Os flavonoides são um grupo diversificado de compostos polifenólicos que podem ser encontrados na natureza e também sintetizados. A gama de atividades biológicas e o potencial para reduzir o risco de doenças crônicas tem motivado a comunidade científica a desenvolver métodos de síntese de compostos desta classe. Neste sentido, as reações de biotransformação são estratégias interessantes com grande potencial para modificar as estruturas de flavonoides naturais e sintéticos. Este estudo teve como objetivo a biotransformação de derivados de flavonoides por fungos de ambiente marinho. Assim, os derivados de flavonoides 2\'-hidroxichalconas (1a-h), 2\'-hidroxi-diidrochalcona (2a), flavanona (3a) e flavan-4-ol (4a) foram usados como substratos em reações biocatalisadas por células totais de fungos de ambiente marinho. As condições reacionais foram otimizadas variando-se o pH e a composição nutricional do meio reacional. Dessa forma, foi realizada uma triagem com oito fungos derivados de ambiente marinho (Penicillium raistrickii CBMAI 931, Cladosporium sp. CBMAI 1237, Aspergillus sydowii CBMAI 935, Penicillium oxalicum CBMAI 1996, Penicillium citrinum CBMAI 1186, Mucor racemosus CBMAI 847, Westerdykella sp. CBMAI 1679 e Aspergillus sclerotiorum CBMAI 849) utilizando a 2\'-hidroxichalcona 1a como substrato. A partir da triagem foram selecionados os fungos P. raistrickii CBMAI 931 e A. sydowii CBMAI 935 para serem aplicados com outros derivados de flavonoides. As reações empregando o fungo P. raistrickii CBMAI 931 resultou preferencialmente na hidrogenação da ligação Cα=Cβ das 2\'-hidroxichalconas substituídas (1a-h) com a formação das 2\'-hidroxi-diidrochalconas (2a-h) com conversões que variaram de 25 a 83% em 14 dias de reação. Também foi realizada uma triagem com dez fungos derivados de ambiente marinho (Fusarium sp. CBMAI 1830, Acremonium sp. CBMAI 1676, Aspergillus sp. CBMAI 1829, A. sydowii CBMAI 935, P.oxalicum CBMAI 1996, P. citrinum CBMAI 1186, P. raistrickii CBMAI 931, Cladosporium sp. CBMAI 1237, M. racemosus CBMAI 847 e Westerdykella sp. CBMAI 1679) para a biotransformação da flavanona 3a. A biotransformação da flavanona 3a resultou na formação de produtos de biorredução, hidroxilação e clivagem de anel. As reações empregando os fungos Cladosporium sp. CBMAI 1237, Westerdykella sp. CBMAI 1679 e Acremonium sp. CBMAI 1676 levou preferencialmente a biorredução do grupo cetônico da flavanona 3a para formação do flavan-4-ol 4a correspondente. Os fungos Acremonium sp. CBMAI 1676 e Cladosporium sp. CBMAI 1237 foram então utilizados para reduzir uma série de flavanonas 3b-g meta e para substituídas, onde os flavan-4-ois foram isolados com bons rendimentos (67-87%), porém com baixa seletividade. O fungo P. raistrickii CBMAI 931 também apresentou potencial para obtenção de diidrochalconas a partir de flavanonas, assim como os fungos A. sydowii CBMAI 935 e Fusarium sp. CBMAI que além de produzirem diidrochalconas ainda promoveram a hidroxilação da mesma. Assim, os fungos de ambiente marinho P. raistrickii CBMAI 931 e A. sydowii CBMAI 935 foram eficientes na biotransformação de derivados de flavonoides com controle quimio- e regiosseletivo. Os fungos de ambiente marinhoutilizados mostraram-se como uma fonte de enzimas ene redutases, álcool desidrogenases e monoxigenases ao mediar eficientemente a biotransformação de derivados de flavanoides. / Flavonoids are a diverse group of polyphenolic compounds that can be found in nature and synthesized. The range of biological activities and the potential to reduce the risk of chronic diseases has motivated the scientific community to develop methods of synthesis of compounds of this class. In this sense, biotransformation reactions are interesting strategies with great potential to modify the structures of natural and synthetic flavonoids. This study aimed at the biotransformation of flavonoid derivatives by marine environment fungi. Thus, the flavonoid derivatives 2\'-hydroxychalconas (1a-h), 2\'-hydroxy dihydrochalcone (2a), flavanone (3a) and flavan-4-ol (4a) were used as substrates in biocatalysed reactions by total cells of fungi of marine environment. The reaction conditions were optimized by varying the pH and nutritional composition of the reaction medium. In this way, eight marine-derived fungi (Penicillium raistrickii CBMAI 931, Cladosporium sp. CBMAI 1237, Aspergillus sydowii CBMAI 935, Penicillium oxalicum CBMAI 1996, Penicillium citrinum CBMAI 1186, Mucor racemosus CBMAI 847, Westerdykella sp. 1679 and Aspergillus sclerotiorum CBMAI 849) were screened to perform the biotransformation of 2\'-hydroxychalcone 1a. From the screening, the fungi P. raistrickii CBMAI 931 and A. sydowii CBMAI 935 were selected for applied with other flavonoid derivatives. The reactions using the fungus P. raistrickii CBMAI 931 resulted preferentially in the hydrogenation of the Cα-Cβ double bond of the substituted 2\'-hydroxychalconas (1a-h) to led formation of 2\'-hydroxy-dihydrochalcones (2a-h) with good conversions (25 to 83%) in 14 days of reaction. It was also carried out a screening with ten fungi derived from marine environment (Fusarium sp. CBMAI 1830, Acremonium sp. CBMAI 1676, Aspergillus sp. CBMAI 1829, A. sydowii CBMAI 935, P. oxalicum CBMAI 1996, P. citrinum CBMAI 1186, P. raistrickii CBMAI 931, Cladosporium sp, CBMAI 1237, M. racemosus CBMAI 847 and Westerdykella sp, CBMAI 1679) for the biotransformation of flavanone 3a. The biotransformation reaction resulted in the biorreduction of flavanona 3a, hydroxylation and ring cleavage of the products. Reactions by Cladosporium sp. CBMAI 1237, Westerdykella sp. CBMAI 1679 and Acremonium sp. CBMAI 1676 preferably led to the reduction of the pro-chiral ketone of flavanone to form the corresponding flavan-4-ol. The fungi Acremonium sp. CBMAI 1676 and Cladosporium sp. CBMAI 1237 were used to reduce a series of substituted flavanones, where flavan-4-ols were isolated in good yields (67-87%), but with low selectivity. The fungus P. raistrickii CBMAI 931 presented potential for produce dihydrochalcones from flavanones, as well as the fungi A. sydowii CBMAI 935 and Fusarium sp. CBMAI that in addition to producing dihydrochalcones still promoted the hydroxylation thereof. Thus, the marine environment fungi P. raistrickii CBMAI 931 and A. sydowii CBMAI 935 were efficient in biotransformation of flavonoid derivatives with chemo- and regioselective control. Marine-derived fungi have been shown to be a source of ene reductase enzymes, alcohol dehydrogenases and monoxigenases by efficiently mediating the biotransformation of flavonoid derivatives.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-02-05T16:22:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Carlos Dávila Sánchez.pdf: 22396898 bytes, checksum: 5122ed06da0d2dc71b9cbf4253c97cda (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-05T16:22:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Carlos Dávila Sánchez.pdf: 22396898 bytes, checksum: 5122ed06da0d2dc71b9cbf4253c97cda (MD5) Previous issue date: 2017-12-07 / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da aplicação de primers experimentais à base de flavonoides na resistência de união, nanodureza, módulo de elasticidade e micromorfologia da interface adesiva criada em dentina hígida e dentina afetada por cárie utilizando um adesivo universal aplicado em modo convencional. Superfícies planas de dentina foram expostas em 182 molares permanentes. Noventa e um molares foram armazenados em água, enquanto os outros 91 foram imersos em uma solução de BHI/Sacarose (pH 4.0) e cepas de Streptococcus mutans por 14 dias para induzir lesões artificiais de cárie em dentina. Quarenta e nove dentes foram aleatoriamente alocados em 7 grupos (n=7) de acordo com o primer experimental usado em cada tipo de substrato (hígido ou afetado por cárie): Controle, sem aplicação de primer (CON), Placebo solução hidroalcoólica com tensoativo (PLA), Proantocinidina (PRO), Quercetina (QER), Naringina (NAR), Rutina (RUT), e Hesperidina (HES). Após o condicionamento, lavagem e secagem das superfícies de dentina, os primers foram ativamente aplicados por 1 min para reumedecer a dentina. Após serem restaurados, os espécimes foram seccionados no seu longo eixo até obter palitos retangulares (0,9 mm2) que foram testados em tração com velocidade de 1 mm/min, tanto após 24 h quanto após 25.000 ciclos em uma máquina de ciclagem térmica (5 ºC / 55 ºC). Para os testes de nanodureza e módulo de elasticidade (n=3), os espécimes foram cortados longitudinalmente até obter duas fatias planas (1,2 mm) e foram analisados em um nanoindentador com uma ponta Berkovich tanto após 24 h quanto após 25.000 ciclos térmicos. Para a análise qualitativa de microinfiltração, 21 dentes (n=3) assistida por corantes em Microscópio confocal (CSLM), o adesivo e a resina composta foram misturados com 0,2% de Rhodamina B (massa) antes dos procedimentos restauradores e duas fatias planas foram obtidas para análise após 24 h e 25.000 ciclos térmicos. As fatias foram imersas em uma solução de Fluoresceína (0,1%) por 4 horas. Quatro imagens da interface adesiva de cada dente foram obtidas em cada momento experimental (24 h ou 25.000 ciclos) a 5 e 10 μm de profundidade. Os resultados foram analisados usando uma análise de variância de medidas repetidas e pós-teste de Bonferroni (= 0,05). Resultados: Os grupos PLA e RUT mostraram os valores mais altos de μTBS em dentina hígida em ambos intervalos (p > 0,05). Na dentina afetada por cárie os grupos RUT e NAR apresentaram os valores mais altos em ambos intervalos. As imagens de CSLM mostraram sinais de infiltração em todos os grupos. PLA, RUT, NAR e PRO mostraram áreas sem infiltração em ambos intervalos e tipo de substrato. As nanopropriedades foram influenciadas pelos grupos experimentais em profundidade dependendo do flavonoide usado. Conclusão: O uso de flavonoides poderia ser uma alternativa terapêutica em dentina hígida e afetada por cárie para melhorar as propriedades e longevidade da interface adesiva. / The aim of this study was to evaluate the effect of experimental flavonoid primers on bond strength, nanohardness, elastic modulus, and micromorphology of bonding interfaces created on sound and caries-affected dentin using one commercially available universal bonding agent applied in the etch-and-rinse mode. Flat midcoronal dentin surfaces were exposed in 182 permanent molars. Ninety-one molars were stored in water while the other 91 molars were kept in a BHI/Sucrose solution (pH 4.0) with Streptococcus mutans strain for 14 days to induce artificial caries-affected dentin. Forty-nine teeth were randomly assigned to 7 groups (n=7) according to the experimental primer applied to each dentin surface condition (sound or caries-affected dentin): Control, in which no primer was applied (CON), Hydroalcoholic solution with surfactant Placebo (PLA), Proanthocianidin (PRO), Quercetin (QER), Naringin (NAR), Rutin (RUT) and Hesperidin (HES). After etching, rinse and drying the dentin surfaces, the primers were actively applied for 1 min to rewet the dentin surface. After bonding and restorative procedures, specimens were sectioned in the long axis to obtain rectangular sticks (0.9 mm2) that were subjected to microtensile tests (μTBS) at a crosshead speed of 1 mm/min, either 24 h or after 25.000 cycles in a thermocycling machine (5ºC / 55ºC). For nanohardness and elastic modulus (n=3), the specimens were longitudinally sectioned to obtain 2 flat silces (1,2 mm) and were analyzed in a nanohardness device with a Berkovich indenter either after 24 h or after 25.000 (5 ºC / 55 ºC) thermal cycles. For the dye assisted microinfiltration qualitative analysis 21 teeth (n=3) was performed with a Confocal Scanning Laser Microscope (CSLM), both adhesive system and resin composite were mixed with 0.2% (weight) Rhodamine B prior to the restorative procedure and two flat slices were obtained for analysis in 24 h and after 25.000 thermal cycles. The bonding interfaces were immersed in a 0,1%. Fluorescein solution for 4 hours. Four images of bonding interface per specimen where obtained in each experimental time (24 h and 25.000 cycles) at 5 and 10 m depth. The data were analyzed using two-way repeated measures ANOVA and Bonferroni post-hoc test ( = 0.05). Results. PLA and RUT showed the highest TBS values in sound teeth at both intervals (24h and ageing) (p>0.05), while RUT and NAR showed the highest TBS values in carious teeth in both stages. CLSM analysis showed signs of microinfiltration for all groups. PLA, RUT, NAR and PRO showed areas of no infiltration in both experiments and intervals. Nanomechanical properties were influenced by experimental groups in deep, dependending on the flavonoid used. Conclusion: The use of flavonoids may be an alternative for therapeutic substances in sound or carious dentin to improve their properties and longevity in the adhesive interphase.

Submitted by Verena Bastos (verena@uefs.br) on 2015-07-24T13:45:42Z No. of bitstreams: 1 ?UDER REIS DIAS -DISSERTA??O MESTRADO 2013 -RGV.pdf: 1805178 bytes, checksum: fa9b0a71b8366540b825499da5adb0f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-24T13:45:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ?UDER REIS DIAS -DISSERTA??O MESTRADO 2013 -RGV.pdf: 1805178 bytes, checksum: fa9b0a71b8366540b825499da5adb0f8 (MD5) Previous issue date: 2013-10-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The Melastomataceae family comprises 4,570 species in approximately 180 genera present in all tropical and subtropical regions of the planet. This family, in Brazil, is the sixth largest family of Angiosperms, with over 1500 species. The genus Tibouchina presents, approximately, 350 species, however, are poorly studied. The Tibouchina pereirae Aubl., a shrub, is popularly used for the treatment of kidney diseases. In this study, we show the antioxidant and antinociceptive effects of T. pereirae. The hexane (EHTP), ethanol (EETP) and aqueous (EATP) extracts were obtained by maceration from the aerial parts of T. pereirae. The flavonoid rich fraction (FFTP) was obtained from fractionation of EHTP. The analysis of FFTP by HPLC-DAD and HPLC-MS/MS led to characterization of these flavonoids. The antioxidant activity of extracts was evaluated using the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay system and the in vivo experiments were conducted on Swiss mice using the acetic acid-induced writhing test and the formalin-induced pain test. Results showed that extracts (EHTP, EETP and EATP) and FFTP present antioxidant activity, when compared to standard butylated hydroxytoluene (BHT) and ascorbic acid (AA). The EHTP and FFTP (i.p., 100mg/Kg) reduced the nociception produced by acetic acid by 90,36% and 94,74%, respectively. The FFTP reduced the formalin effects in both phases by 54, 35% and 92,05%, while the EHTP only protected the second phase by 83,39%. / A fam?lia Melastomataceae apresenta cerca de 4.570 esp?cies, distribu?das em, aproximadamente, 180 g?neros presentes em todas as regi?es tropicais e subtropicais do planeta, sendo que no Brasil ? a sexta maior fam?lia de angiospermas, com mais de 1500 esp?cies. O g?nero Tibouchina possui aproximadamente 350 esp?cies, por?m s?o muito pouco estudadas, sendo que a esp?cie Tibouchina pereirae Aubl. ? popularmente utilizada para o tratamento de problemas renais. Nesse estudo, foram avaliadas as atividades antioxidante e antinociceptiva de T. pereirae. Foram obtidos os extratos hex?nico (EHTP), etan?lico (EETP) e aquoso (EATP) a partir da macera??o das partes a?reas de T. pereirae. A fra??o rica em flavonoides (FFTP) foi obtida a partir do fracionamento do EHTP. A an?lise por CLAE-DAD e CLAE-EM/EM desta fra??o possibilitou caracterizar estes flavonoides. A atividade antioxidante dos extratos foi avaliada utilizando o sistema de ensaio 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) e os experimentos in vivo foram realizados em camundongos Swiss utilizando os testes de contor??o abdominal induzida por ?cido ac?tico e da formalina. Os resultados obtidos demonstraram que o EHTP, EETP e EATP, assim como a fra??o FFTP apresentaram atividade seq?estradora radicalar, quando comparados aos padr?es butilhidroxitolueno (BHT) e ?cido asc?rbico (AA). O EHTP e a FFTP reduziram a nocicep??o induzida pelo ?cido ac?tico em 90,6% e 94,74%, respectivamente. A FFTP reduziu os efeitos da formalina em ambas fases em 54,35% e 92,05%, respectivamente, enquanto que o EHTP foi ativo somente na segunda fase do teste, com uma redu??o no tempo de lambida de 83,39%.

Lipossomas (LUV) são estruturas compostas por uma bicamada lipídica que se organizam de forma semelhante a vesículas, contendo um compartimento aquoso em seu interior. Têm sido avaliados como potenciais carreadores de fármacos. No entanto, após sua administração, in vivo, opsoninas do soro adsorvem-se em sua superfície contribuindo para que o sistema fagocitário mononuclear (SFM) reconheça essas partículas, favorecendo sua remoção da circulação. O sistema complemento (SC) parece ter papel importante neste processo, principalmente por gerar fragmentos ativos do componente C3 (C3b/iC3b) que se depositam nas vesículas lipossomais e são reconhecidos por receptores do complemento presentes, por exemplo, nos polimorfonucleares. Antioxidantes, como a quercetina, têm demonstrado importantes e benéficos efeitos sobre a saúde humana, porém sua baixa solubilidade em água e biodisponibilidade limitam seu uso. Assim, o desenvolvimento apropriado de carreadores de flavonoides seria de grande importância para sua aplicabilidade in vivo. O objetivo do presente trabalho é avaliar a ativação das proteínas do SC por lipossomas compostos de fosfatidilcolina de soja e colesterol (PC:CHOL) ou colesteril-etil-éter (PC:CHOL-OET), contendo ou não quercetina. O consumo das vias clássica (VC) e alternativa (VA) provocado pelas diferentes vesículas foi analisado por ensaio hemolítico e a quantificação de iC3b e anticorpos naturais (IgG e IgM) na superfície dessas partículas foi realizada através de kits de ELISA. A ativação de C3 por vesículas contendo ou não quercetina foi avaliada por imunoeletroforese bidimensional (IEF). Os resultados mostram que lipossomas vazios, compostos por grande quantidade de colesterol, consomem mais os componentes do complemento para ambas as vias, VC e VA. Ainda, a substituição de colesterol por colesteril-etil éter reduziu o consumo das duas vias, mas a ativação do SC ainda é dependente da quantidade deste composto. A incorporação de quercetina não alterou o consumo de ambas as vias. O depósito de iC3b, IgG ou IgM nas vesículas compostas de PC:CHOL-OET na proporção de massa 3:1 foi o menor comparado aos demais. A IEF mostrou que vesículas PC:CHOL vazias induzem maior clivagem de C3 em relação às vesículas PC:CHOL-OET. Ainda, a incorporação de quercetina reduz a conversão de C3 em seus fragmentos. Essas observações sugerem que a preparação lipossomal PC:CHOL-OET em proporção de massa 3:1 parece ser a mais adequada para dar continuidade aos estudos que deverão culminar na tentativa de utilizá-la como carreadora de quercetina para administração in vivo / Liposomes (LUV) are structures composed by lipid bilayer that are organized similarly to vesicles, containing an aqueous compartment inside. They have been evaluated as potential drug carriers, however, after in vivo administration, serum opsonins are adsorb on the surface, contributing to their clearance from the circulation by mononuclear phagocytes system (MPS). The complement system (CS) seems to play an important role in this process, mainly to generate active fragments of the C3 component (C3b/iC3b) that are deposited in the liposomal vesicles and are recognized by complement receptors present, for example, in polymorphonuclear cells. Antioxidants such as quercetin have demonstrated significant and beneficial effects on human health, but its low water solubility and bioavailability limit their use. Thus, the proper development of flavonoids carriers would be of great importance to its applicability in vivo. The objective of this study is to evaluate the activation of SC proteins by liposomes composed of soy phosphatidylcholine and cholesterol (PC: CHOL) or cholesteryl ethyl ether (PC: CHOL-OET), with or without quercetin. The consumption of the classical (CP) and alternative pathway (AP) caused by the different vesicles was analyzed by hemolytic assay and quantification of iC3b and natural antibodies (IgG and IgM) on the surface of these particles was performed using ELISA kits. The activation of C3 by vesicles with or without quercetin was assessed by two-dimensional immunoelectrophoresis (IEF). The results show that empty liposomes, composed of large amounts of cholesterol, consume more CS components in both pathways, CP and AP. Moreover the replacement of cholesterol by cholesteryl ethyl ether reduced the consumption of both pathways, but the activation of the SC is still dependent on the amount of the compound. The incorporation of quercetin did not alter the consumption of both pathways. The deposition of iC3b, IgG or IgM in vesicles composed of PC: CHOL-OET at mass ratio of 3:1 was the lowest compared to the others. The IEF showed that empty vesicles of PC:CHOL induce less cleavage of C3 in relation to vesicles of PC: CHOL-OET. In addition, the incorporation of quercetin reduces the conversion of C3 into its fragments. These observation suggest that the liposomes PC:CHOL at mass ratio 3:1 seems to be the most appropriate to continue the studies that could culminate in an attempt to use it as a carrier to administrate quercetin in vivo

Orientador: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Banca: Luís Vitor Silva do Sacramento / Resumo: A família Eriocaulaceae possui cerca de 1200 espécies divididas em 10 gêneros e suas espécies de plantas são conhecidas como sempre-vivas, por sua grande durabilidade e coloração paleácea. Neste trabalho foram estudadas as espécies: Eriocaulon ligulatum, Leiothrix flavescens e Leiothrix spiralis, as quais foram avaliadas quanto à mutagenicidade e estrogenicidade e algumas substâncias isoladas foram utilizadas para um estudo de relação estrutura-atividade mutagênica e estrogênica. Para avaliação da mutagenicidade, utilizou-se o teste de Ames, e o teste RYA (Recombinant Yeast Assay) foi o empregado para avaliação da estrogenicidade. Os resultados da atividade mutagênica demonstraram que apenas E. ligulatum foi considerado mutagênico e isso foi atribuído às isocumarinas e flavonóides agliconas. Os estudos de relação estrutura-atividade mutagênica mostraram que esta ação foi devida à presença de hidroxilas em posições estratégicas e à ausência de glicosilações, metoxilações, ou qualquer outro tipo de substituição. Para complementar os estudos de relação estrutura-atividade mutagênica com as isocumarinas, utilizou-se resultados já publicados de mutagenicidade de moléculas semelhantes à isocumarina eriocaulina, isolada de E. ligulatum. Verificou-se que os dímeros de isocumarinas têm a sua mutagenicidade influenciada pela conformação espacial, pela presença de grupos hidroxilas mais afastados de grupos volumosos, e pelo tipo de ligação que une os seus monômeros. Quando o potencial estrogênico foi avaliado, apenas a L. flavescens apresentou resultados positivos e que esses são devidos à presença de flavonas agliconas, como a luteolina e a metoxiluteolina. As mesmas isocumarinas, pertencentes a outras espécies da família Eriocaulaceae, avaliadas no teste de Ames, foram avaliadas no teste RYA... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Eriocaulaceae family comprises around 1200 species, divided into 10 genera, and their plant species are known as "sempre-vivas" (everlasting flowers) for its durability and color. In this work the species Eriocaulon ligulatum, Leiothrix flavescens and Leiothrix spiralis were studied. These species were evaluated for the mutagenic and the estrogenic potential and some of their isolated compounds were used for a study of structuremutagenic and estrogenic activities. To assess mutagenicity we used Ames test and the Recombinant Yeast Assay (RYA test) was used for evaluation of estrogenicity. The results of mutagenic activity showed that only E. ligulatum presented mutagenicity and that these results were due to its naphthopyranones and flavonoid aglicons. The structuremutagenic activity studies shown that this action were due to the presence of hydroxyl groups in strategic positions and no glycosylations, methoxylation or any type of substitutions. To complement the studies of structure-mutagenic activity with the naphthopyranones, we use results already published of the mutagenicity of similar compounds to the naphthopyranone eriocaulina, isolated from E. ligulatum, and compare them with the data from ericauline. It was found that the dimers of naphthopyranones have their mutagenicity influenced by its spatial conformation, for the presence of hydroxyl groups furthest away from large groups, and the type of connection that join their monomers. When the estrogenic potential was assessed, we found that only L. flavescens showed positive results and that these results are due to the presence of flavones in the form of aglycones, such as luteolin and methoxyluteolin. The same naphthopyranones belonging to other species of Eriocaulaceae family, evaluated in the Ames test, were assessed in the RYA test. Their results were crucial for the establishment of structureestrogenic activity... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Coorientador: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Cássia Regina Primila Cardoso / Resumo: Este trabalho descreve o estudo fitoquímico, a avaliação das atividades mutagênica e antiradicalar e a determinação dos teores de flavonoides e fenóis totais dos extratos metanólicos e da fração acetato de etila de Paepalanthus chiquitensis Herzog, pertencente à família Eriocaulaceae. As análises por HPLC-UV-PDA permitiram inferir, qualitativamente, que o extrato metanólico de capítulos possui maior concentração de naftopiranonas, enquanto que os escapos possuem maior concentração de flavonoides. Os fingerprints por HPLC-ESI-IT-MSn permitiram identificar dezenove flavonoides e seis naftopiranonas pela análise dos padrões de fragmentações por ESI-MSn, modo negativo, além da comparação com dados existentes na literatura. No estudo fitoquímico, foram utilizadas técnicas cromatográficas usuais, principalmente para substâncias polares, como (Cromatografia de Permeação em gel, Sephadex LH-20, Cromatografia Líquida de Alta Eficiência e Extração em Fase Sólida - SPE), que forneceram misturas de flavonoides identificados por métodos espectroscópicos (Espectrometria de Massas, Ultravioleta e Ressonância Magnética Nuclear). Foram, portanto, identificados dois flavonóides considerados inéditos na literatura (PGC2B e PGC3). A atividade antiradicalar dos extratos metanólicos e das frações acetato de etila foram avaliadas utilizando-se o ensaio DPPH (1,1-difenil-1-picril-hidrazila) e, como padrões, o ácido gálico e a quercetina. Este estudo revelou uma melhor atividade antiradicalar da fração acetato de etila (IC50 = 1,82 ± 0,0374 μg mL-1 para escapos, e 2,05 ± 0,0133 μg mL-1, para capítulos) quando comparadas com os padrões de ácido gálico (IC50 = 4,37 ± 0,0377 μg mL-1) e quercetina (IC50 = 5,12 ± 0,0079μg mL-1). Foi observada uma maior concentração de fenóis totais na fração acetato de etila de escapos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This research describes the phytochemical study, the evaluation of the mutagenic and antiradicalar activities, and the determination of the total levels from flavonoids and phenols of the methanolic extract and ethyl acetate fraction of Paepalanthus chiquitensis Herzog, belonging to the Eriocaulaceae family. The analysis by HPLC-UV-PDA allowed inferring qualitatively that the methanolic extract of the capitulae has a higher concentration of naphythopyranones while scapes have a higher concentration of flavonoids. The fingerprints by HPLC-ESI-IT-MSn allowed to identify nineteen flavonoids and six naphythopyranones by the analisys of the fragmentation patterns by ESI-MSnin the negative mode for flavonoids and naphythopyranones, besides the comparison with to the literature data. In the phytochemical study, usual chromatographic techniques were used, especially for polar compounds -such as Gel Permeation Chromatography, Sephadex LH-20, High Performance Liquid chromatography and Solid Phase Extraction- to provide mixtures of flavonoids which were identified by spectroscopic methods (Mass Spectrometry, Ultraviolet and Nuclear Magnetic Resonance). That allowed to identify two flavonoids unpublished in the literature (PGC2 and PGC3). The antiradical activity of the methanolic extracts and ethyl acetate fractions were evaluated using DPPH assay, with gallic acid and quercetin as antiradical patterns. This study revealed a better antiradical activity of ethyl acetate fractions (IC50 = 1.82 ± 0.0374 μg mL-1, for scapes and 2.05 ± 0.0133 μg mL-1 for capitulae), when compared to the standards galic acid (IC50 = 4.37 ± 0.0377 μg mL-1) and quercetin patterns (IC50 = 5.12 ± 0.0079μg m L-1). Was observed a higher content of total phenols in the ethyl acetate fractions of the scapes (106.54 mg/g of total phenols presents in the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-20Bitstream added on 2014-06-13T18:41:10Z : No. of bitstreams: 1 marcarini_jc_dr_rcla_parcial.pdf: 265800 bytes, checksum: c6fbdf9127d68f8975699df1a232d5e7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-25T13:00:57Z: marcarini_jc_dr_rcla_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-25T13:03:19Z : No. of bitstreams: 1 000728824_20161231.pdf: 225457 bytes, checksum: 79edd21e91fa8d3d9aa45c8fb9480f5f (MD5) Bitstreams deleted on 2017-01-02T15:03:49Z: 000728824_20161231.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-01-02T15:05:07Z : No. of bitstreams: 1 000728824.pdf: 1493773 bytes, checksum: 9b305297fa111e5b9636e58999da953b (MD5) / Há um interesse crescente na investigação de substâncias de origem natural como os flavonóides, devido ao grande número de evidências dos benefícios que eles proporcionam para a saúde, principalmente reduzindo o desenvolvimento de doenças crônicas. Nesse contexto, a rutina é um flavonóide que tem sido bem caracterizado na literatura por apresentar uma variedade de atividades farmacológicas incluindo propriedades antiinflamatória, antialérgica, antimutagênica, imunomoduladora e hepatoprotetora. Estes efeitos protetores atribuídos a rutina estão relacionados, em grande parte, à sua propriedade antioxidante direta, no entanto, as vias moleculares e os mecanismos de ação desses processos são pouco conhecidos. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos citotóxicos, genotóxicos e protetores do flavonóide rutina em concentrações fisiológicas relevantes in vtiro. Para isso, foram utilizadas quatro linhagens de células tumorais: HTC (hepatoma de Rattus norvegicus); HepG2 (hepatoma humano); HT-29 (adenocarcinoma de cólon humano) e 786-O (carcinoma renal humano). Os resultados obtidos com as células HTC mostraram que a concentração de 810 uM de rutina não foi citóxica, apresentou efeito genotóxico e não alterou a expressão dos genes GSTa2 e p38, relacionados ao metabolismo de drogas e controle do ciclo celular, respectivamente. Além disso, a análise dos espectros de Ressonância Magnética Nuclear (RMN H1) dos metábolitos das células expostas a concentração genotóxica da rutina (810uM), revelou menores níveis de fosfocolina, glicerofosfocolina, creatina, lactato, acetato e glutationa. A análise dos resultados das linhagens HepG2 e HT-29 revelou que 100 μM de rutina foi citotóxica e reduziu a expressão e a atividade das principais enzimas antioxidantes endógenas: superóxido dismutase... / There is growing interest in the investigation of naturally occurring substances such as flavonoids, due to the large volume of evidence of the benefits they provide for health, mainly by reducing the development of chronic diseases. In this context, rutin is a flavonoid that has been well characterized in the literature by presenting a variety of pharmacological activities including antiinflammatory, antiallergic, antimutagenic, immunomodulating and hepatoprotective. These protective effects attributed to rutin are related in large part to their direct antioxidant properties, however, the molecular pathways and mechanisms of action of these processes are poorly understood. Thus, the objective of this study was to investigate the cytotoxic, genotoxic and protective flavonoid rutin in the relevant physiological concentrations in vtiro. Therefore, it was using four different strains: HTC (Rattus norvegicus hepatocellular); HepG2 (Human carcinoma), HT-29 (human colon adenocarcinoma) and 786- O (human kidney carcinoma). The results obtained with HTC cells showed that the concentration of 810 UM genotoxic effect of rutin showed no changes in gene expression GSTa2 and p38, related to drug metabolism and cell cycle control, respectively. In addition, NMR analysis of cells exposed to the genotoxic concentration rutin (810 UM) revealed lower levels of phosphocholine, glicerphosphocholine, creatine, lactate, acetate and glutathione. The results of the lines HepG2 and HT-29 revealed that 100 UM of rutin was cytotoxic and reduced the expression and activity of the major endogenous antioxidant enzymes: superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione reductase (Gr). On the other hand, 10 UM of rutin did not alter the viability and kinetics of cell proliferation, significantly increased the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:40:40Z : No. of bitstreams: 1 silva_rah_dr_arafcf_parcial.pdf: 156934 bytes, checksum: 0d16d4cb224d3289c64c5a248aa81946 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:55Z: silva_rah_dr_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:38Z : No. of bitstreams: 1 000689668.pdf: 5100417 bytes, checksum: 67ceb9ad77d0b0ee40dda842049ac5ff (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A espécie Morus nigra L. (Moraceae), amoreira negra, é originária do Sudoeste Asiático, sendo frequente nas regiões tropicais de todo o mundo. Do ponto de vista etnobotânico, a M. nigra possui popularidade por apresentar, não somente valores alimentares nutricionais, mas por conter vários compostos com ação terapêutica como adstringente, antiinflamatória, antioxidante e antitérmica, depurativa, analgésica, antisséptica, hipoglicemiante e usada no controle do climatério, não somente nos frutos, mas também em outras partes da planta como folhas e cascas da árvore. Os vegetais, presentes em grande quantidade na dieta humana, produzem um vasto número de substâncias naturais, chamados de metabólitos secundários como os compostos fenólicos, entre eles os flavonoides e polifenóis, que apresetam potencial antioxidante ou seja, são capazes de inibir ou atrasar os processos oxidativos, gerados por espécies oxidativas radicalares, ou não, retardando ou previnindo a oxidação de lipídios ou outras biomoléculas, evitando assim o surgimento de patologias relacionadas ao estresse oxidativo. O objetivo do trabalho foi avaliar o potencial antioxidante, antimicrobiano e antihemolítico do extrato bruto etanólico, obtidos por maceração de folhas de M. nigra e suas frações, produtos da partição liquido-líquido com hexano, acetato de etila e n-butanol. Para a avaliação da atividade antioxidante, foram utilizadas técnicas de supressão de espécies radicalares como DPPH, ABTS, anion superóxido e óxido nítrico, além de espécies oxidante não radicalar, como o HOCL. Também foi observado o efeito oxidorredutor das frações sobre a atividade catalítica da enzima horseradish peroxidase (HRP). A atividade antihemolítica foi avaliada... / The species Morus nigra L. (Moraceae), mulberry black, is indigenous to Southeast Asia and is common in tropical regions around the world. From the viewpoint ethnobotanical, M. nigra has popularity by presenting not only food nutritional values, but it contains several compounds with therapeutic action as an astringent, anti-inflammatory, antioxidant and antipyretic, depurative, analgesic, antiseptic, hypoglycemic and used to control the menopause, not only in the fruits, but also in other plant parts such as leaves and bark of the tree. The plant, present in large quantities in the human diet, produce a large number of natural substances, called secondary metabolites such as phenolic compounds, including flavonoids and polyphenols, which apresetam antioxidant that is, are able to inhibit or delay the process oxidative, oxidative species generated by free radical or not, delaying or preventing the oxidation of lipids and other biomolecules, thus avoiding the emergence of diseases related to oxidative stress. The objective of this study was to evaluate the potential antioxidant, antimicrobial and antihemolytic crude ethanol extract obtained by maceration of leaves of M. nigra and its fractions, the product liquid-liquid partition hexane, ethyl acetate and nbutanol. To evaluate the antioxidant activity, we used techniques such as deletion of DPPH radical species, ABTS, superoxide anion and nitric oxide, and nonoxidizing free radical species, such as HOCl. We also observed the effect of fractions oxidorredutor on catalytic activity of the enzyme horseradish peroxidase (HRP). The anti-hemolytic activity was evaluated by spectrophotometric measurement of hemoglobin released upon hemolysis without induction and inducer AAPH and HOCl. Antimicrobial activity was evaluated by microdiluições technique... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-17Bitstream added on 2014-06-13T18:41:32Z : No. of bitstreams: 1 moura_lm_dr_arafcf.pdf: 518537 bytes, checksum: 9cc3dbf80249e562d69ea91c87e25384 (MD5) / As frutas cítricas são muito consumidas e apreciadas, não só devido ao seu paladar agradável como também ao valor nutricional que possuem. O Brasil é o maior produtor e exportador mundial de laranjas, suco de laranja concentrado congelado e de suco de laranja pasteurizado (NFC - Not From Concentrated), sendo o estado de São Paulo o maior produtor. Já outras frutas cítricas como limão Siciliano, Grapefruit e Lima da Pérsia possuem uma produção nacional ainda pequena e parte do consumo interno é importada. Outro grupo de laranjas ainda pouco estudado é o das laranjas de polpa vermelha que apresentam o carotenóide licopeno na sua composição. Os compostos antioxidantes (carotenóides, compostos fenólicos, flavonóides) apresentam atividade anti-radical livre e alguns deles também são responsáveis pela cor das frutas. Considerando a importância das frutas cítricas com relação aos seus benefícios para a saúde, os objetivos deste trabalho foram avaliar a atividade anti-radical livre (DPPH• e ABTS•), compostos bioativos (carotenóides, flavanonas e ácido ascórbico) e parâmetros de cor de quatro variedades de frutas cítricas de polpa clara (Lima da Pérsia, Grapefruit, Limão Siciliano e Hamlin); comparar estes mesmos parâmetros entre duas variedades de polpa vermelha (Sanguíneas de Mombuca e baía Cara Cara) e uma de polpa clara (Pera Rio), colhidas no início, meio e fim de safra; e verificar o efeito da pasteurização nos compostos bioativos presentes no suco de laranja de polpa vermelha e de clara. As variedades Baía Cara Cara (CN486) e Pera Rio foram cultivadas na cidade Cordeirópolis/SP e a Sanguínea de Mombuca (CV 93) em três diferentes cidades do Estado de São Paulo, São Bento do Sapucaí, Cordeirópolis e Mogi Mirim. A variedade limão Siciliano apresentou o maior teor de ácido ascórbico (78,86mg), Grapefruit e Hamlin apresentaram o maior conteúdo... / Citrus fruits are widely consumed and enjoyed, not only because of its pleasant taste but also the nutritional value they have. Brazil is the largest producer and exporter of oranges, frozen concentrated orange juice (FCOJ) and orange juice NFC (Not from Concentrated), and the state of Sao Paulo largest producer. Yet other citrus fruits like lemon, grapefruit and Sweet Lime still have a small domestic production and share of domestic consumption is imported. Another group of oranges still less studied are the red pulp of oranges that have the carotenoid lycopene in its composition. The antioxidants (carotenoids, phenolic compounds, flavonoids) have anti-free radical activity and some of them are also responsible for the color of the fruit. Considering the importance of citrus fruits in relation to their health benefits, the objectives were to evaluate the anti-free radical (DPPH • and ABTS •), bioactive compounds (carotenoids, ascorbic acid, and flavanones) and parameters of color four varieties of citrus pulp clear (Sweet Lime, Grapefruit, Lemon and Hamlin), to compare these same parameters between two varieties of red pulp (of Blood and Mombuca Baía Cara Cara) and a clear pulp (Pera Rio) taken at the beginning, middle and end of harvest, and check the effect of pasteurization on bioactive compounds in orange juice pulp and red light. Varieties Baía Cara Cara (CN486) and Pear River were grown in the city Cordeirópolis / SP and Blood of Mombuca (CV 93) in three different cities of São Paulo, São Bento do Sapucaí, Cordeirópolis and Mogi Mirim. The Sicilian lemon variety had the highest content of ascorbic acid (78.86 mg), Grapefruit and Hamlin had the highest content of total carotenoids of the four fruits (13.58 and 11.32 mg / mL) and the antioxidant capacity was higher in fruit that had best levels of carotenoids and phenolic compounds. The hesperidin was present in three... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Arlindo Leal Boiça Júnior / Coorientador: Michael Joseph Stout / Banca: José Djair Vendramim / Banca: Valter Arthur / Banca: Francisco Jorge Cividanes / Banca: Ricardo Antonio Polanczyk / Resumo: A lagarta-da-soja Anticarsia gemmatalis Hübner e a lagarta-militar Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) são duas das principais pragas desfolhadoras da cultura da soja. Entre os métodos disponíveis para seu controle destaca-se o uso de genótipos que apresentam moderada e alta resistência a insetos. No entanto, diversos fatores, inerentes à planta ou ao inseto, podem influenciar a expressão da resistência nas plantas. Desse modo, esse trabalho teve o objetivo de avaliar possíveis fatores que possam influenciar a expressão da resistência em soja, testando-se as hipóteses de que flavonoides, nutrientes, enzimas oxidativas, compostos fenólicos, proteínas e inibidores de proteinase possam ser alguns dos mecanismos responsáveis pela resistência à lagarta-da-soja e lagarta-militar. Três experimentos foram realizados a fim de elucidar essas questões. O primeiro experimento avaliou a influência dos seguintes fatores na expressão de antixenose nos genótipos resistente IAC 100 e suscetível BRSGO 8360 a ambas as espécies de insetos em testes de preferência alimentar com e sem chance de escolha: uma lagarta versus duas lagartas por disco foliar; uso de lagartas sem interrução de alimentação versus com suspensão de alimentação por três horas antes do ensaio; disco foliar versus folíolo inteiro; parte superior versus parte inferior da planta; e estádio vegetativo versus estádio reprodutivo. O segundo experimento avaliou a influência da parte superior versus inferior da planta e de plantas em estádio vegetativo versus plantas em estádio reprodutivo na expressão de antibiose a A. gemmatalis e S. frugiperda nos genótipos resistente PI 227687 e suscetível IGRA RA 626 RR. Além disso, foram avaliadas as concentrações de nutrientes e flavonoides como possíveis mecanismos responsáveis pela resistência em soja. Os macronutrientes quantificados nas folhas dos genótipos de soja provenientes dos respectivos tratamentos ... / Abstract: The velvetbean caterpillar Anticarsia gemmatalis Hübner and the fall armyworm Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) are two of the major defoliating pests of soybeans. Among the methods available for their control, the use of genotypes possessing moderate and high resistance stands out. However, numerous factors, inherent to the plant or to the insect, may influence the expression of resistance in plants. Thus, this work aimed to evaluate potential factors influencing the expression of resistance in soybeans, and we tested the hypotheses that flavonoids, nutrients, oxidative enzymes, phenolics, proteins, and proteinase inhibitors may be some of the mechanisms responsible for resistance to the velvetbean caterpillar and fall armyworm. Three experiments were performed in order to elucidate these issues. The first experiment evaluated the influence of the following factors on the expression of antixenosis in the resistant genotype IAC 100 and susceptible genotype BRSGO 8360 to both insects in free-choice and no-choice feeding assays: one larva versus two larvae per leaf disc; use of non-starved larvae versus larvae starved for three hours prior to the assay; leaf disc versus entire leaflet; upper part versus lower part of plants; vegetative growth stage versus reproductive stage. The second experiment assessed the influence of the upper part versus lower part of the plant, and plants at vegetative growth stage versus reproductive stage on the expression of antibiosis to A. gemmatalis and S. frugiperda in the resistant genotype PI 227687 and susceptible genotype IGRA RA 626 RR. In addition, the concentration of nutrients and flavonoids were evaluated as potentital mechanisms responsible for resistance in soybeans. The macronutrientes quantified in the leaves of the soybean genotypes from the respective treatments were N, P, K, Ca, Mg, and S; the quantified micronutrients were B, Cu, Fe, Mn, and Zn; among the flavonoids, we quantified ... / Doutor