Le microbiote intestinal joue un rôle fondamental chez son hôte. Son étude contribue à la compréhension de différents mécanismes physiologiques chez l’hôte. Suite à l’interdiction d’utiliser des antibiotiques comme facteurs de croissance dans l’alimentation animale, l’utilisation de probiotiques s’est largement répandue pour améliorer les performances zootechniques des animaux. De plus, depuis 1999, des études ont été demandée aux pays producteurs de foie gras de rechercher des méthodes alternatives au gavage. Les travaux de cette thèse se sont donc articulés autour de ces deux objectifs. L’effet de la supplémentation en probiotiques (genre Lactobacillus ou mix de souches) chez des canards mulard durant la phase d’élevage et de gavage a donc été étudié. Si aucun effet des probiotiques sur le métabolisme n’a été démontré, l’expression des marqueurs de l’inflammation a diminué lors du gavage. De plus, nous avons confirmé l’importance du genre Lactobacillus, pendant le gavage, groupe bactérien à fort pouvoir amylolytique. Dans un second temps, la composition du microbiote intestinal de l’oie grise landaise gavée ou suite à une stéatose hépatique spontanée a été étudiée et comparée dans le cadre d’un projet d’alternative au gavage. Pour finir, une étude sur le déclenchement d’une stéatose hépatique chez des oies issues du système de reproduction à l’aide d’un aliment complet de croissance a été réalisée. Ces deux études sur les oies nous ont permis d’observer des similitudes dans les phyla majoritaires du microbiote intestinal qui sont les Firmicutes et les Proteobacteria bien que des différences ont été observées à des niveaux taxonomiques plus bas. L’ensemble de ces travaux ont confirmé la corrélation entre diversité du microbiote intestinal et aptitude à déclencher une stéatose hépatique qu’elle soit issue d’un gavage ou spontanée. / The intestinal microbiota plays a fundamental role in its host. Microbiota studies contribute to understand the different physiological mechanisms in the host. Then, following the ban on antibiotics as growth factors in animal feed, the use of probiotics has increased to improve zootechnical performances. Moreover, since 1999, studies have been requested to the European countries producing “foie gras” to develop alternative methods to overfeeding. The work of this phD was organized according to these two objectives. The effect of probiotic supplementation in ducks during breeding and overfeeding periods was studied. If no impact of probiotics on metabolism has been demonstrated, the expression of markers of inflammation decreased during overfeeding. Moreover, we confirmed the importance of the Lactobacillus genus during overfeeding period, bacterial group with strong amylolytic activities. In a second step, the composition of the intestinal microbiota of the graylag goose after overfeeding period or following a spontaneous hepatic steatosis was studied and compared. Finally, a study on the initiation of hepatic steatosis in graylag geese fed with complete pellets was performed. These two geese studies allowed us to observe the similarities in the major phyla of the intestinal microbiota. Major phylum are still Firmicutes and Proteobacteria although differences were observed at lower taxonomic levels. All of these studies confirmed the correlation between intestinal microbiota diversity and the ability to trigger hepatic steatosis, whether with overfeeding or spontaneous.

Many diets of different compositions are available for use in animal experiments and have been used as standard, but they may induce adverse metabolic effects, compromising the comparison between the results of several studies. The literature records many reports of changes related to the use of these diets, however it lacks studies that compare metabolic effects of consumption of the different standard diets in animal experiments. Accordingly, the objective of this dissertation was to evaluate the metabolic effects of the consumption of diets considered standard widely used in animal research, being presented in the form of two articles: a review of the literature that gathers evidence yet little discussed by the scientific community on the feeding of laboratory animals; the second article refers to an experimental study with rats newly weaned, who received two types of diets: a commercial cereal-based, Nuvilab®, and another purified proposal by the American Institute of Nutrition, the AIN-93. Under the experimental conditions established, coefficients of protein and feeding efficiency presented significantly higher in group AIN-93 than in group Nuvilab®. The AIN-93 showed significantly higher lipid and protein digestibility than Nuvilab®. The different diets did not cause weight difference evolution of animals and histological analysis to the optical microscope of the kidneys, heart, spleen, stomach and small intestine showed no changes in the structures of these bodies, despite the different treatments. Animals fed the AIN-93 diet, regardless of age, had hepatic steatosis in frequency significantly higher than the animals that received the commercial Nuvilab®. The different diets did not cause influence on the absolute and relative weights of organs of animals, except for the absolute weight of the liver among younger animals and relative weight of the intestine among older animals. There was no influence of different diets on biochemical parameters evaluated, and the differences detected possibly resulting from the interaction between age and length of exposure of animals to diets. The markers of damage of kidney and liver function were similar and serum creatinine varied according to age. It was shown that both diets, AIN-93 and Nuvilab ®, are able to promote the growth of rats for a period of study considered subchronic. However, the occurrence of hepatic steatosis in animals fed the AIN-93 diet in pellets, reinforces the importance of tracking the standard protocols of experimentation and is indicative of nutritional inadequacies by imposing the need for further investigations to clarify which components or characteristics of this diet, widely used in animal experiments, may have contributed to this result. For instance, it is suggested that diets in the form of flour are used preferably those pellets, particularly on protocols to investigate metabolic effects. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / Várias dietas de diferentes composições estão disponíveis para o uso em experimentação animal e têm sido utilizadas como padrão, mas podem induzir efeitos metabólicos distintos, comprometendo a comparação entre os resultados dos diversos estudos. A literatura registra inúmeros relatos de alterações relacionadas ao uso dessas dietas, porém, há carência de estudos que comparem os efeitos metabólicos do consumo das diferentes dietas padrão utilizadas em experimentos animais. Assim sendo, o objetivo da presente dissertação foi avaliar as repercussões metabólicas do consumo de dietas consideradas padrão, amplamente utilizadas na pesquisa animal, sendo apresentada na forma de dois artigos: uma revisão da literatura, que reúne evidências ainda pouco debatidas pela comunidade científica relativas à alimentação de animais de laboratório, e um segundo artigo, que se refere a um estudo experimental com ratos Wistar recémdesmamados, que receberam dois tipos de dieta: uma comercial à base de cereais, Nuvilab®, e outra purificada proposta pelo American Institute of Nutrition, a AIN-93. Nas condições experimentais estabelecidas, coeficientes de eficiências protéica e alimentar apresentaram-se significativamente maiores no grupo AIN-93 que no grupo Nuvilab®. A AIN-93 apresentou digestibilidades lipídica e protéica significativamente maiores que a Nuvilab®. As diferentes dietas não causaram diferença na evolução ponderal dos animais e a análise histológica ao microscópio óptico dos rins, coração, baço, estômago e intestinos não evidenciou alterações nas estruturas desses órgãos, apesar dos diferentes tratamentos. Os animais alimentados com a dieta AIN-93, independente da idade, apresentaram esteatose hepática em uma frequência significativamente maior que os animais que receberam a comercial Nuvilab®. As diferentes dietas não exerceram influência sobre os pesos absoluto e relativo dos órgãos dos animais, com exceção do peso absoluto do fígado, entre os animais mais jovens, e do peso relativo do intestino, entre os animais mais velhos. Não se observou influência das diferentes dietas sobre os parâmetros bioquímicos avaliados, sendo as diferenças detectadas possivelmente resultantes da interação entre a idade e o tempo de exposição dos animais às dietas. Os marcadores de lesão e função hepática e renal foram similares e a creatinina sérica variou em função da idade. Demonstrou-se que ambas as dietas, AIN-93 e Nuvilab®, são capazes de promover o crescimento de ratos Wistar por um período de estudo considerado subcrônico. Porém, a ocorrência de esteatose hepática nos animais alimentados com a dieta AIN-93 peletizada, reforça a importância de monitoramento de protocolos padrão de experimentação e é indicativa de inadequações nutricionais, impondo a necessidade de investigações adicionais para esclarecer que componentes ou características dessa dieta, amplamente utilizada em experimentação animal, podem ter contribuído para tal resultado. Por hora, sugere-se que a dieta AIN-93 seja oferecida preferencialmente na forma de farinha, particularmente em protocolos que investiguem efeitos metabólicos.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3708.pdf: 1832154 bytes, checksum: 29e11e4137bb04f771b2ba6bb3dd6c96 (MD5) Previous issue date: 2011-06-17 / Financiadora de Estudos e Projetos / Decreased levels of estrogen are associated with hepatic steatosis (HS), through changes in gene expression of molecules related to fat oxidation and lipogenesis. Both resistance training (RT) and endurance training (ET) prevents the HS in ovariectomized (Ovx) rats. However, the molecular events associated with this process were only investigated for ET but not for RT. Aims: Thus, the aim of this study was to investigate the effects of Ovx and RT on the gene expression of molecules related to fat oxidation and lipogenesis in the liver of rats. Methods: Sprague-Dawley adult female rats were grouped into four groups (n = 6 per group): sham-operated sedentary (Sham-Sed); Ovx sedentary (Ovx-Sed); sham-Rt and Ovx- Rt. A 10-week RT period, during which the animals climbed a 1.1-m vertical ladder with weights attached to their tails, was used. The sessions were performed three times a week, with 4-9 climbs and 8-12 dynamic movements per climb. Gene expression was analyzed by RT-PCR by the ΔΔCt method. Results: The estrogen deficiency associated with ovariectomy decreased the gene expression of molecules related to fat oxidation, carnitine palmitoyltransferase I (53%) and β-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase (27%), and increased of molecules related to lipogenesis, sterol regulatory element-binding protein-1c (106%), acetyl-CoA carboxilase (ACC) (72%) and stearoyl CoA desaturase-1 (109%), which had their expression restored to the RT, with the exception of the ACC. Conclusions: The present results indicate that the RT may have important effects on the prevention of HS in Ovx animals, possibly through the restoration in gene expression of molecules related to hepatic lipid metabolism / A deficiência de estrógeno está associada à esteatose hepática (EH), por meio de alteração na expressão gênica de moléculas relacionadas à oxidação de gordura e à lipogênese. Tanto o treinamento resistido (TR), quanto o treinamento de endurance (TE) previne a EH em ratas ovariectomizadas (Ovx). No entanto, os eventos moleculares somente foram investigados em relação ao TE e não ao TR. Objetivo: investigar os efeitos da Ovx e do TR sobre a expressão gênica de moléculas relacionadas tanto a oxidação de gordura quanto a lipogênese no fígado de ratas. Métodos: Ratas Sprague-Dawley adultas foram divididas em 4 grupos (n = 6 por grupo): sham operado sedentário (Sham-Sed), Ovx sedentário (Ovx-Sed), sham operado TR (Sham-Tr) e Ovx-Tr. O protocolo de TR exigiu dos animais a escalada de uma escada vertical de 1,1 m com pesos atados as suas caudas. Cada sessão consistiu de 4-9 escaladas, com intervalo de 2 min entre as escaladas, realizado com freqüência semanal de 3 vezes durante 10 semanas. A análise da expressão gênica foi realizada por PCR-RT pelo método ΔΔCt. Resultados: A Ovx diminui significativamente a expressão gênica das moléculas relacionadas à oxidação de gordura; carnitina palmitoil transferase I 53% e da hidroxiacil-CoA desidrogenase 27%, e aumentou das moléculas relacionadas com a lipogênese; proteína 1c ligadora do elemento regulado por esteróis 106%, acetil-CoA carboxilase 72% e estearoil-CoA dessaturase-1 109%, as quais tiveram suas expressões restauradas com o TR, com exceção da ACC. Conclusão: Os resultados presentes sugerem que o TR pode ter importantes efeitos sobre a prevenção da EH em animais Ovx, possivelmente por meio da restauração da expressão gênica de moléculas relacionadas ao metabolismo lipídico hepático.

Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a prevalent condition and frequently diagnosed in ultrasonography (US). Bidimensional ultrasonography steatosis grading is subjective and subject to interobserver and intraobserver variability. Hepatic biopsy is the standard diagnostic method, but its indication has some controversies. For clinical practice, noninvasive, objective and reproducible steatosis quantification is necessary. The aim of this study is to assess the performance of Doppler US indices of the three major hepatic vessels in steatosis diagnosis and grading, having histological study as reference. Doppler US was performed in 98 volunteers, including 49, with NAFLD who were submitted to liver biopsy. The other 49, without steatosis in US and without risk factors for NAFLD, were included as the healthy group and were not submitted to biopsy due to ethical reasons. Portal venous pulsatility index (PVI) was calculated by subtracting the minimal peak of portal velocity from the maximum peak and dividing the result by the maximum peak. Right hepatic vein waveform pattern (HVWP) was classified as monophasic, biphasic or triphasic. Hepatic artery resistance index (HARI) was calculated by subtracting end diastolic velocity from systolic peak velocity and dividing the result by systolic peak velocity. Hepatic artery pulsatility index (HAPI) was calculated subtracting end diastolic velocity from systolic peak velocity and dividing the result by mean velocity. Hepatic biopsy specimens were classified in mild steatosis (less than 33% of fatty hepatocytes), moderate (33 to 66%) and severe (more than 66%). Inflammation and fibrosis were classified according to intensity and localization in hepatic acini. PVI had inverse and significant correlation with steatosis presence in biopsy (r= - 0.69; p <0.0001). PVI media and standard deviation in healthy group was 0.35 ±0.08 and in steatosis group was 0.21±0.10 (p<0.0001). HVWP was predominantly triphasic in healthy group and in mild steatosis subgroup while monophasic pattern was the most frequent in moderate and severe steatosis. HARI and HAPI did not distinguish healthy from steatosis group. None of the indices significantly correlated with steatosis grading. Hemodynamic changes in portal and hepatic veins allow noninvasive steatosis diagnoses. In order to improve diagnostic capacity, a discriminant function was obtained using these two parameters, resulting in improvement of Doppler specificity, sensibility and accuracy for steatosis diagnostic. This is a simple and clinical applicable analysis. Doppler indices have limitations in quantifying steatosis as in diagnosing inflammation and fibrosis. / A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é prevalente e frequentemente diagnosticada à ultrassonografia (US). A gradação da esteatose pela US bidimensional é subjetiva e sujeita à variabilidade inter e intra-observador. A biópsia hepática é o método diagnóstico padrão, havendo, porém, controvérsias sobre sua indicação. É necessária, para a prática clínica, a quantificação não invasiva, objetiva e reprodutível da esteatose. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho dos índices do Doppler hepático dos três principais vasos no diagnóstico e gradação da esteatose, comparando-se com análise histológica. US com Doppler foi realizada em 98 voluntários, entre os quais 49, com DHGNA, foram submetidos à biópsia. Os demais 49, sem esteatose à US e sem fatores risco para DHGNA foram incluídos como controles e não submetidos à biópsia por motivos éticos. O índice de pulsatilidade venosa portal (IVP) foi calculado subtraindo-se o pico mínimo de velocidade portal do pico máximo e dividindo-se pelo pico máximo. A onda de velocidade de fluxo (OVF) da veia hepática direita foi classificada em monofásica, bifásica e trifásica. O índice de resistividade (IR) da artéria hepática foi calculado subtraindo-se a velocidade diastólica final do pico de velocidade sistólica e dividindo-se pelo pico de velocidade sistólica. O índice de pulsatilidade (IP) da artéria hepática foi calculado subtraindo-se a velocidade diastólica final do pico de velocidade sistólica e dividindo-se pela velocidade média. Os espécimes obtidos por biópsia hepática por agulha foram classificados em esteatose discreta (até 33% dos hepatócitos infiltrados por gordura), moderada (de 33 a 66%) e acentuada (mais de 66%). A fibrose e a inflamação foram classificadas segundo sua intensidade e localização no ácino hepático. O IVP apresentou correlação inversa e significante com a presença de esteatose à biópsia (r= -0,69; p <0,0001). A distribuição do padrão da OVF da veia hepática direita foi predominantemente trifásico nos controles e no subgrupo com esteatose discreta enquanto o padrão monofásico foi mais frequente na esteatose moderada e acentuada. IR e IP da artéria hepática não distinguiram grupo controle do grupo com esteatose. Nenhum dos índices correlacionou-se significativamente com a gradação da esteatose. As alterações hemodinâmicas das veias porta e hepática permitem o diagnóstico não invasivo da esteatose. Para melhorar a capacidade diagnóstica obteve-se uma função discriminante com estes dois parâmetros, que aumentou especificidade, sensibilidade e acurácia do Doppler para o diagnóstico de esteatose, com uma análise de simples realização e passível de aplicabilidade clínica. Os parâmetros hemodinâmicos estudados mostraram limitações para diagnóstico de inflamação, fibrose e para a gradação da esteatose. / Mestre em Ciências da Saúde

Non-Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) is characterized by accumulation of lipids in hepatocytes, which accounts for at least 5% of the weight of this tissue. It affects patients in different age groups; these tend to present hepatic alterations characterized not only by the accumulation of fat but, in some cases, also by the presence of inflammation and fibrosis, even evolving to cirrhosis. It is considered the hepatic component of Metabolic Syndrome (MS) and this, in turn, is also an inducer of NAFLD. The present study proposes to evaluate the degree of steatosis in patients with NAFLD and their relationship with cardiovascular risk, the prevalence of OSAS and quality of life. This is a cross-sectional study, where 173 patients were interviewed at the outpatient clinic. Hepatology, which is a reference service of the State, University Hospital of the Federal University of Sergipe. Socio-demographic data and anthropometric measurements, results of biochemical laboratory tests and image of medical records were collected, and these patients were submitted to quality of life (QOL) questionnaires (WHOQOL bref), CVD risk (Framinghan score), individual risk of OSAS (Berlin scale) and bioimpedance test. We obtained as results a prevalence in the low risk population to develop CVD (58.4%), a prevalence of the sample for high risk of OSAS (64%), the QV assessment showed better results in the psychological and social relations domains . We conclude that there is an association between the degree of NAFLD and the evolution of OSA in the patients studied. There was no association with the increase in the risk of CVD, and when we assessed the association with the QOL, there was no significant difference between the total score quality of life in patients with mild steatosis for individuals who presented them in marked form. Thus, we emphasize the importance of the global evaluation of these patients, from the beginning of the detection of NAFLD. / A Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (DHGNA) é caracterizada por acúmulo de lipídios em hepatócitos, que representa, ao menos, 5% do peso deste tecido. Acomete pacientes em diferentes faixas etárias; estes tendem a apresentar alterações hepáticas caracterizadas não apenas pelo acúmulo de gordura, mas, em alguns casos, também pela presença de inflamação e fibrose, inclusive evoluindo para cirrose. É considerada o componente hepático da Síndrome Metabólica (SM) e esta, por sua vez, também um indutor da DHGNA. O presente estudo propõe avaliar o grau de esteatose em pacientes com DHGNA e a relação destes com o risco cardiovascular, a prevalência de SAOS e a qualidade de vida. Trata-se de um estudo transversal, onde foram entrevistados 173 pacientes atendidos no ambulatório de Hepatologia, um serviço de referência no Estado, do Hospital Universitário da Universidade Federal de Sergipe. Foram coletados dados sociodemográficos e medidas antropométricas, resultados de exames laboratoriais bioquímicos e de imagem dos prontuários, e estes pacientes foram submetidos a questionários de qualidade de vida (QV) (WHOQOL bref), risco de doenças cardiovasculares (DCV’s) (Escore de Framinghan), a avaliação do risco individual de Síndrome da Apneia Obstrutiva do Sono (SAOS) (Escala de Berlim) e ao teste de bioimpedância. Obtivemos como resultados uma prevalência na população estudada de baixo risco para desenvolver DCV’s (58,4%), houve uma prevalência da amostra para alto risco de SAOS (64%), a avaliação da QV demonstrou melhores resultados nos domínios psicológicos e das relações sociais. Concluímos que há uma associação do grau de DHGNA com a evolução do SAOS nos pacientes estudados, não havendo a mesma associação em relação ao aumento do risco de DCV’s e quando avaliamos a associação com a QV não observou-se diferença significativa entre o escore total de qualidade de vida em pacientes com esteatose leve para os indivíduos que as apresentavam na forma acentuada. Sendo assim, enfatizamos a importância da avaliação global desses pacientes, desde o início da detecção da DHGNA. / Aracaju

The metabolic syndrome (MetS) is characterized by an association of factors that reinforce each other mutually; such as central obesity, hypertension, type 2 diabetes and dyslipidemias. This scenario is associated to reactive species of oxygen and nitrogen production, aggravated by obesity status, triggering imbalance between oxidation and reduction reactions (redox), resulting in oxidative stress and metabolic disorders. Among the antioxidants, it is highlighted the catalase role, responsible to hydrogen peroxide (H2O2) dismutation into oxygen and water. This compound is a substrate in lipolysis, energy control and inflammation. Thus, it is believed that the modulation of the H2O2 / catalase / redox balance-axis in MetS/Obesity, might produce an important therapeutic effect antiobesity and metabolic-liver changes. The aim was to evaluate effect antiobesity and the metabolic-liver changes induced by 3-amino-1,2,4-triazole (ATZ), a reputed catalase inhibitor on the 2O2 / catalase / redox balance-axis. For this, it was used at different doses (125, 250 and 500 mg.kg-1) in C57BL6 MetS mice-diet induced for 12 weeks. The ATZ-treated mice showed increased lipolysis (p<0.001) and decreased (p<0.001) levels of: diameter of adipocytes, body weight; distribution of epididymal fat, adiposity index; expression of plasma leptin ; plasma and liver total cholesterol (p<0.01; ATZ500, p<0.001), triglycerides (,p<0.001) and non-esterified free fatty acids (p<0.001); basal glycemia, during the glucose tolerance test (p<0.001), insulin resistance test (p<0.001) and pyruvate test (p<0.001); the index to indirect evaluation of insulin resistance and plasma insulin (p<0.01). Decreased (p<0,05) of liver-gene expression to: insulin receptor (p<0.05); Glucose-6-phosphatase (G6Pase) and glucokinase (GCK) and increased gene expression to: phosphoenolpyruvate carboxykinase 2 (PcK2) (p<0.01); the fatty acid translocase protein (CD36 / FAT) (p<0.001) and lipid binding protein / adipocyte fatty acids (aP2) (p<0.001). Besides, it ocurred decreased in catalase activity and the levels of reactive substances to thiobarbituric acid (TBARS) (p<0.05). The ATZ showed to be a potent lipolytic inducer, able to promote an important antiobesity effect, capable to: reduce body weight, regulate the lipid balance between plasma and liver, improve glycaemic control and insulin sensitivity, as well as to modulate the redox imbalance in animal MetS induced by high fat diet. / A síndrome metabólica (SMet) é caracterizada pela associação de fatores potencialmente prejudiciais que se reforçam mutualmente, como obesidade central, hipertensão, diabetes mellitus 2 e dislipidemias. Este cenário é acompanhado pela produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, agravado pela obesidade, que podem implicar desequilíbrio entre as reações de oxidação / redução (redox), culminando no estresse oxidativo e alterações metabólicas. Dentre os antioxidantes, destaca-se a catalase, responsável pela dismutação do peróxido de hidrogênio (H2O2) em água e oxigênio. Este composto é um substrato em vias como as relacionadas à lipólise, controle energético e inflamação. Assim, postula-se que a modulação do eixo H2O2/catalase/equilíbrio redox na SMet / obesidade, represente um importante efeito terapêutico antiobesidade com importantes modificações sistêmico-hepáticas relacionadas à lipólise. Diante disso, objetivou-se avaliar as ações antiobesidade e lipolíticas sistêmico-hepáticas, induzidas pelo 3-amino-1,2,4-triazole (ATZ), um reputado inibidor da catalase, sobre o eixo H2O2/CAT/equilíbrio redox, na SMet. Para tanto, utilizou-se este em diferentes doses (125, 250 e 500 mg.kg-1) na dieta de animais C57BL6 com SMet por 12 semanas. Os camundongos tratados apresentaram aumento da lipólise (p<0,001) e diminuição (p<0,001): no diâmetro dos adipócitos; no peso corporal; na distribuição de tecido adiposo; no índice de adiposidade; na expressão plasmática de leptina; nos níveis plasmáticos e hepáticos do colesterol total, triglicerídeos e ácidos graxos livres não esterificados; na glicemia durante os teste de tolerância à glicose, resistência à insulina e do piruvato; no índice de avaliação indireta da resistência à insulina e nos níveis plasmáticos de insulina (p<0,01). Diminuição (p<0,05) da expressão gênica no fígado para: receptor para a insulina; Glicose-6-fosfatase (G6Pase) e Glicoquinase (GCK). Aumento da expressão gênica para: fosfoenolpiruvato carboxiquinase 2 (PcK2) (p<0,01); proteína translocase de ácido graxo (CD36/FAT) (p<0,001) e proteína ligadora de ácidos graxos (aP2) (p<0,001). Além da diminuição da atividade da catalase e níveis das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) (p<0,05). O ATZ mostra ser um potente indutor lipolítico capaz de promover um importante efeito antiobesidade, ao diminuir o peso corporal, regular o balanço lipídico entre o plasma e o fígado, melhorar o perfil glicêmico e a sensibilidade à insulina, além de modular o desequilíbrio redox em animais com SMet induzida por dieta hiperlipídica.

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2017-12-18T18:07:51Z No. of bitstreams: 2 IALA_ BERTASSO2017.pdf: 2661829 bytes, checksum: 3d7795062e62098ad8c0fa111886f04d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T18:07:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 IALA_ BERTASSO2017.pdf: 2661829 bytes, checksum: 3d7795062e62098ad8c0fa111886f04d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Estado do Paraná (FA) / In the present study, the lipid profile and the gene and protein expression of enzymes involved in hepatic lipid metabolism and its repercussion in males of adult offspring were evaluated in obese rats submitted to Roux - en - Y gastric bypass (RYGB). Wistar rats obese by the cafeteria diet (CAF) were submitted to false operation (CAF SHAM) or to RYGB (CAF RYGB). Five weeks later, they began the mating season. The offspring males (F1) obtained were named according to the procedure performed in their mothers, in CAF SHAM-F1 and CAF RYGB-F1, who received a standard weaning diet at 120 days of age. Lipid profile and hepatic lipid metabolic pathways were verified in the mothers and pups. Mothers submitted to the RYGB presented reduction of body weight, fat pad and dyslipidemia. However, maternal RYGB promoted accumulation of hepatic fat (grade 3 steatosis), a mechanism probably due to the reduction of hepatic lipogenesis and increased β-oxidation in the rats of the CAF RYGB group. CAF RYGB-F1 offspring presented a reduction in body weight, accumulation of fat, serum triglycerides (TG) and hepatic cholesterol (CHOL) at 120 days. The amount of acetyl-CoA carboxylase (ACC) and stearoyl-CoA desaturase-1 (SCD-1) mRNA was lower, whereas the amount of carnitine palmitoyl transferase-1 (CPT-1) mRNA was higher in animals from the CAF RYGB-F1 group, compared to the animals from the CAF SHAM-F1 group. The protein expression of ACC and the microsomal triglyceride transfer protein (MTTP) was higher, whereas the expression of fatty acid synthetase (FASN) and phosphorylated ACC (pACC) was lower in CAF RYGB-F1 group, when compared to the animals of the CAF SHAM-F1 group. RYGB in CAF rats improved obesity after pregnancy and lactation. However, these animals had severe liver damage, which did not affect males of adult offspring, despite changes in lipid metabolic pathways. / No presente estudo, foram avaliados, em ratas obesas submetidas à derivação gástrica em Y de Roux (DGYR), o perfil lipídico e a expressão gênica e proteica de enzimas envolvidas no metabolismo lipídico hepático e sua repercussão nos machos da prole adulta. Ratas Wistar obesas pela dieta de cafeteria (CAF) foram submetidas à falsa operação (CAF FO) ou à DGYR (CAF DGYR). Após cinco semanas, iniciaram o período de acasalamento. Os machos da prole (F1) obtida foram denominados segundo o procedimento realizado em suas mães, em CAF FO-F1 e CAF DGYR-F1, os quais receberam dieta padrão do desmame aos 120 dias de vida. O perfil lipídico e vias metabólicas lipídicas hepáticas foram verificados nas mães e nos filhotes. Mães submetidas à DGYR apresentaram redução do peso corporal, acúmulo de gordura e dislipidemia. Todavia, a DGYR materna promoveu acúmulo de gordura hepática (esteatose grau 3), um mecanismo provavelmente decorrente da redução da lipogênese hepática e aumento da β-oxidação nas ratas do grupo CAF DGYR. Os descendentes CAF DGYR-F1 apresentaram, aos 120 dias de vida, redução do peso corporal, do acúmulo de gordura, da concentração sérica de triglicerídeos (TG) e conteúdo de colesterol hepático (COL). A quantidade de mRNA da acetil-CoA carboxilase (ACC) e da estearoil-CoA desaturase-1 (SCD-1) foi menor, ao passo que a quantidade do mRNA da carnitina palmitoil-transferase-1 (CPT-1) foi maior nos animais do grupo CAF DGYR-F1, comparados aos animais do grupo CAF FO-F1. A expressão proteica da ACC e da proteína de transferência de triglicerídeos microssomal (MTTP) foi maior, enquanto que a expressão da enzima ácido graxo sintetase (FASN) e da ACC fosforilada (pACC) foi menor nos animais do grupo CAF DGYR-F1, quando comparados aos animais do grupo CAF FO-F1. A DGYR em ratas CAF melhorou a obesidade após prenhez e lactação. Entretanto, estes animais apresentaram danos hepáticos severos, os quais não repercutiram nos machos da prole adulta, apesar das alterações em vias metabólicas lipídicas.

Introdução: Os efeitos metabólicos do uso combinado dos triglicerídeos de cadeia média (TCM) e do óleo de peixe (OP) na esteatose hepática ainda não estão totalmente esclarecidos. Objetivo: O presente estudo teve o objetivo de verificar os efeitos da combinação dos TCMs e OP na esteatose hepática e estresse oxidativo induzidos pela dieta hiperlipídica (HL+) termolizada em ratos. Material e Métodos: Foram utilizados no total 50 ratos machos da linhagem Wistar. O grupo Controle (n=10) recebeu a dieta controle. Os grupos HL+ receberam a dieta contendo 50% de gordura animal (GA) termolizada e 50% de ração. A adaptação às dietas HL+ foi realizada durante 5 dias. Os grupos HL+GA, HL+TCM, HL+OP e HL+TCM/OP (n=10) receberam a dieta HL+ com 50% de lipídios (gordura animal termolizada) durante 30 dias. Após este período, os grupos HL+TCM, HL+OP e HL+OP/TCM receberam as dietas HL+ adicionadas de óleo de TCM (OTCM), OP e OTCM + OP, respectivamente, durante 20 dias. As análises realizadas foram a gordura hepática total, frações lipídicas hepáticas e séricas, glicemia, vitamina E e retinol séricos, glutationa reduzida (GSH) e malondialdeído (MDA) sérico e hepático e aminotransferases séricas. Resultados: Os grupos HL+ apresentaram acúmulo significativo de gordura total e triglicerídeos hepáticos, exceto o HL+OP. Apenas o grupo HL+TCM não apresentou acúmulo significativo de colesterol total hepático (CT). Este mesmo grupo apresentou valores maiores de CT e HDLcol séricos e menor razão triglicerídeos/HDLcol. Os valores séricos de aminotransferases foram significativamente maiores nos grupos que receberam os OTCM e/ou OP. A peroxidação lipídica (LPO) hepática foi maior foi nos grupos HL+, exceto o HL+TCM. Apenas o grupo HL+GA apresentou maior LPO sérica. Verificou-se que a GSH foi maior nos grupos HL+GA, HL+TCM e HL+OP/TCM, a vitamina E sérica foi menor nos grupos HL+GA, HL+OP e HL+OP/TCM e o retinol sérico foi maior nos grupos HL+GA e HL+TCM. Conclusões: As alterações séricas não refletiram as alterações hepáticas em relação aos lipídios, estresse oxidativo e antioxidantes. O uso do óleo de TCM e óleo de peixe em associação na dieta HL+ resultou em efeito negativo devido ao maior acúmulo de gordura hepática tanto na forma de triglicerídeos quanto de colesterol, maior peroxidação lipídica hepática e menor vitamina E sérica. / Introduction: The metabolic effects of combined use of medium chain triglycerides (MCT) and fish oil (FO) on non alcoholic hepatic steatosis are not fully understood. Objective: The aim of this study was to investigate the effects of the combination of MCT and FO on hepatic steatosis and oxidative stress induced by high fat (HF+) thermolyzed diet in rats. Methodology: Fifty wistar male rats were studied. The Control group (n = 10) received the standard diet. The HF+ groups received diet with 50% of thermolyzed animal fat (AF) and 50% of ration. Five days were dedicated for adaptation to high-fat diets. The groups HF+AF, HF+MCT, HF+FO and HF+MCT/FO (n = 10) received HF+ diet with 50% thermolyzed fat during 30 days. After this period, the groups HF+MCT, HF+FO and HF+MCT/FO received HF+ diets with MCT oil (MCTO), FO and MCTO + OP, respectively, during 20 days. Analysis of total liver fat, liver and serum lipid fractions, serum glucose, vitamin E and retinol, serum and liver reduced glutathione (GSH) and malondialdehyde (MDA), and serum aminotransferases (AST and ALT) were performed. Results: The groups HF+ showed higher total fat and triglycerides, except HF+FO. Only HF+MCT group didn´t have higher liver total colesterol (TC). This same group had higher serum TC and HDLcol and lower triglycerides/HDLcol ratio. The groups fed with MCTO and/or FO had higher serum aminotransferase. Liver lipid peroxidation (LPO) was higher in HF+ groups, except HF+MCT. Serum LPO was higher in HF+AF. The hepatic GSH was higher in the groups HF+AF, HF+MCT and HF+MCT/FO, serum vitamin E was lower in groups HF+AF, HF+FO and HF+MCT/FO, and serum retinol was higher in groups HF+AF and HF+MCT. Conclusions: Lipids, oxidative stress and antioxidant serum and liver alterations didnt correspond. The association of MCTO with FO in HF+ diet resulted in a negative effect when it concerns liver fat, triglyceride and cholesterol accumulation, higher liver lipid peroxidation and lower serum vitamin E.

La prévalence du syndrome métabolique (MetS) est en constante augmentation dans les pays industrialisés. La stéatose hépatique, caractérisée par une accumulation massive de lipides dans les hépatocytes est une des manifestations du MetS. Parmi les SNP (Single Nucleotide Polymorphism) associés au MetS et à la stéatose hépatique, le SNP I148M de l’adiponutrine/PNPLA3 (Patatin-like Phospholipase Domain-Containing) est décrit comme un nouveau marqueur de la stéatose et également de la sévérité des différentes atteintes hépatiques des NAFLD (Non-alcoholic Fatty Liver diseases). L’objectif de ma thèse a été de déterminer le rôle de l’adiponutrine dans le foie, d’une part, en étudiant sa régulation transcriptionnelle par les facteurs de transcription SREBP1c (Sterol Responive Element Binding Protein) et ChREBP (Carbohydrate Responsive Element Binding Protein) en réponse à l’insuline et au glucose et d’autre part, en étudiant l’impact de sa surexpression sur le métabolisme glucido-lipidique dans le foie de souris. L’adiponutrine est régulée de façon semblable aux enzymes lipogéniques et semble avoir un impact sur le métabolisme lipidique dans le foie. Comme l’adiponutrine, différents SNP des médiateurs de la voie Wnt/β-caténine sont également associés au syndrome métabolique et au diabète. La voie Wnt/β-caténine joue un rôle déterminant dans la zonation du lobule hépatique. Nous nous sommes intéressés à la régulation de cette voie par les conditions nutritionnelles et dans un contexte physiopathologique de stéatose et de résistance à l’insuline. Nos résultats montrent la régulation de cette voie par les hormones pancréatiques (insuline et glucagon) dans le foie favorisant ainsi l’orientation métabolique des hépatocytes en fonction des besoins. De plus, cette voie est dérégulée dans le foie d’animaux résistants à l’insuline, suggérant qu’elle pourrait avoir une fonction dans ce désordre métabolique. / The prevalence of metabolic syndrome (MetS) has increased in industrial countries. The hallmark of MetS in the liver is an excessive accumulation of triglyceride, which is called hepatic steatosis. Different SNP (Single Nucleotide Polymorphism) are associated with hepatic steatosis or MetS. One of them is found on adiponutrin/PNPLA3 (Patatin-like Phospholipase Domain-Containing) gene (SNP I148M) and is now considered as a new marker of hepatic steatosis and severity of NAFLD (Non-alcoholic Fatty Liver diseases). In order to understand the physiological role of adiponutrin in the liver, we studied its transcriptional regulation by SREBP1c (Sterol Responive Element Binding Protein) and ChREBP (Carbohydrate Responsive Element Binding Protein), mediators of insulin and glucose respectively. Moreover, by overexpressing adiponutrin in mice liver, we investigated its role in hepatic carbohydrate and lipid metabolism. We showed that adiponutrin is regulated as lipogenic genes and could have a role lipid metabolism. As for adiponutrin I148M, different SNP are found on substrats of Wnt/β-catenin pathway, a major pathway controlling acinus zonation. We examined the regulation of this pathway by nutritionnal status and in a pathophysiological context of insulin resistance and steatosis. We showed that Wnt/β-catenin pathway is regulated by pancreatic hormones (insulin and glucagon) in the liver in order to adapt hepatocyte phenotype to energetic needs. Moreover, this pathway is dysregulated in insulin resistant mice liver. These data may suggest a link between Wnt/β-catenin pathway deregulation and hepatic metabolic disorders.

La stéatohépatite non alcoolique (NASH) est une maladie du foie à évolution clinique grave, dont la prévalence est en constante progression. La stéatohépatite non alcoolique est caractérisée par un dépôt excessif de lipides dans les hépatocytes (stéatose) associé à une inflammation chronique, au contraire de la stéatose hépatique (NAFLD), manifestation initiale mais bénigne d'un dérèglement métabolique. Le NASH augmente le risque de progression vers la fibrose, la cirrhose et le carcinome hépatocellulaire et ne peut être soigné que par une greffe hépatique. Le risque de développer un diabète de type est aussi significativement augmenté chez les patients atteints de NASH. PPAR⍺ est un récepteur nucléaire connu pour réguler l'utilisation des acides gras dans le foie et réprimer les voies de signalisation pro-inflammatoires. [...]Nous avons conçu mutant de PPAR⍺ dont l'activité de liaison à l'ADN est abolie. La comparaison de ses activités transcriptionnelles in vitro avec le PPAR⍺ non muté démontre que les activités de contrôle du métabolisme sont abolies pour ce mutant, alors que les activités anti-inflammatoires restent intactes. [...] Dans cette étude, nous montrons donc pour la première fois que PPAR⍺ inhibe la progression de la stéatose vers le NASH et la fibrose par un mécanisme anti-inflammatoire direct, indépendant de son effet sur le métabolisme lipidique hépatique. / Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is an increasingly prevalent liver condition characterized by excessive lipid deposition in the hepatocytes steatohepatitis (NASH) is hallamarked by chronic inflammation. NASH markedly increases the risk of progression towards liver fibrosis, cirrhosis ans hepatocellular carcinoma. The nuclear peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPAR⍺) regulates hepatic fatty acid utilization and represses pro-inflammatory signaling pathways. [...]Liver-specific expression of wild type or DNA binding-deficient PPAR⍺ in acute and chronic models of inflammation demonstrated that PPAR's anti-inflammatory, but not metabolic activities, result from DNA binding-independent mechanisms in vivo. We futher show that PPAR⍺ inhits the transition from steatosis toward NASH and fibrosis through a direct, anti-inflammatory mechanism independent of its effetc on hepatic lipid metabolism.