Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-18Bitstream added on 2014-06-13T18:42:08Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_an_dr_botfm.pdf: 1241955 bytes, checksum: 4ebec113ac46c15142666ca4f710746d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A aids e a hepatite C crônica são infecções caracterizadas por importante processo inflamatório contínuo, regulado por uma complexa interação entre citocinas. A persistência da atividade inflamatória crônica está intimamente relacionada com a progressão da patogênese da aids, bem como na indução de fibrose na hepatite C. Com o objetivo de avaliar o padrão de citocinas na infecção pelo HIV e na hepatite C crônica, as citocinas IL-2, IL-4, IL-10, TNF-α, INF-γ, TGF-β foram dosadas por Elisa e RT-PCR em cinco grupos: pacientes coinfectados pelo HIV/VHC (n=22), monoinfectados pelo HIV com supressão virológica pelo tratamento, e sem supressão virológica (n=17), monoinfectados pelo VHC (n=22) e um grupo controle composto por indivíduos doadores de sangue (n=10). IL-4 e IL-10 estiveram aumentadas consistentemente nos quatro grupos de estudo, determinando predomínio do perfil Th-2. INF-γ, TNF-α e TGF-β estiveram aumentados apenas nos grupos com infecção pelo VHC, com ou sem coinfecção pelo HIV. No grupo de monoinfectados pelo HIV com supressão virológica, a IL-2 dosada por RT-RCR esteve aumentada, porém os níveis séricos dosados por Elisa estavam normais. A alta produção de citocinas pró-inflamatórias INF-γ, TNF-α e TGF-β nos dois grupos de pacientes com infecção pelo VHC refletem o processo progressivo de acúmulo de inflamação e fibrose hepática. Já o predomínio de IL-4 e IL-10 em todos os grupos, citocinas ligadas ao perfil Th-2, demonstram a incapacidade de produção de uma resposta citotóxica Th-1, perpetuando a infecção e a inflamação crônica, mesmo naqueles indivíduos com supressão virológica pelo tratamento. Além de drogas antivirais, novos tratamentos imunomoduladores têm sido propostos para a erradicação viral, ou a interrupção das lesões causadas pelo estado inflamatório crônico... / Both AIDS and chronic hepatitis C (HCV) are characterized by continuous inflammatory process, regulated by a complex interaction between cytokines. The persistence of chronic inflammatory activity is closely related to the progression of the pathogenesis of AIDS, as well as the induction of fibrosis in HCV. In order to analyze the role of cytokines in HIV/HCV coinfection and the fibrosis progression, IL-2, IL-4, IL-10, TNF- α, INF-γ, TGF-β were measured by ELISA and RT -PCR in five groups: HIV/HCV coinfected patients (n = 22), HCV monoinfected patients (n = 22), HIV monoinfected patients with and without virological suppression (n = 17) and a control group composed by blood donors (n = 10). Hepatic biopsy and METAVIR classification were performed in all HCV patients (n=44). The baseline characteristics (sex, age and race) of all groups were similar. No correlations were found between cytokines and hepatic fibrosis. IL-4 and IL-10 were consistently increased in the four study groups, findings associated to a Th-2 profile. INF- γ, TNF-α and TGF-β were increased only in groups with HCV infection. In the group of HIV monoinfected patients with virological suppression, IL-2 measured by RT-RCR was increased, but serum levels measured by ELISA were normal. The high production of proinflammatory cytokines INF-γ, TNF-α and TGF-β in two groups of patients with HCV infection reflect the gradual process of inflammation and liver fibrosis. The predominance of IL-4 and IL-10 in all study groups demonstrates an inability to promote a cytotoxic Th-1 response. Even in HIV monoinfected patients with virological suppression with increased IL-2 expression, Th-2 cytokines were the predominant, perpetuating the chronic inflammation. In addition to antiviral drugs, new immunomodulatory treatments have been proposed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-23Bitstream added on 2014-06-13T18:43:14Z : No. of bitstreams: 1 cornacini_mcm_dr_botfm.pdf: 480494 bytes, checksum: b0bc2df21341fdbd2b117efc1905a4b8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Diversos estudos, indicam que o cogumelo Agaricus brasiliensis é benéfico em várias condições clínicas, como na hepatite C. Várias espécies de cogumelos comestíveis têm sido exploradas quanto ao seu potencial medicinal e muitos pacientes passam a buscar a solução para suas patologias nas terapias complementares. Avaliar os efeitos da suplementação do Agaricus brasiliensis sobre o estado nutricional, a frequência e a intensidade dos efeitos adversos da terapia antiviral e a resposta bioquímica hepática em indivíduos com hepatite C em tratamento com Interferon peguilado e Ribavirina. Foi realizado um ensaio clínico prospectivo controlado casualizado duplo cego no Serviço de Hepatites Virais do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu-UNESP. Os indivíduos do estudo foram submetidos a um protocolo de suplementação com cogumelo ou placebo por 24 semanas, e foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes grupos: Grupo tratado com placebo (5g/dia n=14) e Grupo tratado com cogumelo (5g/dian= 9).Todas as análises foram obtidas antes e após os tratamentos (placebo ou cogumelo). O estado nutricional (dados antropométricos, de composição corporal, da bioquímica nutricional e do consumo alimentar), foi semelhante entre os grupos. Houve melhora da lesão hepática em ambos os grupos, com redução de transaminases (TGO/AST e TGP/ALT, p<0,05), mostrando a eficácia do tratamento antiviral.O uso do cogumelo mostrou-se benéfico na redução da frequência e intensidade dos efeitos adversos da terapia medicamentosa (mialgia, disgeusia, cefaléia, redução do desejo sexual, queda de cabelo, hipoanorexia, indisposição, boca seca e irritabilidade, p<0,05). Em pacientes com hepatite C, a suplementação de cogumelo Agaricus brasiliensis (5g) por 24 semanas mostrou-se eficiente em reduzir a frequência... / Several studies indicate that the Agaricus brasiliensis is beneficial in various clinical conditions, such as hepatitis C. Several species of edible fungi have been explored as to its potential medical and many patients now have to seek a solution to their condition in complementary therapies. Objective: To evaluate the effects of supplementation of Agaricus brasiliensis on the nutritional status, the frequency of adverse effects of antiviral therapy and liver damage in patients with hepatitis C treated with pegylated interferon and ribavirin. We performed a prospective trial randomized controlled double-blind in the service of Viral Hepatitis Hospital of the Medical School of Botucatu, UNESP. Those in the study were subjected to a memorandum of supplementation with mushroom or placebo for 24 weeks, and were randomly distributed in the following groups: placebo-treated group (5g/dia n = 14) and mushroom-treated group (n 5g/dia- = 9). All tests were obtained before and after the treatments (placebo or mushroom). The nutritional status (anthropometric data, body composition, nutrition and biochemistry of food intake), was similar between the groups. There was improvement of liver damage in both groups, reducing transaminase (AST / ALT and AST / ALT, p <0.05), demonstrating the effectiveness of treatment antiviral use of the mushroom was shown to be beneficial in reducing the frequency and intensity of the adverse effects of drug therapy (myalgia, dysgeusia, headache, reduction in sexual desire, hair loss, hipoanorexia, malaise, dry mouth and irritability, p <0.05). In patients with hepatitis C, the supplementation of Agaricus brasiliensis (5) for 24 weeks proved to be effective in reducing the frequency and intensity of the adverse effects of drug therapy with pegylated interferon and ribavirin, and on the other hand, was inefficient for nutritional status and liver damage.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-21Bitstream added on 2014-06-13T19:44:58Z : No. of bitstreams: 1 pesquero_nc_dr_araiq_parcial.pdf: 90110 bytes, checksum: cfcf708be0e87634edec6f70b4b16779 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:24:36Z: pesquero_nc_dr_araiq_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:27:34Z : No. of bitstreams: 2 pesquero_nc_dr_araiq_parcial.pdf.txt: 20406 bytes, checksum: b2b442eb3fde048c11e0e9bd8b02e38e (MD5) 000720849.pdf: 1930790 bytes, checksum: 2b01a971c780002a5b8b07b144f22909 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:33:12Z: 000720849.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:43:25Z : No. of bitstreams: 2 pesquero_nc_dr_araiq_parcial.pdf.txt: 20406 bytes, checksum: b2b442eb3fde048c11e0e9bd8b02e38e (MD5) 000720849.pdf: 1930790 bytes, checksum: 2b01a971c780002a5b8b07b144f22909 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:48:52Z: 000720849.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:49:44Z : No. of bitstreams: 1 000720849.pdf: 1930790 bytes, checksum: 2b01a971c780002a5b8b07b144f22909 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-27T11:47:03Z: 000720849.pdf,Bitstream added on 2014-10-27T11:48:02Z : No. of bitstreams: 1 000720849.pdf: 1930790 bytes, checksum: 2b01a971c780002a5b8b07b144f22909 (MD5) / No presente trabalho estudou-se a construção de um genossensor e sua viabilidade para compor um dispositivo de análise rápida que pudesse ser aplicado na realização do diagnóstico e genotipagem do vírus da Hepatite C (HCV). Primeiramente otimizou-se uma metodologia para a construção dos eletrodos de carbono impresso, os quais foram empregados como dispositivo transdutor. O genossensor foi, então, construído pela imobilização da sonda de captura na superfície do eletrodo de carbono. A sua superfície foi eletroquimicamente oxidada para a geração de grupos carboxílicos, os quais foram utilizados para a imobilização da proteína estreptavidina (STA). A sonda de captura biotinilada foi, então, imobilizada via interação biotina-STA, sendo os sítios remanescentes da STA bloqueados com biotina. Monitorou-se o evento biológico de hibridização entre a sonda de captura e sua sequência complementar via corrente de oxidação da base nitrogenada guanina. Para tanto foi empregada a técnica de voltametria de onda quadrada. Este genossensor demonstrou alta seletividade frente às sequências de oligonucleotídeos contendo uma e quatro bases não complementares e sequências provenientes de viroses coinfectantes do HCV (HIV e HBV). O genossensor estudado foi aplicado na identificação de amostras provenientes de pacientes HCV positivos (HCV do tipo 1 e 3) e negativos. O estudo das amostras negativas possibilitou a determinação de um valor de cut-off de 37 μA, o qual foi utilizado na genotipagem das amostras classificadas como positivas. Em seguida, construiu-se uma célula de detecção com volume de 25 μL utilizando a cerâmica LTCC (do inglês, Low Temperature Co-Fired Ceramic). Os eletrodos de trabalho, referência e auxiliar foram confeccionados dentro da célula utilizando tintas condutoras... / In the present work was studied the construction of a genosensor and its availability to compose a device for fast analysis which could be applied in Hepatitis C virus (HCV) diagnose and genotyping. Firstly the methodology for screen printed electrodes’ construction was optimized and these electrodes were used as transducer device. Then the genosensor was constructed immobilizing the capture probe on the electrode surface. Thereunto the surface was electrochemically oxidized to carboxylic groups formation, which were used to streptavidin (STA) immobilization. After the biotinilated probe was immobilized through biotin-STA interaction, and the STA reminiscent sites were blocked with biotin solution. Hybridization between the capture probe and its complementary sequence was monitored by means of the guanine oxidation current. Square wave voltammetry was used to this end. The final genosensor showed high selectivity when incubated in solution containing sequences with one and four non complementary nitrogenous bases and also with sequences of coinfecting viruses (HIV e HBV). This genosensor was applied in the identification of samples of HCV positives (HCV type 1 and 3) and negatives patients. This study allowed the determination of the cut-off value (37 μA) which was used in the HCV positive genotyping process. Then a 25 μL detection cell was constructed using LTCC ceramic. The working, reference and auxiliary electrodes were prepared inside the cell by means of conducting inks. The cell electrochemical behavior was evaluated in a standard system (with the redox pair Fe(CN)6 3+/Fe(CN)6 4+). Finally, the genosensor was constructed inside the detection cell using carbon nanotubes as amplifier of the guanine oxidation signal. A very good performance to the conjoint was observed, which means that this... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-20. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:49:09Z : No. of bitstreams: 1 000845987_20170602.pdf: 10278101 bytes, checksum: 8bc5f7049c5eea183e2c927c4ab882a0 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-06-02T11:56:30Z: 000845987_20170602.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-06-02T11:57:15Z : No. of bitstreams: 1 000845987.pdf: 10438412 bytes, checksum: 21849d7366b4147f3d91d763a4e2c419 (MD5) / Chalconas são flavonoides de cadeia aberta, apresentam diversas atividades biológicas e podem ser sintetizadas por várias metodologias, principalmente pela condensação de Claisen-Schmidt. A Hepatite C se apresenta como uma doença de grande incidência na população mundial, e dependendo de seu grau, pode levar a carcinoma hepatocelular. A paracocidioidomicose, uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis, tem grande incidência no Brasil, principalmente em pessoas imunodeprimidas, sua forma aguda pode levar a comprometimentos de órgãos como baço e fígado. A mieloperoxidase (MPO) é uma enzima essencial na resposta imune contra a invasão de patógenos. No estresse oxidativo a atividade clorinante de MPO tem um aspecto negativo, pois está correlacionada a disfunções endoteliais. O presente trabalho teve como objetivo a síntese de três séries de aminochalconas e seus análogos arílicos, com grupos amino nas posições 2', 3' e 4' (anel A), substituintes doadores e aceptores de elétrons no anel B. A fim de avaliar seus efeitos de acordo com as posições dos grupos amino e do bioisosterismo de anel, essas substâncias foram testadas quanto à capacidade de inibição de replicação do HCV, de inibição do crescimento de P. brasiliensis, e da inibição da atividade clorinante de MPO. As substâncias foram sintetizadas com rendimentos altos, uma vez que para 79% das substâncias foram superiores a 75%. A substância LQVM 22 foi capaz de inibir a replicação do HCV em 41%, a 2 µmol L-1. As substâncias LQVM 16 e LQVM 17 demonstraram potente atividade anti-P. brasiliensis, exibindo valores de CIM90 de 0,49 µg mL-1. A substância LQVM 20 foi um potente inibidor da atividade clorinante de MPO, apresentando CI50 de 0,34 µmol L-1. Nossos estudos químicos e biológicos de aminochalconas e seus análogos arílicos conduziram a descoberta de hits, valiosos protótipos... / Chalcones are open chain flavonoids. They show a broad range of biological activities. These compounds can be synthesized by several methodologies, mainly by ClaisenSchmidt condensation. Hepatitis C is a disease of great incidence in worldwide population, and according to its severity can lead to hepatocellular carcinoma. Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis, and has a great incidence in Brazil, in imunodefficient pacients, its acute form can lead to commitment of organs such as spleen and liver. Myeloperoxidase (MPO) is an essential enzyme in imune response against patogen invasion. However, the MPO activity has been correlated with some endotelial disfunctions. The present work aimed the synthesis of three series of aminochalcones and the aryl analogues, with amino group at positions 2', 3' and 4' (ring A), and with donors and withdraw electron substituents on B ring. In order to evaluate the effects of the different positions of amino groups and the ring bioisosterism, these substances were evaluated for the inhibition of HCV replication, P. brasiliensis growth and clorinating MPO activity. The substances were synthesised with high yields, once 79% showed yield above 75%. Compound LQVM 22 was able to inhibit HCV replication in 41 %, at 2 µmol L-1. Compounds LQVM-16 and LQVM-17 demonstrated potent anti-P. brasiliensis activity, exhibiting MIC90 values of 0,49 µg mL-1. Compound LQVM-20 was the potentest inhibitor of MPO chlorinate activity, showing IC50 of 0,34 µmol L-1.Our chemical and biological studies of aminochalcones, and their aryl analogues led to the discovery of hits, which are valuable prototypes to developing of innovatives therapeutical agents...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2014-11-10T11:57:30Z : No. of bitstreams: 1 000783135.pdf: 4785949 bytes, checksum: 6679e25c8d6dcfd9b73004d8151c331e (MD5) / O vírus da hepatite C crônica (VHC) é causa de doença hepática crônica afetando cerca de 3% da população mundial, aproximadamente 170 milhões de pessoas. Investigações sobre a resposta imune em indivíduos infectados com HCV é justificável pelo fato desta constituir doença infecciosa cujas alterações imunológicas têm relação direta com o desenvolvimento e a manutenção da infecção. Este projeto visou avaliar aspectos que compõem a resposta imune de pacientes com hepatite C crônica com diferentes graus de lesão hepática. Foram incluídos no estudo pacientes VHC+ (n=83), genótipo 1, pré-tratamento, os quais foram estratificados conforme o grau de fibrose hepática determinada por biópsia (classificação METAVIR), compondo: G1 (n = 15) pacientes nos estágios F0 (nenhuma fibrose) + F1 (fibrose em expansão dos espaços porta); G2 (n = 21) pacientes no estágio F2 (poucas fontes de fibrose nos espaços porta); G3 (n = 15) pacientes em estágio F3 (início da formação de nódulos); G4 (n = 32) pacientes em estágio F4 (fibrose severa); G5 (n = 16) doadores de sangue voluntários (grupo controle). Foram avaliadas características imunofenotípicas de subpopulações de leucócitos do sangue periférico (células NK totais, NKdim, NKbright, células dendríticas mielóides e plasmocitóides, monócitos clássicos e pro-inflamatórios, linfócitos T CD4+/CD8+), níveis de citocinas e quimiocinas plasmáticas (TGF-β, TNF-α, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CXCL8, CXCL9, CXCL10), analisando a relação destes com a progressão da fibrose. Todas as frequências das subpopulações leucocitárias avaliadas estão alteradas em portadores de hepatite C crônica comparados com indivíduos saudáveis. Além disso, há correlação entre o grau de fibrose e a quantidade de linfócitos T CD4, T CD8, monócitos pro-inflamatórios e células NKbright circulantes. Níveis aumentados de TNF-α foram observados ... / The chronic hepatitis C virus (HCV) is the cause of chronic liver disease affecting about 3% of world population, approximately 170 million people. Investigations of the immune response in individuals infected with HCV is justifiable because this form infectious disease whose immunological changes are directly related to the development and maintenance of infection. This project aimed to evaluate aspects that make up the immune chronic hepatitis C patients with different degrees of liver damage response. The study included patients HCV+ (n = 83), genotype 1, pretreatment, which were classified according to the rate of hepatic fibrosis determined by biopsy (METAVIR classification), composed of: G1 (n = 15) patients in stages F0 (no fibrosis) + F1 (fibrosis expansion of port spaces), G2 (n = 21) patients in the F2 stage (few sources of fibrosis in portal ), G3 ( n = 15 ) patients with stage F3 (early nodule formation), G4 (n = 32) patients with stage F4 (severe fibrosis), G5 (n = 16) volunteer blood donors (control group). Immunophenotypic characteristics of subpopulations of peripheral blood leukocytes (total NK cells, NKdim , NKbright , myeloid dendritic cells and plasmacytoid , classical monocytes, pro- inflammatory CD4 + / CD8 + cells), cytokine levels and plasma chemokines (were evaluated TGF- β , TNF - α , CCL2 , CCL3 , CCL4 , CCL5 , CXCL8 , CXCL9, CXCL10), analyzing their relationship with the progression of fibrosis. All frequencies of evaluated leukocyte subpopulations are altered in patients with chronic hepatitis C compared with healthy subjects. In addition, no correlation between the degree of fibrosis and the amount of CD4, CD8, pro-inflammatory monocytes and circulating NKbright cells. Increased levels of TNF-α were observed in cirrhotic patients (G4) and TGF - β in HCV + groups with moderate hepatic fibrosis (G2 and G3). Plasma chemokine CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL8/IL-8, CCL2/MPC-1, ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-30Bitstream added on 2014-12-02T11:21:11Z : No. of bitstreams: 1 000792799_20141231.pdf: 121704 bytes, checksum: 8ea6280bc854bb7701833438b6a4bcf7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:54Z: 000792799_20141231.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:50Z : No. of bitstreams: 1 000792799.pdf: 4115128 bytes, checksum: bf08d34c13536fc5692eaddb40e4fe2c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Aproximadamente 170 milhões de pessoas no mundo estão cronicamente infectadas pelo vírus da Hepatite C (HCV). No Brasil, os números já chegam a 3 milhões. A persistência da infecção pelo HCV no fígado leva à cronificação da doença, cirrose e hepatocarcinoma. A proteína de envelope 2 (E2) do HCV é a responsável pelo seu acoplamento à célula hospedeira através da interação com receptores de superfície celular, como o R-LDL e o CD81, entre outros. Como as alterações na micro e macrovasculatura hepática, têm sido apontadas como elementos fundamentais na histogênese e prognóstico da doença, o objetivo deste estudo foi avaliar a interação da proteína E2 recombinante com os R-LDL presentes na superfície de células endoteliais (ECV304 e HUVEC) sob influência de LDL e da glicosilação protéica. Também avaliar a resposta inflamatória das células endoteliais à interação com estas proteínas. A proteína E2 foi expressa em dois sistemas heterólogos, E. coli e P. pastoris, para avaliação da glicosilação e da interação com LDL na ligação aos R-LDL das células através de citometria de fluxo. As proteínas também foram avaliadas em testes biológicos quanto à indução celular de produção de espécies reativas de oxigênio (EROs totais – QL e H2O2 - citometria de fluxo), NO (QL em fase gasosa e por método de Griess), arginase (espectrofotometria), IL-8 (ELISA), VEGF (ELISA) e morte celular (MTT - espectrofotometria e por anexina V e PI - citometria de fluxo). Os resultados obtidos revelaram que as proteínas E2 recombinantes podem interagir com os R-LDL das células endoteliais após a ligação ao LDL e que esta ligação pode ser melhorada pela glicosilação (E2L) (p<0,01 em relação à E2B). O teste de NO indicou que as proteínas glicosiladas exibem maior potencial para o estímulo deste nas células HUVEC (p<0,01 em relação ao controle negativo). As concentrações de proteínas testadas não ... / Approximately 170 million people worldwide are chronically infected with hepatitis C virus (HCV). In Brazil, the numbers have already reached 3 million. The persistence of HCV infection leads to chronic infection in liver disease, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The envelope protein 2 (E2) of HCV is responsible for its coupling to the host cell through interaction with cell surface receptors such as the R-LDL and CD81, among others. Because changes in micro and macrovasculature liver, have been identified as key elements in the histogenesis and prognosis of the disease, the aim of this study was to evaluate the interaction of the protein E2 recombinant with the R-LDL present on the surface of endothelial cells (HUVEC and ECV304) under the influence of LDL and protein glycosylation. And also evaluate the inflammatory response of endothelial cells to interact with these proteins. The E2 protein was expressed in two heterologous systems, E. coli and P. pastoris for evaluation of glycosylation and interaction with LDL binding to the R-LDL cells by flow cytometry. The proteins were also evaluated in biological tests for induction of cellular production of reactive oxygen species (EROs - QL and H2O2 - flow cytometry), NO (QL in doing gas and Griess Reagent), arginase (spectrophotometry), IL-8 (ELISA), VEGF (ELISA) and cell death (MTT – spectrophotometry and Annexin V and PI - flow cytometry). The results obtained showed that the recombinant E2 protein can interact with R-LDL endothelial cell after binding to LDL and that this binding can be enhanced by glycosylation (E2L) (p <0.01 in relation to E2B). The NO test indicated that glycosylated proteins exhibit greater potential for the stimulation of the HUVEC cells (p <0.01 compared with negative control). Protein concentrations tested were not sufficient to stimulate an increase or decrease in the activity of arginase remarkable compared to the negative control. The recombinant protein ...

Orientador: Fernando Yamamoto Chiba / Banca: Tânia Adas Saliba / Banca: Symone Cristina Teixeira / Resumo: A hepatite B representa um sério problema de saúde pública, devido ao número elevado de indivíduos portadores da doença e às complicações decorrentes de sua evolução. A vacinação é a principal forma de prevenção e torna-se primordial, especialmente, entre os cirurgiões-dentistas e as auxiliares em saúde bucal, devido à exposição frequente à materiais biológicos, instrumentais e ambientes contaminados. O teste anti-HBs, para verificação da imunidade, ainda é um método pouco utilizado pelos profissionais da saúde, pois é pouco relatado na literatura. Considerando a importância da prevenção da hepatite B e a escassez de pesquisas sobre a verificação da imunidade dos profissionais de saúde, no presente estudo objetivou-se avaliar a cobertura vacinal da hepatite B, o resultado do teste anti-HBs, a realização prévia do teste, a interpretação do resultado do mesmo e o recebimento de orientações sobre a doença em cirurgiões-dentistas e auxiliares em saúde bucal do Sistema Único de Saúde de 9 cidades do Noroeste Paulista. Para este propósito, foi aplicado um questionário semiestruturado e auto administrado com questões referentes ao perfil sóciodemográfico, cobertura vacinal, verificação da imunidade e recebimento de orientações sobre a patologia. Para verificar a imunidade à doença, foi utilizado o método imunocromatográfico, por meio do teste anti-HBs. A análise estatística descritiva e os testes Qui-quadrado e Exato de Fisher, ao nível de significância de 5% foram realizados. Do to... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatitis B is a serious public health problem due to the high number of individuals with the disease and complications due to its evolution. Vaccination is the main form of prevention and is especially important among dentists and dental auxiliaries due to frequent exposure to contaminated biological materials, instrumental and environments. The anti-HBs test, for the verification of immunity, is still a method little used by the health professionals, because this approach is few reported in the literature. Considering the importance of the prevention of hepatitis B and the scarcity of researches about the verification of the immunity of health professionals, the present study aimed to evaluate vaccine coverage, anti-HBs test result, previous test performance, interpretation of the result of the test and the receipt of guidelines about hepatitis B in dentists and dental auxiliaries of the Brazil&#39;s national health system of 9 cities of the Northwest of the São Paulo state. For this purpose, a semi-structured and self-administered questionnaire was applied with questions regarding socio- demographic profile, vaccination coverage, verification of immunity and receipt of guidelines about the pathology. Then, to verify the presence of antibodies against the disease, the immunochromatographic method was used by the anti-HBs test. Descriptive statistical analysis and Fisher&#39;s exact test and Chi-square test at a significance level of 5% were performed. Of the 74 dentists, 64... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Objetivo: Diabetes tipo 2 (DM 2) e hepatite C são doenças altamente prevalentes. A associação entre DM2 e infecção pelo vírus C tem sido evidenciada em diversos estudos, porém os mecanismos envolvidos na associação dessas patologias não estão completamente estabelecidos. O objetivo deste estudo é avaliar o nível de resistência e de secreção de insulina em pacientes com DM2 apresentando ou não infecção pelo vírus da hepatite C (HCV). Métodos: Quinze pacientes com diagnóstico de DM2, HCV positivos, e quinze pacientes DM2, HCV negativos (controles) pareados para a idade, sexo e índice de massa corporal (IMC), foram avaliados quanto à história familiar de DM2, uso de tiazídicos, pressão arterial, circunferência da cintura abdominal, glicemia de jejum, insulinemia, perfil lipídico, alanina aminotransferase (ALT), proteína C ultra-sensível (proteína C US) e hemoglobina glicada (HbA1c). O uso de hipoglicemiantes orais e a presença ou não de síndrome metabólica (SM) segundo os critérios da National Cholesterol Education Program’ Adult Treatment Panel III (NCEP-ATPIII), foram considerados em ambos os grupos. A avaliação da resistência à insulina foi realizada pelo HOMA-RI e HOMA peptídeo C. A função da célula beta foi avaliada pela insulinemia e peptídeo C basal e HOMA-B. A relação peptídeo C/insulina em todos os pacientes foi realizada para descartar hiperinsulinemia devido à disfunção hepática. Resultados: Os pacientes de ambos os grupos não apresentaram diferenças estatisticamente significativas quanto à pressão arterial, história familiar de DM2, uso de tiazídicos, circunferência da cintura abdominal, glicemia de jejum, perfil lipídico, hemoglobina glicada, uso de hipoglicemiantes orais, e ao diagnóstico de SM. As médias dos HOMA-RI e HOMA peptídeo-C foram significativamente maiores no grupo dos pacientes com hepatite C (p=0,038 e p=0,017 respectivamente), assim como as dosagens da ALT (p=0,05), insulinemia basal (p=0,029) e as dosagens de peptídeo C (p=0,031). As medidas do HOMA-B (p=0,19), não apresentaram diferenças significativas entre os dois grupos, assim como a relação peptídeo C/ insulina. A proteína C US (p=0,73), mostrou uma correlação positiva com o log-HOMA-RI, mas não foi encontrada diferença significativa entre os grupos. 12 Conclusões: Os resultados do presente estudo são compatíveis com um maior grau de resistência à insulina nos pacientes com DM2, anti-HCV reagentes, quando comparados com os pacientes DM2, anti-HCV não reagentes. Os pacientes com DM2, anti-HCV reagentes não apresentaram deficiência de secreção de insulina, quando comparados ao grupo-controle. A hiperinsulinemia observada no grupo com HCV foi devida mais a um aumento de secreção do que pela diminuição de degradação hepática. O grau de inflamação sistêmica se correlaciona com o grau de resistência à insulina independente da presença do vírus C.

Introdução: Estima-se que existam no mundo 200 milhões de pessoas infectadas pelo HCV, principal agente etiológico responsável por 90 a 95% dos casos de hepatite transfusional não A e não B. As altas percentagens de cronificação da doença, seu potencial evolutivo para cirrose e hepatocarcinoma tornam a hepatite C um sério problema de saúde pública. Dados da Organização Mundial da Saúde estimam que 2,5% a 4,9% da população brasileira esteja infectada pelo HCV, o que significa 3,9 a 7,6 milhões de pessoas com risco de desenvolver cirrose ou hepatocarcinoma. A co-infecção HCV e HIV é relativamente freqüente entre os usuários de drogas ilícitas e os hemofílicos, ocorrendo entre 50% e 75% dos casos. A presença de infecção pelo HIV pode acelerar a evolução da infecção crônica do HCV para cirrose e descompensação hepática bem como aumentar os níveis de viremia pelo HCV .Os genótipos do HCV constituem fator preditivo independente para a resposta ao tratamento anti-viral. As evidências indicam que o genótipo 1 e 4 estão associados a uma pobre resposta ao tratamento com interferon, seja em monoterapia ou em combinação com ribavirina, ao contrário dos genótipos 2 e 3. Os melhores resultados, medidos pelo parâmetro virológico para pacientes com genótipo 2 ou 3, são alcançados com períodos de 6 meses de tratamento, enquanto que pacientes com genótipo 1 necessitam prolongar o tempo de tratamento por um ano. Objetivos: Avaliar a proporção dos diferentes genótipos e subtipos entre os portadores de hepatite C que realizaram genotipagem na 11ª Coordenadoria Regional de Saúde (CRS) e a taxa desses pacientes que realizaram tratamento disponível no Sistema Único de Saúde (SUS). Avaliar a prevalência de co-infecção (hepatite A, B e HIV) entre os pacientes portadores de HCV e sua associação com genótipo do HCV. Descrever a prevalência de fatores de risco para infecção pelo vírus C na amostra. Avaliar a associação dos genótipos do HCV com idade, sexo e outros fatores de risco para infecção pelo HCV. Avaliar a taxa de pacientes com diagnóstico confirmado que recebem pelo menos uma dose de tratamento com interferon/ribavirina. Métodos: Estudo transversal, de pacientes com diagnóstico de HCV encaminhados para genotipagem em laboratório de referência no interior do estado do RS - Brasil. As informações foram obtidas dos registros do laboratório, do Sistema Nacional de Agravos e Notificação e dos prontuários dos pacientes. Os pacientes que receberam pelo menos uma dose do tratamento foram identificados através do registro da Assessoria de Medicamentos Especiais (AME) do estado do RS. A taxa de resposta foi identificada pela negativação do HCV por teste de PCR, 24 e 48 semanas após o término do tratamento. A identificação dos genótipos foi realizada pela técnica de Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) “in house”. Descreveram-se os dados através de medidas de freqüência e de tendência central, calculando-se intervalo de confiança de 95% quando cabível. Analisou-se a associação de fatores de risco com o genótipo através do teste Quiquadrado e Teste t de Student. As associações de co-infecção por HIV e de tratamento e resposta viral sustentada com o tipo de genótipo foram analisadas através do teste exato de Monte Carlo. Para identificação de fatores independentemente associados aos diferentes genótipos empregou-se regressão logística multinomial. Estimaram-se as razões de prevalência através de regressão de Poisson. Resultados: Foram incluídos 441 pacientes, de 41,1 ±12,0 anos, sendo 56,5% homens. A proporção de genótipo 1 foi de 41,5%, genótipo 2 de 19,3% e genótipo 3 de 39,2%. Três pacientes (0,7%; IC95% 0 - 1,5) apresentaram co-infecção HBV/HCV e 38 dos 237 pacientes com informação sobre HIV foram positivos (16% IC 95% 9.5-13.7). Não houve associação de co-infecção por HIV com genótipo. A taxa de pacientes tratados foi de 37,0%. De 52 pacientes avaliáveis, 63,5% apresentaram resposta viral sustentada (RVS), sendo 9 pacientes com genótipo 1 (64,3%), 14 com genótipo 2 (87,5%) e 10 com genótipo 3 (45,5%; P=0,026). Observou-se associação significativa entre sexo feminino e genótipo 2 e faixa etária maior para genótipo 2 (52,2 ±12,8 anos). Fatores de risco para infecção por HCV foram tratamento cirúrgico, uso de drogas injetáveis e inaláveis, tratamento dentário (p<0,05%). Dos pacientes estudados, 163 (37%) realizaram tratamento em algum momento do estudo e nestes a taxa de respondedores para genótipo 1, 2 e 3 foram de 64,3%, 87,5% e 45,% respectivamente. Conclusão: Observa-se maior proporção do genótipo 1, seguido do genótipo 3 o qual foi mais freqüente que o descrito em outros estudos realizados no RS e Brasil. A prevalência de co-infecção de hepatite C com hepatite B é baixa. Coinfecção com HIV é mais freqüente, mas inferior ao observado na literatura. A taxa de pacientes com diagnóstico confirmado que recebem pelo menos uma dose de tratamento com interferon/ribavirina através do SUS é menor que o esperado, enquanto que a menor resposta viral sustentada para pacientes portadores do genótipo 3 quando comparado ao genótipo 1 deve ser confirmada por novos estudos. Muitos pacientes que realizam genotipagem não foram tratados talvez por não atender aos critérios de tratamento ou por dificuldades de acesso ao sistema público gratuito de tratamento. Mas, entre os pacientes que foram tratados, a taxa de resposta ao tratamento foi maior em geral do que nos relatos da literatura. A base de dados do SINAN é uma importante ferramenta para coleta de dados, para implantação e avaliação de políticas de prevenção e tratamento na área de saúde pública. / Introduction: It is estimated that HCV has infected 200 million people in the world, since it is the main etiological agent responsible for 90 to 95% of the cases of transfusional hepatitis non A and non B. High percentage of chronification of the disease, its potential evolution to cirrhosis and hepatocarcinoma make hepatitis C a serious problem of public health. Data from World Health Organization estimate that 2.5% to 4.9% of Brazilian population is infected by HCV, which means 3.9 to 7.6 million people with risk of cirrhosis or hepatocarcinoma. Factors related to the virus, as viral load, may influence the evolution of chronic hepatitis to cirrhosis and hepatocarcinoma. HCV and HIV co-infection is relatively frequent among users of illicit drugs and hemophilic, occurring between 50% and 75% of the cases. Presence of HIV infection can accelerate the evolution of HCV chronic infection to cirrhosis and hepatic discompensation and increase the levels of HCV viremia as well. HCV genotype is an independent predictor of response to anti-viral treatment. Evidences indicate that genotypes 1 and 4 are associated to a poor response to the treatment with interferon, either in monotherapy or in combination with ribavirin, the opposite of genotypes 2 and 3. Best results, mesured by virological parameter for patients with genotype 2 or 3, are reached with periods of 6 months of treatment, whereas patients with genotype 1 need one year of treatment. Objectives: 1. To evaluate the proportion of different genotypes and subtypes among patients with hepatitis C referred to genotyping in 11ª Regional Center of Health (CRS) and the rate of these patients that under go treatment offered by Public Health System (SUS). 2. To evaluate the prevalence of co-infection (hepatitis A, B and HIV) among patients with HCV and its association with HCV genotype. 3. To describe the prevalence of risk factors for virus C infection in the sample and the association of HCV genotypes with age, sex and other risk factors for HCV infection. 4. To evaluate the rate of patients with confirmed diagnosis receiving at least one dose of treatment with interferon/ribavirin. Methods: Cross sectional study of patients with HCV diagnosis referred to genotyping in a reference laboratory in a small town of RS - Brazil. Data were collected from registers of the laboratory, registers of the National Disease Surveillance Data System (SINAN) and charts of the patients. Those patients who received at least one dose of the treatment were identified in the registers of Special Drugs Assessory (AME) of RS, Brazil. The rate of response was identified by the negativation of HCV through PCR test, 24 and 48 weeks after the end of the treatment. The identification of genotypes was done using Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) “in house”. Data were described with measures of frequency and central tendency, and 95% confidence interval was calculated when applicable. The association between risk factors and genotype was analyzed using Chi-square and T Student tests. Associations of HIV co-infection and of treatment and sustained viral response with genotype were analyzed with Monte Carlo test. To identify factors independently associated to different genotypes, we used multinomial logistic regression. We estimated prevalence ratio using Poisson regression. Results: 441 patients were subjected to genotyping, age 41,1 ±12,0 years, 56,5% males. Proportion of genotype 1 was 41,5%; genotype 2, 19,3% in genotype 3, 39,2%. Three patients (0,7%; IC95% 0 - 1,5) presented HBV/HCV co-infection and 38 of 237 patients with HIV information were positive (16% IC 95% 9.5-13.7). There was no association between HIV co-infection and genotype. The rate of treated patients was 37,0%. Of 52 patients evaluable, 63,5% presented SVR, 9 patients with genotype 1 (64,3%), 14 with genotype 2 (87,5%) and 10 with genotype 3 (45,5%; P=0,026). We observed genotype 2 was more prevalent among women and patients carrying genotype 2 were older (52,2 ±12,8 years). Among risk factors for HCV infection were surgical treatment, use of intravenous and inhalation drugs and dental procedures (p<0,05%). 163 patients (37%) were submitted to treatment in one moment of this study and, in this, rate of response for genotype 1, 2 and 3 were 64,3%, 87,5% and 45,0% respectively. Conclusion: We observed higher genotype 3 prevalence when in comparison with other studies in RS and Brazil. Prevalence of hepatitis C with hepatitis B coinfection is low. HIV co-infection is more frequent, but lower than observed in the literature. Rate of patients with confirmed diagnosis that receive at least one dose of treatment with interferon/ribavirin via SUS is lower than we could expect, and SVR is lower for patients with genotype 3 than genotype 1. But these data must be confirmed by new studies. A lot of patients submitted to genotyping did not receive treatment from public health system, maybe because they did not attend the criteria for treatment or because of low access to the treatment. However, among the patients submitted to treatment, the rate of response was greater than the one present in literature. SINAN data is an important tool to collect data, to implement and evaluate policies of prevention and treatment in public health.

O diagnóstico laboratorial do Vírus da Hepatite C (HCV) pode ser realizado através de análises sorológicas ou por técnicas de biologia molecular. Os testes moleculares são divididos em qualitativos, quantitativos e de genotipagem. Esses são utilizados para confirmação diagnóstica, escolha da terapia antiviral e monitoramento do tratamento. Diversos testes moleculares comerciais estão disponíveis no mercado, no entanto, limitações como o custo elevado, alta complexidade e falta de validação são impeditivos para sua ampla utilização no país. Em razão das dificuldades citadas, novos métodos moleculares têm sido propostos como alternativa. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo o aprimoramento de um método in house para extração e purificação do RNA de HCV, bem como sua detecção qualitativa e genotipagem, utilizando hibridização em microplacas do produto de PCR biotinilado, seguido de detecção colorimética. A região 5'-NCR do HCV foi escolhida para a amplificação. Para avaliar a eficiência do método colorimétrico de hibridização reversa (MCHR) proposto, os resultados foram comparados com os métodos de referência para detecção qualitativa e genotipagem do HCV. Entre as 85 amostras de plasma analisadas, a sensibilidade e especificidade do MCHR para detecção do RNA viral, quando comparado com Cobas Amplicor HCV Assay v2.0, foram de 100% (95% IC; 92,75% - 100%) e de 97,2% (95% IC; 85,48% -100%), respectivamente. Os valores preditivo positivo e preditivo negativo foram de 98% (95% IC; 89,36% - 99,95%) e de 100% (95% IC; 90,01% - 100%), respectivamente. O Kappa encontrado foi de 0,976 (p < 0,001), mostrando alto grau de concordância entre os dois métodos de detecção qualitativa. Para genotipagem do HCV, pôde-se observar 97,22% (35/36) de concordância entre o MCHR e o seqüenciamento de DNA. O Kappa encontrado foi de 0,976 (p < 0,001), mostrando alto grau de concordância entre os dois métodos de genotipagem. Sendo assim, o método proposto apresentou bons resultados de sensibilidade e especificidade, com alto grau de concordância com os métodos de referência, tanto para detecção qualitativa, como para genotipagem do HCV. / The tests for HCV diagnosis are divided into serological and molecular assays. The molecular assays are used to confirm viremia, choice of antiviral therapy and monitor the response to antiviral therapy. A variety of commercial molecular assays have been developed, however, limitations such as the high cost, high complexity and lack of validation impede its widespread use, especially in developing countries. Because of the difficulties cited above, new molecular biology techniques have been proposed as alternatives. Thus, this study aimed at the improvement of an in house method for extraction and purification of RNA from HCV as well as its qualitative detection and genotyping, using hybridization in microplates of biotin-labeled PCR products, followed by colorimetric detection. The region of HCV 5'-NCR was chosen for the amplification. To evaluate the efficiency of colorimetric microwell hybridization assay (CMHA), the results obtained were compared with the reference methods. Among the 85 plasma samples analyzed, the sensitivity and specificity of CMHA for viral RNA detection, when compared with Cobas Amplicor HCV assay v2.0, were 100% (95% CI, 92.75% - 100%) and 97.2% (95% CI, 85.48 % -100%), respectively. The positive predictive and negative predictive values were 98% (95% CI, 89.36% - 99.95%) and 100% (95% CI, 90.01% -100%), respectively. The calculated Kappa was 0.976 (p <0001), showing high correlation between the two methods. Similarly, it was observed 97.22% (35/36) of agreement between the DNA sequencing data and MCHR, for HCV genotyping. The Kappa values was 0.976 (p <0001), showing high correlation between the two methods. The proposed method showed good sensitivity and specificity, with a high degree of concordance between the reference methods for both qualitative detection and for genotyping of HCV.