Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4932_1.pdf: 233117 bytes, checksum: 8124bfc694279a24c5d1670b3e8bd8b0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2001 / A lectina de folha de Bauhinia monandra (BmoLL) e as isolectinas de sementes de Cratylia mollis (Cra Iso 1,2,3), isoladas no Laboratório de Glicoproteínas da UFPE, foram imobilizadas em álcool polivinílico-glutaraldeído (PVA-glutaraldeído) e Sepharose-4B, respectivamente. Os suportes Cra Iso 1,2,3-Sepharose, SpiL-Sepharose (lectina de semente de Swartzia pickellii imobilizada em Sepharose-4B) e BmoLL-PVA-glutaraldeído foram avaliados quanto à eficiência de ligação de ovoalbumina e isolamento de glicoproteínas de soro fetal bovino e de colostro humano. Os rendimentos das imobilizações para Cra Iso 1,2,3-Sepharose e BmoLL-PVA-glutaraldeído foram de 90% e 50%, respectivamente. Distintas condições experimentais utilizando os suportes foram avaliadas (cromatografia em coluna e ensaio em batelada) as quais forneceram diferentes resultados. Proteínas de migração eletroforética similar à IgA secretória de colostro humano e à fetuína foram obtidas após cromatografia de colostro humano em coluna de BmoLL-PVA-glutaraldeído e de soro fetal bovino em coluna de Cra Iso 1,2,3-Sepharose, respectivamente. Ovoalbumina foi retida em Cra Iso 1,2,3-Sepharose nos ensaios em batelada. Os suportes foram estáveis nas condições cromatográficas utilizadas. Cra Iso 1,2,3-Sepharose e BmoLL-PVA-glutaraldeído podem ser incluídas no grupo de suportes para cromatografia de afinidade visando a obtenção de glicoconjugados. SpiL-Sepharose não foi eficiente, nas condições experimentais avaliadas, para a ligação de ovoalbumina e de glicoproteínas de soro fetal bovino

Orientador : Valdemiro Carlos Sgarbieri / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-09-27T19:15:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chaud_SaulaGoulart_D.pdf: 1321140 bytes, checksum: ab67e4743a9713d2e1ac51a83eb769d1 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo o fracionamento e a caracterização química da parede celular (PC) de levedura obtida como subproduto do processo industrial da produção de etanol, visando avaliar as propriedades funcionais e fisiológicas do material fracionado. A PC foi fracionada em glicoproteína (GP), glicana mais manana (G+M), glicana insolúvel (GI), glicana solúvel (GS) e manana (M) que foram caracterizadas quanto à composição centesimal, perfil de aminoácidos, minerais, ácidos graxos e quantificação de monossacarídeos. A proporção entre os componentes da PC foi, fibra (77,8%), com predominância (74%) de fibra solúvel, permanecendo no material 18 a 20% de proteína. O teor de açúcares totais da PC foi 80,8 g/100g e o teor de lipídios foi de 2,00%. Dentre os ácidos graxos saturados predominaram palmítico e esteárico, monoinsaturados palmitoléico e oléico, poliinsaturados linoléico e a¿ linolénico. Os principais elementos minerais foram cálcio, fósforo, potássio e ferro, sendo que a PC representa uma excelente fonte de ferro e cobre. As frações obtidas da PC foram M, 25,13% e GI, 42,92% p/p. As frações com maior conteúdo de fibra foram M, 70,34% de fibra solúvel, GI, 75,20% de fibra insolúvel, G+M, 60,23% fibra solúvel e GS, 70,73% fibra solúvel. Teores de açúcares redutores, M, 70%, com 48,4% de manose, GI, 28,95% e GS, 25,07% glicose. A fração G+M continha 28,08 g/100g de carboidratos totais e 20,0% de redutores totais. A GS apresentou a maior solubilidade, a G+M a menor solubilidade do N e de sólidos totais e a GI apresentou o menor índice de solubilidade. A GS apresentou a maior capacidade de retenção de água (14,36 g/g de amostra) e o menor índice (0,06%) de solubilidade em água. A fração GP reteve (5,33 g/g de amostra) e 83,83% de solubilidade. A viscosidade (95oC) e a viscosidade final (50oC) obedeceram à seguinte ordem: GS > GI > G+M > M > GP e PC. A GI (12% e 14% p/v) apresentou o maior índice de dureza de gel. As frações GP e M apresentaram as melhores propriedades emuslificantes que melhoraram significativamente com a adição de 0,2 , 0,4 e 0,6% (p/v) de ovoalbumina nas suspensões a 1% do material em estudo. Avaliou-se os efeitos da substituição da fibra de uma dieta padrão (AIN-P) por 10% de fibra de cada uma das frações da PC, formulando-se as dietas G+M, M, GI, GS. Ao final de 28 dias, os animais em dieta G+M ganharam menos peso que nas demais. As dietas AIN-M (padrão modificada com 10% celulose) e M foram as que proporcionaram um maior ganho de peso, seguidas das dietas padrão (AIN-P) e GI. O QEA da dieta G+M foi o menor ao longo dos 28 dias. Os maiores índices de digestibilidade da proteína foram observados nas dietas AIN-M, AIN-P e M. Com exceção da dieta G+M observou-se efeitos hipocolesterolêmico e hipolipidêmico em todas as dietas, porém, efeito hiperglicêmico em relação ao valor inicial (T0). Não houve modificações significativas na microflora intestinal dos animais em nenhuma das dietas. As quantidades de lipídios totais e colesterol excretados (fezes) variaram bastante, sendo que a dieta M apresentou maior especificidade para excreção do colesterol. Dentre os AGV, o ácido acético foi o predominante, seguido do propiônico e do butírico, em todas as dietas estudadas. As concentrações de ácido butírico nas dietas contendo M, G+M e G foram significativamente superiores aos padrões (AIN-P e AIN-M) / Abstract: The objectives of this work were the fractionation and chemical characterization of yeast cellular wall (YCW) from yeast biomass obtained as byproduct in the industrial production of ethanol, as well as the evaluation of functional and physiological properties of the various fractions. YCW was fractionated to obtain glycoprotein (GP), a faction containing glycan plus mannan (G+M), insoluble glycan (IG), soluble glycan (SG), and mannan (M), which were characterized for percent composition, amino acid profile, minerals, fatty acids, and monosaccharides. Proportions between YCW components included fiber (77.8%), with predominance (74%) of soluble fiber, remaining in the material 18 to 20% protein. Total sugar content of YCW was 80.8%/100 g and lipid content was 2.00%. Among the saturated fatty acids, the palmitic and stearic were predominant, among the monounsaturated acids, the palmitoleic and the oleic, and among the polyunsaturated acids, the linoleic acid and a¿linolenic acid. The most abundant mineral elements were calcium, phosphorous, potassium, and iron and the YCW showed to be an excellent source of iron and copper. Fractions obtained from YCW were: M 25.13% and IG 42.92% w/v. Fiber content in the isolated fractions were: M 70.34% soluble fiber, IG 75.2% insoluble fiber, G+M 60.23% soluble fiber, and SG 70.73% soluble fiber. Percentages of reducing sugars were M 70% with 48.4% mannose, IG 28.95% and SG 25.07% glucose. The fraction G+M contained 28.0 g/100g total carbohydrate and 20% reducing sugars. The SG presented the highest solubility and G+M the lowest N solubility and the IG presented the lowest total solids solubility. GS showed the highest water retention capacity (14.36 g/g sample) and the lowest (0.06%) solubility in water. The fraction GP showed retention of 5.33 g/g sample and solubility in water of 83.83%. The SG showed the highest viscosity at 50oC (heating phase). The viscosity at 95oC and the final viscosity (50oC) obeyed the following order: SG > IG > G+M > M > GP and YCW. The IG (12% and 14% w/v) presented the highest gel hardness. The fractions GP and M exhibited the best emulsifying properties, which improved significantly by adding 0.2, 0.4, and 0.6 ovoalbumin to the emulsifying media at 1%. Effects of fiber substitution were evaluated through alteration of control diet (AINP), substituting each YCW fraction with 10% of fiber, which resulted in the diets G+M, M, IG, SG. After 28 days, animals on a G+M diet had gained less body weight than the others. AIN-M (standard modified with 10% cellulose) and M diets promoted the highest growth, followed by AIN-P and IG. The DER of the G+M diet was the lowest along 28 days of experiment. Higher protein digestibility indexes were found for AIN-P, AIN-M, and M. With exception of the G+M diet, hypocolesterolemic and hypolipidemic effects were found for all the diets, compared to the starting point (T0). No significant modification of the intestinal microbiota was verified in any dietary treatment. Great variation was verified among the diets for fecal lipids and cholesterol excretion. The M diet showed greater capacity to excrete cholesterol in the rat feces. Among the SCFA, acetic acid predominated in all treatments, followed by propionic acid and butiric acid. Butiric concentrations were significantly higher in the M, G+M, and G diets compared with AIN-P and AIN-M / Doutorado / Doutor em Alimentos e Nutrição

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-09T13:31:06Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1350563 bytes, checksum: d2e65f029d341d387680028a5b5c79fe (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-09T13:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1350563 bytes, checksum: d2e65f029d341d387680028a5b5c79fe (MD5) Previous issue date: 2017-05-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A obesidade é vista como um problema de saúde mundial, considerada uma epidemia pela Organização Mundial de Saúde, que estima que haja no mundo mais de um bilhão de humanos adultos com sobrepeso, e cerca de 266 milhões de homens e 375 milhões de mulheres com quadros de obesidade. Acompanhando essa tendência, a obesidade vem se tornando frequente também entre os equinos, sendo que, em países desenvolvidos a obesidade atinge em torno de 19 a 45% dos cavalos com sobrepeso. Devido à escassez de estudos sobre a influência da sobrepeso em parâmetros bioquímicos (glicêmicos e inflamatórios) em equinos no Brasil, o objetivo deste trabalho foi realizar uma avaliação de constituintes do metabolismo glicêmico (glicose, HbA1C, frutosamina e insulina) e inflamatórios (leptina e proteínas de fase aguda), buscando verificar uma possível associação entre sobrepeso e alterações das variáveis estudadas. Foram utilizados 18 animais, de ambos os sexos, da raça Mangalarga Machador, com idade entre 5 e 15 anos, peso corporal médio de 400 Kg, em que foram avaliados previamente por meio de exame físico, hemograma e perfil bioquímico de função renal e hepática com o objetivo de atestar a sanidade geral dos animais. Também foi realizado anamnese para a verificação de história pregressa de cólica, claudicação e/ou laminite, nos quais foram utilizados como critérios de exclusão dos animais. Os animais foram pesados e avaliados quanto ao escore de condição corporal e adiposidade regional por meio da circunferência do pescoço. Os 18 animais foram distribuídos em dois grupos: 9 no grupo C (controle) composto por animais dentro do peso normal e com escore de condição corporal ≤ 5 (cinco); 9 no grupo O (sobrepeso) formado por animais com escore de condição corporal ≥ 6 (seis). Após realizados todos os procedimentos, foram observadas diferenças estatísticas significativas para a avaliação ultrassonográfica da base da cauda, abdômen ventral e circunferência do pescoço entre o grupo de animais normais (Grupo C) e o grupo com sobrepeso (Grupo O). Em relação às análises bioquímicas, foram observadas diferenças estatísticas significativas para as avaliações das concentrações de frutosamina, HbA1c e leptina entre os grupos; dentre as proteínas de fase aguda, foram observadas diferenças estatísticas significativas nas concentrações séricas de ceruloplasmina, α1-antitripsina e haptoglobina. As proteínas de fase aguda IgA, transferrina, albumina, IgG, glicoproteína ácida e proteína C reativa não apresentaram diferenças estatísticas entre os grupos. Sendo assim, podemos concluir que a leptina plasmática é um bom indicador em equinos que apresentam sobrepeso, além disso, frutosamina e HbA1c, fornecem dados mais precisos quanto à variação glicêmica pregressa no momento da coleta e, portanto, refletem de forma melhor o histórico do metabolismo energético dos animais. O aumento nas concentrações séricas de ceruloplasmina, haptoglobina e α1-antitripsina nos animais com sobrepeso sugerem que adipocinas pró inflamatórias em adipócitos possam atuar induzindo à liberação das mesmas, uma vez excluídas outras possíveis causas inflamatórias. / Obesity is seen as a global health problem, considered an epidemic by the World Health Organization, which estimates that there are more than one billion overweight adult humans in the world, and about 266 million men and 375 million women with obesity. Following this trend, obesity is becoming frequent among equines, and in developed countries obesity affects around 19% to 45% of overweight horses. Due to the lack of studies about the influence of overweight on biochemical parameters (glycemic and inflammatory) in horses in Brazil, the objective of this study was to evaluate the constituents of glycemic metabolism (glucose, HbA1C, fructosamine and insulin) and the inflammatory (leptin and acute phase proteins), seeking to verify a possible association between overweight and changes in the studied variables. Anamnesis was also performed to verify previous history of colic, claudication and/or laminitis, which were used as exclusion criteria for the animals. The animals were weighed and evaluated for body condition score and regional adiposity by neck circumference. The 18 animals were divided into two groups: 9 in group C (control) composed of animals within normal weight and body condition score ≤ 5 (five); The O group (overweight) formed by 9 animals with body condition score ≥ 6 (six). After performing all the procedures, a significant statistical difference was observed for the ultrasonic evaluation of the tail base, ventral abdomen and neck circumference between the group of normal (Group C) and overweight (Group O). Regarding the biochemical analyzes, a statistically significant difference was observed for the evaluation of the concentrations of fructosamine, HbA1c and leptin between the groups. Among the acute phase proteins, a significant statistical difference was observed in serum concentrations of ceruloplasmin, α1-antitrypsin and haptoglobin. The acute phase proteins IgA, transferrin, albumin, IgG, acid glycoprotein and C- reactive protein showed no statistical difference between the groups. Thus, it can be concluded that plasma leptin is a good indicator in horses that present overweight, in addition, fructosamine and HbA1c, provide more precise data regarding the glycemic variation prior to the time of collection and, therefore, it better reflects the history of the energetic metabolism of the animals. The increase in serum concentrations of ceruloplasmin, haptoglobin and α1-antitrypsin in overweight animals suggests that pro-inflammatory adipokines in adipocytes may act to induce their release, once other possible inflammatory causes have been excluded.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os tripomastigotas metacíclicos de Trypanosoma cruz; expressam as glicoproteínas de superfícies GP82 e GP90 de maneira estágio-específica, as quais estão implicadas na invasão da célula hospedeira. Embora as proteínas não sejam expressam e os RNAm GP82 e GP90 fracamente detectáveis em epimastigotas, ensaios de transcrição em núcleos isolados mostraram que eles são transcritos constitutivamente nos dois estágios. Este resultado indica que o acúmulo de transcritos nas formas metacíclicas não é devido a um aumento na transcrição dos genes GP82 e GP90. Para investigar se a estabilidade dos RNAm seria a responsável pelas diferenças nos níveis destes RNAm, parasitas foram tratados com actinomicina D ou cicloheximida. Quando tratados com actinomicina D, as meia-vidas dos transcritos GP82 e GP90 foram maiores que 8 h em tripomastigotas metacíclicos e menor que 0,5 h e 2 h em epimastigotas, respectivamente. Na presença de cicloheximida, os níveis de RNAm GP82 e GP90 caíram levemente, enquanto que em epimastigotas os níveis destes RNAm aumentaram após 8 h de tratamento. Este efeito sugere um mecanismo de estabilização atuando em tripomastigotas metacíclicos e de desestabilização em epimastigotas, os quais parecem ser mediados por elementos presentes na 3' -UTR destes transcritos. Nós mostramos que a 3'-UTR da GP82 gera uma expressão maior do gene repórter GFP em tripomastigotas metacíclicos do que em epimastigotas. Consistente com este achado, análises de "northern blot" mostram que os RNAm GP82 e GP90 são mobilizados para os polissomas e conseqüentemente traduzidos apenas em tripomastigotas metacíclicos. Estes resultados sugerem que a estabilidade destes RNAm envolve interações com elementos regulatórios positivos e negativos na 3' -UTR. Estudos para melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na estabilidade dos RNAm GP82 e GP90 estão em progresso em nosso laboratório. / Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes express the developmentally regulated GP82 and GP90 glycoproteins, which are implicated in host cell invasion. Although GP82 and GP90 mRNAs and proteins are not present and the mRNAs barely detectable in epimastigotes, nuclear run-on analysis showed that they are transcribed in both stages. This result indicates that accumulation of transcripts in metacyclic forms is not due to increased transcription of the GP82 and GP90 genes. To investigate whether mRNA stability may be responsible for the differences in the steady-state levels of these mRNAs, parasites were treated with actinomycin D or cycloheximide. When treated with actinomycin D, the half-lives estimated for GP82 and GP90 transcripts were longer than 8 h in metacyclic trypomastigotes and less than 0.5 h and 2 hours in epimastigotes, respectively. In the presence of cycloheximide, the levels of GP90 and GP82 mRNA decayed slightly after 8 h in metacyclic trypomastigotes, whereas in epimastigotes the levels of these mRNAs increased. This effect suggests a stabilizing mechanism acting in metacyclic trypomastigotes and a destabilizing mechanism in epimastigotes which could be mediated by an element present in the 3’-UTR of the transcripts. We show that the 3’-UTR of GP82 causes higher expression of the green fluorescent protein reporter gene in metacyclic trypomastigotes than in epimastigotes. Consistent with this finding, northern blot analysis showed that GP82 and GP90 mRNAs were mobilized to polysomes and consequently translated, but only in metacyclic trypomastigotes. These results suggest that the stability of these mRNAs involves interactions between positive and negative regulatory elements in the 3’-UTR. Work is ongoing to better understanding the mechanisms involved in changes in GP82 and GP90 mRNA stability. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho mostra o envolvimento de motivos de ligação do tipo NIT2 na modulação da transcrição do gene PbGP43, que codifica um importante antígeno do patógeno humano Paracoccidioides brasiliensis. Esta investigação foi motivada pela descoberta de um elevado número de motivos do tipo GATA (ou TATC) dentro dos 2047 pb da região 5´ intergênica do PbGP43 do isolado Pb339, presentemente clonado e sequenciado neste trabalho. Este fragmento de 2047 pb contém 23 sítios NIT2, que formam 4 “clusters” putativos, dois deles idênticos. Nossa análise foi baseada em ensaios de EMSA (“electrophoretic mobility shift assay”) usando sondas selecionadas e ensaios de PCR em tempo real do gene PbGP43 de culturas de P. brasiliensis expostas a, ou depletadas, de sulfato de amônio e glutamina. Os resultados sugerem que pelo menos alguns motivos NIT2 podem ser funcionais e que o PbGP43 é modulado por fontes primárias de nitrogênio. Nós mapeamos 4 oligonucleotídeos contendo motivos TATC que formaram complexos DNA-proteína possivelmente envolvendo um fator NIT2. Esta afirmação é baseada nas seguintes observações: i) eles formaram bandas de maior intensidade nos ensaios de EMSA com extrato de células que cresceram na ausência de sulfato de amônio; ii) uma mutação pontual no núcleo TATC (para GATC) diminuiu a intensidade das bandas formadas e iii) todos os complexos migraram de forma semelhante. Tanto sulfato de amônio quanto glutamina provocaram diminuição no acúmulo de mRNA do PbGP43, sendo que o efeito pôde ser revertido quando o sal foi retirado do meio. Esta modulação foi vista não só em Pb339, mas também nos isolados Pb3 e Pb18. Os oligonucleotídeos usados para iniciar a reação para amplificação dos 2047 pb da região 5´ intergênica do PbGP43 usando DNA do isolado Pb339 também amplificaram um fragmento de tamanho similar usando DNA do Pb18 e de seis outros isolados. Para os isolados Pb2, Pb3, Pb4 e Pb5 os amplicons foram de ~1500 pb e para Pb9 e Pb17 foi de ~3000 pb. No Pb18, esta sequência é 98% idêntica à de Pb339. No Pb3, além do amplicom de menor tamanho, o número de motivos NIT2 e “clusters” é menor. Ensaios de gene repórter conduzidos em A. nidulans mostraram que os primeiros 480 pb da região 5´ intergênica não só foram responsáveis pela transcrição do gene, mas também continham os elementos necessários para a regulação negativa na presença de sulfato de amônio como fonte de nitrogênio. Além de terem sido testadas fontes de nitrogênio na modulação do PbGP43, o efeito da adição de glicose e soro fetal bovino também foi analisado. Nas condições testadas, o aumento de glicose de 0,18 para 1,5% levou a uma queda no acúmulo de mRNA do gene, no entanto, o contrário foi visto quando a concentração do açúcar subiu de 1,5 para 3%. Para o soro fetal bovino, não houve alteração significativa. Por fim, o mapeamento de elementos de transcrição da região proximal ao ATG (-1 a –326 pb) pelas técnicas de DNAse I footprinting e EMSA levaram à identificação de três regiões de proteção localizadas entre os nucleotídeos –216 e –260 da região promotora proximal. Este é o primeiro relato de modulação por fontes de nitrogênio primárias do gene PbGP43. / The present work shows the involvement of NIT2-like binding motifs in transcription modulation of the PbGP43 gene, which encodes an important antigen from the human pathogen Paracoccidioides brasiliensis. This investigation was motivated by the finding of a high number of GATA (or TATC)-like motifs within the first 2,047 nucleotides of the PbGP43 5’ intergenic region from Pb339 isolate, which has been presently cloned and sequenced. This fragment contains 23 NIT2- like sites, which form 4 putative clusters, two of them identical. Our analysis was based on electrophoretic mobility shift assay (EMSA) with selected probes and real time reverse transcription (RT)-PCR of PbGP43 from P. brasiliensis cultures exposed to, or depleted of, ammonium sulfate and glutamine. The results suggested that at least some NIT2-like motifs may be functional and that PbGP43 is modulated by nitrogen primary sources. We have mapped 4 oligonucleotides containing TATC motifs that formed DNA-protein complexes possibly involving a NIT2-like factor. This suggestion is based on the following observations: i) they formed more intense EMSA bands with extracts from ammonium sulfate-depleted cells; ii) a point mutation in the TATC core (to GATC) decreased shifted band intensity; iii) all the complexes migrated similarly. Both ammonium sulfate and glutamine provoked rapid decrease in PbGP43 mRNA accumulation, but this effect could be reversed upon salt depletion. This kind of modulation was observed not only in Pb339, but also in Pb3 and Pb18. The oligonucleotides that prime amplification of a 2,047-bp PbGP43 intergenic fragment using Pb339 DNA elongated a fragment of similar size with template from Pb18 and six other isolates, while for Pb2, Pb3, Pb4 and Pb5 the amplicon was ~1,500 bp and for Pb9 and Pb17 it was ~3,000 bp. The Pb18 genome sequence of this amplicon is 98% identical to that of Pb339. In Pb3, the number of NIT2-like motifs and clusters is lower. Gene reporter assays conducted in Aspergillus nidulans WG355 showed that the first -480 bp of the PbGP43 5´intergenic region are responsible for promoter activation and contains the minimal elements responsable for down regulation of gene when tested in minimal medium containing sodium nitrate as the only nitrogen source. Besides nitrogen sources, alterations in the concentration of glucose and addition of fetal serum bovine (FSB) in the medium were tested. In our conditions, when glucose concentration increased from 0,18 to 1,5%, mRNA accumulation decreased. The opposite was seen when concentration raised from 1,5 to 3%. FSB, on the other hand, did not alter PbGP43 expression. When the proximal promoter region was mapped by DNAse I footprinting and EMSA, we identified three protected regions localized between – 216 and –260 bp far from the initial codon (ATG). This is the first report on PbGP43 transcription modulation with primary nitrogen sources. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4835_1.pdf: 643552 bytes, checksum: 2316ce5434a69146004c767a3ba2961d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Lectinas de sementes de Cratylia mollis (Cramoll) contêm formas moleculares (Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 e Cramoll 4), as quais foram previamente purificadas com elevado grau de pureza. O padrão de ligação de Cramoll 1,4 (preparação contendo Cramoll 1 e Cramoll 4) e de Cramoll 3 a levanas livres e magnetizadas e de Cramoll 1,4 e Cramoll 3 imobilizadas em Sepharose a preparações de glicoproteínas de plaquetas foram analisados. A ligação das lectinas às levanas (ZAG-12L, Z-1-81L, ZAPL e CP- 50L) foi avaliada por ensaio de inibição da atividade hemaglutinante e a ligação às glicoproteínas de plaquetas foi avaliada por cromatografia em Cramoll 1,4-Sepharose e Cramoll 3- Sepharose. Incubação de Cramoll 1,4 e Cramoll 3 com ZAG-12 ferro magnetizado (FMZAG-12L) que promoveu a melhor inibição também foi testada. Eletroforese em gel de poliacrilamida foi usada para analisar o padrão das proteínas obtidas. A ZAG-12L e ZAPL inibiram ambas as isolectinas, enquanto Z-1-81L e CP- 50L não inibiram estas. Quando Cramoll 1,4 foi incubada com FMZAG-12L obteve-se através da eluição específica com D-glicose um pico protéico que mostrou o mesmo padrão eletroforético observado para Cramoll 1,4 antes da incubação; Cramoll 3 não se ligou a FMZAG-12L. Glicoproteínas de plaquetas foram eluídas especificamente das isolectinas imobilizadas com diferentes padrões eletroforéticos. Os resultados mostraram que Cramoll 1,4 e Cramoll 3 possuem diferentes sítios de ligação e poderão ser utilizadas para caracterizar polímeros de carboidratos ou glicoproteínas

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4929_1.pdf: 2111494 bytes, checksum: 1f2cb834bd3130cceb993e013d789950 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2001 / Lectinas são moléculas que possuem a capacidade de reconhecer carboidratos específicos e têm sido bastante utilizadas em importantes técnicas laboratoriais. Lectinas imobilizadas são utilizadas para estudo de glicoconjugados através da cromatografia de afinidade. O isolamento de glicoproteínas através dessa técnica e a avaliação de seu poder de ligação a várias lectinas tem fornecido informações importantes a respeito de suas cadeias oligossacarídicas e das suas possíveis modificações. Patologias como câncer, processos inflamatórios e doenças hepáticas têm sido relacionadas com alterações da porção carboidrato. O presente estudo tem como objetivo avaliar a capacidade da lectina de sementes de Cratylia mollis (cra) e a Concanavalina A (Con A) em isolar glicoproteínas plasmática de pacientes com esquistossomose mansônica, uma doença hepática inflamatória, nas diferentes fases clínica da doença: hepato-intestinal (HI), hepatoesplênica compensada (HEC) e hepatoesplênica descompensada (HED). Cra e Con A foram hábeis no isolamento de glicoproteínas plasmáticas de pacientes esquistossomóticos nas diferentes formas clínicas. O processo cromatográfico realizado a 4 °C demonstrou uma maior capacidade dessas lectinas em adsorver glicoproteínas quando comparado ao realizado a temperatura ambiente (27 °C). Um aumento na reatividade de glicoproteínas foi observada para os pacientes nas fases HED e HEC. As glicoproteínas caracterizadas por eletroforese em gel de poliacrilamida contendo sulfato sódico de dodecila, sob condições desnaturantes e redutoras, determinaram padrões diferentes das formas HEC e HED onde o surgimento de bandas protéicas e outras bandas mais coradas definiram a diferença em relação aos indivíduos controles e hepato-intestinal

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10664_Natalia Viana Tamiasso20170428-82548.pdf: 2831281 bytes, checksum: dd6b4435569643f23f8aef10a9b49a5a (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Batata yacon (Smallanthus sonchifolius) é um alimento funcional devido a sua capacidade de promover benefícios para a saúde, porém, seus efeitos sobre o câncer colorretal são pouco conhecidos. Assim, objetivou-se avaliar a produção de mucina intestinal e identificar a expressão de fator induzido por hipóxia-1 alfa (HIF- 1α) e fator de crescimento vascular endotelial A (VEGF-A) em modelo experimental de câncer colorretal induzido em ratos suplementados com batata yacon. Quarenta e três ratos foram distribuídos em quatro grupos experimentais: C (não tratado), N (tratado com 1,2-dimetilhidrazina [DMH]), NY (tratado com DMH e farinha de yacon) e Y (tratado com farinha de yacon). A indução neoplásica seguiu protocoloco com uma injeção semanal de DMH durante cinco semanas. Após o período de indução e desenvolvimento neoplásico, as dietas suplementadas com yacon foram fornecidas durante oito semanas após. Amostras intestinais foram coradas com hematoxilina e eosina, ácido periódico de Schiff (PAS) e Alcian Blue e foram submetidas a protocolos imunoistoquímicos com anticorpos anti-HIF-1α e anti-VEGF-A. As lesões encontradas foram linfocitose, hiperplasia linfoide, dilatação glandular, epitélio atípico, displasia, neoplasia benigna e neoplasia maligna. Os animais do grupo N apresentaram redução na produção de mucina neutra e não houve diferença na produção de mucina ácida entre os grupos. Os animais do grupo NY apresentaram redução na expressão de HIF-1α enquanto os grupos Y e NY tiveram expressão de VEGF-A semelhante ao grupo controle. Conclui-se que a suplementação com farinha de yacon aumenta a produção de mucina neutra em animais com câncer colorretal induzido, mas não altera a produção de mucina ácida. Ainda, o consumo de yacon reduz a expressão de HIF-1α e não interfere na expressão de VEGF-A.

Orientador: Jaime Aparecido Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-14T07:59:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_CelsoPaulinoda_D.pdf: 4369740 bytes, checksum: cd49f02fe75b95d94f51aac52e00a458 (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: Lectinas são prot.einas que se ligam a açúcares especifiicos de macromoléculas. Foram descritas inicialmente em plantas, porém de outras fontes já foram isolados como bactérias, animais e até mesmo mamíferos. As lectinas apresentam várias propriedades como hemaglutinação, aglutinação, de bactérias, protozoários, leucocitos, estímulo mitogênico para linfócitos e entre outras a reação e precipitação de glicoproteinas, incluindo imunoglobulinas. As glicoproteinas constituem um grande grupo de substâncias presentes na saliva e soro, dentre elas a imunoglobulina A. Tem sido descrito que lectina de semente de jaca reage com IgA presente no soro e secreções humanas. Neste t.rabalho procuramos verificar se a lectina de semente de jaca, específica para galactose, reagia com imunoglobulina A, salivar, e se era especlfica para esta glicoproteina, comparando as reações com as glicoproteinas do soro. Através de técnicas de dupla difusão em gel de agarose, eletroforese em gel de agarose e poliacrilamida, com saliva e soro deficiente em imunoglobulina A, verificamos que esta lectina reage com outras glicoproteinas da saliva e do soro além da imunoglobulina A. Após o fracionamento do extrato bruto de semente de jaca, por cromatografia de afinidade em agarose-D-galactose, verificamos a existência de outra lectina neste extrato, não específica para galactose, com atividade precipitante para várias proteinas do soro humano. As proteinas da saliva e soro separadas eletroforeticamente em géis de poliacriamida ragem com soluções de lectina. A reação é especifica, pois as proteinas que apresentam afinidad para as lectinas ficam imobilizadas, enquanto que outras se difundem do gel quando em soluções tampões. Est.a t.écnica mostrou-se adequada para o estudo de glicoproteinas da saliva e soro humano normal e patologico / Abstract: Interaction of lectins of jack seeds Artocarpus integrifolia, with salivay and human serum glycoproteins. Lectins are proteins which bind to specific saccharides in polysacharides, glycoproteins or glycolipds. Although originally described in plants, they have been isolated from many diverse sources like bacterias and animal including smails, sponges, fish and others. The lectins have many biological activities like erythrocyte bacterial, protozoal, leukocytes aglutination, produce mitogenic effect on lymphocyte culture, and precipitate glycoproteins, as the immunoglobulins. The gycoproteins are important group in t.he salivary and serum components, included immunoglobulin A. Our aim was determine if the lectin of jack seed (galactose specific) reacts specifically with salivary immunoglobin A when compared with serum glycoprotelns. Through double agar diffusion and electrophoretic separation in agarose and polyacrylamide gels of Ig-A deficient saliva and serrum, we observed that other glycoproteins present in saliva and serum react with this lectin. The fractioned crude extracts of jack seeds by affinty chromatography with agarose-D-ga!actose resulted in a lectin specific to galactose. The other proteins that didn't bind to galactose, also react and precipitate various serum proteins. The salivary and serum proteins separated in disc polyacrylamide gels react with lectins solutions. The reaction is specific because only some proteins are retained into gel after repeated wash in buffer. This procedure was shown to be useful for study normal and pathological human salivary and serum glycoproteins / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Odontologia

Memoria para optar el título de Bioquímico y Magíster en Bioquímica