O sistema imune inato é organizado por processos complexos que envolvem os diversos tipos celulares que culminam na eliminação de uma variedade de microorganismos a fim de proteger o organismo de infecções. Os neutrófilos são células importantes neste sistema, sendo capazes de migrar rapidamente ao foco da infecção. Estas células reconhecem e fagocitam partículas estranhas e atuam no sentido de elimina-los através da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), proteínas antimicrobianas e enzimas proteolíticas dos grânulos, que são liberadas no fagossomo e no espaço extracelular. Entretanto, em algumas doenças inflamatórias e autoimunes têm sido encontradas lesões nos tecidos envolvendo a produção excessiva de EROs pelos neutrófilos, desencadeada por imunocomplexos (ICs) via receptores Fc gama (Fc) e de complemento (CR). Assim, a modulação da ativação destes receptores e da produção de EROs é importante na manutenção da homeostasia. Nas últimas décadas, flavonóides são considerados como metabólitos secundários promissores mostrando atividade antioxidante e imunomodulatória. Neste trabalho foi avaliado o efeito modulatório dos flavonóides galangina, kaempferol, quercetina e miricetina em algumas funções efetoras de neutrófilos humanos, como o metabolismo oxidativo estimulado via receptores de membrana Fc e/ou CR, fagocitose e atividade microbicida, além do efeito citotóxico, antioxidante e inibitório dessas substâncias sobre a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e NADPH oxidase. Os flavonóides analisados mostraram um efeito modulatório negativo no metabolismo oxidativo dos neutrófilos humanos na seguinte ordem: galangina> kaempferol> quercetina > miricetina. Embora a galangina tenha exercido maior atividade, sua ação antioxidante e inibitória na atividade das enzimas MPO e NADPH oxidase foi a menos efetiva dentre os flavonóides avaliados. Além disso, esta substância inibiu de maneira mais acentuada a resposta celular mediada por ambos os receptores Fc e CR quando comparado a estimulação destes receptores individualmente. As substâncias contendo o grupo catecol, quercetina e miricetina mostraram elevada eficiência na inibição da atividade das enzimas NADPH oxidase e MPO, e na redução do radical livre 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH). De maneira geral, os flavonóides não interferiram no processo fagocítico e no mecanismo microbicida, e não induziram toxicidade e morte celular por apoptose ou necrose. Os resultados apresentados neste trabalho mostram uma possível aplicação destes flavonóides como fármacos de origem natural em doenças inflamatórias que apresentem acúmulo de neutrófilos, sendo uma ferramenta promissora para o tratamento efetivo destas doenças. / The innate immune system is composed of complex biological processes involving a variety of cell types that eliminate invading microorganisms to protect the host against infection. Neutrophils are key effector cells of this system, being able to migrate rapidly to infection sites. These cells recognize and engulf foreign particles by phagocytosis, and act to destroy them through production and release of reactive oxygen species (ROS), antimicrobial proteins and proteolytic granule enzymes, which are delivered to the phagossomes and to the extracellular environment. However, tissue damage related to excessive neutrophil ROS production triggered by immune complexes (ICs) via Fc-gamma (FcR) and complement receptors (CR) has been found in some inflammatory and autoimmune diseases. So, modulation of both the activation of these receptors and ROS generation are important to the maintenance of body homeostasis. In the last decades, flavonoids have been considered promising plant secondary metabolites with antioxidant and immunomodulatory activity. This study evaluated the modulator effect of four flavonoids (galangin, kaempferol, quercetin and myricetin) in some human neutrophil effector functions, such as the oxidative metabolism stimulated via FcR and CR classes of membrane receptors, phagocytosis and microbicidal activity, as well as the cytotoxic, antioxidant and inhibitory effect of these compounds in the MPO and NADPH oxidase activity. The flavonoids studied showed a negative modulator effect in the human neutrophils oxidative metabolism in the following ranking order: galangin > kaempferol > quercetin > myricetin. Although galangin had shown the highest activity, it was the least effective antioxidant and inhibitor of MPO and NADPH oxidase activity among the flavonoids tested herein. Furthermore, this compound inhibited more the cellular response mediated by both Fc and CR receptors than by each one of them individually. The flavonoids bearing the catechol group, quercetin and myricetin, had a high efficiency to inhibit NADPH oxidase and MPO activity, as well as to reduce the 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazil (DPPH) free radical. In general, the flavonoids did not interfere in the phagocytic process and microbicidal mechanism, and also did not induce toxicity and cell death by apoptosis or necrosis. The group of results presented here provides a possible application of these flavonoids as drugs of natural source in inflammatory diseases with excessive neutrophil infiltration, being a promising tool for an effective treatment of these illnesses.

Croton é o segundo maior gênero de Euphorbiaceae, com aproximadamente 1.300 espécies, sendo 300 delas existentes no Brasil em diversos biomas. Várias espécies apresentam um característico látex vermelho-sangue, chamado \"sangue-de-dragão\", sendo usadas mundialmente na medicina tradicional. Estudos químicos indicam a presença de múltiplas classes de compostos, sendo as principais: diterpenos (clerodanos, labdanos, kauranos e traquilobanos), óleos voláteis, esteroides e triterpenoides, alcaloides, proantocianidinas e flavonoides. Estes últimos são metabólitos secundários com grande variedade estrutural, possuindo atividades biológicas reconhecidas e de potencial interesse medicinal. Croton floribundus Spreng. e Croton urucurana Baill., por apresentarem várias atividades biológicas de interesse medicinal, são utilizadas na medicina tradicional. Entretanto, poucos estudos têm sido desenvolvidos no sentido de se conhecer melhor aquela classe de substâncias fenólicas. Um dos objetivos deste trabalho corresponde ao isolamento e identificação de flavonoides de folhas de Croton floribundus e Croton urucurana. O material pulverizado foi extraído por refluxo com metanol 80% e concentrado. O extrato seco foi tratado com tolueno e diclorometano. A fase metanólica resultante foi fracionada e subfracionada por meio de cromatografia em coluna de PVPP e Sephadex LH-20, e cromatografia em papel. Depois de fracionadas, as amostras foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e os compostos identificados por ressonância magnética nuclear de hidrogênio (1H) e carbono (13C) ou por CLAE com co-injeção de amostras autênticas. Em ambas as espécies foi identificado o flavonoide acilado tilirosídeo (5). Este parece ser um flavonoide característico do gênero. É um derivado acilado de kaempferol, isolado de um grande número de espécies de Croton. Em C.floribundus foram identificados três triglicosídeos: alcesefolisídeo (1), mauritianina (2), e isoramnetina-3-O-(2,6-di-ramnosil)-galactosídeo (3). Foram identificados também: quercetina-3-O-glucosídeo (4), helicrisosídeo-3\'-metil-éter (6), kaempferol (7), isoramnetina (8) 3-O-metil-kaempferol (9) e 3-O-metil isoramnetina (10). Em C.urucurana, foram identificados: orientina (11), rutina (12), vitexina (13), quercetina-7-O-ramnosídeo (14), ramnetina-3-O-ramnosídeo (15) e quercetina (16). Os flavonoides 1, 3, 14 mostraram-se inéditos, tanto para o gênero, quanto para a família. O flavonoide 15 foi inédito para o gênero, tendo sido encontrado na família, porém, na subfamília Euphorbioideae. Com a detecção do tilirosídeo, foi verificada a possibilidade de se utilizar os extratos proteicos de folhas jovens dessas duas espécies para acilar enzimaticamente flavonoides de interesse, pois estudos na literatura indicam que a acilação pode aumentar a estabilidade e biodisponibilidade de flavonoides, e também melhorar suas atividades biológicas. Para isso, folhas jovens foram coletadas e mantidas em N2 líquido, trituradas e extraídas com tampão de extração. O extrato obtido foi concentrado, sua concentração proteica foi determinada e, posteriormente, foi utilizado para acilar os substratos quercetina-3-O-glucosídeo, kaempferol-3-O-glucosídeo, quercetina-3-O-galactosídeo e quercetagetina-7-O-glucosídeo. p-Cumaroil-CoA e uma mistura de ácido p-cumárico e Coenzima A, foram utilizados como agentes acilantes. Foi verificado que o rendimento do extrato proteico de C.floribundus foi menor que o de C.urucurana. Enquanto o extrato de C.urucurana acilou os substratos glicosilados na posição 3, (kaemferol-3-O-glucosídeo, quercetina-3-O-glucosídeo e quercetina-3-Ogalactosídeo), não acilou o mono-glicosilado na posição 7 (quercetagetina-7-Oglucosídeo), indicando que as aciltransferases dessa espécie são regiosseletivas quanto à posição do resíduo de açúcar. Também demonstrou capacidade de acilação usando como agentes acilantes p-cumaroil-CoA e a combinação ácido p-cumárico + CoA + ATP. O extrato proteico de C.floribundus, talvez por ter apresentado um menor rendimento de extração, acilou apenas o kaempferol-3-O-glucosídeo, resultando no tilirosídeo, o flavonoide acilado característico do gênero / Croton is the second largest genus of Euphorbiaceae, with approximately 1,300 species, 300 among them native from Brazilian biomes. Several species of the genus, used worldly in traditional medicine, possess a characteristic blood colored latex, called \"dragon\'s blood\". Chemical studies about Croton species have uncovered multiple classes of secondary metabolites, such as diterpenes (clerodanes, labdanes, kauranes and trachylobanes), volatile oils, steroids and triterpenoids, alkaloids, proanthocyanidins and flavonoids. The latter are secondary metabolites with high structural diversity and recognized as having biological activities with medicinal potential. Croton floribundus Spreng. and C. urucurana Baill. have shown several medicinally promising biological activities and are used in traditional medicine. However, few investigations have been performed aiming the flavonoid chemistry of any of the two species. One of the objectives of the present study is the isolation and identification of flavonoids from leaves of C. floribundus and C. urucurana. Powdered material from both species was extracted by reflux with 80% methanol. The dry extracts were treated with toluene and dichloromethane, lyophilized and solubilized in methanol. The methanol solution was analyzed by polyvinylpolypyrrolidone column chromatography (PVPP-CC). The fractions obtained were further analyzed by PVPP-CC, Sephadex LH-20 column chromatography and paper chromatography. The fractions and isolated compounds obtained were analyzed by HPLC. Isolated compounds were identified by 1H and 13C NMR and HPLC co-chromatography with authentic samples. The acylated flavonol tiliroside (5) was obtained from extracts of both species. It seems to be a characteristic marker of the genus, having been reported for a high number of Croton species. From the leaf extract of C. floribundus three triglycosides were obtained in the present work: alcesefoliside (1), mauritianin (2) and isorhamnetin-3-O-(2,6-dirhamnosyl)-galactoside (3). Other glycosides identified were quercetin-3-O-glucoside (4), 3\'-helichrysoside-3-O-methyl ether (6), kaempferol (7), isorhamnetin (8), 3-O-methyl-kaempferol (9) and 3-O-methyl-isorhamnetin (10). The following compounds were obtained from C. urucurana: orientin (11), rutin (12), vitexin (13), quercetin-7-O-rhamnoside (14), rhamnetin-3-O-rhamnoside (15) and quercetin (16). Flavonoids 1, 3 and 14 are new regarding genus Croton and family Euphorbiaceae. Flavonoid 15 was previously found in subfamily Euphorbioideae and is now reported for the first time in Croton. Taking into account the detection of tiliroside in the material analyzed, and that acylation increases both stability and bioavailability of flavonoids, while enhancing their biological activity, an approach was planned to use protein extracts of young leaves of both species aiming the enzymatic acylation of several flavonoids. Young leaves were maintained in liquid N2, ground and treated with extraction buffer. The extract obtained was concentrated and mixed with p-coumaroyl-CoA and a mix of p-coumaric acid and Coenzyme A. The extract was used in assays aiming the acylation of quercetin-3-O-glucoside, kaempferol-3-O-glucoside, quercetin-3-O-galactoside and quercetagetin-7- O-glucoside. The concentration of the protein extract from C. floribundus was lower than that of C. urucurana. The extract from C. urucurana acylated the 3-O-glycosilated substrata kaempferol-glucoside, quercetin-glucoside and quercetin-galactoside, but was ineffective toward quercetagetin-7-O-glucoside. These results suggest that acyltransferases in the extract are regioselective about the position of attachment of the sugar moiety. They were shown to be effective using either p-coumaroyl or the combination p-coumaroyl-CoA + ATP. C. floribundus protein extract acylated only kaempferol-3-O-glucoside, yielding tiliroside, the characteristic acylated flavonoid of Croton

Espécies de Croton são fonte abundante de metabólitos secundários, com ampla diversidade de atividades farmacológicas, muitas delas conhecidas e utilizadas popularmente. O presente projeto teve como objetivos ampliar o conhecimento sobre a química do gênero pela da prospecção de flavonoides e componentes de óleos voláteis das especies C. dichrous, C. erythroxyloides, C. myrianthus e C. splendidus, além de realizar um estudo antiproliferativo, gerando conhecimento potencial para a ampliação do emprego do gênero para a medicina de compostos naturais. Como principais compostos identificados destacam-se 1,8 cineol, α-bisabolol, ledol e linanol, nos óleos voláteis; os flavonoides tilirosídeo, rutina e vitexina e o triperpeno lupeol. Atividades antiproliferativas contra as linhagens U251 glioma, MCF-7 mama, H460 pulmão, K562 leucemia, PC-3 próstata e OVCAR-3 ovário foram observadas, com destaque para o extrato foliar de C. erythroxyloides, que teve atividade potente contra as duas últimas linhagens. O presente trabalho colaborou para a melhor elucidação da química e atividades biológicas de espécies ainda não estudadas de Croton, gênero com enorme potencial de utilização medicinal e de grande ocorrência no país. / Croton species are a great source of secondary metabolites, with a wide variety of pharmacological activities, many of these known and popularly used. This project aimed to increase knowledge about the chemistry of the genre through the exploration of flavonoids and essential oil components of the species C. dichrous, C. erythroxyloides, C. myrianthus and C. splendidus, and by antiproliferative tests, generating potential knowledge for extending the use of gender in medicine of natural compounds. The main identified compounds were 1,8 cineol, α-bisabolol, ledol and linanool present at the essential oil, the flavonoids tiliroside, rutin and vitexin and the triterpenoid lupeol. Antiproliferative activity against U251 glioma, MCF-7 mammary, H460 lung, K562 leukemia, PC-3 prostate e OVCAR-3 ovary cell lines were found, and the leaf extract of C. erythroxyloides achieved potent activity against the last two cell lines. This work contributed for the elucidation of chemistry and biological activities of unstudied species of Croton, a genre with great potential for medicinal use and large occurrence in Brazil.

A exposição ao sol traz benefícios à saúde, no entanto, o excesso pode ocasionar danos cutâneos agudos e crônicos, dentre os quais se destacam as neoplasias. A fotoproteção é um método para a prevenção dos efeitos danosos da radiação ultravioleta (UV) e a biodiversidade Brasileira é campo fértil para as pesquisas nesta área. Dessa forma, os objetivos da presente pesquisa envolveram o desenvolvimento de formulações fotoprotetoras bioativas contendo rutina ou quercetina (compostos bioativos) e filtros solares físicos (dióxido de titânio e óxido de zinco); a caracterização das formulações por meio de ensaios físico (viscosidade aparente) e físico-químico (valor de pH); a determinação da eficácia fotoprotetora estimada por espectrofotometria de refletância difusa com esfera de integração; e a avaliação da estabilidade das preparações por meio do Teste de Estabilidade Normal (TEN). Na etapa do Desenvolvimento, a preparação composta por Dermabase® vegetal (10,0% p/p); sistema umectante (8,0% p/p); sistema emoliente (6,0% p/p); sistema quelante/antioxidante (0,6% p/p); sistema conservante (1,0% p/p); e água destilada recém destilada (74,4% p/p), foi selecionada como a formulação-base. As preparações contendo os compostos bioativos e ativos, isolados ou em associações, possuíram valores de pH biocompatíveis com o da pele, abrangendo o intervalo de 4,28 (5,0% p/p de rutina) a 7,58 (5,0% p/p de dióxido de titânio); aspecto de creme com intervalo de viscosidade aparente entre 12400 (5,0% p/p de óxido de zinco + 5,0% p/p de dióxido de titânio + 2,5% p/p de quercetina) e 31900 cP (5,0% p/p de óxido de zinco + 5,0% p/p de dióxido de titânio + 5,0% p/p de rutina); eficácia fotoprotetora estimada na faixa de fator de proteção solar (FPS) de 2,1 (2,5% p/p de quercetina) a 45,3 (5,0% p/p de óxido de zinco + 5,0% p/p de dióxido de titânio + 5,0% p/p de quercetina); e amplo espectro de proteção com valor mínimo de comprimento de onda crítico igual a 377 nm (5,0% p/p de óxido de zinco). Por meio do TEN, as preparações contendo os compostos bioativos e ativos isolados ou a associação dos filtros solares físicos se mantiveram estáveis para os parâmetros de aspecto, FPS estimado, comprimento de onda crítico, valor de pH e viscosidade aparente, nas condições de armazenamento de 22,0 ± 2,0 °C; 5,0 ± 2,0 °C - exceto para a viscosidade aparente - e 40,0 ± 2,0 °C (120 dias). As associações dos filtros físicos com os compostos bioativos se apresentaram instáveis. Apesar das respostas favoráveis que os flavonoides apreciaram, sugerirem-se que novas pesquisas poderiam ser conduzidas com a finalidade de contornar tais problemas, inclusive, realizando a comprovação da eficácia antissolar in vivo das preparações de melhor desempenho. / Exposition to sunlight promotes health benefits, however, its excess may cause acute and chronic cutaneous damages, including neoplasias. Photoprotection is a preventive approach against ultraviolet (UV) radiation deleterious effects and Brazilian biodiversity is an interesting field to the progress of researches in this science segment. The objectives of this research were the development of bioactive sunscreens containing rutin or quercetin (bioactive compounds) and inorganic UV filters (titanium dioxide and zinc oxide); the preparations\' physical (apparent viscosity) and physicochemical (pH value) characterization; the in vitro evaluation of the formulations\' photoprotective efficacy by diffuse reflectance spectrophotometry equipped with integrated sphere; and the sunscreens\' stability analysis by Normal Stability Testing (NST). The vehicle was developed with the following components: Dermabase® vegetal (10.0% w/w); humectant system (8.0% w/w); emollient system (6.0% w/w); antioxidant/chelating system (0.6% w/w); preservatives (1.0% w/w); and distilled water/aqua (74.4% w/w). Formulations containing the bioactive and the UV filters, isolated or in association, were skin biocompatible with interval of pH values from 4.28 (rutin 5.0% w/w) to 7.58 (titanium dioxide 5.0% w/w); apparent viscosity values of 12400 (zinc oxide 5.0% w/w + titanium dioxide 5.0% w/w + quercetin 2.5% w/w) to 31900 cP (zinc oxide 5.0% w/w + titanium dioxide 5.0% w/w + rutin 5.0% w/w); in vitro photoprotection activity by sun protection factor (SPF) ranging from 2.1 (quercetin 2.5% w/w) to 45.3 (zinc oxide 5.0% w/w + titanium dioxide 5.0% w/w + quercetin 5.0% w/w); and broad spectrum property with minimum critical wavelength of 377 nm (zinc oxide 5.0% w/w). By NST, sunscreens with isolated bioactive and active compounds or the UV filters\' association were considered stable during 120 days for the following parameters: aspect, in vitro SPF, critical wavelength, pH value and apparent viscosity when samples were stored at 22.0 ± 2.0 °C; 5.0 ± 2.0 °C (excluding apparent viscosity) and 40.0 ± 2.0 °C. Associations of UV filters with bioactive compounds were instable. Although the favorable results that flavonoids have achieved, it is suggested further researches aiming at to overcome the identified inconvenient, performing the in vivo SPF determination on best performance formulations to prove the estimated in vitro data.

A cultura popular atribui ao gênero Passiflora várias propriedades medicinais e funcionais. Frutas frescas e secas, cascas, infusões e suco da polpa de maracujás silvestres são consumidos e comercializados para controlar ansiedade, insônia, tremores, diabetes e obesidade, entre outras indicações. Dessa forma, os objetivos deste trabalho foram caracterizar e comparar as folhas e frutos (pericarpo, polpa e sementes) das espécies P. edulis Sims variedades BRS Sol do Cerrado, Ouro Vermelho e Gigante Amarelo, P. alata Curtis, P. setacea DC e P. tenuifila Killip em relação ao seu potencial funcional, avaliando-se conteúdos de compostos fenólicos totais, proantocianidinas, vitamina C, alcaloides, tipos e teores de flavonoides, controle potencial de glicemia pós-prandial (inibição de α-amilase e α-glicosidase in vitro) e capacidade antioxidante in vitro. O principal flavonoide encontrado tanto em folhas como em frutos foi a homoorientina e as maiores concentrações foram encontradas em folhas, seguido de pericarpo. Os maiores teores de alcaloides foram detectados nas polpas dos frutos de P. edulis (0,1-0,2 mg/100 g b.s.). As maiores concentrações de compostos fenólicos foram detectadas nas folhas de P. edulis e P. alata, porém as sementes de P. tenuifila e principalmente P. setacea apresentaram os teores mais elevados em comparação com as outras frações. Em relação às proantocianidinas, este é o primeiro estudo que mostra a presenças destes compostos em Passiflora spp, em concentrações significativamente maiores nas sementes. Além disso, o estilbeno piceatanol (3,4,3\',5\'-tetrahidroxi-trans-estilbeno) também foi encontrado nas sementes de P. edulis variedades BRS Ouro Vermelho (2 mg/100 g b.s.) e Gigante Amarelo (3 mg/100 g b.s.) e P. alata (10 mg/100 g b.s.). Os compostos fenólicos encontrados nas sementes de todas as espécies de Passiflora analisadas se mostraram potentes inibidores das enzimas α-amilase e α-glicosidase. Este trabalho mostrou que os frutos e as folhas de Passiflora spp podem ser considerados boas fontes de compostos bioativos, especialmente com atividade antioxidante, apresentando, portanto, potenciais efeitos benéficos sobre a saúde humana. / Folk culture assigns to the genus Passiflora various medicinal and functional properties. Fresh and dried fruits , barks , teas and wild passion fruit pulp juice are consumed and sold to control anxiety, insomnia , tremor , diabetes and obesity , among other indications .Thus, the aim of this study were to characterize the leaves and fruit (pericarp , pulp and seeds) of the species P. edulis Sims varieties BRS Sol do Cerrado, Ouro Vermelho e Gigante Amarelo, P. alata Curtis, P. setacea DC e P. tenuifila Killip in relation to their functional potential , evaluating content of total phenolic compounds , proanthocyanidins , vitamin C , alkaloids , types and levels of flavonoids, potential control of postprandial glycemia (inhibition of α-amylase and α-glucosidase in vitro) and in vitro antioxidant capacity. The main flavonoid found in both leaves and fruits was homoorientina and the highest concentrations were found in leaves, followed by pericarp . The highest levels of alkaloids were detected in the pulp of the fruits of P. edulis ( 0.1-0.2 mg/100 g b.s. ) . The highest concentrations of phenolic compounds were identified in the leaves of P. edulis and P. alata, but the seeds of P. tenuifila and especially P. setacea showed higher levels compared with the other fractions . With respect to proanthocyanidin, this is the first study to show the presence of these compounds in Passiflora spp at concentrations significantly increased in seeds. Furthermore, piceatannol stilbene ( 3,4,3\',5\'- tetrahydroxy -trans- stilbene ) was also found in the seeds of P. edulis varieties BRS Ouro Vermelho (2 mg/100 g d.w.) and Gigante Amarelo (3 mg/100 g d.w.) and P. alata (10 mg/100 g d.w.). Phenolic compounds found in the seeds of all species analyzed are good inhibitors of α-amylase and α-glicosidase. This work showed that the fruit and leaves of Passiflora spp. can be considered good sources of bioactive compounds, especially with antioxidant activity, thus presenting potential beneficial effects on human health.

Causada por protozoários do gênero Leishmania, a leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta milhões de pessoas em todos os continentes. São grandes os desafios no tratamento da leishmaniose porque os fármacos atualmente disponíveis apresentam alta toxicidade, efeitos colaterais, alto custo e resistência parasitária. Sendo assim, faz-se necessário o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento da doença de maneira mais eficiente. A investigação de novas alternativas terapêuticas, novos alvos bioquímicos, em particular a arginase em de Leishmania (L) amazonensis, é considerada um alvo interessante na busca de novos compostos leishmanicidas. A via bioquímica em que está envolvida a arginase é fundamental para a manutenção do ciclo de vida do parasito, sendo responsável pela hidrólise de L-arginina em L-ornitina em mamíferos. Muitos compostos oriundos de produtos naturais tem sido relatados como inibidores da arginase de L. (L.) amazonensis e a presença de grupos hidroxila em suas estruturas mostraram ser importantes na atividade inibidora da enzima. O objetivo desse trabaho estudar a interação bioquímica entre a enzima arginase de L. (L.) amazonensis, extratos vegetais, flavonoides e derivados do ácido cafeico. O extrato acetônico de folhas de Qualea grandiflora apresentou maior capacidade inibitória da arginase (IC50 = 1,7 ± 01 µg/mL) dentre os extratos analisados. Dentre os flavonoides, o composto mais potente foi a taxifolina (IC50 = 1,7 ± 0,2 µM). O verbascosídeo foi o derivado do ácido cafeico com maior potencial de inibição da arginase (IC50 = 0,5 ± 0,2 µM). As estruturas desses compostos podem servir como referência no desenvolvimento de novas drogas para o controle da leishmaniose, que tenham como alvo a arginase. / Caused by protozoa of the genus Leishmania, leishmaniosis is an infectious disease that affects millions of people on all continents. The currently available drugs are highly toxic, expensive, have side effects and parasitic resistance and for these reasons there is a need of developing new drugs to more effective treatment of the disease. The research of new therapeutic alternatives, new biochemical targets, in particular the arginase of Leishmania (Leishmania) amazonensis is considered an interesting target in the search for new compounds leishmanicidal. The biochemistry of arginase pathway is essential for the survival of the parasite, is also responsible for hydrolysis of L- arginine to L- ornithine in mammals. Many compounds from natural products has been reported as inhibitors of arginase L. (L.) amazonensis, and the presence of hydroxyl groups in their structures shown to be important for inhibitory activity of the enzyme. This work studies the biochemical interaction between the arginase enzyme, plant extracts, flavonoids and derivatives of caffeic acid. The acetone extract of Qualea grandiflora leaves showed higher inhibitory capacity of arginase (IC50 = 1.7 ± 01 µg/mL) from the analyzed extracts. Among the flavonoids, the most potent compound was taxifolin (IC50 = 1.7 ± 0.2 µM). The verbascosideo was the derivative of caffeic acid with greater potential for arginase inhibition (IC50 = 0.5 ± 0.2 µM) The structures of these compounds can serve as a reference in developing new drugs for the control of leishmaniosis, which target arginase.

Glioblastoma multiforme é um câncer do sistema nervoso central agressivo e invasivo. Apesar dos avanços terapêuticos com cirurgia, radiação e quimioterapia, o tempo de sobrevida média permanece reduzido. Os polifenóis têm sido relatados por apresentarem várias atividades biológicas, incluindo atividade anticâncer. Nesse estudo, foi avaliada a potencial atividade antiglioma do extrato de Achyrocline satureioides (marcela) e seus principais flavonoides em modelos de glioblastoma in vitro e in vivo. O extrato de A. satureioides (100 μg/mL) assim como os flavonoides isolados (quercetina, 3-O-metilquercetina, luteolina e achyrobichalcona; em 10 μM ou doses menores) reduziram a proliferação de três linhagens celulares de glioma (C6, U87 e U251). A combinação do extrato de A. satureioides com temozolomida (TMZ) demonstrou elevada atividade antiproliferativa comparada com o quimioterápico sozinho em uma menor concentração (50 μg/mL). Cabe ressaltar que nenhuma toxicidade foi observada nas células sadias do cérebro (astrócitos primários, neurônios primários e culturas organotípicas de fatias do hipocampo) na concentração que afetou as células de gliomas. Entretanto, a administração do extrato de A. satureioides no modelo tumoral em ratos não apresentou o mesmo efeito conforme observado in vitro. Além disso, ele foi capaz de bloquear o efeito do TMZ. Esses resultados geram preocupação uma vez que extratos de plantas poderiam afetar a atividade de fármacos anticâncer, especialmente considerando que o chá de marcela é amplamente consumido pela população da América do Sul e indicado para alívios de sintomas como dores de cabeça e náuseas. Portanto, mais estudos in vivo usando os flavonoides isolados são necessários para investigar a potencial atividade antiglioma observada in vitro. / Glioblastoma multiforme is an aggressive and invasive central nervous system cancer. Despite the therapeutic improvements with surgery, radiation, and chemotherapy, the median survival times remain dismal. Polyphenols have been reported to have numerous biological activities, including anticancer activity. In this study, the potential antiglioma activity of Achyrocline satureioides (marcela) extract and its main flavonoids was evaluated both in vitro and in vivo in glioblastoma models. A. satureioides extract (100 μg/mL) as well as the isolated flavonoids (quercetin, 3-O-methyl-quercetin, luteolin and achyrobichalcone; at 10 μM or lower doses) reduced proliferation of three glioma cell lines (C6, U87 and U251). Combination of A. satureioides extract with temozolomide (TMZ) showed enhanced antiproliferative activity compared to the chemotherapeutic alone at a lower concentration (50 μg/mL). Importantly, no toxicity was observed in healthy cells of the brain (primary astrocytes, primary neurons, and organotypic hippocampal slice cultures) at the concentration that affected glioma cells. However, administration of A. satureioides extract did not show the same effect in a rat tumor model as observed in vitro. In addition, it blocked the effect of TMZ. These results raise concern since plant extracts could affect the activity of anticancer drugs, especially considering that marcela tea is widely consumed by the South American population and indicated for relief of symptoms such as headaches and nausea. Therefore, further in vivo studies using the isolated flavonoids are required to investigate their potential antiglioma activity observed in vitro.

O auxílio terapêutico exercido pelas própolis de abelhas Apis mellifera é conhecido desde tempos imemoriais e suas propriedades têm sido amplamente estudadas. Contudo, as própolis produzidas por abelhas sem ferrão foram ainda pouco investigadas. Desta forma, este trabalho se propôs a avaliar algumas características químicas e atividades biológicas de própolis de abelhas sem ferrão da espécie Frieseomelitta varia obtidas em épocas e locais diferentes. Para tanto, obtiveram-se extratos etanólicos de própolis coletadas na região de Alfenas-MG (Fv1, Fv2 e FvA), os quais foram avaliados quanto ao perfil de absorção da luz UV visível, composição por flavonoides (com base em quercetina), compostos fenólicos (com base em ácido gálico) e perfil químico por cromatografia em camada delgada (CCD). Adicionalmente, Fv1, Fv2 e FvA foram submetidos a testes in vitro que analisaram suas atividades antimicrobiana, antioxidante e antiproliferativa. O espectro de absorção da luz UV visível apresentou picos característicos de fenólicos e flavonoides e os testes quantitativos mostraram baixos valores destes compostos fitoquímicos. A CCD, por sua vez, revelou a presença de terpenoides em todas as amostras. Quanto às propriedades biológicas, verificou-se baixa atividade antioxidante. As atividades antimicrobiana e antiproliferativa, no entanto, foram bastante relevantes. A amostra Fv1 mostrou capacidade para inibir totalmente o crescimento de células de câncer de ovário multirresistente a drogas em uma concentração de 7,6µg/mL, valor inferior ao necessário do padrão Doxorrubicina para inibir esta mesma linhagem celular. Nos testes de atividade antimicrobiana, Fv1 também se destacou por sua ação bactericida sobre Streptococcus agalactiae em concentração contida entre 15,62-31,25µg/mL, valor também inferior ao obtido com o padrão Cloranfenicol. Os resultados encontrados nesta pesquisa evidenciam o grande potencial biológico das própolis de Frieseomelitta varia, que pode se modificar conforme local e época de coleta. / The therapeutic aid exercised by propolis of honeybee Apis mellifera is known since immemorial times and their properties have been widely studied. However, the stingless bee propolis has been little investigated. In this way, this work proposed to assess some chemical characteristics and biological activities of propolis produced by Frieseomelitta varia stingless bees. The samples (Fv1, Fv2 and FvA) were obtained in different times and places in the city of Alfenas-MG. Extraction were made with them in ethanol and the resultant extracts were submitted to some evaluations: UV-visible absorption profile, composition by flavonoids (quercetin), phenolic compounds (based on Gallic acid) and chemical profile by thin-layer chromatography (TLC). Additionally, Fv1 Fv2 and FvA were examined by in vitro biological assays, such as antimicrobial, antioxidant and antiproliferative activities. The absorption spectrum of UV-visible light showed characteristic peaks of phenolic compounds and flavonoids, on the other hand, the quantitative tests showed low values of these phytochemicals. The TLC result revealed the presence of terpenoides in all the samples. With regard to biological properties, low antioxidant activity was found. However, the antimicrobial and antiproliferative results, were quite relevant. The sample Fv1 showed ability to inhibit fully the growth of ovarian cancer cells resistant to drugs at a concentration of 7.6µg/mL, below the required value of the standard Doxorubicin to inhibit this same cell line. In the antimicrobial assays, Fv1 also stood out for its bactericidal action on Streptococcus agalactiae in concentration contained between 15.62 -31.25µg/mL, also lower than the value obtained with the standard Chloramphenicol. The results found in this research show the great biological properties of Frieseomelitta varia propolis, which can change according to location and time of collection. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O Bacupari (Garcinia brasiliensis Mart.) é uma espécie arbórea de importância medicinal, da qual diversos estudos têm obtido o isolamento e testado a atividade de moléculas como a 7-epiclusianona, guttiferona-A, garciniafenona e fukugetina. Porém, a produção desses compostos in natura é limitada, tornando necessário estudos que otimizem a produção destas. Nesse contexto as técnicas de cultura de tecidos vegetais, como o cultivo de calos e suspensões celulares tem sido utilizada para produzir e otimizar a obtenção de metabólitos de interesse farmacêutico in vitro. O objetivo desse trabalho foi utilizar a glutamina como fonte de nitrogênio em calos de G. brasiliensis com intuito de investigar a influência desse aminoácido na produção de fenóis, flavonoides e proantocianidinas. Explantes de 2 mm de espessura e 4 mm de diâmetro foram obtidos a partir de seguimentos do procâmbio de sementes de bacupari, obtidas de uma população localizada no município de Viçosa-MG e inoculados em meio de cultivo contendo 30 mL de meio MS (Murashige e Skoog, 1962) complementado com sacarose (3%), ágar (0,7%), BAP (6-Benzilaminopurine, 0,5 mg L-1) e diferentes concentrações de sais que seguem: Meio MS com as concentrações originais de nitrogênio (20 mM NH4NO3 e 18,8 mM KNO3), meio MS com 10 mM NH4NO3 e 9,4 mM KNO3 chamado ½ força (MS ½) e meio MS sem NH4NO3 e KNO3 contendo glutamina em concentrações finais de 5, 10, 30 e 60 mM. Após a inoculação o material foi mantido em sala de crescimento na ausência de luz por um período de 140 dias. As análises bioquímicas foram realizadas em intervalos de 20 dias e as análises fitoquímicas no final do período de cultivo, aos 140 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado contendo 6 tratamentos e 4 repetições. Foi observada diferença significativa na concentração de aminoácidos entre os tratamentos em relação ao tempo de cultivo. A concentração mais baixa para aminoácidos foi a 60 mM de glutamina no tempo de 100 dias. Essa redução pode estar relacionada com a síntese de proteínas, as quais haviam mostraram o decréscimo aos 80 dias de cultivo. Além disso a baixa quantidade de aminoácidos a 60 mM de glutamina indica que esses podem ter sido desviados para a rota metabólica dos metabólitos especiais. / The Bacupari (Garcinia brasiliensis Mart.) is an arboreal species of medicinal importance, where through various studies have demonstrated the isolation and activity of important molecules such as 7-epiclusianone, guttiferona-A, garciniafenona and fukugetina. However, the production of these compounds in nature is limited, so seen the need for studies that optimize the production of these compounds. In this context the techniques of plant tissue culture, such as in vitro cultivation of cells (callus) has been used to produce and optimize the production of metabolites of pharmaceutical interest in vitro. The objective of this study was to use glutamine as a nitrogen source in callus of G. brasiliensis in order to investigate the influence of the amino acid in the production of phenols, flavonoids and proanthocyanidins. The explants were inoculated in MS medium, MS with half concentration of the nitrogen salts, and MS absent of nitrogen sources supplemented with glutamine (5, 10, 30 and 60 mM). Biochemical analyzes were performed at intervals of 20 days and phytochemical analysis at the end of the culture period. At the 20 th and 100 th days, there was no difference in the amino acid content, between the treatments. In the remaining periods, the treatment with 60 mM of glutamine showed the lowest concentrations of amino acids. With respect to proteins, there were differences only at the 140 th day of cultivation, and the use of 60 mM of glutamine resulted in higher concentrations, while MS had the lowest concentrations. Similarly, the treatment with 60 mM glutamine resulted in higher levels of phenolic compounds, flavonoids and proanthocyanidins, and the lower levels were observed in MS. Thus, it is concluded that the use of 60 mM glutamine to replace the nitrogen sources in MS medium in the 140 th day promoted the accumulation of proteins and synthesis of secondary metabolites in callus of Bacupari. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A Garcinia brasiliensis, conhecida como Bacupari, é uma espécie que se destaca por apresentar metabólitos secundários com várias atividades biológicas. Porém, na natureza a produção destes compostos é muito pequena. Para aumentar a produção de metabólitos secundários, de interesse econômico ou medicinal, vem sendo estudadas estratégias biotecnológicas como produção destes compostos in vitro. A adição de elicitores, tais qual o ácido salicílico (AS) e o ácido jasmônico (AJ), no meio de cultura em cultivo de células pode ser uma alternativa para maximizar a produção destes compostos. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo avaliar o efeito elicitor do AS e do AJ na produção de compostos fenólicos e flavonoides totais em calos de embriões zigóticos de G. brasiliensis. Para calogênese foram testadas diferentes combinações da 2-iP (0; 9; 18; 36; 72 µM e 2,4-D (0; 2,05; 10,26; 18,47; 28,73 µM) em meio de cultura Wood Plant Medium (WPM). Cortes de calos com 20 dias foram corados com azul de toluidina e lugol para avaliações histológicas. As áreas cobertas por calos nos explantes foram medidas por meio do programa ImageJ®. Para indução da produção de compostos fenólicos e flavonoides totais os calos foram subcultivados em meio WPM contendo AS (0,1; 1; 10; 100 µM) na ausência de 2-iP e 2,4-D e AS (0,1; 1; 10; 100 µM) com presença de 72 µM de 2-iP e 28,73 µM de 2,4-D e AJ nas concentrações 0,1; 1; 10; 100 µM. Os calos ficaram incubados por 150 dias, a 25º C e ausência de fotoperíodo. A cada 30 dias, calos foram submetidos à análise de conteúdo de fenólicos e flavonoides totais. Para determinação da cinética dos calos, estes foram pesados a cada 30 dias (para tratamentos com AS) e 15 dias (para tratamentos com AJ), traçando-se a curva de crescimento. Os calos com 30 e 90 dias de incubação foram analisados quanto ao teor de fukugetina e 7-epiclusianona. Ao fazer as avaliações histológicas pode-se notar que as células dos calos expostos as concentrações que proporcionaram maior calogênese (72 µM de 2-iP com 28,73 µM de 2,4-D) se mostraram de tamanhos bem variados e com espaço intercelular, caracterizando um tecido desorganizado. Quanto a área dos calos, constatou-se que o tratamento que melhor proporcionou calogênese foi 72 µM de 2-iP com 28,73 µM de 2,4-D. Na elicitação, altas concentrações de AS (10 e 100 µM) e maior tempo de exposição (120 e 150 dias) não implicaram maior acúmulo de compostos fenólicos e flavonoides totais. A concentração de 0,1 µM de AS foi eficiente na produção de fukugetina e 7-epiclusianona quando os calos ficam expostos 30 dias em meio de cultura. Porém, quando o AS foi adicionado ao meio juntamente com 2-iP e 2,4-D, a concentração que mais elicitou à produçao de fukugetina e 7-epiclusianona foi 10 µM de AS com 90 dias de exposição. A concentração de 0,1 µM de AJ promoveu o incremento da massa dos calos de G. brasiliensis e, com aumento do tempo de exposição, foi favorável a produção de fenóis e de flavonoides. As maiores concentrações testadas de AJ (10 e 100 µM) foram as mais eficientes na estimulação da produção da fukugetina e 7-epiclusianona quando os calos permaneceram 90 dias expostos ao elicitor. Para a produção de fukugetina, a condição mais favorável foi a exposição por 30 dias em meio de cultura WPM contendo 10 µM de AJ. Enfim, pode-se concluir que para obter melhor calogênese em embriões de Bacupari é necessário altas concentrações de 2-iP e 2,4-D. O AS e o AJ demonstraram serem elicitores abióticos eficiente na otimização de metabólitos secundários em calos de G. brasiliensis. Levando em consideração a curva de crescimento dos calos de Bacupari, pode-se concluir que o melhor período para a extração dos metabólitos secundários dos calos de G. brasiliensis foi o início da fase estacionária. / Garcinia brasiliensis, known as Bacupari, is a species that stands out for presenting secondary metabolites with different biological activities. However, the nature of the production thereof is very small. To increase production of secondary metabolites, economic and medical interest, biotechnological strategies have been studied as production of these compounds in vitro. The addition of elicitors, such that salicylic acid (SA) and jasmonic acid (AJ), in the culture medium for cell culture may be an alternative to maximize the production of these compounds. In this context, the work was to evaluate the effect of elicitor AS and AJ in the production of phenolics and total flavonoids in callus of zygotic embryos of G. brasiliensis. For callus induction were tested different combinations of 2-iP (0; 9; 18; 36; 72 µM) and 2,4-D (0; 2.05; 10.26; 18.47; 28.73 µM) in the medium of culture Wood Plant Medium (WPM). Callus with 20 days were stained with toluidine blue and lugol for histological evaluation. The areas covered by callus on explants were measured through ImageJ® program. For induction of phenolic compounds and total flavonoid callus were subcultured on WPM containing AS (0.1, 1, 10, 100 µM) in the absence of 2-iP and 2,4-D and AS (0.1, 1, 10, 100 µM) with presence of 72 uM 2-iP and 28.73 mM of 2,4-D and AJ in concentrations 0.1, 1, 10;. 100 uM. The callus were incubated for 150 days at 25 ° C and absence of photoperiod. Every 30 days, callus were subjected to phenolic content analysis and total flavonoid. To determine the kinetics of calluses, these were weighed every 30 days (for treatments with AS) and 15 days (for treatments AJ) to the growth curve. Callus with 30 and 90 days of incubation were analyzed for content of fukugetin and 7-epiclusianone. By making the histological evaluations can be noted that the cells of calluses exposed to the conditions that gave greater callus formation (72 µM of 2-iP with 28.73 µM of 2,4-D) have proved very varied sizes and intercellular space, featuring a disorganized tissue. The area of ​​callus, it was found that the treatment gave better callus induction was 72 uM 2-iP with 28.73 uM 2,4-D. In elicitation, high concentrations of AS (10 and 100 µM) and longer exposure time (120 and 150 days) did not entail greater accumulation of phenolic compounds and total flavonoids. The concentration of 0.1 µM AS was efficient in producing fukugetina and 7-epiclusianone in callus when they are exposed 30 days in culture medium. But when the AS was added to the medium with 2-iP and 2,4-D, the concentration that elicited the production of more fukugetina and 7-epiclusianone was 10 uM AS with 90 days of exposure. The concentration of 0.1 µM AJ promoted the increase of the mass of calluses and G. brasiliensis, increasing the exposure time was favorable production of phenols and flavonoids. The highest concentrations tested AJ (10 and 100 µM) were more efficient in stimulating the production of fukugetina and 7-epiclusianone when the calli 90 days remained exposed to the elicitor. For the production of fukugetin, the most favorable condition for the exposure was 30 days in WPM containing 10 µM of AJ. Anyway, it can conclude that for better callus induction in Bacupari embryos is necessary high concentrations of 2-iP and 2,4-D. The AS and AJ shown to be effective abiotic elicitors on the optimization of secondary metabolites in callus of G. brasiliensis. Taking into account the growth curve of bacupari callus, it can be concluded that the best period for the extraction of secondary metabolites of G. brasiliensis callus was the early stationary phase.