La producción in vitro (PIV) de embriones caprinos mediante técnicas de maduración, fecundación y cultivo embrionario in vitro (MIV-FIV-CIV) proporciona un elevado número de embriones utilizables a nivel científico y/o comercial. El objetivo del este estudio ha sido seleccionar ovocitos de cabra prepuber y sistemas de maduración in vitro para mejorar la producción in vitro de embriones. Los ovocitos se maduraron en medio TCM199 + piruvato sódico + L-glutamina + gentamicina + 10% suero bovino de macho castrado (SS) + 10 mg/ml LH + 10 mg/ml o-FSH + 1 mg/ml 17b-estradiol. Tras 27 h de MIV, los ovocitos se inseminaron con semen fresco (3.5x106 espermatozoides/ml) en medio TALP suplementado con 1 mg/ml de hipotaurina. A las 24 h post-inseminación, se cultivaron en medio SOFm y se mantuvieron 7 días en cultivo. En el Estudio 1, se evaluó la utilidad del test de Azul de Cresol Brillante (BCB) para seleccionar los ovocitos de cabras prepúberes. Los ovocitos BCB+ (ovocitos con citoplasma coloreado de azul, crecimiento finalizado) presentaron un mayor diámetro (136.6 ¡À 6.3 mm; P<0.001) y mayores tasas de maduración nuclear (81.4%; P<0.05), fecundación normal (23.5%; P<0.0001) y desarrollo más allá del estadio de 8 células (41.3%; P<0.001) y de mórulas más blastocistos (12.0%; P<0.05) que los ovocitos no coloreados de azul.En el Estudio 2, se utilizó el Factor de Crecimiento Epid¨¦rmico (EGF), para la maduración in vitro. Para ello, se comparó un medio suplementado con hormonas (LH, FSH y 17b-estradiol) y suero (SS o FCS) con un medio suplementado con 10 ng de EGF en ausencia de suero y hormonas. El porcentaje de ovocitos fecundados de forma normal fue inferior (P<0.05) cuando se empleó EGF (17.3%) que SS (SS: 27.2%; FCS: 29.0%). Las tasas de embriones totales (71.5%) y de embriones que superaron el estadio de 8 células (26.2%) fueron superiores (P<0.05) al emplear SS y hormonas en el medio de maduración.En el Estudio 3, se analizó el efecto de la adición de compuestos tiol (100 ¦ÌM de cisteamina, 100 ¦ÌM de b-mercaptoetanol, 0.57 mM de cisteína y 0.57 mM de cistina) al medio de MIV. Los ovocitos madurados en presencia de cisteamina y b-mercaptoetanol mostraron mayor capacidad (P<0.01) para formar el pronúcleo masculino tras la penetración espermítica (88.0% y 97.1%) y para ser fecundados (P<0.01) de forma normal (72.0% y 77.1%) comparados con el grupo control (62.2% y 37.8%, respectivamente). Asimismo, la adición de cisteamina al medio de MIV mejoró (P<0.05) el porcentaje de embriones que alcanzaron los estadios de mórula y blastocisto (22.2%) y la tasa de blastocistos expandidos (13.0%) respecto al grupo control (6.4% y 2.6%, respectivamente). La concentración de GSH intracelular (pmol/ovocito) fue superior en los ovocitos MIV que en los ovocitos inmaduros.En el Estudio 4 se evaluó el efecto de la adición de cisteamina al medio de maduración de ovocitos de cabra prepúber seleccionados mediante el test de Azul de Cresol Brillante (BCB) sobre la maduración nuclear, fecundación y desarrollo embrionario in vitro. En presencia de cisteamina, el porcentaje de ovocitos BCB+ y madirados con cisteamina mejoraron la maduración nuclear, los fecundados normales, la formación del pronucleo masculino y el porcentage de embriones a las 8 celulas, comparados con el control y BCB-. En presencia de cisteamina, la formación de mórulas y blastocistos fue superior (P<0.001) en los ovocitos BCB+ (23.8%). En conclusión, la selección ovocitaria mediante el test de BCB y la MIV en presencia de cisteamina permiten una mayor capacidad de desarrollo tras MIV-FIV-CIV. Sin embargo, a pesar de obtener resultados aceptables en los parámetros de maduración nuclear y de fecundación in vitro, el desarrollo embrionario continúa siendo reducido. / In vitro production (IVP) of caprine embryos using techniques of in vitro maturation, fertilization and embryo culture (IVM-IVF-IVC) provide a high number of embryos.The aim of the present studies has been the establishment of a system of selection and in vitro maturation of oocytes adequate for competence to develop until blastocyst after in vitro fertilization and embryo culture. For this, oocytes were matured in TCM199 + sodium pyruvate + L-glutamine + gentamicine + 10% steer serum (SS) + 10 mg/ml LH + 10 mg/ml o-FSH + 1 mg/ml 17b-estradiol. After 27 h of IVM, the oocytes were inseminated with fresh sperm (3.5x106 sperm/ml) in TALP medium supplemented with 1 mg/ml hypotaurine. A t 24 h post-insemination, the presuntive zygotes were cultued in SOFm medium and were maintained 7 days in culture. In Study 1, the utility of the Brilliant Cresyl Blue (BCB) test was evaluated . The BCB+ oocytes (oocytes with blue coloured cytoplasm, fully-grown oocytes) presented a bigger diameter(136.6 ¡À 6.3 mm; P<0.001) and higher rates of nuclear maturation (81.4%; P<0.05), normal fertilization (23.5%; P<0.0001), development beyond the 8-cell stage (41.3%; P<0.001) and morulae plus blastocyts (12.0%; P<0.05) .In Study 2, the use of an chemically defined medium, based in Epidermal Growth Factor (EGF) for the in vitro maturation of prepubertal goat oocytes was investigated. A medium supplemented with hormones and serum (SS or FCS) was compared with a medium with 10 ng EGF. The percentage of normally fertilized oocytes was lower when EGF (17.3%) was employed (SS: 27.2%; FCS: 29.0%). The rate of total embryos (71.5%) and embryos that developed beyond the 8-cell stage (26.2%) were higher (P<0.05) when SS and hormones was used. In Study 3, the effect of the addition of thiol compounds (100 ¦ÌM cysteamine, 100 ¦ÌM b-mercaptoethanol, 0.57 mM cysteine and 0.57 mM cystine) to the IVM medium was analyzed. The oocytes matured in the presence of cysteamine and b-mercaptoethanol showed a better ability to form the MPN and to be normally fertilized (P<0.01; 72.0% y 77.1%) compared to the control group. The addition of cysteamine to the IVM medium improved the percentage of embryos that reached the m¨®rula plus blastocyst stage (22.2%) and the expanded blastocyst formation rate (13.0%) related to the control group. The intracellular GSH concentration (pmol/oocyte), was higher in the oocytes tIVM than immature oocytes. In Study 4, the addition of cysteamine to the IVM medium of oocytes selected by the Brilliant Cresyl Blue (BCB) was studied. The control group oocytes, no exposed to the BCB test, were matured in the same medium, but without cysteamine. In the presence of cyteamine, the percentage of oocytes that matured nuclearly was of BCB+ oocytes (89.5%)., while this rate was higher in the presence of cysteamine (77.8%). 97.0% of the penetrated oocytes exhibited ability to form MPN and a 69.7% were able to develop the 2 pronuclei, being these percentages significantly higher. The exposed oocytes to the BCB with cysteamine showed a lower percentage of non-decondensed heads (3.0%) than the control group (25.6%). Embryos developed beyond the 8-cell stage was higher in the BCB+ (68.3%). Likewise, in the presence of cysteamine, the morule plus blastocysts formation rate was higher (P<0.001) in the BCB+ oocytes (23.8%) related to the BCB- oocytes (5.1%). In conclusion, oocytes selection using the BCB test and the IVM in the presence of cysteamine allow a better development ability after IVM-IVF-IVC. In the present studies, we have been able to confirm an improvement in the oocytes development in relation with the initial IVM system, acting on growing and final maturation phases.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-07-18Bitstream added on 2014-06-13T19:17:44Z : No. of bitstreams: 1 dayan_a_me_botfmvz.pdf: 264427 bytes, checksum: 27a8348b7bcdc6cd677cb5317cbb7845 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As técnicas de aspiração folicular (OPU) e fecundação in vitro (FIV) vêm surgindo como uma alternativa importante para a produção de embriões bovinos. Estas técnicas aplicam-se tanto para vacas com problemas reprodutivos adquiridos, como para melhorar a performance de vacas saudáveis, gestantes, novilhas e animais de idade avançada. Vários trabalhos relatam fatores que interferem no processo de OPU-FIV. O presente trabalho tem como objetivo identificar alguns dos fatores que interferem na produção, como a influência da raça e da sazonalidade na recuperação de oácitos, produção de embriões e taxa de gestação; a influência do estádio de desenvolvimento embrionário e da sincronização da receptora no momento da transferência e, posteriormente, a 5 interação entre o estádio embrionário e a sincronização da receptora. Foram avaliadas 1.841 aspirações foliculares em 566 doadoras das raças Nelore, Brahman, Gir, Guzerá, Blond D'Aquitaine, Limousin, Holandesa e Pardo suíço em 29 propriedades. A idade das doadoras variou entre 12 e 240 meses. De um total de 19.~659 oócitos viáveis, foram produzidos 7.116~ embriões (36,20%), dos quais foram transferidos 3.572 embriões originando 1.147 gestações (32,11 %). As raças Nelore e Blond D'Aquitaine apresentaram maior produção de oócitos (15,52±3,15 e 14,85±2,40 respectivamente). A maior produção de embriões por sessão de OPU foi das raças Brahman, Blond D'Aquitaine e Nelore (5,54±2,36; 4,43±1,92; 4,04±2,47, respectivamente). No inverno a produção de oócitos foi superior ao outono (15,22±3,62 e 13,36±3,48, respectivamente), no entanto a produção de embriões foi melhor no verão e outono (4,35±2,38e 4,14±2,49, respectivamente) e pior no inverno e na primavera (3,46±2,31 e 3,83±2,54, respectivamente). A mesma relação foi observada na taxa de gestação para o verão, outono, inverno e...

Resumo: As técnicas de aspiração folicular (OPU) e fecundação in vitro (FIV) vêm surgindo como uma alternativa importante para a produção de embriões bovinos. Estas técnicas aplicam-se tanto para vacas com problemas reprodutivos adquiridos, como para melhorar a performance de vacas saudáveis, gestantes, novilhas e animais de idade avançada. Vários trabalhos relatam fatores que interferem no processo de OPU-FIV. O presente trabalho tem como objetivo identificar alguns dos fatores que interferem na produção, como a influência da raça e da sazonalidade na recuperação de oácitos, produção de embriões e taxa de gestação; a influência do estádio de desenvolvimento embrionário e da sincronização da receptora no momento da transferência e, posteriormente, a 5 interação entre o estádio embrionário e a sincronização da receptora. Foram avaliadas 1.841 aspirações foliculares em 566 doadoras das raças Nelore, Brahman, Gir, Guzerá, Blond D'Aquitaine, Limousin, Holandesa e Pardo suíço em 29 propriedades. A idade das doadoras variou entre 12 e 240 meses. De um total de 19.~659 oócitos viáveis, foram produzidos 7.116~ embriões (36,20%), dos quais foram transferidos 3.572 embriões originando 1.147 gestações (32,11 %). As raças Nelore e Blond D'Aquitaine apresentaram maior produção de oócitos (15,52±3,15 e 14,85±2,40 respectivamente). A maior produção de embriões por sessão de OPU foi das raças Brahman, Blond D'Aquitaine e Nelore (5,54±2,36; 4,43±1,92; 4,04±2,47, respectivamente). No inverno a produção de oócitos foi superior ao outono (15,22±3,62 e 13,36±3,48, respectivamente), no entanto a produção de embriões foi melhor no verão e outono (4,35±2,38e 4,14±2,49, respectivamente) e pior no inverno e na primavera (3,46±2,31 e 3,83±2,54, respectivamente). A mesma relação foi observada na taxa de gestação para o verão, outono, inverno e ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Orientador: Paulo Henrique Franceschini / Coorientador: Maria Denise Lopes / Mestre

O Brasil é o país que mais realiza aspiração folicular de oócitos guiada por ultrasonografia (OPU) para fins de produção in vitro de embriões bovinos. Com isso é possível aumentar consideravelmente o número de progênies por fêmea por ano. O objetivo desse trabalho foi identificar polimorfismos em genes envolvidos na foliculogênese e associar alterações gênicas com o número de folículos pré-antrais recrutados em bovinos, estimados pelo número de oócitos recuperados por OPU. Dados de aspiração folicular feitas a campo em fêmeas Nelore (Bos taurus indicus) foram obtidos de duas empresas diferentes, sendo que 30 fêmeas foram utilizadas para a prospecção de polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs), 218 para estudos populacionais e dados de 193 fêmeas foram utilizados para a análise de efeitos das variações genéticas com o número de oócitos viáveis colhidos por OPU. Vinte fêmeas da raça Holandesa (Bos taurus taurus) foram genotipadas para a identificação de alelos taurinos ou zebuínos específicos. Regiões dos genes Gdf9, Fgf8, Fgf10 e BmprII foram amplificadas por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) e seqüenciadas para prospecção de SNPs. Quatro polimorfismos foram genotipados por meio de restrição enzimática de DNA, (PCR-RFLP; genes: Gdf9, Fgf8, Lhr e DNA mitocondrial-mtDNA) ou PCR em tempo real utilizando sondas específicas para cada alelo (BmprII). A avaliação de efeitos dos marcadores sobre a característica foi realizada por análise de variância utilizando modelos mistos com dados repetidos, em que o número de oócitos viáveis foi considerado variável dependente, as fêmeas foram consideradas variável aleatória, e local de aspiração, ano de aspiração e o SNP foram efeitos fixos. O mesmo modelo foi utilizado para estimar efeito médio de substituição alélica, em que o marcador foi substituído por uma co-variável numérica. A diferença entre médias de quadrados mínimos foram estimadas por meio de contrastes e a significância avaliada por teste t. Os efeitos ou as diferenças entre as médias foram consideradas significativas quando P<0,05. Foram identificados 19 SNPs sendo que 10 polimórficos entre as fêmeas Nelore, 04 causadores de substituição de aminoácidos na proteína. Entre os marcadores nucleares genotipados (Gdf9, A318C; Fgf8, C1027G; BmprII, A40048G; Lhr C62478T), todos apresentaram equilíbrio de segregação alélica dentro do marcador e genotípica entre os marcadores (P>0,05). Os SNPs nos genes Gdf9, BmprII e Lhr genotipados em fêmeas Nelore e Holandesas apresentaram-se fixados na segunda raça. Foram identificados efeitos dos polimorfismos dos genes Gdf9, Fgf8, BmprII e Lhr (P<0,05), entretanto os variantes de mtDNA não foram significativos. As diferenças entre médias confirmaram os resultados da ANOVA. Para os polimorfismos no gene Gdf9, BmprII e Lhr, observou-se a tendência de os indivíduos heterozigotos terem menores médias de oócitos viáveis quando comparados aos homozigotos, já o polimorfismo no gene Fgf8, observou-se a tendência de interação aditiva entre os alelos, em que foi estimado um efeito médio de 1,13±0,01 oócitos viáveis por troca de alelo C por G. Conclui-se que variações genéticas são causas de variabilidade do número de folículos presentes nos ovários, estimados por OPU. / Brazil is the country with the biggest number of ovum pick up (OPU) collection for bovine in vitro embryo production. This strategy is used to increase the number of calves born per cow per year. The objective of this work was to identify polymorphisms in genes related in folliculogenesis and associate some of the resulted gene variants with the number of pre antral follicle recruited in bovines, estimated by the number of oocytes collected by OPU. Records of open filed OPUs performed in Nelore cows (Bos taurus indicus) were obtained from two independent enterprises, and 30 females were used for single nucleotide polymorphism (SNP) prospection, 218 females for genotype and allelic population analysis and 193 females used for identification of genetic variation effects over the number of viable oocytes collected by OPU. Twenty Holstein cows (Bos taurus taurus) were also genotyped for identification of taurine and zebuine specific alleles. Segments of genes Gdf9, Fgf8, Fgf10 and BmprII were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and sequenced for SNP prospection. Four polymorphisms were genotyped by means of enzymatic DNA digestion (PCR-RFLP, genes: Gdf9, Fgf8, Lhr and mitochondrial DNA - mtDNA) or real time PCR using allelic specific probes (Gene: BmprII). Genetic marker effect over the analyzed characteristic was realized by analysis of variance using mixed models with repeated data, in which the number of viable oocytes were set as dependent variable, the females were considered random variable, OPU place, OPU year and SNP were fixed effects. The same model was used for average allelic substitution effect estimation, where the genetic marker class was changed by a numeric covariant. The least square means (LSM) differences were estimated by contrasts and the significance evaluated by t test. Fixed effects or LSMs differences were considered significant when P<0.05. Nineteen SNPs were identified, from which ten were polymorphic among Nelore cows, four were expected to cause amino acid changes in protein. Among the nuclear genome markers genotyped (Gdf9, A318C; Fgf8, C1027G; BmprII, A40048G; Lhr C62478T, all resulted in allelic segregation equilibrium within marker and genotypic segregation equilibrium between markers (P>0.05). The SNPs in genes Gdf9, BmprII and Lhr genotyped in Nelore and Holstein cows were fixed in the last breed. SNPs in genes Gdf9, Fgf8, BmprII and Lhr affected the characteristic (P<0.05), however the mtDNA variants did not. The LSMs differences confirmed the ANOVA results. Heterozygote females for SNPs in genes Gdf9, BmprII and Lhr tend to have smaller LSMs than homozygous ones. On the other hand, there is indication of additive allelic interaction between alleles of SNP in gene Fgf8, for which an average allele substitution was estimated in 1.13±0.01 viable oocytes for a C/G change. We concluded that genetic variations were responsible for variable number of follicles present in ovaries, estimated by OPU.

The role that amniotic fluid (AF) may play in HIV vertical infection is unresolved. We used the FIV-infected cat model to study this question. We hypothesized that AF may be a source of fetal infection if the virus is present in the fluids. However, virus neutralizing (VN) antibodies in AF may limit vertical transfer. Fetuses were delivered from FIV-infected queens by cesarean section at early and late gestation. AFs were aspirated from intact fetal membranes and tested for viral antigen and RNA and for FIV-specific antibody. Randomlyselected samples were tested for VN activity using a syncytium reduction assay. Neither FIV antigen nor RNA was detected in any AFs. AFs and parallel serum samples from early and late pregnancy were positive for FIV-specific antibody. VN activity was detected in three early-term AFs and a parallel serum, but not late-term AFs. AF appears to play no appreciable role in FIV vertical transmission.

[pt] As propriedades mecânicas, reológicas e elétricas do polímero poli (fluoreto de vinilideno) – PVDF – têm sido extensivamente estudadas, mas em particular é sua propriedade piezoelétrica que motiva a maior parte dos trabalhos, visto que a piezoeletricidade ocorre em poucos materiais e é mais intensa no PVDF em relação a outros polímeros. O fator chave que define a faixa de aplicação de polímeros piezoelétricos é a sua utilização na concepção de transdutores, sensores e atuadores. Neste sentido, a presente pesquisa analisa a aplicabilidade do polímero PVDF em tubulações para medição de vazão de água, empregando como método de medição de vazão a técnica de Flow Induced Vibration (FIV), considerando as propriedades piezoelétricas peculiares do polimorfo PVDF-B(beta). De modo geral, a FIV é um fenômeno que causa instabilidade das tubulações que transportam fluidos, tido como um problema operacional que ocorre em muitas plantas industriais. No entanto, este fenômeno passou a ser investigado como uma técnica de medição de vazão, a qual considera que a massa de um fluido pode ser indiretamente medida, medindo-se a aceleração que ela transmite para outro corpo, de modo que o desvio padrão do sinal da vibração medida aumenta com a vazão, sendo mais bem ajustado por um polinômio de segundo grau. A metodologia de trabalho consistiu em caracterizar o material espectroscopicamente, por meio de técnicas de Espectroscopia no Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR) e Difração de Raios-X (DRX); eletromecanicamente, em um shaker mecânico no Laboratório de Sensores a Fibras Ópticas do Departamento de Engenharia Mecânica da PUC-Rio; e finalmente em um circuito hidráulico de testes do Laboratório de Escoamento de Fluidos do Departamento de Engenharia Mecânica da PUC-Rio. Ensaios foram realizados de forma a identificar os níveis de tensões elétricas geradas pela vibração oriunda da passagem da água no tubo de PVDF. Visando à comparação com os sinais de vibração, foram realizadas medições simultâneas com acelerômetros e um filme de PVDF. Para medir a deformação no tubo adotaram-se sensores de Rede de Bragg. Os resultados dos ensaios de FIV permitiram concluir que o desvio padrão do sinal da tensão medida pelo tubo de PVDF é proporcional à vazão. No entanto, algumas variáveis precisaram ser controladas. As incertezas associadas à medição de vazão pelo tubo mostraram uma considerável redução nos níveis mais altos de vazão. Por outro lado, nos níveis mais baixos de vazão observou-se uma instabilidade muito grande, possivelmente devido ao processo de acomodação mecânica inicial do tubo. Apesar disso, uma forte relação entre o sinal gerado pelo tubo de PVDF e a vazão que induziu esta vibração permitiu que a aplicabilidade do tubo de PVDF como medidor de vazão de água fosse comprovada. / [en] The mechanical, rheological and electrical properties of polymer poly (vinylidene fluoride) - PVDF - have been extensively studied, but in particular it is its piezoelectric property that motivates most of the works, since the piezoelectricity occurs in few materials and is more intense in PVDF relative to other polymers. The key factor that defines the range of applications of piezoelectric polymers is their use in the conception of transducers, sensors and actuators. In this sense, the present research analyzes the applicability of the PVDF polymer in pipes for the measurement of water flow rate, using as flow measurement method the Flow Induced Vibration (FIV) technique, considering the peculiar piezoelectric properties of the polymorph PVDF-B(beta). In general, the FIV is a phenomenon that causes instability of the pipes that transport fluids, considered as an operational problem that occurs in many industrial plants. However, this phenomenon has been investigated as a flow rate measurement technique, which considers that the mass of a fluid can be indirectly measured by measuring the acceleration it transmits to another body, so that the standard deviation of the signal of the measured vibration increases with the flow rate, being better adjusted by a second degree polynomial. The work methodology consisted in characterizing the material spectroscopically, using Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and X-Ray Diffraction (XRD) techniques; electromechanically, in a mechanical shaker at the Optical Fiber Sensors Laboratory of the Mechanical Engineering Department of PUC-Rio; and finally in a test hydraulic circuit of the Laboratory of Fluid Flow of the Department of Mechanical Engineering of PUC-Rio. Tests were carried out in order to identify the levels of electrical voltages generated by the vibration caused by the passage of water in the PVDF tube. In order to compare the vibration signals, simultaneous measurements were made with accelerometers and a PVDF film. To measure the deformation in the tube, Bragg Network sensors were adopted. The results of the FIV tests allowed concluding that the standard deviation of the voltage signal measured by the PVDF tube is proportional to the flow rate. However, some variables had to be controlled. The uncertainties associated with flow rate measurement by tube showed a considerable reduction in the higher flow rates. On the other hand, in the lower levels of flow rate a very great instability was observed, possibly due to the process of initial mechanical accommodation of the tube. Nevertheless, a strong relationship between the signal generated by the PVDF tube and the flow rate that induced this vibration allowed that the applicability of the PVDF tube as a water flow meter was proved.

<p>&nbsp;Иако су 60&ndash;тих година прошлога века по први пут описане, леукемија мачке (FeLV; engl. Feline leukemia virus) и мачји заразни перитонитис (FIP; engl. Feline infectious peritonitis) који је узрокован мачјим коронавирусом (FCoV; engl. Feline Coronavirus), те 80&ndash;тих година прошлога века први пут инфекција вирусом мачје имунодефицијенције (FIV; engl. Feline Immunodeficiency Virus), те три болести су до данас остале неизлечиве, смртоносне, а леукемија и имунодефицијенција су повезане и с настајањем малигних оболења код домаћих и дивљих мачака. Многа питања везана уз епидемиологију и превенцију остала су до сада неразјашњена. Стога мачји коронавирус (FCoV), вирус мачје леукемије (FeLV) и вирус мачје имунодефицијенције (FIV) заузимају важно место у истраживањима и у ветеринарској свакодневној пракси. Главни епидемиолошки и превентивни проблем код свих трију зараза представљају инфициране мачке које не показују клиничке знаке болести или имају неодређене клиничке знаке, а шире инфекције путем пљувачке, урина, фецеса, суза, крви и осталих телесних течности. Тако се инфекција вирусом мачје леукемије (FeLV) и вирусом мачје имунодефицијенције (FIV) споро развија код мачака, па мачка у раздобљу обично дужем од четири године не показује клиничке знаке или има неодређене клиничке знаке, а представља стални извор заразе и шири инфекцију унутар мачје популације. Виремичне мачке представљају велику опасност за осталу мачју популацију посебно у домаћинствима с више мачака, ако иду напоље, у одгајивачницама, склоништима за мачке, ветеринарским амбулантама, клиникама и у ветеринарској трансфузиологији. Главни превентивни проблем код вируса мачје леукемије, мачјег заразног перитонитиса и вируса мачје имунодефицијенције је непостојање на тржишту комерцијално делотворне вакцине. Будући да су досадашња епидемиолошка истраживања показала да FCoV, FeLV и FIV показују велику разлику у вируленцији унутар различитих мачјих популација и да разлика у вируленцији зависи од географског положаја, начина држања и о пасмини, истраживања треба спровести за сваку поједину земљу. Циљеви овога епидемиолошког истраживања су били следећи:</p><p>&bull; одређивање преваленције инфекција и коинфекција узрокованих коронавирусима мачака (FCoV), вирусима леукемије (FeLV) и имунодефицијенције (FIV) на подручју Загреба и Вараждина;<br />&bull; одређивање епидемиолошких фактора ризика и њихова значаја за настанак, развој и ширење FCoV, FeLV и FIV у популацији домаћих мачака.<br />Ово епидемиолошко истраживање је спроведено на 106 мачака. Лабораторијски тестови вирусолошких показатеља су рађени на Ветеринарском факултету у Бечу. Узорци су претражени на FCoV антитела тестом имунофлуоресцентних антитијела (IFA), FeLV-п27 антиген помоћу имуноензимског теста (ELISA), FeLV специфичне нуклеинске киселине користећи real-time PCR (Applied Biosystem 7300 Real time PCR System) и FIV антитела са брзим имуномиграцијским тестом (RIM). Резултати лабораторијских претрага вирусолошких показатеља показали су да је:<br />&bull; 45,28% тестираних мачака било позитивно на FCoV инфекцију;<br />&bull; 6,60% тестираних мачака било позитивно на FeLV инфекцију;<br />&bull; 7,55% тестираних мачака имало коинфекцију са FeLV и FCoV;<br />&bull; 5,66% тестираних мачака имало коинфекцију са FIV и FCoV.<br />Резултати епидемиолошких показатеља показали су да је доказана:<br />&bull; статистички значајна асоцијација између здравственог статуса и групе FeLV+;<br />&bull; статистички значајна асоцијација између излажења напоље без власникове контроле и група FCoV+ и FIV/FCoV+.<br />Одређивање учесталости FCoV, FeLV и FIV уз факторе ризика за настанак, развој и ширење зараза је од великог значаја за спречавање ширења ова три вируса унутар популације мачака на градским подручјима.</p> / <p>&nbsp;Iako su 60&ndash;tih godina prošloga veka po prvi put opisane, leukemija mačke (FeLV; engl. Feline leukemia virus) i mačji zarazni peritonitis (FIP; engl. Feline infectious peritonitis) koji je uzrokovan mačjim koronavirusom (FCoV; engl. Feline Coronavirus), te 80&ndash;tih godina prošloga veka prvi put infekcija virusom mačje imunodeficijencije (FIV; engl. Feline Immunodeficiency Virus), te tri bolesti su do danas ostale neizlečive, smrtonosne, a leukemija i imunodeficijencija su povezane i s nastajanjem malignih obolenja kod domaćih i divljih mačaka. Mnoga pitanja vezana uz epidemiologiju i prevenciju ostala su do sada nerazjašnjena. Stoga mačji koronavirus (FCoV), virus mačje leukemije (FeLV) i virus mačje imunodeficijencije (FIV) zauzimaju važno mesto u istraživanjima i u veterinarskoj svakodnevnoj praksi. Glavni epidemiološki i preventivni problem kod svih triju zaraza predstavljaju inficirane mačke koje ne pokazuju kliničke znake bolesti ili imaju neodređene kliničke znake, a šire infekcije putem pljuvačke, urina, fecesa, suza, krvi i ostalih telesnih tečnosti. Tako se infekcija virusom mačje leukemije (FeLV) i virusom mačje imunodeficijencije (FIV) sporo razvija kod mačaka, pa mačka u razdoblju obično dužem od četiri godine ne pokazuje kliničke znake ili ima neodređene kliničke znake, a predstavlja stalni izvor zaraze i širi infekciju unutar mačje populacije. Viremične mačke predstavljaju veliku opasnost za ostalu mačju populaciju posebno u domaćinstvima s više mačaka, ako idu napolje, u odgajivačnicama, skloništima za mačke, veterinarskim ambulantama, klinikama i u veterinarskoj transfuziologiji. Glavni preventivni problem kod virusa mačje leukemije, mačjeg zaraznog peritonitisa i virusa mačje imunodeficijencije je nepostojanje na tržištu komercijalno delotvorne vakcine. Budući da su dosadašnja epidemiološka istraživanja pokazala da FCoV, FeLV i FIV pokazuju veliku razliku u virulenciji unutar različitih mačjih populacija i da razlika u virulenciji zavisi od geografskog položaja, načina držanja i o pasmini, istraživanja treba sprovesti za svaku pojedinu zemlju. Ciljevi ovoga epidemiološkog istraživanja su bili sledeći:</p><p>&bull; određivanje prevalencije infekcija i koinfekcija uzrokovanih koronavirusima mačaka (FCoV), virusima leukemije (FeLV) i imunodeficijencije (FIV) na području Zagreba i Varaždina;<br />&bull; određivanje epidemioloških faktora rizika i njihova značaja za nastanak, razvoj i širenje FCoV, FeLV i FIV u populaciji domaćih mačaka.<br />Ovo epidemiološko istraživanje je sprovedeno na 106 mačaka. Laboratorijski testovi virusoloških pokazatelja su rađeni na Veterinarskom fakultetu u Beču. Uzorci su pretraženi na FCoV antitela testom imunofluorescentnih antitijela (IFA), FeLV-p27 antigen pomoću imunoenzimskog testa (ELISA), FeLV specifične nukleinske kiseline koristeći real-time PCR (Applied Biosystem 7300 Real time PCR System) i FIV antitela sa brzim imunomigracijskim testom (RIM). Rezultati laboratorijskih pretraga virusoloških pokazatelja pokazali su da je:<br />&bull; 45,28% testiranih mačaka bilo pozitivno na FCoV infekciju;<br />&bull; 6,60% testiranih mačaka bilo pozitivno na FeLV infekciju;<br />&bull; 7,55% testiranih mačaka imalo koinfekciju sa FeLV i FCoV;<br />&bull; 5,66% testiranih mačaka imalo koinfekciju sa FIV i FCoV.<br />Rezultati epidemioloških pokazatelja pokazali su da je dokazana:<br />&bull; statistički značajna asocijacija između zdravstvenog statusa i grupe FeLV+;<br />&bull; statistički značajna asocijacija između izlaženja napolje bez vlasnikove kontrole i grupa FCoV+ i FIV/FCoV+.<br />Određivanje učestalosti FCoV, FeLV i FIV uz faktore rizika za nastanak, razvoj i širenje zaraza je od velikog značaja za sprečavanje širenja ova tri virusa unutar populacije mačaka na gradskim područjima.</p> / <p>Although in the nineteen sixties feline leukemia virus (FeLV) and feline infectious peritonitis (FIP) induced by feline coronavirus (FCoV) were described for the first time and feline immunodeficiency virus (FIV) was described in the nineteen eighties for the first time, too, all three diseases have been untreatable and lethal to the present day. Feline leukemia virus and feline immunodeficiency virus are associated with development of neoplasm diseases in domestic and wild cats. Many questions associated with epidemiology and prevention have not still been clarified. Feline coronavirus (FCoV), feline leukemia virus (FeLV) and feline immunodeficiency virus (FIV) play an important role in investigations and everyday veterinary practice.<br />The main epidemiologic and preventive problems in all three diseases are infected cats. They have no clinical signs of disease or have undefined clinical symptoms but they spread infections by saliva, urine, feces, tears, blood and other body fluids among the cat population. Infections of feline leukemia virus (FeLV) and feline immunodeficiency virus (FIV) develop slowly in cats. Viremic cat during a period longer than four years does not show clinical signs or has undefined symptoms and is constant source of infection and spreads infection in cat population. Viremic cats are great danger for cat populations especially in multiple cat households, if they go outside, in catteries, cat shelters, veterinary clinics or blood<br />transfusions. The main preventive problem with feline leukemia virus, feline infectious peritonitis and feline immunodeficiency virus is that there is no effective vaccine in the market. As to date epidemiologic research has shown that FCoV, FeLV and FIV have shown a great difference in virulence in various cat populations and as the virulence varies according to geographic location, maintenance and breeding research should be carried out for each particular country. The aims in this epidemiologic research were the following:<br />&bull; to determine the prevalence of infections and co-infections induced by feline coronaviruses (FCoV), feline leukemia virus (FeLV) and feline immunodeficiency virus (FIV) in the areas of Zagreb and Varaždin;<br />&bull; to determine which epidemiologic factors are risky and their significance for the occurrence, development and spreading of FCoV, FeLV and FIV in population of domestic cats.<br />This epidemiologic research was carried out on 106 cats. Laboratory tests of viral parameters were carried out at the Faculty of Veterinary Medicine in Vienna. The samples were investigated for the presence of FCoV antibodies by Immunofluorescence Antibody Assay (IFA), for FeLV-p27 antigen by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), for FeLV specific nucleic acids by real-time PCR (Applied Biosystems 7300 Real time PCR System) and for the presence of FIV antibodies by rapid immunomigration test (RIM). Lab tests results of viral parameters demonstrated that:<br />&bull; 45.28% tested cats were positive for FCoV infection;<br />&bull; 6.60% tested cats were positive for FeLV infection;<br />&bull; 7.55% tested cats were co-infected with FeLV and FCoV;<br />&bull; 5.66% tested cats were co-infected with FIV and FCoV.<br />The results of epidemiologic parameters demonstrated that:<br />&bull; statistically significant association was found in health status and group FeLV+;<br />&bull; statistically significant association was found in outdoor access without owner&#39;s control and groups FCoV+ and FIV/FCoV+.<br />Determining FCoV, FeLV and FIV prevalence with risk factors for the occurrence, development and spread of infections is of great importance to prevent the spread of these three viruses in cat population in urban areas.</p>

Les rétrovirus sont un enjeu de santé publique, aussi bien humaine qu'animale. La compréhension des déterminants structuraux sous-jacents à la fonction de leurs protéines constitue une étape essentielle dans le développement de stratégies antirétrovirales efficaces.Ce manuscrit porte sur l'étude des bases structurales des mécanismes moléculaires impliqués dans les fonctions clés des rétrovirus que sont i) la régulation de l'expression des protéines de rétrovirus complexes et ii) l'assemblage des particules virales, à travers l'étude de deux protéines rétrovirales d'intérêt thérapeutique : la protéine Tax du virus T-lymphotrope humain (HTLV) et la protéine de capside du virus de l'immunodéficience féline (FIV). L'étude structurale de ces deux protéines d'intérêt et la compréhension des mécanismes moléculaires nécessaires à leurs fonctions permettraient d'ouvrir la voie à la conception de nouvelles stratégies antirétrovirales.Malgré de nombreux tests d'expression et de purification, l'étude structurale de la protéine Tax du HTLV n'a pu être réalisée, en raison de son insolubité. Cependant, ce travail doctoral a permis de résoudre, pour la première fois, la structure cristallographique de la protéine de capside entière du FIV. Bien que cette dernière adopte un repliement similaire aux autres capsides rétrovirales dont la structure est connue, elle présente également des spécificités structurales dont les conséquences fonctionnelles seront discutées / Retroviruses are a major concern of public health in humans but also in animals. A better understanding of the structural determinants underlying the functions of retroviral proteins is a crucial step for the development of efficient antiretroviral therapies.This manuscript studies the structural basis of the molecular mechanisms implicated in key functions of retroviruses such as, i) the regulation of complex retroviruses protein expression and ii) the assembly of viral particles, through the study of two retroviral proteins of therapeutic interest: the human T-lymphotropic virus (HTLV) Tax protein and the feline immunodeficiency virus (FIV) capsid protein. The functional and structural studies of these two proteins and the understanding of the molecular mechanisms required for their functions will pave the way to the conception of new antiretroviral therapeutic strategies.Despite several expression and purification assays, no structural studies could be performed for the HLTV Tax protein. However, this study allowed the resolution of the first structure for the full-length FIV capsid protein by X-ray crystallography. Although the FIV capsid protein displays a standard a-helical topology like other retroviral CAs, it also harbors original features whose functional consequences will be discussed

O presente trabalho foi composto de dois estudos distintos. O Estudo I, com um foco conservacionista, teve como objetivo a avaliação e comparação de diferentes métodos de criopreservação de sêmen de bugio-preto (Alouatta caraya). Para tanto, o estudo foi dividido em dois experimentos: Experimento I composto de dois ensaios no primeiro ensaio foram comparados dois diluidores comerciais BotuBOV e Test-yolk buffer (TYB) e no segundo ensaio foram comparados dois métodos de criopreservação de sêmen congelação lenta e vitrificação; Experimento II avaliação dos efeitos da adição de DHA e de Trolox (análogo da vitamina E) ao diluidor para criopreservação de sêmen. O diluidor TYB apresentou melhores resultados quando comparados ao BotuBOV. A congelação lenta apresentou melhores resultados quando comparada à vitrificação. Não houve diferença entre o diluidor controle e os diluidores com Trolox, DHA ou combinação dos dois (DHAT), com exceção da integridade de acrossoma, que foi significativamente menor para o diluidor DHAT. Conclui-se que são necessários mais estudos, com utilização de outras doses de DHA e Trolox, além de outros antioxidantes. O Estudo II, com foco em pesquisa biomédica, teve como objetivo a criopreservação de sêmen de macaco-rhesus (Macaca mulata) e avaliação da qualidade pós-descongelação por meio de fecundação in vitro (FIV). Para tanto, o estudo foi dividido em três experimentos: Experimento I avaliação e comparação de dois métodos de criopreservação de sêmen congelação lenta e vitrificação; Experimento II avaliação e comparação de quatro métodos de preparação do sêmen pós-descongelação lavagem simples (LS), swim-up (SU), separação por gradiente de densidade (SGD) e filtragem em lã de vidro (FLV); Experimento III avaliação da qualidade seminal pós-descongelação por meio de FIV. A congelação lenta apresentou melhores resultados que a vitrificação (p<0,05). LS apresentou os melhores resultados, seguido por SGD e SU, enquanto FLV apresentou os piores resultados. LS e SGD foram utilizados para avaliação da qualidade seminal por meio de FIV, utilizando sêmen fresco como controle. As taxas de fecundação (média±EPM%) para oócitos MI inseminados com sêmen fresco (43.5±16.4) foram significativamente maiores (p<0,05) que LS (2.0±2.0), mas não diferiram de SGD (25.1±14.2). Não houve diferença na taxa de blastocistos (média±EPM%) entre os tratamentos (variação de 0 a 11.9±7.9). As taxas de fecundação para oócitos MII inseminados com sêmen fresco (41.4±3.6) também foram significativamente maiores que SGD e LS (18.4±6.9 e 12.7±7.7, respectivamente), assim como a taxa de blastocistos (64.7±13.6; 4.7±4.7; 30.9±13.8, respectivamente). Conclui-se que, espermatozoides criopreservados foram capazes de fertilizar oócitos e os embriões atingiram o estágio de blastocisto. A SGD selecionou espermatozoides pós-descongelação de melhor qualidade para FIV em macacos-rhesus, quando comparada à LS / This work was divided in two studies. The objective of Study I was to test and compare different cryopreservation methods for sperm from black-and-gold howler monkeys (Alouatta caraya), with a focus on species conservation. The study was divided in two experiments. Experiment I composed of two trials the first trial compared two commercial extenders BotuBOV and Test-yolk buffer (TYB), and the second trial compared two cryopreservation methods slow freezing and vitrification; Experiment II evaluation of the effects of DHA and Trolox (vitamin E analog) as additives to the freezing extender. TYB had better results when compared to BotuBOV. Slow freezing had better results when compared to vitrification. There was no difference between control extender (TYB) and extender containing Trolox, DHA or a combination of both (DHAT), except for acrosome integrity, which was significantly lower for DHAT. In conclusion, more studies are necessary, using other doses of DHA and Trolox, as well as other antioxidants. The objective of Study II was to assess the quality of frozen-thawed sperm from rhesus macaques (Macaca mulatta) by in vitro fertilization (IVF). The study was divided in three experiments. Experiment I evaluation and comparison of two cryopreservation methods slow freezing and vitrification; Experiment II evaluation and comparison of four preparation methods for frozen-thawed sperm simple wash (SW), swim-up (SU), density gradient centrifugation (DGC), and glass wool filtration (GWF); and Experiment III evaluation of frozen-thawed sperm quality by IVF. Slow freezing had better results when compared to vitrification (p<0,05). SW had better results, followed by DGC and SU, while GWF had the worse results. SW and DGC were further evaluated by IVF. Fertilization rates (mean±SEM%) with MI oocytes using fresh sperm were significantly higher (43.5±16.4) than with SW (2.0±2.0) and did not differ from DGC (25.1±14.2). There was no difference in blastocyst rates between treatments (range 0 to 11.9±7.9). Fertilization rates with MII ova were also significantly higher with fresh sperm (41.4±3.6) than DGC and SW (18.4±6.9 and 12.7±7.7, respectively), and more blastocysts developed from MIIs fertilized with fresh sperm (64.7±13.6) than SW and DGC (4.7±4.7 and 30.9±13.8, respectively). In conclusion, frozen-thawed sperm were able to fertilize oocytes and embryos reached the blastocyst stage. DGC yielded better frozen-thawed sperm for IVF in rhesus macaques, when compared with SW

Perdas embrionárias e alterações gestacionais são frequentemente observadas em prenhezes de embriões bovinos manipulados in vitro. Sabe-se que tais anormalidades são resultantes de alterações epigenéticas ocasionadas pela manipulação dos gametas e/ou do embrião durante as técnicas de reprodução assistida (ARTs), com destaque para as técnicas de fecundação in vitro (FIV) e da clonagem por transferência nuclear de células somáticas (SCNT). Tais alterações resultam em distúrbios no desenvolvimento do concepto em algum momento crítico entre a fertilização e o parto, fornecendo bons modelos de estudos sobre a fisiopatologia de perdas embrionárias e dos distúrbios de desenvolvimento. Caracterizam-se como momentos críticos após a transferência do embrião (TE) o desenvolvimento embrionário no útero, o reconhecimento materno da gestação, a placentação e o desenvolvimento da placenta e do feto, os quais tem de ser transpassados sem nenhuma falha, permitindo um desenvolvimento normal do concepto até o termo. Sendo assim, o presente trabalho abordou três fases distintas do amplo período gestacional em prenhezes por ARTs. O Estudo 1 foi realizado durante o período peri-reconhecimento materno da gestação e objetivou descrever a abundância de expressão de genes estimulados pelo interferon tau (ISGs) de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) maternas em gestações oriundas de ARTs no primeiro mês de gestação; o Estudo 2 compreendeu os primeiros 35 dias de gestação e objetivou descrever as mudanças morfológicas e vasculares do complexo útero-concepto-ovário e o estímulo à expressão de ISGs em PBMCs em gestações de conceptos clonados por SCNT com diferentes fenótipos de desenvolvimento, sendo esses denominados gestação anembrionada e CL persistente; e o Estudo 3 foi conduzido durante o período pré-parto e objetivou descrever as alterações na produção de esteroides sexuais e corticosteroides em gestações produzidas por ARTs. Três hipóteses foram testadas: (1) Gestações de conceptos clonados por SCNT apresentam uma baixa e mais tardia estimulação de ISGs em PBMCs maternas quando comparadas com gestações de conceptos produzidos por FIV e IA; (2) O concepto clonado por SCNT apresenta um menor estímulo sobre mudanças morfológicas e vasculares do complexo útero-ovário e ISGs em PBMCs maternas durante os primeiros 35 dias de gestação, quando comparado com conceptos oriundos de IA; e (3) Gestações de embriões oriundos de ARTs apresentam alterações na dinâmica esteroidogênica no pré-parto quando comparados com gestações de IA. No estudo 1 foram coletadas amostras de sangue de gestações produzidas por inseminação artificial (IA), FIV e clonagem por SCNT, nos dias 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 pós-ovulação e foi realizada mensuração da abundância de transcritos de ISGs (OAS1 e ISG15) em PBMCs maternas. No estudo 2, gestações produzidas por IA e clonagem por SCNT, foram submetidas a escaneamentos ultrassonográficos dos ovários, útero e concepto a cada 3 dias do dia 14 ao 35 (dia 0 = ovulação) e amostras de sangue foram coletadas nos dias 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 para mensuração da abundância de transcritos de ISGs (OAS1 e ISG15) em PBMCs maternas. No estudo 3, foram coletadas amostras de sangue no último mês em gestações naturais, oriundas de FIV e de clonagem por SCNT para análise hormonal de 10 esteroides utilizando o método de espectrometria de massas multi-hormonal de alta resolução LC-MS/MS. O primeiro estudo mostrou semelhanças na expressão de genes estimulados pelo IFNT em gestações oriundas de ARTs e produzidas por IA. Entretanto, a estimulação nas gestações oriundas de ARTs aparentou ser quatro dias mais prolongada, sugerindo uma maior funcionalidade do trofectoderma em conceptos oriundos de ARTs. O segundo estudo demonstrou um aumento na expressão de ISGs em PBMCs maternas tanto em gestações de conceptos normais quanto em anormais, justificando a manutenção da função luteal mesmo na ausência de detecção do concepto por ultrasonografia. No terceiro estudo, demonstrou-se alterações na esteroidogênese nas gestações de embriões FIV e clonados no último mês de gestação, sendo essas compatíveis com a hiperativação da enzima aromatase durante todo o último mês de gestações oriundas de FIV e hiperativação das enzimas P450C11 e P450C21 trinta dias antes do parto em gestações oriundas de clonagem por SCNT. O presente estudo concluiu que conceptos oriundos de FIV e clonagem por SCNT apresentam um prolongamento no estímulo de ISGs pelo IFNT, conceptos clonados anormalos apresentam estímulo de ISGs, o que justifica a manutenção da função luteal, e, por fim, a cascata esteroidonênica que culmina com o parto apresenta-se alterada em gestações oriundas de FIV e clonagem por SCNT. / Pregnancy losses and gestational abnormalities are frequently observed in pregnancies from in vitro produced embryos in bovines. It is known that these abnormalities are due to epigenetic changes from the manipulation of gametes and/or embryo during the use of assisted reproduction techniques (ARTs), especially for the in vitro fertilization (IFV) and cloning by somatic cells nuclear transfer (SCNT). These changes results in disturbances of conceptus development in any critical stage between the fertilization and parturition, which provides good models for the study of physiopathology of embryo losses and disturbances of development. Critical stages after the embryo transfer (ET) to the uterus are characterized as the maternal recognition of pregnancy, placentation, and fetal-placental development, which needs to be surpassed without failures, in order to develop a normal conceptus until term. Therefore, the present work approached three distinct phases of the wide gestational period in pregnancies from ARTs. The Study 1 was conducted during the maternal peri-recongnition of pregnancy period and aimed to describe the expression of interferon stimulated genes (ISGs) in maternal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in pregnancies derived of ARTs; the Study 2 comprise the first 35 days of pregnancy and aimed to describe morphological and vascular changes of the complex uterus-ovaries-conceptus, as well as the expression of ISGs in maternal PBMCs in pregnancies of conceptus cloned by SCNT with different phenotypes of development, denominated as anembryonic gestation and persistent CL; the Study 3 was conducted during the pre-partum period and aimed to describe changes in the production of sexual steroids and corticosteroids during the last month of pregnancies derived of ARTs. Three hypothesis were tested: (1) Pregnancies of conceptus cloned by SCNT presented a decrease and delay in the stimulation of ISGs in maternal PBMCs when compared with conceptuses produced by IFV and AI; (2) Stimulus from the conceptus for changes in the morphology and vasculature of the the uterus-ovarian complex, detected by ultrasonography in B and Doppler modes, and the stimulation of ISGs in maternal PBMCs during the first 35 days of pregnancy of conceptus cloned by SCNT are less intense when compared with conceptus derived from AI; and (3) Pregnancies derived of ARTs present changes in the steroidogenic dynamics in the pre-partum, when compared with pregnancies derived from AI. In Study 1 blood samples were collected from pregnancies produced by AI, IVF, and cloning by SCNT, at days 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28, and 31 post-ovulation for the measurement of abundance of transcripts of ISGs (OAS1 and ISG15) in maternal PBMCs. In Study 2, pregnancies derived of AI and cloning by SCNT, were submitted to ultrasonographic scans for the evaluation and description of morphological and vascular changes in ovaries, uterus, and conceptus every 3 days from day 14 to 35 (day 0 = ovulation) and blood samples were collected on days 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 for the measurement of the abundance of transcripts of ISGs (OAS1 and ISG15) in maternal PBMCs. In Study 3, blood samples were collected during the last month of pregnancies naturally conceived, derived of IVF, and cloned by SCNT for the analysis of 10 steroids using the method of mass spectrometry high resolution LC-MS/MS. The first study showed similarities in the ISGs expression stimulation in pregnancies derived of ARTs and AI. However, the stimulation in the ART derived pregnancies was apparently 4 days longer, suggesting a greater placental function in conceptus derived of ARTs. The second study showed an increase in ISG expression in both normal and abnormal conceptus development, which justifies the maintenance of CL in the absence of a conceptus structure detected by ultrasonography. In the third study, was detected changes in the steroidogenesis of pregnancies derived of IFV and cloning by SCNT during the last month of pregnancy, which are compatible with the hyperactivation of the aromatase enzyme during the last month of IFV derived pregnancies, and hyperactivation of the enzymes P450C11 and P450C21 thirty days before parturition in pregnancies derived of cloning by SCNT. The present study concludes that conceptus derived of IFV and cloning by SCNT present a prolonged stimulus of ISGs, cloned conceptus with anomalous development presents a stimulus of ISGs, which justifies the CL function maintenance, and, ultimately, the steroidogenic cascade that culminates with the term is altered in pregnancies derived from IFV and cloning by SCNT.