O concentrado em substituição à parte da forragem na alimentação, principalmente por grãos de cereais ricos em amido, a fim de suprir as necessidades energéticas do animal, pode exceder a capacidade digestiva do intestino delgado e atingir o ceco e cólon, acarretando em mudanças na microbiota e causando distúrbios gastrointestinais. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da suplementação do óleo essencial carvacrol sobre a digestibilidade aparente dos nutrientes da dieta, resposta glicêmica e insulinêmica pós-prandial, pH fecal, perfil plasmático de triglicerídeos, colesterol total, frações de colesterol ligado à lipoproteína de alta densidade (HDL-C), colesterol ligado à lipoproteína de baixa densidade (LDL-C) e colesterol ligado à lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL-C). Foram utilizados oito animais da raça Mini-horse, machos, castrados, com idade de 42±6 meses, peso médio de 135±15 kg, alimentados com dieta contendo alta proporção de concentrado: volumoso, constituída de 60% concentrado comercial peletizado e 40% de feno de gramínea, cuja variação foi a inclusão de um produto contendo 7% de carvacrol, onde os tratamentos foram inclusão de controle, 100, 200 e 300 ppm de óleo essencial contendo 7% de carvacrol. O delineamento experimental utilizado foi em quadrado latino duplo 4x4 com medidas repetidas no tempo e os dados obtidos foram submetidos à análise de variância com nível de significância de 5%. Os resultados dos coeficientes de digestibilidade MS, MO, PB, EE, MM, FDN e FDA foram respectivamente, P= 0,48; P= 0,66; P= 0,58; P= 0,64; P= 0,55; P= 0,58; P= 0,46; valores de pH fecal observados foram adequados (pH = 6,38) para o equilíbrio da microbiota, não sendo observado efeito de tratamento (P=0,84). Na avaliação da área abaixo da curva (AAC), não foi observado efeito de tratamento (P= 0,48) para os valores de glicose. A resposta plasmática de insulina apresentou efeito quadrático para AAC (P=0,05) nos tempos (90, 150 e 210 minutos). Na avaliação de gordura plasmática não foi encontrado efeito de tratamento para triglicérides o valor de (P=0,37), para colesterol total e frações HDL, LDL e VLDL os valores foram respectivamente, P= 0,85; P= 0,57; P= 0,94; P= 0,37. A inclusão de óleo essencial na dieta não promove efeito sobre a digestibilidade, resposta glicêmica, perfil plasmático de gordura plasmática e pH das fezes. A inclusão de óleo essencial promove efeito sobre a resposta insulinêmica. / The concentrate to replace part of the forage in the diet, mainly cereal grains rich in starch, in order to meet the energy needs of the animal, may exceed the digestive capacity of the small intestine and reach the cecum and colon, resulting in changes in the microbiota and causing gastrointestinal disorders. The aim of this study was to evaluate the effect of supplementation of carvacrol as essential oil on the apparent digestibility of nutrients, glucose and insulin responses postprandial fecal pH, plasma levels of triglycerides, total cholesterol and its fractions high density lipoprotein (HDL-C), low density lipoprotein (LDL-C) very low density lipoprotein (VLDL-C). Were used eight animals, Mini-horse breed, geldings, aged 42±6 months, average weight 135±15 kg, fed a diet containing high relation concentrate:roughage, consisting of 60% commercial concentrate and 40 % of grass hay, which variation was the inclusion of essential oil containing 7% carvacrol, with the treatments divided according to the level of inclusion: 0 (control), 100, 200 and 300 ppm. The experimental design was 4x4 latin square with repeated measures over time and the data were subjected to analysis of variance with a significance level of 5%. The results of the digestibility coefficients of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), ether extract (EE), mineral matter (MM), neutral detergent fiber (NDF) and acid deterge nt fiber (ADF) were, respectively, P=0.48; P=0.66; P=0.58; P=0.64; P=0.55; P=0.58 and P=0.46. Faecal pH values were found suitable (pH=6.38) to the balance of microorganisms, and there was no effect of treatment (P=0.84). In evaluation of the area under the curve (AUC), weren´t observed effects of treatment (P=0.48) values for glucose. The response of plasma insulin showed a quadratic effect for AUC (P=0.05) in times 90, 150 and 210 minutes. In the evaluation of plasma lipids wasn´t found effect treatment of the triglyceride value (P=0.37) for total cholesterol, and HDL-C, LDL-C and VLDL-C values were respectively (P=0.85; P=0.57; P=0.94 and P=0.37). The inclusion of essential oil in the diet does not promote effect on digestibility, glycemic response, plasma levels lipids and plasma pH of feces. The inclusion of essential oils promotes effect on the insulin response.

Orientadores: Reginaldo Guirardello, Cristiane Barbieri Rodella, Fábio de Ávila Rodrigues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T22:54:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SepulvedaLanziano_CarlosAlberto_M.pdf: 2488855 bytes, checksum: f2b18af4d9c9b44b4d3596ab297bbcda (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar catalisadores de titânia-zircônia na reação de isomerização de glicose para frutose. Foram testados catalisadores puros de titânia e zircônia, além de mistos desses óxidos em proporções em massa de 25:75, 50:50 e 75:25. Os catalisadores foram caracterizados por adsorção de nitrogênio a 77 K, difração de raios X e dessorção a temperatura programada de CO2 e NH3. A atividade catalítica dos catalisadores foi testada em reator de batelada, a temperaturas de 393, 403, 413 e 423 K e tempos de reação de 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 8 h. Os resultados mostraram que os catalisadores puros possuem estrutura cristalina, no caso da titânia fase anatásio e mistura de fase monoclínica e tetragonal no caso da zircônia. A área superficial dos catalisadores puros foi menor em comparação com os catalisadores mistos que mostraram ser materiais amorfos. Além disso, os catalisadores mistos apresentaram maior concentração de sítios ácidos e básicos. Todos os catalisadores permitiram a reação de isomerização, contudo favoreceram reações secundárias que transformaram a frutose em HMF e/ou ácido lático. A isomerização de frutose é atribuída às características básicas, enquanto a formação de HMF às características ácidas. Já a formação de ácido lático é considerada como a intervenção de sítios básicos e ácidos. Finalmente, considerando esses resultados foram supostas rotas de reação sobre os catalisadores e modeladas matematicamente. Os parâmetros reacionais foram determinados ajustando os dados experimentais aos modelos matemáticos usando a metodologia de ajuste de parâmetros de equações diferenciais ordinárias / Abstract: In this work, titania-zirconia catalyst were evaluated in the reaction of glucose into fructose. Pure Titania and Zirconia and mixed oxides in mass proportions 25:75, 50:50 and 75:25 were tested. The catalysts were characterized by nitrogen adsorption at 77K, X-ray diffraction and temperature programmed desorption of \ce{CO2} and \ce{NH3}. The catalytic activity was measured in batch reactor at temperatures of 393, 403, 413 and 423 K and reaction times of 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7 and 8 h. The results showed that pure catalyst structure is crystalline, Titania phase was anatase and Zirconia was mixture of monoclinic and tetragonal phase. The surface area of pure catalysts was lower that the mixed catalysts, these showed properties of amorphous solids. Similarly, the mixed catalysts showed higher concentration of acidic and basic sites. The catalysts allowed the isomerization reaction, but favored side reactions that convert fructose to HMF and lactic acid. Basic sites favored the reaction of isomerization of glucose into fructose and acid sites favored the reaction of dehydration of fructose to HMF. Basic and acid site favored lactic acid formation. Finally taking into account these results were supposed routes of reaction on the catalysts and modeled mathematically. The reaction parameters were determined by fitting the experimental data to mathematical models. The methodology used was parameter estimation for differential equations / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Antonio Herbert Lancha Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T21:33:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_LucianaOquendo_M.pdf: 20417126 bytes, checksum: f10ff0c3e726825817cef1f4adfc1630 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A obesidade já é considerada uma epidemia mundial independente de condições econômicas e sociais. O risco aumentado de mortalidade e morbidade associado à obesidade tem sido alvo de muitos estudos que tentam elucidar os aspectos da síndrome X como conseqüência da obesidade. Deste modo, o objetivo deste estudo foi desenvolver uma ração hiperlipídica, baseada na ingestão alimentar de mulheres obesas brasileiras, capaz de desencadear obesidade em ratas fêmeas saudáveis. Na preparação da ração foi utilizado: banha de porco como fonte de gordura (38,7% do vcr), caseína como fonte de proteína (17,1% do VCr) e amido como fonte de carboidrato (44,2%do vcr). Após 40 dias de alimentação hiperlipídica, ratas wistar apresentaram o mesmo peso corporal comparado com o grupo que ingeriu ração controle, no entanto, o grupo experimental apresentou maior quantidade de gordura na carcaça e também maior tecido adiposo marrom comparado com o grupo controle. Quando a ração hiperlipídica foi mantida por mais 20 dias, e depois por mais 80 dias, as evidencias de aCÚInulo de gordura foram ainda maiores. Foi possível identificar também prejuízo na tolerância à glicose durante teste oral de tolerância à glicose realizado após 40, 60 e 120 dias de alimentação hiperlipídica comparado com controle. Os animais alimentados com dieta hiperlipídica por 60 dias apresentaram hiperinsulinemia (29,7%) e hiperglicemia (9,3%) quando comparado com os valores encontrados no grupo controle. Deste modo, foi possível concluir que a ração desenvolvida neste estudo foi eficiente em desencadear o quadro de obesidade com prejuízo na tolerância à glicose em ratas saudáveis / Abstract: Obesity has been reported as a worldwide epidemic, independent of economic and social conditions. The possible causes of increased mortality and morbidity associated with obesity have been focused by many studies that attempt to understand the X syndrome, one of the consequences of obesity. The aim ofthe present study was to develop a high fat diet based on the dietary intake of Brazilian obese women, which would be able to induce dietary obesity in healthy female rats. The diet was formulated with lard as fat source (38,7% of calories), casein as protein source (17,1 % of calories) and starch as carbohydrate source (44,2% of calories). After 40 days of high fat diet consumption, young female Wistar rats presented the same body weight compared with the control group, but higher carcass fat content. Brown adipose tissue weight was also increased in these animals, as compared with controls. Evidence of fat accumulation was higher when the diet was sustained for 60 and 120 days. We could also identify impairment in glucose tolerance with the oral glucose test tolerance after 40,60 and 120 days in the animals on the high fat diet. These rats presented hyperinsulinemia (29,7%) and hyperglycemia (9,3%) after 60 days, as compared with controls. The diet developed in this study was therefore efficient in inducing obesity and glucose intolerance and healthy female rats / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Antonio Herbert Lancha Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T23:25:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francischi_RachelPamfilioPradode_M.pdf: 10363324 bytes, checksum: bf68d1468b48d6b02221c295845846bf (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Dietas hiperlipídicas (HL) são fatores de risco para doenças metabólicas. A alimentação fracionada (padrão nibbling) parece prevenir tais desordens, e dietas com poucas e volumosas refeições (padrão gorging) podem causar obesidade e picos na insulinemia. O objetivo deste estudo foi avaliar o desenvolvimento de obesidade, de intolerância à glicose e de dislipidemia em ratas submetidas a diferentes freqüências de ingestão alimentar em dietas controle (11% de lipídeos) ou HL (39% de lipídeos). Ratas Wistar foram acompanhadas por 8 semanas, tendo sido divididas em 4 grupos: CG (controle gorging, com ingestão de ração comercial lx/dia durante 2h/dia); HLG (HL gorging, com consumo de HL lx/dia por 2h/dia); CN (controle nibbling, com acesso 24h/d à ração comercial) e HLN (HL nibbling, com acesso 24h/d à ração HL). O consumo alimentar foi limitado para igualar a ingestão energética entre os 4 grupos. Foram realizados OGTTs (testes orais de tolerância à glicose), dissecações e pesagens dos tecidos adiposos, extrações de gorduras dos tecidos, análises séricas e de glicogênio. Animais em HL apresentaram maior peso e maiores depósitos de tecido adiposo. A incorporação de gorduras na carcaça foi maior em CG (88,1 i: 21,0 mglg) que CN (55,7 i: 11,2 mglg), porém semelhante entre HLG (101,9 i: 19,2 mglg) e HLN (101,3 i: 14,3 mglg). CG e CN apresentaram maior conteúdo de glicogênio muscular que HLG e HLN. Grupos gorging apresentam maior teor de glicogênio hepático. Não foram detectadas diferenças na insulinemia, colesterolemia, trigliceridemia, albuminemia e nas concentrações de HDLcolesterol sérico, porém HLG apresentou a maior glicemia basal. A curva glicêmica de animais em HL apresentou glicemias mais elevadas que os controles. Houve prejuízo na tolerância à glicose também em resposta ao padrão gorging. O padrão gorging causou maior acúmulo de gorduras nos animais em dieta com restrição de gorduras, mas não aumentou o já eficiente acúmulo de tecido adiposo da alta ingestão de lipídeos. A associação da HL ao padrão gorging induziu prejuízos na tolerância à glicose. Estudos futuros serão importantes para melhor caracterizar a evolução da síndrome metabólica em resposta a estes comportamentos alimentares / Abstract: Fat diets (HL) are risk factor for metabolic diseases. Frequent feeding (nibbling pattern) may prevent these disorders, and meal feeding (gorging) may cause obesity and insulinemia peaks. The aim of this study was to evaluate obesity and glucose intolerance development, and serum lipids in rats submitted to different feeding frequencies associated to HL (39% fat) and control diet (11%). Female Wistar rats were accompanied during 8 weeks divided into: CG (gorging control, one meal a day with stock diet for 2h1day); BLG (gorging fat, one meal a day with fat rich diet for 2h1day); CN (nibbling control, 24h1d access to stock diet); BLN (nibbling fat, 24h1d access to fat rich diet). Food intake was limited in order to match the energy intake among all groups. OGTT (Oral glucose tolerance test), adipose tissue dissection, lipid extraction, plasma and glycogen analyses were performed. HL animals were heavier and fatter than controls. Lipid incorporation into carcass fat were greater in CG (88,1 i: 21,0 mg/g) than CN (55,7 i: 11,2 mg/g), however BLG (101,9 i: 19,2 mg/g) and BLN (101,3:t 14,3 mg/g) had the same fat amount in body carcass. CG and CN had more musc1e glycogen content than BLG and BLN. Gorging groups showed heavier liver glycogen deposit. There were no differences in insulinemia, cholesterolemia, serum albumin and serum HDL-cholesterol, but BLG had the greatest basal serum glucose. OGTT showed greater glucose concentrations in HL animals than in controls. There was glucose tolerance impairment in gorging rats. Meal feeding increased the rate of fat deposition when the low-fat diet is given, but did not improve the already efficient utilization of the high-fat diet. The association between HL and gorging induced glucose tolerance impairment. Future studies are important to better understand the metabolic syndrome evolution consequent to these feeding behaviors / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:00:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3962_1.pdf: 546764 bytes, checksum: ee06009adf82956a3114ca9f4d3f6f36 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Introdução: Estudos epidemiológicos têm relatado um aumento progressivo na prevalência do Diabetes Mellitus (DM) com o avançar da idade. Objetivo: Descrever o perfil glicêmico e fatores associados em idosos do Programa de Saúde da Família de Camaragibe-PE. Métodos: Estudo de corte transversal e de série de casos de diabetes mellitus auto-referida (DMAR), realizado em novembro/dezembro-2003. O perfil glicêmico foi delineado pelas concentrações da glicose plasmática e pelo percentual de glicação da hemoglobina (A1c). Como fatores associados, foram avaliados: características socioeconômicas e demográficas, estado nutricional e estilo de vida. Resultados: A prevalência de hiperglicemia (&#8805;126 mg/dL) foi de 9,5% (IC95% 6,0 14,5), com níveis de glicose plasmática mais elevados nos indivíduos com excesso de peso. Entre os idosos com DMAR, cerca de 1/3 apresentou níveis glicêmicos elevados e 2/3 controle glicêmico inadequado (A1c &#8805;8,0%). As concentrações de A1c mostraram correlação positiva (r= 0,72) com as concentrações de glicose plasmática. Os níveis glicêmicos foram maiores nos homens e nos idosos com <65 anos. A glicose plasmática e A1c não mostraram correlação (p>0,05) com as variáveis relacionadas ao estilo de vida. Conclusão: A menor prevalência de hiperglicemia na população idosa de Camaragibe, em comparação aos dados de outros municípios brasileiros poderia refletir a boa cobertura na atenção à saúde local. No entanto, entre os idosos com diagnóstico de DMAR o controle glicêmico inadequado impõe a adoção de estratégias terapêuticas de maior efetividade

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:02:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9039_1.pdf: 2295894 bytes, checksum: 5b874a171afea93832753cb0a467211a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo desta dissertação foi avaliar em ratos adultos, os efeitos da desnutrição protéica perinatal no metabolismo energético do músculo esquelético isolado submetido à estimulação adrenérgica. Ratas Wistar foram divididas em dois grupos de acordo com a manipulação nutricional durante toda gestação e lactação: o grupo controle recebeu uma dieta com 17% caseína (C, n=6) e o grupo desnutrido recebeu uma dieta com 8% de caseína (LP, n=6). O peso corporal e o consumo alimentar foram avaliados semanalmente. No primeiro dia após o nascimento foi verificado o tamanho e o peso das ninhadas. Após o desmame os filhotes receberam dieta padrão de biotério e foram avaliados quanto ao peso corporal, comprimento corporal e o ganho de peso corporal até a idade adulta. Aos 100 dias de idade os animais foram submetidos a um jejum de 12 horas e foram sacrificados para retirada dos tecidos. Foi retirado o sangue do animal para avaliar, através de espectrofotometria e ELISA, as concentrações séricas de proteínas totais, glicose, colesterol, triglicerídeos, leptina e insulina. Ambos, os músculos sóleo e EDL foram removidos e incubados em equipamento de banho isolado de tecidos por duas horas com fenilefrina 10-5 M, um agonísta seletivo do receptor &#945;1- adrenérgico, ou com isoprenalina 10-5 M, um agonista dos receptores &#946;1- e &#946;2- adrenérgico. Após a estimulação adrenérgica dos músculos, foram avaliadas a atividade das enzimas citrato sintase, PFK e &#946;-HAD. Nossos resultados demonstram que animais submetidos à desnutrição protéica perinatal apresentam menor peso no nascimento e maior ganho de peso pós-natal. Com relação às avaliações do soro observamos apenas uma redução na concentração de proteínas totais em animais desnutridos. No músculo sóleo, foi observado que animais desnutridos apresentaram menor atividade da enzima &#946;-HAD e que mesmo quando estimulados com &#945; ou &#946; agonistas a atividade desta enzima permaneceu reduzida. No músculo EDL, a atividade das enzimas PFK e CS foi maior em animais desnutridos em relação ao controle. Quando tratados com isoprenalina animais desnutridos apresentaram redução da atividade da enzima PFK e um aumento da atividade da enzima &#946;-HAD em relação aos animais desnutridos que foram tratados com fenilefrina e os que não foram tratados. O presente estudo mostrou que a desnutrição protéica perinatal programa o metabolismo energético de forma diferente em dois tipos de músculos esqueléticos. No músculo predominantemente oxidativo, diminui a atividade da enzima chave da beta oxidação de ácidos graxos, sendo este efeito persistente mesmo quando estimulados com agonistas adrenérgicos. Enquanto que, no músculo predominantemente glicolítico, aumenta a atividade de enzimas chaves do metabolismo dos carboidratos e quando estimulados com &#946;-agonista adrenérgico induz o metabolismo dos ácidos graxos e inibe o metabolismo glicolítico

O fungo filamentoso Trichoderma reesei é caracteristicamente reconhecido pela produção de celulases e hemicelulases, que lhe permitem utilizar uma ampla variedade de polissacarídeos como fonte de carbono. Neste trabalho, descrevemos a caracterização de dois genes de T. reesei, Trhxt1 e Trhxt2, que codificam proteínas com alta similaridade a transportadores de glicose de vários microorganismos. Os dois genes foram identificados em um banco de dados de ESTs de T. reesei. A análise computacional de Trhxt1 e Trhxt2 indica que ambos fazem parte da major facilitator superfamily (MFS), apresentando, tipicamente, 12 segmentos transmembrânicos. A expressão de Trhxt1 ocorre apenas em baixos níveis de glicose(&#8776; 100 &#181;mol 1-1), enquanto a de Trhxt2 parece ocorrer de forma constitutiva, independentemente da fonte de carbono. Em baixas concentrações de oxigênio, a expressão de Trhxt1 é induzida e a de Trhxt2, reprimida. O sistema de transporte em T. reesei apresenta um componente de afinidade muito alta por glicose (Km &#8776; 20 &#181;mol 1-1) semelhante ao de outros fungos filamentosos. Dados sobre o transporte de glicose em uma cepa mutante &#916;Trhxt1 indicam que o gene Trhxt1 está envolvido com o transporte em baixos níveis de glicose (&#8804; 100 &#181;mol 1-1) que correspondem, provavelmente, aos valores encontrados no solo, o habitat natural de T. reesei.. Interessantemente, a indução do sistema de celulases de T. reesei por celulose está retardada no mutante &#916;Trhxt1, o que sugere a importância do transporte de glicose na expressão dos genes das celulases. Finalmente, além de descrever os primeiros genes de transportadores de glicose em T. reesei, esperamos que este trabalho possa contribuir para o preenchimento de uma lacuna em relação ao transporte de açúcares em fungos filamentosos em geral. / The filamentous fungus Trichoderma reesei is a natural soil inhabitant capable of metabolizing a vast number of polysaccharide substrates. In this work, we describe two genes of T. reesei, named Trhxt1 and Trhxt2, which code for proteins with significant similarities to glucose transporters from other fungi. These genes were identified in an EST database of T. reesei. Sequence analysis of TrHXT1 and TrHXT2 revealed 12 putative transmembrane domains and several other characteristic motifs found in members of the major facilitator superfamily (MFS). Trhxt1 is transcriptionally induced only by low levels of glucose(&#8776; 100 &#181;mol 1-1), while Trhxt2 expressionis independent of both glucose concentration and carbon source. We also show that Trhxt1 expression is enhanced when cells are exposured to low oxygen levels; in contrast, Trhxt2 expression seems to be repressed at these conditions. Glucose transport in T. reesei is apparently mediated by a multicomponent uptake system, in which the high-affiníty component has a Km of approximately 20 &#181;mol 1-1. This low Km value is similar to the values reported for glucose uptake by other filamentous fungi. Kinetics of glucose transport in a T. reesei &#916;Trhxt1 strain suggests that Trhxt1 is involved in glucose uptake in conditions of low glucose (&#8804; 100 &#181;mol 1-1), which are most probably found in the soil, a low-nutrient environment. Interestingly, índuction ofthe T. reesei cellulase system by cellulose ís significantly delayed in the &#916;Trhxt1 mutant, suggesting that glucose transport may be important to the mechanisms of expression of the cellulase genes. Finally, we hope that this work may be helpful to provide a better understanding of sugar uptake in filamentous fungi, for which there is little information available.

O fungo filamentoso Trichoderma reesei é caracteristicamente reconhecido pela produção de celulases e hemicelulases, que lhe permitem utilizar uma ampla variedade de polissacarídeos como fonte de carbono. Neste trabalho, descrevemos a caracterização de dois genes de T. reesei, Trhxt1 e Trhxt2, que codificam proteínas com alta similaridade a transportadores de glicose de vários microorganismos. Os dois genes foram identificados em um banco de dados de ESTs de T. reesei. A análise computacional de Trhxt1 e Trhxt2 indica que ambos fazem parte da major facilitator superfamily (MFS), apresentando, tipicamente, 12 segmentos transmembrânicos. A expressão de Trhxt1 ocorre apenas em baixos níveis de glicose(&#8776; 100 &#181;mol 1-1), enquanto a de Trhxt2 parece ocorrer de forma constitutiva, independentemente da fonte de carbono. Em baixas concentrações de oxigênio, a expressão de Trhxt1 é induzida e a de Trhxt2, reprimida. O sistema de transporte em T. reesei apresenta um componente de afinidade muito alta por glicose (Km &#8776; 20 &#181;mol 1-1) semelhante ao de outros fungos filamentosos. Dados sobre o transporte de glicose em uma cepa mutante &#916;Trhxt1 indicam que o gene Trhxt1 está envolvido com o transporte em baixos níveis de glicose (&#8804; 100 &#181;mol 1-1) que correspondem, provavelmente, aos valores encontrados no solo, o habitat natural de T. reesei.. Interessantemente, a indução do sistema de celulases de T. reesei por celulose está retardada no mutante &#916;Trhxt1, o que sugere a importância do transporte de glicose na expressão dos genes das celulases. Finalmente, além de descrever os primeiros genes de transportadores de glicose em T. reesei, esperamos que este trabalho possa contribuir para o preenchimento de uma lacuna em relação ao transporte de açúcares em fungos filamentosos em geral. / The filamentous fungus Trichoderma reesei is a natural soil inhabitant capable of metabolizing a vast number of polysaccharide substrates. In this work, we describe two genes of T. reesei, named Trhxt1 and Trhxt2, which code for proteins with significant similarities to glucose transporters from other fungi. These genes were identified in an EST database of T. reesei. Sequence analysis of TrHXT1 and TrHXT2 revealed 12 putative transmembrane domains and several other characteristic motifs found in members of the major facilitator superfamily (MFS). Trhxt1 is transcriptionally induced only by low levels of glucose(&#8776; 100 &#181;mol 1-1), while Trhxt2 expressionis independent of both glucose concentration and carbon source. We also show that Trhxt1 expression is enhanced when cells are exposured to low oxygen levels; in contrast, Trhxt2 expression seems to be repressed at these conditions. Glucose transport in T. reesei is apparently mediated by a multicomponent uptake system, in which the high-affiníty component has a Km of approximately 20 &#181;mol 1-1. This low Km value is similar to the values reported for glucose uptake by other filamentous fungi. Kinetics of glucose transport in a T. reesei &#916;Trhxt1 strain suggests that Trhxt1 is involved in glucose uptake in conditions of low glucose (&#8804; 100 &#181;mol 1-1), which are most probably found in the soil, a low-nutrient environment. Interestingly, índuction ofthe T. reesei cellulase system by cellulose ís significantly delayed in the &#916;Trhxt1 mutant, suggesting that glucose transport may be important to the mechanisms of expression of the cellulase genes. Finally, we hope that this work may be helpful to provide a better understanding of sugar uptake in filamentous fungi, for which there is little information available.

Esse estudo avaliou o efeito da glicose sobre a atividade da PKA e sua interação com o SGLT1 e os trocadores Na+/H+ (NHE1 e NHE3). As células HEK-293 foram transfectadas com hSGLT1 wild type (WT) ou mutante (S418H) e tratadas 20 dias com DMEM contendo glicose 5 mM ou 25 mM. Foi avaliada a expressão de hSGLT1, hSGLT1+GFP, NHE1, NHE3 e PKA. Foi avaliada a expressão de hSGLT1+GFP e SGLT2 na membrana, com ou sem H-89, Manose, Sucrose e Filipina. Foi avaliada a velocidade de recuperação do pH intracelular (dpHi/dt), onde a solução de NH4Cl foi substituída por uma solução de glicose 5 ou 25 mM ou ambas as soluções na vigência de H-89 ou S3226. Esses dados indicam que o aumento do AMPc pela glicose altera a expressão e atividade dos SGLTs e NHEs. Nossos experimentos utilizando a transfecção do SGLT1 demonstraram que as células regulam a distribuição de SGLT1 e 2 na membrana, frente ao aumento extracelular desse substrato e que as vias ativadas pela glicose afetam a capacidade de recuperação do pH intracelular (pHi), através do NHE3. / This study evaluated the effect of glucose on the PKA activity and its interaction with SGLT1 and the Na+/H+ exchanger (NHE1 and NHE3). The HEK-293 cells were transfected with hSGLT1 wild type (WT) or mutant (S418H) and treated 20 days with DMEM containing glucose 5 mM or 25 mM. The hSGLT1, hSGLT1+GFP, NHE1, NHE3 and PKA expression was analyzed. The surface hSGLT1+GFP and SGLT2 expression with or without H-89, Manose, Sucrose and Filipina was evaluated. The pHi recovery rate (dpHi/dt) was analyzed replacing the NH4Cl solution to glucose 5 or 25 mM solution or both with H-89 or S3226. These data indicate that the glucose increases the cAMP concentration and alters the expression and activity of SGLTs and NHEs. Our experiments using SGLT1 transfection demonstrated that, in the treatment with high glucose concentration, HEK-293 cells regulate the SGLT1 and 2 cellular distribution and that the pathways activated by glucose impair the pHi recovery rate, through the NHE3.

Os estudos foram realizados em cultura de células HEK-293 (human embrionic kidney cells). Por microscopia de fluorescência, avaliou-se a velocidade de recuperação do pHi (dpHi/dt). Por Western blot, avaliou-se a expressão de SGLTs e NHEs e a translocação dos SGLTs foi avaliada por imunofluorescência. Resultados: No controle, a dpHi/dt foi de 0,169 ± 0,020 unid pH/min (n=6). A glicose modula dose e tempo dependentemente a dpHi/dt. O tratamento crônico aumentou esse parâmetro e somente Florizina (inibidor dos SGLTs), H-89 (inibidor da PKA) e BAPTA (quelante de Ca2+intracelular Ca2+i) reduziram esse efeito. O tratamento crônico induziu a internalização do SGLT1, manteve o SGLT2 no citosol e aumentou sua expressão. Conclusões: No tratamento crônico, a internalização do SGLT1 depende da PKA, independe de Ca2+i e a permanência do SGLT2 no citosol depende tanto da PKA quanto do Ca2+i. Assim, a distribuição celular do SGLT2 altera a atividade dos NHEs. / In this work we used human embryonic kidney (HEK-293 cells). The pHi recovery rate (dpHi/dt) was evaluated through fluorescence microscopy. The expression of SGLT´s and NHEs was analysed through Western blot and translocation of SGLTs was evaluated through Imunofluorescence. Results: In the control situation, the dpHi/dt was 0,169 ± 0,020 units pH/min (n=6). This parameter was modulated by glucose in a concentration and time dependent manner. Chronic treatment increased the dpHi/dt and this stimulatory effect was inhibited by Phlorizin (SGLTs inhibitor), H-89 (PKA inhibitor) and BAPTA (intracellular Ca2+ cheleator - Ca2+i). The chronic treatment induced internalization of SGLT1, increased the expression of SGLT2 and kept it in the cytosol. Conclusions: In chronic treatment, the internalization of SGLT1 involves a PKA-dependent and Ca2+i- independent mechanism. The maintenance of SGLT2 in the cytosol depends on PKA and Ca2+i. Thus, the cellular distribution of SGLT2 is associated with NHEs activity.