Orientadores: Dora Maria Grassi-Kassisse, Regina Celia Spadari-Bratfisch / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T11:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_Julianade_D.pdf: 1515697 bytes, checksum: cf7b29c6343aa3e81992652c33e8c1f3 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A literatura é escassa quanto à modelos de estresse relacionados ao estudo da utilização periférica de glicose, com o objetivo de compreender os mecanismos através dos quais a situação de estresse possa levar a resistência à insulina. Nosso modelo de estresse induzido por choques nas patas aplicados em três dias consecutivos em ratos apresenta um quadro metabólico bastante semelhante àquele apresentado em quadros iniciais de diabetes tipo 2, tornando-se fundamental o estudo da captação de glicose pelos tecidos neste modelo animal. Considerando que o modelo de estresse por choque nas patas promove alterações fisiológicas que têm repercussões endócrinas e metabólicas possíveis de serem demonstradas in vivo e in vitro, os objetivos deste trabalho foram investigar a captação periférica de glicose em ratos estressados utilizando as técnicas de ivGTT, clamp euglicêmico-hiperinsulinêmico e captação de glicose em adipócitos isolados. Nossos resultados demonstraram que: a captação de glicose pelos adipócitos isolados de ratos estressados está menos sensível a insulina e mais sensível a noradrenalina quando comparado aos adipócitos de ratos controle; a estimulação adrenérgica da captação de glicose é principalmente mediada pelo a1-AR; a estimulação do ß2-AR não teve efeito em adipócitos de ratos controle, mas inibiu significativamente a captação de glicose pelos adipócitos isolados de ratos estressados, que pode ser uma troca da via de sinalização Gs para Gi; os adipócitos isolados de tecido adiposo epididimal de ratos estressados não apresentam alteração na produção de lactato basal e nem estimulada quando comparado aos provenientes de ratos controle; os adrenoceptores do subtipo a1 estão envolvidos na captação de glicose in vivo demonstrada pelos ensaios de ivGTT; o modelo de choque nas patas alterou a sensibilidade dos receptores de insulina, avaliada pelo ensaio de clamp euglicêmico-hiperglicêmico apenas em parte da população estudada. Este conjunto de dados permite concluir que a indução de estresse por choques nas patas causa alterações na captação periférica de glicose, principalmente através da sinalização adrenérgica, que caracterizam este modelo como uma importante ferramenta para o estudo de alterações metabólicas induzidas pelo estresse / Abstract: There are few animal models to study the peripheral glucose uptake alterations induced by stress. Rat foot-shock stress model induces metabolic alterations similar to diabetes type 2. Considering that rat foot-shock stress model causes physiological alterations which are possible to be studied carrying out experiments in vivo or in vitro we claim in this work evaluate glucose uptake in stressed rats throughout ivGTT, clamp euglycemic-hyperinsulemic, glucose uptake and lactate production in isolated adipocytes. Our results show that: glucose uptake by isolated stressed rat adipocytes is decreased by insulin and increased by a1-AR agonists; besides ß2-AR stimulation significantly inhibit glucose uptake induced by a1-AR; there is no alteration in lactate production by isolated adipocytes rats; a1-ARs are involved in glucose uptake demonstrated in ivGTT assays; sensitivity to insulin receptors were decreased in some rats when available by clamp assays. All these results together suggested that stress induced by foot-shock in rats induces alterations in glucose uptake, mainly throughout adrenergic mechanisms, and this model could be very useful as a tool to study metabolic alterations during stress response / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

RACIONAL: A obesidade caracteriza-se por um excesso de tecido adiposo branco que causa morbidades metabólicas, mecânicas e a morte de aproximadamente 2,8 milhões de pessoas anualmente. Sua fisiopatologia envolve alterações em mecanismos que interagem no cérebro, sejam humorais, neurais e comportamentais, os quais podem ser eliciados por alimentos. Por sua vez, técnicas de neuroimagem funcional, como o Single-photon Emission Tomography (SPECT), surgiram como ferramentas para avaliar alterações funcionais in vivo. Por isso, questionamos se imagens de SPECT cerebral, alteradas após a ingestão de glicose em comparação a um teste controle com água, explicariam, pelo menos em parte, o comportamento alimentar da obesidade. OBJETIVOS: Comparar a perfusão (ativação) cerebral de imagens de SPECT, após ingestão de água vs. glicose, em mulheres obesas e com peso normal. Correlacionar a intensidade da perfusão encontrada com níveis sanguíneos de leptina, insulina e glicemia, bem como com a quantidade de gordura corporal. MATERIAIS E MÉTODOS: 10 mulheres com e 10 sem obesidade (n = 20) foram submetidas à SPECT cerebral duas vezes, após marcação pelo [99mTc]-ECD 30 minutos após ingestão de 300 mL de água e de uma solução com 75 gramas de glicose, em dias separados (40 SPECTs), tendo sido cada sujeito controle de si mesmo. As imagens foram comparadas intragrupo e entre grupos por meio do software Statistical Parametric Mapping. Modelos de efeitos mistos foram usados para avaliar correlações entre as variáveis. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Mulheres obesas apresentam maior ativação em regiões da Default Mode Network e da Salience Network após o teste com água. Enquanto as obesas apresentam-se mais engajadas na percepção dos processos fisiológicos (como fome e sede) na situação basal, com água, apenas aquelas com peso normal parecem responder às alterações desses processos eliciadas pelo alimento oferecido. Após estímulo com glicose, apenas o grupo sem obesidade aumentou a perfusão em regiões relacionadas à recompensa e ao controle do comportamento, como corpo estriado e córtices orbitofrontal e pré-frontal. A perfusão nestas áreas apresentou correlação negativa com a interação entre leptina e insulina (Coef. = - 0,001, p = 0,003). Além disso, tais regiões recebem aferências dopaminérgicas e, por isso, temos como hipótese que déficits na sinalização da dopamina explicariam os achados encontrados. CONCLUSÃO: A ingestão de glicose eliciou respostas relacionadas à recompensa alimentar normal e a um controle apropriado sobre o apetite nas mulheres sem obesidade, não sendo observado o mesmo nas obesas, processo do qual parece participar a interação entre insulina e leptina e déficits na sinalização dopaminérgica. / RATIONALE: Obesity is an excess of white adipose tissue that causes mechanical, metabolic injuries and mortality of approximately 2.8 million people annually. Its physiology involves alterations in humoral, neural and behavioral mechanisms that interact in brain, which can be elicited by nutrients. Functional neuroimaging techniques, such as Single-photon Emission Tomography (SPECT), arise as tools to evaluate abnormalities in vivo. Therefore, we argue if changes in brain images, after intake of glucose, compared to a test with water, would explain, at least in part, the altered feeding behavior of obesity. OBJECTIVES: Compare perfusion (activation) of brain SPECT images after water vs. glucose intake in obese and normal weight volunteers. Correlate the intensity of perfusion found with blood levels of leptin, insulin and glucose, as well as with the amount of body fat. MATERIALS AND METHODS: 10 women with and 10 women without obesity (n = 20) underwent SPECT twice, after labeling by the [99mTc]-ECD 30 minutes after ingesting 300 ml of water and a solution of 75 grams glucose, on separate days (40 SPECTs) being each subject control of yourself. The images were compared between groups and intragroup using Statistical Parametric Mapping. Mixed effects models were used to assess correlations between variables. RESULTS AND DISCUSSION: Obese women have higher activation in regions of the Default Mode Network and Salience Network after test with water. While obese have become more engaged in the perception of physiological processes (such as hunger and thirst) at baseline, with water, this group do not seem to respond to changes of these processes elicited by the food offered. After glucose intake, only those with normal weight increased perfusion in regions related to food reward and behavioral control, such as striatum and orbitofrontal and prefrontal cortices. The perfusion in these areas was negatively correlated with the interaction between leptin and insulin (Coef = -. 0.001, p = 0.003). In addition, these regions receive dopaminergic afferents and therefore we hypothesized that deficits in dopamine signaling could explain the results observed. CONCLUSION: Glucose intake elicited responses related to normal food reward and the appropriate control over appetite in women without obesity, not being observed the same in obese volunteers, a process in which the interaction between insulin and leptin, as well as dopamine signaling seems to participate.

O objetivo deste trabalho foi analisar a influência dos fatores etários, sexuais, da gestação, do puerpério, da lactação e dos sistemas de criação nos constituintes do metabolismo lipídico e glicemia de búfalos. A análise bioquímica foi obtida por meio da determinação dos teores séricos de colesterol, triglicérides, ß-hidroxibutirato (ß-HBO), ácidos graxos não esterificados (NEFA), e teores plasmáticos de glicose. Também foi objetivo sugerir valores de referência para estes metabólitos. Foram utilizadas seis propriedades de bubalinos das raças Murrah, Mediterrâneo, e mestiços, todas localizadas no Estado de São Paulo. No total, foram colhidas amostras de soro e plasma de 635 animais, entre novembro de 2009 e julho de 2010. Para a avaliação da condição do estado geral dos animais, foi utilizada avaliação do escore de condição corporal (ECC) atribuindo notas de 1 a 5 somente para animais acima de 24 meses. Os valores da média aritmética, desvio padrão, erro padrão da média, coeficiente de variação, intervalo de confiança (95%), e valores mínimo e máximo foram calculados utilizando o procedimento Means do SAS versão 9.2. Os testes de normalidade dos resíduos e homogeneidade das variâncias foram realizados utilizando o Guide Data Analise do SAS. Os dados foram analisados por ANOVA, usando o procedimento Glimmix do SAS. As informações de grupo (Idade; Gestação; Lactação; Sexo; Puerpério; Sistema de Criação), Fazenda; Categoria; Número de Crias e ECC, assim como suas interações, foram utilizadas nos modelos estatísticos. Concluiu-se que os constituintes metabólicos foram consideravelmente influenciados pela idade, sexo, puerpério, lactação e sistema de criação, não sendo verificada influência relevante pela gestação de novilhas. Devido à grande quantidade de amostras estrategicamente colhidas, obtidas de diferentes realidades criatórias, também foi possível sugerir valores de referência para o lipidograma e glicemia de búfalos de diferentes idades, sexos, momentos gestacionais, fases do periparto e períodos de lactação. / The aim of this study was to analyze the influence of age, gender, pregnancy, puerperium, lactation and breeding systems in the constituents of lipid metabolism and glucose of buffaloes. The biochemical analysis was obtained by determining the levels of serum cholesterol, triglycerides, beta-hydroxybutyrate (ß-HBO), non-esterified fatty acids (NEFA) and plasma glucose levels. It was also meant to suggest reference values for these metabolites. Were used six properties of buffaloes Murrah, Mediterranean, and crossbreed, all located in the São Paulo state. Were collected 635 samples of serum and plasma between November 2009 and July 2010. To assess the condition of the general state of animals was used to evaluate body condition score (BCS) by assigning scores from 1 to 5 only for animals over 24 months. The values of the arithmetic mean, standard deviation, standard error means, coefficient of variation, confidence interval (95%), and minimum and maximum values were calculated using the Means procedure of SAS version 9.2. Tests for normality of residuals and homogeneity of variances were performed using the SAS Guide to Data Analysis. Data were analyzed by ANOVA using the SAS procedure Glimmix. The group information (Age, Pregnancy, Lactation, Gender, Puerperium; Creation System), Farm, Category, Number of Offspring and BCS, as well as their interactions, were used in statistical models. It was concluded that the metabolic components were significantly influenced by age, gender, postpartum, lactation and breeding system, and is not verified by the relevant influence pregnant heifers. Due to the large number of samples strategically taken, obtained from different stock breeding, were also suggest reference values for serum lipids and glucose of buffaloes in different ages, genders, moments of pregnancy, stages of peripartum and lactation periods.

A participação do fígado na homeostasia da glicose materna ainda não está esclarecida. Este estudo avaliou a produção hepática de glicose em ratas prenhes e controle bem como algumas das principais vias metabólicas hepáticas envolvidas nas alterações metabólicas mediadas pelo fígado ao final do período de prenhez em ratas. Houve diminuição do conteúdo de glicogênio hepático e glicose circulante em ratas prenhes. A taxa de gliconeogênese diminuiu em prenhes assim como o conteúdo de IR e sua fosforilação em tirosina mediante estímulo com insulina, porém a fosforilação em serina da AKT e o conteúdo e expressão gênica da PEPCK, mantêm-se como em controles. Há aumento do conteúdo de PTP1B e de sua associação ao IR na presença de insulina. Houve diminuição do conteúdo de G6Pase, AMPK total e da fosforilação da AMPKa/1 e, conseqüentemente, da fosforilação da ACC em ratas prenhes. Há aumento de triglicérides circulantes e diminuição de triglicérides no tecido hepático. Aumenta a expressão gênica da FAS e diminuem as expressões de G-6-Pase, MEs, LXR, SREBP1 e PFK. Os resultados indicam não haver resistência à insulina no fígado de ratas prenhes e que a atividade metabólica hepática no período está voltada para a síntese de novo de ácidos graxos. / The involvement of the liver in maternal glucose homeostasis is still unclear. This study evaluated the hepatic glucose production in pregnant rats and some of the hepatic metabolic pathways involved in metabolic disorders mediated by the liver in late pregnancy.There was a decrease in liver glycogen content and plasma glucose in pregnant rats. The rate of gluconeogenesis decreased as well as the contents of IR tyrosine phosphorylation after insulin stimulus, but the pSer-AKT, PEPCK, SHP2 contents, SHP2-IR association and the expression of PEPCK remained unaltered. The content of PTP1B and its association with IR decreases in the presence of insulin. The content of G6Pase, AMPK and the phosphorylation of AMPK a/1 and consequently the phosphorylation of ACC decreases in liver from pregnant animals. Triglyceride levels and the expression of FAS was increased in pregnant rats whereas the triglycerides reduced in the liver. The expression of G-6-Pase, MEs, LXR, SREBP1 and PFK decreased in the liver of pregnant rats. The results indicate no insulin resistance in the liver of pregnant rats, and that hepatic metabolic activity in this period is focused on de novo fatty acids synthesis.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Objetivou-se mensurar a taxa de colesterol presente no plasma seminal (PS) de caprinos, e verificar se ocorre efluxo de colesterol dos espermatozÃides para o PS, e como tal evento ocorre individualmente apÃs uma hora de incubaÃÃo a 38 ÂC. O experimento foi conduzido no LaboratÃrio de Estudos em ReproduÃÃo Animal da UFC. Foram utilizados oito bodes criados intensivamente e alimentados segundo o NRC/caprinos (1981). Os ejaculados coletados foram divididos em trÃs alÃquotas. A primeira foi centrifugada para obtenÃÃo do PS, que foi acondicionado em tubos eppendorfs e armazenado a -18 ÂC. A segunda alÃquota foi incubada a 38 ÂC / 1 h e depois centrifugada para obtenÃÃo do PS. Essas duas alÃquotas foram analisadas quanto ao nÃvel de colesterol total e HDL. A terceira alÃquota foi diluÃda em citrato de sÃdio â glicose e submetida ao teste termorresistÃncia, para avaliaÃÃo do vigor, motilidade, cÃlulas espermÃticas normais e alteraÃÃes morfolÃgicas totais. O delineamento experimental empregado foi de blocos casualizados, para a anÃlise dos dados utilizou-se o programa estatÃstico SAS@ 9.0. Foram observadas diminuiÃÃes significativas do vigor e da motilidade entre os tempos de incubaÃÃo. Entretanto, na maioria dos animais ocorreu estabilizaÃÃo dos parÃmetros a partir de 60 min de incubaÃÃo. Pequena diferenÃa foi observada entre os indivÃduos para estes parÃmetros. O nÃvel de colesterol total encontrados no PS de caprinos aumentou significativamente apÃs a incubaÃÃo em 50% dos animais. Antes e apÃs a incubaÃÃo, o nÃvel de colesterÃis total e HDL variaram significativamente entre os indivÃduos. A proporÃÃo de colesterol HDL no PS foi muito elevada, os valores foram 83,79% e 78,41%, respectivamente. Foi observada uma associaÃÃo significativamente (p<0,01) positiva e moderada, entre a proporÃÃo de HDL e o vigor espermÃtico (r = 0,30) e entre a motilidade e a proporÃÃo de HDL foi considerada pequena (r = 0,19). Concluiu-se que o PS de caprinos contÃm uma alta proporÃÃo de colesterol e o principal colesterol presente à o HDL. / The objective was to measure the rate of cholesterol present in seminal plasma (SP) goats, and verify whether cholesterol efflux from sperm to the PS, and as such event occurs individually after one hour incubation at 38  C. The experiment was conducted at the Laboratory for Animal Reproduction, UFC. Eight goats were used intensively reared and fed according to NRC / goat (1981). The ejaculates collected were divided into three aliquots. The was first centrifuged to obtain the PS, which was packed in tubes eppendorfs and stored at -18  C. The second aliquot was incubated at 38  C / 1 h and then centrifuged to obtain the PS. These two samples were analyzed the level of total cholesterol and HDL. The third aliquot was diluted in sodium citrate - glucose and subjected to heat resistance test for evaluation of force, mobility, normal sperm cells and morphological changes in total. The design trial was a randomized block design to data analysis was used The statistical program SAS @ 9.0. There were significant reductions of force and motility between incubation times. However, in most animals parameter stabilization occurred after 60 min of incubation. Small difference was observed among individuals for these parameters. Cholesterol Total found in PS of goats increased significantly after incubation in 50% of animals. Before and after incubation, the level of total and HDL cholesterols ranged significantly among individuals. The proportion of HDL cholesterol in the ER was very high values &#8203;&#8203;were 83.79% and 78.41% respectively. We observed a association (p <0.01) positive and moderate between the proportion of HDL and sperm vigor (r = 0.30) and between the motility and the proportion of HDL was considered small (r = 0.19). It was concluded that PS goats contains a high proportion of cholesterol and cholesterol This is the main HDL.

O desenvolvimento de sensores eletroquímicos para glicose integrados a cateteres tem como requisitos básicos a sua miniaturização e funcionamento por períodos relativamente longos no ambiente intravenoso. A função de tais sensores é o acompanhamento de forma continuada e em tempo real, a evolução clínica de pacientes internados em unidades de terapia intensiva (UTIs). Dentre os sensores para glicose, os biossensores amperométricos baseados na reação enzimática de glicose oxidase se mostrou o mais promissor. Diferentes procedimentos para a construção de tais microssensores implantáveis foram desenvolvidos. Um conjunto de eletrodos, constituído fios de platina (mais adiante cobre, com diâmetro 0,18 mm) e de prata (diâmetro 0,20 mm) revestidos com poli-vinil-formol foram posicionados no interior de uma agulha de aço inoxidável (30,0 mm de comprimento e 0,80 a 1,2 mm de diâmetro) e fixados com resina epóxi, constituindo um dispositivo único com os eletrodos de trabalho, referência e auxiliar, respectivamente. A otimização do sensor envolveu a platinização eletroquímica da superfície do eletrodo de trabalho, o que aumentou a sua área efetiva e favoreceu a deposição do material enzimático. A presença de um detergente não iônico favoreceu a formação de um filme uniforme de enzimas e a eletropolimerização de 1,2-diaminobenzeno (em presença de albumina de soro bovino) foi utilizada para a formação de um filme com a característica de minimizar a interferência de espécies neutras. A adição de um filme de Náfion® à superfície do sensor aumentou a seletividade. O sensor resultante caracterizou-se por possuir um tempo de resposta curto (~6 s), linearidade de 1,0 até 12,5 mmol dm-3 com um limite de detecção de 1,0 mmol dm-3 , diminuição na resposta de espécies eletroativas (ácido ascórbico 2,0% e paracetamol 10,5% em relação à glicose) e uma vida útil superior a sete dias, em tampão fosfato 0,05 mol dm-3 . Para possibilitar o implante de tais sensores, foram exploradas diferentes metodologias de esterilização, sendo a mais favorável a irradiação com acelerador de elétrons com doses acumulativas. Sensores revestidos com acetato de celulose e Náfion® (a melhor condição) apresentaram perda de atividade da ordem de 15%, após serem irradiados. / The development of electrochemical sensors for glucose integrated into catheters has as basic requisite its miniaturization and the requirement of functioning for relatively long periods in the intravenous environment. The function of such sensors is the continuous monitoring on real time of the clinical evolution of patients hospitalized in intensive therapy units (UTIs). Amongst the sensors for glucose, amperometric biosensors based on the enzymatic reaction of glucose oxidase has been considered as the most promising ones. Different procedures for the construction of such microsensors to be implanted have been developed. A set of electrodes, constituted by a platinum wire (along this work, it was substituted by copper wires) with 0.18 mm diameter and a silver wire with 0.20 mm diameter coated with poly-vinyl-formol were positioned inside a stainless needle (30.0 mm length and 0.80 to 1.2 mm diameter) and fixed with epoxy resin, resulting in a single device containing the working, reference and auxiliary electrodes, respectively. The optimization of the sensor involved the electrochemical platinization of the working electrode surface, increasing its effective area and favoring the deposition of the enzymatic material. The presence of a non-ionic detergent favored the formation of a uniform film of enzyme and the electropolymerization of 1,2-diaminobenzene (in the presence of albumin and bovine serum) was used for the formation of a film able to ® interference of neutral species. The addition of a Nafion® film to the sensor surface increased its selectivity. The resultant sensor was characterized for its short time -3 response (~6 s), linearity between 1.0 and 12.5 mmol dm-3 with a detection limit of 1.0 mmol dm-3 , reduction in the interference of electroactive species (2.0% ascorbic acid and 10.5% paracetamol in relation to glucose) and a useful life larger than seven days, in 0.05 mol dm-3 phosphate buffer. To make possible the implantation of such sensors, different methodologies of sterilization were explored, being the most favorable the irradiation with electron accelerator using accumulating doses. Sensors coated with cellulose acetate and Nafion® (the best condition) presented loss of activity (around 15%), after the irradiation.

Objetivamos identificar os efeitos celulares pelo qual o DHEA melhora a função das ilhotas pancreáticas. Ratos wistar com 12-14 meses de idade receberam uma única injeção subcutânea de DHEA (10mg.kg-1) ou veículo. Após uma semana, ilhotas pancreáticas foram isoladas para realização dos testes: secreção de insulina, respiração mitocondrial, oxidação de glicose, atividade da citrato sintase, fragmentação de DNA, expressão gênica e dosagem plasmáticas de hormônios esteróides sexuais. DHEA apresentou melhoria significativa na secreção de insulina. Notou-se um aumento na oxidação da glicose, respiração mitocondrial, atividade da citrato sintase, expressão do PCNA mRNA e reduzida apoptose. O uso de inibidores de receptores de andrógeno e estrógeno inibiu a secreção de insulina estimulada por glicose. Concluímos que o DHEA é capaz de melhorar a funcionalidade metabólica e reduzir o índice de apoptose da ilhota pancreática, melhorando a capacidade secretora, sendo este papel modulado, provavelmente, pela ligação do DHEA aos receptores de andrógenos e estrógenos. / We sought to identify the cellular effects by which DHEA improves pancreatic islets function. Male Wistar rats, 12-14 month-old, receive one subcutaneous injection of DHEA (10mg.kg-1) or vehicle. After a week, pancreatic islets from these animals were isolated and submitted to the following tests: insulin secretion, mitochondrial respiration, glucose oxidation, citrate synthase activity, DNA fragmentation, gene expression and the dosage of plasmatic steroid hormones. DHEA treatment resulted in significant improvement in insulin secretion. We observed an increase in glucose oxidation, mitochondrial respiration, citrate synthase activity, PCNA mRNA expression, and reduced apoptosis. Glucose-stimulated insulin secretion was inhibited by androgen and estrogen receptor inhibitors. We conclude that DHEA is capable of improving metabolic functionality and reduces apoptosis index in pancreatic islets, improving the secretory capacity stimulated by different secretagogues, with this being probably modulated by the binding of DHEA to androgen and estrogen receptors.

O GLUT4 (gene Slc2<font face=\"symbol\">a4) é responsável pela captação de glicose sob estímulo insulínico, e alterações na sua expressão se relacionam à resistência à insulina (RI). Variações na concentração de estradiol (E2) estão relacionadas a RI e menor expressão deste transportador, mecanismo que pode ser mediado pelo fator transcricional NF<font face=\"symbol\">k-B, um repressor de Slc2<font face=\"symbol\">a4. Avaliou-se em células 3T3-L1 a regulação da expressão de Slc2<font face=\"symbol\">a4/GLUT4, a atividade de ligação de NF<font face=\"symbol\">k-B e a captação de glicose pelo E2 e o papel de ESR1 (isoforma 1 do receptor de E2) nesta regulação. Tratou-se as células por 1 dia com E2 e PPT (agonista de ESR1). O PPT aumentou a expressão de Slc2<font face=\"symbol\">a4/GLUT4 na ausência ou presença de E2 bem como a captação de glicose e diminuiu a atividade de ligação de NF<font face=\"symbol\">k-B. Os resultados apresentados demonstram que o E2, atuando via ESR1 aumenta a expressão de Slc2<font face=\"symbol\">a4/GLUT4, efeitos estes parcialmente mediados por NF<font face=\"symbol\">k-B, resultando em alteração na captação de glicose. / GLUT4 (gene Slc2<font face=\"symbol\">a4) is responsible by insulin-induced glucose uptake and alterations in its expression are related to insulin resistance (IR). Variability in estradiol levels (E2) is related with IR and lower glucose transporter expression and this mechanism can be mediated by transcriptional factor NF<font face=\"symbol\">k-B, which is an Slc2<font face=\"symbol\">a4 repressor. Our aim was to evaluate in 3T3-L1 adipocytes the role of E2 in Slc2<font face=\"symbol\">a4/GLUT4 expression, NF<font face=\"symbol\">k-B binding activity and glucose uptake as well as the ESR1 (estrogen receptor 1) role in this regulation. For this, 3T3-L1 cells were treated for 1 day with E2 and PPT (ESR1-agonist). PPT enhanced Slc2<font face=\"symbol\">a4/GLUT4 expression in the absence or presence of E2 as well as the glucose uptake and decreased NF<font face=\"symbol\">k-B binding activity. Our results show that E2 increases Slc2<font face=\"symbol\">a4/GLUT4 expression via ESR1 and this effect is partially mediated by NF<font face=\"symbol\">k-B, and allow parallel changes in glucose uptake.

A análise de fluxos metabólicos para a produção de PHAMCL por Pseudomonas sp. LFM046 revelou que a baixa eficiência de conversão de carboidratos em PHA (60-70% do valor máximo teórico) deve estar associada à utilização principal da via das pentoses (VP) para o metabolismo de carboidratos. Eficiências significativamente maiores poderiam ser obtidas se uma parcela maior da glicose fosse metabolizada pela via Entner-Doudoroff (ED). Assim, neste trabalho foi realizada a análise de fluxos metabólicos utilizando glicose marcada (C13) e o melhoramento genético de Pseudomonas sp. LFM046 utilizando estratégia de engenharia metabólica. Experimentos com glicose marcada confirmaram um maior fluxo de carboidratos pela VP em relação a ED. A superexpressão de genes específicos de ED em Pseudomonas sp. LFM046 demonstrou apenas pequenos aumentos na eficiência de conversão de carboidratos em PHA pelas linhagens recombinantes. / The metabolic flux analysis for PHAMCL production by Pseudomonas sp. LFM046 revealed that the low efficiency of carbohydrates conversion into PHA (60-70% of the maximum theoretical value) should be associated with the main use of pentose phosphate pathway (PP) for the carbohydrate metabolism. Significantly higher efficiencies could be obtained if a larger portion of the glucose was metabolized via the Entner-Doudoroff (ED). Therefore, the metabolic fluxes analysis was performed in this work using labeled glucose (13C) and the genetic improvement of Pseudomonas sp. LFM046 by using metabolic engineering approach. Experiments with labeled glucose confirmed an increased flow of carbohydrates by PP compared to ED. The overexpression of specific genes from ED in Pseudomonas sp. LFM046 showed only small increases in the efficiency of carbohydrates conversion into PHA by recombinant strains.

Foram utilizados quatro éguas, da raça brasileiro de hipismo, com idade aproximada de 24 meses, com peso médio de 500 Kg, em um delineamento experimental Quadrado Latino balanceado 4X4, com arranjo fatorial 2X2 dos tratamentos e medidas repetidas no tempo, sendo o primeiro fator dois concentrados, um somente peletizado (CT) e o outro peletizado com pré-extrusão do ingrediente milho (CM), e o segundo fator é constituído pela diferença na ordem de fornecimento do concentrado e do volumoso onde um o concentrado é fornecido às 7:00h e às 19:00h e o volumoso às 9:00h e às 21:00h (C7V9); e o outro o inverso (V7C9). Não houve efeito dos tratamentos na aceitabilidade, na digestibilidade aparente total da matéria seca (51,2; 54,5; 53,4; 58,2%) da matéria orgânica (54,1; 57,5; 56,1; 60,7%), do amido (98,2; 98,3; 98,2; 98,2%), da proteína bruta (65,6; 70,3; 68,9; 72,6%), da fibra em detergente neutro (42,5; 44,6; 42,9; 49,3%) e da fibra em detergente ácido (34,8; 37,3; 37,0; 42,3%), porém noto-se uma tendência de melhora para os fatores V7C9 e CM. A resposta glicêmica plasmática foi analisada pela área abaixo da curva de glicose com valores obtidos para CTC7V9 de 493,7; CTV7C9, 407,6; CMC7V9, 430,7 e CMV7C9, 387,8, porém não houve efeito do fator concentrado, já o fator sistema de alimentação sofreu diferença estatística com aumento para o sistema C7V9, o que demonstra uma curva menos acentuada para V7C9, demonstrando uma absorção mais uniforme da glicose. / Four mares had been used, of the race Brazilian of jumping, with approach age of 24 months, average weight of 500 kg, in balanced Latin Squared experimental delineation 4X4, with factorial arrangement 2X2 of the treatments and measures repeated in the time, being the first factor two concentrates, one only pelletized (CT) and the other pelletized with daily pay-drawing of the ingredient maize (CM), and as the factor is constituted by the difference in the order feeding the concentrate and the voluminous one where one the concentrate is feeded 7:00h and to 19:00h and voluminous 9:00h and 21:00h (C7V9); e the other the inverse one (V7C9). It did not have effect of the treatments in acceptability, in the total apparent digestibilidade of dry substance (51,2; 54,5; 53,4; 58,2%) of organic substance (54,1; 57,5; 56,1; 60,7%), of starch (98,2; 98,3; 98,2; 98,2%), of rude protein (65,6; 70,3; 68,9; 72,6%), of the fiber in neutral detergent (42,5; 44,6; 42,9; 49,3%) and of the fiber in acid detergent (34,8; 37,3; 37,0; 42,3%), however I notice a trend of improvement for factors V7C9 and cm. The plasmatic glucose it was analyzed by the area below of the glucose curve with values gotten for CTC7V9 of 493,7; CTV7C9, 407,6; CMC7V9, 430,7 and CMV7C9, 387,8, however did not have effect of the concentrated factor, already the factor feeding system suffered to difference statistics with increase for system C7V9, what it less demonstrates an accented curve for V7C9, demonstrating an absorption more uniform of the glucose.