Made available in DSpace on 2016-02-26T14:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KellenFavero.pdf: 755145 bytes, checksum: 75ab2d5ef8d4f2b22c66ab7bbf6d6e59 (MD5) Previous issue date: 2009-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The potential for Trichospilus diatraeae Cherian & Margabandhu, 1942 (Hymenoptera:Eulophidae) as biological control agent in Brazil is unknown and, therefore, this research assessed the feasibility of pupae of Tenebrio molitor Linnaeus, 1758 (Coleoptera:Tenebrionidae) as host alternative, to optimize its production in the laboratory for the control of Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae). This research was conducted in the laboratory of Entomology of the Federal University of Grande Dourados. Initially, it was evaluated the reproductive performance of T. diatraeae in the host T. molitor by building the table of life and fertility. Host pupae that were individualized with females of the parasitoid in glass tubes. Daily, the pupae were exchanged, until the death of all females. The survival of immatures was 92.65%. The females of the parasitoid had estimated average life of 8.28 ± 1.01 (days), with innate capacity of increase in number of 0.15, net reproductive rate of 37.50; finite rate of increase of 1.16; average time between generations of 23.67 days and time of doubling the population of 4.52 weeks. It appears that pupae of T. molitor are suitable for the development of T. diatraeae. It was subsequently assessed the effect of density on the reproductive capacity of T. diatraeae created in pupae of T. molitor. For this, pupae of T. molitor with 24 hours of age were exposed to parasitism of females of T. diatraeae with 48 hours of age, for 72 hours in host-parasitoid relationships 1:1, 1:7, 1:14, 1:21, 1:28 and 1:32, respectively, with 12 repetitions for each treatment. There are percentages of parasitism of 33.33 and 83.33% for the densities of 1:1 and 14:1, respectively and 100% for the other. The emergence of individuals of T. diatraeae in pupae of T. molitor was 75% in the density of 1:1 and 100% at densities of 21:1, 28:1, 32:1. The cycle length of T. diatraeae ranged from 21.00 ± 2.22 to 24.00 ± 2.00 days for the densities of 32:1 and 1:1, respectively. The progeny of T. diatraeae by pupa of T. molitor was higher in density of 21:1 with an average of 246.50 ± 50.18. The sex ratio decreased with increasing densities of T. diatraeae, ranging from 0.82 ± 0.06 and 0.97 ± 0.01. The proportion of 21 females of T. diatraeae by pupa of T. molitor can be considered more appropriate for the establishment of the parasitoid, due to higher production of offspring in less development time. Then evaluated the reproductive performance of T. diatraeae pupae in the natural host D. saccharalis and alternative T. molitor. Pupae of hosts with 24 hours of age were exposed to parasitism for 72 hours for females of T. diatraeae of 48 hours of age. The duration of the life cycle of T. diatraeae was 20.00 ± 0.00 and 22.89 ± 0.35 days for pupae of D. saccharalis and T. molitor, respectively, with 100 and 80% parasitism and 40 emergency and 75% of this parasitoid on the first and second host, respectively. The progeny of T. diatraeae was 354.00 ± 41.09 and 151.56 ± 30.97 per pupa of D. saccharalis and T. molitor, respectively. The number of individuals of T. diatraeae not completed the development was higher in pupae of D. saccharalis (71.50 ± 19.33). The sex ratio of T. diatraeae in pupae of D. saccharalis and T. molitor showed similar values (0.94 ± 0.01 and 0.93 ± 0.02), respectively. The longevity of females and males of T. diatraeae emerged from pupae of D. saccharalis and T. molitor was (5.93 ± 0.70 and 7.0 ± 1.53) and (12.04 ± 0.69 and 8.4 ± 1.19) days, respectively. In general, the biological characteristics of T. diatraeae were better in pupae of D. saccharalis than T. molitor. The techniques developed have proved suitable for the establishment of T. diatraeae in the laboratory. This knowledge may increase the chances of success of natural enemies in biological control programs for the drilling of sugar cane / O potencial de Trichospilus diatraeae Cherian & Margabandhu, 1942 (Hymenoptera: Eulophidae) como agente de controle biológico no Brasil é pouco conhecido e, por isso, esta pesquisa avaliou a viabilidade de pupas de Tenebrio molitor Linnaeus, 1758 (Coleoptera: Tenebrionidae) como hospedeiro alternativo, visando otimizar sua produção em laboratório para o controle de Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae). Esta pesquisa foi conduzida no laboratório de Entomologia da Universidade Federal da Grande Dourados. Inicialmente, foi avaliado o desempenho reprodutivo de T. diatraeae no hospedeiro T. molitor através da construção de tabela de vida e fertilidade. Pupas desse hospedeiro foram individualizadas com fêmeas do parasitóide em tubos de vidro. Diariamente, as pupas foram trocadas, até a morte de todas as fêmeas. A sobrevivência dos imaturos foi de 92,65%. As fêmeas do parasitóide apresentaram longevidade média estimada de 8,28 ± 1,01 (dias), com capacidade inata de aumentar em número de 0,15; taxa líquida de reprodução de 37,50; razão finita de aumento de 1,16; tempo médio entre as gerações de 23,67 dias e tempo de duplicação da população de 4,52 semanas. Constata-se que pupas de T. molitor são adequadas para o desenvolvimento de T. diatraeae. Posteriormente, foi avaliado o efeito da densidade na capacidade reprodutiva de T. diatraeae criado em pupas de T. molitor. Para isso, pupas de T. molitor com 24 horas de idade foram expostas ao parasitismo de fêmeas de T. diatraeae com 48 horas de idade, por 72 horas nas relações hospedeiro-parasitóide 1:1, 1:7, 1:14, 1:21, 1:28 e 1:32, respectivamente, com 12 repetições para cada tratamento. Observou-se porcentagens de parasitismo de 33,33 e 83,33% para as densidades de 1:1 e 14:1, respectivamente e de 100% para as demais. A emergência de indivíduos de T. diatraeae em pupas de T. molitor foi de 75% na densidade de 1:1 e de 100% nas densidades de 21:1, 28:1, 32:1. A duração do ciclo de T. diatraeae variou de 21,00 ± 2,22 a 24,00 ± 2,00 dias, para as densidades de 32:1 e 1:1, respectivamente. A progênie de T. diatraeae por pupa de T. molitor foi maior na densidade de 21:1 com média de 246,50 ± 50,18. A razão sexual decresceu com o aumento das densidades de T. diatraeae, variando entre 0,82 ± 0,06 e 0,97 ± 0,01. A proporção de 21 fêmeas de T. diatraeae por pupa de T. molitor pode ser considerada a mais adequada para a criação desse parasitóide, devido a maior produção de descendentes em menor tempo de desenvolvimento. Em seguida avaliou-se o desempenho reprodutivo de T. diatraeae em pupas do hospedeiro natural D. saccharalis e alternativo T. molitor. Pupas desses hospedeiros com 24 horas de idade foram expostas ao parasitismo durante 72 horas por fêmeas de T. diatraeae de 48 horas de idade. A duração do ciclo de vida de T. diatraeae foi de 20,00 ± 0,00 e 22,89 ± 0,35 dias em pupas de D. saccharalis e T. molitor, respectivamente, com 100 e 80% de parasitismo e 40 e 75% de emergência desse parasitóide sobre o primeiro e segundo hospedeiro, respectivamente. A progênie de T. diatraeae foi de 354,00 ± 41,09 e 151,56 ± 30,97 por pupa de D. saccharalis e T. molitor, respectivamente. O número de indivíduos de T. diatraeae que não completaram o desenvolvimento foi maior em pupas de D. saccharalis (71,50 ± 19,33). A razão sexual de T. diatraeae em pupas de D. saccharalis e de T. molitor apresentou valores semelhantes (0,94 ± 0,01 e 0,93 ± 0,02), respectivamente. A longevidade de fêmeas e machos de T. diatraeae emergidos de pupas de D. saccharalis e de T. molitor foi de (5,93 ± 0,70 e 7,0 ± 1,53) e de (12,04 ± 0,69 e 8,4 ± 1,19) dias, respectivamente. De maneira geral, as características biológicas de T. diatraeae foram melhores em pupas de D. saccharalis do que em T. molitor. As técnicas desenvolvidas mostraram-se apropriadas para a criação de T. diatraeae em laboratório. Esses conhecimentos poderão aumentar as possibilidades de sucesso desse inimigo natural em programas de controle biológico da broca-da-cana-de açúcar

Esporotricose é uma micose subcutânea, causada principalmente pelo fungo Sporothrix schenckii e a nova espécie Sporothrix brasiliensis. Foi relatado na literatura que os camundongos infectados com a cepa de S. schenckii M-64 produziu uma resposta imune mista, em que o soro dos camundongos infectados reagiram apenas com uma glicoproteína de 70 kDa (gp70), identificada como importante fator de virulência. Assim o presente trabalho visa avaliar a importância à virulência e eficácia do anticorpo monoclonal P6E7 em outras cepas do complexo Sporothrix. Camundongos foram infectados com as cepas de S. schenckii (1099-18 e 15383) e S. brasiliensis (5110 e 17943). Cada 7 dias, o baço e fígado foram retirados para a análise do UFC e citocinas. Foi realizado western blot com o soro dos camundongos infectados e com anticorpo monoclonal P6E7 utilizando o exoantígenos das diferentes cepas. Foi realizado protocolo de tratamento com o anticorpo P6E7 nos camundongos infectados, para a avaliação da carga fúngica no baço e no fígado. Análise de citocinas mostrou que as cepas de S. schenckii induziram uma resposta mista Th1/Th2, entretanto nos camundongos infectados com as cepas de S. brasiliensis, não foi observada produção significativa de citocinas. No western blot realizado com exoantígenos das cepas de Sporothrix sp. foi observado diferentes componentes antigênicos, quando o soro de camundongos infectados foi utilizado, porém a reação com anticorpo monoclonal contra a gp70 demonstrou que a gp70 estava presente apenas no exoantígeno da cepa mais virulenta 5110. Infecção realizada com todas as cepas demonstrou cronicidade pela análise UFC. O tratamento com o AcMo P6E7 foi eficaz no tratamento da esporotricose experimental, sendo capaz de diminuir a carga fúngica, principalmente no baço dos camundongos infectados. / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis, caused mainly by fungi Sporothrix schenckii and the new specie Sporothrix brasiliensis. Was reported in previous studies that mice infected with low virulent S. schenckii M-64 strain, produced a mixed immune response, where the infected mice serum reacted only with a 70 kDa glycoprotein (gp70), identified as important virulence factor. Thus, the present study aims to evaluate the virulence importance and effectiveness of monoclonal antibody P6E7 in other Sporothrix complex strains. Mice were infected with Sporothrix yeast strain of S. schenckii (1099-18 and 15383) and S. brasiliensis (5110 and 17943). Each 7 days, the spleen and liver were taken for CFU and cytokines analysis. The western blot was performed with the serum obtained from infected mice and a monoclonal antibody P6E7 using exoantigens from different strains. Was performed treatment protocol with the monoclonal antibody P6E7 on infected mice, for spleen and liver fungal burden evaluation. Cytokine analysis showed that S. schenckii strains induce a mixed Th1/Th2 response, however in the S. brasiliensis strains wasn\'t observed significant cytokine production. In western blot accomplished with the strains exoantigens was observed different antigenic components when the infected mice serum was used, however with monoclonal antibody against gp70 demonstrated that gp70 was present only in most virulent strain 5110. Infection performed with all strains demonstrated chronicity for CFU analysis. Treatment with Mab P6E7 was effective in experimental sporotrichosis, with reducing capable of fungal load, mainly in the spleen of infected mice.

Made available in DSpace on 2016-08-17T15:00:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paulo Adriano Dias.pdf: 333147 bytes, checksum: 43e74d9d8545a20d163895a21cf14b1b (MD5) Previous issue date: 2008-01-25 / This list of species is the first study dealing with bat flies in the Maranhão State. The work was done at seven different areas in the cities Bacabeira, São Luis, Santa Inês and Tufilândia. The bats were captured in mists nets and the parasites were collected with tweezers. A total of 559 bat flies belonging to 25 species, (22 species of the family Streblidae and 2 of Nycteribiidae), were colleted from 118 bats belonging to 22 species, 13 genera and 4 families. Trichobius joblingi Wenzel, 1966 was the most frequent species with 28.7% of the collected individuals. This study registered a high number of species of bat flies in the state, evidencing the importance of the area for studies of biodiversity, as well as aspects related to host-parasite relationships. / Esta lista preliminar de espécies de moscas ectoparasitas de morcegos é o primeiro estudo com esse grupo no Estado do Maranhão. O levantamento foi realizado em sete localidades nos municípios Bacabeira, São Luis, Santa Inês e Tufilândia. Os morcegos foram capturados em redes de neblina e os parasitas retirados destes com pinças. No total foram capturadas 559 moscas pertencentes a 25 espécies (11 gêneros), sendo 22 espécies da família Streblidae e duas da Nycteribiidae. Trichobius joblingi Wenzel, 1966 foi a espécie mais freqüente, representando 28.7% dos indivíduos coletados. As moscas encontravam-se infestando 118 morcegos pertencentes a 22 espécies, 13 gêneros e 4 famílias. Este estudo registrou uma alta riqueza de espécies de moscas e de morcegos no estado, evidenciando a importancia da região para estudos em biodiversidade, bem como aspectos relacionados à relação parasito-hospedeiro.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-06-06T18:14:40Z No. of bitstreams: 1 2015 - Vin?cius Menezes Tunholi Alves.pdf: 1609397 bytes, checksum: 1c31fd547893728f1c9c9165ee10137c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T18:14:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015 - Vin?cius Menezes Tunholi Alves.pdf: 1609397 bytes, checksum: 1c31fd547893728f1c9c9165ee10137c (MD5) Previous issue date: 2015-07-01 / FAPERJ / Angiostrongylus cantonensis Chen, 1935 was first described as a parasite of the pulmonary artery of Rattus norvegicus and Rattus rattus in Canton, China. This helminth is an etiological agent of eosinophilic meningoencephalitis, a zoonotic disease endemic to certain Asian countries, which has recently dispersed to Africa, North and South America, and Caribbean islands. Currently Brazil is considered an area of high risk for the establishment of human angiostrongyliasis, due mainly to the occurrence of naturally infected snails and rodents, acting respectively as definitive and intermediate hosts of this parasite, directly favoring the transmission dynamics of neural angiostrongyliasis. In its life cycle, snails act as intermediate hosts, allowing the development of infective larval forms in the definitive host. In recent years, the metabolic characteristics of experimentally infected snails have been studied in an effort to develop measures to control the pathologies transmitted by these organisms. However, there is little information on the relationship between A. cantonensis and the freshwater snail Biomphalaria glabrata, which is cause for concern, not only because of the importance of this parasite, but also due to the widespread distribution of this snail in Brazil. In this study, the metabolic alterations of B. glabrata resulting from experimental infection by A. cantonensis were evaluated. For this purpose, snails of the pigmented strain were used, reared in the laboratory since oviposition. Two overall groups were formed: control (C1, C2 and C3), with uninfected animals, and treated (I1, I2 and I3), with infected snails. Each subgroup was composed of 10 snails. The entire experiment was performed in duplicate, utilizing a total of 120 snails. After one, two and three weeks of infection, 20 snails from each group were dissected to collect the hemolymph and tissues. The spectrophotometric readings were performed with Doles commercial reagent kits. The biochemical measurement demonstrated that infection by A. cantonensis induced a significant reduction in the hemolymph concentrations of calcium after one week of infection, followed by an increase in the concentrations of this ion in the second week of infection. This situation was accompanied by intense mobilization of CaCO3 in the shell of the infected snails, possibly as an attempt to reestablish the acid-base equilibrium after its alteration during the parasites? development. The histopathology results also demonstrated morphological changes in the digestive gland of infected snails, mainly in the form of granulomatous reactions and areas of metastatic calcification. Variations in the reserves of neutral lipids stored in the digestive gland-gonad complex were also observed. Infection resulted in a significant decrease in the concentrations of cholesterol and an increase in the levels of fatty acid and triacylglycerol after the first two weeks of infection. The increase in the concentration of fatty acid was associated with an increase in lipase activity, indicating that A. cantonensis induces activation of a lipolytic process during development in its intermediate host. Finally, infection by A. cantonensis resulted in changes in the oxidative metabolism of B. glabrata. Besides depletion of the polysaccharide reserves stored in the digestive gland and cephalopodal mass, parasitism by A. cantonensis induced activation of the host?s anaerobic metabolism, resulting not only in an increase in activity of lactate dehydrogenase in the hemolymph, but also reduction of the levels of pyruvic acid and accumulation of lactate. This is an interesting adaptive response of the host to infection, enabling the host, through anaerobic metabolism, to generate energy while still maintaining its redox balance. Additionally, the reduction in the concentrations of oxalic acid in the final parasite development periods suggests its diversion to gluconeogenesis, indicating the involvement of this molecule as a precursor in the synthesis of glucose-6-phosphate. This metabolic condition was accompanied by a deletion in oxidative phosphorylation infected snails (1 and 2 weeks) after infection, suggesting a decrease in the number of mitochondria in the examined tissue, or suppression of enzymatic centers related to oxidative reactions. / O nemat?ide Angiostrongylus cantonensis foi primeiramente descrito como parasito de art?ria pulmonar de Rattus norvegicus e Rattus rattus em Canton, China. Este helminto tem sido mencionado como principal agente etiol?gico da meningoencefalite eosinof?lica humana, uma metazoonose end?mica no continente asi?tico e que recentemente, tem-se disseminado para ?frica, Norte e Sul da Am?rica e Ilhas do Caribe. Atualmente, o Brasil ? considerado ?rea de alto risco ao estabelecimento da angiostrongil?ase humana, justificado n?o somente pela presen?a de moluscos, mas tamb?m roedores naturalmente infectados, que atuam respectivamente como hospedeiros intermedi?rios e definitivos desse parasito, fatores que favorecem diretamente a din?mica de transmiss?o da angiostrongil?ase neural. Em seu ciclo de vida moluscos atuam como hospedeiros intermedi?rios, possibilitando a partir se sua infec??o, o desenvolvimento de formas larvais infectantes ao hospedeiro definitivo. Nos ?ltimos anos, a caracteriza??o de padr?es metab?licos de moluscos infectados experimentalmente, tem sido estudada como base para o desenvolvimento de medidas focadas principalmente no controle de patologias transmitidas por estes organismos. Por?m, quando nos referimos a modelos experimentais utilizando A. cantonensis e Biomphalaria glabrata, os dados ainda s?o escassos, o que preocupa, n?o apenas pela import?ncia do parasito, mas tamb?m pela ampla distribui??o da esp?cie B. glabrata no Brasil. Neste estudo, foram observadas altera??es no metabolismo mineral, lip?dico e oxidativo de B. glabrata, decorrentes da infec??o experimental por A. cantonensis. Para isso, foram utilizados moluscos da linhagem pigmentada criados desde a oviposi??o e mantidos em condi??es laborat?riais. Foram formados dois grupos: controle (C1, C2, C3) com animais n?o infectados e infectados (I1, I2 e I3). Os grupos eram compostos por 10 moluscos. Todo experimento foi feito em duplicata, utilizando um total de 120 moluscos. Ap?s 1, 2 e 3 semanas de infec??o, 20 moluscos de cada grupo eram dissecados para a coleta da hemolinfa e tecidos. As leituras espectrofotom?tricas foram realizadas a partir de kits comercias da marca Doles. As dosagens bioqu?micas demonstraram que a infec??o por A. cantonensis induziu uma diminui??o significativa nos conte?dos hemolinf?ticos de c?lcio ap?s primeira semana de infec??o, seguido por um aumento nas concentra??es desse ?on na segunda semana de estudo. Este cen?rio foi acompanhado por uma intensa mobiliza??o de CaCO3 na concha de moluscos infectados, possivelmente como tentativa em restabelecer o equil?brio ?cido-base alterado durante o desenvolvimento do parasito. Resultados histopatol?gicos demonstraram ainda altera??es morfol?gicas na gl?ndula digestiva de moluscos infectados, caracterizadas principalmente na forma de rea??es granulomatosas e ?reas de calcifica??o metast?tica. Varia??es nas reservas de lip?dios neutros estocados no complexo gl?ndula digestiva-g?noda foram tamb?m demonstradas. A infec??o resultou em um decr?scimo significativo nos conte?dos de colesterol e no aumento dos n?veis de ?cido graxo e triacilglicerol ap?s as duas primeiras semanas de infec??o. O aumento nos conte?dos de ?cido graxo foi associado ao aumento da atividade lip?sica, indicando que A. cantonensis induz de fato a ativa??o de um processo lipol?tico durante etapa de desenvolvimento em seu hospedeiro intermedi?rio. Por fim, a infec??o de A. cantonensis resultou em mudan?as no metabolismo oxidativo de B. glabrata. Al?m da deple??o de reservas polissacar?dicas estocadas na gl?ndula digestiva e massa cefalopodal, o parasitismo por A. cantonensis induziu a ativa??o do metabolismo anaer?bio de seu hospedeiro, resultando n?o apenas no aumento da atividade da lactato desidrogenase hemolinf?tica, mas tamb?m na redu??o dos n?veis de ?cido pir?vico e ac?mulo de lactato. Isso representa uma interessante resposta adaptativa do hospedeiro frente ? infec??o, possibilitando o hospedeiro a partir do metabolismo anaer?bio, gerar energia e ao mesmo tempo mant?m seu balan?o redox. Adicionalmente, a redu??o nas concentra??es de ?cido ox?lico observado nos per?odos finais do desenvolvimento parasit?rio, sugere o seu desvio para a gliconeog?nese, destacando o envolvimento dessa mol?cula como precursora na s?ntese de glicose-6-fosfato. Este cen?rio metab?lico foi acompanhado por uma supress?o na fosforila??o oxidativa de moluscos infectados (1 e 2 semanas) de infec??o, sugerindo uma diminui??o na quantidade de mitoc?ndrias no tecido analisado, ou ainda, na inibi??o de centros enzim?ticos relacionados ?s rea??es oxidativas.

Plantas de mostarda-do-campo (Brassica rapa) exibindo intenso superbrotamento de ramos finos, com folhas e flores de tamanho reduzido, foram observadas em campos cultivados com couve-flor. Como os sintomas se mostravam similares àqueles induzidos por fitoplasmas, suspeitou-se que esta espécie daninha estava infectada por este tipo patógeno. Visando confirmar a diagnose, plantas foram amostradas e seu DNA extraído para ser usado em ensaios de duplo PCR, conduzidos com os iniciadores R16mF2/mR1, SN910601/SN011119, 16F2n/R2 e R16(III)F2/16(III)R. As amplificações de fragmentos genômicos correspondentes ao 16S rRNA revelaram uma constante associação entre um fitoplasma do grupo 16SrIII com as plantas sintomáticas. A doença foi denominada de superbrotamento. Cigarrinhas da espécie Agalia albidula foram coletadas nas áreas marginais e no interior dos campos de couve-flor, onde cresciam plantas de mostarda-do-campo. O DNA total foi extraído e usado em duplo PCR desenvolvido com os mesmos iniciadores citados anteriormente. Os resultados mostraram que os insetos analisados eram portadores de um fitoplasma do grupo 16SrIII. Para alguns isolados do fitoplasma encontrado em plantas de mostarda-do-campo, os produtos amplicados em duplo PCR com os iniciadores R16(III)F2/16(III)R foram sequenciados e confirmaram que as sequências pertenciam a um representante do grupo 16SrIII. Mapas de sítios putativos de restrição foram elaborados com o emprego de diversas endonucleases, porém não se logrou sucesso em definir a identidade deste fitoplasma ao nível de classificação de subgrupo. Com base nos resultados obtidos no presente estudo, plantas de mostarda-do-campo servem como hospedeiro alternativo de um fitoplasma do grupo 16SrIII, o qual foi anteriormente associado à doença conhecida como enfezamento, ocorrente em outras espécies de brássica, como repolho, brócolis e couve-flor. Assim, é sugerido que esta espécie daninha possa abrigar o agente de doença, garantindo sua sobrevivência e atuando como fonte de inóculo para as culturas comerciais. Além disto, cigarrinhas da espécie A. albidula podem ser apontadas como potenciais vetores do fitoplasma relacionado ao superbrotamento da mostarda-do-campo, bem como ao agente causal do enfezamento em brássicas. A presente pesquisa contribuiu para melhor compreensão dos aspectos relacionados aos enfezamentos das brássicas, envolvendo diversidade de fitoplasmas, gama de hospedeiros alternativos destes agentes de doença e ocorrência de vetores deste tipo de patógeno. / Mustard-field plants (Brassica rapa) showing intense shoots proliferation, small sized leaves and flowers, were observed in cauliflower production fields. Since the symptoms were similar to those induced by phytoplasmas, it was suspected that this weed was infected by this type of pathogen. To confirm the diagnosis, plants were sampled for DNA extraction to be used in nested PCR tests conducted with primers R16mF2/mR1, SN910601/SN011119, F6F2n/R2 and R16(III)F2/16(III)R. The amplification of genomic fragments corresponding to the 16S rRNA showed a constant association between a phytoplasma group 16SrIII with symptomatic plants. The disease was called witche\"s broom. Species of leafhopper, Agalia albidula, were collected in marginal areas and at cauliflower fields, where mustard-field plants grew. The total DNA was extracted and used in nested PCR carried out with the same primers mentioned above. The results showed that the insects analyzed were carriers of a phytoplasma group 16SrIII. For some isolates of phytoplasma found in mustard-field plants, the products obtained in nested PCR with primers R16(III)F2/16 (III)R were sequenced and confirmed that belonged to a representative 16SrIII group. Putative restriction sites maps, were prepared using a many restriction endonucleases, but no success has been achieved in defining the identity of the phytoplasma subgroup classification level. Based on the results in the present study, mustard-field plants could be an alternative host of a phytoplasma group 16SrIII, which was previously associated with the disease known as stunting, occurring in other species of rapeseed such as cabbage, broccoli and cauliflower. Thus, it is suggested this weed could harbor the disease agent, ensuring their survival and acting as a source of inoculum for commercial crops. Moreover, the species of leafhoppers, A. albidula, could be identified as a potential vector of the phytoplasma associated with witche\"s broom mustard-field as well as the causal agent of stunting in brassicas. This research contributed to understanding the issues related to stunting in brassicas, involving a diversity of phytoplasmas, range of alternative hosts of these disease agents and occurrence of vectors of this pathogen type.

A vassoura-de-bruxa é a doença mais importante da cultura do cacaueiro, nos países onde ela ocorre. Em 1989 foi constatada pela primeira vez a presença do patógeno causador dessa doença na principal região produtora do Brasil. A falta de medidas de controle eficientes resultou, nos últimos anos, em menor produção, mudanças no uso da terra, venda de propriedades, diminuição do nível de emprego e danos ao meio ambiente. Em vista do pouco conhecimento sobre aspectos epidemiológicos da doença nas condições do sudeste da Bahia, elaborou-se o presente trabalho com os seguintes objetivos: estudar o gradiente de infecção da vassoura-de-bruxa em ramos e frutos em cacaueiros enxertados; comparar o efeito de genótipos e três tratamentos (poda fitossanitária semestral, poda fitossanitária mensal e poda fitossanitária aliada a aplicação de fungicida mensais) no controle da doença; estudar o progresso da vassoura-de-bruxa no tempo, quantificado em ramos e frutos doentes. O experimento foi conduzido em Uruçuca, BA, em área contendo 16 genótipos diferentes, adjacente a uma área com cacaueiros abandonados com alta incidência da doença. A área experimental foi dividida em três partes, as quais receberam os seguintes tratamentos: poda fitossanitária semestral, poda fitossanitária mensal e poda fitossanitária aliada a aplicação de fungicida mensal. Pelo menos uma vez por mês foram contados os ramos e frutos com vassoura. Os resultados mostraram a ausência de evidência clara da existência de gradiente de doença. Os níveis de resistência genética à vassoura-de-bruxa de ramos e frutos não foram correlacionados entre si. Houve bom ajuste do progresso da doença ao modelo monomolecular. As menores taxas de crescimento foram obtidas no tratamento com poda e aplicação de fungicida mensal. O tratamento que combinou poda e pulverização com fungicida apresentou diferença significativa na redução do percentual de frutos com vassoura. Os genótipos NO-34, NO-17 e NO-02 foram os que apresentaram menores percentagens de frutos com vassoura, sendo significativamente diferentes dos genótipos NO-24 e NO-13. / Witches' broom is the most important disease of cocoa, in the countries where it occurs. In 1989, it was verified for the first time the presence of the pathogen in the main producing area of Brazil. The lack of efficient control measures resulted, in the last years, in losses in the production, changes in the use of the soil, sale of properties, decrease of the employment level and damages to the environment. In view of the little knowledge on epidemic aspects of the disease in the conditions of the southeast of Bahia, the present work was elaborated with the following objectives: to study the gradient of the witches' broom infection in flushes and pods in grafted cocoa; to compare the effect of genotypes and three treatments (half-yearly phytosanitation, monthly phytosanitation and monthly phytosanitation allied to fungicide application) in the control of the disease; to study the witches' broom temporal progress, quantified in flushes and pods. Trials were carried out in Uruçuca, BA, in area contends 16 different genotypes, adjacent an area with abandoned cocoa with high incidence of the disease. The experimental area was divided in three parts, which received the following treatments: half-yearly phytosanitation, monthly phytosanitation and monthly phytosanitation allied to fungicide application. At least once a month, flushes and pods with broom were counted. Results showed the absence of clear evidence of the existence of disease gradient. The levels of genetic resistance to the witches' broom of flushes and pods were not correlated to each other. There was good adjustment of progress of the disease to the monomolecular model. The smallest growth rates were obtained in the treatment with monthly phytosanitation and fungicide application. The treatment that allied phytosanitation and fungicide application presented significant difference in the reduction of the percentage of witches' broom infected pods. The genotypes NO-34, NO-17 and NO-02 presented smaller percentages of diseased pods, being significantly different from the genotypes NO-24 and NO-13.

Neospora caninum e Hammondia heydorni são coccídeos formadores de cistos proximamente relacionados com outros organismos heteroxenos pertencentes ao filo Apicomplexa, como Toxoplasma gondii e Hammondia hammondi. Para saber se o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous), um canídeo silvestre comumente encontrado do nordeste da Argentina ao nordeste da América do Sul, pode ser hospedeiro definitivo de N. caninum, exemplares de cachorro-do-mato foram alimentados com tecidos de bovinos e bubalinos naturalmente infectados por N. caninum. As fezes dos cachorros-do-mato foram colhidas e examinadas diariamente para pesquisa de oocistos. No primeiro experimento, masseter e cérebro (peça inteira dos dois órgãos) colhidos de dois bovinos de aproximadamente dois anos de idade, foram picados, misturados e fornecidos às quatro raposas em dois dias consecutivos. Duas raposas eliminaram oocistos sub-esféricos não esporulados medindo 10-13µm no oitavo e nono dias pós-infecção, respectivamente. Uma das raposas eliminou oocistos por cinco e a outra nove dias. Amostras de DNA extraída dos de oocistos de cada dia de eliminação foram analisadas por PCR com primers grupo-específicos PCR-ITS-1 e espécie-especificos Nc5-NPCR. Todas as amostras foram positivas por PCR-HSP-70 e PCR-ITS-1, mas negativas por Nc5-NPCR. A sequência de nucleotídeos PCR-ITS-1 revelou 100% de identidade com seqüências homólogas de H. Heydorni. Concluímos que H. heydorni também utiliza o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) como hospedeiro definitivo. O cachorro-do-mato é usualmente reportado em contato com rebanhos em diversas regiões do Brasil. Então, é razoável inferir que estes carnívoros possam exercer um importante papel nos ciclos silvestre e doméstico da infecção por H. heydorni. Em um segundo experimento, sete exemplares de cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) foram alimentados com tecidos de 3 búfalos (Bubalus bubalis) naturalmente infectados por N. caninum. As fezes das raposas foram analisadas 30 dias antes e trinta depois da infecção experimental e nenhuma das raposas eliminou oocistos N. caninum-like nas fezes. Estes resultados sugerem que o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) não é hospedeiro definitivo de N. caninum, entretanto estudos adicionais são necessários. / Neospora caninum and Hammondia heydorni are two cyst forming coccidians closely related to other apicomplexans, such as Toxoplasma gondii and Hammondia hammondi with a two host life-cycle. To clarify whether crab-eating fox (Cerdocyon thous), a wild carnivore commonly found from northern Argentina to northern South America, can be final hosts of N. caninum, foxes were fed on tissues of cows and water buffaloes naturally infected with N. caninum. Faeces were examined from 30 days before to 30 days after infection. In experiment 1, the whole masseter muscle and brain from two-year old bovines are collected, minced and pooled together for the fox infection. The bovine pooled tissues were equally administered for four fox, in two consecutive days. Two foxes shed unsporulated oocysts subspherical in shape measuring 10-13µm, after eight and nine days post-infection, respectively. One of the foxes eliminated oocysts for five days, while the other fox shed oocysts for nine days. A DNA sample of oocysts detected at each day of oocyst elimination was tested by a PCR carried out employing primers directed to the common toxoplasmatiid 18S and 5.8S coding genes (PCR-ITS-1). These samples were also submitted to a N. caninum specific gene (Nc-5nPCR). All of them were positive by PCR-ITS-1 and negative by Nc-5nPCR. The PCR-ITS-1 nucleotide sequence revealed 100% identity with homologous sequences of H. heydorni. In conclusion, it is clear that H. heydorni also uses the crab-eating fox as a definitive host. The crab-eating fox is usually reported to live in close contact with livestock in several regions of Brazil. Therefore it is reasonable to infer that such carnivores may play an important role in the sylvatic and domestic cycles of H. heydorni infection. In experiment 2, seven fox consumed tissues from three N. caninum naturally infected water buffaloes. Feaces were examined from 30 days before to 30 days after infection and none fox shed N. caninum-like oocysts. These results suggest that the crab-eating fox cannot be definitive host of N. caninum; however additional studies will be necessary.

Dermatófitos são um grupo de fungos intimamente relacionados, que tem a capacidade de invadir tecidos queratinizados como pele, cabelos e unhas de homens e outros animais causando dermatofitoses. Os agentes envolvidos nessas infecções pertencem aos gêneros Trichophyton, Microsporum ou Epidermophyton e, de acordo com seu habitat natural, são classificados em espécies geofílicas, zoofílicas ou antropofílicas. A maior incidência de dermatofitoses é causada pelo gênero Trichophyton, sendo T. rubrum a espécie mais prevalente em infecções de pele e unhas em humanos. Devido à severidade e longevidade destas infecções, e à resistência ao tratamento, o estudo de fatores envolvidos na interação patógeno-hospedeiro, na resistência dos dermatófitos a agentes antifúngicos e na manutenção do processo infeccioso são de grande relevância. Por análises morfológicas, fisiológicas e de expressão gênica, comparamos cinco dermatófitos cujos genomas foram sequenciados por iniciativa do Broad Institute, Microsporum canis, Trichophyton equinum, Trichophyton interdigitale, Trichophyton rubrum e Trichophyton tonsurans. Cultivos em queratina, mimetizando o processo infeccioso, foram utilizados para analisar o envolvimento dos dermatófitos na interação patógeno-hospedeiro e manutenção do processo infeccioso. Também expusemos as espécies a concentrações subinibitórias de agentes terapêuticos, de modo a verificar a resposta destes fungos a diferentes drogas. Observamos que o acúmulo de transcritos dos genes relacionados à virulência em dermatófitos avaliados durante o crescimento em queratina sugere que a maquinaria metabólica com atividade de formação da parede celular do fungo, metabolização do substrato e adesão ao hospedeiro ativa nos períodos iniciais de infecção. Contudo, um padrão de expressão correlacionado à similaridade das sequências genômicas não foi observado nas condições testadas. Também não se observa correlação direta entre o nicho preferencial dos dermatófitos e os níveis transcricionais em resposta à queratina de origem animal. Analisamos três genes envolvidos na resistência a múltiplas drogas (MDR) durante crescimento na presença de drogas com atividade antifúngica. Nossos dados sugerem que os genes MDR atuam sinergicamente em dermatófitos, e podem atuar de forma compensatória quando em presença de drogas antifúngicas, o que pode ser uma importante causa de falhas no tratamento. Nossos resultados fornecem evidências de que a expressão dos genes analisados não se correlaciona com as relações filogenéticas entre estes dermatófitos, visto que apesar da íntima relação entre o conteúdo genético e organização do genoma, os níveis transcricionais destes genes são diferentes entre as espécies. Assim, diferenças na adaptação a nichos específicos e a progressão da doença entre os dermatófitos podem ser explicadas por diferentes perfis de transcrição do gene. / Dermatophytes are a group of closely related fungi, which have the ability to invade keratinized tissues, such as skin, hair, and nails of both human and animal hosts causing dermatophytosis. The agents involved in these infections belong to the genera Trichophyton, Microsporum or Epidermophyton and, according to their natural habitat, are classified as geophilic, zoophilic or anthropophilic species. The higher incidence of dermatophytosis is caused by the genera Trichophyton, being the specie T. rubrum the most prevalent causative of human skin and nail infections. Because of the severity and longevity of these infections and their resistance to treatment, the study of the factors involved in host-pathogen interaction, in resistance of dermatophytes to antifungal agents, and in maintenance of the infection is relevant. Through morphological, physiological and gene expression analysis we compared five dermatophytes, whose genomes were sequenced by initiative of the Broad Institute: Microsporum canis, Trichophyton equinum, Trichophyton interdigitale, T. rubrum and Trichophyton tonsurans. Growth in keratin, which mimetize the infectious process, was used to analyze the involvement of dermatophytes in host-pathogen interaction and maintenance of the infectious process. We also exposed the species to subinibitory concentrations of therapeutic agents to verify the response of these fungi to different drugs. We observed that the accumulation of transcripts of genes related to virulence in dermatophytes evaluated during growth in keratin, suggest that the metabolic machinery with activity on fungal cell wall formation, substrate metabolization, and host adhesion is activated in early stages of infection. However, an expression pattern correlating to genomic sequence similarity was not observed in the conditions tested. We also did not observe a direct correlation between the preferential niche of these dermatophytes and the transcriptional levels in response to the keratin from animal origin. We analyze three genes involved in multidrug resistance (MDR) during growth in the presence of drugs with antifungal activity. Our data suggest that MDR genes act synergistically in dermatophytes, and they may compensate for one another when challenged with antifungal drugs, which can be an important cause of therapeutic failure. We provide evidence that the expression of the analyzed genes does not correlate with the phylogeny of these dermatophytes since, in spite of the different species being highly related in gene content and genome organization, the transcription level of these genes is different among these species. Thus, differences in adaptation to a specific niche and disease progression among dermatophytes would be explained by different gene transcription profiles.

Orientador: Louis Bernard Klaczko / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T19:31:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ventura_IuriMatteuzzo_M.pdf: 2580161 bytes, checksum: ec78d3ac3a9cb1dcb0d410ab56b4d99c (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Genetica Animal e Evolução / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Wilson Castro Ferreira Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Matemática, Estatística e Computação Científica / Made available in DSpace on 2018-08-20T05:05:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_RaulAbreude_D.pdf: 6617583 bytes, checksum: 80b80410952f2ac47edc7cf71466fb07 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Neste trabalho apresentamos modelos matemáticos de processos evolutivos, utilizando como abordagem principal a descrição da frequência de fenótipos em populações. São propostos diversos modelos baseados em equações diferenciais parciais, ordinárias e equações de recorrência. São apresentados resultados de suas análises, bem como comparações com modelos genéticos aditivos. Como uma ilustração do tipo de abordagem proposto, criamos um modelo de um sistema do tipo parasita-hospedeiro (Maculinea-Myrmica) utilizando-o com o objetivo de analisar comportamento de especificidade de hospedeiro. Finalmente, apresentamos generalizações dos modelos em espaços de fenótipos e indicamos direções para aprofundamento de pesquisa / Abstract: In this thesis we present models of evolutionary dynamics that describe the changes in frequencies of phenotypes in populations. The models proposed are based on ordinary and partial differential equations and difference equations. Results from the analysis of the models and comparisons with the behavior of additive genetic models are presented. We develop a model for a host-parasite system (Maculinea-Myrmica) using the phenotypic space aprroach with the objective of analysing the hostspecificity behavior of the species. Finally, we present generalizations of the models of phenotypic spaces and indicate directions for further research in the area / Doutorado / Matematica Aplicada / Doutor em Matemática Aplicada