京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第21994号 / 医博第4508号 / 新制||医||1037(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 羽賀 博典, 教授 武藤 学, 教授 山下 潤 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

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Motivação: A introdução do medicamento antagonista H2, e a descoberta do papel do Helicobacter pylori, na patogênese da úlcera péptica, diminuiu a indicação cirúrgica da doença ulcerosa. Todavia, a incidência de perfuração na doença ulcerosa tem se mantido constante, e o tratamento cirúrgico é a conduta mais indicada. A mortalidade nesta circunstância continua expressiva. Objetivo: Este trabalho teve como objetivo analisar possíveis fatores de risco de mortalidade no tratamento da úlcera gastroduodenal perfurada tratada com cirurgia. Casuística e métodos: Foram estudados 311 pacientes (268 do sexo masculino e 43 do sexo feminino), sendo 242 portadores de úlcera duodenal e 69 de úlcera gástrica, no período de janeiro de 1997 a dezembro de 2000. Ocorreram 35 óbitos (11,25%). Analisaram-se os seguintes fatores: idade, sexo, tabagismo, etilismo, doença ulcerosa prévia, uso de antiinflamatório, pneumoperitônio, doenças concomitantes, choque na admissão, tempo de perfuração, peritonite, tipo de cirurgia e local de perfuração. Os fatores de risco de mortalidade nos dois tipos de úlcera foram comparados descritivamente utilizando-se o odds ratio, os percentuais de mortalidade, o teste de Zelen e análise de regressão logística univariada e multivariada. Destaca-se que a maioria do pacientes foi submetida ao tratamento cirúrgico não definitivo, sendo o critério utilizado para definir o tipo de cirurgia determinado por escolha aleatória da equipe cirúrgica. Resultados: Os fatores de risco associados à mortalidade na úlcera gastroduodenal perfurada identificados na análise univariada foram: idade (UG), pneumoperitônio, doenças concomitantes, local de perfuração, choque na admissão e tempo de perfuração. A presença do pneumoperitônio é um sinal radiológico importante no diagnóstico da úlcera gastroduodenal perfurada. Na sua ausência, ocorreu aumento de incidência de mortalidade. A incidência de mortalidade na úlcera gástrica perfurada foi maior no idoso. Na úlcera gástrica a incidência de mortalidade foi maior do que na úlcera duodenal. Entretanto, a análise multivariada mostrou que os fatores de risco independentes preditivos de mortalidade foram na úlcera duodenal: tempo de perfuração maior que 24 horas, doenças concomitantes e choque na admissão e na úlcera gástrica: idade, tempo de perfuração maior que 24 horas e choque na admissão. Conclusões: O risco aumentado de mortalidade na úlcera gastroduodenal perfurada pode ser previsto quando os pacientes apresentam idade avançada (UG), doenças concomitantes (UD), tempo de perfuração maior que 24 horas, e choque na admissão hospitalar / Motivation: The introduction of the H2 antagonist drug and the discovery that the Helicobacter pylori played a role in the pathogenesis of the peptic ulcer caused a decrease in the indication of surgical treatment for ulcer disease. However, the incidence of perforation in ulcer disease has remained constant, and surgical treatment is the most indicated treatment modality. In these cases, the rate of mortality is still significant. Objective: This paper aimed at analyzing the risk factors for mortality in the surgically treated perforated gastroduodenal ulcer. Cases and methods: 311 patients were studied (268 males and 43 females), seeing that 242 were duodenal ulcer carriers and 69 gastric ulcer, in the period from January 1997 to December 2000. Thirty-five patients died (11,25%). The following factors were analyzed: age, sex, smoking, chronic alcohol consumption, previous ulcer disease, use of anti-inflammatory medication, pneumoperitoneum, concomitant diseases, shock upon admittance, time lapsed since perforation, peritonitis, type of surgery and perforation site. The risk factors for mortality in the two types of ulcer were compared descriptively, using the odds ratio, percentage of mortality, the Zelen test and the univariate and multivariate logistic regression analysis. It is worth pointing out that most of the patients had undergone nondefinitive surgical treatment and the criterion used to decide the type of surgery was random selection by the surgical team. Results: The risk factors associated to mortality in the perforated gastroduodenal ulcer identified by the univariate analisys were: age (GU), pneumoperitoneum, concomitant diseases, perforation site, shock upon admittance, time lapsed since perforation, peritonitis and type of surgery. The presence of pneumoperitoneum is an important radiological sign for the diagnosis of the perforated peptic ulcer. When this diagnostic tool was not used, an increase in the incidence of mortality was observed. The incidence of mortality for perforated gastric ulcers was higher in elderly patients. The incidence of mortality was higher for gastric ulcers relative to duodenal ulcers. However, the multivariate analysis showed that independent predictive risk factors for mortality were the following, for the duodenal ulcer: time lapse of more than 24 hours since perforation, severe coexisting diseases and shock at the time of admittance; for gastric ulcer: age, time lapse of more than 24 hours, from moment perforation and shock at the time of admittance. Conclusion: The increased risk of mortality for perforated duodenal ulcer can be predicted when the patients are elderly (GU), when there are concomitant diseases (DU), the time lapsed from the moment of perforation exceeds 24 hours, and when the patients are in shock at the time of admittance

Motivação: A introdução do medicamento antagonista H2, e a descoberta do papel do Helicobacter pylori, na patogênese da úlcera péptica, diminuiu a indicação cirúrgica da doença ulcerosa. Todavia, a incidência de perfuração na doença ulcerosa tem se mantido constante, e o tratamento cirúrgico é a conduta mais indicada. A mortalidade nesta circunstância continua expressiva. Objetivo: Este trabalho teve como objetivo analisar possíveis fatores de risco de mortalidade no tratamento da úlcera gastroduodenal perfurada tratada com cirurgia. Casuística e métodos: Foram estudados 311 pacientes (268 do sexo masculino e 43 do sexo feminino), sendo 242 portadores de úlcera duodenal e 69 de úlcera gástrica, no período de janeiro de 1997 a dezembro de 2000. Ocorreram 35 óbitos (11,25%). Analisaram-se os seguintes fatores: idade, sexo, tabagismo, etilismo, doença ulcerosa prévia, uso de antiinflamatório, pneumoperitônio, doenças concomitantes, choque na admissão, tempo de perfuração, peritonite, tipo de cirurgia e local de perfuração. Os fatores de risco de mortalidade nos dois tipos de úlcera foram comparados descritivamente utilizando-se o odds ratio, os percentuais de mortalidade, o teste de Zelen e análise de regressão logística univariada e multivariada. Destaca-se que a maioria do pacientes foi submetida ao tratamento cirúrgico não definitivo, sendo o critério utilizado para definir o tipo de cirurgia determinado por escolha aleatória da equipe cirúrgica. Resultados: Os fatores de risco associados à mortalidade na úlcera gastroduodenal perfurada identificados na análise univariada foram: idade (UG), pneumoperitônio, doenças concomitantes, local de perfuração, choque na admissão e tempo de perfuração. A presença do pneumoperitônio é um sinal radiológico importante no diagnóstico da úlcera gastroduodenal perfurada. Na sua ausência, ocorreu aumento de incidência de mortalidade. A incidência de mortalidade na úlcera gástrica perfurada foi maior no idoso. Na úlcera gástrica a incidência de mortalidade foi maior do que na úlcera duodenal. Entretanto, a análise multivariada mostrou que os fatores de risco independentes preditivos de mortalidade foram na úlcera duodenal: tempo de perfuração maior que 24 horas, doenças concomitantes e choque na admissão e na úlcera gástrica: idade, tempo de perfuração maior que 24 horas e choque na admissão. Conclusões: O risco aumentado de mortalidade na úlcera gastroduodenal perfurada pode ser previsto quando os pacientes apresentam idade avançada (UG), doenças concomitantes (UD), tempo de perfuração maior que 24 horas, e choque na admissão hospitalar / Motivation: The introduction of the H2 antagonist drug and the discovery that the Helicobacter pylori played a role in the pathogenesis of the peptic ulcer caused a decrease in the indication of surgical treatment for ulcer disease. However, the incidence of perforation in ulcer disease has remained constant, and surgical treatment is the most indicated treatment modality. In these cases, the rate of mortality is still significant. Objective: This paper aimed at analyzing the risk factors for mortality in the surgically treated perforated gastroduodenal ulcer. Cases and methods: 311 patients were studied (268 males and 43 females), seeing that 242 were duodenal ulcer carriers and 69 gastric ulcer, in the period from January 1997 to December 2000. Thirty-five patients died (11,25%). The following factors were analyzed: age, sex, smoking, chronic alcohol consumption, previous ulcer disease, use of anti-inflammatory medication, pneumoperitoneum, concomitant diseases, shock upon admittance, time lapsed since perforation, peritonitis, type of surgery and perforation site. The risk factors for mortality in the two types of ulcer were compared descriptively, using the odds ratio, percentage of mortality, the Zelen test and the univariate and multivariate logistic regression analysis. It is worth pointing out that most of the patients had undergone nondefinitive surgical treatment and the criterion used to decide the type of surgery was random selection by the surgical team. Results: The risk factors associated to mortality in the perforated gastroduodenal ulcer identified by the univariate analisys were: age (GU), pneumoperitoneum, concomitant diseases, perforation site, shock upon admittance, time lapsed since perforation, peritonitis and type of surgery. The presence of pneumoperitoneum is an important radiological sign for the diagnosis of the perforated peptic ulcer. When this diagnostic tool was not used, an increase in the incidence of mortality was observed. The incidence of mortality for perforated gastric ulcers was higher in elderly patients. The incidence of mortality was higher for gastric ulcers relative to duodenal ulcers. However, the multivariate analysis showed that independent predictive risk factors for mortality were the following, for the duodenal ulcer: time lapse of more than 24 hours since perforation, severe coexisting diseases and shock at the time of admittance; for gastric ulcer: age, time lapse of more than 24 hours, from moment perforation and shock at the time of admittance. Conclusion: The increased risk of mortality for perforated duodenal ulcer can be predicted when the patients are elderly (GU), when there are concomitant diseases (DU), the time lapsed from the moment of perforation exceeds 24 hours, and when the patients are in shock at the time of admittance

Este trabalho aborda a espécie Pothomorphe umbellata (L.) Miq. (Piperaceae), conhecida popularmente como pariparoba. Nos últimos anos foram atribuídas diversas atividades a essa espécie, entre elas uma potente atividade antioxidante, atividade anti-inflamatória e ainda inibição in vitro do crescimento de Helicobacter pylori. Tais estudos tornam interessante a investigação da atividade antiúlcera e dos principais grupos de compostos que possam ser relacionados à esta ação, sendo estes os principais objetivos do trabalho. Para cumprir os objetivos propostos, foram utilizados diferentes modelos de ulceração gástrica em animais. Em modelo de indução por etanol acidificado, extratos brutos de folhas e raízes não inibiram significativamente a formação de lesões, porém frações do extrato de raízes conseguiram desempenho semelhante ao do lansoprazol. Em modelo de ligadura do piloro e indução por indometacina o extrato bruto de raízes (EB) não mostrou diferença em relação ao controle negativo. Em modelo de indução por ácido acético, o EB reduziu o tamanho, a presença de necrose e infiltrado inflamatório nas lesões. Com os resultados obtidos, é proposto que sua atividade esteja relacionada à capacidade antioxidante já relatada na literatura. Através de análise e separação por CLAE, foram identificadas três moléculas na fração mais ativa em relação à ação antiúlcera. Duas delas (piperumbellactamas A e B) já haviam sido descritas nessa espécie, porém nas partes aéreas. A terceira (caldensina) havia sido isolada de Piper caldense, e não foram encontrados na literatura relatos de sua ocorrência em P. umbellata. Para melhorar a solubilidade do extrato em água, foi preparada uma suspensão de nanocápsulas, que associou as substâncias mais apolares com sua matriz polimérica. Ao mesmo tempo, formou partículas de tamanho e índice de polidispersão adequados, indicando a viabilidade da formulação. / This work is based on a research of Pothomorphe umbellata (L.) Miq. (Piperaceae) extracts, popularly known as pariparoba. Through the past years, many activities have been attributed to this species, including strong antioxidant activity, anti-inflammatory effect and in vitro growth inhibition of Helicobacter pylori. On that account, the investigation of the antiulcer activity and the research for related chemical compounds was proposed, trying to establish a relationship between these compounds and the activity. To accomplish the proposal, some distinct ulcer models (in rats) were used. The crude extracts from leaves and roots had no significant effect over mucosal damage when tested in acidified ethanol model. By contrast, some fractions from the roots extract showed similar performance when compared to lansoprazole. Also, the crude extract from roots (CE) was not different from water when tested in pylorus ligation and indomethacin induction models. When tested in acetic acid model, the CE significantly reduced the lesion area, the presence of necrosis and inflammatory infiltrate. With these results, a correlation between the antioxidant (previously reported) and antiulcer activities is suggested. The chemical analysis was performed through high-performance liquid chromatography (HPLC) and three molecules were identified in the fraction which showed the stronger antiulcer activity. Two of them (piperumbellactam A and B) had been described in branches of this species. The third (caldensin) had been isolated from Piper caldense, and no record was found about its occurence in P. umbellata. In order to increase CE water solubility, a nanoparticles suspension was prepared. This formulation was able to associate the hydrophobic components to its polymeric matrix. At the same time, it exhibited adequate particle size and polydispersity index, indicating a viability of the formulation.

Tradicionalmente plantas medicinais são utilizadas pela população para a prevenção e tratamento da úlcera gástrica. A úlcera gástrica é uma patologia heterogênea de etiologia multifatorial, que acomete aproximadamente de 8 a 10% da população mundial. Entretanto, os tratamentos terapêuticos disponíveis são muito dispendiosos, possuem limitada eficácia e com vários efeitos colaterais. Extrato de folhas de Phyllanthus tenellus Roxb. é utilizado pela população para o tratamento de problemas gástricos. Esta espécie está incluída na Relação Nacional de Plantas com Interesse ao SUS (ANVISA). Com a finalidade de investigar a atividade antiúlcera foram ensaiados dois modelos de lesões gástricas em animais. No modelo de indução por etanol acidificado, após administração do extrato bruto (extrato hidroetanólico 70% liofilizado) de P. tenellus, verificou-se redução de 3.44% e 4.25% da área de lesão gástrica nas doses 200mg/kg e 400mg/kg, porém não houve diferença significativa entre os resultados. Já no ensaio, utilizando extrato hidroetanólico, fração acetato de etila e fração aquosa, nas doses de 200mg/kg, assim como no ensaio anterior, verificou-se redução da área de lesão gástrica de 0.7%, 1.1% e 0.7% respectivamente, porém não houve diferença significativa entre controle e tratado. No teste, utilizando a fração acetato de etila das folhas de P. tenellus (Phyllanthaceae), houve redução de 9,46 e 22,80% das lesões gástricas nas doses de 100mg/kg e 400mg/kg, porém não houve diferença significativa. No modelo de úlcera gástrica induzida por etanol acidificado em animais pré-tratados com etoricoxibe, indometacina e L-NAME, verificou-se uma tendência de redução da lesão gástrica, porém não houve diferença significativa. Já no modelo de úlcera gástrica induzida por etanol acidificado em animais pré- tratados com NEM, houve diminuição das lesões gástricas em 90% no grupo Salina+FA (p<0,05), comparando-o com o grupo NEM+FA. Em modelo de úlcera subaguda induzida por ácido acético, após 7 dias de tratamento com o extrato hidroetanólico de P. tenellus nas doses de 100, 200 e 400 mg/kg, houve redução significativa nas lesões gástricas em 60% na dose de 100 mg/kg (p<0.01), 47% na dose de 200 mg/kg (p<0,01) e 69% na dose de 400 mg/kg (p<0,001). Realizando avaliação histológica, foi verificado aumento regenerativo do epitélio da mucosa e reparação com cicatrização da lamina própria da mucosa com proliferação fibroblástica e neoformação de vasos sanguíneos, e grande deposição de colágeno, evidenciando que o processo de cicatrização e regeneração está ocorrendo após o tratamento com o extrato hidroetanólico a 70% de P. tenellus. Paralelamente aos estudos farmacológicos, foi determinado o perfil cromatográfico por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) do extrato hidroetanólico e frações (clorofórmica, acetato de etila e aquosa). No ensaio de quantificação de flavonoides e de compostos fenólicos foi observado que a fração acetato de etila possui maior concentração de substâncias fenólicas, incluindo flavonoides, seguida do extrato bruto e por último, pela fração aquosa. No experimento de determinação de capacidade antiradicalar observou-se que a fração acetato de etila (CE50=13,09 &#181;g/ml) apresentou uma melhor capacidade de redução do radical DPPH, seguida do extrato hidroetanólico (CE50=19,86 &#181;g/ml) e fração aquosa (CE50=45,76 &#181;g/ml). Estes resultados estão em consonância com a gastroproteção observada no experimento de atividade antiulcera, sugerindo uma possível relação do flavonoide, di-hidromiricetina presente no extrato, com a atividade gastroprotetora e com a facilitação da cicatrização das úlceras gástricas. / Traditionally medicinal plants have been used to prevent and to treat gastric ulcer. Gastric ulcer is a heterogeneous disease of multifactorial etiology, which affects about 8-10% people in the world. However, these pharmaceutical products are not completely effective and produce many adverse effects. Extracts of leaves of Phyllanthus tenellus Roxb. is often used for treating gastric disease by the population. This species is included in RENISUS. In order to investigate antiulcer activity, for this were realized two distinct ulcer models in rats. In acidified ethanol model, the crude extract (hydroethanol extract 70% lyophilized) from leaves of P. tenellus showed a reduction for 3.44% and 4.25% from gastric lesion area at the dose 200mg/kg and 400mg/kg, however there was not diference significant between the results. The assay using hydroethanol extract, ethyl acetate fraction and aqueous fraction at the dose 200mg/kg as in the previous test showed a reduction from gastric lesion area respectively in 0.7%, 1.1% and 0.7% however there was not significant difference between control and treated. The assay using ethyl acetate fraction from the leaves P. tenellus (Phyllanthaceae), showed a reduction in 9,46% and 22,80% of gastric lesion area at the dose 100mg/kg and 400mg/kg however there was not significant difference. In gastric ulcer model induced by acidified ethanol in pre-treated animals in ethoricoxib, indomethacin and L-NAME, showed a tendency of reduction from gastric lesion area however there was not significant difference. In gastric ulcer model induced by acidified ethanol in pre-treated animals with NEM showed a reduction from gastric lesion in 90% in the group Salina+FA (p<0,05), comparing with the group NEM+FA. In subacute ulcer model induced by acid acetic , after 7 days of treatment with hydroethanol extract of P. tenellus at the dose 100, 200 and 400 mg/kg showed significant reduction from gastric lesion in 60% at the dose 100 mg/kg (p<0.01), 47% at the dose 200 mg/kg (p<0,01) and 69% at the dose 400 mg/kg (p<0,001). With histological evaluation it was possible to see regenerative increased of the mucosal epithelium and reparation with healing mucosal lamina propria with fibroblast proliferation and blood vessels neoformation, and large collagen deposition showing healing process and regeneration occurring after treatment hydroethanol extract 70% of P. tenellus. At the same time the pharmacological studies it was made the chromatographic profile by Thin Layer Chromatography (TLC), hydroethanol extract and fractions (chloroform, ethyl acetato and aqueous). The assay of quantitation of flavonoids and phenolic compounds it was observed that the ethyl acetate fraction has a higher concentration of phenolic substances including flavonoides, then the crude extract and lastly the aqueous fraction . In the experiment to determine antiradicalar capacity it was noted that the ethyl acetate fraction (CE50=13,09 &#181;g/ml) showed a better radical DPPH reduction capacity, followed by hydroethanol extract (CE50=19,86 &#181;g/ml) and aqueous fraction (CE50=45,76 &#181;g/ml). These results are in line with the gastroprotection observed in gastric ulcer experiment, suggesting a possible relation of the flavonoid , di - hidromiricetina present in the extract, with the gastroprotective activity and facilitating healing of gastric ulcers.

Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) é uma espécie muito empregada na medicina tradicional no Brasil e em outras partes do mundo, especialmente Índia, países da África e China. É indicada popularmente para diversos fins incluindo o tratamento de úlceras gástricas. A análise fitoquímica revelou a presença de vários constituintes, em especial os flavonoides. O tratamento de úlcera gástrica convencional apresenta diversos efeitos colaterais e, na maioria das vezes, não evita a recidiva da lesão. Dessa maneira, é interessante encontrar uma terapêutica mais segura e efetiva. Com o objetivo de avaliar a segurança, foi realizado ensaio de citotoxicidade do extrato bruto, in vitro, com valor de IC50 igual a 0,926 mg/mL, sendo possível predizer um valor de LD50 (1341,46 mg/kg). Já em relação ao ensaio de citotoxicidade, in vitro, da fração acetato de etila não foi encontrado um valor de IC50. Resultados de fototoxicidade, in vitro, mostraram que o extrato bruto e fração acetato de etila de K. pinnata não possuem potencial fototóxico. A contagem microbiana na droga vegetal para bactérias aeróbias/mesófilas foi de 6,9 x 104 UFC/g e a contagem de bolores e leveduras foi de 2,4 x 103 UFC/g, ambos valores dentro do limite estabelecido pela OMS. Análise de endotoxinas também foi realizada para o extrato bruto (<4,0.105 UE/kg) e fração acetato de etila (<2,7.105 EU/kg) de K. pinnata. Referente à fitoquímica, diversos flavonoides foram identificados no extrato bruto e fração acetato de etila de K. pinnata. Paralelamente ao estudo fitoquímico foi verificado que a atividade gastroprotetora do extrato bruto envolve a ação das prostaglandinas e grupamentos sulfidrila. Já o mecanismo de gastroproteção da fração acetato de etila é dependente de prostaglandinas e óxido nítrico. A atividade cicatrizante do extrato bruto de K. pinnata também foi avaliada. De acordo com os resultados macroscópicos, as doses de 200mg/kg e 400 mg/kg reduziram a área de lesão, com uma taxa de 33% e 39%, respectivamente, após 7 dias de tratamento (p<0,05). Análise histológica dos grupos tratados com o extrato bruto (200 e 400 mg/kg) indicou melhor recuperação da lesão, verificada pela regeneração da mucosa gástrica e pelo restabelecimento da arquitetura glandular. As enzimas antioxidantes (catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase) e a expressão de VEGF foram avaliadas no mecanismo de cicatrização de úlceras gástricas. Os resultados mostraram que a atividade antiulcerogênica foi mediada pela ação antioxidante da enzima SOD. Não foi evidenciado in vivo o aumento da expressão de VEGF e nem o sequestro do radical peroxil nos animais tratados com o extrato bruto. Os resultados dos ensaios in vitro (ORAC) mostraram uma maior capacidade de sequestro de radicais peroxil da fração acetato de etila (1192,35 ± 112,61 &#181;mol equivalente de Trolox/g de amostra seca) quando comparado com o extrato bruto (431,32 ± 7,17 &#181;mol equivalente de Trolox/g de amostra seca). A atividade anti Helicobacter pylori também foi avaliada, no entanto, o extrato bruto não apresentou atividade anti H.pylori. Ademais, o extrato bruto demonstrou um potencial anti-inflamatório, pois foi observada uma redução nos níveis de TNF-&#945; e L-selectina, após o tratamento em neutrófilos estimulados com LPS. Analisando os resultados sugere-se que K. pinnata possui um potencial terapêutico no combate de úlceras gástricas e possivelmente, anti-inflamatório, sendo que os flavonoides podem estar relacionados com o efeito biológico observado. / Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) is a commonly used species in traditional medicine in Brazil and in other parts of the world, especially India, Africa and China, for the treatment of various diseases, including gastric ulcers. Phytochemical analysis revealed the presence of several constituents in this plant, especially flavonoids. The available pharmaceutical products to treat peptic ulcer have several side effects and, in most cases, do not prevent recurrence of the gastric lesions. Therefore, it is important to find a safer and more effective therapy. In order to evaluate safety, the in vitro cytotoxicity assay of crude extract from K. pinnata was performed. The IC50 value was 0,926 mg/mL corresponding to LD50 value (1341, 46 mg/kg). It was not determined IC50 value in vitro cytotoxicity assay for ethyl acetate fraction from K. pinnata. Neither the crude extract nor ethyl acetate fraction from K. pinnata showed phototoxicity. Microbial counting was performed on the K. pinnata-based drug in order to investigate microbiological contamination. The microbial count for aerobic / mesophilic bacteria was 6.9 x 104 CFU/g, and yeast count was 2.4 x 103 CFU/g, both values in agreement with the limits established by WHO. Endotoxin analysis was also performed for the crude extract (<4,0.105 UE/kg) and for ethyl acetate fraction (<2,7.105 UE/kg) from K. pinnata. In the phytochemical analysis several flavonoids were identified in the crude extract and ethyl acetate fraction of K. pinnata. In parallel to the phytochemical study, it was verified that the gastroprotective activity of the crude extract of K. pinnata involved prostaglandins and sulfhydril compounds. On the other hand, the mechanism of gastroprotection of the ethyl acetate fraction of K. pinnata is dependent on prostaglandins and nitric oxide. The healing activity of the crude extract of K. pinnata was also evaluated. According to the macroscopic results the dose of 200 mg/kg and 400mg/kg reduced the injury area, with a rate of 33% and 39%, respectively, after 7 days of treatment (p <0.05). Histological analysis showed regeneration of the gastric mucosa and re-establishment of the glandular architecture in groups treated with the crude extract (200 and 400 mg/kg). Antioxidant enzymes (catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase) and VEGF expression were evaluated in the mechanism of gastric ulcer healing. The results showed that the antiulcerogenic activity was mediated by SOD. It was not demonstrated an increase in VEGF expression and nor in the in vivo sequestration of the peroxyl radical in the animals treated with crude extract. The results of in vitro assay (ORAC) showed a greater sequestering of peroxyl radical to the ethyl acetate fraction (1192,35 ± 112,61 &#181;mol equivalent of Trolox/g of ethyl acetate fraction) when compared to the crude extract (431,32 ± 7,17 &#181;mol equivalent of Trolox/g of crude extract) of K. pinnata. The anti Helicobacter pylori activity was also evaluated; however, the crude extract did not show anti H. pylori activity. However, the crude extract of K. pinnata demonstrated an anti-inflammatory potential, because TNF-&#945; and L-selectin levels were reduced after treatment in LPS-stimulated neutrophils. The analysis of the results suggests that K. pinnata has a therapeutic potential against gastric ulcers and possible anti-inflammatory properties, and the flavonoids may be linked to the biological effect.

O objetivo deste estudo foi analisar a participação do PCV2 no desenvolvimento de ulcerações gástricas em suínos. Descrevem-se as lesões macroscópicas e histopatológicas nas diferentes zonas do estômago de suínos naturalmente infectados pelo PCV2 e H. pylori. As lesões foram descritas nas diferentes zonas do estômago. Os estômagos coletados eram provenientes de granjas com diagnóstico prévio de infecção pelo PCV2 durante os anos de 2006 à 2008. A presença dos agentes foi verificada por técnicas de imunoistoquímica (IHQ). Dentre os 63 estômagos processados, 30 não apresentavam ulcerações no quadrilátero, sendo que 16 deles apresentavam marcação anti-PCV2 positiva em alguma das regiões analisadas. Apenas 06 casos não apresentavam marcação anti-PCV2 nos dos tecidos testados (estômago e linfonodo). Marcação positiva anti-PCV2 foi verificada em 56 linfonodos, dos quais 28 estômagos foram positivos para PCV2 em alguma zona da mucosa glandular. Grandes quantidades de antígeno do PCV2 foram observadas pela IHQ no citoplasma, núcleo e restos necróticos de células intralesionais das glândulas gástricas nas regiões do antro e cárdia; entretanto, na região do fundo, a marcação de IHQ anti-PCV2 foi restrita às células da superfície mucosa e fossetas gástricas. Marcação de IHQ anti-H. pylori foi identificada em 27 casos, principalmente, na superfície mucosa e fossetas gástricas no antro. A associação de antígenos PCV2 com células produtoras de muco lesadas na zona glandular gástrica sugere o envolvimento de PCV2 como um fator adicional para o desenvolvimento de úlceras gástricas em suínos. / The aim of this study was to describe macroscopical and histopathological found in different zones of stomachs collected from pigs naturally infected with PCV2 and H. pylori. lesions were described in the different zones of the stomach. Stomachs were collected during the years of 2006 to 2008 from herds previously diagnosed as positive for PCV2 infection. The presence of the agents was determined by immunohistochemical techniques. Among 63 stomachs examined, ulceration of the Pars oesophagica was not observed in 30 stomachs, although, 16 of them showed positive PCV2 immunostaining in some of the areas tested. PCV2 immunostaining was not observed in only six cases in any of the tested tissues (stomach and lymph node). PCV2 positive immunostaining was observed in 56 lymph nodes and in some zones of the glandular mucosa, in 28 stomachs. Large amounts of PCV2 antigen were observed in the cytoplasm and nucleus of intralesional cells and in debris of gastric glands of antrum and cardia. However, anti-PCV2 immunostaining was restricted to superficial mucosal cells and gastric pits, in the fundus. H. pylori immunostaining was observed in 27 cases, mainly pn the mucosal surface and gastric pits of the antrum. The association of PCV2 antigen with damaged glandular mucus-producing cells in the gastric glandular zone suggests a role of PCV2 as an additional factor for the development of swine gastric ulcers.

O objetivo deste estudo foi analisar a participação do PCV2 no desenvolvimento de ulcerações gástricas em suínos. Descrevem-se as lesões macroscópicas e histopatológicas nas diferentes zonas do estômago de suínos naturalmente infectados pelo PCV2 e H. pylori. As lesões foram descritas nas diferentes zonas do estômago. Os estômagos coletados eram provenientes de granjas com diagnóstico prévio de infecção pelo PCV2 durante os anos de 2006 à 2008. A presença dos agentes foi verificada por técnicas de imunoistoquímica (IHQ). Dentre os 63 estômagos processados, 30 não apresentavam ulcerações no quadrilátero, sendo que 16 deles apresentavam marcação anti-PCV2 positiva em alguma das regiões analisadas. Apenas 06 casos não apresentavam marcação anti-PCV2 nos dos tecidos testados (estômago e linfonodo). Marcação positiva anti-PCV2 foi verificada em 56 linfonodos, dos quais 28 estômagos foram positivos para PCV2 em alguma zona da mucosa glandular. Grandes quantidades de antígeno do PCV2 foram observadas pela IHQ no citoplasma, núcleo e restos necróticos de células intralesionais das glândulas gástricas nas regiões do antro e cárdia; entretanto, na região do fundo, a marcação de IHQ anti-PCV2 foi restrita às células da superfície mucosa e fossetas gástricas. Marcação de IHQ anti-H. pylori foi identificada em 27 casos, principalmente, na superfície mucosa e fossetas gástricas no antro. A associação de antígenos PCV2 com células produtoras de muco lesadas na zona glandular gástrica sugere o envolvimento de PCV2 como um fator adicional para o desenvolvimento de úlceras gástricas em suínos. / The aim of this study was to describe macroscopical and histopathological found in different zones of stomachs collected from pigs naturally infected with PCV2 and H. pylori. lesions were described in the different zones of the stomach. Stomachs were collected during the years of 2006 to 2008 from herds previously diagnosed as positive for PCV2 infection. The presence of the agents was determined by immunohistochemical techniques. Among 63 stomachs examined, ulceration of the Pars oesophagica was not observed in 30 stomachs, although, 16 of them showed positive PCV2 immunostaining in some of the areas tested. PCV2 immunostaining was not observed in only six cases in any of the tested tissues (stomach and lymph node). PCV2 positive immunostaining was observed in 56 lymph nodes and in some zones of the glandular mucosa, in 28 stomachs. Large amounts of PCV2 antigen were observed in the cytoplasm and nucleus of intralesional cells and in debris of gastric glands of antrum and cardia. However, anti-PCV2 immunostaining was restricted to superficial mucosal cells and gastric pits, in the fundus. H. pylori immunostaining was observed in 27 cases, mainly pn the mucosal surface and gastric pits of the antrum. The association of PCV2 antigen with damaged glandular mucus-producing cells in the gastric glandular zone suggests a role of PCV2 as an additional factor for the development of swine gastric ulcers.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / A &#946;-ionona (4-[2,6,6-trimetill-1-ciclohexeno]-3-buten-2-ona) à um sesquiterpeno (terpenoide degradado - C13) presente na estrutura molecular do retinol, &#946;-caroteno e Ãcido retinÃico, sendo formado a partir da via do mevalonato em diferentes tipos de plantas. As pesquisas sobre as atividades biolÃgicas da &#946;-ionona ainda sÃo incipientes e poucos resultados com este composto sÃo encontrados na literatura. Este estudo visa investigar a atividade da &#946;-ionona no modelo de lesÃo gÃstrica induzida por etanol. A manipulaÃÃo dos animais e os protocolos experimentais foram registrados na ComissÃo de Ãtica em Pesquisa Animal (CEPA) sob o nÃmero 87/2011. Camundongos Swiss (n = 8), em jejum de 18 h, receberam, por gavagem, BI nas doses de 6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg/kg. ApÃs 60 min da administraÃÃo de BI os animais receberam 0,2 ml de etanol absoluto por gavagem. Decorridos 60 min dessa administraÃÃo, os animais foram sacrificados, os estÃmagos removidos e analisados para determinaÃÃo do Ãndice de lesÃo. A avaliaÃÃo histopatolÃgica do estÃmago foi realizada atribuindo escores aos parÃmetros de edema, hemorragia, perda de cÃlulas epiteliais e infiltrado inflamatÃrio. Para investigar o envolvimento de mediadores no efeito de BI, os animais receberam indometacina (10 mg/kg; v.o.), L-NAME (20 mg/kg; i.p.), ODQ (10 mg/kg; i.p.), glibenclamida (5 mg/kg; i.p.) e capsazepina (5 mg/kg; i.p) antes do tratamento com BI (12,5 mg/kg; v.o.). Misoprostol (50 Âg/kg v.o), L-arginina (600 mg/kg; i.p.), diazÃxido (3 mg/kg; i.p.) e capsaicina (0,3 mg/kg; v.o.) foram utilizados padrÃo positivo. Os nÃveis de nitrito e glutationa foram dosados na mucosa do estÃmago para investigar o efeito da BI sobre os nÃveis de NO e seu efeito antioxidante, respectivamente. O tratamento dos animais com a BI (12,5; 25; 50 e 100 mg/kg), reduziu significativamente e de forma dose-dependente, a Ãrea da lesÃo gÃstrica induzida pelo etanol para (11,41  2,0; 7,92  1,8*; 6,32  2,0 e 1,43  0,42 % respectivamente). Entretanto, a BI na menor dose avaliada (6,25 mg/kg), nÃo apresentou reduÃÃo significativa da Ãrea ulcerada (21,97  1,8%). A administraÃÃo de BI reduziu os escores de hemorragia, edema e a perda de cÃlulas epiteliais. A Indometacina e capsazepina nÃo foram capazes de reverter o efeito protetor da BI. O prÃ-tratamento dos animais com L-NAME, ODQ e Glibenclamida reverteu o efeito gastroprotetora da BI, mostrando o envolvimento do NO e canais KATP no seu mecanismo de aÃÃo. O grupo prÃ-tratado com BI (12,5 mg/kg v.o.) mostrou uma maior concentraÃÃo de nitrito (24,18 mM) quando comparado ao grupo controle (17,68 mM). O prà tratamento com BI foi efetivo em proteger contra o dano oxidativo (346,4  60,32 Âg/g de tecido), evitando a depleÃÃo nos nÃveis de GSH no tecido. Estes resultados indicam que a &#946;-ionona possui efeito gastroprotetor no modelo de LesÃo GÃstrica induzida por Etanol mediado pela via NOGMPcKATP e atravÃs da mediaÃÃo do terpeno na depleÃÃo dos nÃveis de GSH provocado pelo etanol. / The &#946;-ionone (4-[2,6,6-cyclohexene-1-trimetill]-3-butene-2-one) is a sesquiterpene (degraded terpenoid - C13) present in the molecular structure of retinol and &#946;-carotene acid retinoic being formed from the mevalonate pathway in different types of plants. Research on the biological activities of &#946;-ionone are still incipient and limited results with this compound are found in the literature. This study aims to investigate the activity of &#946;-ionone in the model of ethanol-induced gastric injury. Handling of animals and experimental protocols were recorded by the Ethics Committee on Animal Research (CEPA) under number 87/2011. Swiss mice (n = 8), fasted 18 hours, were orally treated with BI at doses of 6.25, 12.5, 25, 50 and 100mg/kg. After 60 min of administration BI animals received 0.2 ml of absolute ethanol po. After 60 min this administration, the animals were sacrificed, the stomachs removed and analyzed to determine the rate of injury. Histologic examination of the stomach was performed by assigning scores to the parameters of edema, hemorrhage, loss of epithelial cells and inflammatory infiltrate. To investigate the role of mediators in BI effect, animals received indomethacin (10 mg / kg, po), L-NAME (20 mg / kg, ip) ODQ (10 mg / kg, ip), glibenclamide (5 mg / kg, ip) and capsazepine (5 mg / kg, ip) before treatment with BI (12.5 mg / kg, po). Misoprostol (50 mg / kg po), L-arginine (600 mg / kg, ip), diazoxide (3 mg / kg, ip) and capsaicin (0.3 mg / kg, po) was used positive pattern. The levels of nitrite and glutathione were measured in the stomach mucosa to investigate the effect of BI on the levels of NO and its antioxidant effect, respectively. Treatment of animals with the BI (12.5, 25, 50 and 100 mg / kg) reduced significantly and dose-dependent manner, the area of ethanol-induced gastric lesion to (11.41  2.0, 7 92 *  1.8, 6.32  2.0 and 1.43  0.42% respectively). However, the BI lowest tested dose (6.25 mg / kg) showed no significant reduction of the ulcerated area (21.97  1.8%). The administration of BI scores decreased hemorrhage, edema and loss of epithelial cells. The capsazepine and indomethacin were not able to reverse the protective effect of BI. Pretreatment of animals with L-NAME, ODQ and glibenclamide reversed the gastroprotective effect of BI, showing the involvement of NO and KATP channels in its mechanism of action. The group pretreated with BI (12.5 mg / kg po) showed a higher concentration of nitrite (24.18 mM) compared to the control group (17.68 mM). The pretreatment BI was effective in protecting against oxidative damage (346.4  60.32 mg / g of tissue), preventing depletion of GSH levels in tissue. These results indicate that the &#946;-ionone has gastroprotective effect in the model of ethanol-induced gastric injury mediated by the NO cGMP K ATP and terpene through the mediation of the GSH depletion induced by ethanol.