Avaliamos a capacidade de indução de migração, invasão e secreção de protease pelo peptídeo derivado da laminina, C16 (KAFDITYVRLKF, cadeia g1) em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico humano. Laminina g1 foi imunolocalizada no carcinoma adenóide in vivo e in vitro. Ensaio de ferida, em câmara bipartite e em vídeo microscopia (time-lapse) mostraram que C16 estimula migração em células CAC2. C16 também estimulou invasão em ensaio com câmaras bipartites cobertas com Matrigel. Invasão depende de atividade de protease. Zimografia mostrou que C16 aumentou secreção de MMPs 2 e 9. Diferentes vias de sinalização podem estar relacionadas com os efeitos de C16. Immunoblot revelou que C16 aumentou a fosforilação de AKT e ERK. Para o estudo de possíveis receptores do peptídeo, preparações de membrana foram passadas em colunas de afinidade com C16 acoplado. Banda de 40kDa foi eluída e analisada por espectrometria de massa (LC-MS/MS) que identificou a cadeia a1 do colágeno. O fragmento de colágeno eluído poderia ser parte de um complexo protéico envolvendo C16. Integrinas são receptores de colágeno e candidatas a fazerem parte desse complexo. Células CAC2 expressaram as integrinas av, a5, b3 and b1. Silenciamento dessas integrinas promoveu redução da migração e secreção de protease induzidas por C16. Sugerimos que C16 estimularia migração, invasão e secreção de protease em células de carcinoma adenóide cístico através de integrinas a5b1 e avb3. O sinal gerado por C16 seria transduzido pelas vias AKT e ERK1/2. / We studied induction of migration, invasion and protease activity by laminin-derived peptide C16 (KAFDITYVRLKF, g1 chain) in a cell line (CAC2) from adenoid cystic carcinoma. Laminin g1 was immunolocalized in adenoid cystic carcinoma in vivo and in vitro. C16 increased migratory activity of CAC2 cells, as shown by monolayer wound assay, Transwell migration assay and time-lapse video microscopy. This peptide also stimulated cell invasion in Transwell chambers coated with Matrigel. Invasion depends on protease activity. Zymograms showed that C16 increased secretion of MMPs 2 and 9. Different signaling pathways could be related to C16 regulation in CAC2 cells. Immunoblot showed that C16 increased phosphorylation of both AKT and ERK compared to controls. To study putative receptors of this peptide we used affinity chromatography. Membrane preparations were run through C16-affinity columns. A 40kDa band was eluted and analyzed by mass spectrometry (LC-MS/MS) identifying a collagen a1 chain. The collagen fragment eluted could be part of a protein complex involving C16. This protein complex may include integrins, which are collagen receptors. CAC2 cells exhibited av, a5, b3 and b1 integrins. siRNA knockdown of these integrins inhibited both C16-induced migration and protease activity. We propose that C16 increases migration, invasion and protease activity of a human salivary gland adenoid cystic carcinoma cell line through a5b1 and avb3 integrins. The signal generated by C16 is transduced by AKT and ERK1/2 signaling pathways.

Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T16:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bonfitto_VeraLuciaLeite_D.pdf: 2371427 bytes, checksum: 9766d47098dc3a0a8725d3d05732303e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A angiogênese induzida pelo tumor é o resultado não somente do balanço entre indutores e inibidores da angiogênese, mas também da demanda metabólica tumoral. Nos carcinomas salivares com diferenciação mioepitelial, a densidade microvascular (DMV) é mais baixa do que nos carcinomas sem tal diferenciação. Apesar do fenótipo antiangiogênico da célula mioepitelial, as razões para essa associação ainda não foram completamente esclarecidas. Com a finalidade de aumentar o conhecimento sobre os fenômenos envolvidos na vascularização de carcinomas salivares, analisamos a DMV em tumores de diferentes tipos e graus histológicos. Além disso, em carcinomas adenóides císticos (CAC) com transformação para alto grau (CAC-TAG) analisamos a expressão de proteínas relacionadas ao metabolismo celular e a DMV entre áreas convencionais e transformadas. Estes achados foram também comparados com aqueles encontrados no CAC clássico. Material e Métodos: Em 42 carcinomas salivares com diferenciação mioepitelial e em 56 sem tal diferenciação, a vascularização tumoral foi avaliada através da DMV em lâminas coradas pelo CD34 (marcador pan-endotelial) e pelo CD105 (marcador de neoangiogênese). Além disso, em 7 casos de CAC-TAG e em 18 CACs foram examinadas as expressões dos marcadores relacionados ao metabolismo celular: transportador de glicose transmembrana (GLUT1) e antígeno mitocondrial (AMT), e do Ki- 67 (para análise do índice de proliferação). Resultados: Somente a DMV-CD105 foi significantemente diferente entre os diferentes subgrupos de tumores. Os tumores de alto grau apresentaram DMV-CD105 significantemente aumentada em relação aos de baixo grau. Os carcinomas com diferenciação mioepitelial e o carcinoma de células acinares mostraram DMV-CD105 semelhantes. Nos CAC-TAG, o componente transformado caracterizava-se pela perda da camada mioepitelial e índice aumentado de Ki-67. As áreas convencionais do CAC-TAG e o CAC clássico foram negativas para GLUT1 na maioria dos casos (83,3% e 81,3%, respectivamente) e exibiam expressão baixa ou ausente de AMT (100% e 66,7% dos casos respectivamente). Em contraste, as áreas transformadas do CAC-TAG exibiam aumento da expressão de GLUT1 (50% dos casos) e de AMT (100%). No CAC-TAG, comparando a DMV entre áreas convencionais e transformadas não se notou alteração significante. Conclusões: Nos carcinomas salivares, as células mioepiteliais não aparentam desempenhar papel crucial na vascularização tumoral, a qual é influenciada por fatores não necessariamente relacionados à demanda metabólica e progressão tumoral. A correlação da neoangiogênese com grau histológico tumoral sugere que a agressividade do carcinoma salivar pode ser um dos fatores indutores, embora por mecanismos ainda não esclarecidos / Abstract: Tumor-induced angiogenesis is not only determined by the net balance between inductors and inhibitors but also by factors related to tumor metabolic demand. Salivary carcinomas with myoepithelial component have been reported to have a lower microvascular density (MVD) than others without such cells. Despite the anti-angiogenic phenotype of the myoepithelial cells, the reasons for this association remain unclear so far. To broaden our understanding of phenomena involved in vascularization of salivary carcinomas we analyzed the MVD in tumors of different histological types and grade. In addition, in adenoid cystic carcinomas (ACC) with high-grade transformation (ACC-HGT), the expression of proteins linked to cellular metabolism as well as MVD was compared between conventional and HGT areas. We also compared the findings with ordinary ACC. Material and Methods: In 42 salivary carcinomas with myoepithelial differentiation and 56 without, tumor vascularization was assessed by measuring MVD in CD34 (pan-endothelial marker) and CD105 (neoangiogenesis marker) stained sections. In addition, in seven cases of ACC-HGT and in 18 ACCs the expressions of GLUT1, mitochondrial antigen (MTA) and Ki-67 (for evaluation of proliferation index) were also examined. Results: Only CD105-MVD was significantly different among the different tumor subgroups. High-grade tumors showed significantly higher CD105-MVD. Carcinomas with myoepithelial differentiation and acinic cell carcinomas exhibited similar CD105-MVD. In ACC-HGT, loss of myoepithelial layer was found only in the HGT component, which also showed higher Ki-67 index. Conventional areas of both ACC-HGT and ACC were negative for GLUT1 in most cases (83.3% and 81.3%, respectively) and exhibited low or no expression of MTA (100% and 66.7% of cases respectively). In contrast, the HGT component presented increased expression of both proteins (GLUT1+ in 50% of cases; MTA+ in 100%). MVD did not differ significantly between conventional and HGT components. Conclusions: In salivary carcinomas, myoepithelial cells do not appear to play a pivotal role in tumor vascularization, which is influenced by factors not necessarily related to metabolic demand and carcinoma progression. The correlation between tumor degree and neoangiogenesis (MVD-CD105) suggests that carcinoma aggressiveness may be one of the inductors but the mechanisms remain to be clarified / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Kleber Fernando Pereira.pdf: 1118848 bytes, checksum: 4671bfd9ffd403997392e07dda224e2d (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / The raccoon (Procyon cancrivorus) is a wild carnivore, reaching one meter in length including the tail, and weigh up to 10 kg. Known as raccoon or mouse naked hand washer has the peculiarity to dive in the water everything she eats. It has nocturnal and crepuscular, terrestrial and arboreal climber, a resident of shrub areas, preferably near water courses, is a good swimmer with great ability to dig, climb and is living alone. This thesis has generated the production of two articles. In the first article, entitled "Origin and anatomical distribution of the ischiatic nerve of raccoon", it was proposed to study the anatomy of the ischiatic nerve of raccoon in order to build morphological basis of this nerve with the aim of comparative neurology, and thus provide necessary support especially for the practices used in clinical medicine and surgery. The ischiatic nerve of the raccoon comes from the ventral ramus of the sixth and seventh nerves lumbar and first sacral nerve, resembling the origin of the guinea pig. Leaves the pelvic cavity through the greater ischiatic foramen, presenting themselves surrounded by the superficial gluteal muscles, biceps femoris and caudal crural abductor, this path similar to the dog and is distributed to the gluteus biceps, gluteus medius, gluteus deep, as well as observed in goats Saanen, and quadratus femoris muscles twin, resembling in dog, cat and pig, biceps femoris, semitendinosus, semimembranosus, observed in all specimens analyzed and adductor magnus, only observed raccoon. In all specimens are compared, the ischiatic nerve ends by bifurcating into the tibial and common peroneal nerve. In the second article, entitled "Morphological Aspects of the salivary glands of crab-eating raccoon (Procyon cancrivorus)" were described morphological aspects of salivary glands and their ducts located in Procyon cancrivorus and compare with literature data on the morphology of domestic and wild animals such as dogs, cats, skunks and raccoons. The salivary glands of the raccoon are formed by the parotid, mandibular, sublingual and zygomatic. The parotid gland shows irregular triangular shape and mandibular rounded contour is observed surrounded by a fibrous capsule. The sublingual is divided into two parts: a caudal part which lies in the region occiptomandibular the digastric muscle and the rostral part lies between the mucous membrane of the mouth and mylohyoid muscle with its respective duct. The zygomatic gland is small and rounded, situated in the rostral part of the pterygopalatine fossa. The anatomical knowledge of the origin and distribution of the ischiatic nerve and the morphology of the salivary glands when compared with bare hand domestic and wild animals, provides contributions to medicine and surgery in wild animals and for future studies on the general biology of the species. / O mão-pelada (Procyon cancrivorus) é um carnívoro silvestre, podendo chegar a 1 metro de comprimento incluindo a cauda, e pesar até 10 kg. Conhecido como guaxinim, mão-pelada ou rato lavador têm a peculiaridade de mergulhar na água tudo o que come. Possui hábito noturno e crepuscular, escalador arborícola e terrícola, habitante de áreas arbustivas, preferencialmente próximas a cursos de água, é um bom nadador com ótimas habilidades para cavar, escalar e tem vida solitária. A presente tese gerou a produção de dois artigos. No primeiro artigo, Origem e distribuição anatômica do nervo isquiático de mão-pelada , propôs-se estudar a anatomia do nervo isquiático de mão-pelada, a fim de assentar bases morfológicas deste nervo visando à neurologia comparativa, e assim fornecer subsídios necessários especialmente para as práticas utilizadas nas clínicas médica e cirúrgica. O nervo isquiático do mão-pelada origina-se do ramo ventral do sexto e sétimo nervos lombares e primeiro nervo sacral, assemelhando-se com a origem em preá. Deixa a cavidade pélvica através do forame isquiático maior, apresentando-se envolvido pelos músculos glúteo superficial, bíceps femoral e abdutor caudal crural, trajeto este semelhante com o cão e distribui-se para os músculos glúteo bíceps, glúteo médio, glúteo profundo, assim como observado em caprinos da raça Saanen, músculos quadrado femoral e gêmeo, assemelhando-se em cão, gato e suíno, músculos bíceps femoral, semitendíneo, semimembranáceo, observado em todos os espécimes analisadas e adutor magno, verificado apenas em mão-pelada. Em todos os espécimes comparados, o nervo isquiático termina bifurcando-se em nervo tibial e fibular comum. No segundo artigo, Morphological aspects of the salivary glands of crab-eating racoon (Procyon cancrivorus) foram descritos os aspectos morfológicos das glândulas salivares e a localização dos seus ductos em Procyon cancrivorus, e comparar com dados literários sobre a morfologia de animais domésticos e silvestres, como cão, gato, gambás e quatis. As glândulas salivares do mão-pelada são formadas pelas glândulas parótida, mandibular, sublingual e zigomática. A glândula parótida apresenta formato irregularmente triangular e a mandibular observa-se contorno arredondado circundada por uma cápsula fibrosa. A sublingual se divide em duas partes: uma parte caudal que se situa na região occiptomandibular do músculo digástrico e a parte rostral situa-se entre a túnica mucosa da boca e o músculo milo-hióideo com seu respectivo ducto. A glândula zigomática é pequena e arredondada, situada na parte rostral da fossa pterigopalatina. O conhecimento anatômico da origem e distribuição do nervo isquiático e da morfologia das glândulas salivares do mão-pelada, quando comparado com animais domésticos e silvestres, oferece contribuições para a clínica médica e cirúrgica em animais silvestres e para futuros estudos sobre a biologia geral da espécie.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:21:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao cintia f goncalves odontologia 2009.pdf: 430474 bytes, checksum: f21b41a1da7080f7f0755bb0019a8531 (MD5) Previous issue date: 2009-05-22 / Aims: Investigate the prognostic significance of cellular proliferation indexes and mucosecretional activity in Mucoepidermoid Carcinoma (MEC) of oral cavity minor salivary glands using the immunoexpression of the protein Ki-67 and the glycoprotein MUC1 in young people and adults, by correlating these markers to clinical and pathological parameters. Material and methods: From 1987 to 2007, 35 cases of MEC were diagnosed in minor salivary glands. Demographic clinical data were obtained from clinical records, the microscopic diagnosis was revisited and the specimens were reclassified in terms of histologic grading, according to the system used by Batsakis & Luna (1990). Qualitative and quantitative analyses of the expression of Ki-67 protein and MUC1 glycoprotein, obtained through immunohistochemistry, were correlated to the variables: age, gender and histologic grading. Results: The cases of MEC (n=35) were more frequently found in people over thirty (60%), with predilection for females (1.7:1) and occurred most frequently in the hard palate (54.3%). Of the cases studied, 42.9% were low grade, 37.1% intermediate and 20% high grade. A greater expression of Ki-67 was found for adults while the greater expression for young people was MUC1, although neither result was statistically significant (Ki-67 / P=0.44 e MUC1 / P=0.5). In addition no prognostic relation was seen between male and female, despite the greater expression of both markers for males (Ki-67 / P=0.58; MUC1 / P=0.4). In terms of histologic grading intermediate and high grade tumors presented a greater expression for both markers, but without any statistical significance (Ki-67 / P=0.18; MUC1 / P=0.6). Conclusions: MEC in minor salivary glands could present a tendency of lesser aggressiveness in younger patients when compared to adults; in females when compared to males, and in tumors of low histologic grade when compared to those of intermediate or high grade. Furthermore, this tumor may have a tendency to higher mucossecretory activity in young than in adults, in males than in females and in intermediate and high grade tumors. / Objetivos: Investigar a significância prognóstica dos índices de proliferação celular e da atividade mucossecretora no Carcinoma Mucoepidermóide (CME) de glândulas salivares menores de cavidade oral através da imunoexpressão da proteína Ki-67 e da glicoproteína MUC1 em indivíduos jovens e adultos, correlacionando-os aos parâmetros clínico-patológicos. Material e métodos: De 1987 a 2007, foram diagnosticados 35 casos de CME em glândulas salivares menores. Dados clínicos e demográficos foram obtidos dos prontuários, diagnóstico microscópico revisitado e os espécimes foram reclassificados, quanto à gradação histológica. Análises qualitativas e quantitativas da expressão da proteína Ki-67 e da glicoproteína MUC1, obtidas por imunoistoquímica, foram correlacionadas às variáveis: idade, gênero e gradação histológica, visando suas implicações prognósticas. Resultados: Os casos de CME (n=35) foram mais freqüentes em indivíduos acima dos 30 anos (60%), com predileção para o gênero feminino (1,7:1). O palato duro foi o sítio de maior ocorrência (54,3%). 42,9% foram de baixo grau; 37,1% intermediário e 20% alto grau. Foi observada uma maior expressão de Ki-67 para os adultos e de MUC1 para os jovens, embora, com resultados estatisticamente não significantes (Ki-67 / P=0,44 e MUC1 / P=0,5). Além disso, não foi observada relação prognóstica entre o gênero masculino e feminino, apesar da maior expressão de ambos marcadores para o gênero masculino (Ki-67 / P=0,58; MUC1 / P=0,4). Quanto à gradação histológica os tumores de grau intermediário e alto grau apresentaram maior expressão para ambos marcadores, embora, sem significância estatística (Ki-67 / P=0,18; MUC1 / P=0,6). Conclusões: O CME em glândula salivar menor pode apresentar tendência à menor atividade de proliferação celular no paciente jovem do que no adulto; no gênero feminino do que no gênero masculino, e em tumores de baixo grau histológico do que intermediário e alto grau. Além disso, este tumor pode apresentar tendência a maior atividade mucossecretora no indivíduo jovem que no adulto, no gênero masculino que no feminino e em tumores de intermediário e alto grau que em tumores de baixo grau histológico.

A doença renal crônica (DRC) gera manifestações orais e alterações salivares nos pacientes, entretanto poucos estudos avaliaram os efeitos desta doença nas glândulas salivares. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da nefropatia crônica experimental na morfologia, metabolismo, estresse oxidativo e concentrações iônicas nas glândulas parótida (PA) e submandibulares (SM) de ratos. A nefropatia crônica experimental foi induzida pelos 5/6 de nefrectomia (grupo DRC) e os resultados foram comparados com os grupos Sham e Controle no tempo experimental de 12 semanas. Foram avaliados os pesos corpóreos iniciais e finais, níveis séricos e urinários de ureia e creatinina, a depuração de creatinina e excreção proteica urinária. A morfologia do córtex renal foi avaliada pela contagem de glomérulos em 30 campos x200 de aumento por grupo, além disso, foram avaliadas a presença de glomeruloesclerose e fibrose intersticial no grupo DRC. Nas glândulas PA e SM, foi realizada contagem de ductos em 30 campos x400 de aumento por grupo e avaliação de fibrose e de glicogênio no parênquima glandular. A análise metabólica avaliou os efeitos da DRC e estímulos simpáticos e parassimpáticos da salivação nos fluxos metabólicos glicolítico, oxidativo e anaplerótico utilizando infusões com [U-13C]Glicose ou [1,6-13C2]Glicose, [2-13C]Glicose e [U-13C]Ácidos graxos, e espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) de próton (1H) e carbono 13 (13C) em alta resolução de extratos glandulares como técnica de detecção de incorporação de 13C em metabólitos intermediários. Atividades enzimáticas avaliadas foram: hexoquinase [HK], fosfofrutoquinase-1(PFK-1), piruvato quinase (PK), lactato desidrogenase (LDH), glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD), amilase, peroxidase e catalase. Além disso, foram quantificados os conteúdos de malondialdeído [MDA], glicogênio e concentrações iônicas de cálcio, fósforo e sódio. Foram observadas diminuições significativas dos pesos corpóreos finais, aumentos significativos das concentrações séricas e diminuições das concentrações urinárias de ureia e creatinina, diminuição da depuração de creatinina e aumento da excreção proteica no grupo DRC comparado aos grupos Controle e Sham. Na avaliação do córtex renal encontramos diminuição significativa da contagem glomerular, infiltrado inflamatório, atrofia tubular, glomeruloesclerose e fibrose intersticial. Na avaliação histológica glandular foi observado aumento significativo da contagem de ductos e diminuição de glicogênio na glândula SM. Na análise metabólica observamos a prevalência do fluxo glicolítico nas glândulas salivares. O estímulo salivar promoveu aumentos significativos na razão 12C-Lactato/12C-Alanina nos grupos Controle e Sham, com exceção do grupo DRC PA, onde em repouso se observou um aumento, comparando com os grupos Sham e Controle. No grupo DRC PA foram observadas diminuições significativas dos níveis de 12C-Alanina, 12C-Creatina e 12C-Glicose sem estímulo e aumento de 12C-Acetato com estimulo. No DRC SM detectaram-se aumento dos níveis de 12C-acetato e diminuição significativa da relação 13C3-Lactato/13C3-Acetato pós-estímulo indicativos de inibição do metabolismo oxidativo. Estas alterações nos níveis de metabólitos e suas razões, bem como nos níveis de enriquecimento 13C, denotam alterações profundas a nível metabólico nas glândulas salivares devido a DRC. Nas análises enzimáticas foram encontradas na glândula PA diminuições significativas das atividades da PFK-1 e LDH em relação ao grupo Controle e aumentos significativos da peroxidase e catalase comparado aos grupos Controle e Sham. Na glândula SM foi observada diminuição significativa na atividade enzimática da PFK-1 comparado ao grupo Controle. Além disso, foram observados aumentos significativos do conteúdo de MDA nas glândulas PA e SM e aumento significativo da concentração de sódio na glândula SM comparado aos grupos Controle e Sham. As modificações estruturais, metabólicas, oxidativas e iônica evidenciam a disfunção glandular na DRC e podem estar associadas às alterações salivares que caracterizam a doença. / Chronic kidney disease (CKD) promotes oral manifestations and salivary changes in patients, but few studies have evaluated the effects of this disease in the salivary glands. The aim of this study was to evaluate the effects of experimental chronic nephropathy in morphology, metabolism, oxidative stress and ionic concentrations in parotid (PA) and submandibular glands (SM) of rats. Experimental chronic nephropathy was induced by 5/6 nephrectomy (CKD group) and the results were compared with the Sham and Control groups at 12 weeks experimental period. The initial and final body weights, serum and urinary levels of urea and creatinine, creatinine clearance and protein excretion were evaluated. The morphology of the renal cortex was assessed by counting glomeruli in 30 fields x200 magnification per group, moreover, the presence of glomerulosclerosis and interstitial fibrosis in CKD group were also evaluated. The PA and SM histological evaluation was made by ducts count in 30 fields x400 magnification per group and assessment of fibrosis and glycogen in the glandular parenchyma. Metabolic analysis measured the effects of CKD and sympathetic and parasympathetic stimulation of salivation in glycolytic, oxidative and anaplerotic metabolic fluxes using infusions with [U-13C]Glucose or [1,6-13C2]Glucose, [2-13C]Glucose and [U-13C]Fatty acids, using high resolution proton (1H) and carbon 13 (13C) nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy of glandular extracts as detection technique of 13C incorporation in intermediary metabolites. Enzyme activities were measured: hexokinase [HK], 1-phosphofructokinase (PFK-1), pyruvate kinase (PK), lactate dehydrogenase (LDH), glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PD), amylase, peroxidase and catalase. Furthermore, the malondialdehyde [MDA], glycogen content and calcium, phosphorus and sodium ionic concentrations were quantified. Significant decreases of final body weights, significant increases in serum concentrations and decreases in urinary concentrations of urea and creatinine, decreased creatinine clearance and increased protein excretion were observed in CKD group comparing with the Control and Sham groups. In the evaluation of the renal cortex, a significant decrease in glomerulus count, inflammatory infiltration, tubular atrophy, glomerulosclerosis and interstitial fibrosis were found. In glandular histological evaluation was observed a significant increase in the ducts count and reduced glycogen content in SM gland. Metabolic analysis revealed the prevalence of glycolytic flux in the salivary glands. The salivary stimulus promoted significant increases of 12C-Lactate/12C-Alanine ratio in the Control and Sham groups, except the DRC PA group, which at rest had an increase of the ratio compared to the sham and control groups. In DRC PA group significant decreases in the levels of 12C-Alanine, 12C-Creatine and 12C-Glucose without stimulation and increase of 12C-Acetate with stimulus were observed. In CKD SM were detected increased levels of 12C-acetate and significant decrease of the 13C-Lactate/13C-Acetate indicative of post-stimulus inhibition of oxidative metabolism. These changes in levels of metabolites and their ratios, as well as the enrichment levels 13C denote major changes at the metabolic level in salivary glands due to DRC. In the enzymatic analyzes, at DRC PA gland were found significant decreases of PFK-1 and LDH activities compared to the Control group and significant increases of peroxidase and catalase compared to control and Sham groups. In DRC SM gland was observed a significant decrease in the enzymatic activity of PFK-1 compared to Control group. In addition, significant increases in MDA content in PA and SM and significant increase in sodium concentration were observed in the SM compared to the control and Sham groups. Structural, metabolic, oxidative stress and ionic changes demonstrate the occurrence of glandular dysfunction in CKD, which might be associated with the salivary changes that characterize the disease.

Orientador: Solange Maria de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:01:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pontual_MariaLuizadosAnjos_D.pdf: 19820473 bytes, checksum: dbd5a33178ca3a999b3af5968d746de7 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Avaliou-se o efeito radioprotetor do selenito de sódio nas células secretoras das glândulas submandibulares de ratos, por meio da análise ultraestrutural. Foram utilizados 57 ratos subdivididos em quatro grupos experimentais: controle, irradiado, selenito de sódio e selenito de sódio/irradiado. Os animais, pertencentes aos grupos irradiado e selenito de sódio/irradiado, foram submetidos a 15 Gy de radiação gama na região de cabeça e pescoço. Nos animais correspondentes aos grupos selenito de sódio e selenito de sódio/irradiado foi administrado 0,5 mg/kg de peso de selenito de sódio por via intraperitonial 24 horas antes da irradiação e nos grupos controle e irradiado, injetou-se solução salina. As glândulas submandibulares foram removidas após 4, 8, 12, 24, 48 e 72 horas da irradiação. Os resultados mostraram que a radiação causou danos, desde o primeiro tempo, nas células secretoras, sendo maior para as células serosas. Os danos intensificaram-se até o período de 12 horas, com início do processo de reparo no tempo de 24 horas, sem recuperação completa nos últimos tempos avaliados. O grupo selenito de sódio também apresentou alterações celulares nos tempos estudados, porém com menor dano em relação ao causado pela radiação. Foram observados vacuolização, lise de inclusões citoplasmáticas e alterações nucleares. O grupo selenito de sódio/irradiado apresentou maior semelhança com o grupo controle que os outros grupos tratados durante todos os tempos estudados. Foi concluído que, apesar das alterações observadas no grupo selenito de sódio, o selenito de sódio possui ação radioprotetora nas células secretoras das glândulas submandibulares / Abstract: The radioprotective effect of sodium selenite in the secretory cells of submandibular glands of rats was assessed by ultrastructural analysis. A total of 57 rats were used, which were divided into four experimental groups: control, irradiated, sodium selenite and sodium selenite/irradiated. The animals belonging to the irradiated and sodium selenite /irradiated groups were submitted to 15 Gy of gamma radiation at the head and neck. The animals in the sodium selenite and sodium selenite/irradiated groups received intraperitoneal injections of sodium selenite, 0.5mg/kg of body weight, at 24 hours before irradiation; the control and irradiated groups received injection of saline solution. The submandibular glands were removed at 4, 8, 12, 24, 48 and 72 hours after irradiation. The results demonstrated that the radiation induced damages to the secretory cells, especially the serous cells, since the first period. The damages were increased up to the 12- hour period, with onset of the repair process at 24 hours, without complete recovery at the last periods. The sodium selenite group also presented cellular alterations in the study periods, yet with less damage compared to that caused by radiation. There was vacuolization, lysis of cytoplasmic inclusions and nuclear alterations. The sodium selenite/irradiated group was more similar to the control group than the other groups treated at all study periods. It was concluded that, despite the alterations observed in the sodium selenite group, the sodium selenite has a radioprotective action on the secretory cells of submandibular glands / Doutorado / Radiologia Odontologica / Doutor em Radiologia Odontológica

Mosquitos são os mais importantes vetores de patógenos humanos, transmitindo um amplo espectro de doenças infecciosas emergentes e reemergentes. Nesse cenário, o mosquito Aedes aegypti está entre as espécies mais relevantes. No presente estudo investigamos as atividades do extrato de glândula salivar (EGS) desse mosquito vetor na biologia das células dendríticas e dos linfócitos T. Nossos dados revelam que o EGS não interfere na diferenciação, maturação e função de células dendríticas murinas. Entretanto, componentes salivares desse mosquito possuem um efeito direto sobre linfócitos. O mecanismo de ação do EGS envolveu a apoptose de células T naïve, enquanto células de memória foram mais resistentes a essa atividade. Uma molécula com peso molecular acima de 400 kDa é provavelmente a responsável por esse efeito. Em conjunto, os resultados gerados por esse trabalho contribuem com a elucidação dos efeitos biológicos da saliva de Ae. aegypti na imunidade de seus hospedeiros e, conseqüentemente, seu papel na transmissão de doenças. / Mosquitoes are the most important vectors of human pathogens, transmitting a wide range of emerging and re-emerging infectious diseases. In this scenario, Aedes aegypti is a relevant mosquito species. In the present study, we have investigated the activities of the salivary gland extract (SGE) of this mosquito vector on the dendritic cell and T lymphocyte biology. Our data reveals that the SGE does not interfere on the differentiation, maturation and function of murine dendritic cells. However, salivary components of these mosquitoes have a direct effect on lymphocytes. The mechanism of action of SGE involved apoptosis of naïve T cells, while memory cells were more resistant to this activity. A molecule with molecular weight above 400 kDa is likely responsible for this effect. .Taken together, the results generated by this work contribute to the understanding of the biological effects of Ae. aegypti saliva on the host and, consequently, its role on the transmission of diseases.

A doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) é uma das maiores causas de mortalidade e morbidade pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas. A DECH, em sua manifestação crônica (DECHc), ainda não tem sua fisiopatologia totalmente esclarecida; entretanto, o envolvimento do sistema imunológico, por meio de respostas imunes inatas e adaptativas é bem estabelecido na literatura. A DECHc afeta múltiplos órgãos, incluindo as glândulas salivares, o que tem, como causa imediata, a xerostomia. Essas alterações são largamente desconhecidas e sub-relatadas. Assim, esse estudo indagou se o sintoma de xerostomia na DECHc é decorrente de alterações morfológicas e funcionais das glândulas salivares. Para responder essa pergunta analisamos de forma qualitativa e por meio da morfometria, espécimes de biopsias de glândulas salivares labiais de pacientes com DECHc e com sintoma de xerostomia. Foram utilizados como controles, espécimes de biopsias de glândulas salivares de pacientes diagnosticados com Síndrome de Sjögren (SSp) (que é um modelo clássico de xerostomia) e de pacientes com líquen plano oral (LPO) (cujas manifestações clínicas orais podem se assemelhar às da DECHc) e queixa de xerostomia. Também foram analisadas, por meio de ensaio multiplex, as citocinas relacionadas à resposta imune Th17 (importante via imunológica na patogenia da DECHc) na saliva de 21 pacientes de DECHc, 27 de SSp, 10 de LPO e 15 voluntários saudáveis. Os principais achados morfológicos nas glândulas salivares dos pacientes de DECHc foram a extensa fibrose, fibroplasia periductal, atrofia ductal e acinar; alterações vasculares representadas pela congestão e formação de trombos hialinos; e infiltrado inflamatório intersticial difuso de aspecto leve a moderado. As glândulas salivares de SSp, entretanto, apresentaram um infiltrado inflamatório na forma de focos de linfócitos ao redor dos ductos excretores de intensidade moderada a severa; os ductos excretores apresentaram-se atróficos, ectásicos, exibindo metaplasia oncocítica e fibroplasia periductal; as alterações vasculares, por sua vez, se apresentaram em maior proporção na forma de vasculite. No LPO as alterações teciduais foram menos intensas. Quando analisadas as concentrações das citocinas, na DECHc, foram encontradas maiores concentrações de IL-17A, IL-4, IL-17F e IL-10, em relação aos grupos controles, essas citocinas estão envolvidas em mecanismos prófibróticos, o que permitiu a correlação dessa expressão aos eventos escleróticos nas glândulas salivares dos pacientes de DECHc. Entre elas, a IL-17F apresentou uma tendência de aumento em relação a proporção da área de fibrose nas glândulas salivares destes pacientes. A CD40L, que também esteve presente em maior concentração nos pacientes de DECHc, é uma molécula de ligação capaz de amplificar a resposta imunológica no mecanismo de rejeição do enxerto no hospedeiro, além de regular o mecanismo de apoptose e ativar o endotélio para a formação de trombos. As citocinas IL-31, IL-23 e IL-22, também apresentaram relevância na saliva dos pacientes de DECHc, sendo participantes do mecanismo das alterações liquenóides no LPO. Através das análises comparativas foi possível correlacionar a presença de citocinas envolvidas na resposta Th17 com as alterações glandulares e consequente xerostomia nos pacientes de DECHc. / The graft versus host disease (GVHD) is one of the biggest causes of mortality and morbidity after hematopoietic stem cells transplantation. The pathophysiology in the chronical manifestation of the disease (cGVHD), is not entirely elucidated, however the involvement of the immunological system, by means of the innate and adaptive responses are depicted in the literature concerning the disease development. The cGVHD affects multiple organs, including the salivary glands, leading to xerostomia. These alterations are under reported and mostly unknown. Therefore, this study investigated if the symptom of xerostomia in cGVHD is triggered by functional e morphological changes in minor salivary glands. To answer this inquiry specimens of biopsied labial salivary glands from patients of cGVHD and xerostomia were analyzed qualitatively and through morphometry. Specimens of biopsied salivary glands from patients with Sjögren\'s Syndrome (SS) (which is a classic model of xerostomia) and from patients with oral lichen planus (OLP) (whose clinical oral manifestations resemble the cGVHD lesions) were used as controls. Also, the cytokines related to the immunological response Th17 (important immune pathway in cGVHD pathophysiology) in the saliva of 21 cGVHD patients, 27 of SS, 10 patients of OLP and 165 healthy individuals were analyzed using the multiplex assay. The major morphological findings revealed on the salivary glands of cGVHD patients were the extensive fibrosis, periductal fibrosis, ductal and acinar atrophy. Congestion and hyaline thrombi formation were the most important vascular changes shown among these specimens. A diffuse interstitial inflammatory infiltrate was observed, with varied intensity. The SS salivary glands, however, portrayed a focal inflammatory infiltrate, with moderate to severe intensity around the excretory ducts. These ducts exhibited atrophy, ectasia, periductal fibrosis and oncocytic metaplasia. The main vascular change presented in these patients was the manifestation of vasculitis. The salivary glands from the OLP patients showed a lesser amount of alterations. The multiplex assay revealed a higher concentration of the cytokines IL-17A, IL-4, IL-17F and IL-10 in the cGVHD samples, when compared to the other groups. These cytokines are involved within the promotion of fibrosis, which endorsed the association of these secretions with the salivary glands sclerotic mechanisms. The secretion of CD40L was higher in cGVHD samples; this membrane protein is capable of amplifying the immunological response in graft rejection, besides the capacity to regulate apoptosis and activate the endothelium in thrombi formation. The cytokines IL-31, IL-23 and IL-22, also presented a higher concentration in cGHVD patients\' saliva, these secretions are actively involved in the mechanisms of lichenoid lesions in OLP, corroborating the perceived morphological changes. The comparative analysis of the morphological and salivary changes in cGVHD confirmed the correlation of Th17 immunological response within the minor salivary glands injuries and consequent xerostomia in these patients.

Mosquitos são os mais importantes vetores de patógenos humanos, transmitindo um amplo espectro de doenças infecciosas emergentes e reemergentes. Nesse cenário, o mosquito Aedes aegypti está entre as espécies mais relevantes. No presente estudo investigamos as atividades do extrato de glândula salivar (EGS) desse mosquito vetor na biologia das células dendríticas e dos linfócitos T. Nossos dados revelam que o EGS não interfere na diferenciação, maturação e função de células dendríticas murinas. Entretanto, componentes salivares desse mosquito possuem um efeito direto sobre linfócitos. O mecanismo de ação do EGS envolveu a apoptose de células T naïve, enquanto células de memória foram mais resistentes a essa atividade. Uma molécula com peso molecular acima de 400 kDa é provavelmente a responsável por esse efeito. Em conjunto, os resultados gerados por esse trabalho contribuem com a elucidação dos efeitos biológicos da saliva de Ae. aegypti na imunidade de seus hospedeiros e, conseqüentemente, seu papel na transmissão de doenças. / Mosquitoes are the most important vectors of human pathogens, transmitting a wide range of emerging and re-emerging infectious diseases. In this scenario, Aedes aegypti is a relevant mosquito species. In the present study, we have investigated the activities of the salivary gland extract (SGE) of this mosquito vector on the dendritic cell and T lymphocyte biology. Our data reveals that the SGE does not interfere on the differentiation, maturation and function of murine dendritic cells. However, salivary components of these mosquitoes have a direct effect on lymphocytes. The mechanism of action of SGE involved apoptosis of naïve T cells, while memory cells were more resistant to this activity. A molecule with molecular weight above 400 kDa is likely responsible for this effect. .Taken together, the results generated by this work contribute to the understanding of the biological effects of Ae. aegypti saliva on the host and, consequently, its role on the transmission of diseases.

Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T19:08:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freitas_LeandroLuizLopesde_D.pdf: 4064664 bytes, checksum: d04222e584211904229193f280c217a9 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O adenoma pleomórfico (AP) é a neoplasia mais freqüente das glândulas salivares e o carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CXAP) é a sua forma de transformação maligna mais comum. Os trabalhos da literatura com séries exclusivas de CXAP são poucos e englobam, em sua maioria, carcinomas já em estádios avançados. Raros são os estudos realizados exclusivamente com tumores que apresentam os dois componentes (benigno e maligno) e em fases iniciais de malignização. Alterações nos genes p53 e c-erbB-2 parecem ser as principais vias envolvidas nesta transformação. Estas proteínas, além do marcador de proliferação celular Ki-67, podem ser importantes critérios no diagnóstico do CXAP, especialmente em sua fase precoce. O objetivo deste trabalho foi avaliar retrospectivamente a expressão imunoistoquímica de marcadores celulares (p53, c-erbB-2, Ki-67 e bcl-2, uma proteína antiapoptótica) em CXAP em diferentes fases de malignização (4 intracapsulares, 4 minimamente invasivos e 7 francamente invasivos), nas áreas benignas e malignas e em AP que não sofreram malignização (17 casos - grupo controle). A parótida foi a glândula mais acometida em ambos os grupos (CXAP 53%, grupo controle 88%), envolvendo mais mulheres que homens. A idade média dos pacientes com CXAP em qualquer fase evolutiva (63,3 anos) foi maior que no grupo controle (35,6 anos). A proteína p53 foi mais expressa nas áreas malignas (em média 35,71% nos CXAP precoces e 8,11% nos CXAP francamente invasivos, versus 12,76% e 4,58% nas áreas benignas, respectivamente) e principalmente em células luminais, enquanto os menores valores foram encontrados no grupo controle (1,71%). Fato semelhante ocorreu com o índice mitótico e a expressão de Ki-67. A expressão de c-erbB-2 foi observada quase que exclusivamente em células malignas com diferenciação luminal. A proteína bcl-2 teve positividade fraca e focal. Concluímos que as proteínas p53 e c-erbB-2 parecem estar envolvidas na transformação maligna do AP, já em fases precoces, sendo critérios mais objetivos do que a simples avaliação morfológica para o diagnóstico dos CXAP intracapsulares / Abstract: Pleomorphic adenoma (PA) is the commonest salivary gland tumor, and carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA) is its most frequent malignant counterpart. There are few studies centering on CXPA only and most have been performed in frankly invasive carcinomas. Series of CXPA containing both morphological components (adenoma and carcinoma) at an early stage of carcinomatous transformation are extremely rare. p53 and c-erbB-2 appear to be the most important genes involved in this malignant change. These proteins, and the proliferative index marker Ki-67, could be valuable criteria for diagnosis of CXPA, specially at an early stage. The aim of this study was to assess retrospectively the expression of cell markers (p53, c-erbB-2, Ki-67 and bcl-2, an antiapoptotic protein) in CXPA in different phases of malignant progression (4 intracapsular, 4 minimally invasive and 7 frankly invasive), in benign and malignant areas and in PA without malignant transformation (17 cases - control group). The parotid was the most frequently involved gland in both groups (CXPA: 53%, control group: 88%), and women were more affected than men. The average age in the CXPA group (63.3 years) at any stage was higher than in the control group (35.6 years). p53 expression was highest in malignant areas (mean 35.71% in early CXPA and 8.11% in frankly invasive CXPA, versus 12.76% and 4.58% in benign areas, respectively) and mainly in luminal cells, while the lowest values (1.71%) occurred in the control group. Similar findings were obtained with the mitotic index and Ki-67 expression. c-erbB-2 positivity was observed almost exclusively in malignant cells of the luminal type. bcl-2 expression was weak and focal. In conclusion, both p53 and c-erbB-2 proteins appear to be involved in malignization of PA since an early stage, thus providing criteria more objetive than simple morphological evaluation for diagnosis of intracapsular CXPA / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas