Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T14:44:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 225669.pdf: 727049 bytes, checksum: b37f475df9f64af382e4800b371a0981 (MD5)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T00:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T20:00:16Z : No. of bitstreams: 1 243741.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / O objetivo do presente estudo foi avaliar e caracterizar as respostas hipernociceptivas em ratos submetidos à ligação dos nervos espinhais L5 e L6 (LNE L5L6), bem como analisar a participação dos receptores B1 e B2 para as cininas neste modelo de dor neuropática. A LNE L5L6 induziu hipernocicepção ao frio, ao calor e mecânica. A hipernocicepção ao frio e mecânica foram reduzidas pelo tratamento sistêmico com morfina, indometacina e anticonvulsivantes, enquanto que a hipernocicepção ao calor foi totalmente resistente aos anticonvulsivantes. Nos animais neuropáticos, a injeção intraplantar do agonista de receptores B1 (DABK) induziu respostas nociceptivas, as quais são mediadas pela ativação de receptores B1, enquanto que a nocicepção induzida pela injeção intraplantar de agonista de receptores B2 (Bradicinina, BK) foi potencializada nesses animais, e envolveu a ativação de receptores B2 e B1. Este estudo também demonstrou que nos animais neuropáticos, a expressão dos receptores B1 e B2 estava aumentada na pele da pata e nos segmentos L4-L6 dos nervos espinhais, 12 dias após a indução da neuropatia. Neste mesmo período, em gânglios da raiz dorsal (GRD) L4 e L5L6 de animais falso-operados e L4 de animais neuropáticos, os receptores B1, B2 e TRPV1 foram expressos em corpos celulares de fibras C não-peptidérgicas positivas para isolectina B4 (IB4). Nesses mesmos tecidos, os receptores B1 e B2 também foram expressos em corpos celulares de fibras A. Entretanto, nos GRDs lesados L5L6, ocorreu uma redução da imunorreatividade para IB4 e conseqüente redução da expressão de receptores B1, B2 e TRPV1. Contudo, os receptores B1 e B2 foram expressos em corpos celulares de fibras A. Com base nos experimentos envolvendo a mobilização de cálcio intracelular induzida pela BK, podemos sugerir que a potencialização dessa resposta, em neurônios insensíveis a capsaicina, nos GRDs L5L6 de animais neuropáticos é dependente da ativação de receptores B2 e da formação de prostaglandinas, mas não envolve a ativação de receptores B1, TRPV1 e TRPA1. A hipernocicepção térmica (tanto ao frio quanto ao calor) e mecânica foram reduzidas pelo tratamento com antagonistas de receptores B1 (DALBK) e B2 (HOE 140). Conclui-se portanto que receptores B1 e B2 para cininas, presentes na pata, nos nervos espinhais e nos GRDs intactos e lesados parecem ser importantes na mediação das respostas hipernociceptivas induzidas pela LNE L5L6, podendo representar alvos terapêuticos valiosos para o tratamento da dor neuropática.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T03:12:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 239926.pdf: 572289 bytes, checksum: b3bfb6b900e5d686ad603d59ed651cf8 (MD5) / Várias evidências apontam para a adolescência como um período crítico para o início de uma ampla escala de transtornos neuropsiquiátricos, incluindo o transtorno do déficit de atenção e hiperatividade (TDAH) e o abuso de drogas. Os ratos espontaneamente hipertensos (SHR) são geralmente considerados um modelo genético apropriado para o estudo do TDAH, uma vez que esses animais apresentam características comportamentais do transtorno, tais como hiperatividade, impulsividade, prejuízos na atenção sustentada, déficits cognitivos e aumento da busca pela novidade. Apesar da alta prevalência do TDAH em adolescentes, os estudos que utilizam a linhagem SHR foram realizados principalmente em animais adultos. O foco do presente estudo foi investigar a participação do sistema canabinóide, através da administração aguda intraperitoneal (i.p.) do agonista dos receptores canabinóide WIN 55.212-2 (WIN: 0,125; 0,25; 1,25; ou 2,5 mg/kg), na atividade locomotora, em comportamentos relacionados à ansiedade e nas propriedades reforçadoras em ratos machos adolescentes e adultos, das linhagens Wistar e SHR. Para esse propósito foi utilizado o teste do campo aberto (CA), labirinto em cruz elevado (LCE) e da preferência condicionada de lugar (PCL). A administração de WIN nas doses de 0,25 e 1,25 mg/kg (i.p.) promoveu seletivamente estimulação locomotora em SHR adolescentes, mas não em animais adultos SHR ou em ratos Wistar (independentemente da idade). Ainda que as doses testadas de WIN não tenham causado efeitos em comportamentos relacionados à ansiedade quando avaliadas no CA (locomoção central) ou no LCE (tempo nos braços abertos), a maior dose WIN testada (2.5 mg/kg, i.p.) diminuiu significantemente o número de entradas nos braços fechados (um índice indicativo de redução da atividade locomotora) de ratos adolescentes das duas linhagens no LCE. Além disso, os resultados do presente estudo mostram que o tratamento com WIN induz respostas contraditórias nos efeitos reforçadores na PCL. Na linhagem Wistar, a faixa de dose entre 0,25 e 2,5 mg/kg produziu claramente aversão em ratos adultos, enquanto que em ratos adolescentes não produziu quaisquer efeitos. Na linhagem SHR, a administração de WIN induziu efeitos reforçadores em ambas as idades, em baixa dose (0,25 mg/kg, i.p.) para ratos adultos e em alta dose (2,5 mg/kg, i.p.) para ratos adolescentes. Os efeitos do WIN na locomoção e nas propriedades reforçadoras foram bloqueados pelo prétratamento com o AM 251, um antagonista seletivo dos receptores canabinóides do subtipo CB1. Os resultados do presente estudo indicam efeitos de um agonista canabinóide dependentes da linhagem e da idade, na atividade locomotora e nas propriedades reforçadoras, estendendo a noção de que a adolescência e os comportamentos observados em ratos SHR representam fatores de risco para a sensibilidade aumentada aos efeitos de drogas.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T05:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 238176.pdf: 1523972 bytes, checksum: 1339a1f91b3dcdae6ffe52dfe88cf2ae (MD5) / Além de funcionarem como enzimas de degradação, certas proteases atuam como moléculas de sinalização que regulam algumas atividades celulares por clivarem e ativarem membros da família de receptores acoplados à proteína G, os receptores ativados por proteases (PARs). A tripsina é uma protease capaz de gerar respostas nociceptivas e inflamatórias por ativar principalmente o receptor PAR-2. O objetivo do presente estudo foi analisar os mecanismos e mediadores envolvidos nas respostas nociceptivas e inflamatórias induzidas pela tripsina na pata de camundongos. A injeção intraplantar de tripsina produziu aumento tempo- e dose-dependente do volume da pata dos camundongos associado com nocicepção espontânea. A resposta edematogênica foi inibida pelo antagonista seletivo do receptor B2 para as cininas FR173657 (48 ± 5 %), pelo inibidor não seletivo das enzimas COX1/2 indometacina (33 ± 3 %), pelo bloqueador da enzima COX-2 celecoxib (30 ± 5 %), pelo inibidor de síntese protéica dexametasona (30 ± 6 %), pelo antagonista do receptor de CGRP CGRP8-37 (39 ± 6 %), pelo antagonista do TRPV1 SB366791 (49 ± 4 %) ou pela deleção do receptor p55 do TNFa (42 ± 6 %). Ademais, o antagonista do receptor B1 para cininas SSR240612, o inibidor da enzima COX-1 SC560, o depletor de mastócitos composto 48-80, o estabilizador de mastócitos cromoglicato de sódio, o antagonista do receptor H1 de histamina pirilamina ou os antagonistas seletivos para os receptores NK1 FK888, NK2 SR48968, NK3 SR142801, foram todos capazes de reduzir o edema induzido pela tripsina. Ao contrário, o inibidor não seletivo da enzima óxido nítrico sintase (NOS) L-NOARG ou a deleção gênica enzima NOS induzida não foram capazes de reduzir o edema de pata causado pela tripsina. Interessantemente, o edema de pata foi significativamente reduzido em animais com deleção gênica para o receptor PAR-2, apenas na primeira hora, mas não nos pontos tardios após a injeção de tripsina. Já a nocicepção induzida pela tripsina foi significativamente reduzida pelo FR173657 (57 ± 8 %), composto 48/80 (56 ± 6 %), cromoglicato de sódio (47 ± 7 %), SB366791 (48 ± 8 %), FK888 (41 ± 8 %), SR48968 (60 ± 3 %), SR142801 (46 ± 9 %), CGRP8-37 (35 ± 5 %), em animais com deleção gênica para o receptor p55 do TNFa (38 ± 6 %) ou em animais com deleção gênica para o receptor PAR-2 (85 ± 3 %). Entretanto, as respostas nociceptivas induzidas pela tripsina não foram alteradas pelo tratamento com o SSR240612, indometacina, dexametasona, pirilamina ou L-NOARG. Além disso, a tripsina produziu aumento na atividade da enzima mieloperoxidase, o qual foi ausente em animais com deleção gênica para o PAR-2. A tripsina também induziu aumento tempo-dependente dos níveis das citocinas TNFa e IL-1ß na pata dos camundongos. O presente estudo mostra que a injeção intraplantar de tripsina na pata de camundongos produz respostas nociceptivas e inflamatórias marcantes que são mediadas pela geração de um conjunto de mediadores inflamatórios e, em grande parte, mas não exclusivamente, pela ativação do receptor PAR-2.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T11:36:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 239808.pdf: 474707 bytes, checksum: 761bb2234f6b2c2bdf2190586ac0376d (MD5) / Este estudo investigou a influência do plumierídeo (PL), um iridóide isolado da espécie vegetal Allamanda cathartica, em inibir as respostas inflamatória e nociceptiva em diferentes modelos experimentais. Uma única administração oral do PL (0,0001-1 µg/kg) inibiu o edema de pata induzido por carragenina em e em ratos, com efeito prolongado. Quando administrado por via s.c. (0,1-100 µg/kg), o PL foi efetivo em inibir o edema induzido por carragenina, dextrana, zimosano e formalina, em camundongos. Estes efeitos foram similares aos produzidos pela dexametasona (0,5 mg/kg; s.c.). O PL demonstrou-se ainda eficaz em inibir o edema de orelha induzido por óleo de cróton, ácido araquidônico e PGE2 em camundongos, e por carragenina, bradicinina e anafilotoxina C5a em ratos. O iridóide PL também inibiu o aumento da atividade da MPO, bem como a migração de neutrófilos induzidapor carragenina na cavidade pleural. Contra a resposta inflamatória persistente induzida pela injeção i.pl. de CFA, o PL foi eficaz em inibir o edema, nos dois esquemas de tratamento realizados (pré e pós-CFA), demonstrando um efeito duradouro. Surpreendentemente, apesar de não interferir com a dor referida induzida por formalina, o PL inibiu a hipernocicepção neuropática orofacial térmica observada após a constrição do nervo infraorbital, bem como a hipernocicepção inflamatória mecânica induzidana pata por CFA. O conjunto de resultados sugere que estas ações do PL possam decorrer de sua interferência com mecanismos de sinalização celular mediadas por bradicinina, PGE2 e/ou C5a, bem como de potente efeito inibitório sobre mecanismos de migração de leucócitos. Entretanto, os resultados conduzidos até o momento são ainda insuficientes para esclarecer os verdadeiros alvos de ação deste composto. Estudos adicionais que venham determinar seus mecanismos de ação podem resultar no desenvolvimento de uma alternativa terapêutica nova e importante para o tratamento da inflamação e dor.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T13:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 242398.pdf: 2379971 bytes, checksum: f1505ed5398307e26b071886acf40733 (MD5)

Nos últimos anos, o ambiente marinho tem sido pesquisado para uma variedade de compostos com diferentes atividades biológicas. Entre todos os organismos marinhos, as esponjas representam uma das fontes mais promissoras de novas drogas contra o câncer. Embora o litoral brasileiro seja o segundo mais extenso depois da Austrália, existem poucos estudos com esponjas marinhas coletadas no Brasil objetivando a descoberta de novos fármacos. Nesse trabalho, nós investigamos os efeitos de diferentes extratos da esponja marinha Polymastia janeirensis na viabilidade de uma linhagem de glioma humano (U138MG). Além disso, avaliamos a seletividade do efeito, caracterizamos os mecanismos envolvidos no processo de morte celular e isolamos as frações ativas responsáveis pelas atividades encontradas. De uma maneira geral, um efeito antiproliferativo foi observado quando as células forma expostas aos extratos (aquoso e orgânico) da esponja. Entretanto, as doses mais altas (50 e 100 μg/ml) foram extremamente citotóxicas, inibindo mais de 80% a proliferação e a viabilidade celular. Além disso, uma morte celular por necrose foi observada com essas doses, enquanto uma morte celular por apoptose foi observada com a dose mais baixa (10 μg/ml). Nós também demonstramos que a rota apoptótica ativada em resposta aos extratos era a via intrínseca, e que a produção de radicais livres estava, pelo menos em parte, relacionada ao efeito bifásico (apoptose ou necrose) encontrado. Os resultados aqui apresentados demonstram a existência de uma seletividade do efeito citotóxico, uma vez que os extratos não induziram morte em culturas de astrócitos na dose em que foi observada morte por apoptose nos gliomas. Ademais, uma potente atividade apoptótica foi observada com o composto ativo isolado da esponja marinha alvo desse estudo. Os nossos resultados sugerem que a esponja marinha alvo desse estudo pode ser considerada uma boa fonte para o desenvolvimento de novas drogas contra o câncer. / Over the last years, the marine environment has been screened for a variety of compounds with different biological activities. Among all marine organisms, sponges represent one of the most promising source of new drug leads for cancer. Although Brazil has the second most extensive coastline after Australia, there are just few reports in which the authors have screened Brazilian sponge extracts for biological activities. In this work, we examine the anti-proliferative effects of crude extracts of the marine sponge Polymastia janeirensis in the U138MG human glioma cell line. Moreover, we investigate the effects on selective cytotoxicity in the glioma cells in comparison with a normal, untransformed cell culture, as well as examine the apoptotic pathway activated in response to treatments with extracts of P. janeirensis. Yet, we performed a bioassayguided fractionation to found the active fractions in the extracts. Exposure of glioma cells to treatments resulted in cell number decrease with both aqueous and organic extracts. Moreover, sponge extracts reduced glioma cell viability. However, higher doses (50 e 100 μg/ml) induced a stronger cytotoxic effect when compared to the lower dose tested (10 μg/ml), inhibiting more than 80% of cellular growth and viability. Our results showed that sponge extracts caused necrosis in the glioma cell line at higher doses, while a high percentage of apoptotic glioma cells were observed at 10 μg/ml. We also demonstrated that marine sponge extracts induces oxidative cell death through a receptor-independent pathway under our assays condictions, and ROS productions may be related to the biphasic effect (apoptosis or necrosis) observed. Furthermore, our results suggested a selective cytotoxic effect on glioma cell line compared to a normal cell culture, since the effect on viability found in glioma cells was not observed in astrocyte cultures with the lower dose (10 μg/ml). Yet, a strong apoptotic activity was observed with the active fraction isolated from P. janeirensis. Our results suggest that this marine sponge may be considered a good source for new antiglioma metabolites.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:53:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 222411.pdf: 1478185 bytes, checksum: e7d2bcfb6be10340d763dec9701635e4 (MD5) / Estudos anteriores demonstraram que a naltrexona (NTX), um antagonista opióide não-seletivo, reduz o consumo de etanol e o número de recaídas através do bloqueio da liberação de dopamina no núcleo accumbens. Além disso, foi demonstrado que a NTX impede o desenvolvimento de tolerância aguda em ratos. O objetivo deste trabalho foi verificar se a injeção sistêmica ou intra-accumbens de NTX ou de antagonistas seletivos para os receptores µ-, d- e k-opióides, respectivamente naloxonazina (NLZ), naltrindol (NTD) e nor-binaltorfimina (BNI), bloqueiam a tolerância rápida ao etanol em ratos. Grupos de Ratos Wistar receberam injeção sistêmica de NTX (0,1; 0,3; 0,6; 1 e 3 mg/kg i.p.) ou veículo. Em seguida cada grupo foi dividido em dois grupos tratados com etanol (2,7 g/kg, 20% p/v, i.p.) ou salina respectivamente. O prejuízo motor (ângulo de queda) foi avaliado no plano inclinado aos 30, 45, 60 e 75 min após o tratamento. Depois de 24 h (Dia 2) todos os animais receberam etanol (2,7 g/kg i.p.) e foram novamente avaliados no plano inclinado. Para verificar a participação dos receptores opióides do núcleo accumbens ratos Wistar foram implantados com cânulas direcionadas às porções core ou shell do núcleo accumbens. Sete dias após a cirurgia diferentes grupos receberam injeção intra-accumbens de NTX (5-20 µg/0,3 µl), NLZ (2-4 µg/0,3 µl), NTD (2-4 µg/0,5 µl), BNI (2,5-5 µg/0,3 µl) ou veículo (0,3 µl). Em seguida cada grupo foi dividido em dois grupos tratados com etanol (2,7 g/kg i.p.) ou salina respectivamente. O prejuízo motor foi avaliado como descrito anteriormente. No dia 2 todos receberam apenas etanol e foram novamente testados. No Dia 1 apenas o etanol provocou prejuízo motor significativo (ANOVA de duas vias, p < 0,05). No Dia 2 a injeção repetida de etanol provocou reduzido prejuízo motor nos grupos tratados com etanol+veículo, sugerindo tolerância. A injeção sistêmica de 0,3 e 0,6 mg/kg de NTX impediu o desenvolvimento de tolerância, efeito que foi revertido pela co-administração de morfina. A injeção intra-accumbens de NTX na porção core (dose de 20 µg) e na porção shell (doses de 10 e 20 µg) bloqueou a tolerância ao etanol. A injeção de 4 µg de NLZ nas porções core ou shell bloqueou a tolerância ao etanol. A injeção de 5 µg de BNI na porção core provocou redução do prejuízo motor nos animais tratados com BNI+salina. As injeções de BNI na porção shell e de NTD nas porções core e shell não afetaram a tolerância ao álcool. Os resultados sugerem que o sistema opióide presente no núcleo accumbens influencia positivamente o desenvolvimento de tolerância rápida à incoordenação motora provocada por etanol. Além disso, sugerem que o receptor µ- esteja principalmente envolvido no bloqueio da tolerância pela naltrexona. O efeito diferenciado observado pela injeção da BNI pode dever-se à localização pré-sináptica do receptor k-opióide no núcleo accumbens.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:57:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O [receptor B1] para as [cininas] está normalmente ausente em condições fisiológicas, sendo expresso em processos inflamatórios ou infecciosos. Este estudo avaliou alguns dos mecanismos envolvidos na indução do receptor B1 após o tratamento com o [lipopolissacarídeo] de E. Coli (LPS) na pata de rato. A injeção do agonista seletivo dos receptores B1, a [des-Arg9-bradicinina] (DABK), produziu [edema] de baixa intensidade na pata de ratos normais, enquanto o pré-tratamento local com LPS causou aumento tempo-dependente do edema à DABK, da ativação do [fator nuclear-kB] (NF-kB) e da expressão do RNAm para o receptor B1. Os inibidores de síntese protéica, cicloheximida ou dexametasona, ou da ativação do NF-kB, PDTC ou TLCK, reduziram significativamente a resposta edematogênica à DABK nos animais tratados com LPS. O edema à DABK também foi inibido de forma significativa pelos anticorpos anti-IL-1b ou anti-TNF-a, pela IL-10 ou pelo antagonista do receptor de IL-1, IRA. A indução dos receptores B1 pelo LPS foi acompanhada por um aumento marcante dos níveis de IL-1b e TNF-a, da expressão da sintase do óxido nítrico induzida (iNOS) e da migração de [neutrófilos]. Os inibidores da migração celular, fucoidina ou anticorpo anti-CD18, o antagonista de PAF WEB 2086 ou o anticorpo anti-PMN também reduziram significativamente o edema mediado pelos receptores B1. Por fim, os inibidores de NOS, L-NOARG, aminoguanidina e 1400W também inibiram marcadamente o edema à DABK. Estes dados sugerem que a produção de [citocinas] e de óxido nítrico, a ativação do NF-kB e o influxo de neutrófilos são eventos importantes para a indução dos receptores B1 após o tratamento com LPS.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T07:00:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 294610.pdf: 1292455 bytes, checksum: 80b6d21e26e8373d5fa70c7f4fb56edf (MD5) / Diferenças relacionadas às características fisico-químicas do fármaco, componentes da formulação e processos de fabricação podem gerar problemas na biodisponibilidade de medicamentos. Partindo deste princípio, e da necessidade de realização de testes mais específicos prévios a execução de estudos de biodisponibilidade relativa / bioequivalência farmacêutica em humanos foi desenvolvida uma ferramenta em modelo animal para predizer o comportamento farmacocinético de formulações desenvolvidas previamente a realização dos testes em humanos. Foram avaliados os perfis farmacocinéticos de formulações da associação sulfametoxazol + trimetoprima suspensão e comprimido administrados a ratos Wistar. Os resultados foram comparados com dados previamente obtidos em estudos de biodisponibilidade relativa/bioequivalência com indivíduos sadios. Observou-se que, no caso da suspensão, os resultados se apresentaram mais consistentes e foi possível correlacionar o perfil dos fármacos em ratos e humanos. Nos comprimidos também houve relação entre os valores, entretanto, limitações do modelo animal não permitiram uma relação completa com os resultados encontrados em humanos. Os resultados encontrados no estudo permitem avaliações do comportamento farmacocinético individual de cada formulação testada, contribuindo para que problemas sejam identificados e corrigidos anteriormente à submissão dos medicamentos à testes oficiais de biodisponibilidade relativa / bioequivalência em humanos.