O objetivo deste estudo foi avaliar a distribuição genotípica e mutações no genoma do vírus da hepatite B (VHB) em um grupo de pacientes co-infectados pelo VHB e vírus da imunodeficiência humana (HIV). Foram incluídos pacientes AgHBs +/HIV+ , atendidos em um ambulatório de referência para pacientes infectados pelo HIV, na cidade de São Paulo. Para a detecção dos marcadores sorológicos para infecção pelo VHB utilizou-se técnica de ELISA através de kits comerciais. A detecção do DNA-VHB foi realizada através de nested-PCR e sua quantificação foi realizada por COBAS AMPLICOR. De acordo com a literatura, a infecção pelo VHB no Brasil varia de 0,4 a 8,5%. Os genótipos de VHB, as mutações na região do core, BCP, pré-core e na região da polimerase foram determinados por seqüenciamento. Cinqüenta e nove pacientes foram incluídos neste estudo e cinqüenta e seis pacientes relatavam uso prévio de lamivudina ou tenofovir. A presença do DNA-VHB foi detectada em 22 pacientes AgHBs positivos. A identificação dos genótipos foi realizada em 16 pacientes e a distribuição dos genótipos do VHB foi: A (12-75%); G (2-13%), D (1-6%) e F (1-6%). Em 10 dos pacientes com viremia presente para DNA-VHB, foram observadas mutações na região da polimerase (rtL180M + rtM204V, rtV173L + rtL180M + rtM204V) e no gene do envelope (sI195M, sW196L, sI195M/sE164D). Mutações na região do BCP (A1762T, G1764A) e do pré-core (G1896A) foram identificados em quatro pacientes. Em conclusão, entre os pacientes analisados observou-se uma alta prevalência de mutações associadas a resistência à lamivudina e associadas a resistência a anti-HBs. O genótipo G, raramente descrito em nosso meio, foi também observado nesse grupo de pacientes. / The objective of this study was to evaluate the genotype distribution and genomic mutations of hepatitis B virus (HBV) among a group of HIVHBV co-infected patients from an AIDS outpatient clinic in São Paulo. HBV serological markers were detected by commercially available enzyme immunoassay kits. HBV DNA was detected by using an in-house nested PCR and quantified by COBAS AMPLICOR. HBV genotypes, basal core promoter (BCP) / pre-core / core region and surface / polymerase genes mutations were determined by sequencing. Among the 59 patients included in this study, 56 reported previous use of lamivudine or tenofovir. According to the literature HBV infection in Brazil varies from 0,4 to 8,5%. HBV DNA was detected in 16/22 patients and the genotypes distribution was A (n=12, 75%); G (n=2, 13%); D (n=1, 6%), and F (n=1, 6%). In 10 patients with viremia, lamivudine-resistance mutations in the polymerase gene (rtL180M + rtM204V, rtV173L + rtL180M + rtM204V) were found, accompanied by changes in the envelope gene (sI195M, sW196L, and sI195M/sE164D). Mutations in the BCP and pre-core regions were identified in 4 patients. In conclusion, genotype G, rarely seen in Brazil, was observed in this group of patients. A high prevalence of mutations associated with lamivudine-resistance accompanied by mutations associated with anti-HBs resistance was also found among these patients.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-07-23T19:43:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação corrigida Léo Marques - Última versão.pdf: 2389075 bytes, checksum: c3eadd17d5fbbe099053507be58d48e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-31T18:52:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação corrigida Léo Marques - Última versão.pdf: 2389075 bytes, checksum: c3eadd17d5fbbe099053507be58d48e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-31T18:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação corrigida Léo Marques - Última versão.pdf: 2389075 bytes, checksum: c3eadd17d5fbbe099053507be58d48e3 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / As doenças são um dos principais problemas para a cultura do citros no Brasil, o fato do Rio Grande do Sul ter sua citricultura concentrada sobre um único porta-enxerto („Trifoliata‟) aumenta e muito os riscos fitossanitários, em uma possível disseminação de doenças que esse porta-enxerto apresente suscetibilidade. Existe uma grande necessidade de diversificar a base genética de porta-enxertos cítricos no estado do Rio Grande do Sul, que pode ser resolvida através de estudos de genótipos que se adaptem às condições climáticas do estado. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento e adaptação de diferentes porta-enxertos, desde a fase de emergência de sementes até o período que antecede a enxertia. A dissertação traz um artigo, elaborado nos anos de 2016 e 2017, na unidade Sede da Embrapa Clima Temperado em Pelotas-RS. Intitulado “Desenvolvimento inicial de potenciais porta-enxertos para a citricultura”, analisa o comportamento dos porta-enxertos no período em que às sementes estão emergindo, analisando às variáveis porcentual da emergência de plântulas, início, duração e uniformidade de emergência e também o crescimento, através das variáveis altura e diâmetro medidos a partir dos 130 dias após a semeadura e a adaptação às condições climáticas locais através do porcentual de mortalidade. Verificou-se que os porta-enxertos „Trifoliata‟, TSKC X CTSW – 041 e TSKC X CTSW – 025 apresentam sementes com maior emergência de plântulas, e que o „Trifoliata‟ manifesta emergência mais precoce, rápida e uniforme, em comparação aos demais porta-enxertos utilizados no experimento. Foi possível observar que muitos porta-enxertos não se desenvolveram bem nas condições de clima local, como por exemplo, os genótipos LCR X CTSW – 009 e LVK X LCR – 039, que tiveram 100% e 90% de plantas mortas respectivamente. Por outro lado verificou-se que alguns genótipos adaptaram-se perfeitamente, o porta-enxerto citrumeleiro „Swingle‟, apresentou maior altura e diâmetro associado a uma mortalidade muito baixa, outros porta-enxertos além do citrumeleiro „Swingle‟ são promissores para citricultura do estado devido ao um desenvolvimento inicial superior e uma baixa mortalidade, como os genótipos Cleo X TRBN – 245, Cleo X TRSW – 287, citrandarins „Índio‟, „San Diego‟ e „Riverside‟, LRF X (LCR X TR) – 005 e limoeiro „Cravo‟. / The diseases are one of the main problems for the citrus crop in Brazil, the fact that Rio Grande do Sul has its citriculture concentrated on a single rootstock ('Trifoliata') increases the phytosanitary risks, in a possible dissemination of diseases that this rootstock is susceptible. There is a great need to diversify the genetic basis of citrus rootstocks in the state of Rio Grande do Sul, which can be solved through studies of genotypes that adapt to the climatic conditions of the state. The goal of this study was to evaluate the development and adaptation of different rootstocks, from seed emergence to the period that preceds the grafting. The dissertation brings an article, elaborated in the years 2016 and 2017, at the headquarters of Embrapa Clima Temperado in Pelotas-RS . Entitled "Initial development of potential rootstocks for citrus", analyze the behavior of the rootstocks in the period in which the seeds are emerging, through the variables: seedling emergence percentage, iniciation, duration and emergency uniformity, as well as growth, through the variables of height and diameter measured from 130 days after sowing and adaptation to local climatic conditions by mortality rate. It was verified that Trifoliata rootstocks, TSKC X CTSW-041 and TSKC X CTSW-025, showed seeds with higher seedling emergence, and that 'Trifoliata' showed premature emergence, faster and more uniform compared to the others. It was possible to observe that many rootstocks did not develop well under local climatic conditions, such as the LCR X CTSW-009 and LVK X LCR-039 genotypes, which had 100% and 90% of dead plants respectively. On the other hand, it was verified that some genotypes were perfectly adapted, the 'Swingle' citrus tree rootstock, presented higher height and diameter associated with a very low mortality, other rootstocks besides the 'Swingle' citrus tree are promising for citrus cultivation of the state due to superior initial development and low mortality, such as the genotypes Cleo X TRBN - 245, Cleo X TRSW - 287, citrandarins 'Índio', 'San Diego' and 'Riverside', LRF X (LCR X TR) - 005 and lemon tree 'Cravo'.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-11-27T19:29:54Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ágabo Macêdo da Costa e Silva- 2014.pdf: 1890977 bytes, checksum: 8a4d7bcee9ab084556c93c3c72e6a9f8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2014-12-01T14:46:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ágabo Macêdo da Costa e Silva- 2014.pdf: 1890977 bytes, checksum: 8a4d7bcee9ab084556c93c3c72e6a9f8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-01T14:46:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ágabo Macêdo da Costa e Silva- 2014.pdf: 1890977 bytes, checksum: 8a4d7bcee9ab084556c93c3c72e6a9f8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Hepatitis C represents a public health problem worldwide. Hepatitis C virus (HCV) is classified into seven genotypes and many subtypes. Besides their epidemiological importance, these genotypes have influence on the response to hepatitis C treatment, as well as other factors related to the virus and its host, such as polymorphisms upstream of interleukin (IL) 28B locus. Despite the importance of these factors in the response to treatment of hepatitis C, there are no data regarding the subject in the Midwest Region of Brazil. The present study aimed to identify the genotypes of HCV among patients attended at a reference laboratory in Goiânia-GO, and also to assess response to treatment of patients infected with genotype 1 with pegylated interferon (PEG-IFN) and ribavirin (RBV), with emphasis on the polymorphism upstream of IL28B gene (rs 12979860). For HCV genotyping, a cross-sectional study was conduct in an anti-HCV positive patients in a reference laboratory in Goiânia-GO, during in a period of 10 years (2003 to 2012) (n = 1300). From January/2012 to December/2013 (n = 101), a cohort was conduct among patients infected with HCV genotype 1 treated with PEG-IFN and RBV in order to evaluate treatment response. Patients were interviewed and blood samples collected for detection of viral RNA by polymerase chain reaction (PCR) with primers complementary to the region 5’ noncoding (NC) of HCV. All HCV RNA positive samples were genotyped by line probe assay – LiPA, and the samples typed as 1a/1b, 2 and 4 were sequenced in the NS5B region of the viral genome. The analysis of single nucleotide polymorphism (SNP) rs12979860 C/T was performed by restriction fragment length polymorphism (RFLP). Of the 1300 samples tested for HCV RNA, 894 were positive. Among these, genotypes 1 (76.3%), 2 (1.9%), 3 (21.6%) and 4 (0.2%) were found. These data show the predominance of genotype 1, followed by 3 and 2, and support the results of other studies in Goiânia. In addition, genotype 4 was found in the studied population. Regarding to SNP rs12979860 C/T, the TC genotype was the most common (57.4%), followed by CC (23.8%) and TT (18.8%). The rate of sustained virologic response (SVR) was 28.7%, being higher in individuals with the CC genotype (54.2%) when compared to those with CT and TT genotypes (22.4% and 15.8%, respectively). These results indicate that analysis of SNP rs12979860 is an important predictor of SVR following PEG-IFN and RBV treatment in patients infected with HCV genotype 1 in our region. / A hepatite C representa um problema de saúde pública mundial. O vírus da hepatite C (HCV) é classificado em sete genótipos e vários subtipos. Além da importância epidemiológica, os genótipos desse vírus influenciam a resposta ao tratamento da hepatite C, assim como outros fatores relacionados ao vírus e ao hospedeiro, como o polimorfismo relacionado ao gene da interleucina (IL) 28B. Apesar da importância desses fatores na resposta ao tratamento da hepatite C, não existem dados sobre o tema na Região Centro-Oeste. O presente estudo teve como objetivos identificar os genótipos do HCV em pacientes atendidos em laboratório de referência em Goiânia-GO e avaliar a resposta ao tratamento com interferon peguilado (PEG IFN) e ribavirina (RBV) em portadores do genótipo 1, com ênfase no polimorfismo relacionado ao gene IL28B (rs 12979860). Foi realizado um estudo de corte transversal para genotipagem do HCV em pacientes anti-HCV reagentes atendidos em laboratório de referência em Goiânia-GO, em um período de 10 anos (2003 a 2012) (n = 1300). Entre janeiro/2012 e dezembro/2013 (n = 101), foi formada uma coorte de portadores do genótipo 1 do HCV submetidos ao tratamento da hepatite C com PEG IFN e RBV, para avaliação de sua resposta. Os pacientes foram entrevistados e amostras sanguíneas coletadas para detecção do RNA viral por reação em cadeia da polimerase (PCR) com iniciadores complementares a região 5’ não codificante (NC) do HCV. Todas as amostras RNAHCV positivas foram genotipadas por line probe assay – LiPA, e as tipadas como 1a/1b, 2 e 4 foram sequenciadas para a região NS5B do genoma viral. A análise do single nucleotide polymorphism (SNP) rs12979860 C/T foi realizada por restriction fragment length polymorphism (RFLP). Das 1300 amostras testadas para RNA-HCV, 894 foram positivas, sendo identificados os genótipos 1 (76,3%), 2 (1,9%), 3 (21,6%) e 4 (0,2%). Estes dados mostram o predomínio do genótipo 1, seguido do 3 e 2, e corroboram os de outros estudos realizados em Goiânia, com a adição do genótipo 4 na população estudada. Em relação ao SNP rs12979860 C/T, o genótipo TC foi o mais frequente (57,4%), seguido por CC (23,8%) e TT (18,8%). A taxa de resposta virológica sustentada (RVS) foi de 28,7%, sendo superior nos portadores do genótipo CC (54,2%) em relação aos genótipos TC e TT (22,4% e 15,8%, respectivamente). Estes resultados indicam que a análise do SNP rs12979860 é importante preditor de RVS ao tratamento com PEG IFN e RBV em pacientes infectados com o genótipo 1 do HCV em nossa região.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:56:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Haroldo.pdf: 2662749 bytes, checksum: eff5460b00701b479eafe3b4c0486090 (MD5) Previous issue date: 2011-01-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The study aimed to evaluate the performance of eight maize cultivars with characteristics for consumption on the green stage of maturation and verify the adaptability of upland ecosystems and wetlands in the environmental conditions of the cities of Manaus and Iranduba in Amazonas State. The experiments were conducted in a randomized complete block design with factorial arrangement 2 x 8 x 5 and four replications. The treatments were defined by eight maize varieties in two ecosystems and five harvest times during different stages of maturation. Variables were evaluated for agronomic and sensory characteristics as well as aspects of marketing. Data were subjected to analysis of variance and means were compared by Duncan test at 5% probability. In upland and lowland cultivars was no significant difference by F test at 5% probability, for productivity. The plant stand is presented in greater variety (BR 5110) 56875 pl ha-1 and lower in the hybrid (HTMV1) 43,611 pl ha-1 on land. In the lowland hybrid (HTMV1) had the lowest stand with 47,709 pl ha-1 and variety (BR 5110) with the largest booth 72,292 pl ha-1. The length of the spikes differed statistically by F test at 5% probability on firm ground, and the varieties (and Saracura Cativerde) at greater length 17.81 cm and 16.09, respectively. The number of commercial ears was significant by F test at 5% probability on firm ground, and the hybrids (AG 1051 and HTMV1) had the highest and lowest numbers of spikes 42,708 and 34,167, respectively. Floodplain, the results did not differ by F test at 5% probability, as the sweetness and texture. As for brix, tenderness, flavor and color differ statistically by F test at 5% probability. On land, the results were statistically different as to color and brix. The corn is an excellent crop for the state of Amazonas, which can be grown in lowland ecosystems and land, with options to use varieties and hybrids according to the technological level of the farmer. / O trabalho objetivou avaliar o comportamento de oito cultivares de milho com características para consumo no estádio verde de maturação e verificar a adaptabilidade aos ecossistemas de terra firme e várzea nas condições edafoclimáticas dos municípios de Manaus e Iranduba no Estado do Amazonas. Os experimentos foram conduzidos no delineamento experimental de blocos casualizados com arranjo fatorial 8 x 2 x 5 e quatro repetições. Os tratamentos foram definidos por oito cultivares de milho, em dois ecossistemas e cinco épocas de colheita realizadas em diferentes estádios de maturação. Foram avaliadas variáveis de aspectos agronômicos e organolépticos, bem como aspectos de características mercadológicas. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias dos tratamentos comparadas pelo teste de Duncan a 5% de probabilidade. Em terra firme e várzea, as cultivares não apresentou diferenças significativas pelo teste F a 5% de probabilidade, quanto à produtividade. O estande de plantas apresentou-se maior na variedade (BR 5110) 56.875 pl ha-1 e menor no híbrido (HTMV1) 43.611 pl ha-1 em terra firme. Na várzea o híbrido (HTMV1) apresentou o menor estande com 47.709 pl ha-1 e a variedade (BR 5110) o maior estande com 72.292 pl ha-1. O comprimento das espigas diferiu estatisticamente pelo teste F a 5% de probabilidade em terra firme, sendo as variedades (Saracura e Cativerde) com maior e menor comprimento 17,81 e 16,09 cm, respectivamente. O número de espigas comerciais foi significativo pelo teste F a 5% de probabilidade em terra firme, sendo que os híbridos (AG 1051 e HTMV1) apresentaram os maiores e menores números de espigas 42.708 e 34.167, respectivamente. Na várzea, os resultados não diferiram pelo teste F a 5% de probabilidade, quanto à doçura e textura. Quanto ao brix, a maciez, o sabor e a coloração diferiram estatisticamente pelo teste F a 5% de probabilidade. Em terra firme, os resultados diferiram estatisticamente quanto ao brix e a coloração. O milho verde é uma ótima opção de cultivo para o Estado do Amazonas, podendo ser cultivado em ecossistemas de várzea e terra firme, com opções de uso de variedades e híbridos de acordo com o nível tecnológico do agricultor.

O coronavírus bovino (BCoV) é classificado no grupo 2 do gênero Coronavirus da ordem Nidovirales, família Coronaviridae, causando diarréia em bezerros neonatos, processos respiratórios em bezerros não neonatos e disenteria em vacas adultas. No presente estudo, 203 amostras fecais de bezerros de 19 propriedades leiteiras nos Estados de São Paulo e Minas Gerais foram submetidas à prova de hemaglutinação/ inibição da hemaglutinação (HA/HI) para a detecção de coronavírus e a uma reação de PCR dirigida ao gene codificador da RNA-polimerase RNA-dependente dos coronavírus (PCR pol), sendo feita a comparação entre as duas técnicas através dos testes Kappa e J de Youden. Amostras positivas à PCR pol foram submetidas a uma reação de PCR para amplificação de um segmento de 488 pares de bases correspondentes à região hipervariável do gene codificador da subunidade S1 da proteína S, sendo os fragmentos submetidos a seqüenciamento de DNA para a reconstrução genealógica das amostras estudadas. Ainda, a presença de rotavírus foi pesquisada pela técnica de PAGE. Segundo a técnica de HA/ HI, 35,47% das amostras e 73,68% das propriedades rurais forma positivas para BCoV, enquanto que pela PCR pol 25,12% das amostras e 52,63% das propriedades rurais foram positivas para este vírus. A comparação entre as duas técnicas resultou valores de kappa de -0,048 para os resultados individuais e -0,08 em relação às propriedades rurais e J de Youden de -0,045 para os resultados individuais e -0,1 em relação às propriedades rurais, demonstrando baixa concordância entre as duas provas. A genealogia obtida por máxima parcimônia através de algoritmo heurístico e baseada em seqüências da região hipervariável do gene codificador da subunidade S1 da proteína S de 15 amostras de campo aqui estudadas, da amostra Kakegawa de coronavírus bovino utilizada como controle positivo e de 10 seqüências recuperadas dos GenBank revelou a existência de dois genotipos dentro desta espécie viral, sendo os dois genotipos encontrados entre amostras brasileiras. A identidade média de nucleotídeos entre as 15 amostras brasileiras foi de 98,34%, com similaridade média de aminoácidos de 98%. Amostras pertencentes ao genotipo 2 apresentaram uma deleção de 18 nucleotídeos/ 6 aminoácidos dentro da região correspondente ao domínio II da proteína S. A árvore de máxima parcimônia enraizada tendo bredavírus como grupo externo revelou que esta deleção ocorreu em um único momento na genealogia dos coronavírus bovinos. Rotavírus foi encontrado em 12,6% das amostras fecais individuais e 28, 57% das propriedades rurais pesquisadas. Estes resultados são os primeiros baseados em amostras brasileiras de coronavírus bovino e contribuem para a caracterização molecular do BCoV, para a predição da eficiência de imunógenos e para o encontro de marcadores moleculares úteis para estudos epidemiológicos continuados em relação às diarréias neonatais em bovinos. / Bovine coronavirus (BCoV) belongs to group 2 of the genus Coronavirus from the order Nidovirales, family Coronaviridae and causes diarrhea in newborn calves, respiratory diseases in non-newborn calves and dysentery in cows. In the present study, 203 stool samples of calves from 19 dairy farms from São Paulo and Minas Gerais States were submitted to hemagglutination/ hemagglutination inhibition test (HA/HI) to bovine coronavirus detection and a PCR assay targeted to the RNA-polymerase RNA-dependent gene of coronaviruses (PCR pol), the comparison between the two tests carried out with Kappa and Youden´s J tests. Samples positive to PCR pol were submitted to a PCR assay that amplifies a 488 base-pair fragment which corresponds to the hypervariable region of the gene coding for the S1 subunit of the S protein; the amplified fragments were submitted to DNA sequencing aiming the genealogic reconstruction of the studied samples. Rotavirus was surveyed with the PAGE test. The HA/ HI test resulted 35.47% of samples and 73.68% of farms positive to BCoV, while, according to PCR pol, 25.12% of the samples and 52.63% of the farms were positive to this virus. The comparison between the two tests produced a kappa value of -0.048 to individual results and -0.08 to the farms and Youden´s J value of -0.045 to individual results and -0.1 to the farms, showing low agreement between the two tests. Maximum parsimony genealogy with an heuristic algorithm based on sequences of the hypervariable region of the gene coding for the S1 subunit of the S protein from 15 field samples here studied, from the Kakegawa bovine coronavirus strain used as positive control and from 10 sequences retrieved from GenBank showed the existence of two genotypes in this viral species. Mean nucleotide identity between the 15 Brazilian samples was 98.34%, with mean amino acid similarity of 98%. Samples from genotype 2 showed a deletion of 18 nucleotides/ 6 amino acids inside the domain II region of the S protein. Rooted maximum parsimony tree with bredavirus as an outgroup revealed that this deletion has happened only once in bovine coronavirus genealogy. Rotavirus was found in 12.6 % of stool samples and 28.57% of the surveyed farms. These are the first results based on Brazilian strains of bovine coronavirus and contribute to molecular characterization of BCoV, to the prediction of the efficiency of immunogens and to the finding of molecular markers useful to continued epidemiologic surveys on newborn bovine diarrhea.

O objetivo deste estudo foi o isolamento de Toxoplasma gondii de ovinos e caprinos e posterior caracterização genotípica desses isolados. Amostras de soros ovinos (495) de 36 Municípios do Estado de São Paulo e de caprinos (143) de seis Municípios dos Estados da Bahia (10), Paraíba (12), Rio Grande do Norte (7) e São Paulo (114) foram testadas, através do Teste de Aglutinação Modificado (MAT&ge;25) à presença de anticorpos anti-T. gondii. Dos animais amostrados, 24,2% e 32,2% dos ovinos e caprinos respectivamente, apresentaram-se positivos com títulos que variaram de 25 a 3200 em ambas espécies. Dentre os ovinos houve associação (p<0,001) entre sexo, idade e sistema de produção com a presença de anticorpos anti-T. gondii. Os caprinos apresentaram associação entre idade, sistema de produção, e raça com a soropositividade. Para o isolamento do agente o bioensaio em camundongos foi realizado utilizando-se pool de tecidos de ovinos (cérebro, coração e diafragma) e caprinos soropositivos (cérebro, coração e diafragma e masseter). Dos 82 bioensaios realizados com amostras de ovinos, 16 isolados (19,5%) foram obtidos. Houve associação entre o título de anticorpos anti-T. gondii e o isolamento do agente (p<0,001) com maior quantidade de isolados obtidos de animais com títulos mais altos. Para a caracterização genotípica das amostras utilizou-se a análise de polimorfismo de comportamento dos fragmentos de DNA gerados por enzimas de restrição (RFLP) sobre produtos do locus SAG2 amplificados pela PCR, que as identifica em genótipos I, II e III. Amostras do tipo I (87,5% dos ovinos e 100 % dos caprinos) e do tipo III (12,5% dos isolados de ovinos) foram obtidas e não houve o encontro de isolados tipo II ou mistas. Nos tecidos dos animais com títulos de anticorpos superiores a 400, e dos quais não se obteve o isolamento do agente pelo bioensaio (21 amostras de ovinos), foi realizada a nested-PCR das amostras primárias (homogeneizado de tecidos), não sendo obtida nenhuma amplificação. Amostras do tipo III não causaram óbitos nos camundongos e as tipo I causaram óbitos em 51,0% e 83,4% dos isolados de ovinos e caprinos, respectivamente. Houve associação entre a sobrevida dos camundongos infectados com o genótipo I de caprinos e ovinos (p<0,001). / The aim of this study was to analyze the SAG2 locus of Toxoplasma gondii isolated from sheep and goats in order to determine the frequency of occurrence of the three different lineages (types I, II and III). Serum samples of sheep (495) from 36 counties in São Paulo State and goat (143) from six counties in States of Bahia (10), Paraíba (12), Rio Grande do Norte (7) and São Paulo (114) were analyzed by the modified agglutination test (MAT&ge;25) for the detection of antibodies anti-T. gondii. Occurrence of antibodies anti-T. gondii was 24.2% and 32.2% in sheep and goats, respectively. The titers varied from 25 to 3200 in both species. Among sheeps, association of seropositivity (p<0,001) with sex, age, production system and presence of antibodies anti-T. gondii was observed. Association was also observed between the frequency of seropositive goats and age, production system and breed. For T. gondii isolation, pool of tissues of each seropositive sheep (brain, heart and diaphragm) and goat (brain, heart, diaphragm and masseter) were bioassayed in mice. From a total of 82 bioassay performed with sheep samples, 16 isolates (19.5%) were obtained. Association between antibodies anti-T. gondii titers and isolation was observed (p<0.001). Considering the goats, 12 isolates (42.6%) were obtained from 26 bioassays. For the genotypic characterization (genotype I, II and III), the restriction fragment length polymorphism (RFLP) was performed on fragments of the locus SAG2 amplified by PCR. Samples of type I (87.5% from sheep and 100% from goats) and type III (12.5% from sheep) was observed. Neither type II nor mixed samples were observed. In tissues samples from animals with antibodies titers above 400 in which T. gondii was not isolated (21 sheep sample), nested-PCR was performed and no amplification was observed. Mortality was not observed in the mice infected by the isolates type III. The isolates of type I from sheep and goats, respectively, killed 51.0% and 83.4% of the infected mouse. Association was also observed between mortality rate in infected mice and genotype I of sheep and goat (p<0.001).

Apesar de o protozoário Toxoplasma gondii ser considerado a única espécie válida para o gênero, são reconhecidas três linhagens clonais, denominadas Tipo I, Tipo II e Tipo III, predominantes em países da Europa ocidental e Estados Unidos. Com a pesquisa de amostras deste parasito provenientes de outras regiões do mundo, como no caso do Brasil, várias outras configurações genotípicas diferentes das dos arquétipos mencionados acima vêm sendo encontradas. Neste trabalho, quarenta galinhas/galos (Gallus domesticus) de criação livre de oito propriedades rurais de áreas limítrofes ao Pantanal da Nhecolândia no estado do Mato Grosso do Sul foram eutanasiadas e amostras de sangue, cérebro e coração foram coletadas. O sorodiagnóstico foi realizado através do Teste de Aglutinação Modificado (MAT) e, com um pool de órgãos dos animais positivos, foi realizado bioensaio em camundongos. Foram obtidos, após o bioensaio, 11 isolados de T. gondii. O DNA foi extraído dos tecidos dos camundongos infectados e a tipificação dos isolados foi realizada utilizando 12 marcadores PCR-RFLP, genericamente denominados SAG1, 5´3´SAG2, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3. Vinte e sete galinhas (67,5%) foram sorologicamente positivas para T. gondii e 13 (32,5%) foram negativas. Das amostras soropositivas, 7 (25,9%) foram positivas na diluição 1:5, 3 (11,1%) em 1:10, 2 (7,4%) em 1:20, 3 (11,1%) em 1:320, 1 (3,7%) em 1:640, 3 (11,1%) em 1:1280, 2 (7,4%) em 1:2560, 4 (14,8%) em 1:5120 e 2 (7,4%) em 1:10240. Quanto à genotipagem, cinco genótipos foram revelados nos 11 isolados de galinhas de cinco propriedades do município de Aquidauana e uma propriedade do município de Rio Verde do Mato Grosso, incluindo um genótipo misto encontrado em um isolado (TgCkBr198) que demonstrou um complexo cujos padrões são uma combinação de 2 alelos observados em oito loci. Dois genótipos foram descritos pela primeira vez, considerando os 140 isolados de galinhas de diferentes regiões brasileiras avaliadas em estudos anteriores. Os resultados corroboram com estudos anteriores sobre os isolados de T. gondii no Brasil, confirmando sua diversidade e atipicidade. / Despite the protozoan Toxoplasma gondii is considered the only valid species for the genus, three clonal lineages are recognized, known as the Type I, Type II and Type III, which predominate in Western European countries and the USA. The search for samples of this parasite from other regions of the world, as in the case of Brazil, has revealed different genotypes other than the archetypes above mentioned. In this study, forty free range chickens (Gallus domesticus) of eight farms from areas belonging to the Pantanal Nhecolândia in the state of Mato Grosso do Sul were euthanized and samples of blood, brain and heart were collected. The serodiagnosis was performed using the technique of modified agglutination test (MAT) and a pool of organs of seropositive animals was used to perform the bioassay in mice. It was obtained 11 isolates of T. gondii. DNA was extracted from tissues of infected mice and characterization of isolates was performed using 12 PCR-RFLP markers, known generically SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, C29-2, L358, PK1, Apico and CS3. Twenty-seven chickens (67.5%) were serologically positive for T. gondii and 13 (32.5%) were negative. Among the seropositive samples, 7 (25.9%) were positive at 1:5 dilution, 3 (11.1%) in 1:10, 2 (7.4%) in 1:20, 3 (11.1%) at 1:320, 1 (3.7%) at 1:640, 3 (11.1%) in 1:1280, 2 (7.4%) in 1:2560, 4 (14.8%) on 1:5120 and 2 (7.4%) at 1:10240. With regard to genotyping, five genotypes were found within 11 isolates from chickens from five properties in the municipality of Aquidauana and one property of the municipality of Rio Verde of Mato Grosso, including a mixed genotype found in one isolate (TgCkBr198) that showed a complex pattern which is a combination of 2 alleles observed at eight loci. Two genotypes have been described for the first time, considering the 140 isolates from chickens in different Brazilian regions evaluated in previous studies. The results corroborate with previous studies on the isolates of T. gondii in Brazil, confirming their diversity and atypicality.

O protozoário flagelado Giardia duodenalis é um parasito intestinal que pode infectar uma ampla variedade de mamíferos, incluindo os humanos e os animais domésticos e selvagens. Devido à carência de informações a respeito da caracterização molecular de amostras de Giardia spp. no Brasil, o presente estudo teve como objetivo analisar 113 amostras de fezes positivas para Giardia spp. de origem humana e animal. Um segmento do gene que codifica a enzima glutamato desidrogenase (gdh) dos isolados provenientes de 37 humanos, 31 cães, 20 gatos, 12 bugios, cinco bezerros, três chinchilas, duas avestruzes, dois cachorros-do-mato e uma onça-pintada foi amplificado e seqüenciado. A análise da seqüência de nucleotídeos do gene gdh mostrou que estes isolados foram divididos em seis linhagens genéticas principais (Assemblages A, B, C, D, E, F). O genótipo AII foi identificado apenas nas amostras de humanos, enquanto o genótipo AI foi detectado nos isolados de origem animal (gato, bezerro, onça-pintada). Os isolados de Giardia spp. provenientes dos humanos, bugios, chinchilas e avestruzes foram caracterizados como pertencente ao genótipo BIV. Entretanto, os demais Assemblages foram identificados apenas em um grupo específico de hospedeiros. Assemblage C e D foram encontrados nas amostras de cães e cachorros-do-mato, Assemblage F nas amostras de gatos e Assemblage E nas amostras de bezerros. A caracterização molecular das amostras de Giardia spp. gera uma importante contribuição para o conhecimento da especificidade de hospedeiro dos diferentes genótipos. / The flagellated protozoan Giardia duodenalis is an intestinal parasite that can infect a broad variety of mammalian hosts, including humans and domestic and wild animals. Due the lack of information about the molecular characterization of Giardia spp. in Brazil, this study aimed to analyse 113 stool samples from human and animals, all positive to Giardia spp. A segment of the glutamate dehydrogenase gene (gdh) of isolates from 37 humans, 31 dogs, 20 cats, five calves, 12 wild monkeys, three chinchilas, two ostrichs, two crab-eating-foxes and one jaguar was amplified and sequenced. Nucleotide sequences analysis of gdh gene showed that these isolates could be divided into six main genetic lineage (Assemblages A, B, C, D, E, F). The genotype AII was identified only in human isolates, whereas genotype AI was detected in a variety of animals (cat, calf, jaguar). In adition, Giardia spp. isolates recovered from human, wild monkeys, chinchila and ostrichs were characterized as genotype BIV. However the other Assemblages identified were confined to restrict host species. Assemblages C and D were found in isolates from dogs and crab-eating-foxes, Assemblage F from cats and Assemblage E from calves. The molecular characterisation of Giardia spp. isolates has made a major contribution to our understanding of the host specificity of different genotypes.

Com o objetivo de avaliar o efeito de população de plantas (30.000, 60.000 e 90.000 plantas.ha -1 ), sob dois espaçamentos (0,40 e 0,80 m), sobre a produtividade de grãos de três genótipos (AG 1051, AG 7575 e DKB 911) de milho (Zea mayz L.) com arquiteturas foliares diferentes, foi conduzido experimento de campo em Piracicaba-SP (Departamento de Produção Vegetal, Universidade de São Paulo) no período de 20 de novembro a 10 de abril de 2001. Foi utilizado delineamento em blocos casualizados com três repetições. Em função dos resultados obtidos, pode-se concluir que: (i) em alta população (90.000 plantas.ha -1 ), a redução do espaçamento (de 0,80 m para 0,40 m) teve efeito positivo na produtividade de grãos no genótipo de arquitetura foliar aberta (AG 1051), devido a otimização de interceptação de luz, e (ii) até 60.000 plantas.ha -1 , independentemente do genótipo, a produtividade de grãos é crescente com o aumento da população de plantas. Com o aumento da população de plantas de 60.000 para 90.000 plantas.ha -1 , a produtividade de grãos: (a) aumenta no genótipo de arquitetura foliar ereta (DKB 911), (b) tende a estabilizar no genótipo de arquitetura semi-ereta (AG 7575), e (c) tende a estabilizar sob espaçamento reduzido (0,40 m), ou diminui sob espaçamento de 0,80 m no genótipo de arquitetura aberta (AG 1051). / With the purpose of evaluating the effect of plant population (30,000; 60,000 and 90,000 plants.ha -1 ), under two row widths (0.40 and 0.80 m), on grain yield of three maize (Zea mayz L.) genotypes (AG 1051, AG 7575 and DKB 911) with different leaf architecture, a field experiment was carried out in Piracicaba, São Paulo State, Brazil (Crop Science Department, University of São Paulo) between 20 th November to 10 th April 2001. The experiment was laid out in a randomized complete blocks design with three replicates. According to the results: (i) in high population (90,000 plants.ha -1 ), due the optimization of light interception, the reduction of row width (from 0.80 m to 0.40 m) increases grain yield in the opened leaf architecture genotype (AG 1051), and (ii) independently of genotype, up to 60,000 plants.ha -1 , the grain yield is crescent with increment of plant population. With the plant population increasing from 60,000 to 90,000 plants.ha -1 , the grain yield: (a) increases in the erect leaf architecture genotype (DKB 911), (b) presents a stabilization tendency in the semi-erect leaf architecture genotype (AG 7575), and (c) presents stabilization tendency under narrow row (0.40 m), and decreases under row width of 0.80 m in the opened leaf architecture genotype (AG 1051).

Foi realizada a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, através do teste de aglutinação modificado (MAT), em 68 amostras de soros de capivaras de seis municípios no estado de São Paulo. Anticorpos (MAT?25) foram encontrados em 51 (75%) capivaras examinadas. Dentre estas realizou-se o bioensaio em camundongos, com tecidos do cérebro, coração e língua, de 40 capivaras, sendo obtidos 36 isolados (90%). Não houve associação entre o número de isolados e idade das capivaras (p=0,21), sexo (p=0,58) ou tipo de criação (p=0,62), isto é, criadouros e vida livre, bem como a freqüência de isolamentos e os títulos de anticorpos (p=0,99). A análise de polimorfismo de comprimento dos fragmentos de DNA gerados por enzimas de restrição (RFLP) sobre produtos do locus SAG2 amplificados pela reação em cadeia pela polimerase (PCR) revelou que 20 isolados (55,5%) pertenciam ao genótipo I, 14 (38,9%) ao genótipo III e dois (5,6%) que apresentaram genótipo misto (tipos I e III). Não foi encontrado isolado tipo II. A proporção de isolados tipo I entre as capivaras de vida livre foi maior (p=0,049) do que entre as capivaras provenientes de criadouros. Por outro lado, entre as capivaras de criadouros, a proporção de isolados tipo III foi maior (p=0,041). A maioria dos isolados tipo I (12/20) causou óbito em todos os camundongos infectados e, em nenhum grupo com este isolado, 100% dos camundongos sobreviveram. A maioria dos isolados tipo III (8/14) não matou nenhum camundongo infectado. A freqüência de óbitos em camundongos com genótipo I (86%) foi maior do que o tipo III (44,9%) (p<0,001), enquanto a sobrevida dos camundongos com genótipo III foi significativamente maior que a dos camundongos com genótipo I (p<0,001). Foram encontrados cistos nos cérebros dos camundongos infectados em todos os 36 isolados. A análise genotípica também foi realizada diretamente dos tecidos de 35 das 36 capivaras (homogeneizados de tecidos) das quais houve isolamento pelo bioensaio, usando nestedPCR-RFLP no locus SAG2. Foram caracterizadas 22 amostras (62,8%), 21 delas idênticas aos dos isolados correspondentes. Em uma amostra genótipo misto foi obtido dos tecidos primários e tipo I no isolado. Os genótipos mistos foram confirmados pelo seqüenciamento de DNA dos produtos da nestedPCR obtidos das amostras primárias das capivaras. / Antibodies to Toxoplasma gondii were assayed by the modified agglutination test (MAT) in serum samples of 68 capybaras from six counties in São Paulo state, Brazil. Antibodies (MAT?25) were found in 51 (75%) capybaras examined. Tissues (brain, heart and tongue) of 40 of the seropositive capybaras were bioassayed in mice and 36 (90%) isolates were obtained. There was no statistical association between number of isolates and age (p=0.21), gender (p=0.58) and type of rearing (p=0.62), as well as no association with frequency of isolations and antibody titer distribution (p=0.99). Restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis in PCR-amplified SAG2 locus products revealed that 20 isolates (55.5%) were genotype I, 14 (38.9%) were genotype III and two (5.6%) were mixed genotypes (types I and III). Type II isolate was not found. The proportion of type I isolates in the group of wildlife capybaras was higher (p=0.049) than in the captive rearing group. On the other hand, the proportion of type III isolates was significantly higher in the captive rearing group (p=0.041). Most of the type I isolates (12/20) killed all infected mice and none of those groups had 100% of surviving mice. Most of the mice infected with genotype III isolate survived. The mortality rate in mice infected with genotype I (86%) was higher than the type III (44.9%) (p<0.001) and mice infected with type III isolates survived for longer periods than type I isolates (p<0.001). Tissue cysts were found in mice infected with all 36 isolates. Genotyping was also done directly from the tissue homogenates from the 35 of 36 capybaras using nested-PCR-RFLP analysis on the SAG2 locus. Twenty?two samples (62.8%) were characterized and in 21 the genotypes found were the same as those from the corresponding isolates. In one sample, mixed genotype was detected directly from the primary sample and type I from the mice isolate. The mixed genotype was confirmed by direct DNA sequencing of the nestedPCR products from the capybaras primary samples.