Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências de Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-24T09:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 264527.pdf: 548869 bytes, checksum: 9b64cba041fd0b8d0d3dd6af770714a1 (MD5) / As infecções pelo HBV e pelo HCV são dois preocupantes problemas de saúde pública, que infectam o fígado causando necrose e inflamação do tecido hepático. Quando a infecção persiste, favorecem a progressão para cirrose e carcinoma hepatocelular. No Brasil, a prevalência do HBV em geral é moderada (2% a 7%), com baixa taxa de infecção no Sul, média taxa de infecção no Nordeste e Sudeste, e uma alta prevalência na região da Amazônia, no Espírito Santo e no oeste de Santa Catarina. Atualmente, poucos dados são disponíveis da prevalência e dos fatores de risco ao HBV e do HCV no Brasil, principalmente em indivíduos vacinados contra a hepatite B. Além disso, o conhecimento da prevalência desses vírus é crucial a fim de antecipar impactos futuros nos sistemas de saúde e permitir um adequado gerenciamento dos recursos financeiros. O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência dos marcadores da hepatite B (HBsAg, anti-HBc e anti-HBs) e da hepatite C (anti-HCV) em estudantes voluntários com idade entre 10 a 15 anos. Participaram do estudo um total de 410 estudantes e foi verificado o documento de vacinação de 353. As amostras de sangue foram coletadas e as concentrações do HBsAg, anti-HBc, anti-HBs e anti-HCV foram determinadas. Os 4 marcadores foram analisados através da metodologia de imunoensaio enzimático de micropartículas (MEIA-Abbott AxSym System Laboratories). Os resultados mostram que a prevalência do HBsAg foi 0.5% (2/410), e a prevalência do anti-HBc foi 1% (4/410). A prevalência total do anti-HBs foi 81,22% (333/410), sendo que em 36,10% (148/410) dos adolescentes as concentrações de anti-HBs foram < 10 UI/L e em 45,12%(185/410) foram = 10 UI/L. A prevalência do anti-HBs em estudantes que receberam 3 ou 4 doses da vacina foi 94,48% (325/344), atingindo a cobertura vacinal proposta pelo Ministério da Saúde. Nenhuma prevalência do anti-HCV foi observada. Os resultados do estudo mostram que na população de 10 a 15 anos de idade residentes no município de Itajaí, Santa Catarina, a prevalências dos marcadores HBsAg, anti-HBc e anti-HCV é baixa. Além disso, a elevada cobertura vacinal e a prevalência do marcador anti-HBs demonstram o êxito do programa de vacinação instituído em 1993, que deve ser mantido e ampliado, mas, também, que outras formas de prevenção devem ser desenvolvidas a fim de prevenir a transmissão do HBV e do HCV. Infection by HBV and HCV is a worldwide public health problem, which infect and result in necrosis and inflammation in the liver. When the infection persists, contribute to progression liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. In Brazil, prevalence of HBV is moderate (2% to 7%), with low infection rate in Southern, middle rate in Northeast and Southeast, and high prevalence in the Amazon region, in the Espírito Santo, and in west of Santa Catarina. Little data are available on the seroprevalence and of risk factors for HBV and HCV infections in Brazil, mainly who had received hepatitis B vaccine. Knowing the prevalence of HBV and HCV in the general population is crucial for anticipating their future impact on the health system and for ensuring an adequate allocation of financial resources. The present study aimed to determine the prevalence of HBV (HBsAg, anti-HBc and anti-HBs) and HCV (anti-HCV) markers in voluntary students to aged 10 to 15 years. A total of 410 students participated in the study and 353 students vaccination document was check. Blood samples were collected and were tested four serological markers through Microparticle Enzyme Immunoassay (MEIA-Abbott AxSym System Laboratories). The results show that the overall HBsAg prevalence was 0.5% (2/410) and anti-HBc prevalence was 1% (4/410). The overall prevalence of anti-HBs was 81,22% (333/410), 36,10% (148/410) adolescent had anti-HBs concentrations < 10 IU/L and 45,12%(185/410) had anti-HBs concentrations = 10 IU/L. The prevalence of anti-HBs in vaccinated student that received 3 or 4 doses series was 94,48% (325/344) achieving the vaccination coverage goal of Health Department. None anti-HCV prevalence was observed. The results from study indicate that the prevalence of HBV and HCV markers was low in voluntary adolescents from Itajaí, Santa Catarina, aged from 10 to 15 years old. Moreover, the high vaccination coverage and prevalence of anti-HBs markers show the success of the vaccination program against hepatitis B initialized in 1993, that need to be maintained and expanded, but also that other prevention forms should be developed to prevent the HBV and HCV transmission.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T14:56:52Z No. of bitstreams: 1 Peliganga Luiz.pdf: 631321 bytes, checksum: f365dc00480984685a80d0910780e556 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T14:56:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peliganga Luiz.pdf: 631321 bytes, checksum: f365dc00480984685a80d0910780e556 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Organização Mundial de Saúde (OMS) estima que aproximadamente 720 milhões de indivíduos estejam infectados pelos vírus da hepatite B(HBV) ou C(HCV) com índice de mortalidade cerca de 25%, constituindo importante problema de saúde pública global, A escassez de dados sobre HBV e HCV em Angola e a identificação de alguns fatores de risco incentivaram a realização deste trabalho com objetivo de avaliar a freqüência de marcadores de HBV em gestantes e HBV e HCV em doadores, e descrever os fatores de risco associados, visando adoção de estratégias voltadas à aplicação de medidas preventivas.No presente estudo utilizou-se os dados de registros dos doadores em banco de sangue para os anos 2005, 2006 e 2007 e investigou-se os possíveis fatores de risco através da aplicação do questionário epidemiológico em 500 doadores e 1014 gestantes no ano 2007. Os resultados dos marcadores de HBV e HCV nos doadores foram obtidos através dos registros e nas gestantes através de testes rápidos. A freqüência de HBsAg em doadores de sangue manteve-se em 11% durante os anos 2005, 2006 e 2007, enquanto que nas gestantes foi de 9%. A prevalência de anti-HCV em doadores aumentou progressivamente de 0,3% para 1% entre os anos 2005 e 2007. Os fatores de risco que despertaram a atenção nos doadores foram à circuncisão, DTS, e escarificação, ao passo que nas gestantes foram à aplicação de piercing, uso de medicamento tradicionais na vagina, compartilha de instrumento de manicure. / The World Health Organization (WHO) has estimated that approximately 720 million people are infected with hepatitis B (HBV) or hepatitis C virus (HCV) with a mortality rate of 25%, thus representing a major global public health problem. The little data on HBV and HCV in Angola together with lack of identification of risk factors encouraged this study that proposed to evaluate the frequency of HBV among pregnant women and HBV and HCV in blood donors, and to describe risk factors that may implement guidelines for preventive measures. The study included data from blood bank records for the years 2005, 2006 and 2007. Possible risk factors were investigated by means of an epidemiologic questionnaire among 500 blood donors and 1014 pregnant women in the year 2007 and testing was performed through rapid tests. The prevalence of HBsAg among the blood donors was persistently 11% during the years 2005, 2006 and 2007 and 9% for pregnant women. An increase in anti-HCV prevalence from 0.3% to 1.0% was observed from 2005 to 2007. Risk factors of interest amongst the blood donors were circumcision, STD, and scarification, while for pregnant women piercing, use of traditional vaginal agents, and sharing of manicure devices.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Saúde Pública. / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:07:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 222423.pdf: 1732336 bytes, checksum: 73f66e0f562f5af56459ab26897aab1d (MD5) / A hepatite C é um sério problema de saúde pública mundial, não somente pelo grande número de pessoas infectadas pelo vírus da hepatite C (HCV), mas também porque a maioria destas desconhece este fato, o que as torna um importante elo na cadeia de transmissão viral, perpetuando a doença. A maioria dos portadores crônicos de hepatite C toma conhecimento de sua situação patológica ao doar sangue. Este foi um estudo transversal, no qual se analisou os dados de todos os doadores de sangue do Centro de Hematologia e Hemoterapia de Florianópolis, Santa Catarina (HEMOSC) nos anos de 2000 a 2004, com objetivos de estimar a prevalência do anti-HCV, fatores a ela associados e verificar a existência de co-infecções do HCV com outros agentes infecciosos pesquisados na doação de sangue. Em 120.493 doações realizadas no período a prevalência do anti-HCV foi de 0,211% (IC 95% 0,209-0,213), observando-se um declínio ao longo do período pesquisado. A soropositividade para o anti-HCV foi associada ao sexo masculino, idade superior a 23 anos, baixa escolaridade e menos de oito doações no HEMOSC. Evidenciou-se em 25,4% dos casos a existência de co-infecções com o HCV. Os fatores de provável contaminação mais observados foram os usos de drogas ilícitas, quer seja por inalação ou por via endovenosa, e história de transfusão. Conclui-se que os doadores de sangue do HEMOSC estão expostos ao vírus da hepatite C e isto deve ser conhecido para aumentar a segurança transfusional. Hepatitis C is a worldwide serious public health problem, not only due the expressive number of persons infected by the virus of the hepatitis C (HCV), but also because the majority of these does not know this fact, what becomes them an important link in the chain of transmission viral, perpetuating the illness. The majority of the chronic bearers of hepatitis C takes knowledge of his pathological situation upon donating blood. This was a cross sectional study, which analyzed the data of all of the blood donors of the Center of Hematologia and Hemoterapia of Florianópolis, Santa Catarina (HEMOSC) between the years 2000 to 2004. The main objective of this study was estimate the prevalence of the anti-HCV, their associated factors. In addition, we investigate the existence of co-infection of the HCV with others infectious agents in the donation of blood. Among 120.493 donations carried out in the period it was found a anti-HCV of 0,211% (IC 95% 0,209-0,213) It was observe a reduction during the studied period. The seropositivity for the anti-HCV was associated to the male sex, age over 23 years, basic schooling and less than eight donations in the HEMOSC. It was identified that 25,4% of the cases presented co-infections. The mains contamination pathways was transfusions and drugs abuse. The study shows that the blood donors of the HEMOSC are displayeds to the virus of the hepatitis C and this must be known to improve transfusional security.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências de Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T08:30:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 290033.pdf: 1558107 bytes, checksum: 8a5b4bd35386d9821f8ba0bc31cf786a (MD5) / As hepatites virais são doenças causadas por vírus de etiologia distintas, com tropismo específico pelo tecido hepático. As infecções causadas pelos vírus da Hepatite B (HBV) e da Hepatite C (HCV) são consideradas problemas de saúde pública, haja vista que em todo mundo, cerca de 400 milhões de pessoas estão infectadas pelo HBV e 200 milhões pelo HCV. O objetivo deste estudo foi verificar a prevalência dos marcadores de infecção e de imunização pelo HBV e do marcador de infecção pelo HCV em adolescentes com idade entre dez e quinze anos, estudantes do ensino fundamental na cidade de Lages - SC. A pesquisa foi realizada com 439 voluntários no período de setembro de 2009 a agosto de 2010 através de coleta de sangue e aplicação de questionário. Os resultados evidenciaram prevalência de 0% para o anti-HCV e HBsAg, 0,91% para o anti-HBc, e 92,48% ao anti-HBs; A cobertura vacinal contra o HBV foi de 99,77%. Cerca de 56% dos voluntários não souberam definir hepatite, porém a maioria (70,84%) identificou a vacina contra o HBV como forma de prevenção da infecção. Enquanto 61,73% dos voluntários acreditam que a transmissão ocorra através do contato com sangue ou secreções contaminadas enquanto 30,30% desconhecem as formas de transmissão. Observou-se ainda que 27,10% dos voluntários já estiveram internados, todavia apenas 2,05% receberam transfusão sangüínea. Dentre os voluntários, 11,62% possuem body piercing e/ou tatuagem. De acordo com os resultados obtidos concluiu-se que a circulação do HBV e HCV na cidade de Lages é baixa, e que há necessidade de implantação de programas educacionais dirigidos ao tema.

Tese (doutorado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2012 / Inclui bibliografias / Introdução: O Líquen Plano Bucal (LPB) é uma doença inflamatória crônica. Estudos confirmaram associação entre LPB e Vírus da Hepatite C (VHC). A avaliação das Regiões Organizadoras Nucleolares (NORs) em lesões bucais reflete o índice proliferativo celula

INTRODUÇÃO: Foi recentemente sugerido que a suscetibilidade à fibrose hepática, induzida pelo HCV, está relacionada a genes que regulam a apoptose. OBJETIVOS: Este trabalho visa elucidar a possível interação entre apoptose, inflamação e fibrose em pacientes com hepatite crônica C (HCC). MATERIAL E MÉTODOS: Pacientes com HCC, monoinfectados, com idade entre 18 a 60 anos, foram incluídos e submetidos a exames clínico e histopatológico. Aqueles com insuficiência renal crônica, neoplasias malignas, abuso de álcool, gravidez e/ou uso de imunossupressores foram excluídos. Foram determinados o índice de massa corporal, glicose, insulina, HOMA-IR, perfil lipídico, fibrose (METAVIR), níveis séricos de CK-18 (M30-Apoptosense, ELISA - Lausen, Switzerland), Fas, Fas-L, I-CAM, V-CAM, MIF, PAI (HSEP-63k, Milliplex, Millipore, Copenhagen, Denmark). RESULTADOS: Cinquenta e cinco pacientes foram incluídos, 23 deles eram virgens de tratamento. Dos pacientes que receberam tratamento antiviral, 15 obtiveram resposta virológica sustentada (RVS) e 17 foram não respondedores (NR). A inflamação, avaliada pelo sVCAM foi diretamente associada à fibrose avançada (p = 0,009). Além disso, níveis de apoptose mensurados pelo sFas-L e inflamação mensurados através do sVCAM foram mais elevados no grupo RVS em relação aos virgens de tratamento (p = 0,006 e 0,019, respectivamente). sVCAM correlacionou-se tanto com o sFas-L (rs = 0,778, p < 0,001) quanto com o MIF (rs = 0,621, p < 0,001). MIF e sFas-L também apresentaram correlação positiva (rs = 0,526, p = 0,001). CK-18 não diferiu entre os grupos. CONCLUSÃO: Fibrose avançada teve uma correlação positiva com a inflamação, mensurada pelo sVCAM, mas não foi associada a marcadores de apoptose. Os níveis de apoptose via sFas-L e inflamação via sVCAM evidenciaram-se maiores em pacientes que eliminaram o vírus quando comparados a pacientes não tratados. MIF também revelou tendência a ter níveis mais elevados naqueles com fibrose avançada. / AIMS: HCV-related liver fibrosis was recently suggested to be linked to genes that regulate apoptosis. Our study aims to elucidate the possible crosstalk between apoptosis, inflammation and fibrosis in patients with HCV. METHODS: HCV monoinfected patients, aging from 18 to 60 years old were included and underwent clinical pathological examination. Those with chronic renal failure, malignancies, alcohol abuse, pregnancy and/or taking immunosuppressant agents, were excluded. Body mass index, glucose, insulin, HOMA-IR, lipid profile, and fibrosis (METAVIR) were determined as well as serum levels of CK-18 (M30-Apoptosense, ELISA - Lausen, Switzerland), Fas, Fas-L, I-CAM, V-CAM, MIF, and PAI (HSEP-63k, Milliplex, Millipore, Copenhagen, Denmark). RESULTS: Fifty-five patients were included, 23 of them naïve. From the antiviral-experienced patients, 15 had sustained virological response (SVR) and 17 were non-responders (NR). Inflammation as assessed by sVCAM was directly associated to advanced fibrosis (p=0.009). As well the levels of apoptosis via sFas-L and inflammation via sVCAM both were increased in SVR group in comparison to naïve (p=0.006 and 0.019, respectively). sVCAM correlated both with sFas-L (rs=0.778, p < 0.001) and MIF (rs = 0.621, p < 0.001). MIF and sFas-L also displayed a correlation (rs=0.526, p=0.001). CK-18 did not differ among the groups. CONCLUSION: Advanced fibrosis had a positive correlation with inflammation by sVCAM, but was not associated with apoptosis markers, while levels of apoptosis via sFas-L and inflammation via sVCAM were increased in patients who cleared the virus when compared to naïves. MIF also showed a tendency to have higher levels those with advanced fibrosis.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Objetivo: Detectar a prevalência da hepatite C nas unidades de diálise em Maceió. Métodos: 569 pacientes com Doença Renal Crônica (DRC) em programa regular de hemodiálise (HD) em 6 clínicas de diálise foram incluídos. A análise laboratorial constou da pesquisa do anticorpo do vírus da hepatite C (anti-HCV) ELISA-3ª (ensaio imunoenzimático de 3ª geração) nos pacientes. Nos casos positivos para o anti-HCV, foi realizada a transcrição reversa seguida da amplificação do c-DNA em cadeia RT-PCR (HCV-RNA). Resultados: Detectaram-se 66/569 pacientes com sorologia positiva, o que corresponderia a uma prevalência de 11,6%, porém, quando realizamos a RT-PCR nos pacientes com anti-HCV positivo, o percentual da viremia encontrada é de 39,5% (26/66). Conclusões: O anti-HCV, por sua sensibilidade e baixo custo, deve ser realizado entre os portadores de DRC como teste para screening e que a RT-PCR, por ser um exame de maior especificidade, deve ser usado para a confirmação de resultados positivos e verificação de falsopositivos encontrados no ELISA-3ª. / Purpose: The objective of this study was to detect the prevalence of hepatitis C in the units of dialysis in Maceió. Methods: 569 patients with Doença Renal Crônica (DRC) in regular program of hemodiálise (HD) in 6 clinics of dialysis had been enclosed. The laboratorial analysis consisted of the research of the antibody of the virus of hepatitis C (anti-HCV) ELISA-3ª (imuno-enzymatic assay of 3ª generation) in the patients. In the positive cases for anti-HCV, reversa followed of the amplification of cDNA in chain RT- PCR was carried through the transcription (HCV-RNA). Results: 66/569 patients with positive sorologia had detected themselves, what she would correspond to a prevalence of 11,6%, however, when we carry through the RT-PCR in the patients with anti-HCV positive, the percentage of the joined viremia is of 39,5% (26/66). Conclusions: We conclude that the RT-PCR, for being an examination of bigger especificidade, must be used for the confirmation of positive results and verification of false-positives found in the ELISA-3ª. However, anti-HCV, by its sensitivity and low cost, must be carried through enters the DRC carriers as test for screening. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-19T21:21:54Z No. of bitstreams: 1 Hermes Pedreira EStudo molecular dos vírus B e C...2010.pdf: 5589974 bytes, checksum: b86706272dbb22d0d349edae7d641ce1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-19T21:21:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hermes Pedreira EStudo molecular dos vírus B e C...2010.pdf: 5589974 bytes, checksum: b86706272dbb22d0d349edae7d641ce1 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Infecções pelos vírus B e C das hepatites constituem um significante problema de saúde pública em todo mundo. Mais de 350 milhões de pessoas estão cronicamente infectadas pelo VHB e 170 milhões pelo VHC. No Brasil, a prevalência de pessoas infectadas pelo VHB varia de baixa endemicidade (<2%) até alta, (>7%), e estima-se que 1,5% da população esteja infectada pelo VHC (WHO). Estudos recentes tem demonstrado consideráveis variações entre os isolados do VHB, confirmando a diversidade de genótipos do vírus circulantes e o surgimento de mutações no genoma viral que podem ter impacto na resposta terapêutica e imune. Informações sobre a diversidade genética do VHB serão de grande valor para determinar fatores de risco associados a disseminação do vírus e auxiliar na adoção de medidas de prevenção e terapêutica. A infecção pelo VHC tornou-se um sério problema de saude pública desde que não existe uma vacina disponível e o tratamento é extremamente caro para os órgãos públicos como desgastante para o paciente. Este trabalho utilizou as ferramentas moleculares e de epidemiologia no estudo destes vírus para caracterizar molecularmente os vírus B e C das hepatites nas Regiões Norte e Nordeste, particularmente na Bahia, através de sequenciamento de DNA e análises filogenéticas. Amostras de pacientes provenientes da Bahia, Acre, Rondonia, Amazonas, Maranhão e Tocantins foram analisadas. As amostras foram oriundas de outros estudos e de centros de referência para tratamento das hepatites, sendo avaliadas 635 amostras para o VHC e 335 de VHB. Sequencias das regiões pré-S/S e pré- Core/Core do VHB e NS5b, 5UTR, E1 e Core do VHC foram utilizadas para classificação genotípica e análise filogenetica. Os genótipos mais frequentes para o VHB foram A (57%), D (10%) e F(33%) na Bahia e nas amostras da região Norte. Nós encontramos em nosso estudo 55,6% de pacientes co-infectados com VHB/Delta. Não foi possível estabelecer uma ligação genótipo específico com a evolução da infecção, e determinar a presença de mutantes relacionados à resposta terapêutica e ao escape imunológico. Com relação ao VHC, a subtipagem dos isolados foi realizada através do sequenciamento da região NS5b e 5UTR (n=230). Os sub-genótipos mais frequentes foram 1a(45,6%), 1b (46,9%), 3a (6,5%) e 2a/b(0,8%). As regiões E1 e Core também foram sequenciadas e no futuro serão utilizadas para avaliar possiveis mutações. O presente estudo mostra que a aplicação de protocolos de sequenciamento, bioinformática e filogenia são indispensáveis para a compreensão da epidemiologia molecular dos vírus das hepatites. / Infections with hepatitis B and C viruses constitute a significant public health problem worldwide. More than 350 million people are chronically infected with HBV and 170 million by HCV. In Brazil, HBV remains endemic despite widespread vaccination with prevalence of infection ranging from (<2%) low endemicity, until high (>7%) in different regions. Prevalence of HCV infection in Brazil has been estimated at 1.5%. Recent studies have shown considerable genetic variation among HBV isolates, confirming the diversity of circulating genotypes of the virus and the emergence of mutations in the viral genome that may impact on therapeutic and immune response. Information on the genetic diversity of HBV is useful for molecular epidemiology to determine risk factors associated with the spread of the virus and to inform prevention strategies and for monitoring therapy. Because there is no vaccine available to prevent HCV infection and treatment is extremely expensive for public agencies, HCV is an emerging public health problem. The treatment efficiency is directly related to viral genotype. In this study molecular epidemiology tools were used to characterize HBV and HCV in the North and Northeast, particularly in Bahia, through DNA sequencing and phylogenetic analysis. Samples from Bahia, Acre, Rondônia, Amazonas, Maranhão and Tocantins were analyzed. The samples were collected in collaboration with other studies and centers of references for hepatitis treatments. 635 samples from HCV infected patients and 335 samples from HBV infected were evaluated. Sequences of the regions pre-S / S, HBV core / pre-core, NS5B, 5UTR, HCV Core and E1 were used for genotypic classification and phylogenetic analysis. The most frequent HBV genotypes were A (57%), D (10%) and F (33%) in Bahia and in the samples from the North region. Fifty five percent of the patients from Rondônia were coinfected with HBV and HDV. In this study, we were unable to establish a connection with the particular genotype evolution of the infection and determine the presence of mutants related to therapeutic response and immune escape. In the North region co-infection with HBV genotype F and D virus is strongly associated with poor outcome of the disease as informed by the physicians and literature. Regarding HCV, the subtyping of isolates was performed by sequencing the NS5B region and 5UTR (n=230). The sub-genotypes more frequent were 1a (45.6%), 1b (46.9%), 3a (6.5%) and 2a / b (0.8%). The Core and E1 regions were also sequenced and in the future could be used to evaluate possible mutations. This study shows that the implementation of protocols for sequencing, bioinformatics and phylogenetic are essential for understanding the molecular epidemiology of hepatitis.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-29T20:58:12Z No. of bitstreams: 1 Sidelcina Rugieri Pacheco Prevalencia de enfecção pelo virus da hepatite c....pdf: 867639 bytes, checksum: 379cd008d8b47ad5e4f6b594cffcdace (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-29T20:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sidelcina Rugieri Pacheco Prevalencia de enfecção pelo virus da hepatite c....pdf: 867639 bytes, checksum: 379cd008d8b47ad5e4f6b594cffcdace (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Os indivíduos com anemia falciforme são considerados como pertencentes aos grupos de risco para infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) pós-transfusional, sobretudo, antes da implantação da triagem sorológica nos bancos de sangue, que no Brasil ocorreu em 1993. O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência de infecção e os genótipos do VHC circulantes nos pacientes com anemia falciforme, bem como avaliar a contribuição de outros fatores de risco para a aquisição do VHC e a possível associação do VHC com as manifestações clínicas da doença de base. Os pacientes com anemia falciforme atendidos no ambulatório multidisciplinar da HEMOBA foram convidados a participar do estudo, mediante assinatura do TCLE e resposta a um questionário clínico-epidemiológico individual. O diagnóstico laboratorial do VHC foi realizado através de ELISA de 4. geração para o anticorpo anti-VHC pela HEMOBA e a confirmação da infecção e genotipagem do RNA do VHC (VHC-RNA) nas amostras soropositivos para o anti-VHC através de técnicas de biologia molecular no LACEN-BA. Dados adicionais, tais como, histórico clínico e resultado de exames sorológicos e bioquímicos foram obtidos através da revisão de prontuários. Entre janeiro de 2009 e setembro de 2010, 585 pacientes com anemia falciforme foram incluídos no estudo. A média de idade foi de 21,1 ± DP 13,1 anos (1 - 65 anos). Trinta e sete pacientes com anemia falciforme apresentaram soropositividade para anti-VHC, que representa uma soroprevalência global de 6,4% (IC 95% 4,4 – 8,3 %). A soroprevalência foi associada com residência na Região Metropolitana de Salvador (RMS), período da primeira transfusão, número de transfusões e utilização de seringa não descartável (p<0,05), mas não foi encontrada associação com sexo, compartilhamento de utensílios domésticos ou uso de drogas. Entre os menores de 17 anos a soroprevalência foi de 1,5 % semelhante à prevalência na população em geral. A prevalência de infecção confirmada pela detecção do VHC RNA foi de 3,3 % (21/583) (IC 95% 2,1 – 5,1%). O genótipo 1 do VHC foi predominante, presente em 76,2%, seguido do genótipo 3, presente em 23,8% dos pacientes com anemia falciforme. O HTLV I/II foi encontrado em 2,6 % e a co-infecção com VHC chegou a 53,3%. Não foram encontrados casos de HIV. A infecção pelo VHC demonstrou associação significativa com manifestações clinicas da anemia falciforme como dactilite e osteonecrose. A anemia falciforme determina alterações em vários marcadores de avaliação do perfil hepático, entretanto, apenas elevações de TGP foram associadas com a infecção pelo VHC. Foi observado nesse estudo que o risco de infecção pelo VHC em pacientes com anemia falciforme foi reduzido desde a implantação da triagem sorológica, porém um risco residual ainda existe. / People affected by sickle cell anemia are considered at risk for post-transfusional hepatitis C virus (HCV) infection, especially prior to the implementation of serological screening tests in blood banks such as those that occurred in Brazil in 1993. The impact of this control measure and the possible interaction between hepatitis C and severity of sickle cell disease are unknown. We aim to determine the prevalence of infection and HCV genotypes circulating among patients with sickle cell anemia, to assess the contribution of other risk factors to the occurrence of new infections and to investigate the possible effect of HCV on the underlying disease severity. Sickle cell anemia outpatients who attended the multidisciplinary clinic from HEMOBA were invited to participate in the study, required to sign the informed consent waiver and answer an individual clinical-epidemiological questionnaire. HCV laboratory diagnosis was performed in HEMOBA using ELISA 4.generation to detect the anti-HCV antibody. Infections were confirmed and genotyped for the anti-HCV positive samples in LACEN-BA with molecular biology techniques. Additional data such as clinical history and examination results were obtained by reviewing patient’s charts. Between January 2009 and September 2010, 585 sickle cell anemia were included. The mean age was 21.1 ± 13.1 years (1-65 years). Thirty-seven sickle cell anemia showed seropositivity for anti-HCV, which represents an overall seroprevalence of 6.4% (95% CI 4.4 to 8.3%). The seroprevalence was associated with residence in the Metropolitan Region of Salvador (RMS), the time of first transfusion, number of transfusions and use of disposable syringe (p <0.05) but was not associated with sex, sharing domestic utensils or drug use. Among those younger than 17 years the prevalence was 1.5% similar to the prevalence in the general population. Blood transfusion was the only risk factor identified in this group. The prevalence of HCV infection confirmed by detection of HCV-RNA was 3.3% (21/583) (95% CI 2.1 to 5.1%). The HCV genotype 1 was predominant, it was present in 76.2%, followed by genotype 3, 23.8%. HTLV I / II was sickle cell anemia and HCV co-infection reached 53.3%. HIV infections were not reported in this study group. HCV infection showed a significant association with clinical manifestations of sickle cell disease and dactylitis and osteonecrosis. Sickle cell anemia causes alterations in several markers for assessing the hepatic profile, however only ALT was associated with HCV infection. Risk of HCV infection in sickle cell anemia was reduced after the implementation of serological screening, but residual risk remains.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:40:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 brunna_marques_ioc_mest_2013.pdf: 2715065 bytes, checksum: aaa9be9dc694a52d7bf82b8c0cd65be7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O diagnóstico da infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) é feito pela detecção de marcadores sorológicos e moleculares, porém o custo destas metodologias é bastante elevado e a coleta de sangue para a realização destes ensaios além de requerer pessoal treinado, é difícil em áreas remotas ou com poucos recursos. O objetivo deste estudo foi otimizar protocolos e padronizar métodos de diagnóstico molecular para infecção pelo HCV em amostras de sangue coletado em papel de filtro (SPF) para facilitar o acesso ao diagnóstico em áreas remotas ou com recursos limitados. Para isto, 99 indivíduos forneceram amostras pareadas de soro e SPF, dentre os quais 59 eram anti-HCV reagente e 40 eram não reagentes em suas amostras de soro. As amostras anti-HCV reagentes foram submetidas à técnica de quantificação comercial. Para o desenvolvimento da RT-PCR quantitativa (RT-qPCR) in house, uma curva padrão interna foi construída utilizando um plasmídeo contendo o inserto do HCV e iniciadores e sonda foram desenhados para a região 5´NC do HCV. Para otimização da técnica, a concentração de cDNA, transcriptase reversa e números de ciclos de reação foram avaliados. Para a extração de RNA de HCV em amostras de SPF, sete métodos foram avaliados. A sensibilidade, especificidade, correlação, reprodutibilidade e presença de inibidores da RT-PCR quantitativa também foram determinados. O conjunto de QIAamp DNA Mini Kit foi o método mais eficiente para extração do RNA do HCV em SPF. A RT-qPCR in house desenvolvida foi capaz de quantificar o HCV no soro de 44 amostras onde a mediana de carga viral foi inferior aquela observada na técnica comercial (log10 4,94 e log10 6 cópias de HCV/mL, respectivamente). A faixa de detecção do método in house foi de 10 a 109 cópias de HCV por reação Para a detecção de HCV em SPF foi necessário o aumento da transcriptase reversa e de cDNA, permitindo que 35 amostras fossem detectadas com um limite mínimo de detecção igual a 58,5 cópias/mL e a mediana de carga viral foi semelhante à observada nas respectivas amostras de soro avaliadas pela técnica comercial (log10 5,38 e log10 5,89 cópias de HCV/mL, respectivamente). Obteve-se boa reprodutibilidade da RT-qPCR in house através da análise da curva padrão e de amostras de soro e SPF. Não foi observada a presença de inibidores de reação utilizando o GAPDH como controle interno. Quando comparado com a metodologia comercial, a RT-qPCR apresentou sensibilidade de 74,58% (IC95% 61,5-85,0) em soro e 59,3% (IC95% 45,7-71,9) em SPF, e a especificidade foi igual a 100% para ambos espécimes. Quando a RT-qPCR foi avaliada entre os dois espécimes clínicos, a sensibilidade da técnica em SPF foi igual a 65,9% (IC95% 50,0-79,5) e a especificidade foi igual a 100%. Quarenta e cinco amostras de soro e quinze amostras de SPF foram amplificadas na RT-PCR qualitativa, onde 43 amostras de soro e 11 amostras de SPF foram sequenciadas. Entre as amostras de soro, 29 foram classificadas como subgenótipo 1b, 13 como subgenótipo 1a, 1 como genótipo 3. Entre as amostras de SPF, 9 foram classificadas como subgenótipo 1b e 2 como subgenótipo 1a. Foi observada alta homologia nucleotídica entre as sequencias de HCV das amostras pareadas de soro e SPF onde todas foram classificadas como genótipo 1. Conclui-se que o sangue em papel de filtro pode ser utilizado para detecção, quantificação e análise filogenética do HCV, sendo uma ferramenta promissora para estudos de epidemiologia da hepatite C / The d iagnosis of hepatitis C virus (HCV) infection is made by detection of molecular and serologic al markers, but the cost of these methodologies is quite high and blood sample collection requires trained personnel what it is difficult in remote areas or prese nting few resources. The aim of this study was to optimize protocols and standardize molecular diagnostic methods for HCV infection in dried blood samples (DBS) to facilitate access to diagnosis in remote areas or with limited resources. For this, 99 indiv iduals provided paired serum and DBS samples , where 59 of them were anti - HCV rea ctive and 40 were non - reactive in their serum samples. A nti - HCV positive samples were subjected to commercial quantification technique. For the development of quantitative RT - P CR (RT - qPCR) in house, an internal standard curve was constructed using a plasmid containing the insert and HCV primers and probe designed for the 5' non coding ( NC ) region of HCV. For optimization of these technique s , the concentration of cDNA, reverse tr anscriptase and numbers of cycles of reaction were evaluated. For the extraction of HCV RNA in DBS samples, seven methods were evaluated. The sensitivity, specificity, correlation, reproducibility and presence of inhibitors in quantitative RT - PCR were also determined. Q IAamp DNA Mini Kit was the most efficient method for HCV RNA extraction among DBS samples . The in house RT - qPCR was able to quantify HCV among 44 serum samples where the median viral load was lower than that observed in commercial technique ( 4.94 log 10 and 6 log 10 copies of HCV / mL, respectively). The range of HCV detection using in house RT - qPCR was 10 - 10 9 copies of HCV per reaction. For HCV detection in DBS , it was necessary to increase reverse transcriptase and cDNA concentration giving 35 HCV RNA reactive samples with a limit of detection equal to 58.5 copies of HCV / m L and the median viral load was similar to that observed in their sera evaluated by commercial technique (5.38 log 10 and 5.89 log 10 copies of HCV / mL, respectively). In hous e RT - qPCR presented good reproducibility using standard curve and paired DBS and sera samples . It was not observed the presence of inhibitors of the reaction using GAPDH as internal control. In house RT - qPCR showed a sensitivity of 74.58% (95% CI 61.5 to 8 5.0) in serum and 59.3% (95% CI 45.7 to 71.9) in DBS, and the specificity was 100% for both specimens compared to the commercial methodology . When the RT - qPCR was evaluated in two clinical specimens, the sensitivity of the technique in DBS was equal to 65. 9% (95% CI 50.0 to 79.5) and specificity was 100%. Forty - five serum samples and 15 DBS samples were amplified in qualitative RT - PCR, where 43 serum samples and 11 DBS samples were sequenced. Among the serum samples, 29 were classified as HCV subgenotype 1b , 1 3 as subgenotype 1a, genotype 1 and 3. Among DBS samples, 9 were 9 classified as HCV subgenotype 1b and 2 as HCV subgenotype 1a. HCV nucleotide sequences presented high homology between paired DBS and sera samples and all of them were classified as geno type 1. It is conclude that dried blood spot may be used for detection, quantification and phylogenetic analysis of HCV and it is a promising tool for studying the epidemiology of hepatitis C