Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivos: avaliar a eficácia do laser de baixa intensidade (LBI) no tratamento da mucosite e comparar os efeitos cicatrizantes de duas potências do LBI (35mW e 100mW). Métodos: Foram utilizados 72 hamsters Sírios Dourados (Mesocricetus auratus) com idade de 8 a 12 semanas e peso entre 120 e 150g. Todos os animais receberam uma injeção intraperitoneal de 5-Fluorouracil (5-FU) no dia 0 (80mg/kg) e no dia 2 (40mg/kg), para indução da mucosite, por meio de irritação superficial com agulha G18. Os hamsters foram distribuídos em três grupos: grupo I laser terapêutico (n=24), potência de 35mW, energia de 0,52J, tempo de 16 segundos; grupo II laser terapêutico (n=24), potência de 100mW, energia de 0,56J, tempo de 6 segundos; e 0 grupo III controle. A bolsa jugal direita dos hamsters foi superficialmente irritada, nos dias 3 e 4. Os grupos I e II receberam aplicações diárias de LBI nos dias 3 a 6, comprimento de onda de 660nm, de forma pontual, por contato, irradiados em cinco locais geometricamente distribuídas na mucosa jugal, de maneira a privilegiar as regiões mais vascularizadas e a cobrir toda a área da bolsa com a luz, devido ao espalhamento nos tecidos. No grupo III a mucosa foi somente irritada. Os grupos foram redistribuídos em quatro subgrupos com seis animais em cada um, sendo que cada subgrupo foi, aleatoriamente, submetido a eutanasia nos dias D4, D7, D11 e D15. A expressão da ciclooxigenase 2 (COX-2), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e a densidade de microvasos mensurada pelo Fator VIII, foram analisadas pelo metodo Imunohistoquímico, bem como se procedeu a avaliação histopatológica de reparação tecidual e da inflamação pela coloração de hematoxilina-eosina (HE). Resultados: 0 processo inflamatório estava instalado em todos os grupos, durante 0 período inicial. No grupo I houve inibição da ciclooxigenase-2, redução do tempo da inflamação e estabilização da expressão do VEGF e expressão do Fator VIII, comparado aos grupos II e III, no período inicial. Conclusão: 0 LBI é promissor instrumento para minimizar 0 processo inflamatório, sendo que a potência de 35mW apresentou melhores resultados, inibindo a enzima COX-2.. / Purpose: To investigate the mechanisms of action of laser therapy in reducing the severity of oral mucositis. Histological evaluation of neutrophil response and immunohistochemical staining for cyclooxygenase-2 (COX-2), vascular endothelial growth factor (VEGF) and Factor VIII (a measure of microvessel density), were performed to examine the tissue response to laser therapy. Methods: A hamster cheek pouch model of oral mucositis was used with all animals receiving intraperitoneal 5- Fluorouracil followed by surface irritation. Animals were randomly allocated into 3 groups and treated with a 35mW laser, 100mW laser or no laser. Groups I and II received daily laser applications of λ=660 using 32.8mW, 0.52J, 16 sec and 92.6mW, 0.56J, 6 sec, respectively, from day 3 toOn days 4, 7, 11 and 15, buccal pouch tissue was harvested from subgroups of animals. This tissue was used for histology to measure the neutrophil response and for immunohistochemistry to measure the expression of COX-2, VEGF, and Factor VIII. Results: As healing progressed, a decrease in the number of neutrophils and microvessel density was seen. The 35mW laser caused a significant decrease in COX-2 expression in the period following its use, accompanied by a decrease in neutrophils. The 100mW laser suppressed VEGF expression as compared to the control group. Conclusion: The tissue response to laser therapy appears to vary by dose. The 35mW laser used here is a promising tool for minimizing the inflammatory process and should be further evaluated for the management of mucositis. / FAPESP: 05/02637-0 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-31. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:15Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12959.pdf: 1645113 bytes, checksum: 2836abcccc356e427c13763a5a6f708c (MD5) / Objetivo: Analise do fator de crescimento vasculo-endotelial (VEGF) como marcador sorologico no diagnostico da gravidez ectopica. Outrossim, e desiderato deste projeto avaliar se as variantes polimorficas -460 T/C (rs833061), -634 C/G (rs2010963) e +936 C/T (rs3025039) do gene do VEGF podem estar associadas a ocorrencia da gravidez ectopica (GE). Alem disso, procuramos avaliar se os niveis sericos de VEGF estavam correlacionados com o genotipo. Metodo: estudo caso-controle, onde foram selecionadas 35 pacientes com diagnostico de gravidez ectopica, 15 abortamentos e 22 gestacoes intra-uterinas normais. Foram coletados 10 mL de sangue em tubo seco, centrifugados a 2000 rpm e o sobrenadante foi separado em cinco aliquotas de 200 £gL e armazenados a -80 o C, para posterior avaliacao. A dosagem serica do VEGF foi realizada por metodo de ELISA - (human VEGF; R&D systems, Minneapolis). Para a avaliacao dos polimorfismos do gene do VEGF foram incluidas 74 pacientes com historia previa ou em vigencia de GE, em acompanhamento no Ambulatorio de GE da UNIFESP. O grupo controle foi constituido de 134 mulheres na menopausa, com pelo menos duas gestacoes normais, sem abortos ou GE durante a menacme, em seguimento no Ambulatorio de Climaterio da UNIFESP. Foram coletados 10 mL de sangue periferico, retirado buffy-coat, do qual e extraido DNA genomico pela tecnica de DTAB / CTAB. A genotipagem foi realizada digerindo os produtos de PCR com as enzimas de restricao especificas para os polimorfismos do gene de VEGF +936 C/T, -634 C/G e -460 C/T. Os dados foram analisados pelo teste ƒÓ2 ou teste exato de Fisher, sendo considerado significante p<0,05. Resultados: Nos casos estudados a media dos valores sericos do VEGF foi de 297,5 pg/mL na gravidez ectopica, 299,6 pg/mL no abortamento e de 39,9 pg/mL nas gestacoes intra-uterinas normais (p<0,0001). Nao foram identificadas diferencas significantes quanto as frequencias genotipicas e alelicas para os polimorfismos do gene do VEGF +936 C/T (p=0,28), -460 C/T (p=0,70) e -634 G/C (p=0,17). Nao foi identificada relacao entre os valores sericos de VEGF e os genotipos para nenhum dos polimorfismos de VEGF testados. Conclusao: Nossos resultados sugerem que na gravidez ectopica sejam detectados valores sericos mais elevados de VEGF do que na gravidez intra-uterina viável. Por outro lado, quando comparamos os valores de VEGF na gravidez ectópica com os casos de abortamento, não encontramos diferença estatisticamente significante. Não foi identificada associação entre a expressão de polimorfismo +936 C/T, -634 C/G e -460 C/T do gene do VEGF e nem de seus alelos com a ocorrência de gravidez ectópica. Não foi identificada relação entre os níveis séricos de VEGF e os genótipos para nenhum dos polimorfismos de VEGF testados. A produção de VEGF sérico parece não ter correlação com o genótipo. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-31 / Objetivo: Investigar os efeitos da oxigenação hiperbárica (OHB) e da Nacetilcisteína (NAC) isoladamente ou em associação sobre a viabilidade de retalhos cutâneos em ratos. Métodos: 32 ratos Wistar machos foram distribuídos randomicamente em GS (sham/n=8), GNAC (N-acetilcisteína/n=8), GOHB (oxigenação hiperbárica/n=8) e GNH (NAC+OHB/n=8). Sob anestesia geral foi dissecado um retalho dorsal de base cranial medindo (2x8cm) conforme modelo preconizado por McFarlane; foi interposta uma lâmina de polietileno entre o retalho e seu leito impedindo a vascularização a partir do mesmo; o retalho foi suturado de novo sobre seu leito. Nos sete dias consecutivos cada animal recebeu: GS solução salina intraperitoneal, o grupo GNAC 300mg de NAC intraperitoneal, o grupo GOHB 2 horas de oxigenação hiperbárica a 2,4 ATA e o grupo GNH recebeu a associação dos tratamentos. No oitavo dia do experimento os animais foram novamente anestesiados e foram coletadas biópsias dos terços proximal, médio, distal e controle para análise imuno-histoquímica bem como fotografias digitais para posterior análise por meio do programa Image-Lab. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados pelos testes ANOVA e Bonferroni (p<0,05). Resultados: A média da área de necrose no grupo GS foi de 18,3%, no grupo GNAC 24,3%, no grupo GOHB 12,6% e no grupo GNH 14,9%. A expressão do VEGF na epiderme, derme, tecido submuscular e vasos não demonstrou diferenças significativas nos diferentes grupos de tratamento. A acumulação de células em apoptose foi significativamente menor no terço médio em todos os grupos tratados, mas significativamente menor nos grupos tratados com OHB. Os resultados menos favoráveis foram observados no grupo GS e GNAC. Conclusão: A OHB está associada à menor expressão de apoptose celular e menor área de necrose de pele. A NAC não apresentou efetividade na proteção do retalho randômico quer pela avaliação da apoptose ou da necrose celular. A associação dos dois procedimentos não produziu potencialização dos resultados favoráveis do uso de ambos separadamente. Os achados sugerem que a difusão do oxigênio pelo interstício celular foi o fator determinante dos resultados mais favoráveis da OHB. / Objective: To investigate the effects of hyperbaric oxygen (HBO) and N-acetylcysteine (NAC) alone or in association on the viability of skin flaps in rats. Methods: 32 male Wistar rats were randomized in: GS (sham/n=8), GNAC (Nacetylcysteine/ n=8), GHBO (hyperbaric oxygen/n=8) and GNH (NAC+OHB/n= 8). A skin flap measuring cranial base (2x8cm) was performed (McFarlane) and brought a polyethylene film between the skin flap and its surgical bed prior to closure with interrupted polyamide sutures. For seven days the animals received injections of saline intraperitoneally (GS) and NAC at a dose of 300mg/kg (GNAC). HBO was performed for periods of two hours with 2.4 ATA (GOHB) for seven days and the association of NAC and HBO was carried out in group GNH. On the eighth day the dorsum of the animal was photographed and collected biopsy specimen of skin from the flap at thirds proximal, middle and distal flap. The areas of necrosis were evaluated (photos processed by the Image-Lab), assessment of apoptosis (cleaved caspase 3) and angiogenesis (VEGF). The data obtained were statistically analyzed by ANOVA and Bonferroni (p <0.05). Results: The mean areas of necrosis (mm2) were: GS 18.3%, GNAC 24.3%, GOHB 12.6% and GNH 14.9%. The expression of VEGF in the epidermis, dermis, submuscular tissue and vessels was not significant in the different treatment groups. The presence of cells undergoing apoptosis was significantly lower in the middle third of all treated groups compared to sham group, but significantly lower in the group treated with HBO alone or in combination with NAC. Conclusion: HBO is associated with reduced expression of apoptosis and reduced area of necrosis of skin flap. The NAC is not associated with lower expression of apoptosis and alone had the worst results in this experiment. The association of the two procedures did not produce potentiating of the favorable results of the use of both separately. The findings suggest that the diffusion of oxygen through the interstitial space was the determining factor of more favorable results of HBO. / TEDE

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:31:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 140.pdf: 1784586 bytes, checksum: 0f64f771714a2b5b111b4bc7d8a475de (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / O câncer de mama é uma doença heterogênea com alta incidência, sendo a principal causa de morte por câncer entre as mulheres. Dentre os processos que contribuem para a carcinogênese e que dependem do micro ambiente do hospedeiro, destaca-se o processo de angiogênese, sendo o fator de crescimento vascular endotelial (VEGFA) o principal fator pró-angiogênico com influente papel no desenvolvimento do câncer de mama. O gene que codifica o VEGFA é altamente polimórfico e seus polimorfismos estão associados a diferentes padrões de expressão gênica, afetando os níveis de VEGFA em diversos modelos celulares, incluindo o câncer de mama. O presente estudo teve como objetivo investigar a associação entre polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) do VEGFA (rs699947, rs833061, rs1570360, rs2010963 e rs3025039) e características histopatológicas com valor prognóstico no câncer de mama, bem como avaliar o potencial de genótipos e haplótipos VEGFA como preditores do risco de progressão da doença. A população do estudo consistiu de uma coorte de mulheres brasileiras com câncer de mama unilateral e não metastático, submetidas à ressecção tumoral ou à quimioterapia neoadjuvante como primeira abordagem terapêutica (N=1043). O DNA genômico foi extraído de amostras de sangue periférico, e usado para genotipagem de VEGFA(N=895). Os resultados foram divididos em dois manuscritos. (...) Em relação à sobrevida livre de doença após tratamento cirúrgico, os SNPs de VEGFA ou seus haplótipos não mostraram impacto significativo sobre o risco de progressão, caracterizado pela presença de recorrências ou metástases, tanto considerando toda a coorte de estudo, como após a estratificação das pacientes de acordo com os subtipos tumorais. Também não foram observadas diferenças significativas nas curvas de sobre vida livre de doença quando apenas os indivíduos com diplótipos homozigotos foram considerados. / Como conclusão, os haplótipos VEGFA não foram validados como preditores independentes da progressão rápida do câncer de mama em pacientes de câncer de mama inicial, tratadas com terapias padronizadas. Apesar disso, em vista da associação do SNP rs699947 ou o haplótipo (...) do gene VEGFA com tumores não-luminais, estudos futuros a respeito da relevância dos SNPs VEGFA para o prognóstico do câncer de mama devem abordar em especial os tumores dos tipos HER2-like ou Triplo-Negativo, que têm menos opções terapêuticas, e podem se beneficiar de novas terapias. / Breast cancer is a heterogeneous disease with high incidence among women, being the leadingcause of cancer death. Among the host microenvironment processes that contribute tocarcinogenesis, angiogenesis plays a central role, and the Vascular Endothelial Growth FactorA (VEGFA) is the main pro-angiogenic factor, with impact in the development of breastcancer. The gene encoding VEGFA is highly polymorphic, and their polymorphisms have beenassociated with different patterns of gene expression, affecting VEGFA levels in different cellmodels, including breast cancer. The present study aimed to investigate the associationbetween single nucleotide polymorphism (SNP) of VEGFA (rs699947, rs833061, rs1570360,rs2010963 and rs3025039) and histopathological features with prognostic value in breastcancer, and to evaluate the potential of VEGFA genotypes and haplotypes as risk predictors ofdisease progression. The study population consisted of a cohort of Brazilian women withunilateral and non-metastatic breast cancer, who underwent tumor resection or neoadjuvantchemotherapy as their first therapeutic approach (N=1043). Genomic DNA was extracted fromperipheral blood samples, and used for VEGFA genotyping (N=895). The results were dividedinto two manuscripts. The first shows the association of VEGFA SNPs or haplotypes withhistopathological characteristics with prognostic value for the treatment of breast cancer. Thesecond evaluates the impact of VEGFA genotypes and haplotypes on the risk of breast cancerprogression among patients initially treated with curative surgery. ^ien / The associations betweenSNPs and histopathological characteristics were estimated by odds ratios (OR) and theirrespective confidence intervals of 95 percent (CI 95 percent), and the independent predictors werevalidated by logistic regression. Disease-free survival curves were estimated by the Kaplan-Meier method and the impact of VEGFA genotypes and haplotypes on the risk of breast cancerprogression (characterized by the incidence recurrence or metastasis) was evaluated usingmultivariate regression models of COX proportional hazards, with calculation of the adjustedhazard ratios (HR) and their 95 percent CI.^ien / With regards to disease-free survival, VEGFA genotypes or haplotypes showed no significant impact on the risk of breast cancer progression,either considering the entire study cohort, or after patient stratification according to tumorsubtypes. There were also no significant differences in disease-free survival curves when onlyindividuals with homozygous diplotypes were considered. In conclusion, VEGFA haplotypeswere not validated as independent predictors of early-onset breast cancer progression in earlystagebreast cancer patients treated with standard first-line therapies. Nevertheless, in view ofthe apparent association between VEGFA rs699947 or haplotype (...) and non-luminal tumors,future studies on the functional relevance of VEGFA SNPs in breast cancer prognosis shouldfocus in specific subtypes, especially in HER2-like tumors or Triple-negative, which havefewer treatment options, and are more likely to benefit from new therapies. (AU)^ien

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Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-08T20:33:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Gabriela Tonini Peterle.pdf: 1720247 bytes, checksum: f69ebeacd96de38d131c0f8171f8ed62 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-17T13:49:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Gabriela Tonini Peterle.pdf: 1720247 bytes, checksum: f69ebeacd96de38d131c0f8171f8ed62 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T13:49:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Gabriela Tonini Peterle.pdf: 1720247 bytes, checksum: f69ebeacd96de38d131c0f8171f8ed62 (MD5) / CNPQ / O carcinoma epidermoide de cavidade oral (CEC oral) é uma causa significativa de mortalidade e morbidade e está relacionado, principalmente, ao uso do álcool e tabaco. Alguns marcadores genéticos de resposta ao tratamento e evolução clínica já foram identificados para esse carcinoma, como a HIF1α, a qual promove a transcrição de genes como CA-IX, PAI-1 e VEGF envolvidos na resposta celular à depleção de oxigênio. Com o intuito de observar as influências de algumas proteínas da via de hipóxia nas características clinicopatológicas e no prognóstico dos pacientes, bem como observar a atuação dos constituintes do tabaco no mecanismo de hipóxia, foi realizada uma análise semi-quantitativa de 52 pacientes com CEC oral, por meio de imuno-histoquímica, sendo os cálculos e gráficos estatísticos feitos através do software Epi Info® v3.4.3, 2007. A frequência de positividade da expressão CA-IX confirmou a existência de diferenças biológicas entre as expressões negativa e positiva da proteína (p=0,027). Desta forma, a expressão citoplasmática positiva mostrou uma relação significante com a ocorrência de linfonodos acometidos (p=0,025) e a expressão membranar negativa de CA-IX foi predominante nos casos com o infiltrado inflamatório intenso (p=0,044). Em relação às curvas de sobrevida, as expressões positivas fraca e forte de CA-IX membranar mostraram significância referente à Sobrevida Livre de Doença Local (LDL) (p=0,038); já as expressões citoplasmáticas negativa e positiva da proteína apresentaram significância para a Sobrevida Doença Específica (DE) (p=0,022). A análise multivariada confirmou a expressão citoplasmática de CA-IX como um fator de risco para a ocorrência de óbito doença específica, aumentando esse risco em aproximadamente 3x (HR=2,84; IC= 1,02-7,87). Em relação ao PAI-1, o nível da expressão citoplasmática da proteína mostrou relação significante com o grau de diferenciação tumoral (p=0,027) e as expressões citoplasmáticas e membranares positivas apresentaram associação com o infiltrado inflamatório moderado (p=0,013; p=0,033, respectivamente). Já para o prognóstico, as expressões membranares negativa e positiva de PAI-1 apresentaram uma associação significante com a recidiva local (p=0,027) e a análise multivariada confirmou a expressão membranar positiva da proteína como um fator de risco para a ocorrência de tal recidiva, aumentando esse risco em aproximadamente 14x (OR=14,49; IC= 1,40-150,01). O grau de diferenciação tumoral também foi significantemente associado com as expressões citoplasmáticas negativa e positiva de VEGF (p=0,035) e foi observada uma relação entre a presença do infiltrado inflamatório e as expressões positivas fraca e forte da proteína (p=0,038). Por fim, não foram encontradas significâncias estatísticas entre o hábito tabagista e as expressões de CA-IX, PAI-1 e VEGF, no entanto, acredita-se que este resultado seja decorrente da composição da casuística do trabalho. Assim, a busca de biomarcadores para o CEC oral é um desafio que deve ser assumido por grupos de pesquisas que trabalham com a doença, com o intuito de elucidar mecanismos da gênese tumoral que ainda não foram compreendidos. / Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) is a significant cause of mortality and morbidity and is mainly related to the use of alcohol and tobacco. Some genetic markers of treatment response and clinical evolution have been identified for this carcinoma, such as HIF1α, which promotes transcription of more than 100 genes involved in cell hypoxia response, among these: CA IX, PAI-1 and VEGF. In order to observe the influence of these proteins in tumor clinicopathological and prognostic features, as well as observe the activity of the constituents of tobacco in hypoxic mechanism, a semi-quantitative analysis of 52 patients with oral cancer was performed, by means of immunohistochemistry, being the statistical calculations and graphics performed by Epi Info® v3.4.3, 2007. The frequency of CA-IX positive expression confirmed the existence of biological differences between the negative and positive expressions of protein (p=0.027). Furthermore, the cytoplasmic positive expression showed a significant relationship with the occurrence of regional lymph node metastases (p=0.025) and CA-IX membrane negative expression was predominant in cases with intense inflammatory infiltrate (p=0.044). Regarding to the survival curves, the CA-IX weak and strong expression of membrane showed significance with respect to the Local Disease-Free Survival (p=0.038), whereas positive and negative cytoplasmic protein expressions were significant for Disease Specific Survival (p=0.022). Multivariate analysis confirmed the cytoplasmic CA-IX expression as a risk factor for the occurrence of disease specific death, with approximately 3-fold increased risk (HR=2.84, CI=1.02-7.87). The cytoplasmic expression level of PAI-1 showed significant correlation with the degree of tumor differentiation (p=0.027) and both the cytoplasmic expressions and positive membrane were associated with mild infiltration (p=0.013, p=0.033, respectively). Concerning to prognostic characteristics, PAI-1 positive and negative membrane expression showed a significant association with local relapse (p=0.027). Moreover, multivariate analysis confirmed the PAI-1 positive membrane expression of as a risk factor for the occurrence of this recurrence, with approximately 14-fold increased risk (OR=14.4, CI=1.40-150.01). The degree of tumor differentiation was also significantly associated with VEGF negative and positive cytoplasmic expression (p=0.035) and a relationship between the presence of inflammatory infiltrate and the weak and strong positive expression of the protein (p=0.038) was observed. Finally, statistical significance between the smoking habit and the CA-IX, PAI-1 and VEGF expression of were not found, but, it is believed that this result was due to the composition of the work casuistry. Thus, the search for biomarkers for OSCC is a challenge which must be faced by research groups, in order to elucidate mechanisms of tumorigenesis that are not yet understood.

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Orientador: Maria Alice da Cruz Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T15:24:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_MoniqueCulturatoPadilha_M.pdf: 7402848 bytes, checksum: 64244a22fab0eb94170d857f28da8e50 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), o principal regulador da angiogênese e da permeabilidade vascular, foi recentemente reconhecido como neurotrófico, neurogênico e neuroprotetor, sendo, portanto, regulado positivamente em muitos processos neuropatológicos. Neste modelo experimental de quebra da barreira hematoencefálica (BHE) pelo veneno da aranha Phoneutria nigriventer (PNV), a expressão do VEGF e seus receptores tirosina-quinase, Flt-1 e Flk-1 e de seus RNAs mensageiros foi investigada no hipocampo e cerebelo de ratos Wistar (Rattus norvegicus) por imunohistoquímica (IHQ), western blotting (WB) e reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR). Paralelamente, a integridade da BHE foi avaliada através da expressão das proteínas da via paracelular, Ocludina e ?-catenina, e da principal proteína da membrana basal, a Laminina, que estão presentes no endotélio na interface sangue-cérebro. O estudo foi realizado em ratos de 14 dias (neonatos) e de 8-10 semanas (adultos jovens) para avaliar diferenças em função da idade na funcionalidade da BHE e na possível mediação dos efeitos neurotóxicos do PNV pelo VEGF. A via escolhida para administração de PNV (1,7 mg/kg em 0,5ml de salina 0,9%) foi intraperitoneal, devido sua administração mais favorável nos animais neonatos. Os tempos de 2, 5 e 24 horas após a administração de PNV visaram investigar a expressão das proteínas, RNAs mensageiros e uma possível mediação pelo VEGF na fase aguda do envenenamento. A administração do PNV provocou sinais imediatos de intoxicação nos animais, os quais foram mais severos e imediatos nos neonatos do que nos adultos. No hipocampo, os dados do WB mostraram aumento da expressão de VEGF, Flt-1 e Flk-1 e respectivos RNAs mensageiros, que foram concomitantes com o desenvolvimento de edema perivascular e diminuição da expressão da Ocludina, ?-catenina e Laminina. Os dados da IHQ mostraram que a imunorreatividade de VEGF ocorreu nos corpos dos neurônios piramidais e dendritos nos subcampos CA1, CA2, CA3 e giro denteado do hipocampo, em contraste com a marcação nuclear de Flt-1 e Flk-1. O PNV aumentou visivelmente a imunomarcação das três proteínas. No cerebelo, os dados do WB e IHQ mostraram que o PNV induziu aumento na expressão dos componentes do sistema VEGF/Flt-1/Flk-1. Células presentes na camada granular e molecular que não mostraram marcação nos animais controles passaram a ser positivas nos animais xviii envenenados, principalmente as células de Purkinje. Os animais adultos apresentaram aumentos mais proeminentes no sistema VEGF/Flt-1/Flk-1 do cerebelo do que os recémnascidos; nestes, o PNV induziu diminuição na expressão da Ocludina, ?-catenina e Laminina, enquanto nos adultos a diminuição ocorreu apenas na Ocludina e ?-catenina. O veneno da aranha P. nigriventer contem peptídeos neurotóxicos que causam excitabilidade na neurotransmissão nervosa por modificarem a fisiologia dos canais de sódio, potássio e cálcio. Uma vez que a dinâmica das alterações descritas diferiu entre regiões cerebrais e entre animais neonatos e adultos jovens, sugerimos particularidades regionais e de funcionalidade, tanto da BHE, como dos neurônios imunorreativos em resposta ao PNV. Estes resultados são os primeiros a demonstrar alterações do sistema VEGF/Flt-1/Flk-1 no hipocampo e cerebelo que cursam com sinais neuroexcitotóxicos dos animais que foram tratados com o veneno / Abstract: Vascular endothelial growth factor (VEGF), a major regulator of developmental angiogenesis and vascular permeability, was recently recognized as neurotrophic, neurogenic and neuroprotector, hence being upregulated in many neuropathological processes. In this experimental model of blood brain barrier (BBB) breakdown by the Phoneutria nigriventer spider venom (PNV), the expression of VEGF and its receptor tyrosine kinases, Flt-1 and Flk-1 and their mRNAs was investigated in the hippocampus and cerebellum of Wistar rats (Rattus norvegicus) by immunohistochemistry (IHC), western blotting (WB) and real time polymerase chain reaction (qPCR). Simultaneously, the BBB integrity was assessed through expression of paracellular pathway proteins, ?- catenin and Occludin, and the main basement membrane protein, Laminin, which are present in the endothelium blood-brain interface. The study was performed in rats by 14 days (neonates) and 8-10 weeks (young adults) to assess differences related to age in the BBB functionality and the possible mediation of the PNV neurotoxic effects by VEGF. The via chosen for PNV administration (1.7 mg/kg in 0.5 ml of 0.9% saline) was intraperitoneally, due to more favorable application in neonate animals. The times of 2, 5 and 24 hours after PNV administration aimed to investigate the expression of proteins, mRNAs, and possible mediation by VEGF in acute envenomation. The PNV administration provoked immediate signs of intoxication in animals, which were more severe and immediate in neonates than in adults. In hippocampus, the WB data showed increased expression of VEGF, Flt-1 and Flk-1 and their mRNAs, which were concomitant with the development of perivascular edema, and decreased expression of Occludin, ?-catenin and Laminin. IHC data show that VEGF immunoreactivity occurred in the bodies and dendrites of pyramidal neurons in the subfield CA1, CA2, CA3 and dentate gyrus of the hippocampus, in contrast with nuclear staining of Flt-1 and Flk-1. The PNV visibly increased immunostaining of the three proteins. In cerebellum, the WB data and IHC showed that the PNV induced an increase in the expression of VEGF/Flt-1/Flk-1 system components. Cells in the granular and molecular layer showed no marking in the control animals became positive in animals envenomed, especially Purkinje cells. Adult animals showed increases more prominent in the VEGF/Flt-1/Flk-1 system of the cerebellum than xx neonates; in these animals, the PNV induced decrease in expression of Occludin, ?-catenin and Laminin, while in adults the decrease occurred only in Occludin and ?-catenin. The venom of the spider P. nigriventer contains peptides that cause excitability in the nervous neurotransmission by modifying the physiology of sodium, potassium and calcium channels. Since the dynamics of the changes described differed between brain regions and among neonates and young adult animals, we suggest regional specificities and functionality of BHE and immunoreactive neurons in response to PNV. These results are the first to demonstrate changes in the hippocampus and cerebellum VEGF/Flt-1/Flk-1 system that courses with neuroexcitotoxic signs of animals that were treated with venom / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia

A retinopatia diabética (RD) é uma complicação microvascular do diabetes melito, sendo a principal causa de cegueira adquirida. Fatores angiogênicos como o vascular endothelial growth factor (VEGF) estão envolvidos na patogênese da RD. O VEGF-A é uma citocina potente e multifuncional que atua através dos receptores VEGFR-1 e VEGFR-2 expressados no endotélio vascular causando aumento da permeabilidade vascular e estímulo à neovascularização em processos fisiológicos e patológicos. A expressão do VEGFR-1 é acentuada por hipóxia e, apesar da afinidade, apresenta fraca resposta ao VEGF enquanto o VEGFR-2 é o principal mediador mitogênico, angiogênico e do aumento da permeabilidade vascular. Alguns polimorfismos do VEGF têm sido estudados na suscetibilidade e risco de progressão da RD. Importante associação entre o polimorfismo -634C/G e a presença de RD é relatada principalmente em relação ao alelo C. A homozigose CC estaria relacionada à RDP e níveis sérico e vítreo aumentados de VEGF sugerindo que a presença do alelo C seja um fator de risco independente para RD. Os conhecimentos sobre o VEGF levaram ao desenvolvimento de agentes anti-VEGF (pegaptanibe, ranibizumabe e bevacizumabe) com objetivo de inibir a neovascularização patológica. A terapia anti-VEGF é uma realidade cujos resultados são cada vez mais promissores na prática médica do tratamento da RD. / Diabetic retinopathy (DR), a DM microvascular complication, is the leading cause of blindness. Angiogenic factors such as vascular endothelial growth factor (VEGF) are involved in the pathogenesis of DR. VEGF-A is a potent, multifunctional cytokine that acts through the receptors VEGFR-1 and VEGFR-2 expressed in the vascular endothelium and causing increased vascular permeability and neovascularization stimulation in both physiological and pathological processes. The expression of VEGFR-1 is upregulated by hypoxia and is less responsive to VEGF compared to VEGFR-2 which is the main mediator mitogenic, angiogenic, and increased vascular permeability. VEGF polymorphisms have been studied in DR susceptibility and progression. Significant association between the polymorphism -634C/G and the presence of DR is reported mainly in relation to allele C. The homozygous CC is associated to proliferative DR and to increased vitreous and serum levels of VEGF suggesting that the presence of the C allele is an independent risk factor for RD. The knowledgement of VEGF lead to the development of anti-VEGF drugs (pegaptanib, ranibizumab and bevacizumab) aiming to prevent pathological neovascularization. The anti-VEGF therapy is a reality in practice medical treatment of DR.

Introdução: O Fator de Crescimento Endotelial Vascular - A (VEGF) é um dos principais promotores da angiogênese e demonstra relação com prognóstico no câncer gástrico (CG). Objetivos: Correlacionar a expressão imunoistoquímica do VEGF com o estadiamento e sobrevida no câncer gástrico. Métodos: 45 espécimes de adenocarcinomas foram avaliados para expressão imunoistoquímica do VEGF. O estadiamento patológico (pTNM), características histológicas e sobrevida foram avaliados empregando os testes ANOVA, análise multivariada e curva de Kaplan-Meier. Resultados: Foi observada maior expressão do VEGF na comparação entre os estadiamentos IA e IB vs II,III e IV (p<0,001). O VEGF menos expresso estava relacionado com maior penetração do tumor na parede gástrica (p<0,003) e presença de comprometimento linfonodal (p<0,001). Pacientes apresentando tumores com maior expressão de VEGF tiveram maior sobrevida (HR 0,37; IC 95%: 0,17-0,79). Conclusão: Houve associação inversa na expressão do VEGF com o estadiamento dos tumores gástricos. A análise multivariada demonstra a expressão do VEGF como fator prognóstico independente na sobrevida dos pacientes com câncer gástrico. / Background: Vascular endothelial growth factor A (VEGF) is one of the main promoters of angiogenesis and correlates with gastric cancer (GC) prognosis. Aims: To evaluate the correlation between immunohistochemical VEGF expression and the gastric cancer stage and survival rate. Methods: VEGF expression was evaluated by immunohistochemistry in 45 adenocarcinoma specimens. Pathologic staging (pTNM), histological characteristics and survival were assessed using an ANOVA test, a multivariate analysis and the Kaplan-Meier method. Results: A higher VEGF expression level was observed in stages IA and IB compared with II, III and IV (p<0.001). A lower VEGF expression level correlated with a greater tumor penetration level in the gastric wall (p<0.003) and the extent of tumor spread to the lymph nodes (p<0.001). Higher VEGF scores correlated with a longer survival time (HR 0.37; 95% CI: 0.17 - 0.79). Conclusion: An inverse correlation was observed between VEGF expression and gastric tumor stage. A multivariate analysis demonstrates that VEGF expression is an independent prognostic factor for survival in gastric cancer.