Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-03-15T04:01:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337679.pdf: 2522322 bytes, checksum: fcab0a22f1746aa49c82dbedbaa52a8a (MD5) Previous issue date: 2015 / A espécie vegetal Lafoensia pacari A. St.-Hil., família Lythraceae, é uma planta medicinal muito utilizada nos estados de Goiás, Mato Grosso e Mato Grosso do Sul, sendo popularmente conhecida como pacari ou mangaba-brava. Dentre os vários propósitos medicinais desta planta, encontra-se o uso popular ?contra o desânimo?. Portanto, o nosso objetivo foi realizar o estudo fitoquímico do extrato bruto e frações obtidas biomonitorados pela atividade tipo antidepressiva. A análise fitoquímica apontou a presença de saponinas, taninos, esteroides, triterpenos e traços de flavonoides no extrato etanólico das cascas do caule de L. pacari (EEP) e na fração clorofórmica (FClor), a que melhor mimetizou o efeito do extrato bruto, são encontrados principalmente esteroides e triterpenos. Análises de RMN 13C, HMQC e CLAE-DAD da fração clorofórmica, permitiram identificar o esteroide ß-sitosterol e o triterpeno lupeol entre os principais constituintes desta fração. O pré-tratamento com EEP (100, 300 e 1000 mg/kg, v.o.) no teste do nado forçado (NF) sugere um efeito do tipo antidepressivo sem alteração na deambulação no campo aberto (CA). Após o fracionamento, a FClor foi a que melhor reteve a atividade biológica do extrato, sendo a dose de 70 mg/kg a mais efetiva no NF e no teste de suspensão pela cauda. Tanto o pré-tratamento com PCPA (100 mg/kg i.p., durante 4 dias ? inibidor da síntese de serotonina), quanto AMPT (100 mg/kg i.p., 4 h antes ? inibidor da síntese de catecolaminas) bloqueou o efeito da FClor, sugerindo o envolvimento do sistema serotoninérgico e catecolaminérgico na atividade observada. Dentre os compostos isolados, apenas o lupeol (40 mg/kg, v.o.) reduziu o tempo de imobilidade no NF sem alterar a deambulação dos animais no CA e as drogas PCPA e AMPT também bloquearam a atividade deste composto. Ao avaliar a atividade das isoformas MAO-A e MAO-B, na presença de FClor e de lupeol, não foi detectada qualquer inibição enzimática. Quanto à capacidade de aumentar o nível hipocampal do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), apenas a FClor se mostrou ativa no protocolo de tratamento estudado. Neste estudo não foi observado aumento na expressão (Western blotting) das proteínas CREB e pCREB, após os tratamentos com a FClor (70 mg/kg), o lupeol (40 mg/kg), o ß-sitosterol (40 mg/kg) e a imipramina (30 mg/kg). Assim, concluímos que o EEP, a fração rica em triterpenos e o triterpeno lupeol apresentaram efeito do tipo antidepressivo envolvendo as monoaminas endógenas, sem inibir diretamente a enzima MAO. Além disso, a FClor aumentou o nível hipocampal de BDNF, sem a participação da via de sinalização mediadapor CREB. Portanto, a L. pacari é uma espécie vegetal promissora na avaliação de fitoconstituintes com atividade antidepressiva.<br> / Abstract : The species Lafoensia pacari A. St.-Hil., Lythraceae Family, is a medicinal plant widely used in the states of Goiás, Mato Grosso and Mato Grosso do Sul, popularly known as ?pacari? or ?mangaba-brava?. Among the ethnophamalogycal uses was the use ?to raise the spirits?. Thus, in the present, our aim was to perform the phytochemical study of the crude extract and fractions bio-guided by the antidepressant-like activity. Phytochemical analysis showed the presence of saponins, tannins, steroids, triterpenes and flavonoids traces on the ethanol extract of of L. pacari stem bark (EEP) and in the chloroform fraction (FClor), the one that better mimicked the crude extract effects, are mostly found steroids and triterpenes. 13C NMR, HMQC and HPLC-DAD analysis of chloroform fraction have identified the steroid ß-sitosterol and the triterpene lupeol among the main constituents of this fraction. Pretreatment with EEP (100, 300 and 1000 mg/kg, p.o.) before the forced swimming test (NF) suggests an antidepressant-like effect with no change in ambulation in the open field (CA). After fractionation, the FClor was the one that best retained the biological activity of the crude extract and the dose of 70 mg/kg was the most effective in the NF and the tail suspension test. Pretreatment with PCPA (100 mg/kg i.p. for 4 days - a serotonin synthesis inhibitor) as well as AMPT (100 mg/kg i.p. 4 hours prior - a catecholamine synthesis inhibitor) blocked the FClor effect, suggesting the involvement of catecholaminergic and serotonergic system in the observed activity. Among the compounds isolated, only lupeol (40 mg/kg, p.o.) reduced the immobility time in the NF without changing the animal?s activity in CA. PCPA and AMPT also blocked the lupeol activity. In MAO-A and MAO-B isoforms activity assay in the presence of FClor and lupeol, no enzyme inhibition was detected. Regarding the ability to increase the hippocampal level of brain-derived neurotrophic factor (BDNF), only FClor was active in the studied treatment protocol. No increases were seen in CREB and pCREB proteins expression (Western blotting) after treatment with FClor (70 mg/kg), lupeol (40 mg/kg), ß-sitosterol (40 mg/kg) and imipramine (30 mg/kg). We have concluded that the EEP, the triterpenes fraction and lupeol showed an antidepressant-like effect involving endogenous monoamines, without directly inhibiting the MAO enzyme activity. Furthermore, FClor increased hippocampal BDNF levels, without involving of the signaling CREB-mediated pathway. Therefore, L. pacari is a promising plant in the study of phytochemicals with antidepressant activity.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-03-15T04:05:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337675.pdf: 1273481 bytes, checksum: e7d6c6e404a92d9706940b7057478e65 (MD5) Previous issue date: 2015 / A espécie Plinia peruviana é uma árvore conhecida popularmente como ?jabuticaba de cabinho?, cujos frutos são utilizados no preparo de geleias, licores, destilados e vinhos. Este estudo teve como objetivo investigar o efeito de extratos brutos obtidos das cascas do fruto da Plinia peruviana sobre o tônus vascular em aorta de rato, e identificar os mecanismos de ação envolvidos neste efeito in vitro. Neste trabalho revelou-se que o efeito vasodilatador do extrato preparado a partir das cascas do fruto da Plinia peruviana, obtidos pelo método de extração assistida por micro-ondas e rotaevaporação (EBM-1) é totalmente dependente do endotélio em anéis de aorta de rato previamente contraídos por fenilefrina. Este efeito induzido pelo EBM-1 foi abolido em preparações incubadas com os inibidores das enzimas óxido nítrico sintase L-NAME, ou da guanilato ciclase ODQ, bem como sequestrador de NO carboxi-PTIO. O inibidor não seletivo de canais de K+ ativados pelo Ca+2 e de canais de K+ ativados por voltagem tetraetilamonio TEA, assim como o sequestrador de ânions superóxido tempol, reduziram o Emax vasorrelaxante do EBM-1 em aproximadamente 35 e 26%, respectivamente. O efeito vasodilatador do EBM-1 em anéis de aorta também foi significativamente reduzido na presença de wortmanin (um inibidor da fosfatilinositol 3-cinase (PI3K), ou do inibidor da proteína cinase B (Akt 1/2). Deste modo os resultados obtidos neste trabalho revelam que as cascas do fruto da plinia peruviana apresentam componentes capazes de causar relaxamento vascular in vitro. Este efeito é decorrente da ativação das vias do óxido nítrico/guanilato ciclase e, pelo menos em parte, da PI3K/Akt. Também parece envolver uma regulação da produção ou biodisponibilidade de espécies reativas de oxigênio, bem como da abertura de canais de K+ ativados por voltagem. Estudos adicionais devem ser realizados para explorar a importância desses achados na regulação do tônus vascular em modelos in vivo, bem como o potencial de preparações obtidas a partir de extratos das cascas do fruto da jabuticaba em doenças envolvendo o sistema cardiovascular, como a hipertensão arterial sistêmica, angina e aterosclerose.<br> / Abstract : Plinia peruviana is a tree popularly known as ?jabuticaba de cabinho?. Its fruits are commercialized and used to prepare jams, liqueurs and wines. Using rat aortic rings maintained in organ baths for experimentation, this study discloses the endothelium-dependent vasodilatory effect induced by a crude hydroalcoholic extract prepared using the fruit peel?s of Plinia peruviana, which was obtained by microwave-assisted extraction method followed by rotavap (EBM-1). The ability of EBM-1 to induce vasodilation was abolished by L-NAME (a nitric oxide synthase inhibitor), ODQ (a guanylyl cyclase inhibitor), as well as by the NO scavenger carboxy-PTIO. The non-selective blocker of the Ca+2-activated and voltage dependent K+ channels, tetraethylammonium (TEA), and the superoxide anion scavenger tempol, reduced the maximum relaxation elicited by EBM-1 by around 35% and 25%, respectively. In addition, wortmannin (a phosphoinositide 3-kinase inhibitor) reduced EBM-1-induced relaxation in aortic rings by 75%. The incubation of preparations with the protein kinase B inhibitor (Akt1/2) also impaired the relaxation generated by EBM-1. On the other hand, the mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitor, rapamycin, as well dorsomorphin (an inhibitor of adenosine monophosphate activated protein kinase; AMPK) did not alter the vascular relaxation induced by EBM-1. Taken together, our results show that the fruits peel of Plinia peruviana presents one or more compounds able to induced in vitro vascular relaxation. This effect depends on activation of the nitric oxide/guanylate cyclase pathway in endothelial cells, and seems to involve the regulation of production or bioavailability of reactive oxygen species, such as superoxide, as well the opening of Ca+2-activated and voltage dependent K+ channels. In addition, our data also reveals that activation of PI3K plays a major role in this effect, at least in part through protein kinase B (Akt) enzymes. Further studies, including in vivo approaches, must be carried out for a better comprehension of the effects of preparations obtained from ?jabuticaba? peel on the cardiovascular system, in both physiological and pathological conditions.

Dissertação (mestrado profissional) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2016-04-19T04:07:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337873.pdf: 1269859 bytes, checksum: b4d4965a3f37787547ff4d2960c27c4a (MD5) Previous issue date: 2015 / Os eventos adversos no processo de assistência à saúde vêm sendo um dos maiores problemas mundiais no âmbito hospitalar. Dentre esses eventos podemos destacar os relacionados aos erros no atendimento de prescrição, uso e administração de medicamentos. O erro dos profissionais na administração de medicamento tem causado sérias consequências aos pacientes, muitas vezes debilitantes. O foco do nosso estudo foi a investigação dos erros mais comuns envolvendo medicamentos em um hospital privado da cidade de Florianópolis, e como a utilização de um sistema eletrônico de atendimento de prescrições (SEAP) pode agir como barreira contra eventos adversos. Para isso verificamos a quantidade de registros de eventos adversos em duas unidades de terapia intensiva (UTI) diferentes identificadas como UTIA e UTIB. A análise foi realizada por três meses em dois períodos distintos. Na UTIB, mas não na UTIA, o atendimento das prescrições se deu a partir do SEAP durante o segundo período de valiação. Além disso, analisamos a percepção dos colaboradores da UTIB em relação ao SEAP, e se esse funcionava como barreira contra eventos adversos, alem do seu conhecimento em utilizar métodos que garantam a segurança do paciente, posteriormente comparando-os aos do núcleo de segurança do paciente (NSP), grupo referencia quando o tema é segurança do paciente na instituição de pesquisa. Os resultados obtidos nos mostram que a utilização SEAP eliminou os eventos adversos relacionados a medicação no setor UTIB. As entrevistas com os trabalhadores da área da saúde revelou que o interesse dos profissionais em utilizarem o SEAP é a maior dificuldade para sua implementação e que a educação continuada focando das propriedade farmacológicas das medicações pode funcionar como mais uma estratégia adotada para garantir a segurança do paciente.<br> / Abstract : Adverse events involving medications have been described around the world as major problem in the healthcare system. They include errors in prescription, name, dose, or route of administration. The consequences of such mistakes may include physical and/or psychological harm for patients. Our study focused on an investigation about the most common errors involving medications in a private hospital of the city of Florianópolis, and how the usage of an electronic care prescription system (ECPS) could act as a barrier against adverse events. For this, the number of adverse events was measured in two different intensive care units (ICU), identified as ICUA and ICUB. The analyses were performed in two separated periods of three months each. In ICUB, but not in ICUA, all steps involving drug usage (from prescription to administration) were conducted under control of the ECPS during the second period of evaluation. In addition, nurses from ICUB were inquired about their perception of the ECPS as a barrier against adverse events, and their knowledge regarding methods to improve patient safety. The results obtained showed that the ECPS was able to completely avoid adverse events involving medication in the ICUB. The interviews with healthcare professionals revealed that the commitment with the adoption of ECPS is a major point to warranty the efficacy of the system as a barrier against adverse events, and that continuous education regarding the pharmacological properties of drugs administered, including adverse effects and the risks associated with medications may be a functional strategy to achieve healthcare improvements in patient safety.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:39:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339419.pdf: 1426935 bytes, checksum: 0d8c0c0486e49626e60185221fcff86b (MD5) Previous issue date: 2015 / Leflunomida e metotrexato são drogas modificadoras do curso da doença classicamente utilizadas por via sistêmica no tratamento da artrite reumatoide e o sucesso clínico está relacionado com a inibição da proliferação de células imunes e de citocinas na cavidade articular. Baseado nestes potenciais efeitos inibitórios, nossa principal hipótese é que a administração direta dessas drogas na medula é capaz de reduzir a infiltração de leucócitos, edema e incapacitação articular em um modelo de artrite induzida por LPS. Ratos Wistar fêmeas, pesando entre 200 e 220 g, receberam as drogas por via intratecal, 2 horas antes da administração de LPS (30 ng/ 50 µl; i.a.) nas articulações de joelho previamente sensibilizadas com carragenina (300 µg/ 20 µl; i.a.). A incapacitação articular foi avaliada pelo tempo de elevação da pata (TEP; s) durante o deambular de 1 min; o edema pelo aumento do diâmetro articular (DA; cm) e a migração celular pela contagem total de leucócitos (CT; cel/mm3) do fluido sinovial coletado ao final de 5 horas de observação dos parâmetros. As administrações por via intratecal de teriflunomida (metabólito ativo da leflunomida) (0,1 e 20 µg/ 10 µl) e metotrexato (25 µg/ 10 µl) foram capazes de reduzir a migração celular para o fluido sinovial, a incapacitação e o edema articular promovidos pelo LPS, ao contrário de quando administrados por via intraperitoneal, sugerindo que o sítio de interação para os efeitos antiartríticos das drogas foi restrito ao ambiente medular. A coadministração com uridina (10 µg) reverteu apenas os efeitos inibitórios produzidos pela menor dose de teriflunomida, sugerindo que apenas em maiores concentrações o mecanismo de ação da droga independe da inibição da síntese de novo de nucleotídeos. A coadministração por via intratecal de teriflunomida (0,1 µg) e bumetanida (60 µg), um bloqueador do reflexo da raiz dorsal, não potencializou o efeito inibitório da teriflunomida na redução da incapacitação, edema e migração celular, sugerindo que a inibição do reflexo da raiz dorsal e consequentemente da inflamação neurogênica estejam envolvidos na ação medular da teriflunomida. A coadministração de teriflunomida (0,1 µg) e metotrexato (25 µg) por via intratecal promoveu um efeito somatório na inibição da inflamação articular, provavelmente pela adição do mecanismo imunomodulador do metotrexato na inibição da síntese de citocinas pelas células gliais. O presente estudo sugere que o tratamento por via intratecal com teriflunomida e metotrexato modula a inflamação periférica provavelmente por reduzir o aumento da quantidade de citocinas inflamatórias na medula, através da inibição da atividade glial que inibea sensibilização dos terminais neuronais medulares envolvidos na sinalização nociceptiva e na indução da inflamação neurogênica. Esta estratégia pode representar uma nova abordagem terapêutica para o tratamento da artrite reumatoide com menos efeitos colaterais sistêmicos.<br> / Abstract : Leflunomide and methotrexate are disease-modifying antirheumatic drugs classically used systemically in the treatment of rheumatoid arthritis and clinical success is related to inhibition of proliferation of immune cells and cytokines in the joint cavity. Based on these potential inhibitory effects, our central hypothesis is that the direct administration of these drugs on the spinal cord is able to reduce articular incapacitation, edema and synovial leukocyte infiltratio induced in a model of LPS-induced arthritis. Female Wistar rats, weighing between 200 and 220 g were given the drugs intrathecally 2 hours before administration of LPS (30 ng/ 50 µl; i.a.) in the knee joints previously sensitized with carrageenan (300 µg/ 20 µl; i.a.). Inflammatory-induced incapacitation was measured hourly by the paw elevation time (TEP; s) in 1-min period of observation, and edema was evaluated by the articular diameter increase (DA; cm) taken just after each incapacitation measurement. After the 5-h period of observation parameters the synovial fluid was collected from articular capsule for total leukocyte count (CT; cells/ mm3). Intrathecal administration of teriflunomide ( active metabolite of teriflunomide) (0.1 and 20 µg/ 10 µl) and methotrexate (25 g/ 10 µl) were able to reduce cell migration to the synovial fluid, incapacitation and joint edema induced by LPS, unlike when given by intraperitoneal route, suggesting that the interaction site for antiarthritic effects of drugs was restricted to spinal cord microenvironment. Co-administration with uridine (10 µg) just reverses the inhibitory effects produced by the lower dose of intrathecal teriflunomide, suggesting that only in the higher concentrations of the drug mechanism of action independent from inhibition of de novo synthesis of nucleotides. Co-administration of intrathecal teriflunomide (0.1 µg) and bumetanide (60 µg), a blocker of the dorsal root reflex did not potentiate the inhibitory effect of teriflunomide on the reduction of incapacitation, edema and cell migration, suggesting that inhibition of dorsal root reflex and neurogenic inflammation are involved in spinal action of teriflunomide. Co-administration of teriflunomide (0,1 µg) and methotrexate (25 µg) intrathecally caused a summation effect on inhibition of joint inflammation, probably due to the addition of methotrexate immunomodulatory mechanism of inhibition on cytokine synthesis released by glial cells. Thus, this study proposes that the intrathecal methotrexate and leflunomide modulates the peripheral inflammation by inhibiting on increase of cytokines in spinal cord that sensitizes neuronal terminals involved in nociceptive signaling andinduction of neurogenic inflammation. This strategy may represent a novel therapeutic approach for the treatment of rheumatoid arthritis with fewer systemic side effects.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-26T10:13:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 301421.pdf: 1081641 bytes, checksum: c4185c784477f7ab0b14ae0295686558 (MD5) / Sepse é uma infecção local, acompanhada de uma resposta inflamatória sistêmica e vinculada à elevada incidência e taxa de mortalidade. Apesar desta patologia ser alvo de inúmeras pesquisas, poucos estudos avaliam o papel do leito vascular renal nessa condição. Neste trabalho, avaliamos as alterações vasculares renais e o envolvimento da via Rho-A/Rho-quinase em ratos endotoxêmicos. Ratos machos Wistar, com peso de 230-280 g provenientes do Biotério Central da Universidade Federal de Santa Catarina, receberam, via intraperitoneal, PBS (1 ml/kg) ou LPS (10 mg/kg), 6 ou 24 horas antes dos protocolos experimentais. Os animais tratados com LPS apresentaram PAM reduzida, aumento da FC, hiporresponsividade à Phe, além do aumento na concentração plasmática de NO, uréia e creatinina, como descrito por vários autores, demonstrando reprodutibilidade do modelo. Na análise da reatividade vascular renal, houve hiporreatividade à Phe nos rins dos animais do grupo LPS 24 horas. No entanto, a administração de AVP no leito renal dos animais tratados com LPS revelou uma hiper-reatividade a este agente, além de uma maior sensibilidade à inibição da enzima Rho-quinase (ROCK) no grupo LPS 6 horas. A análise, in vivo, da pressão arterial e fluxo microvascular renal também revelou hiper-reatividade à AVP nos animais endotoxêmicos. Além disto, a administração de 0,1 mg/kg de Y-27632 (i.v.), um inibidor da enzima ROCK, diminuiu o efeito da AVP na PAM dos animais do grupo controle. O mesmo não foi observado nos grupos endotoxêmicos. A administração de Y-27632 não influenciou a redução do fluxo sanguíneo renal em resposta às menores doses de AVP, mas nos grupos LPS 6 e 24 h, reduziu significativamente a diminuição causada pela maior dose de AVP utilizada (30 nmol/kg). A análise de parâmetros cardíacos revelou que não há correlação entre as alterações cardíacas induzidas pelo LPS e a hiper-reatividade à vasopressina. As expressões de proteínas não se mostraram alteradas nos grupos que receberam LPS quando comparadas ao PBS. Por fim, constatamos que houve diminuição na produção inicial de urina que se reestabelece 24 horas após o choque endotoxêmico, o que pode estar relacionando a variações nos níveis de AVP plasmático durante a endotoxemia. Podemos concluir que o leito renal não apresenta hiporreatividade à AVP durante a endotoxemia, o que pode contribuir para a eficácia desse mediador em elevar a pressão arterial no choque séptico. Alterações na funcionalidade da via Rho-A/Rho-quinase parecem contribuir de forma diferenciada para os efeitos vasculares da AVP durante a sepse. Novos estudos precisam ser desenvolvidos a fim de esclarecer o potencial benéfico ou deletério dessa inter-relação. / Sepsis is a local infection, followed by systemic inflammatory response and linked to high incidence and mortality rate. Although very studied, few researches have investigated the role of renal vascular bed in this condition. In this work, we evaluated the changes in the functionality of the renal vascular bed, and the involvement of the Rho-A/Rho-kinase pathway, in endotoxemic rats. Male Wistar rats (230-280 g) received by intraperitoneal route either saline (1 ml/kg) or LPS (10 mg/kg), 6 or 24 hours before the experimental protocols. The endotoxemic animals showed reduced mean arterial pressure (MAP), increased heart rate, hyporesponsiveness to phenylephrine and high levels of plasmatic nitrate+nitrate, urea and creatinine levels, as described by several studies. In the analysis of renal vascular function, kidneys from LPS 24 group were hyporeactivity to Phe. However, the renal bed of the animals treated with LPS showed a hyper-reactivity to vasopressin (AVP). An increased sensitivity to inhibition of Rho-kinase (ROCK) was found in the groups LPS 6 hours. The effects of AVP on systemic blood pressure and renal blood flow (both measured in vivo) were also enhanced in endotoxemic rats. In addition, the administration of 0.1 mg/kg of Y-27632 (i.v.), a ROCK inhibitor, decreased the effect of AVP on MAP of control animals., but not in endotoxemic groups. The administration of Y-27632 partially avoided the reduction in renal blood flow elicited by lower doses of AVP in all experimental groups, but had no effect against the highest dose of AVP (30 nmol/kg) in groups LPS 6 and 24 h. Analysis of cardiac parameters showed no correlation between the LPS-induced cardiac changes and the increased effects of AVP. The protein expression of components of the Rho-A/Rho-kinase pathway had not been significantly impaired in kidneys from LPS-treated animals, when compared to control samples. Finally, we did observe a decreased urinary output in the first 6 h after LPS administration, that was restored between 18-24 hours of endotoxemia. Changes in diuresis may be related to variations in plasma levels of AVP during endotoxemia. We concluded that the renal bed does not present hyporeactivity to AVP in endotoxemic shock, what can contribute to the effectiveness of this mediator in raising blood pressure in septic shock. Differential changes in the functionality of the Rho-A/Rho-kinase pathway may contribute to the increased vascular effects of AVP in renal vessels during a septic state. Further studies need to be carried out to provide more evidence regarding the beneficial or deleterious importance of this relationship.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-26T10:49:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 303001.pdf: 7919845 bytes, checksum: 3afed454cc0071e0c7ee5ad61cafa34e (MD5) / As doenças inflamatórias intestinais (IBD) representam um grupo de disfunções do trato gastrointestinal, que acometem milhões de pessoas em todo o mundo e, até o momento, possuem poucos tratamentos eficazes. Neste sentido, os modelos de colite experimental têm contribuído de forma crucial para o estudo dos eventos patofisiológicos que ocorrem nas IBD e, também, na busca por alternativas terapêuticas que venham a prevenir e/ou tratar essas doenças. Recentemente, a necessidade da suplementação humana com os ácidos graxos poliinsaturados, do tipo ômega-3, tem ganhado grande atenção, devido ao fato desse lipídio ser precursor de vários mediadores químicos envolvidos em diversas funções celulares e na promoção da resolução da inflamação. Dessa forma, o presente estudo buscou mapear a cinética de produção de alguns mediadores inflamatórios e células envolvidas no modelo de colite aguda e crônica induzida pelo sulfato sódico de dextrana (DSS), bem como, avaliar o papel antiinflamatório dos mediadores lipídicos derivados do ômega-3, AT-RvD1, RvD2 e 17R-HDHA, em diferentes modelos de inflamação intestinal. Nossos resultados demonstraram que a população de neutrófilos foi predominante nos estágios iniciais da colite induzida pelo DSS, sendo que esse aumento do infiltrado celular foi acompanhado da produção e da expressão de mediadores pró-inflamatórios, tais como o TNF-a, IL-12 e CXCL1/KC. Ademais, observamos que durante as fases de recuperação da inflamação ocorreu aumento na expressão de citocinas antiinflamatórias, como a IL-10 e o TGF-ß. Por outro lado, a fase crônica foi caracterizada pela massiva liberação de mediadores pró-inflamatórios; porém, com a co-produção de citocinas antiinflamatórias, além da significativa participação de macrófagos e linfócitos T, caracterizando assim intensa atividade inflamatória na mucosa intestinal e cronificação da colite experimental. Além disso, verificamos que o tratamento preventivo sistêmico com a AT-RvD1, RvD2 ou com o 17R-HDHA reduziu de forma marcante a severidade da doença, o dano tecidual colônico e a infiltração de neutrófilos nos modelos de colite induzida pelo DSS ou pelo ácido trinitrobenzenosulfônico (TNBS) em camundongos. Adicionalmente, constatamos que o efeito benéfico desses mediadores lipídicos foi devido à redução na produção e na expressão de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias, moléculas de adesão, e pela atividade reduzida do fator nuclear .B (NF.B). Por fim, demonstramos, através de experimentos in vitro que o efeito da AT-RvD1, mas não da RvD2 ou do 17R-HDHA, sobre a redução na secreção de mediadores pró-inflamatórios, foi dependente da ativação do receptor ALX/FPR2. Estes resultados corroboraram aqueles da colite induzida pelo DSS, que demonstraram que o bloqueio farmacológico do receptor ALX/FPR2 reverteu significativamente o efeito benéfico da AT-RvD1 sobre a severidade da colite experimental. Em conclusão, nossos resultados ampliaram os conhecimentos acerca do modelo de colite induzida pelo DSS, além de sugerir importantes implicações terapêuticas. Além disso, demonstramos que a AT-RvD1, RvD2 ou o 17R-HDHA podem ser promissores candidatos na prevenção ou tratamento das IBD. / Inflammatory bowel disease (IBD) represents a group of gastrointestinal disorders, affecting millions of people around the world, and, until now, have few effective treatments. Therefore, experimental models of colitis have contributed crucially to the study of pathophysiological events that occur in IBD, and also in the investigations for effective therapies that may prevent and/or treat these diseases. Recently, the human supplementation with polyunsaturated fatty acids, such as omega-3, has emerged and received much attention, because this lipid is a precursor of some chemical mediators involved in various cellular functions and in promoting the resolution of inflammation. Thus, this study aimed to investigate the kinetics of the production of some inflammatory mediators and cells involved in the model of acute and chronic colitis induced by dextran sulfate sodium (DSS), and to assess the role of anti-inflammatory lipid mediators derived from omega-3, AT-RvD1, RvD2 and 17R-HDHA, in different models of intestinal inflammation. Our results showed that neutrophil infiltration was predominant in the early stages of DSS-induced colitis, and this increase was accompanied by the production and expression of pro-inflammatory mediators, such as TNF-á, IL-12 and CXCL1/KC. Furthermore, we observed that during the recovery phase, the expression of inflammatory cytokines such as IL-10 and TGF-â was increased in the colonic tissue. On the other hand, the chronic phase was characterized by the massive release of pro-inflammatory mediators; however, with the co-production of anti-inflammatory cytokines and significant participation of macrophages and T lymphocytes, featuring intense inflammatory activity in the intestinal mucosa and chronicity of experimental colitis. In addition, we found that preventive systemic treatment with AT-RvD1, RvD2 or 17R-HDHA markedly prevented the disease activity, the colonic tissue damage and neutrophil infiltration in DSS or 2,4,6- trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS) in mice. Additionally, we showed that the beneficial effect of these lipid mediators was due to reduced production and expression of pro-inflammatory cytokines/chemokines, adhesion molecules, and the reduced activity of nuclear factor êB (NFêB). Finally, we demonstrated that the AT-RvD1, but not RvD2 or 17R-HDHA, reduced the secretion of pro-inflammatory mediators, in LPS-induced macrophages, in an ALX/FPR2 dependent manner. Moreover, the pharmacological blockade of ALX/FPR2 receptor significantly reversed the beneficial effects of AT-RvD1 in DSS-induced colitis. In conclusion, our results largely extended the knowledge about the model of DSS-induced colitis, and suggest important therapeutic implications. Finally, we demonstrated that AT-RvD1, RvD2 or 17R-HDHA can be promising candidates for the prevention and/or treatment of IBD.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-06-25T22:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 307869.pdf: 2942955 bytes, checksum: c02d78ab39a8ea822c0c2f236d2dc38e (MD5) / O objetivo do presente estudo foi investigar o papel do receptor B2 para as cininas na neuroinflamação induzida pelo peptídeo A?1-40 em camundongos. Há indícios de que o peptídeo A? tem um papel central na doença de Alzheimer e, de relevância para este trabalho, estudos recentes sugeriram o envolvimento do sistema calicreína-cininas na patofisiologia da doença em humanos, bem como sua contribuição em modelos experimentais desta doença. Para a realização dos experimentos, os animais foram pré-tratados com o antagonista seletivo do receptor B2, o HOE 140 (50 ?mol/sítio/ i.c.v.), 2 horas antes da injeção i.c.v do peptídeo A?1-40 (400 ?mol/sítio). Após 14 dias, os animais foram submetidos aos testes comportamentais e no dia seguinte (dia 15), os cérebros foram removidos para a realização da técnica de western blot. Ainda, o mesmo protocolo de tratamento foi seguido para a realização de coletas em tempos específicos (6h, 24h ou 8 dias) para a realização das análises de imunoistoquímica, nos tempos de expressão máximo da cada proteína. O pré-tratamento dos animais com HOE 140 preveniu o prejuízo cognitivo e o dano sinápico induzido pelo peptídeo A?1-40, avaliados através do teste de reconhecimento de objetos e pela expressão das proteínas sinápticas sinaptofisina e PSD-95, respectivamente. Além disso, o peptídeo A?1-40 induziu aumento na expressão do receptor B2 após 15 dias no hipocampo dos animais, e o bloqueio deste receptor com o HOE 140 preveniu esta alteração, sugerindo uma possível auto-regulação do receptor B2 pelo seu antagonista. Ainda, o processo inflamatório induzido pelo peptídeo A?1-40, evidenciado através do aumento da ativação microglial e do aumento na expressão das enzimas COX-2, iNOS e nNOS, foi prevenido pelo pré-tratamento com o HOE 140. Estes efeitos tóxicos iniciados pela administração de A?1-40 parecem ser mediados pela ativação de PKC (isoformas ? e ?) e, por conseguinte, das MAPKs p-38 e JNK, e dos fatores de transcrição NF?B e c-jun. Estes eventos parecem ser modulados pela ativação do receptor B2, uma vez que, o bloqueio deste receptor com o HOE 140 preveniu todas estas alterações induzidas pelo peptídeo A?1-40. Estes resultados, analisados em conjunto, fornecem evidências de que a toxicidade induzida por A?1-40 parece ser mediada pela ativação do receptor B2 e que o bloqueio deste receptor e das vias de sinalização por ele ativadas podem ser novos alvos para o tratamento do processo inflamatório característico na progressão da doença de Alzheimer. / The aim of this study was to investigate the role of the kinin B2 receptor in the A?-induced neuroinflammation in mice. There are recent evidences showing that the A? peptide has a central role in Alzheimer's disease. Relevantly, recent studies have suggested the involvement of the kallikrein-kinin system in the pathophysiology of Alzheimer's disease in both humans and experimental models. In this study, experimental procedures were carried out using Swiss mice pretreated with the selective B2 receptor antagonist, HOE 140 (50 ?mol/site, i.c.v.), given two hours prior the i.c.v. injection of A?1-40 peptide (400 ?mol/site). After 14 days, the animals were subjected to behavioral tests, and on day 15 the brains were removed to perform Western blot analysis. In addition, the same treatment protocol was used to carry out tissue collections, at specific time points (6h, 24h or 8 days), in order to perform immunohistochemical analysis. These time point were chosen based on the maximum expression level of each protein. The pretreatment of animals with HOE 140 prevented the cognitive impairment and synaptic injury induced by A?1-40 peptide, assessed using object recognition task and through evaluation of the expression of synaptic proteins, (synaptophysin and PSD-95), respectively. Furthermore, A?1-40 peptide increased B2 receptor expression, in the mice hippocampus after 15 days, and the pharmacological blockage of this receptor (with HOE 140) prevented this alteration, suggesting a possible auto-regulation mechanism for B2 receptor expression. Also, the A?1-40-induced inflammatory process was evidenced by increased microglial activation and increased expression of COX-2, iNOS and nNOS. All these alterations were prevented by the pretreatment with HOE 140. The toxic effects induced by A?1-40 administration seems to be mediated by activation of PKC (? and ? isoforms), which leads to the activation of p-38 MAPKs and JNK, and transcription factors NF?B and c-Jun. These events seems to be modulated by activation of B2 receptor, since blocking this receptor with HOE 140 prevented all these changes. These results, taken together, provide evidence that the A?-induced toxicity might be mediated by B2 receptor activation. Thus, the blockage of B2 receptor, and signaling pathways activated by it, might constitute new attractive targets for the treatment of the inflammation associated with of Alzheimer's disease progression.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:16:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 220970.pdf: 714951 bytes, checksum: 813a461ea17fae0fa556d412f7c28938 (MD5) / O objetivo geral deste estudo foi avaliar o efeito de anticorpos anti-citocinas pró e antiinflamatórias na nocicepção e edema articulares e na migração de células para o fluido sinovial, no modelo de artrite induzida por LPS em ratos, e compará-las a alguns fármacos antiartríticos, potencialmente moduladores da atividade de citocinas. Ratos Wistar machos, pesando entre 250 e 300g, receberam LPS (0,03; 1,0 ou 30 ng; i.art.) 3 dias após uma sensibilização com carragenina (300 µg; i.art.). A incapacitação foi avaliada pelo tempo de elevação da pata (TEP; s) durante marcha de 1 min; o edema, pela variação do diâmetro articular (DA; cm) e, a migração celular, pela contagem total (CT; cel/mm3) e diferencial de leucócitos (mononucleares e polimorfonucleares, MON; PMN; cel/mm3) do fluido sinovial coletado 6 h após. A indometacina (0,5 ou 2,5 mg/kg) e o diclofenaco (0,5; 2,5 ou 5,0 mg/kg) inibiram significativamente a incapacitação e o edema articular tanto no pré quanto no pós-tratamento. O diclofenaco inibiu a migração de MON. Nenhuma das duas drogas inibiu a migração de PMN. A dexametasona (0,4 ou 4,0 mg/kg) inibiu a incapacitação, o edema articular e a migração de MON, mas não inibiu a migração de PMN. A sulfasalazina (30 ou 100 mg/kg) inibiu somente o edema articular sem alterar a incapacitação e a migração celular. O leflunomide (20, 40 ou 80 mg/kg) inibiu de maneira dose-dependente o edema articular, mas somente a maior dose inibiu a incapacitação articular. O leflunomide também inibiu a migração de MON. A diacereína (50 ou 200 mg/kg) inibiu significativamente apenas o edema articular. A pentoxifilina (20 ou 40 mg/kg) inibiu o edema e a migração de PMN, mas não alterou a incapacitação articular e a migração de MON. Anticorpos anti-TNFa e anti-IL-1ß inibiram significativamente o edema articular e a migração de MON. Anticorpos anti-TNFa inibiram a incapacitação e a migração de PMN. Houve uma tendência de inibição da migração de PMN pelos anticorpos anti-IL-1ß. Anticorpos anti-CINC-1 reduziram a incapacitação, o edema articular e a migração de MON e PMN. Anticorpos anti-IL-10, anti-IL-13 a anti-IL-4 aumentaram a incapacitação e o edema articular induzido por uma dose relativamente baixa de LPS (0,03 ng). No entanto, anticorpos anti-IL-10 e anti-IL-13 aumentaram a incapacitação mas reduziram o edema articular induzido por uma dose alta de LPS (1,0 ng). Além disso, a injeção intraarticular da citocina IL-13, antes do LPS (0,03 ng), inibiu a incapacitação, embora tenha aumentado o edema articular sem alterar a migração celular. Este estudo nos permite concluir que: (a) no modelo de artrite induzida pelo LPS, as citocina pró-inflamatórias TNFa, IL-1ß e CINC-1 estão envolvidas no desenvolvimento da nocicepção, edema articular e migração celular; (b) IL-10, IL-13 e IL-4 também são produzidas localmente e apresentam efeito inibitório. Contudo, IL-10 e IL-13 também apresentam efeito pró-edematogênico neste modelo; (c) os resultados obtidos com antiinflamatórios não esteroidais e com dexametasona sugerem que o modelo de artrite induzida pelo LPS é confiável para avaliar a ação de outras drogas sobre a nocicepção, edema articular e migração celular; (d) as drogas modificadoras de doença (DMARDs), que podem modular a síntese e liberação de citocinas pró-inflamatórias, TNFa e IL-1ß, não apresentaram efeito tão potente quanto os respectivos anticorpos anti-citocinas sugerindo que, pelo menos neste modelo in vivo, esse mecanismo de ação pode não ser atingido. Leflunomide, foi o único DMARD testado que apresentou efetividade similar aos anticorpos anti-TNFa e anti-IL-1ß em todos os parâmetros avaliados (nocicepção, edema articular e migração celular de MON).

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226452.pdf: 1463507 bytes, checksum: cc42c141dca74c9111dd2a5cc17a5db8 (MD5) / O choque séptico é uma síndrome caracterizada pela presença de hipotensão, hiporeatividade a vasoconstritores e hipoperfusão. Em parte, estes eventos vasculares estão associados a vários mecanismos moleculares que envolvem a expressão da óxido nítrico (NO) sintase induzida (iNOS), síntese de NO, ativação da enzima guanilato ciclase solúvel e canais de K+ e, a formação de S-nitrosotióis. O presente estudo demonstra que a exposição in vitro de anéis de aorta torácica de rato à doadores de NO, S-nitroso-N-acetil-DL-penicilamina (SNAP) e trinitrato de glicerila, induziu hiporeatividade à fenilefrina de longa duração. Em vasos com e sem endotélio, o aumento da intensidade da hiporeatividade à fenilefrina foi dependente do aumento da concentração do SNAP. A ausência da camada endotelial potencializa a hiporeatividade à fenilefrina produzida pelo NO, caracterizando um efeito protetor vascular do endotélio, não associado à produção de ânion superóxido (O2-), angiotensina II, endotelina (via receptores ET-A), produtos derivados das enzimas ciclooxigenase (COX), lipooxigenase, citocromo P-450 e NO sintase endotelial (eNOS). O ácido 5,5'-ditio-bis-(2-nitrobenzóico), DTNB (um agente oxidante que não permeia a membrana celular), previne e reverte a hiporeatividade à fenilefrina de longa duração mediada pelo SNAP e, na ausência do endotélio, o DTNB demonstrou maior eficácia em prevenir o efeito do NO. Estes achados evidenciam a participação de específicos grupamentos sulfidrilas presentes nas proteínas das membranas celulares, e em especial na musculatura lisa vascular. Em vasos com endotélio, a prevenção da hiporeatividade à fenilefrina causada pelo SNAP também foi verificada com outro agente oxidante, a diamida, mas não com o uso de agente redutor como o ditiotreitol (DTT) em anéis sem endotélio. A adição de L-cisteína e N-acetilcisteína, tióis de baixo peso molecular, promoveu marcante relaxamento de longa duração em vasos pré-incubados com SNAP, sugerindo que a hiporeatividade e o vasorelaxamento são eventos relacionados a S-nitrosação de resíduos de cisteína e a mobilização de NO. As várias adições de L-cisteína reverteram a hiporeatividade à fenilefrina em vasos com endotélio pré-incubados com SNAP. O efeito oxidante do DTNB bloqueou o relaxamento promovido pela ativação de canais de K+ sensíveis ao Ca2+ de alta condutância (BKCa) mediado pelo NS1619, sugerindo que o DTNB inibe os eventos vasculares causados pelo NO, hiporeatividade e relaxamento, em parte, via BKCa. Entretanto, o DTNB não foi capaz de modificar o vasorelaxamento causado pelo 8-bromoguanosina 3',5'-monofosfato cíclico (8-Br-GMPc, um análogo de GMPc) e pela acetilcolina, e ainda, não promoveu relaxamento em vasos pré-incubados com SNAP. Em vasos pré-contraídos com endotelina-1 (ET-1), o relaxamento para L-cisteína associado ao SNAP foi prevenido através da exposição vascular ao DTNB. Em contraste, o SNAP não foi eficaz de causar hiporeatividade endotelinérgica de longa duração. Em experimentos ex vivo, o DTNB foi eficiente em reverter a hiporeatividade à fenilefrina em vasos de animais tratados com LPS. Além disso, o co-tratamento de animais com LPS e DTNB, 4 e 6 horas após a endotoxina, também aboliu totalmente a hiporeatividade à fenilefrina, em vasos sem endotélio. O DTNB previne e reverte a hiporeatividade à fenilefrina induzida pelo SNAP in vivo. Em camundongos, a administração de Escherichia coli (E. coli) causou mortalidade na ordem de 60 %, e o DTNB administrado 30 min antes da E. coli ou, a cada 12 horas após a administração da bactéria, reduziu a mortalidade em 20 e 30 %, respectivamente. O vasorelaxamento mediado pela L-cisteína, em anéis de aorta pré-incubados com o SNAP, depende da ativação da guanilato ciclase solúvel e da abertura de subtipos de canais de K+, sensíveis a alta concentração de K+, mas insensíveis ao tetraetilamônio (TEA), 4-aminopiridina, glibenclamina, clotrimazol e caribdotoxina.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:14:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317829.pdf: 1196028 bytes, checksum: b45c41979d2169d09b0d948da10f4639 (MD5) Previous issue date: 2013 / A artrite reumatoide é uma doença autoimune que em seu curso pode causar inatividade do paciente e levá-lo a óbito. Acredita-se que 1,5% da população mundial seja afligida pela doença, que não tem cura e os tratamentos disponíveis nos dias de hoje além de terem alto custo, podem causar efeitos adversos graves, limitando o tratamento da doença. A pesquisa em busca de medicamentos com menos efeitos adversos e de custo acessível faz-se então necessária. O presente estudo mostrou que a tripsina administrada em ratas pela via oral na dose de 2,95mg/Kg foi capaz de diminuir a dor e a inflamação articular em um modelo de artrite induzida por CFA, e que uma única administração foi capaz de manter o efeito antiartrítico durante os 7 dias de avaliação. Animais vagotomizados não tiveram melhora do quadro artrítico após a administração da tripsina na mesma dose anterior, indicando um papel vagal na atividade da enzima. Da mesma forma, a tripsina não teve efeito quando administrada em animais que receberam injeção intratecal das neurotoxinas 6-OHDA e 5,7-DHT. Esse resultado sugere o papel das vias descendentes inibitórias noradrenérgicas e serotoninérgicas, respectivamente, na ação da tripsina. As vias descendentes inibitórias monoaminérgicas não somente podem diminuir a nocicepção, como também, a partir da inibição do reflexo da raiz dorsal, seria capaz de controlar a inflamação articular. O presente trabalho propõe, então, que a ativação vagal seguida da liberação de monoaminas na medula pela via descendente inibitória compõem o mecanismo de ação da tripsina via oral, que pode ser considerada como uma alternativa de tratamento para doenças inflamatórias crônicas como a artrite reumatoide. Por extensão, esse trabalho sugere que ativadores orais de aferências do nervo vago subdiafragmático, e não absorvíveis, podem ser um novo ramo para o desenvolvimento de fármacos com menos efeitos colaterais.<br>