Orientador: Luis Octavio Regasini / Coorientadora: Paula Rahal / Banca: Rafaela Salgado Ferreira / Banca: Fatima Pereira de Souza / Resumo: Chalconas são flavonoides de cadeia aberta, apresentam diversas atividades biológicas e podem ser sintetizadas por várias metodologias, principalmente pela condensação de Claisen-Schmidt. A Hepatite C se apresenta como uma doença de grande incidência na população mundial, e dependendo de seu grau, pode levar a carcinoma hepatocelular. A paracocidioidomicose, uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis, tem grande incidência no Brasil, principalmente em pessoas imunodeprimidas, sua forma aguda pode levar a comprometimentos de órgãos como baço e fígado. A mieloperoxidase (MPO) é uma enzima essencial na resposta imune contra a invasão de patógenos. No estresse oxidativo a atividade clorinante de MPO tem um aspecto negativo, pois está correlacionada a disfunções endoteliais. O presente trabalho teve como objetivo a síntese de três séries de aminochalconas e seus análogos arílicos, com grupos amino nas posições 2', 3' e 4' (anel A), substituintes doadores e aceptores de elétrons no anel B. A fim de avaliar seus efeitos de acordo com as posições dos grupos amino e do bioisosterismo de anel, essas substâncias foram testadas quanto à capacidade de inibição de replicação do HCV, de inibição do crescimento de P. brasiliensis, e da inibição da atividade clorinante de MPO. As substâncias foram sintetizadas com rendimentos altos, uma vez que para 79% das substâncias foram superiores a 75%. A substância LQVM 22 foi capaz de inibir a replicação do HCV em 41%, a 2 µmol L-1. As substâncias LQVM 16 e LQVM 17 demonstraram potente atividade anti-P. brasiliensis, exibindo valores de CIM90 de 0,49 µg mL-1. A substância LQVM 20 foi um potente inibidor da atividade clorinante de MPO, apresentando CI50 de 0,34 µmol L-1. Nossos estudos químicos e biológicos de aminochalconas e seus análogos arílicos conduziram a descoberta de hits, valiosos protótipos... / Abstract: Chalcones are open chain flavonoids. They show a broad range of biological activities. These compounds can be synthesized by several methodologies, mainly by ClaisenSchmidt condensation. Hepatitis C is a disease of great incidence in worldwide population, and according to its severity can lead to hepatocellular carcinoma. Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis, and has a great incidence in Brazil, in imunodefficient pacients, its acute form can lead to commitment of organs such as spleen and liver. Myeloperoxidase (MPO) is an essential enzyme in imune response against patogen invasion. However, the MPO activity has been correlated with some endotelial disfunctions. The present work aimed the synthesis of three series of aminochalcones and the aryl analogues, with amino group at positions 2', 3' and 4' (ring A), and with donors and withdraw electron substituents on B ring. In order to evaluate the effects of the different positions of amino groups and the ring bioisosterism, these substances were evaluated for the inhibition of HCV replication, P. brasiliensis growth and clorinating MPO activity. The substances were synthesised with high yields, once 79% showed yield above 75%. Compound LQVM 22 was able to inhibit HCV replication in 41 %, at 2 µmol L-1. Compounds LQVM-16 and LQVM-17 demonstrated potent anti-P. brasiliensis activity, exhibiting MIC90 values of 0,49 µg mL-1. Compound LQVM-20 was the potentest inhibitor of MPO chlorinate activity, showing IC50 of 0,34 µmol L-1.Our chemical and biological studies of aminochalcones, and their aryl analogues led to the discovery of hits, which are valuable prototypes to developing of innovatives therapeutical agents... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T18:50:10Z : No. of bitstreams: 1 levada_pm_me_botfm.pdf: 689725 bytes, checksum: c63e816ca9e037b70a0ce24e2abf22a3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Empresa Privada / Secretaria do Estado da Saúde de São Paulo / A identificação dos diferentes genótipos e subtipos do VHC tem sido útil para o entendimento da evolução da doença e da epidemiologia do vírus em relação a fatores de risco. Atualmente, os métodos de genotipagem assim como a região do genoma viral a ser utilizada constituem temas de discussão. O presente trabalho teve por objetivo comparar a metodologia de hibridização reversa (kit comercial INNO-LiPAÒ v1.0) ao seqüenciamento direto das regiões 5´UTR, NS5B e core do genoma do VHC. Foram utilizadas 92 amostras de plasma de pacientes do Ambulatório de Hepatites da Disciplina de Gastroenterologia Clínica da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP). Dentre as 92 amostras constituintes deste trabalho, 64 foram selecionadas aleatoriamente e 28 foram escolhidas segundo a genotipagem prévia realizada com o kit INNO-LiPAÒ v.1.0. Dentre estas 28 amostras escolhidas, 10 foram genotipadas como 1a/1b, 2 como 2, 2 como 5, 7 apenas como 1 e 7 foram inconclusivas para a genotipagem com o kit comercial. A genotipagem por seqüenciamento direto foi efetuada seguindo as etapas de: extração do RNA viral, transcrição reversa, amplificação das regiões 5´UTR, NS5B e 5´UTR-core por Nested-PCR, reação de marcação fluorescente e eletroforese em aparelho automático ABI 377 (Applied Biosystems). Todas as amostras puderam ser amplificadas para a região 5´UTR e 62 para NS5B. Para as 30 amostras que não puderam ser amplificadas para NS5B foi realizada a amplificação da região 5’UTR-core que se mostrou eficiente na amplificação de 28 (93%) das amostras. A análise de seqüência permitiu uma maior precisão na classificação viral. O seqüenciamento direto foi eficaz na solução de 100% dos resultados inconclusivos pela metodologia de hibridização reversa. Assim como já reportado na literatura o kit comercial INNO-LiPAÒ v.1.0 produziu resultados errôneos com... / The HCV genotypes and subtypes identification has been useful to understand the disease evolution and viral epidemiological regarding risk factors. Recently, the genotyping methods and viral genomic region used in viral typing have been very discussed in scientific community. The goal of this study was to compare the reverse hybridization methodology and sequencing of the HCV genomic regions 5´UTR, NS5B and core. Ninety-two plasma sample with viral RNA detected from patients assisted in the Department of Internal Medicine – Gastroenterology Division, Botucatu Medical School, University of São Paulo State - UNESP were used in this study. From these 92 samples, 64 were randomly selected and 28 choose according genotyping result by reverse hybridization. The genotyping by reverse hybridization were performed with INNO-LiPAÒ v.1.0, according manufacturer's instructions. To genotyping by sequencing viral RNA isolated from plasma samples was used as a source for RT-PCR amplification and automatic sequencing in ABI 377 sequencer (Applied Biosystems). All samples were amplified to 5’UTR genomic region and 62 to NS5B. From 30 samples that showed insucess in NS5B amplification, 28 (93%) were amplified to 5’UTR-core region with efficiency. The genotyping by sequencing allowed more precision in viral classification. The sequencing showed efficient in the resolution of the 100% of cases inconclusive by reverse hybridization. The genotyping by INNOLiPA Ò v.1.0 showed wrong results in relation of viral subtyping, corroborating previous results of the scientific literature. The sequencing also demonstrated at least a change of viral genotype when compared with INNO-LiPAÒ v.1.0, result that could influence the therapeutic decision, turning questionable the INNO-LiPAÒ v.1.0 efficiency to determine the viral genotypes, too.

Made available in DSpace on 2016-11-30T14:53:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 111823_Thais.pdf: 520140 bytes, checksum: f710ce21a648a6cd5a8a9eabfc2ba506 (MD5) license.txt: 214 bytes, checksum: a5b8d016460874115603ed481bad9c47 (MD5) Previous issue date: 2015 / A hepatite C foi descoberta em 1989 e até o presente momento, não há diretrizes formais para a avaliação da adesão ao tratamento do HCV. Estudos sobre as taxas de adesão aos antirretrovirais nos paciente HIV levaram ao desenvolvimento de muitas intervenções eficazes nos pacientes no intuito de melhorar a adesão ao tratamento. Objetivo: Verificar a adesão ao tratamento da hepatite C e em pacientes atendidos no ambulatório de infectologia do Hospital Nereu Ramos em Florianópolis (SC). Métodos: Estudo transversal, com 123 pacientes em tratamento farmacológico para hepatite C, sendo incluídos todos os pacientes em tratamento no período do estudo. Para avaliação da adesão ao tratamento medicamentoso da Hepatite C, foi aplicado o questionário Morisky-Green. As variáveis qualitativas foram apresentadas em valores absolutos e relativos. As quantitativas em valores de tendência central e de dispersão. Para verificar a associação entre as variáveis qualitativas serão utilizados o testes de Qui-quadrado de Pearson e o teste t de Student. A Razão de prevalência foi calculada utilizando a Regressão de Poisson modificada. Resultados: Foram avaliados 123 pacientes em tratamento para hepatite C. Do total 89 (72,4%) eram do sexo masculino, com média de idade de 51,7 (DP=9,4) anos. Com relação ao questionário Morisky-Green verificou-se que 96 (78%) dos pacientes não aderiram ao tratamento. Os fatores que mais interferiram na adesão foram o esquecimento de tomar a medicação, 50 (40,6%) e o fato de se sentirem incomodados ao seguir corretamente o tratamento, 66(53,65%). Dos 34 pacientes que realizaram o teste de resposta virológica sustentada para avaliar a carga viral, 30 apresentaram resposta virológica sustentada, ou seja, carga viral indetectável, enquanto que quatro pacientes permaneceram com carga viral detectável. Conclusão: Conclui-se que a adesão ao tratamento de Hepatite C é baixa, necessitando de acompanhamento de equipe multidisciplinar para melhorar o tratamento. Apesar disto, dos pacientes que realizam o tratamento completo, a maioria apresenta carga viral indetectável após seis meses de tratamento. / Although hepatitis C virus (HCV) was discovered in 1989, no formal guidelines for the evaluation of adherence to treatment have been issued so far. Studies on adherence rates to antiretroviral therapy in people living with HIV have led to the development of many effective interventions to improve patient adherence to treatment. Objective: To assess adherence to HCV therapy among patients treated at the Infectious Diseases Clinic of the Hospital Nereu Ramos in Florianópolis, Santa Catarina, Brazil. Methods: A cross-sectional study on 123 patients undergoing pharmacological treatment for HCV was performed, which included all patients admitted during the study period. The Morisky-Green questionnaire was administered to assess compliance with HCV therapy. Qualitative variables were presented as absolute and relative values, whereas quantitative variables, as central tendency and dispersion. Pearson¿s chi-square test and the Student's t test were used to assess the correlation between qualitative variables. Prevalence ratios were estimated using the modified Poisson regression. Results: We evaluated 123 patients undergoing HCV treatment, of whom 89 (72.4%) were male, with a mean age of 51.7 (SD = 9.4) years. The Morisky-Green questionnaire revealed that 96 (78%) patients did not adhere to treatment. Factors affecting adherence included forgetting to take medications (50, 40.6%) and feeling uncomfortable to comply with the treatment (66, 53.65%). Of the 34 patients who underwent SVR test to assess the viral load, 30 had sustained virologic response, i.e., undetectable viral load, while 4 patients remained with detectable viral load. Conclusion: We concluded that adherence to HCV treatment is low, requiring multidisciplinary team monitoring to improve treatment. Nevertheless, most patients who undergo the full treatment present undetectable viral load after six months of treatment.

Human immunodeficiencv virus (HIV) and hapatitis C virus (HCV) co-infection occurs in a significant number of cases, and can be explained bv transmission routes common to these viruses. Such as sexual contact. exposure to contaminadet blood. and vertical transmission. HIV/HCV co-infection accelerates the progression to AIDS and liver fibrosis in patients winth chronic hepatitis C. worsening the prognosis and clinicalcondition of both viral diseases. Objective : To identifv the risk factors associated with HCV co-infection in HIV-infected patients treated at the municipal public health service in three cities in southern santa Catarina. Methods: a paired case-control studv that included HIV- infected adults (controls) and co-infected with HCV (cases) bv using intentional (convenience) sampling was performed. individuals who agreed to participate bv consent underwent and interview in a private room. Medical records were reviewed to collect clinical and laboratorv data. Chi-square test was used to compare categorical variables and student test or Wilcoxon U-Mann-Whitnev test was used to compare continuous variables. Odds ratiosn (OR) werw calculated to determine the association between variables. and confidence intervals werw set at 95%. Variables with p<0.20 were included in the multivariate analvsis: variables with p<0.05 and/or those that werw significant in the adiustment model remained in the final model. Results: We studied 165 patients: 55 cases and 110 controls. Mean age was 43.6_+ 8.4 vears: 70,9% male. Living with or had lived with hapatitis C carrier had been arrested. tattooing. iniection drug use. blood transfusion and having iniection drug users (IDUs) as sexual partners were considered risk factors for HIV/HCV co-infection. After adiusting for confounding variables. living or had lived with HCV carrier [OR=22.9 (3.37 to 156.71)] blood transfusion [OR= 15.93(2.55 to 99.46)]. IDUs [OR= 14.65 (1.42 to 151.59)] and having IDUs as sexual partners [OR= 6.97(1.21 to 40.32)] werw independent risk factors for HCV infection in HIV-infected patients. Conclusion: the risk factors associeted with HIV/HCV co-infection werw living with HCV carriers. blood transfusion. IDUs and having IDUs as sexual partners. / Submitted by Rogele Pinheiro (rogele.pinheiro@unisul.br) on 2017-10-23T17:14:20Z No. of bitstreams: 1 106582_Valdete.pdf: 722452 bytes, checksum: e987cdb588276ba8bf81153178bccbfa (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2017-10-23T20:15:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 106582_Valdete.pdf: 722452 bytes, checksum: e987cdb588276ba8bf81153178bccbfa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T20:15:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 106582_Valdete.pdf: 722452 bytes, checksum: e987cdb588276ba8bf81153178bccbfa (MD5) Previous issue date: 2012-12-10 / Introdução: A coinfecção entre o vírus da imunodeficiência humana (HIV) e o vírus da hepatite C (HCV) ocorre em número considerável de casos e pode ser explicada pelas vias de transmissão comuns a esses vírus, tais como a sexual, vertical e sanguínea. A coinfecçao HIV/HCV acelera a progressão para a Aids e para a fibrose hepática em pacientes com hepatite C crônica, piorando o prognostico e a condição clinica destas doenças virais.Objetivo: identificar os fatores de risco associados à coinfecçao pelo HCV em pacientes infectados pelo HIV atendidos no serviço público municipal de três cidades do Sul de Santa Catarina. Métodos: Estudo caso-controle pareado por sexo e idade que inclui adultos infectados pelo HIV e HCV (casos - coinfectados) e apenas os infectados pelo HIV (moinfectados - controles) por amostragem intencional (conveniência). Os indivíduos que aceitaram participar mediante anuência foram submetidos à entrevista em ambiente reservado. Foram revisados os prontuários médicos para coleta de dados clínicos e laboratoriais. As variáveis categóricas foram comparadas pelos testes de qui-quadrado de Pearson e as contínuas pelo teste t de Student ou U de Wilcoxon-Mann-Whitnev. Para se determinar a razão de chance entre as variáveis foi calculado o odds ratio (OR) e respectivos intervalos de confiança (95%). Foram incluídas na analise multivariadas as variáveis que apresentaram valor de p<0.20, permanecendo no modelo final variáveis com valor de p<0.05 e/ou aquelas que desempenharem papel de ajustamento no modelo por regressão logística condicional. Resultados: Foram estudados 165 pacientes, sendo 55 casos e 110 controles. A média de idade foi de 43,6 ±8,2 anos de idade entre os casos e 43,7 ±8,6 anos de idade entre os controles, sendo 70,9% do sexo masculino em ambos os grupos. Morar ou ter morado com portador de hepatite C, ter sido preso, possuir tatuagem, uso de drogas injetáveis, transfusão sanguínea e parceiro sexual usuário de drogas injetáveis (UDI) foram considerados fatores de risco para a coinfecçao HIV/HCV. Após o ajuste das variáveis de confusão morar (ou) com portador de HCV [OR=22,99(3,37-156,71)], transfusão sanguínea [OR=15,93(2,55-99,46)], UDI[OR=14,65(1,42-151,59)]e parceiro sexual com história de UDI[OR=6,97(1,21-40,32)] foram fatores de risco independentes para à infecção pelo HCV em pessoas vivendo com HIV. Conclusão: Os fatores de risco associados à coinfecção HIV/HCV foram morar com portador de HCV, transfusão sanguínea, UDI e parceiro sexual UDI.

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-24. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:02Z : No. of bitstreams: 1 000865730_20170823.pdf: 924072 bytes, checksum: 32a501e812718e7fca544333e5a2d2e5 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-08-24T16:16:58Z: 000865730_20170823.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-08-24T16:17:46Z : No. of bitstreams: 1 000865730.pdf: 2241985 bytes, checksum: d8a659df5df4fb8c509cf7668652077a (MD5)

Submitted by FERNANDA CRISTINA WINCKLER null (fwinckler@fmb.unesp.br) on 2016-11-30T19:00:44Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL 30.11.16.pdf: 468887 bytes, checksum: 372ef2c27b73313e5608616205ed1d2e (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-12-02T16:28:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 winckler_fc_me_bot.pdf: 468887 bytes, checksum: 372ef2c27b73313e5608616205ed1d2e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-02T16:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 winckler_fc_me_bot.pdf: 468887 bytes, checksum: 372ef2c27b73313e5608616205ed1d2e (MD5) Previous issue date: 2016-10-19 / A hepatite C é uma doença infecciosa que torna-se crônica em cerca de 85% dos infectados que poderão desenvolver cirrose e carcinoma hepato celular. O tratamento antiviral em muitos dos pacientes não é eficaz, principalmente quando estes portam o genótipo 1 e fibrose avançada, a resposta inflamatória também desempenha seu papel sobre a resposta virológica sustentada (RVS) durante o tratamento com Interferon Peguilado (PegIFN) associado a Ribavirina (RBV). Nesse estudo nosso objetivo principal foi avaliar a influência da resposta inflamatória através de células e citocinas/quimiocinas sobre a resposta virológica do paciente em tratamento antiviral com terapia tripla. Incluimos pacientes com RNA VHC+, nunca tratados (naive), portadores do genótipo 1, ambos os sexos e com fibrose avançada F3 (n=6); F4 (n=21) candidatos ao tratamento em regime triplo. Os pacientes tiveram suas amostras coletadas e analizadas nas semanas 0 e 12 do tratamento e os seguintes parâmetros foram analisados: IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-α, IFN-γ, RANTES, MCP-1, MIG, IP- 10, através de citometria de fluxo (método CBA). Foram incluídos 15 voluntários saudáveis (grupo controle) e 27 pacientes que foram separados em G1(RVS) e G2 (não RVS), a taxa de RVS foi de 63%. Os pacientes com hepatite C crônica tiveram os níveis circulantes de IP10, MCP-1, MIG, RANTES, IL-8 e IL-6 mais elevados quando comparados com voluntários saudáveis, quando comparados G1xG2 os níveis de RANTES (p=0,04) e IL-6 (p=0,02) foram associadas com a RVS na semana 0, seus níveis eram mais baixos em G1, na semana 12 os níveis de RANTES (p=0,04) e IL-8 (n=0,01) foram associados com a RVS, seus níveis são mais elevados em G2, a comparação entre as semanas 0 e 12 mostrou que em G1 os níveis de IL6 (p= 0,02) e MCP-1 (p=0,001) apresentam associação com o tratamento e em G2 os parâmetros associados ao tratamento foram RANTES (p=0,05) e MCP-1 (p=0,01). Os resultados sugerem que, a citocina IL-6 e a quimiocina RANTES estão associadas com a RVS na semana 0. Na semana 12, RANTES assim como IL-8 influenciam na RVS durante terapia antiviral em regime triplo. Quando comparado semana 0 e 12 em pacientes RVS, a citocina IL-6 está associada ao tratamento. Em pacientes não RVS, RANTES esta associada ao tratamento e MCP-1 está associada ao tratamento independente da resposta obtida. / Hepatitis C is an infectious disease which becomes chronic in about 85% of infected people who can develop cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Antiviral therapy isn’t effective in many patients, especially when these patients are genotype 1 and have advanced fibrosis, the inflammatory response also plays a role on sustained virological response (SVR) during treatment with Pegylated (PegIFN) plus Ribavirin (RBV). The aim of this study was evaluate the influence of the inflammatory response by cells and cytocines/chemokines on the virologic response of the patients under antiviral treatment with triple therapy. We included patients with HCV RNA+, naive, genotype 1, both male and female and with advanced fibrosis F3 (n=6); F4 (n=21) for triple treatment regimen. Patients had their samples collected and analyzed at weeks 0 and 12 of treatment and the following parameters were analyzed: IL- 2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-α, IFN-γ RANTES, MCP-1, MIG, IP-10 by flow cytometry (CBA method). Control group of 15 healthy volunteers and 27 patients, who were separated into GI (SVR) and G2 (not SRV), were included, the SVR rate was 63%. Patients with chronic hepatitis C had higher circulating levels of IP10, MCP-1, MIG, RANTES, IL-8 and IL-6 compared with healthy volunteers, when G1xG2 were compared, levels of RANTES (p=0,040 and IL-6 (n=0,02) were associated with a SVR at week 0 and its levels were lower in G1; at week 12, levels of RANTES (p=0,04) and IL-8 (p=0,01) were associated with a SVR and its levels were higher in G2. The comparison between weeks 0 and 12 showed that, in G1, the IL6 levels (p = 0.02) and MCP-1 (p = 0.001) were associated with the treatment and in G2, the parameters associated with the treatment were RANTES (p = 0.05) and MCP-1 (p = 0.01). The results suggest that the cytocine IL-6 and chemokine RANTES are associated with SVR at week 0. At week 12, RANTES as well as IL-8 influence in SVR during antiviral therapy in triple regimen. When weeks 0 and 12 in patients SVR are compared, the cytocine IL-6 is associated with treatment. In non-SVR patients, RANTES is associated with treatment and MCP-1 is associated with independent treatment of the patient's response.

Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Isabel Maria Vicente Guedes de Carvalho Mello / Banca: Flora Maria de Campos Fernandes / Banca: Camila Malta Romano / Banca: Adriano Mondini / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Resumo: A Hepatite C é uma doença presente em todo o mundo. O vírus da Hepatite C (HCV), o agente etiológico dessa doença, é um vírus de RNA de fita simples positiva. Seu genoma codifica uma única poliproteína precursora que após processamento origina dez proteínas virais. A NS5A, uma das proteínas virais não estruturais, esta associada com a resposta ao tratamento baseado em Interferon, tratamento aprovado para Hepatite C no Brazil.O HCV tem uma alta taxa de mutação levando a uma alta variabilidade, fator importante para a evasão da resposta imune e a resposta ao tratamento. O objetivo deste trabalho foi analisar a evolução das quasiespécies antes, durante e após o tratamento em pacientes infectados com HCV genótipo 3a que apresentaram diferentes respostas ao tratamento. O RNA viral foi extraído, o cDNA sintetizado, a região NS5A amplificada e clonada e 15 clones de cada ponto de coleta foram seqüenciados. As sequências foram analisadas com relação a história evolutiva, diversidade genética e seleção. Nossas análises mostram que a população viral que persiste após o tratamento na maioria dos pacientes não respondedores está presente em amostras pré-tratamento sugerindo uma aptidão para evadir o tratamento. Ainda a maioria das amostras pré-tratamento de pacientes respondedores ao final do tratamento ou não apresentou a população encontrada nas amostras pós-tratamento ou apresentou em menor freqüência. As exceções ilustram a característica única do processo evolutivo e conseqüentemente o processo de resistência ao tratamento em cada paciente. A evolução do vírus da Hepatite C ao longo do tratamento aparenta ser o resultado de uma relação evolutiva única entre as cepas virais e cada hospedeiro humano, levando a persistência do vírus ou a resposta ao tratamento / Abstract: Hepatitis C is a disease spread throughout the world. Hepatitis C virus (HCV), the etiological agent of this disease, is a single-stranded positive RNA virus. Its genome encodes a single precursor protein that yields ten proteins after processing. NS5A, one of the non-structural viral proteins, is most associated with interferon-based therapy response, the approved treatment for hepatitis C in Brazil. HCV has a high mutation rate and therefore high variability, which may be important for evading the immune system and response to therapy. The aim of this study was to analyze the evolution of NS5A quasispecies before, during, and after treatment in patients infected with HCV genotype 3a who presented different therapy responses.Viral RNA was extracted, cDNA was synthesized, the NS5A region was amplified and cloned, and 15 clones from each time-point were sequenced. The sequences were analyzed for evolutionary history, genetic diversity and selection. Our analysis shows that the viral population that persists after treatment for most non-response patients are is present in before-treatment samples, suggesting it is fitted to evasion of treatment. Accordingly, most before-treatment samples from end-of-treatment response patients either did not show the population found after the relapse or showed it in low abundance. The exceptions illustrate the uniqueness of the evolutionary process, and therefore the treatment resistance process, in each patient.Hepatitis C virus evolution throughout treatment appears to be the result of a unique evolutionary relationship between viral strains and each human host, leading to either persistence or clearance / Doutor

Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Bruno Moreira Carneiro / Banca: Maurício Lacerda Nogueira / Banca: Isabel Maria Vicente Guedes de Carvalho Mello / Resumo: A hepatite C é consequência da infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) e estima-se que cerca de 150 milhões de pessoas em todo o mundo estejam cronicamente infectadas. Estudos têm demonstrado interações entre proteínas virais e do hospedeiro durante o ciclo de replicação do HCV e estas interações podem ser utilizadas para o desenvolvimento de novas terapias contra a hepatite C. As proteínas de choque térmico (Hsp) são proteínas celulares que interagem com proteínas do HCV e a inibição destas proteínas poderiam reduzir a replicação viral. Neste estudo, as proteínas celulares Hsp90 e Hsp27 foram inibidas por siRNA isoladamente ou em combinação com a inibição das regiões virais 5'UTR, NS3 e NS5A. Foi utilizada uma cultura celular estável Huh7 expressando um replicon subgenomico do HCV e todas as moléculas de siRNA dirigidas ao genoma do vírus mostraram eficiência na redução da replicação viral. A melhor resposta foi obtida pelo siRNA 5'UTR, que apresentou bons resultados também nos estudos à longo prazo. A inibição da proteína celular Hsp27 aumentou os níveis de replicação do vírus, entretanto a supressão de Hsp90 mostrou redução da replicação viral e a utilização desta molécula juntamente com a molécula de siRNA dirigida para 5'UTR mostraram uma diminuição de mais de 90% da replicação viral. Entretanto a inibição prolongada de Hsp90 levou à morte celular, evidenciando o importante papel desta proteína na sobrevivência das células. Portanto o presente trabalho sugere que a terapia combinada de siRNAs pode ser uma alternativa eficiente no combate à hepatite C em pacientes com HCC uma vez que a inibição de Hsp90 atua tanto na supressão tumoral quanto na replicação do HCV / Abstract: Hepatitis C is a consequence of infection by hepatitis C virus (HCV) and it is estimated that approximately 150 million people are chronically infected worldwide. Several studies have demonstrated interactions between viral and host proteins during the HCV replication cycle and these interactions might be used for development of new therapies against hepatitis C. The heat shock proteins (Hsp) are cellular proteins that interact with proteins of HCV and inhibition of these proteins could reduce viral replication. In this study, cellular proteins Hsp90 and Hsp27 were inhibited by siRNA targeting the mRNA of these proteins in combination with siRNA to viral 5'UTR region, NS3 and NS5A. We used a stable cell line expressing HCV subgenomic replicon and all siRNA molecules targeting the viral genome showed effectiveness in reducing viral replication. The best response was achieved by siRNA 5'UTR, which showed good results on long term studies. The inhibition of cellular protein Hsp27 increased virus replication, but knockdown of Hsp90 showed reduced viral replication. Use of this molecule together with the siRNA molecule directed to 5'UTR showed a decrease of more than 90% viral replication. However, the prolonged inhibition of Hsp90 led to cell death, demonstrating the important role of this protein in cell survival. Finally this work suggests that the combination therapy of siRNAs can be an effective alternative to treat hepatitis C in patients with HCC since reduction of Hsp90 expression if effective on tumor suppression and in HCV replication / Mestre

Resumo: Diversos estudos, indicam que o cogumelo Agaricus brasiliensis é benéfico em várias condições clínicas, como na hepatite C. Várias espécies de cogumelos comestíveis têm sido exploradas quanto ao seu potencial medicinal e muitos pacientes passam a buscar a solução para suas patologias nas terapias complementares. Avaliar os efeitos da suplementação do Agaricus brasiliensis sobre o estado nutricional, a frequência e a intensidade dos efeitos adversos da terapia antiviral e a resposta bioquímica hepática em indivíduos com hepatite C em tratamento com Interferon peguilado e Ribavirina. Foi realizado um ensaio clínico prospectivo controlado casualizado duplo cego no Serviço de Hepatites Virais do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu-UNESP. Os indivíduos do estudo foram submetidos a um protocolo de suplementação com cogumelo ou placebo por 24 semanas, e foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes grupos: Grupo tratado com placebo (5g/dia n=14) e Grupo tratado com cogumelo (5g/dian= 9).Todas as análises foram obtidas antes e após os tratamentos (placebo ou cogumelo). O estado nutricional (dados antropométricos, de composição corporal, da bioquímica nutricional e do consumo alimentar), foi semelhante entre os grupos. Houve melhora da lesão hepática em ambos os grupos, com redução de transaminases (TGO/AST e TGP/ALT, p<0,05), mostrando a eficácia do tratamento antiviral.O uso do cogumelo mostrou-se benéfico na redução da frequência e intensidade dos efeitos adversos da terapia medicamentosa (mialgia, disgeusia, cefaléia, redução do desejo sexual, queda de cabelo, hipoanorexia, indisposição, boca seca e irritabilidade, p<0,05). Em pacientes com hepatite C, a suplementação de cogumelo Agaricus brasiliensis (5g) por 24 semanas mostrou-se eficiente em reduzir a frequência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several studies indicate that the Agaricus brasiliensis is beneficial in various clinical conditions, such as hepatitis C. Several species of edible fungi have been explored as to its potential medical and many patients now have to seek a solution to their condition in complementary therapies. Objective: To evaluate the effects of supplementation of Agaricus brasiliensis on the nutritional status, the frequency of adverse effects of antiviral therapy and liver damage in patients with hepatitis C treated with pegylated interferon and ribavirin. We performed a prospective trial randomized controlled double-blind in the service of Viral Hepatitis Hospital of the Medical School of Botucatu, UNESP. Those in the study were subjected to a memorandum of supplementation with mushroom or placebo for 24 weeks, and were randomly distributed in the following groups: placebo-treated group (5g/dia n = 14) and mushroom-treated group (n 5g/dia- = 9). All tests were obtained before and after the treatments (placebo or mushroom). The nutritional status (anthropometric data, body composition, nutrition and biochemistry of food intake), was similar between the groups. There was improvement of liver damage in both groups, reducing transaminase (AST / ALT and AST / ALT, p <0.05), demonstrating the effectiveness of treatment antiviral use of the mushroom was shown to be beneficial in reducing the frequency and intensity of the adverse effects of drug therapy (myalgia, dysgeusia, headache, reduction in sexual desire, hair loss, hipoanorexia, malaise, dry mouth and irritability, p <0.05). In patients with hepatitis C, the supplementation of Agaricus brasiliensis (5) for 24 weeks proved to be effective in reducing the frequency and intensity of the adverse effects of drug therapy with pegylated interferon and ribavirin, and on the other hand, was inefficient for nutritional status and liver damage. / Orientador: Carlos Antonio Caramori / Coorientador: Maria Antonieta de Barros Leite Carvalhaes / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Ana Lúcia T. Spinardi Barbisan / Banca: Lucienne de Souza Venâncio Lotufo Brant / Banca: Anderson Merliere Navarro / Doutor

Orientador: Paulo Inácio da Costa / Banca: Miriane da Costa Gileno / Banca: Vanderlei Rodrigues / Banca: Daniele Cardoso Geraldo Maia / Banca: Elisabeth Loshchagin Pizzolitto / Resumo: O vírus da hepatite C (VHC) é um vírus envelopado com cerca de 50 a 70 nm de diâmetro, fita positiva de RNA e pertence ao gênero do Hepacivirus e à família Flaviridae. A detecção e quantificação do antígeno do core, proteína do nucleocapsídeo do VHC tem obtido sucesso em muitos ensaios, sendo considerado um marcador da replicação viral, por apresentar uma sequencia de aminoácidos altamente conservada, o que lhe confere alta sensibilidade e especificidade. A proteína E2 é uma glicoproteína de envelope do VHC com 11 sítios de glicosilação e a maioria deles estão bem conservados, tornando-a um alvo antigênico. O objetivo deste estudo foi o de desenvolver métodos diagnósticos para o VHC de alta sensibilidade, baixo custo e que pudessem ser utilizados na triagem sorológica. As regiões genômicas que codificam as proteínas core (parcial 136 aa) e E2 do VHC foram expressas em E. coli da linhagem Rosetta e clonadas no vetor de expressão pET-42a e induzidas por IPTG 0,4mM, produzindo proteínas recombinantes fusionadas a proteína GST (glutationa S-transferase), que foram então purificadas por cromatografia de afinidade. A imunorreatividade foi avaliada por Western Blot, Slot Blot e os métodos diagnósticos (ensaio imunoenzimático (ELISA) de captura, indireto, imunoblotting e imunocromatográfico) desenvolvidos e aprimorados. Os métodos desenvolvidos foram mais sensíveis e específicos utilizando a mistura das proteínas recombinantes fusionadas a GST (core + E2) / Abstract: The hepatitis C virus (HCV) is an enveloped virus of about 50 to 70 nm in diameter, positive strand RNA, and belongs to the genus Hepacivirus and the family Flaviridae. The detection and quantification of the core antigen, HCV nucleocapsid protein, has been successful in many trials and is considered a marker of viral replication, since it presents a sequence of highly conserved amino acids, giving it high sensitivity and specificity. The E2 protein is an envelope glycoprotein of HCV with 11 glycosylation sites, most of these well-conserved, making it a target antigen. The aim of this study was to develop high sensitivity, low cost diagnostic methods for HCV which could be used for serological screening. The genomic regions encoding the core (part 136 aa) and E2 proteins of HCV were expressed in E. coli Rosetta strain, cloned in expression vector pET-42a, and induced with 0.4 mM IPTG, producing recombinant proteins fused to GST protein (glutathione S-transferase), which were then purified by affinity chromatography. The immunoreactivity was assessed by Western blot, Slot Blot and the developed and improved diagnostic methods (enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) capture and indirect, immunoblotting and immunochromatographic). The methods developed were more sensitive and specific using the mixture of the recombinant proteins fused to GST (core + E2) / Doutor