3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA, ecstasy) is one of the most abused recreational drugs in the world. It has been extensively reported that this drug inhibits its own metabolism by inhibiting a polymorphic liver enzyme, CYP2D6, which is responsible for the clearance of one quarter of drugs used in therapeutics. This phenomenon has important clinical implications, since MDMA users display a higher prevalence of psychopathology, particularly of mood disorders, compared to control population. Importantly, these psychiatric diseases are treated with drugs most of them substrate of this enzyme. In addition, it is not elucidated how MDMA is still metabolically cleared even after repeated drug doses. Therefore, the first part of this thesis was focused on studying the metabolic autoinhibition by MDMA assessing several liver enzyme activities in men and women. Although MDMA pharmacology is well established, is it still not clear which is the mechanism of action of the drug. MDMA interacts with the serotonergic system at several levels, but nowadays is technically difficult to study the serotonergic function in living human brain. Imaging methods are limited by a number of factors. Thus, it would be advantageous to have a reliable peripheral index of the serotonergic activity in the blood. The second part of this thesis presents the development of several approaches aimed to assess whether the serotonin transporter in platelets can be used as a peripheral biomarker for central serotonergic activity, and determine if it plays any role in drug mechanism of action. / La 3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA, èxtasi) és una de les drogues més consumides al món. Aquesta droga inhibeix el seu propi metabolisme, inhibint un enzim polimòrfic del fetge, el CYP2D6, que és el responsable de l’eliminació d’una quarta part dels medicaments. Aquest fet té implicacions clíniques rellevants, ja que els consumidors de MDMA presenten una prevalença de psicopatologia més alta respecte a la població no consumidora, i moltes de la patologies psiquiàtriques es tracten amb fàrmacs substrats d’aquest enzim. A més, encara no s’ha discernit com aquesta droga pot ser eliminada de l’organisme, inclús després d’haver-ne consumit dosis de manera repetida. Així doncs, la primera part d’aquesta tesi es centra en estudiar l’autoinhibició de la MDMA determinant l’activitat de diferents enzims del fetge, en homes i dones. Encara que la farmacologia de la MDMA està descrita a fons, no està del tot clar quin és el seu mecanisme d’acció. La MDMA interactua amb el sistema serotonèrgic de diverses maneres, però avui en dia és molt difícil estudiar tècnicament el sistema serotonèrgic en el cervell humà. Les tècniques d’imatge estan limitades per molts factors, i per tant, seria molt útil tenir un índex perifèric a la sang de l’activitat serotonèrgica al sistema nerviós central. La segona part d’aquest tesi s’enfoca en el desenvolupament de tècniques per determinar a diferents nivells si el transportador de la serotonina a les plaquetes podria ser un bon biomarcador perifèric de la seva activitat al cervell, i d’aquesta manera veure si el sistema serotonèrgic està implicat en el mecanisme d’acció de la MDMA.

Orientador: Gun Brigitta Bergsten Mendes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T06:51:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Braga_ThaisBaleeiroTeixeira_M.pdf: 3327293 bytes, checksum: fbbf187dc4c890a713dbc66a2d3f6424 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Realizou-se um estudo transversal em um hospital escola de 400 leitos com a finalidade de comparar a prevalência de prescrição de medicamentos para pacientes idosos e não idosos. As folhas de prescrição de todos os 273 pacientes adultos que se encontravam internados no hospital no dia 29 de junho de 1995 foram examinadas. Os medicamentos prescritos foram codificados conforme o sistema A TC e registrados em um formulário próprio, juntamente com os dados demográficos e diagnósticos de alta, codificados pela CID- 9a.revisão. Dos 273 pacientes, 46,5% possuíam 14 a 44 anos (grupo etário jovem); 33% possuíam 45 a 64 anos (grupo etário intermediário) e 20,5% tinham 65 anos ou mais (grupo dos pacientes idosos). As neoplasias e as doenças cardiovasculares foram significativamente me'nos freqüentes entre os pacientes mais jovens. A média do número de medicamentos por paciente foi 5 para todos os grupos etários. As cinco classes terapêuticas mais prescritas foram N, A, C, J e B. As prevalências de prescrição para as classes B e C foram significativamente maiores para o grupo dos idosos. Os fármacos mais prescritos para os três grupos etários foram respectivamente: dipirona 54%; 49%, 36%;" ranitidina 43%, 49%, 43%; dipirona, combinação dose-fixa 31 %, 33%, 32%; metoclopramida 39%, 27%, 25%; cefazolina 22%, 15,6%, 21,4%. As doses médias prescritas foram comparadas entre os três grupos etários. Para a maioria dos fármacos prescritos nenhum ajuste de dose para pacientes idosos foi observado. Em idosos, a alta prevalência de dipirona, combinação dose-fixa é questionável, assim como a dose média de metoclopramida. Foram examinados os prontuários dos pacientes idosos internados no dia do estudo, a fim de avaliar principalmente, os perfis renal e hepático dos pacientes, através dos registros de exames laboratoriais. Os pesos dos pacientes idosos, quando encontrados nos prontuários também foram anotados. Dos pacientes, cujos pesos foram registrados, 9% apresentavam menos que 55 Kg. Trinta e seis por cento dos pacientes idosos possuíam clearance renal estimado menor que 40mllmin e 62,5% apresentavam uma concentração de albumina plasmática reduzida( < 3,4g/dl). Mesmo assim, não foi observada uma redução significativa da maioria dos fármacos. Aproximadamente 40% dos pacientes com registro de glicemia, apresentavam mais que 140mg/dl. Esta informação aliada à prevalência de prescrição de insulina observada, mostrou que diabetes ocorreu com freqüência em idosos, embora não tenha sido encontrado nenhum diagnóstico de diabetes neste grupo etário, sugerindo que as comorbidades não são relatadas. Uma amostra aleatória de residentes do hospital foi entrevistada, usando um questionário contendo 20 questões fechadas sobre "Farmacologia no idoso". Pode ser observado que tanto o ano de residência, como a procedência da escola médica não influenciaram no nível do conhecimento desta disciplina, porém ao ser comparada a porcentagem de acerto de no mínimo 75% entre os residentes clínicos e cirúrgicos, os clínicos obtiveram resultados significativamente melhores que os cirúrgicos. De um modo geral, os residentes do hospital apresentaram bom conhecimento nas questões abordadas, o que nem sempre se refletiu na prática observada / Abstract: A transversal study was performed in a 400 beds tertiary care teaching hospital in order to compare prevalence of drug prescriptions for elderly and non-elderly inpatients. The weight, glucose test, creatinine and albumin ratios, as well as hepatic enzymes that were registered on the records of the elderly inpatients were analysed. Thirty-six per cent of the elderly inpatients had an estimated renal clearance of less than 40 mllmin and 62,5% had albumin levels of less than 3,4 g/dl. Forty per cent of the elderly showed at least 140 mgl di of blood glucose. The prescription sheets of ali 273 adult non psychiatric inpatients that were' in the hospital on 29th June 1995 were examined and the prescribed drugs , coded according to ATC, were registered in a summary form, along with demographic data and discharge diagnoses ICD-9 coded. 46.5% of the patients were 14-44 years old (young people), 33% were aged 45-64 (middle age), and 20.5% were 65 years or more (old patients). Malignancies and cardiovasc~lar diseases were significantly less frequent among the young patients. The median number of drugs for the three age groups were respectively: 4 (range 1-21); 5 (range 1-13); 5 (range 1-10). The most prescribed therapeutic classes were N, A, C, J and B. For classes B and C a significantly higher prevalence was found for the elderly patients. The most prescribed drugs for the three age groups were respectively: dipyrone 54%, 49%, 36%; ranitidine 43%, 49%, 43%; dipyrone fixed-dose combination 31 %, 33%, 32%; metoclopramide 39%, 27%, 25%; cefazolin 22%, 16%, 21 %. The mean doses prescribed to the three age groups were compared. For most drugs no dose adjustment for elderly patients was observed. The high prevalence of prescriptions for dipyrone fixed-dose combination is questionable, as is the mean dose of metoclopramide to elderly people. A random sample of residents of the hospital answered a test with 20 closed questions about Geriatric Pharmacology. The mean overall score was 75% and 67% of the residents' reached it. The scores were evaluated according to the year of residency and no difference was found. The performance of the residents from medical and surgical departments were compared. Among the medical residents, 82% reached 'the score while 50% of the surgical ones did it. Even if the scores were quite good, a significant discrepancy between theory and practice was seen / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Ana Valéria Barros de Castro / Resumo: Os adenomas hipofisários são lesões relativamente comuns, representando 10 a 15% de todos os tumores intracranianos. Dentre os tumores secretores, os produtores de prolactina (prolactinoma), são os mais freqüentes. O tratamento de escolha é o medicamentoso, que ocorre de modo prolongado e, geralmente múltiplo, elevando, portanto, os riscos de interações medicamentosas (IM), reações adversas a medicamentos (RAM) e outros problemas relacionados com medicamentos (PRM). O objetivo desse estudo foi aplicar a Atenção Farmacêutica no tratamento de pacientes portadores de prolactinomas, para investigar e descrever as possíveis IM, RAM e PRM e auxiliar na orientação farmacoterapêutica e melhorar a qualidade de vida do paciente. Utilizamos a metodologia Dáder para o seguimento farmacoterapêutico e a metodologia de Minessota para a classificação dos PRM. Foram utilizadas as técnicas da análise de variância não-paramétrica para o modelo de medidas repetidas em dois grupos independentes e o teste do qui-quadrado de Mc Neman e Mann-Whitney para comparações dos resultados, com nível de significância de 5%. Observamos diminuição dos custos dos medicamentos, dos níveis séricos de prolactina dos pacientes e da automedicação; houve detecção e resolução de RAM, PRM e IM. Concluímos que o seguimento farmacoterapêutico mediante a aplicação da AF foi útil para o tratamento de portadores de prolactinoma. / Abstract: Pituitary adenomas are relatively common disorders, representing 10 to 15% of all intracranious tumors. Among the secreting tumors, prolactinomas, which secrete prolactina, are the most frequent ones. The treatment of choice of prolactinoma is clinical and generally involves multiple and long-term pharmacotherapy which may predispose to drug-related problems (DRP) such as drug interactions (DI) or adverse drug reactions (ADR). The objective of this study was to apply Pharmaceutical Care in the pharmacotherapy follow-up of patients with prolactinoma in order to investigate and describe possible DI, ADR and other DRP that could modify the success and insurance of treatment and assist on the pharmacoterapy orientation. We used Dader’s methodology to apply Pharmaceutical Care and methodology of Minessota to classify the DRP. For statistical analysis we used non-parametric analysis of variance for repeated measurements in two independent groups and the test of chi-square of Mc Neman and Mann-Whitney for comparisons of the results, with level of significance of 5%. We detected and/or resolved the majority of ADR, DRP and DI and reduced medical-costs, prolactinemia levels and frequency of self-medication practice. We conclude that pharmaceutical care is an important approach to the pharmacotherapy follow-up of patients with prolactinoma. / Mestre

nÃo hà / A leishmaniose à um grupo de doenÃas com um extenso espectro, cosmopolita, porÃm com ampla e significativa incidÃncia na zona tropical. A leishmaniose apresenta-se sob duas formas, uma visceral envolvendo estruturas do sistema hemolinfopoiÃtico; outra com envolvimento cutÃneo e/ou mucoso, amiÃde, sem visceralizaÃÃo. Esta Ãltima, conhecida como leishmaniose tegumentar (LT), alvo deste estudo, tem como um dos grandes problemas o tratamento, realizado mediante formulaÃÃes injetÃveis com risco de complicaÃÃes no local da aplicaÃÃo e o risco de danos Ãs funÃÃes hepÃtica e renal, alÃm de alteraÃÃes cardÃacas. VÃrios ensaios mostram resultados satisfatÃrios utilizando o FluconazolÂ. Visando a consolidar os resultados descritos na literatura, este estudo procurou demonstrar a eficÃcia terapÃutica do Fluconazol em altas doses no tratamento da LT, em pacientes de uma Ãrea endÃmica no Sul do Estado do CearÃ, Brasil, MunicÃpio de Barbalha. Realizou-se um estudo prospectivo, randomizado, com dois grupos de pacientes. Sessenta do Grupo I fizeram uso de 300mg ou 450mg de Fluconazol durante seis semanas. Sessenta do Grupo II fizeram uso de Glucantime com 20mg/kg/dia, durante 20 dias consecutivos. O diagnÃstico de LT foi realizado com Imprint, cultura, biopsia com histopatolÃgico corado pelo Giemsa e Imuno-histoquÃmica, e a IntradermorreaÃÃo de Montenegro. Todos os pacientes foram avaliados clinicamente e acompanhados durante atà 90 dias. As variÃveis contÃnuas foram avaliadas pelo Test t de Student; para a correlaÃÃo de variÃveis, utilizou-se o Coeficiente de CorrelaÃÃo de Pearson (r). O tempo de cura de cada grupo teve sua avaliaÃÃo realizada pelo mÃtodo de Kaplan-Meier. Em todos os testes de hipÃtese o &#945; foi considerado significante quando menor do que 5% (p < 0,05). A eficÃcia terapÃutica (ET) foi calculada com base na reduÃÃo do risco relativo. A populaÃÃo estudada era predominantemente constituÃda de indivÃduos com faixa etÃria entre 30 e 40 anos de idade, cor de pele parda, rurÃcolas agricultores, com discreta prevalÃncia do sexo feminino. Os resultados mostraram uma eficÃcia terapÃutica de 38,7%. A cura teve relaÃÃo com o tamanho da lesÃo, dados estatatiscamente representativos p< 0,0001. LesÃes com tamanho inferior a 30 mm (isolada ou somatÃrio de vÃrias lesÃes), responderam prontamente ao FluconazolÂ.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / IntroduÃÃo: DepressÃo à uma condiÃÃo psicopatolÃgica crÃnica e recorrente, com evidentes prejuÃzos sÃcio-ocupacionais e de qualidade de vida, tanto na fase aguda quanto no longo prazo. A depressÃo à causada por um dÃficit funcional das monoaminas nas suas vias transmissoras (serotoninÃrgicas, noradrenÃrgica e dopaminÃrgicas) em certos locais do cÃrebro. Apesar de existirem diversas formas de tratamento clÃnico desse transtorno do humor como: psicoterapia, antidepressivos, ECT e TMS, a prescriÃÃo das drogas antidepressivas representa a principal forma de manejo das chamadas depressÃes endÃgenas. A modulaÃÃo funcional das vias de transmissÃo neuroquÃmica pode interferir no desempenho do processamento de funÃÃes cognitivas como a memÃria. Objetivo: Nosso estudo procurou investigar as possÃveis alteraÃÃes em diferentes tipos e fases da memÃria provocadas pelo uso crÃnico de diferentes manejos de antidepressivos; monoterapia e terapia combinada. MÃtodos: Utilizamos nessa pesquisa a administraÃÃo crÃnica de trÃs drogas antidepressivas e suas associaÃÃes (Paroxetina, Venlafaxina e Bupropiona) de largo uso na prÃtica clÃnica. Para avaliaÃÃo do desempenho mnemÃnico utilizamos modelos comportamentais para ratos com alto valor preditivo para memÃria (labirinto radial, esquiva passiva) e para atividade exploratÃria (campo aberto). Foram medidos os nÃveis de BDNF e a atividade enzimÃtica da AChE do hipocampo dos grupos de ratos usuÃrios de antidepressivos. Resultados: No Labirinto Radial â fase de aquisiÃÃo: os grupos Venlaf (11Â4,85), Venlaf+Parox (10,88Â5,30) e Venlaf + Buprop (11Â3,85) apresentaram nÃmero de tentativas de treinos significativamente maior comparado ao desempenho dos animais do grupo controle (5,11Â1,36), enquanto os grupos com Parox (4,14Â2,19), Buprop (7,1Â3,66) sozinha e Parox + Bup (4,75Â1,75) nÃo apresentaram alteraÃÃes do nÃmero de tentativas significantes. Labirinto Radial â MC: os grupos Venlaf (2,16Â1,47), Venlaf+Parox (2,85Â1,35) e Venla + Bup (2,62Â1,76) nÃo apresentaram alteraÃÃes significantes em comparaÃÃo ao grupo usuÃrio da soluÃÃo salina (2,25Â1,58), enquanto que os usuÃrios dos antidepressivos Parox (3,11Â1,69), Bup (4,9Â2,99) e Parox + Bup (4,12Â2,58) apresentaram um nÃmero significativamente (p<0,001) maior de erros em relaÃÃo ao grupo controle (2,25Â1,58). Labirinto Radial â ML: grupos usuÃrios de Venla (4,5Â1,64), Buprop (4Â2,3) e Venlaf+ Bup (2,87Â1,72) nÃo apresentaram alteraÃÃes significativamente diferente do grupo controle (3.11Â1,36), enquanto que o grupo usuÃrio de Parox (4,4Â1,50) apresentou um nÃmero significativamente maior de erros em relaÃÃo ao grupo controle (3.11Â1,36). Os grupos usuÃrios de Venlaf + Parox (2,66Â0,85) e Parox+Buprop (3,12Â2,16) apresentaram um nÃmero de erros significativamente menor quando comparados ao nÃmero de erros na Parox (4,4Â1,50). Esquiva Passiva â MC e ML:os grupos usuÃrios de Parox (218,4Â113,1), Bup (39,57Â23,19) e Parox+Buprop (300Â0,0) apresentaram um tempo de latÃncia significativamente (p<0,001) maior em relaÃÃo ao grupo controle (270Â37,30). ML: os grupos usuÃrios de Venlaf+Parox (218,1Â103,6) e Parox+ Bup (296,7Â8,69) reverteram o aumento do tempo de latÃncia do grupo de Parox (218,1Â103,6) e causou uma diminuiÃÃo significativa (p<0,001) do tempo de permanÃncia do rato no compartimento claro em relaÃÃo ao mesmo grupo. Campo Aberto â N0 cruzamentos: Parox (20,80Â3,85) apresentou um aumento significativo do nÃmero de cruzamentos em relaÃÃo ao grupo controle (14,90Â3,85), enquanto que o grupo usuÃrio de Parox+Buprop (12Â2,50) reverteu o aumento da atividade locomotora do grupo da Parox (20,80Â3,85). ConclusÃes: no teste de aquisiÃÃo houve prejuÃzo de desempenho nos grupos usuÃrios de antidepressivos com pouca seletividade para recaptaÃÃo de serotonina. O desempenho da MC e ML, em habilidades visuo-espaciais, obtivemos dÃficits nos grupos de antidepressivos que potencializam tanto a aÃÃo serotoninÃrgica, com a aÃÃo dopaminÃrgica. A potencializaÃÃo &#946;-adrenÃrgica induziu uma melhora do desempenho da formaÃÃo e consolidaÃÃo da MC e ML. / Introduction: Depression is a chronic and recurrent psychopathological condition, with obvious socio-occupational injury and quality of life in both the acute and long term. Depression is caused by afunctional deficit of monoamines in their signaling pathways (serotoninergic, dopaminergic, noradrenergic) in certain parts of the brain. Although there are various forms of clinical treatment of mood disorders such as psychotherapy, antidepressants, ECT and TMS, the prescription of antidepressant drugs is the main form of management of calls endogenous depressions. The functional modulation of neurochemical transmission paths can interfere with the processing performance of cognitive functions like memory. Objective: Our study sought to investigate the possible changes in different types and stages of memory caused by chronic use of antidepressants from different managements; monotherapy and combination therapy. Methods: We use this research to chronic administration of three antidepressant drugs and their associations (paroxetine, venlafaxine and bupropion) widely used in clinical practice. To evaluate the performance mnemonic to use behavioral models predictive of mice with eigen value memory (radial maze, passive avoidance) and exploratory activity (open field). They measured levels of BDNF and AChE in the hippocampus of rats in groups of antidepressant users. Results: Radial Maze - acquisition phase: the Venlaf group (11 Â4.85), associated with Venlaf Parox (10,88Â5,30) associated with Buprop and Venlaf (11  3.85) showed a number of training trials significantly higher compared to that of the control group (5.11 1.36), while groups with Parox (4, 14  2.19), Buprop (7.1  3.66) associated with Parox alone and Buprop (4.75  1.75) showed no change in the number of significant attempts. Radial Maze - MC: Venlaf groups (2.16 Â1.47) associated with Venlaf Parox (2.85  1.35) associated with Buprop and Venlaf (2.62  1.76) showed no significant changes compared to the user group of saline (2.25  1.58) while users of antidepressants Parox (3.11  1.69), Buprop (4.9 2.99) associated with Buprop and Parox (4.12  2.58) had significantly (p <0.001) greater errors in the control group (2.25  1.58). Radial Maze â ML: Venlaf users groups (4.5  1.64), Buprop (4  2.3) associated with Buprop and Venlaf (2.87  1.72) showed no significant than the control group (3.11  1.36),where as the group user Parox (4.4 1.50) howed a significantly greater errors in the control group (3.11  1 ,36) Venlaf users groups associated with Parox (2.66  0.85) associated with Buprop and Parox (3.12  2.16) had a number of errors significantly lower when compared to the number of errors in Paroxetine (4.4  1.50). Avoidance passive âMC and ML : Parox users groups(218.4  113.1) Buprop (39.57  23.19) and associated with Parox Buprop (300  0.0) showed a significant lag time higher in the control group (270  37.30). ML: Venlaf users groups associated with Parox (218.1  103.6) associated with Buprop and Parox (296.7  8.69) revert the increase in the latency time of the Parox (218,1Â103,6) and caused a significant decrease the time spent in the compartment of the mouse course over the same group. Open Field: Parox (20.80  3.85) increased significantly in the control (14.90  3.85) while the user group Buprop associated with Parox (12  2.50) reversed the increase in locomotor activity of the Parox group (20.80  3.85). Conclusions: the test of acquisition show loss of performance in groups o antidepressant users with little selectivity for serotonin reuptake. The MC and ML in visual-spatial skills, we found deficits in groups of antidepressants that potentiate both serotonin action with dopaminergic action. The potentiation of &#946;-adrenergic is associated with increased level of alertness and improves the performance of establishment and consolidation of MC and ML.

nÃo hà / A Alpinia zerumbet à uma planta comumente encontrada na regiÃo do nordeste do Brasil. Essa planta à conhecida popularmente por colÃnia e à muito utilizada na medicina popular por suas propriedades diurÃticas e anti-hipertensivas. O objetivo do presente estudo foi investigar se o extrato aquoso das folhas de A. zerumbet (EAAz) apresentava atividade vasodilatadora em aorta de rato prÃ-contraÃda com fenilefrina e, elucidar o seu mecanismo de aÃÃo. Ratos machos Wistar (250 a 300 g), provenientes do biotÃrio da UFC, foram sacrificados por deslocamento cervical e a aorta torÃcica removida e dissecada. Os anÃis da aorta (4 a 5 mm) foram montados em cÃmeras orgÃnicas, contendo soluÃÃo de Krebs e aerados com carbogÃnio a 37ÂC, para as medidas de variaÃÃes na tensÃo isomÃtrica. O endotÃlio dos anÃis da aorta foi removido mecanicamente para estudar o seu envolvimento no efeito vasodilatador do EAAz. Para estudar o envolvimento do Ãxido nÃtrico (NO), GMPc, prostanÃides, canais de potÃssio ativados por Ca2+, espÃcies reativas do oxigÃnio e a ativaÃÃo das enzimas quinases Src e PI3 quinase, as preparaÃÃes foram tratadas, respectivamente, com L-NAME (100 ÂM), ODQ (10 ÂM), indometacina (10 ÂM), caribdotoxina (100 nM) mais apamina (100 nM), MnTMPyP (100 ÂM), catalase (500 U/ml), PEG-catalase (500 U/ml), SOD (500 U/ml) e PP2 (20 ÂM), Wortmannin (300 nM). O efeito vasodilatador do EAAz (0,05; 0,15; 0,5; 1,5; 15 e 50 Âg/mL), acetilcolina (10-8 - 10-5 M) e nitroprussiato de sÃdio (10-8 M) foram avaliados em aorta de ratos prÃ-contraÃda com fenilefrina (10-8 - 3x10-8 M), antes e apÃs tratamento com os inibidores especÃficos. A vasodilataÃÃo induzida pelo EAAz mostrou-se dependente do endotÃlio e mediada pelo NO via GMPc jà que o relaxamento vascular foi abolido na presenÃa do Ãster metÃlico de NG-nitro-l-arginina e do ODQ. A vasodilataÃÃo tambÃm foi reduzida pelo MnTMPyP (permeante celular mimÃtico da SOD), polietilenoglicol catalase, PP2 (inibidor da quinase Src) e Wortmannin (inibidor da fosfoinositideo 3-quinases). A via de produÃÃo de EROs induzida pelo EAAz foi inibida significativamente pela aÃÃo do MnTMPyP e PEG-catalase. Ocorreu tambÃm a inibiÃÃo da via EROs/PI3 quinase/Src quinase que estÃo envolvidas na ativaÃÃo da eNOS. O EAAz causou um relaxamento dependente do endotÃlio via NO/GMPc com o possÃvel envolvimento de EROs e das Src quinase e fosfoinositideo 3-quinase dependente de Akt. Dessa forma, pode-se concluir que o relaxamento vascular induzido pelo EAAz poderia explicar o tradicional uso do chà das folhas de A. zerumbet para o tratamento da hipertensÃo arterial. / The Alpinia zerumbet is a plant commonly found in the northeastern region of Brazil. This plant is popularly known as colony and is widely used in folk medicine for its diuretic and antihypertensive properties. The aim of this study was to investigate whether the aqueous extract of leaves of A. zerumbet (EAAz) had vasodilator activity in rat aorta pre-contracted with phenylephrine and to elucidate its mechanism of action. Male Wistar rats (250-300 g) from the vivarium of UFC, were killed by cervical dislocation and the thoracic aorta removed and dissected. The aortic rings (4-5 mm) were mounted in organ cameras, and containing Krebs solution aerated with carbogen at 37  C to measure changes in isometric tension. The endothelium of the aortic rings was removed mechanically to study their involvement in the vasodilator effect of EAAz. To study the involvement of nitric oxide (NO), cGMP, prostanoid, potassium channels activated by Ca2+, reactive oxygen species and activation of enzymes kinases Src and PI3 kinase, the preparations were treated respectively with L-NAME (100 ÂM ), ODQ (10 ÂM), indomethacin (10 ÂM), carybdotoxin (100 nM) plus apamin (100 nM), MnTMPyP (100 ÂM), catalase (500 U / ml), PEG-catalase (500 U/ ml), SOD (500 U / ml) and PP2 (20 ÂM), wortmannin (300 nM). The vasodilatory effect of EAAz (0.05, 0.15, 0.5, 1.5, 15 and 50 Âg / mL), acetylcholine (10-8 - 10-5 M) and sodium nitroprusside (10-8 M ) were evaluated in the aorta of rats pre-contracted with phenylephrine (10-8 - 3x10-8 M) before and after treatment with the specific inhibitors. EAAz induced vasodilation was dependent and endothelium mediated by NO via cGMP as the vascular relaxation was abolished in the presence of the methyl ester of NG-nitro-L-arginine and ODQ. Vasodilation was also reduced by MnTMPyP (mimetic cellular permeant SOD), catalase polyethylene glycol, PP2 (Src kinase inhibitor) and wortmannin (inhibitor of phosphoinositide 3-kinase). The route of production of ROS induced EAAz was significantly prevented by the action of MnTMPyP and PEG-catalase. There was also the inhibition of the kinase ROS/PI3 / Src kinase that are involved in the activation of the eNOS. The EAAz caused an endothelium-dependent relaxation via NO / cGMP with the possible involvement of ROS and Src kinase and phosphoinositide 3-kinase-dependent Akt. Taking us to the conclusion that the vascular relaxation induced by EAAz could explain the traditional use of the tea leaves of A. zerumbet for the treatment of hypertension.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente teve por objetivo avaliar a diminuiÃÃo da resposta hipernociceptiva inflamatÃria no curso do desenvolvimento da colite experimental induzida pelo Ãcido TNBS em ratos, bem como avaliar o papel da via NO/GMPc/PKG/K+ATP e a participaÃÃo de opioides endÃgenos e endocanabinoides neste evento. Para tanto, as colites foram induzidas por TNBS (20mg) diluÃdo em etanol a 50% ou etanol a 50%. O grupo controle recebeu somente salina via transanal. TrÃs ou quatorze dias apÃs a induÃÃo das colites foram avaliados os seguintes parÃmetros: edema de pata por carragenina (Cg; 500&#956;g/pata direita) ou dextrana (Dxt; 500&#956;g/pata direita.) por pletismometria, atividade da enzima mieloperoxidase (MPO), migraÃÃo de neutrÃfilos para cavidade pleural induzidas por Cg (500&#956;g/pata direita) e a hipernocicepÃÃo mecÃnica induzida por PGE2 (100ng/pata) ou Cg (500&#956;g/pata) aferido por analgesÃmetro digital (InsightÂ). Para verificar a participaÃÃo da via NO/GMPc/PKG/K+ATP na diminuiÃÃo da resposta hipernocicetiva da colite induzida por TNBS foram usados o L-Noarg (antagonista da NOSi; 100ng/pata) , O ODQ (bloqueador da guanilato ciclase soluivel; 8&#956;g/pata), o KT5823 (antagonista da PKG; 1,5 &#956;g/pata) e a glibenclamida (bloqueadora dos canais de K+ATP; 160&#956;g/pata). Depois, para avaliar a participaÃÃo opiÃide e canabinÃide nesse evento, naloxona (antagonista de receptor opioide, 1,0 &#956;g/pata) ou AM251 (antagonista de receptor canabinoide ; 1, 80 &#956;g/pata) ou AM630 (antagonista de receptor canabinoide tipo 2; 25 &#956;g/pata) foram injetados respectivamente. Os animais com colite induzida por TNBS apresentaram uma inibiÃÃo significativa do edema de pata tanto com o Cg (TrÃs ou quatorze dias apÃs a induÃÃo) quanto com Dxt (TrÃs dias apÃs a induÃÃo), quando comparados com os outros grupos em estudo. Em nenhum dos dias estudados, foram observadas diferenÃas na atividade da MPO na pata e nem na avaliaÃÃo da migraÃÃo de neutrÃfilos para a cavidade pleural induzidas por Cg. Ratos com colite induzida por TNBS apresentavam diminuiÃÃo na resposta hipernociceptiva induzida por Cg e PGE2. O tratamento com o ODQ, KT5823 e glibenclamida, naloxona, AM251 e AM630 reverteram esse efeito. O L-Noarg tambÃm reverteu o efeito entinociceptivo da colite induzida por TNBS, mas com a administraÃÃo da L-Arginina esse efeito foi recuperado. Apartir dos nossos resultados podemos concluir que a colite induzida por TNBS diminuiu a hipernocicepÃÃo inflamatÃria induzida tanto por carragenina quanto por PGE2 por dimimuir parÃmetros inflamatÃrios agudos como a resposta edematogÃnica a estÃmulos inflamatÃrios. AlÃm disso, esse efeito antinociceptivo parece ser independente da infiltraÃÃo de neutrÃfilos, mas dependente da ativaÃÃo da via final NO/GMPc/PKG/K+ATP e estimulada pelas aÃÃes dos opiÃides e canabinÃides endÃgenos. / The aim of this study was to investigate a possible involvement of the opioids, endocannabinoids and NO/cGMP/PKG/K+ATP pathway in the antinociception of the CrohnÂs experimental model in hypernociception induced by carragenan ou PGE2. Colitis was induced in the male Wistar rats (200-250) by intracolonic administration of 20 mg of 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) in 50% ethanol, ethanol 50% or an equivalent volume of saline. Three or fourteen days after the colitis induction several parameters were evaluated: paw edema induced by carrageenan (Cg; 500&#956;g/hind paw) or dextran (Dxt, 500&#956;g/hind paw), myeloperoxidase activity (MPO), neutrophil migration to pleural cavity. Paw edema was evaluated the right hind paw and measured by plethysmometry. Neutrophil migration was induced by Cg injection in the right hind paw or in the peritoneal cavity. After 4h, rats were sacrificed and the skin of the right hind paw was harvested to measure neutrophil infiltration by MPO assay. Neutrophil migration induced by Cg was also evaluated in the pleural cavity, with the total e differential leucocytes counted. The mechanical behavioral tests were performed by measuring the force in grams (g) applied through a digital analgesymeter (InsightÂ). In this test the rats received PGE2 (100ng/paw) or carrageenan (Cg; 500&#956;g/paw) into the plantar surface. In order to investigate the involvement of the NO/cGMP/PKG/K+ATP pathway in this event there were used L-Noarg (antagonist of iNOS; 100ng/paw), ODQ ( guanilate ciclase blocker; 8&#956;g/paw), L-Arg (200mg/kg), KT5823 ( PKG blocker; 1.5 &#956;g/paw) and Glibenclamide ( K+ATP channels blocker; 160&#956;g/paw). To evaluated the involvement of the opioids and cannabinoids in this event naloxone (opioids receptor blocker; 1 &#956;g/paw) or AM251 ( cannabinoid receptor blocker type I; 80 &#956;g/paw) or AM630 (cannabinoid receptor blocker type II; 25 &#956;g/paw) were inject respectively. Our results shows that, in animals with TNBS-induced colitis, there was a significant inhibition in the Cg (3rd or 14th after colitis induction) and Dxt (3rd after colitis induction)-induced paw edema. There were no differences in MPO activity and neither in the pleural neutrophil infiltration induced by Cg in rats inoculated with TNBS -induced colitis (3rd after colitis induction) when compares to normal animals. Rats with colitis induced by TNBS showed an increased nociceptive threshold when induced by CG and PGE2. Treatment with ODQ, KT5823 and glibenclamide, naloxone, AM251 and AM630 decreased the nociceptive threshold when compared with TNBS colitis. L-NOARG decrease the nociceptive threshold in rats with colitis induced by TNBS and L-arginine reversed this effect. Our results suggest that the antinociceptive effect of the experimental model of CrohnÂs disease induced by TNBS seemed to be mediated a decrease of inflammatory response independent of neutrophil migration and activation of the NO&#8260;cGMP/PKG pathway followed by the opening of K+ ATP channels and activation of opioid and cannabinoid system.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / This work shows for the first time the antinociceptive effect of the citronellyl acetate (CAT) and aimed to characterize the profile of effect and identify possible antinociceptive mechanisms of the cat, in models of acute nociception in mice. The CAT was testeed standardized animal models of pain using mice Swiss (24-32g). The CAT was administered at doses of 25, 50, 75, 100 or 200 mg/kg, by gavage. It was used in the tests of abdominal writhings by acetic acid; hot plate; formalin test; mechanic sensitivity; inflamatory hipernociception induced by carrageennan; Nociception test induced by capsaicin, cinnamaldeide, menthol, acid saline, PMA, 8-Br-cAMP, bradykinin or glutamate, as well as in behavioural models (open field and rota rod tests) that allowed to exclude the possibility of a muscle relaxant action or to induce false-positive result in the earlier models. The results showed that the CAT have antinociceptive effect in the visceral nociception model induced by acetic acid (in the 100 or 200 mg/kg doses, with ED50 of 74.42 mg/kg), this effect was verified after 30 minutes of aplication and continued until 240 minutes (200 mg/kg). Pretreatment with CAT showed antinociceptive effect in licking model induced by intraplantar formalin application and in the thermal nociception model (hot plate). CAT showed the decreasing of mechanical sencibility using the von Frey hair. In the antinociceptive mechanism investigation, CAT showed effect related with K+ATP channels, TRPV1, TRPM8, ASIC, glutamatergics receptors, bradykinin receptors, PKA and PKC. IN the investigation of neurotramitters pathways involved in antinociceptive effect of CAT, we can suggest the involvement of serotonergics system (5-HT1A, 5-HT2A/C receptors) and muscarinic, dopaminergic and &#945;2-adrenergics receptors. With the results showed, we can conclude the CAT have antinociceptive effect in mice, and as possible mechanism the modulation of intracellular mediators PKC and/or PKA, relacted with moleculars mechanisms of K+ATP channels, TRPV1, TRPM8, ASIC, glutamatergics receptors, bradykinin receptors, serotonergics system (5-HT1, 5-HT2A/C receptors) and muscarinic, dopaminergic and &#945;2-adrenergics receptors. / Esse trabalho, atà onde se sabe, mostra pela primeira vez o efeito antinociceptivo do acetato de citronelila (CAT) e teve como objetivo caracterizar o perfil do efeito e identificar possÃveis mecanismos antinociceptivos do CAT, em modelos de nocicepÃÃo aguda em camundongos. O CAT foi testado em modelos animais padronizados de dor utilizando camundongos Swiss (24-32g). O CAT foi administrado nas doses de 25, 50, 75, 100 ou 200 mg/kg, por via oral. Foram utilizados os testes de contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico; placa quente; teste da formalina; nocicepÃÃo mecÃnica, hipernocicepÃÃo inflamatÃria induzida pela carragenina; teste da nocicepÃÃo induzida por capsaicina, cinamaldeÃdo, mentol, salina Ãcida, PMA, 8-Br-cAMP, bradicinina ou glutamato, bem como em modelos comportamentais (testes do campo aberto e rota Rod) que permitiram excluir a possibilidade de uma atividade relaxante muscular ou induzir resultados falso-positivos nos modelos anteriores. Os resultados mostraram que o CAT possui efeito antinociceptivo no modelo de nocicepÃÃo visceral induzida por Ãcido acÃtico (nas doses de 100 ou 200 mg/kg, com DE50 de 74,42 mg/kg), esse efeito foi verificado apÃs 30 minutos da aplicaÃÃo e persistiu por atà 240 minutos (200 mg/kg). O prÃ-tratamento com o CAT mostrou efeito antinociceptivo no modelo de lambedura induzida pela aplicaÃÃo intraplantar de formalina e no modelo de nocicepÃÃo tÃrmica (placa quente). O CAT mostrou diminuiÃÃo da sensibilidade mecÃnica utilizando o filamento de von Frey. Na investigaÃÃo do mecanismo antinociceptivo, o CAT mostrou efeito relacionado com os canais K+ATP, TRPV1, TRPM8, ASIC, receptores glutamatÃrgicos, receptores de bradicinina, PKA e PKC. Na investigaÃÃo das vias de neurotransmissÃo envolvidas no efeito antinociceptivo do CAT, podemos sugerir o envolvimento dos receptores &#945;2-adrenÃrgicos, sistema serotonÃrgico (receptores 5-HT1A, 5-HT2A/C), receptores muscarÃnicos e dopaminÃrgicos. Com os resultados mostrados, podemos concluir que o CAT possui efeito antinociceptivo em camundongos, e como possÃveis mecanismos a modulaÃÃo de mediadores intracelulares PKA e/ou PKC, relacionados com os mecanismos moleculares dos canais K+ATP, TRPV1, TRPM8, ASIC, receptores glutamatÃrgico, receptores de bradicinina, receptores &#945;2-adrenÃrgico, sistema serotonÃrgico (receptores 5-HT1, 5-HT2A/C), receptores muscarÃnicos e dopaminÃrgicos.

This doctoral thesis describes the evaluation of analytical methodologies to detect human growth hormone (hGH) abuse in sport. Two main strategies are studied and compared. The first (direct method) measures changes in the proportions of hGH variants, expressed as ratios, which are altered after hGH administration. Two versions of the direct method are compared; one using ratios between recombinant and pituitary variants and a second using ratios between only 22 and 20 kDa hGH variants. To fully understand the immunoassays readings, all relevant antibodies were characterised by surface plasmon resonance (SPR). A second strategy (indirect method) measures changes in proteins, other than hGH, provoked by the use of hGH. These bio-markers should have a longer retrospective analytical power. To evaluate the performance of both strategies, two clinical trials with recombinant hGH (rhGH) were carried out with healthy male subjects. The resulting data have been compared and statistically assessed. It is the first time that all available strategies have been applied on a single data set and this allows better understanding of the analytical readings which provides an additional tool in the evaluation of anti-doping analyses. / Esta tesis doctoral describe la evaluación de métodos analíticos para detectar el abuso de hormona de crecimiento humana (hGH) en el deporte. Se han estudiado y comparado dos estrategias. La primera o método directo mide cambios en la proporción de variantes de hGH expresados como ratios, que están alterados después de administrar hGH. Dos versiones del método directo son comparadas; una con ratios entre variantes recombinante e hipofisaria y otra con ratios entre variantes de 22 y de 20 kDa. Para una mejor comprensión, los anticuerpos relevantes utilizados en los inmunoensayos, se caracterizaron por medio de resonancia del plasmon de superficie (SPR). Una segunda estrategia o método indirecto mide cambios en bio-marcadores (proteínas) causados por uso de hGH recombinante (rhGH). Estos bio-marcadores presentan un poder analítico más fuerte y de mejor retrospección en el tiempo. Para evaluar el rendimiento de ambas estrategias se han realizado dos ensayos clínicos con rhGH en varones sanos. Los datos resultantes se han comparado y evaluado estadísticamente. Es la primera vez que ambas estrategias se han aplicado sobre una misma serie de datos y ello permite una mayor comprensión de lecturas analíticas lo que proporciona herramientas adicionales en la evaluación de los análisis anti-dopaje.

La present tesis doctoral desenvolupa una nova metodologia analítica antidopatge. Degut a que actualment la detecció de l'abús d'hormona del creixement recombinant està relativament resolt, es tem que els secretagogs de la hormona del creixement (GHS) siguin el relleu natural ja que es creu provoquen efectes anabòlics semblants. L'objectiu de la tesi és la detecció de secretagogs de l'hormona del creixement (GHS) a partir de mostres d’orina. Els GHS presenten gran diversitat estructural que fa difícil una única determinació química convencional. Per això s'ha optat per utilitzar la seva propietat comú d'interaccionar amb el receptor específic GHS-R1a, mitjançant un mètode basat en un assaig competitiu front un lligand marcat. Monitorant la senyal del lligand marcat al final de l’assaig es pot determinar la presència de qualsevol GHS a la mostra. S'ha determinat per l’assaig un valor de tall de la senyal del lligand marcat per sota de la qual una mostra és considerada sospitosa amb una baixa probabilitat d'obtenir un fals positiu. El mètode desenvolupat ha funcionat amb els 8 GHS estudiats, incloses mostres reals procedents d'un assaig d’administració d’un d’ells. Variables com l'edat, gènere o exercici físic no provoquen interferències en el mètode, que actualment es troba en fase de validació. / The presented doctoral thesis describes de development of a new analytical method in anti-doping. At present, the detection of recombinant growth hormone abuse is relatively settled, and therefore it is anticipated that growth hormone secretagogues (GHS) will replace GH, as they can induce similar anabolic effects. The aim of this thesis is the detection of growth hormone secretagogues (GHS) from urine samples. GHS presents high structural diversity rendering very difficult a single conventional chemical determination for all. Thus, in this approach the single feature shared by all GHS, interaction with the specific receptor GHS-R1a, is targeted using a method based on a competitive assay against a labelled ligand. By monitoring the signal of the labelled ligand at the end of the test, the presence of any GHS in the sample can be determined. A threshold value below which a sample is considered suspicious with low probability of being false positive was set up. The developed methodology was tested with 8 different GHS, and also samples from an administration assay of one of the GHS. Variables such as age, gender or physical exercise do not interfere with the method, which is currently under validation.