet identified, situated in the membrane cell or close to it, different from iAR. FSH, and testosterone/epitestosterone affect each other electrophysiological responses suggesting a cross talking in the intracellular signaling pathways.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2014-09-02T17:54:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Marcelo (1).pdf: 12759308 bytes, checksum: 40b75be7f8928a0434ee0e8b3f6c1b55 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2014-09-04T15:02:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Marcelo (1).pdf: 12759308 bytes, checksum: 40b75be7f8928a0434ee0e8b3f6c1b55 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-04T15:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Marcelo (1).pdf: 12759308 bytes, checksum: 40b75be7f8928a0434ee0e8b3f6c1b55 (MD5) / Triterpenos e esteroides são conhecidos por suas atividades biológicas. Derivados destes compostos podem potencializar atividades que foram descritas para seus precursores. A síntese de novos compostos de produtos naturais bioativos abre um amplo espectro de possibilidades estratégicas no que se refere a modular ou mesmo descobrir novas propriedades. Este trabalho descreve o isolamento de ácido ursólico e ácido oleanólico (em mistura) de Eriope Blanchetii, síntese de derivados de -sitosterol, estigmasterol, lupeol, ácido ursólico e ácido oleanólico. Os derivados sintetizados são denominados: bromoacetato de sitosterila, bromoacetato de estigmasterila, bromoacetato de lupeoíla, bromoacetato de ursoloíla, bromoacetato de oleanoíla, 2-pirrolidin-1-il acetato de sitosterila, 2- pirrolidin-1-il acetato de estigmasterila, 2-pirrolidin-1-il acetato de lupeoíla, 2- pirrolidin-1-il acetato de ursoloíla, 2-pirrolidin-1-il acetato de oleanoíla. Estes compostos foram caracterizados pela análise de dados registrados por espectrometria de massas, espectroscopia de infravermelho, espectroscopia de ressonância magnética nuclear de 1H e 13C. Os derivados foram submetidos a teste de inibição de protease e os resultados obtidos mostram atividade para - sitosterol e estigmasterol (em mistura), bromoacetato de sitosterila e bromoacetato de estigmasterila (em mistura), 2-pirrolidin-1-il acetato de sitosterila e 2-pirrolidin-1- il acetato de estigmasterila (em mistura), lupeol, bromoacetato de lupeoíla, 2- pirrolidin-1-il acetato de lupeoíla, ácidos ursólico e oleanólico (em mistura).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:44:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317597.pdf: 4081872 bytes, checksum: ffa4037c632740fd4461737001112393 (MD5) Previous issue date: 2013 / O robalo-flecha (Centropomus undecimalis) é um hermafrodita protândrico e um dos entraves para a reprodução em laboratório é a captura e manutenção das fêmeas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de implantes do hormônio 17-? estradiol (E2) para induzir a mudança de sexo em machos adultos. Foram utilizados 39 peixes com peso inicial de 383 ± 83 g. Cada peixe foi marcado com um "transponder" e recebeu um implante. Foram testadas quatro dosagens (0,5; 1,0; 4,0 e 8,0 mg kg-1) de E2 em implantes EVAc mais um grupo controle. Os parâmetros avaliados foram: crescimento, sobrevivência, IGS, IHS, morfologia das gônadas e fígado e a dosagem de esteroides (T e E2) no plasma sanguíneo. A sobrevivência foi de 100 % no controle, 0,5 e 1,0 mg kg-1, de 57 % no 4 mg kg-1 e nenhum sobreviveu no 8 mg kg-1. O ganho de peso nos tratamentos controle e 0,5 mg kg-1 foi significativamente maior que 4 mg kg-1 e não diferiu de 1 mg kg-1. Todos os peixes tratados com E2 tiveram desenvolvimento dos ovários enquanto que os do controle continuaram machos. Com 15 dias, os níveis de E2 no plasma aumentaram diretamente com a dosagem de hormônio. Os níveis de T no controle foram maiores em todos os tempos amostrais em relação aos tratados com E2. Os resultados demonstram que a dosagem de 0,5 mg kg-1 de E2 em implantes EVAc é eficiente para induzir a mudança de sexo em machos do robalo flecha.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:34:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340356.pdf: 1629281 bytes, checksum: e17b6dc442d421d89f3e6e359b9dffd0 (MD5) Previous issue date: 2016 / O presente trabalho teve como objetivo otimizar uma metodologia analítica, considerando alterações e adaptações ambientalmente amigáveis, para determinação de esteroides em amostras de sedimentos utilizando as técnicas de cromatografia a gás com detector por ionização em chama (GC/FID) e cromatografia a gás com espectrometria de massas (GC-MS). Foram levados em consideração, particularmente, procedimentos de extração e derivatização. Para a etapa de extração foi utilizado banho de ultrassom e avaliada a eficiência de recuperação dos analitos empregando etanol como solvente extrator. As variáveis volume de etanol e tempo de ultrassom foram otimizadas por método multivariado com o programa Statistica, sendo obtida resposta mais adequada na extração com a combinação do uso de 21 mL de etanol em 30 min de sonicação. Na etapa de derivatização realizou-se a avaliação e otimização do método de derivatização no injetor do GC. A otimização multivariada também foi empregada para avaliar este procedimento. A interação dos fatores temperatura do injetor em 290 ºC, tempo de splitless de 2 min e volume de agente derivatizante de 40 µL resultou em satisfatória resposta analítica. O método proposto foi aplicado sob as condições otimizadas em matrizes sedimentares, que possibilitou amplas faixas lineares, com boas linearidades e baixos desvios padrão relativos (RSD) para os seis esteroides estudados. Os limites de detecção variaram entre 3 e 14 ng mL-1 e os de quantificação entre 10 e 47 ng mL-1. Ainda, a exatidão e precisão do método foram avaliadas por meio de ensaios de recuperação por fortificação de matriz e atestaram o bom desempenho desta metodologia.<br> / Abstract: This study aimed to optimize an analytical methodology, considering environmental friendly alterations, to quantify steroids in sediment through gas chromatography with flame ionization detector (GC/FID) and gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). Extraction and derivatization procedures were, particularly, taken into consideration. In the extraction procedure an ultrasonic bath was used to access the analytes recovery efficiency with the use of ethanol as extracting solvent. The factors, volume of ethanol and ultrasonic bath time, were optimized by multivariate method using Statistica software, where 21 mL of ethanol and 30 min of sonication time were found to be the most adequate combination for the experimental procedure. At the derivatization step, an injection port derivatization method was evaluated and optimized. The multivariate technique was also used to investigate relevant variables. In this way, it was found that the interaction between the factors injection port temperature at 290 °C, splitless time of 2 min, and derivatization reagent volume of 40 µL, resulted in a satisfactory analytical response. The proposed method under the optimized conditions, employed in sedimentary matrices, presented broad linear ranges, good linearities and low relative standard deviation (RSD) for all the six studied steroids. The limits of detection varied between 3 and 14 ng mL-1 and the limits of quantification between 10 and 47 ng mL-1. In addition, recovery assays through matrices fortification, used in order to evaluate the precision and accuracy, attested the good performance of the proposed method.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-16. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:26Z : No. of bitstreams: 1 000855105.pdf: 3849322 bytes, checksum: f0df905449fd64bc40f709ee0ee228a3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Entender a dinâmica e os eventos reprodutivos de cada espécie é essencial para o controle e melhoria da reprodução em cativeiro. O surubim do Iguaçu faz parte um programa de repovoamento do rio Iguaçu e suas proles provêm de reprodução induzida, porém aspectos básicos de sua biologia reprodutiva, como idade em que acontece o primeiro ciclo de reprodução e os meses que representam o período reprodutivo, são desconhecidos ou pouco explorados. O trabalho foi conduzido a fim de levantar informações a respeito do desenvolvimento reprodutivo da espécie, em uma população de cativeiro. Foram utilizados peixes juvenis (n≈154), machos e fêmeas, a partir de um ano de idade que foram acompanhados, mensalmente, durante 24 e 36 meses, respectivamente. Foram avaliados parâmetros referentes ao desenvolvimento gonadal, alterações celulares e flutuação de esteroides sexuais (estradiol e testosterona) ao longo do tempo. Nas condições do experimento, os animais apresentaram crescimento corporal e ganho de peso gradual. Fêmeas apresentaram desenvolvimento sexual tardio e permaneceram imaturas até 48 meses (4 anos de idade). Observou-se o desenvolvimento celular e alteração nos níveis de esteroides, que acompanharam os picos verificados para os machos. Os machos apresentaram ciclo reprodutivo do primeiro para o segundo ano de vida e todas as fases reprodutivas foram observadas. O padrão de desenvolvimento gonadal, aliado às modificações celulares e flutuação de esteroides indica o período reprodutivo dos machos nos meses de setembro a novembro (primavera) / Understand events and reproductive dynamics is essential for the appropriate management and control of reproductive function in captivity. The species, ―surubim do Iguaçu‖ is include in Iguaçu river reintroduction programs and offspring's were obtain by induce spawning, but reproductive biology aspects, as first maturation age and reproductive season are lower explored or no available. The research was realized to provide information about surubim's reproductive development, in captive conditions. Were evaluated juvenile individuals, with one year old, every month due 24 and 36 months, to male and female, respectively. Were evaluated gonad developments, cell modifications and steroids fluctuations (estradiol and testosterone), during all experimental time. The fish showed gradative growth and weight gain. Female present slow sexual development and stay in immature status after 48 months (4 years age). Cellular modifications and steroids elevation levels were verified, and peaked of steroids occur in same time of male peaked. Male showed reproductive cycle with two years old and all reproductive phases of were observed. The gonadal development with to cellular changes and steroids fluctuation indicates the breeding season the males in the months from September to November (spring) / FAPESP: 2012/01824-4