e algumas vias de sinalização envolvidas com a reabsorção de HCO3-, além do efeito do tratamento com florizina e com streptozotocina. Para isso, utilizamos o método de microperfusão estacionária in vivo. Perfusões tubulares com solução de glicose 5mM aumentaram a reabsorção de bicarbonato em comparação com soluções contendo florizina sem glicose. Porém, perfusão de soluções de glicose 20mM ocasionaram efeito intermediário sobre esta reabsorção. A perfusão de solução contendo glicose 5mM com os inibidores PD169316 e LY294002 aboliu o efeito estimulatório promovido pela glicose 5mM. O tratamento com streptozotocina aboliu o efeito inibitório da perfusão de solução de glicose 20mM. Já o tratamento com florizina, não apresentou nenhum efeito adicional à inibição ocasionada pela perfusão de glicose 20mM mas inibiu o efeito estimulatório produzido pela perfusão de glicose 5 mM. / We studied the modulation of bicarbonate reabsorption by the apical Na+/H+ exchanger of renal proximal tubule by luminal glucose, and the signaling path of this relationship. Treatment with phloridzin and streptozotocin diabetes on HCO3- reabsorption was also studied. We used stationary microperfusion in vivo for this purpose. Tubule perfusions with 5 mM glucose increased bicarbonate reabsorption compared to solutions without glucose plus phloridzin. Perfusion with 20 mM glucose caused an intermediate effect on JHCO3- compared to 0/phloridzin and 5 mM glucose. The inhibitors PD169316 and LY294002 with 5 mM glucose blocked the stimulatory effect of the latter, but H89 had no such effect. Streptozotocin diabetes abolished the inhibitory effect of 20 mM glucose perfusion. Chronic phloridzin did not produce any additional effect on JHCO3- during 20 mM glucose perfusion in normal rats., but blocked JHCO3- during perfusion with 5 mM glucose.

Diversos estudos buscam identificar novas moléculas com ações regulatórias sobre a via de sinalização da insulina e consequentemente na homeostase da glicose. Assim, este trabalho visa avaliar o potencial de extratos de frutos no controle da homeostase glicêmica. Os frutos avaliados foram o morango (cv. Toianoca, Camarosa, Oso Grande e Camino Real), a amora-preta e a framboesa vermelha, em dois tempos de amostragem, sendo considerado como tempo A1 e tempo A2. As amostras foram caracterizadas quanto ao seu conteúdo de fenólicos totais, conteúdo de antocianinas monoméricas, capacidade antioxidante, avaliada pelos métodos DPPH e ORAC, ácido elágico total, capacidade de inibição da alfa-glicosidase e captação de glicose e lipólise em tecido adiposo de camundongos (ensaio explante). Dentre os frutos, no primeiro tempo de amostragem, a amora-preta e o morango, cv Oso Grande, foram os que apresentaram maior conteúdo de fenólicos totais (62,36 e 34,89 mg AG/g, respectivamente) no entanto não foram mantidos esses valores no segundo tempo de amostragem, com concentração 30% e 60% inferior, respectivamente; e maior concentração de antocianinas monoméricas (45,33 mg/g e 3,09 mg/g, respectivamente). Em relação a inibição da enzima alfa-glicosidase, avaliado em extrato metanólico, o fruto framboesa vermelha e o morango cv. Camino Real foram as que apresentaram alto potencial inibitório nos dois tempos de amostragem (IC50 0,47 mg FT e IC50 0,57 mg FT para framboesa vermelha e IC50 0,50 mg FT e IC50 0,46 mg FT para Camino Real). Quando avaliado os extratos enriquecidos em fenólicos, o valor de IC50 com maior potencial dentre os frutos avaliados foi da amora-preta, nos dois tempos A1 e A2 (0,0023 mg FT e 0,0021 mg FT, respectivamente). Para captação de glicose em tecido adiposo explate, ao utilizar a insulina para estimular a captação de glicose juntamente com o tratamento (extrato), esse estimulo foi efetivo no aumento da captação de glicose somente com as amostras cv. Camino Real e cv. Oso Grande. Isso pode ser explicado pela alta correlação encontrada de antocianinas identificadas no fruto, como pelargonidina-3-O-glicosídeo. Por outro lado, somente a amora-preta A1 aumentou a lipólise em condição basal, mas nenhuma fruta foi eficiente para reduzir a lipólise em condição estimulada pelo isoproterenol. Sendo assim, frutas vermelhas podem ser boas fontes de compostos bioativos, principalmente antocianinas, as quais podem ter corroborado positivamente com os resultados. / Several studies seek to identify new molecules with regulatory actions on the insulin signaling pathway and consequently on glucose homeostasis. Thus, this work aims to evaluate the potential of fruit extracts in the control of glycemic homeostasis. The fruits evaluated were strawberry (cv. Toianoca, Camarosa, Oso Grande and Camino Real), blackberry and red raspberry, in two sampling times, being considered as time A1 and time A2. Fruits were evaluated for total phenolic, monomeric anthocyanins and contents, antioxidant capacity, evaluated by DPPH and ORAC methods, alpha-glycosidase inhibition capacity and glucose uptake and lipolysis in adipose tissue of mice (explant assay). Among the fruits, in the first sampling period, blackberry and strawberry, cv. Oso Grande, showed the highest total phenolic content (62.36 and 34.89 mg AG / g, respectively), with a decrease of the 30% and 60%, respectively, in the second sampling time; and higher monomeric anthocyanins concentration (45.33 mg/g and 3.09 mg/g, respectively). The methanolic extracts of raspberry and the strawberry cv Camino Real (A1 and A2) presented the highest alpha-glucosidase inhibitory potential. Otherwise, the enriched-polyphenol extract of blackberry (A1 and A2) presented the highest potential among the evaluated fruits. Adipose tissue treated with strawberry cv. Camino Real and cv. Oso Grande was effective in increasing glucose uptake stimulated by insulin. This can be explained by the high correlation with the anthocyanins pelargonidin-3-O-glycoside identified in this fruit. In addition, blackberry A1 was the only sample to increase the lipolysis in basal condition, but all other fruits were not effective to decrease lipolysis in stimulated condition. Thus, berries could be a good sources of bioactive compounds to maintain the glucose homeostasis.

Orientador: Otto Mack Junqueira / Coorientador: Luciano Hauschild / Banca: Antonio Carlos Laurentiz / Banca: Eurípedes Laurindo Lopes / Banca: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Banca: Lizandra Amoroso / Resumo: O primeiro experimento foi conduzido nas instalações de um abatedouro comercial situado no município de Xanxerê/SC, com o objetivo de avaliar as principais injúrias que ocorrem na pele e nas carcaças suínas oriundas do manejo na área de espera do abatedouro. Foram utilizados 1000 suínos, machos e fêmeas, com aproximadamente 150 dias de idade, criados e manejados de acordo com as normas do abatedouro comercial, observados desde o momento do desembarque na área de descanso do abatedouro até o momento da entrada na área de insensibilização. Foram avaliados os danos à superfície corporal, compreendendo contusões, marcas de mordidas e feridas, juntamente com hematomas roxos ou esverdeados na carcaça. Observou-se a ocorrência de danos na pele dos animais, causados por marcas de mordidas ocorridas por brigas de animais de lotes diferentes misturados em uma mesma baia, principalmente no dorso e nos membros dianteiros dos suínos. Foram observadas contusões decorrentes da condução dos animais, com predominância no dorso e nos membros, não sendo encontradas feridas nem hematomas nos animais avaliados. Conclui-se que as maiores injúrias à carcaça durante o manejo na área de espera do abatedouro são compreendidas por marcas de mordidas na pele oriundas de brigas e contusões oriundas do manejo de condução dos animais. O segundo estudo foi conduzido nas instalações de uma granja comercial em Santa Catarina, com o objetivo de avaliar o efeito da inclusão de glicose, bicarbonato de sódio e vitamina E via dieta hídrica durante o jejum pré-abate sobre o rendimento de carcaça, peso relativo de órgãos, conteúdo estomacal e parâmetros de qualidade de carne em suínos. Foram utilizados 500 animais, distribuídos no último dia pré-abate durante o período de dieta hídrica em delineamento experimental inteiramente casualizado, com dez tratamentos e dez repetições, com cinco suínos em cada unidade experimental. Os ... / Abstract: The first experiment was conducted in a commercial slaughterhouse in Xanxerê city, Santa Catarina, intending to evaluate frequently problems that occur in swine skin and carcass during slaughterhouse resting area handling. Were used 1000 male pigs, 150 day-old, raised and handled according to the rules of the commercial slaughterhouses, and reared welfare norms. Were evaluated skin injury, comprehending marks of biting and wounds, and also green or purple hematomas in the carcass. Were observed injuries in the pigs skin, caused by biting, fighting between animals of different locates in a same place, mainly in the back and front limbs of the animals. Also, occurred punch marks in the back and limbs, resulting from the animal conduction handling, not been observed wounds and hematomas on animals evaluated. It is concluded that the highest incidence of carcass injuries in the handling of slaughterhouse resting area are composed by biting marks resulted from fighting and punch marks in the skin arisen from animal conduction. The second trial was conducted in a commercial swine farm and was aimed the evaluation of the addition of glucose, sodium bicarbonate and vitamin E in water during swine pre-slaughter fasting on the carcass yield, relative organs weight, stomach content and pork quality parameters. Were used 500 animals, distributed in the last day during fasting pre-slaughter, in a completely randomized design, with ten treatments and five replicates of five pigs each experimental unit. The treatments were the addition of 0,45% of sodium bicarbonate; 0,45% of sodium bicarbonate + 200mg/L of vitamin E; 0,55% of sodium bicarbonate; 0,55% of sodium bicarbonate + 200mg/L of vitamin E; 50g/L of glucose; 50g/L of glucose + 200mg/L of vitamin E; 75g/L of glucose; 75g/L of glucose+ 200mg of vitamin E; 200mg/L of vitamin E and a treatment with water only. The addition of glucose, bicarbonate and vitamin E does not influence the carcass ... / Doutor

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-03-15T13:08:48Z No. of bitstreams: 1 PDF - Rafaella Bastos Leite.pdf: 1326501 bytes, checksum: 57e6fffb3bbe74433cba4f469a5b6545 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-21T21:05:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rafaella Bastos Leite.pdf: 1326501 bytes, checksum: 57e6fffb3bbe74433cba4f469a5b6545 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-21T21:05:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rafaella Bastos Leite.pdf: 1326501 bytes, checksum: 57e6fffb3bbe74433cba4f469a5b6545 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-21T21:05:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Rafaella Bastos Leite.pdf: 1326501 bytes, checksum: 57e6fffb3bbe74433cba4f469a5b6545 (MD5) Previous issue date: 2014-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The keratocystic odontogenic tumor (KOT) stands out among the other odontogenic lesions in view of the potentially aggressive biological behavior and its association in some cases, with the Gorlin syndrome. Some studies have suggested a more aggressive biological behavior for KOTs associated with Gorlin syndrome, compared to isolated KOTs, characterized by greater growth capacity and bone infiltration and higher tendency to recur. The present study aimed to evaluate, descriptively and comparatively, by means of immunohistochemistry, the expression of glucose transporter-1 (GLUT-1) and -3 (GLUT-3) and the angiogenic index (CD34) in isolated primary and recurrent KOTs and in KOTs associated with Gorlin syndrome. The sample was composed by 21 isolated KOTs (14 primary and 7 recurrent) and 14 KOTs associated with Gorlin syndrome. The expression of GLUTs was evaluated in the epithelial component of the lesions, establishing the percentage of immunopositive cells, according to the scores: score 0 (negative), score 1 (≤ 25% of positive cells), score 2 (26% - 50% of positive cells), score 3 (51% - 75% of positive cells), and score 4 (≥ 76% positive cells). For the angiogenic index, the microvessel count (MVC) technique was applied, quantifying the microvessels immunoreactive to anti-CD34 antibody. Regarding the median scores for immunopositivity for GLUT-1 and the angiogenic index, comparisons between groups were performed using the nonparametric Kruskal-Wallis test. For GLUT-3, the data obtained from the evaluation of epithelial expression of this protein were submitted to descriptive statistical analysis. Possible correlations between the scores of immunopositivity for GLUT-1 and angiogenic index in the lesions were evaluated using the Spearman correlation test. The level of significance was set at 5% (p <0.05). The analysis of epithelial GLUT-1 immunoreactivity revealed predominance of score 4 in isolated primary KOTs (n = 9, 64.3%) and in KOTs associated with Gorlin syndrome (n = 8; 57.1%). In isolated recurrent KOTs, it was identified a slightly higher frequency of cases with scores 4 (n = 3; 42.9%) and 2 (n = 2; 28.6%). The nonparametric Kruskal-Wallis test showed no statistically significant difference between groups (p = 0.406). Regarding the GLUT-3, all groups showed higher frequency of negative cases. The few KOTs positive for GLUT-3 were classified as score 1 (≤ 25% of positive cells), showing a low expression of this protein in the epithelial component. The mean number of microvessels was 63.80 in isolated primary KOTs, 61.11 in KOTs associated with the Gorlin syndrome, and 65.88 in isolated recurrent KOTs, without significant differences between groups (p = 0.965). The results of this study suggest that the differences in biological behavior of isolated KOTs and KOTs associated with Gorlin syndrome may not be related to the expression of GLUTs-1 and -3, or to the angiogenic index in the lesions. The high expression of GLUT-1 in KOTs suggests an important role for this protein in glucose uptake by the epithelial cells of these tumors. / O tumor odontogênico ceratocístico (TOC) se destaca entre as demais lesões odontogênicas em virtude do comportamento biológico potencialmente agressivo e por sua associação, em alguns casos, à síndrome de Gorlin. Pesquisas tem sugerido um comportamento biológico mais agressivo para os TOCs associados à síndrome de Gorlin, em comparação aos TOCs isolados, caracterizado por maior capacidade de crescimento e infiltração óssea e maior tendência a recorrência. O presente estudo se propôs a avaliar, descritiva e comparativamente, a imunoexpressão dos transportadores de glicose-1 (GLUT-1) e -3 (GLUT-3) e o índice angiogênico (CD34) em TOCs isolados primários e recorrentes e TOCs associados à síndrome de Gorlin. A amostra foi composta por 21 TOCs isolados (14 primários e 7 recorrentes) e 14 TOCs associados à síndrome de Gorlin. A expressão dos GLUTs foi avaliada no componente epitelial das lesões, estabelecendo-se o percentual de células imunopositivas, de acordo com os escores: escore 0 (negativo), escore 1 (≤ 25% das células positivas), escore 2 (26% - 50% das células positivas), escore 3 (51% - 75% das células positivas) e escore 4 (≥76% das células positivas). Para o índice angiogênico, foi empregada a técnica da contagem microvascular (MVC), quantificando-se os microvasos imunomarcados pelo anticorpo anti-CD34. Em relação às medianas para os escores de imunopositividade para GLUT-1 e para o índice angiogênico, as comparações entre os grupos foram realizadas por meio do teste não paramétrico de Kruskal-Wallis. Para o GLUT-3, os dados obtidos com a avaliação da expressão epitelial desta proteína foram submetidos apenas à análise estatística descritiva. Possíveis correlações entre os escores de imunopositividade para GLUT-1 e o índice angiogênico nas lesões foram avaliadas por meio do teste de correlação de Spearman. O nível de significância foi estabelecido em 5% (p < 0,05). A análise da imunoexpressão epitelial de GLUT-1 revelou predomínio de casos com escore 4 nos TOCs isolados primários (n = 9; 64,3%) e nos TOCs associados à síndrome de Gorlin (n = 8; 57,1%). Nos TOCs isolados recorrentes, foi identificada frequência discretamente maior para os casos com escores 4 (n = 3; 42,9%) e 2 (n = 2; 28,6%). O teste não paramétrico de Kruskal-Wallis revelou ausência de diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p = 0,406). Em relação ao GLUT-3, todos os grupos estudados revelaram maior frequência de casos negativos. Os poucos TOCs positivos para GLUT-3 foram classificados como escore 1 (≤ 25% das células positivas), revelando uma baixa expressão desta proteína no componente epitelial. O número médio de microvasos foi de 63,80 nos TOCs isolados primários, 61,11 nos TOCs associados a síndrome de Gorlin e 65,88 nos TOCs isolados recorrentes, sem diferenças significativas entre os grupos (p = 0,965). Os resultados do presente estudo sugerem que as diferenças no comportamento biológico de TOCs isolados e TOCs associados à síndrome de Gorlin não foram relacionadas com a expressão de GLUTs-1 e -3 ou com o índice angiogênico (CD34) nas lesões. A alta expressão de GLUT-1 em TOCs sugere um importante papel para esta proteína na captação de glicose pelas células epiteliais destes tumores.

Este trabalho consiste em estudar o comportamento eletroquímico de biomoléculas imobilizadas sobre o eletrodo de carbono vítreo, utilizando materiais biocompatíveis como meios imobilizadores para detecções em meios aquosos. Foram utilizados inicialmente compósitos de hidrogéis capazes de auxiliar a permanência da enzima sobre a superfície do eletrodo e beneficiar a transferência de carga entre a enzima e o eletrodo de trabalho. Para melhorar a resposta eletroquímica do biossensor, também foram estudados métodos que utilizam líquidos iônicos no processo de imobilização da enzima. Deste modo a eletroatividade da enzima foi inicialmente estudada por voltametria cíclica, a fim de evidenciar tal eletroatividade no meio totalmente iônico, como também avaliar o melhor método de imobilização, para futuras aplicações em detecções de analitos. Os líquidos iônicos utilizados são compostos por cátions alquil-imidazol com ânions de natureza orgânica ou inorgânica. Como se sabe os íons que compõem o líquido iônico podem distinguir sua funcionalidade, pois é o tamanho desses íons que influencia na maioria das suas propriedades físico-químicas, tais como hidrofobicidade e viscosidade. / The aim of this work is to study the electrochemical behavior of biomolecules immobilized on a glassy carbon electrode, using biocompatible materials as a way for immobilizing detection in aqueous media. Initially, hydrogels composite were used because they are able to assist the permanence of the enzyme on the electrode surface and they are benefit to the charge transfer between enzyme and electrode surface. To improve the electrochemical response of the biosensor, methods using ionic liquids in the process of immobilization of the enzyme were also studied. Thus the electroactivity of the enzyme was initially analyzed by cyclic voltammetry in order to show that the electroactivity remains in an entirely ionic media, as well as evaluating the best method of immobilization, for future applications in biosensors. The ionic liquids used are composed of imidazole-alkyl cations with anions of organic or inorganic nature. As it is well known, the ions in the ionic liquid can distinguish its functionality, due to the fact that it is the size of these ions that influences most on their physicochemical properties such as hydrophobicity and viscosity.

O cen&aacute;rio energ&eacute;tico mundial traz &agrave; tona a necessidade da busca por fontes renov&aacute;veis que contribuam de maneira positiva para a diminui&ccedil;&atilde;o de emiss&otilde;es de gases nocivos, como o CO2. Neste contexto estudos como o presente constituem importante contribui&ccedil;&atilde;o para o melhor entendimento destas quest&otilde;es ambientais, para tanto o mesmo teve como objetivo avaliar o efeito de pr&eacute;-tratamento com solu&ccedil;&atilde;o alcalina aquosa (merceriza&ccedil;&atilde;o, NaOH 20%, 20 g.L-1, temperatura ambiente, 5h) sobre a sacarifica&ccedil;&atilde;o, via hidr&oacute;lise &aacute;cida e enzim&aacute;tica de fibras lignocelul&oacute;sicas de curau&aacute; (Teor de: umidade 8,2% &plusmn;0,2, cinzas 2,0% &plusmn;0,1, holocelulose 85,9% &plusmn;0,7, hemiceluloses 15,5% &plusmn;0,2, &#945;-celulose 70,4% &plusmn;0,2, lignina total de 9,4% &plusmn;0,3 e &iacute;ndice de cristalinidade (Ic) 69,4%. Al&iacute;quotas retiradas durante a merceriza&ccedil;&atilde;o foram caracterizadas, por exemplo, a al&iacute;quota referente a 2h apresentou as seguintes propriedades: &#945;-celulose 81,6% &plusmn;0,2, lignina total 3,2% &plusmn;0,3 e &iacute;ndice de cristalinidade (Ic) 75,5%. An&aacute;lises de microscopia eletr&ocirc;nica de varredura (MEV), comprimento e espessura m&eacute;dio (MorFi) mostraram, ao longo da merceriza&ccedil;&atilde;o, aumento de rugosidade e fragmentos aderidos a superf&iacute;cie da fibra, e diminui&ccedil;&atilde;o de comprimento e espessura. Fibras n&atilde;o tratadas e tratadas (2h) foram submetidas a hidr&oacute;lise &aacute;cida (1:30 vol./massa, H2SO4 a 24%, 80&deg;C, 6h), onde as fibras n&atilde;o reagidas foram separadas do licor via filtra&ccedil;&atilde;o, e caracterizadas por difra&ccedil;&atilde;o de raios X, MEV, MorFi, e os a&ccedil;&uacute;cares do licor e produtos de decomposi&ccedil;&atilde;o foram analisados via Cromatografia l&iacute;quida de alta efici&ecirc;ncia (CLAE). Os resultados da hidr&oacute;lise &aacute;cida com a fibra mercerizada, apresentaram maior produ&ccedil;&atilde;o de glicose (fra&ccedil;&atilde;o celul&oacute;sica) e diminui&ccedil;&atilde;o dos teores de xilose e arabinose, (fra&ccedil;&atilde;o hemicelul&oacute;sica). A glicose atingiu teor m&aacute;ximo de 2,68 g.L-1, no entanto para a hidr&oacute;lise com a fibra n&atilde;o tratada atingiu um m&aacute;ximo de 1,3 g.L-1, com forma&ccedil;&atilde;o em baixa escala de produtos de decomposi&ccedil;&atilde;o (HMF e furfural). Fibras de partida e mercerizada tamb&eacute;m foram submetidas a hidr&oacute;lise enzim&aacute;tica (48h, enzimas celulase comercial-Accellerase 1500, 0,5mL/g). Al&iacute;quotas das polpas n&atilde;o reagidas e licor foram extra&iacute;das durante a rea&ccedil;&atilde;o, e caracterizadas conforme descrito para hidr&oacute;lise &aacute;cida. Microscopias mostraram que houve aumento da rugosidade e da abertura dos feixes de fibras nas fibras mercerizadas. Os valores de Ic apresentaram aumento inicial e posterior queda indicando hidr&oacute;lise da fra&ccedil;&atilde;o n&atilde;o cristalina da celulose seguida da fra&ccedil;&atilde;o cristalina. O comprimento e espessura m&eacute;dio das fibras, sofreram diminui&ccedil;&atilde;o, sendo mais acentuada na hidr&oacute;lise com a fibra mercerizada e mais intenso para a espessura. Houve forma&ccedil;&atilde;o de glicose e xilose e n&atilde;o houve forma&ccedil;&atilde;o de produtos de decomposi&ccedil;&atilde;o como ocorrido na hidr&oacute;lise &aacute;cida. A fibra n&atilde;o tratada apresentou um m&aacute;ximo de 12,0 g.L-1 de glicose e 2,30 g.L-1 de xilose, j&aacute; a fibra mercerizada apresentou m&aacute;ximos de 17,5 g.L-1, 1,36 g.L-1 de glicose e xilose respectivamente, indicando aumento de 45% de glicose e diminui&ccedil;&atilde;o de 56% de xilose. Esta investiga&ccedil;&atilde;o do efeito da merceriza&ccedil;&atilde;o sobre a sacarifica&ccedil;&atilde;o da fibra de curau&aacute; forneceu informa&ccedil;&otilde;es importantes para o aprofundamento deste estudo, assim como indicou que o curau&aacute; pode posteriormente se tornar fonte de produ&ccedil;&atilde;o de etanol de segunda gera&ccedil;&atilde;o. / The global energy scenario brings to light the need for the search for renewable sources that contribute positively to the reduction of harmful gases emission, such as CO2. In this context, studies such as the one herein constitute an important contribution to a better understanding of these environmental issues. The purpose of this study was to evaluate the effect of the alkaline pre-treatment (mercerization, NaOH 20%, 20 g.L-1, room temperature, 5h) on saccharification, via acid and enzymatic hydrolysis of curau&aacute; lignocellulosic fibers (moisture content 8.2% &plusmn; 0.2, ashes 2.0% &plusmn; 0.1, holocellulose 85.9% &plusmn;0.7, hemicellulose 15.5% &plusmn;0.2, &#945;-cellulose 70.4% &plusmn; 0.2, total lignin 9.4% &plusmn; 0.3 and crystallinity index, (Ic, 69.4%). Aliquots removed during mercerization were characterized. For example, the aliquot referring to 2h had the following properties: &#945;-cellulose 81.6% (&plusmn; 0.2), total lignin 3.2% (&plusmn; 0.3) and crystallinity index (Ic) 75.5%. Analyses of scanning electron microscopy (SEM), length and average thickness (MorFi) showed increased roughness and fragments adhered to the fiber surface and a decrease in length and thickness throughout the mercerization. Untreated and treated fibers (2h) were subjected to acid hydrolysis (1:30 vol./M.H2SO4 24%, 80&deg;C, 6h), in which the unreacted fibers were separated from the liquor via filtration, and then characterized by X-ray diffraction, MEV, MorFi; liquor sugars and decomposition products were analyzed via High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The results of the acid hydrolysis with the mercerized fiber presented higher glucose production (cellulose fraction) and decreased xylose and arabinose contents (hemicellulosic fraction). The maximum glucose content obtained was 2.68 g.L-1, while for the hydrolysis with the untreated fiber the maximum was 1.3 g.L-1, in which there was low-scale formation of decomposition products (HMF and furfural). No mercerized and mercerized fibers were also subjected to enzymatic hydrolysis (48h, commercial cellulase enzymes-Accellerase 1500, 0.5mL / g). Aliquots of the unreacted pulps and liquor were extracted during the reaction, and then characterized as described for acid hydrolysis. Microscopies showed that there was an increase in roughness and in the opening of fiber bundles in the mercerized fibers. The crystallinity indexes showed an initial increase and a subsequent decrease indicating hydrolysis of the non-crystalline fraction of the cellulose followed by the crystalline fraction. The length and average thickness of the fibers decreased, which was more accentuated in the hydrolysis with the mercerized fiber and more intense as for the thickness. There was formation of glucose and xylose and there was no formation of decomposition products as occurred in acid hydrolysis. For the untreated fiber, a maximum glucose of 12.0 gL-1 and 2.30 gL-1 of xylose was obtained, whereas the mercerized fiber presented a maximum of 17.5 gL-1, 1.36 gL-1 of glucose and xylose respectively, indicating a 45% increase in glucose and a 56% decrease in xylose. This investigation of the effect of mercerization on the saccharification of the curau&aacute; fiber provided important information for further studies, as well as indicating that the curau&aacute; can later become a source of second generation ethanol production. Keywords: Curau&aacute; Fiber. Mercerization. Acid and Enzymatic Hydrolysis. Glucose.

Em bovinos de corte, maiores diâmetros do folículo pré-ovulatório (FPO) e as subsequentes altas concentrações de progesterona [P4] aumentam o crescimento do concepto e a taxa de prenhez. Formulou-se a hipótese que a modulação do tamanho do FPO e [P4] no diestro subsequente à ovulação do FPO estimulam a expressão endometrial de transcritos e proteínas da famílias das Solute Carrier Proteins (SLC) que estão relacionadas ao transporte de glicose. Vacas Nelore (n=60), solteiras e ciclando receberam duas injeções de PGF2&alpha; (PGF; 0,5mg; i.m.) com intervalo de 14 dias. Dez dias após (dia -10; D-10), receberam um dispositivo intravaginal liberador de P4 e benzoato de estradiol (2mg; i.m.). Para modular o crescimento do FPO e alterar a produção de P4 pós-ovulação, no D-10 os animais receberam PGF (grupo alta P4; AP) ou não (grupo baixa P4; BP). Dispositivos foram removidos e PGF injetada 60 a 42 horas antes da indução da ovulação para o grupo AP e 48 a 30 horas antes da indução para o grupo BP e ovulações foram induzidas com GnRH (buserelina; 10&micro;g; i.m.) no D0. Crescimento e ovulação do FPO e formação do CL foram avaliados por ultrassom e [P4] medidas por radioimunoensaio. No D7 os animais que ovularam foram abatidos (AP, N=18 e BP, N=18), o endométrio foi dissecado e submetido à extração de RNA total para análises de qPCR, extração de proteínas totais para análises de western blotting e incluído em parafina para análises de imunohistoquímica. Diferença entre as médias dos grupos foi determinada pelo teste t de student. O diâmetro máximo do FPO (média ± erro padrão da média; 12,8±0,4 vs. 11,1±0,4mm) foi maior no grupo AP (P<0,01). A [P4] no D7 foi maior no grupo AP (4,5±1,0 ng/mL vs. 3,3±1,1 ng/mL; P<0,05). As concentrações relativas dos transcritos que codificam SLCs foram determinadas por qPCR, usando a ciclofilina como controle endógeno. Não houve diferença na expressão de SLC2A1 (0,91±0,04 vs. 1,02±0,07), SLC2A3 (1,14±0,16 vs. 1,05±0,1), SLC2A4 (1,20±0,14 vs. 1,01±0,05), SLC2A5 (0,95±0,12 vs. 1,04±0,12), SLC5A1 (1,35±0,25 vs. 1,49±0,44), ATP1A2 (1,29±0,17 vs. 1,03±0,1), ATP1B2 (1,20±0,11 vs. 1,06±0,1), SLC37A4 (1,16±0,16 vs. 1,1±0,12), entre os grupos AP e BP respectivamente (P>0.05). Também não foi possível identificar diferença na quantidade proteica de SLC2A1 no endométrio dos animais do grupo AP em relação ao grupo BP. SLC2A1 foi identificada na membrana basal no epitélio luminal (EL), epitélio glandular (EG) e no estroma uterino dos animais. SLC2A4 foi identificada na membrana basal e membrana apical no EL, EG e no estroma uterino dos animais. Em conclusão, a modulação do tamanho do FPO e [P4] no diestro não afetaram a expressão gênica ou proteica dos transportadores de glicose. É possível que ao invés da expressão gênica ou proteica, a atividade transportadora das SLCs, ou ainda, a expressão e função de genes relacionados ao metabolismo de carboidratos, sejam regulados pelo ambiente endócrino peri-ovulatório em vacas. / In beef cattle, changes in the peri-ovulatory endocrine milieu are associated with conceptus growth and fertility. A large size of the pre-ovulatory follicle (POF) and resulting elevated progesterone (P4) concentrations during diestrus affect pregnancy rates positively. Our hypothesis is that modulation of POF size and diestrus P4 concentrations regulate nutrient availability in the uterus. Specifically, optimal glucose concentrations in the histotroph are required for adequate embryo growth during early gestation. The objective was to determine if POF size and resulting P4 concentrations during the first week of diestrus influence gene expression of Solute Carrier Protein (SLC) families that are related to glucose transport. Cyclic, non-lactating Nelore cows received two injections of cloprostenol (PGF; 0.5mg; i.m.) 14 days apart. Ten days later (day -10; D-10), cows received a P4-releasing device along with estradiol benzoate (2mg; i.m.). To modulate the growth of the POF and alter post-ovulatory P4 production, on D-10 animals received PGF (high post-ovulatory P4 group; HP) or not (low post-ovulatory P4 group; LP). The P4-releasing devices were removed and PGF injected 60 to 42 hours before the ovulation induction in the HP group and 48 to 30 hours before the ovulation induction in the LP group. Ovulation was induced with buserelin (GnRH; 10&micro;g; i.m.) on D0. Diameter of POF and ovulation were assessed by ultrasonography starting onD- 2. From D1 to D7, plasma was obtained for measurement of P4 concentration. On D7, cows that ovulated were slaughtered (HP, n=18 and LP, n=18) and endometrium was dissected and subjected total RNA extraction for qPCR analyzes, total protein extraction for western blotting analyzes and included in paraffin for imunohistochemical analyzes. Differences between group means were determined by student\'s t test. Maximum diameter of the POF (mean ± SEM; 12.8±0.4 vs. 11.1±0.4mm) was greater in HP vs. LP (P<0.01). Progesterone concentration on D7 was larger on the HP group (4.5±1.0 ng/mL and 3.3±1.1 ng/mL; P<0.05). Relative concentrations of transcripts coding for facilitative sugar transporters (SLC2A1, SLC2A3, SLC2A4 and SLC2A5), a sodium-dependent glucose co-transporter (SLC5A1) and other transporters related to glucose uptake (ATP1A2, ATP1B2, SLC37A4) were determined by qPCR, using cyclophilin as the endogenous control gene. There were no significant differences in expression of SLC2A1 (mean ± SEM;0.91±0.04 vs. 1.02±0.07), SLC2A3 (1.14±0.16 vs. 1.05±0.1), SLC2A4 (1.20±0.14 vs. 1.01±0.05), SLC2A5 (0.95±0.12 vs. 1.04±0.12), SLC5A1 (1.35±0.25 vs. 1.49±0.44), ATP1A2 (1.29±0.17 vs. 1.03±0.1), ATP1B2 (1.20±0.11 VS. 1.06±0.1) ,SLC37A4 (1.16±0.16 vs. 1.1±0.12), between HP and LP, respectively (P>0.05). There was no difference in the abundance of SLC2A1 protein between groups. The SLC2A1 protein was localized in the luminal epithelium (LE), glandular epithelium (GE) and uterine stroma (US) of animals. The SLC2A4 protein was localized on the basal and apical membrane of the LE, GE and US of animals. In conclusion, modulation of POF size and diestrus P4 concentrations did not affect the expression of glucose transporter genes or proteins. It is possible that activity of SLC proteins rather than gene expression, or alternatively, expression and function of genes related to carbohydrate metabolism, are regulated by the peri-ovulatory endocrine milieu in cows.

Introdução: O diabetes mellitus (DM) está associado a complicações que comprometem a qualidade de vida e a sobrevida dos indivíduos. Além disso, acarreta elevados custos para o controle metabólico e o tratamento de suas complicações, sendo assim caracterizado como um problema de saúde pública. A regulação da digestão e da absorção intestinal dos carboidratos, com vista a manter a homeostase da glicose plasmática, constituem importantes estratégias de proteção em condições clínicas como o diabetes tipo 2 (DM2), obesidade e síndrome metabólica. Os compostos fenólicos compreendem um grupo complexo de fitoquímicos bioativos presentes nos vegetais. Estudos in vitro e in vivo têm demonstrado que os compostos fenólicos inibem a atividade de carbohidrases (&#945;-amilase e &#945;-glicosidase) e o transporte intestinal de glicose mediado pelos transportadores SGLT1 e GLUT2. O cerrado brasileiro compreende uma larga biodiversidade, porém, apesar de muitas espécies terem sido identificadas, o seu potencial nutritivo e funcional ainda é pouco conhecido. Dentre estas espécies nativas é destacado o jatobá-do-cerrado. O jatobá-do-cerrado é uma leguminosa nativa brasileira, cuja a polpa farinácea que envolve suas sementes apresenta quantidades significativas de compostos fenólicos, podendo ter um potencial efeito sobre o metabolismo da glicose. Objetivos: Verificar os efeitos dos compostos fenólicos da farinha de jatobá-do-cerrado na digestão de carboidratos e na captação de glicose em células intestinais Caco-2. Metodologia: Os compostos fenólicos da farinha de jatobá foram obtidos por extração sequencial com as soluções de etanol (60%) e acetona (70%). Em seguida, o extrato foi digerido utilizando enzimas (&#945;-amilase, pepsina e pancreatina) em pH fisiológico. Os compostos fenólicos presentes no extrato antes e após a digestão foram identificados por cromatografia líquida de ultra performance - espectrômetro de massas (UPLC-MS/MS). Foi avaliada a capacidade de inibição dos extratos de jatobá digeridos em relação à atividade das enzimas &#945;-amilase e &#945;-glicosidase. Células intestinais Caco-2 foram incubadas com diferentes concentrações (0,05 mg/mL - 0,1 mg/mL) de extratos de farinha de jatobá digeridos em diferentes tempos (30 min, 2h e 12 h) para a avaliação da captação de glicose e da expressão gênica dos transportadores de glicose SGLT1 e GLUT2. Resultados: 44 compostos fenólicos foram identificados, dentre eles, a principal classe presente são os flavonoides. Compostos como o ácido cafeico, o kaempferol, quercetina-3- rutinosideo e a quercetrina estavam presentes no extrato antes da digestão. O conteúdo de compostos fenólicos do extrato foi reduzido após a digestão, entretanto o mesmo ainda apresentou compostos de relevância biológica como o ácido p-cumárico, ácido 3-o-feruloilquinico, theaflavina, crisina e grandinina que já apresentaram efeito positivo sobre o metabolismo da glicose in vitro em outros trabalhos. Os extratos fenólicos de jatobá após a digestão in vitro inibiram significativamente a atividade das enzimas &#945;-amilase (76 e 91%) e &#945;- glicosidase (53 e 77%). Os extratos também demonstraram inibir significativamente tanto a captação de glicose independente de sódio quanto a expressão gênica dos transportadores de glicose SGLT1 e GLUT2 de maneira dose-dependente. Conclusão: Este é o primeiro trabalho que identificou os compostos fenólicos presentes na farinha de jatobá. A partir do exposto, podemos concluir que a farinha de jatobá apresenta potencial benefício a saúde devido ao seu conteúdo de compostos fenólicos e a capacidade destes compostos de regular a digestão e a absorção de carboidratos in vitro. / Introduction: Diabetes mellitus (DM) is associated with complications that decrease the quality of life and survival of individuals. In addition, it entails high costs for metabolic control and treatment of its complications, thus being characterized as a public health problem. The regulation of digestion and intestinal absorption of carbohydrates to maintain plasma glucose homeostasis are important strategies for protection in chronic diseases such as type 2 diabetes (DM2), obesity and metabolic syndrome. Phenolic compounds are a complex group of chemical substances present in plants. In vitro and in vivo studies have shown that phenolic compounds are able to inhibit the activity of carbohydrases (&#945;-amylase and &#945;-glycosidase) and the intestinal transport of glucose mediated by SGLT1 and GLUT2 transporters. Brazilian Cerrado present a large biodiversity, but although many species have been identified, its nutritional and functional potential is still little known. Among these native species is the jatobá-docerrado. Jatobá-do-cerrado is a brazilian native legume, whose farinaceous pulp that surrounds its seeds presents significant amounts of phenolic compounds and may have a potential effect on glucose metabolism. Objectives: To verify the effects of phenolic compounds from jatobá-do-cerrado flour in the digestion of carbohydrates and uptake of glucose in Caco-2 intestinal cells. Methods: Phenolic compounds of jatobá flour were obtained by sequential extraction with solutions of ethanol (60%) and acetone (70%). The extract was digested using enzymes (&#945;-amylase, pepsin and pancreatin) at physiological pH. The phenolic compounds present in the extract before and after the digestion were identified by liquid chromatography of ultra-performance - mass spectrometer (UPLCMS / MS). The ability of inhibition of the extracts of jatobá digested in relation to the activity of &#945;-amylase and &#945;-glycosidase enzymes was evaluated. Caco-2 intestinal cells were incubated with different concentrations of jatobá flour extracts (0.1 mg / mL - 0.05 mg / mL) for different time (30 min, 2 h and 12 h) to the evaluation of facilitated uptake (sodium-free buffer) and gene expression of SGLT1 and GLUT2 glucose transporters. Results: 44 phenolic compounds have been identified, among them a major class present are flavonoids. Compounds such as caffeic acid, quercetin-3-rutinoside and quercetrine were present in the extract before in vitro digestion. The content of phenolic compounds of the extract after digestion was reduced. However, the extract presents compounds with biological activity such as p-coumaric acid, 3-o-feruloylquinic acid , theaflavin, chrysin and grandinine, which already presented positive effects on glucose metabolism in vitro in other studies. Phenolic extracts of jatobá after in vitro digestion inhibited the activity of &#945;-amylase (76 and 91%) and &#945;-glycosidase (53 and 77%). The extracts also shown to inhibit both glucose uptake and gene expression of glucose transporters SGLT1 and GLUT2 in a dose-dependent manner. Conclusion: This is the first work that identified the phenolic compounds present in jatobá flour. Thus, we can conclude that the jatobá flour presents potential health benefit by modulate digestion and the absorption of carbohydrates in vitro.

Made available in DSpace on 2016-04-28T14:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SilVia Paranhos Turner.pdf: 1472322 bytes, checksum: 4103df96d4e3b8e5e15b1066a63561ea (MD5) Previous issue date: 2009-03-03 / The study was carried out to evaluate insulin sensitivity in orses fed diets with high level of soluble carbohydrates. The study was undertaken at the 2nd Cavalary and Guard Regiment Andrade Neves Regiment, situated in Rio de Janeiro, in the year of 2007. Blood samples were taken monthly from fasting horses, and body condition scores (BCS) evaluated during nine consecutive months, from February to October, 2007. Blood was sampled into heparinized and fluorized vacutainer tubes and centrifuged, plasma separated, refrigerated and transported to the EQUILAB Laboratory at the Federal Rural University of Rio de Janeiro, where plasma was stores at -20oC. Plasma was analyzed for glucose spectrophotometrically, and insulin by radioimmunoassay. Basal proxies were calculated for the assessment of insulin sensitivity (RSQUI) and pancreatic beta cell response (MIRG). Feed and hay samples were taken monthly and analyzed for nutrient contend. A glycemic index test was undertaken in a selected group of six horses from the sampled group. No significant relation was found between colic incidence and sex, plasma glucose, insulin, MIRG and RSQUI. Animals that had colic had a trend (P = 0.072) to have a higher BCS, compared to animals without colic during the analyzed period. Horses that had colic had lower body weights than horses without colic (P < 0.05), suggesting that these animals also had lower lean mass, and perhaps more fat. Insulin sensitivity (RSQUI) was higher in the months of higher physical activity. Results of the current study indicate that physical activity is the best prevention for insulin resistance, and, at the same time helps to reduce body fat, and indirectly prevent the occurrence of colic. / Este trabalho teve como objetivo avaliar a sensibilidade ? insulina em eq?inos alimentados com dieta com n?veis elevados de carboidratos sol?veis escolhidos por conveni?ncia. O estudo foi realizado no 2o Regimento de Cavalaria e Guarda - Regimento Andrade Neves, na cidade do Rio de Janeiro, durante os anos de 2007 e 2008. Durante nove meses consecutivos, de Fevereiro a Outubro de 2007, os eq?inos eram submetidos ? coleta sangu?nea em jejum e avaliado o escore e peso corporal. O sangue foi coletado em tubos de vacutainer heparinizados e fluoretados e as amostras foram centrifugadas, amostradas e transportadas refrigeradas at? o laborat?rio EQUILAB na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, onde eram armazenadas em freezer a 20 0C. O plasma foi submetido a determina??o de glicose por espectofotometria e a insulina por radioimunoensaio. Os proxies basais foram calculados na avalia??o da sensibilidade insul?nica e a resposta secret?ria insul?nica. As amostras de feno e ra??o comercial foram coletadas mensalmente para an?lise bromatol?gica. Ao t?rmino do ensaio, o ?ndice glic?mico do concentrado comercial foi avaliado em seis eq?inos do grupo experimental. N?o houve correla??o entre a incid?ncia de c?lica com idade, sexo, concentra??o plasm?tica de glicose e insulina, MIRG e RISQI e resist?ncia ? insulina. Os animais com c?lica apresentaram tend?ncia (P = 0,072) a ter um maior escore corporal comparado aos animais sem c?lica durante o per?odo avaliado. Os eq?inos com c?lica apresentavam menor peso do que animais sem c?lica (P < 0,05) os eq?inos com peso menor maior correla??o com a incid?ncia de c?lica, logo sugere que estes animais t?m maior quantidade de massa de gordura. A sensibilidade a insulina foi maior nos meses de maior atividade f?sica. Os resultados deste estudo indicam que a atividade f?sica ? a preven??o mais efetiva da resist?ncia a insulina e, ao mesmo tempo, auxilia na redu??o da gordura corporal e indiretamente pode prevenir a incid?ncia de c?licas.

Poli-hidroxialcanoatos (PHA) são poliésteres naturais, acumulados por muitas bactérias sob condições de estresse nutricional, que atuam como reserva de carbono e energia. No Brasil, o bagaço de cana-de-açúcar é um importante resíduo lignocelulósico que ainda contém açúcares, podendo servir como precursores de outros produtos como os PHA. Em mistura de açúcares, diversas bactérias consomem preferencialmente a glicose depois os outros açúcares. Esta resposta é denominada repressão catabólica (RC). Neste trabalho foram estudadas estratégias pra reduzir o processo de RC, para que os açúcares em mistura sejam consumidos simultaneamente e inserir genes que permitam a síntese de polihidroxialcanoatos (PHA) em E. coli VH33 e W3110. O meio M9 sem suplementação foi selecionado e foi utilizado em ensaio de acúmulo em biorreator. Neste ensaio a linhagem mutante VH33 pSK-::phaCABCn chegou a acumular um pouco mais de 27% de sua biomassa seca em forma de PHA. Ao fazer a análise de fluxos metabólicos foi observado que a linhagem já estava em sua capacidade máxima teórica. Nestes ensaios a repressão catabólica ainda estava presente. Foram realizados ensaios em biorreator com hidrolisado do bagaço de cana- de- açúcar, porém a bactéria não foi capaz de crescer. / Polyhydroxyalkanoates (PHA) are natural polyesters accumulated by many bacteria under nutritional stress conditions; with the role of as carbon and energy sources. In Brazil, the sugarcane bagasse is an important lignocellulosic crop that can be used as precursors for other products, for instance, PHAs. E. coli are capable to select, in a mixture of sources of carbon, that promotes the best bacterial growth rate. This phenomenon is known as catabolite repression (CR). The aim of this work is to create strategies to reduce the repression catabolite process. During this project, sugar mixtures have been simultaneously consumed. Genes were inserted in E. coli VH33 and the wild type W3110. The M9 medium without supplementation was selected and used to accumulate bioreactor assay. The mutant strain VH33 pSK-::phaCABCn accumulated up to 27% of PHA. In the metabolic flux analysis, it was observed that LFM 862 strain was already in the theoretical maximum capacity. The catabolic repression was practically abolished in this assay. Bioreactor assays were made using sugarcane hydrolysate, but the strain was not capable to grow.