O gênero Burkholderia é composto por bactérias de elevada diversidade fisiológica e genética, sendo alvo para uma série de aplicações biotecnológicas. A linhagem Burkholderia seminalis TC3.4.2R3 foi capaz de controlar fungos e bactérias patogênicas, bem como produzir antibióticos. A análise de perfil fisiológico da planta hospedeira indica que não há a elicitação de respostas de defesa no controle dos sintomas da podridão mole por B. seminalis. Foi observado que o sucesso do controle depende do contato direto do agente de biocontrole e o patógeno B. gladioli, e que B. seminalis possui atividade antimicrobiana in vitro contra com a formação de um halo de inibição e redução de 40% da densidade de B. gladioli em co-cultura líquida com B. seminalis. A análise do mutante M01 defectivo no controle da podridão mole, que apresenta a região intergênica da patatina-ferritina nocauteada pelo transposon, não mostrou diferenças significativas comparado ao isolado selvagem para os mesmos ensaios. / The genus Burkholderia is composed of bacteria with high physiological and genetic diversity, and it is being goal for a number of biotechnological applications. The Burkholderia seminalis TC3.4.2R3 strain was able to control fungal and bacterial pathogens as well as produce antibiotics. The physiological profile analysis of the host plant indicates that there is no defense responses elicitation induced by B. seminalis involved in controlling symptoms of soft rot. It was observed that the success of control depends on the full contact of the biocontrol agent and the pathogen B. gladioli. B. seminalis has an antimicrobial activity in vitro showing a inhibition halo and reducing the density of B. gladioli in co-culture with B. seminalis by 40%. The M01 mutant, wich is defective in control of soft rot and showing a insertion of transposon in a intergenic region between patatin-ferritin, presented no significant differences compared to the wild strain for the same assays.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-29T14:10:59Z No. of bitstreams: 2 Teixeira, Laura Helena Marcon-2013-tese.pdf: 2830610 bytes, checksum: 659f08910c5e986bd655384eca69bff1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-29T15:12:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Teixeira, Laura Helena Marcon-2013-tese.pdf: 2830610 bytes, checksum: 659f08910c5e986bd655384eca69bff1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-29T15:12:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Teixeira, Laura Helena Marcon-2013-tese.pdf: 2830610 bytes, checksum: 659f08910c5e986bd655384eca69bff1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Pneumonia is of the main causes of death of children under 5 years of age. Several health organizations worldwide, public and private, are engaged in investigating the disease and evaluate the effectiveness of mechanisms to prevent and combat existing. Infections causing pneumonia can be avoided. However, especially in poor countries, the resources to promote prevention are scarce. Thus the combat actions need to be very efficient and effective. To ensure the effectiveness of these actions, such as vaccines, are necessary statistical information like age range, region, period, social status and history obtained through field research. This paper proposes and implements a software architecture for the construction, use and maintenance of research of childhood pneumonias. The techniques, technologies, tools and services used in defining the architecture were chosen with a focus on low cost. This way is much more feasible to use software for automated search systems by healthcare entities that have few financial resources. / As pneumonias estão entre as principais causas de morte das crianças com menos de 5 anos de idade. Várias entidades de saúde no mundo todo, públicas e privadas, estão empenhadas em investigar a doença e avaliar a eficiência dos mecanismos de prevenção e combate existentes. As infecções que causam pneumonia podem ser evitadas. No entanto, principalmente em países pobres, os recursos para promover a prevenção são escassos. Assim as ações de combate precisam ser muito eficientes e eficazes. Para garantir a efetividade dessas ações, como as vacinas, são necessárias informações estatísticas como faixa etária, região, época, condição social e histórico obtido através de pesquisa em campo. Este trabalho propõe e implementa uma arquitetura de software para construção, uso e manutenção de sistemas de pesquisa das pneumonias na infância. As técnicas, tecnologias, ferramentas e serviços utilizados na definição da arquitetura foram escolhidos com foco no baixo custo. Dessa forma fica muito mais viável a utilização de softwares para sistemas de pesquisa automatizados por entidades de saúde que possuem poucos recursos financeiros.

Resumo: O gênero Potyvirus é um dos maiores dentre os vírus de planta com genoma composto por RNA. O genoma dos potyvirus codifica um único polipeptídeo que é processado por três proteinases virais que originam todas as proteínas necessárias para complementar o ciclo da infecção. A proteína HC-Pro (Helper Component proteinase) é uma dessas proteínas multifuncionais que está envolvida na amplificação do genoma, transmissão por afídeo, movimento sistêmico e local, supressão do silenciamento gênico e proteólise. Nesse trabalho, foi realizada a substituição funcional de parte da região codificadora da HC-Pro do Lettuce mosaic virus (LMV) com a porção correspondente à HC-Pro do Potato virus Y (PVY), com o objetivo de melhor compreender os papéis dessa proteína no ciclo de infecção dos potyvirus. O LMV e o PVY diferem tanto em patogenicidade quanto em círculo de hospedeiros. O LMV infecta, principalmente, espécies da família Asteraceae (alface) enquanto o PVY infecta Solanaceae. Para avaliar o efeito de tal substituição na infectividade, dois vírus quiméricos foram construídos: um clone infeccioso de LMV contendo a HC-Pro selvagem do PVY (estendendo-se dos aminoácidos 1 a 352) e um segundo clone contendo a HC-Pro de PVY com mutação no motivo conservado IGN (mutado para RPN). Os vírus recombinantes e o LMV selvagem foram inoculados via biobalística em folhas de plântulas de alface cv. Trocadero (suscetível ao LMV). A presença e a natureza das progênies virais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Potyvirus is one of the largest genera of plant RNA viruses. The potyvirus genome encodes a single polypeptide that is processed by three viral proteinases to yield all viral proteins needed for the infection cycle. One of these proteins is the multifunctional helper component proteinase (HC-Pro), which is involved in genome amplification, aphid transmission, local and systemic movement, suppression of gene silencing and proteolysis. To gain further understanding of the roles of this protein in the Potyvirus life cycle, the functional replacement of the HC-Pro coding region of Lettuce mosaic virus (LMV) with its corresponding counterpart of Potato virus Y (PVY) was performed. These viruses differ both in pathogenicity and in host range. LMV infects mainly Asteraceae while PVY infects Solanaceae. To assess the functional requirement of a homologous HC-Pro in infectivity, two different chimeric viruses were constructed i. e: a full-length LMV containing a wild type PVY HC-Pro (1aa to 352aa) and a full-length LMV containing a PVY HC-Pro with a mutation in the IGN motif (exchanged to RNP). The chimeras, and wild type LMV, were inoculated by biolistic in young lettuce plants. The presence and nature of viral progenies were checked by RT-PCR amplification followed by sequencing. All recombinant viruses were infectious and displayed systemic infection although the symptoms were weak when compared to the wild type LMV. The viruses accumulation were evaluated by differential cycles in the RT-PCR. The LMV wild type was amplified by 30 cycles while the chimerics viruses needed 40 cycles. Therefore this result indicating that the chimeric viruses titer were lower than LMV wild type. The results 4 described here demonstrated that the main biological functions of HC-Pro can be accomplished by heterologous protein. / Orientador: Marcelo Agenor Pavan / Coorientador: Ivan de Godoy Maia / Banca: Renate Krause Sakate / Banca: José Osmar Gaspar / Banca: João Roberto Spotti Lopes / Banca: Addolorata Colariccio / Doutor

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T14:35:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_DeteccaoAtividadeImunolocalizacao.pdf: 1867557 bytes, checksum: 77ff96d87954f2519ef1c983d7f73eb0 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-11T14:07:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_DeteccaoAtividadeImunolocalizacao.pdf: 1867557 bytes, checksum: 77ff96d87954f2519ef1c983d7f73eb0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T14:07:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_DeteccaoAtividadeImunolocalizacao.pdf: 1867557 bytes, checksum: 77ff96d87954f2519ef1c983d7f73eb0 (MD5) Previous issue date: 2014-10-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / INCT/BEB - Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Biologia Estrutural e Bioimagem / As leishmanioses são protozoonoses causadas por parasitos do gênero Leishmania e estão distribuídas por diversas partes do mundo. Essa patologia se manifesta sobre diversas formas clínicas: Leishmaniose visceral (LV), Leishmaniose cutânea (LC) e Leishmaniose cutaneomucosa (LM). O parasito Leishmania apresenta duas formas evolutivas: a forma promastigota, de vida livre, e a forma amastigota, intracelular obrigatório, presente principalmente nas células fagocíticas mononucleadas. A inibição do crescimento ou destruição dos parasitos dentro da célula hospedeira é um mecanismo fundamental para erradicar a infecção. A inibição dos efeitos leishmanicidas do macrófago parece estar relacionada com a capacidade de algumas espécies em inibir a produção de óxido nítrico (NO). Estudos recentes têm mostrado que algumas espécies de Leishmania possuem a capacidade de produzir NO a partir de uma forma constitutiva da enzima Óxido Nítrico Sintase (cNOS). Este trabalho tem como objetivo detectar e localizar a enzima cNOS presente em promastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis. Para isto, o presente estudo utilizou citometria de fluxo, a qual permitiu quantificar a produção de NO nos parasitos, evidenciando a maior atividade da enzima cNOS em Leishmania (L.) amazonensis quando comparada com a espécie Leishmania (V.) braziliensis. Foi realizada a imunomarcação das formas promastigotas com o anticorpo anti-cNOS para observar a localização ultraestrutural da enzima por microscopia eletrônica de transmissão (MET), posteriormente a co-marcação com os anticorpos anti-cNOS e anti-GAPDH para confirmar a provável compartimentalização desta enzima em organelas glicossomais. Os resultados sugerem que a produção de NO por diferentes espécies de Leishmania é um processo localizado em organelas glicossomais com a captura do aminoácido L-arginina da célula hospedeira, o sequestro deste substrato priva o hospedeiro de sintetizar o NO exógeno danoso ao parasito. Esta modulação sugere mais um mecanismo de escape que os protozoários tripanossomatídeos apresentam durante a complexa interação parasito-hospedeiro. / The Leishmaniasis is an infectious disease caused by parasites of the Leishmania genus and are distributed in different parts of the world. This pathology manifests in several clinical forms: Visceral leishmaniasis (VL), cutaneous leishmaniasis (CL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL). The Leishmania parasite presents two evolutionary forms: promastigote form, free life parasite, and amastigotes, intracellular binding, present mainly in the mononuclear phagocytic cells. The growth inhibition or destruction of parasites within the host cell is an essential to break the infection mechanism. Inhibition of macrophage leishmanicidal effect appears to be related to the ability of some species to inhibit the nitric oxide (NO) production. Recent studies have shown that some species of Leishmania have the ability to produce NO by the constitutive form of nitric oxide synthase (cNOS). This work aims to detect and locate the cNOS enzyme present in Leishmania (Leishmania) amazonensis and Leishmania (Viannia) braziliensis promastigotes. For this reason, this study used flow cytometry, which allowed to quantify NO production in parasites, indicating the increased activity of the cNOS enzyme in Leishmania (Leishmania) amazonensis compared with Leishmania (Viannia) braziliensis species. We performed immunostaining of promastigotes with anti-cNOS antibody to watch the ultrastructural localization of the enzyme by transmission electron microscopy (TEM), then co-labeling with anti-cNOS and anti-GAPDH antibody to confirm the probable compartmentalization this enzyme in glycossomal organelles. The results suggest that NO production by different strains of Leishmania is a process located in the glycossomal organelles capturing L-arginine from the host cell, the substrate depletion deprives the host to synthesize the harmful exogenous NO to the parasite. This modulation suggests another escape mechanism that trypanosomatid protozoa present in the complex host-parasite interaction.

A vassoura-de-bruxa é a doença mais importante da cultura do cacaueiro, nos países onde ela ocorre. Em 1989 foi constatada pela primeira vez a presença do patógeno causador dessa doença na principal região produtora do Brasil. A falta de medidas de controle eficientes resultou, nos últimos anos, em menor produção, mudanças no uso da terra, venda de propriedades, diminuição do nível de emprego e danos ao meio ambiente. Em vista do pouco conhecimento sobre aspectos epidemiológicos da doença nas condições do sudeste da Bahia, elaborou-se o presente trabalho com os seguintes objetivos: estudar o gradiente de infecção da vassoura-de-bruxa em ramos e frutos em cacaueiros enxertados; comparar o efeito de genótipos e três tratamentos (poda fitossanitária semestral, poda fitossanitária mensal e poda fitossanitária aliada a aplicação de fungicida mensais) no controle da doença; estudar o progresso da vassoura-de-bruxa no tempo, quantificado em ramos e frutos doentes. O experimento foi conduzido em Uruçuca, BA, em área contendo 16 genótipos diferentes, adjacente a uma área com cacaueiros abandonados com alta incidência da doença. A área experimental foi dividida em três partes, as quais receberam os seguintes tratamentos: poda fitossanitária semestral, poda fitossanitária mensal e poda fitossanitária aliada a aplicação de fungicida mensal. Pelo menos uma vez por mês foram contados os ramos e frutos com vassoura. Os resultados mostraram a ausência de evidência clara da existência de gradiente de doença. Os níveis de resistência genética à vassoura-de-bruxa de ramos e frutos não foram correlacionados entre si. Houve bom ajuste do progresso da doença ao modelo monomolecular. As menores taxas de crescimento foram obtidas no tratamento com poda e aplicação de fungicida mensal. O tratamento que combinou poda e pulverização com fungicida apresentou diferença significativa na redução do percentual de frutos com vassoura. Os genótipos NO-34, NO-17 e NO-02 foram os que apresentaram menores percentagens de frutos com vassoura, sendo significativamente diferentes dos genótipos NO-24 e NO-13. / Witches' broom is the most important disease of cocoa, in the countries where it occurs. In 1989, it was verified for the first time the presence of the pathogen in the main producing area of Brazil. The lack of efficient control measures resulted, in the last years, in losses in the production, changes in the use of the soil, sale of properties, decrease of the employment level and damages to the environment. In view of the little knowledge on epidemic aspects of the disease in the conditions of the southeast of Bahia, the present work was elaborated with the following objectives: to study the gradient of the witches' broom infection in flushes and pods in grafted cocoa; to compare the effect of genotypes and three treatments (half-yearly phytosanitation, monthly phytosanitation and monthly phytosanitation allied to fungicide application) in the control of the disease; to study the witches' broom temporal progress, quantified in flushes and pods. Trials were carried out in Uruçuca, BA, in area contends 16 different genotypes, adjacent an area with abandoned cocoa with high incidence of the disease. The experimental area was divided in three parts, which received the following treatments: half-yearly phytosanitation, monthly phytosanitation and monthly phytosanitation allied to fungicide application. At least once a month, flushes and pods with broom were counted. Results showed the absence of clear evidence of the existence of disease gradient. The levels of genetic resistance to the witches' broom of flushes and pods were not correlated to each other. There was good adjustment of progress of the disease to the monomolecular model. The smallest growth rates were obtained in the treatment with monthly phytosanitation and fungicide application. The treatment that allied phytosanitation and fungicide application presented significant difference in the reduction of the percentage of witches' broom infected pods. The genotypes NO-34, NO-17 and NO-02 presented smaller percentages of diseased pods, being significantly different from the genotypes NO-24 and NO-13.

Esporotricose é uma micose subcutânea, causada principalmente pelo fungo Sporothrix schenckii e a nova espécie Sporothrix brasiliensis. Foi relatado na literatura que os camundongos infectados com a cepa de S. schenckii M-64 produziu uma resposta imune mista, em que o soro dos camundongos infectados reagiram apenas com uma glicoproteína de 70 kDa (gp70), identificada como importante fator de virulência. Assim o presente trabalho visa avaliar a importância à virulência e eficácia do anticorpo monoclonal P6E7 em outras cepas do complexo Sporothrix. Camundongos foram infectados com as cepas de S. schenckii (1099-18 e 15383) e S. brasiliensis (5110 e 17943). Cada 7 dias, o baço e fígado foram retirados para a análise do UFC e citocinas. Foi realizado western blot com o soro dos camundongos infectados e com anticorpo monoclonal P6E7 utilizando o exoantígenos das diferentes cepas. Foi realizado protocolo de tratamento com o anticorpo P6E7 nos camundongos infectados, para a avaliação da carga fúngica no baço e no fígado. Análise de citocinas mostrou que as cepas de S. schenckii induziram uma resposta mista Th1/Th2, entretanto nos camundongos infectados com as cepas de S. brasiliensis, não foi observada produção significativa de citocinas. No western blot realizado com exoantígenos das cepas de Sporothrix sp. foi observado diferentes componentes antigênicos, quando o soro de camundongos infectados foi utilizado, porém a reação com anticorpo monoclonal contra a gp70 demonstrou que a gp70 estava presente apenas no exoantígeno da cepa mais virulenta 5110. Infecção realizada com todas as cepas demonstrou cronicidade pela análise UFC. O tratamento com o AcMo P6E7 foi eficaz no tratamento da esporotricose experimental, sendo capaz de diminuir a carga fúngica, principalmente no baço dos camundongos infectados. / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis, caused mainly by fungi Sporothrix schenckii and the new specie Sporothrix brasiliensis. Was reported in previous studies that mice infected with low virulent S. schenckii M-64 strain, produced a mixed immune response, where the infected mice serum reacted only with a 70 kDa glycoprotein (gp70), identified as important virulence factor. Thus, the present study aims to evaluate the virulence importance and effectiveness of monoclonal antibody P6E7 in other Sporothrix complex strains. Mice were infected with Sporothrix yeast strain of S. schenckii (1099-18 and 15383) and S. brasiliensis (5110 and 17943). Each 7 days, the spleen and liver were taken for CFU and cytokines analysis. The western blot was performed with the serum obtained from infected mice and a monoclonal antibody P6E7 using exoantigens from different strains. Was performed treatment protocol with the monoclonal antibody P6E7 on infected mice, for spleen and liver fungal burden evaluation. Cytokine analysis showed that S. schenckii strains induce a mixed Th1/Th2 response, however in the S. brasiliensis strains wasn\'t observed significant cytokine production. In western blot accomplished with the strains exoantigens was observed different antigenic components when the infected mice serum was used, however with monoclonal antibody against gp70 demonstrated that gp70 was present only in most virulent strain 5110. Infection performed with all strains demonstrated chronicity for CFU analysis. Treatment with Mab P6E7 was effective in experimental sporotrichosis, with reducing capable of fungal load, mainly in the spleen of infected mice.

Submitted by Rodnei Dennis Rossoni (rodnei.rossoni@fosjc.unesp.br) on 2017-12-11T11:19:52Z No. of bitstreams: 1 Tese_Pronta.pdf: 4361864 bytes, checksum: 4e8e22ae0f0744e73ce578cec2fbcce4 (MD5) / Submitted by Rodnei Dennis Rossoni (rodnei.rossoni@fosjc.unesp.br) on 2017-12-11T18:47:11Z No. of bitstreams: 1 Tese_Pronta.pdf: 4361864 bytes, checksum: 4e8e22ae0f0744e73ce578cec2fbcce4 (MD5) / Submitted by Rodnei Dennis Rossoni (rodnei.rossoni@fosjc.unesp.br) on 2017-12-14T11:25:03Z No. of bitstreams: 1 Tese_Pronta.pdf: 4361864 bytes, checksum: 4e8e22ae0f0744e73ce578cec2fbcce4 (MD5) / Submitted by Rodnei Dennis Rossoni (rodnei.rossoni@fosjc.unesp.br) on 2017-12-14T13:50:32Z No. of bitstreams: 1 Tese_Pronta.pdf: 4361864 bytes, checksum: 4e8e22ae0f0744e73ce578cec2fbcce4 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2017-12-18T15:12:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rossoni_rd_dr_sjc.pdf: 4361864 bytes, checksum: 4e8e22ae0f0744e73ce578cec2fbcce4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T15:12:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rossoni_rd_dr_sjc.pdf: 4361864 bytes, checksum: 4e8e22ae0f0744e73ce578cec2fbcce4 (MD5) Previous issue date: 2017-12-04 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O estudo da atividade inibitória de Lactobacillus pode contribuir na descoberta de novas estratégias terapêuticas nas infecções por Candida. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi isolar e identificar Lactobacillus da cavidade bucal de indivíduos livres de cárie e avaliar seu potencial de inibição de C. albicans por meio de estudos in vitro e in vivo. Primeiramente, foram avaliados os efeitos de 30 isolados clínicos de Lactobacillus sobre o número de células viáveis (UFC) em biofilme de C. albicans e sobre a formação de hifas. Os isolados que obtiveram os maiores efeitos inibitórios sobre C. albicans foram selecionados para os testes de determinação da biomassa total dos biofilmes pela absorbância do cristal violeta, análise da arquitetura dos biofilmes por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e quantificação da expressão de genes de C. albicans (ALS3, HWP1, EFG1 e CPH1) por qPCR. Esses isolados também foram submetidos a estudos in vivo usando os modelos de Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans. Para o estudo em G. mellonella, a infecção experimental foi avaliada pela curva de sobrevivência, quantificação da carga fúngica na hemolinfa, densidade hemocitária, quantificação da expressão gênica de peptídeos antifúngicos (Gallerymicina e Galiomicina) e monitoramento da infecção de C. albicans por análise de bioluminescência. No modelo de C. elegans, a infecção foi avaliada por meio dos ensaios de curva de sobrevivência e estudo da filamentação de C. albicans. Os resultados dos ensaios in vitro demonstraram que L. paracasei 28.4, L. rhamnosus 5.2 e L. fermentum 20.4 foram as cepas com maior atividade antimicrobiana sobre os biofilmes de C. albicans. Nessas cepas, todos os genes analisados foram regulados negativamente na associação com Lactobacillus quando comparados com o grupo controle. No estudo in vivo, a injeção de L. paracasei 28.4 em G. mellonella infectadas com C. albicans aumentou a sobrevida das larvas, o número de hemócitos e a expressão de peptídeos antifúngicos, reduzindo assim a UFC de C. albicans. Em C. elegans, L. paracasei 28.4 também foi capaz de aumentar a sobrevida dos vermes infectados com C. albicans e reduzir a filamentação. Conclui-se que L. fermentum 20.4, L. paracasei 28.4 e L. rhamnosus 5.2 tem potencial para serem usados como probióticos na cavidade bucal devido sua ação anti-biofilme e sua regulação negativa dos genes de virulência de C. albicans. L. paracasei 28.4 foi capaz de prolongar a sobrevida nos dois modelos experimentais infectados com C. albicans por apresentarem ação antifúngica e imunomodulatória. / The study of the antifungal activity of Lactobacillus may contribute to the discovery of new therapeutic strategies for Candida infections. In this context, the objective of this study was to isolate and identify Lactobacillus from the oral cavity of caries-free subjects and to evaluate its effects through in vitro and in vivo studies. First, the effects of 30 clinical isolates of Lactobacillus on the number of viable cells (CFU) in biofilms of C. albicans and on hyphae formation were evaluated. The isolates that obtained the highest inhibitory effects on C. albicans were selected for biofilm biomass determination by violet crystal absorbance, analysis of biofilm architecture by scanning electron microscopy (SEM) and quantification of the expression of C. albicans (ALS3, HWP1, EFG1 and CPH1) by real time PCR. These isolates were also submitted to in vivo studies using the Galleria mellonella and Caenorhabditis elegans models. For the study in the model of Galleria mellonella, the experimental infection was evaluated by the survival curve, quantification of the fungal load in the hemolymph, hemocitary density, the gene expression of antifungal peptides (Gallerymicin and Galiomicin) and monitoring of C. albicans infection by bioluminescence analysis. In the Caenorhabditis elegans model, the infection was evaluated by the survival curve assays and the study of C. albicans filamentation. The results of in vitro tests demonstrated that L. paracasei 28.4, L. rhamnosus 5.2 and L. fermentum 20.4 were the strains with the highest antimicrobial activity on the biofilms of C. albicans. In these strains, all analyzed genes were negatively regulated in association with Lactobacillus when compared to the control group. In the in vivo study, the injection of L. paracasei 28.4 into the G. mellonella increased survival of the larvae, the number of hemocytes and the expression of antifungal peptides, thus reducing the CFU of C. albicans. In C. elegans, L. paracasei 28.4 was also able to increase the survival of worms infected with C. albicans and reduce the filamentation. We conclude that L. fermentum 20.4, L. paracasei 28.4 and L. rhamnosus 5.2 have potential to be used as probiotics in the oral cavity due to their anti-biofilm action and their negative regulation of virulence genes of C. albicans. L. paracasei 28.4 was able to prolong survival of both experimental models infected with C. albicans for having antifungal and immunomodulatory action. / 13/25181-8 / 14/12458-4

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-08Bitstream added on 2014-06-13T19:22:39Z : No. of bitstreams: 1 hoppe_egl_dr_jabo.pdf: 1540256 bytes, checksum: 5f7596806464f080af8ea17e52f8fafd (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A adequada compreensão dos mecanismos fisiopatológicos das doenças que afetam os animais silvestres contribui positivamente para a melhoria das condições de manutenção desses animais em cativeiro e fornece subsídios para a elaboração de planos de conservação de animais de vida livre. Diversos relatos de Haemonchus contortus em cervídeos de cativeiro e vida livre, bem como a importância desse nematódeo para a ovinocultura, motivaram o presente estudo. Inicialmente, foram determinados valores de normalidade para os parâmetros hematológicos e bioquímicos, bem como testada possível influência do sexo sobre eles. Num segundo momento, os animais foram separados em grupos e infectados experimentalmente. O processo infeccioso foi monitorado por um período de 60 dias, ao final do qual os animais foram submetidos à eutanásia e necropsiados. O processo infeccioso estabelecido, em intensidade parasitária similar à observada em animais de vida livre, não foi capaz de suscitar alterações hematológicas, bioquímicas ou anátomo-patológicas relevantes, tampouco interferir na ingestão de alimentos, sugerindo que, apesar da possibilidade de parasitismo, a infecção por H. contortus, nos níveis deste experimento, não provocam doença clínica nos animais. À luz dos dados morfométricos e parasitológicos, sugere-se uma má adaptação do H. contortus aos veados-catingueiros, apesar da possibilidade de manutenção do parasita nestes animais. / The comprehension of the pathophysiological aspects concerning wild animals’ diseases contributes favourably to the improvement of captive rearing of these animals, and also to the elaboration of conservation action plans for free-ranging animals. The diverse reports on deer parasitism by Haemonchus contortus and the importance of this nematode for sheep production motivated this research. First, reference values for haematological and biochemical parameters were determined for this species and the gender influence on them was tested. Then, the animals were divided in groups and infected. The infectious process was monitored over a 60 days period, and then the animals were killed and necropsied. The established infection, similar to natural acquired infections, was insufficient to lead to haematological, biochemical or pathological changes or interfere with food uptake. Based on this, despite the possibility of infection, H. contortus did not cause clinical disease in gray-brocket deer. Moreover, the morphometric and parasitological data suggest a maladaptation of H. contortus in this host species.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-03T16:25:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 264169 bytes, checksum: 7e0b0fa3ed22dc10518d5006802eb10c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T16:25:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 264169 bytes, checksum: 7e0b0fa3ed22dc10518d5006802eb10c (MD5) Previous issue date: 2005-03-29 / A requeima, causada por Phytophthora infestans, é uma doença destrutiva da batateira e do tomateiro. Há poucas informações quanto a potenciais fontes de inóculo primário do patógeno no Brasil. Os objetivos deste trabalho foram: determinar o tempo de sobrevivência do patógeno em hastes, folíolos e frutos de tomateiro em solo; verificar a especificidade de P. infestans por meio de teste centrífugo-filogenético com a inclusão de espécies nativas do Brasil e estudar a dinâmica temporal do inóculo de P. infestans no ar. Avaliou-se a sobrevivência em restos culturais de tomateiro, tanto em casa de vegetação como no campo. A sobrevivência do patógeno em restos culturais foi inferior a 100 e 35 dias em casa de vegetação e no campo, respectivamente. Em casa de vegetação, a quantidade de estruturas do patógeno visualizadas em microscópio estereoscópico foi maior em tratamentos mantidos em solo seco, que aqueles mantidos em solo úmido. Dois isolados de P. infestans, da linhagem clonal US-1, obtidos de tomateiro, e dois de BR-1, obtidos de batateira, foram inoculados em plantas de 43 espécies. Além das plantas de batata e tomate, apenas plantas de Petunia hybrida e Nicotiana benthamiana foram suscetíveis ao patógeno. A ocorrência de esporângios de P. infestans foi monitorada em condições de campo com armadilhas Rotorod, Burkard e plantas de tomate e batata. Esporângios foram observados ao longo de todo o ano de 2004 e início de 2005. A captura de esporângios de P. infestans realizada pela Burkard foi maior no período das 6:00 às 18:00 h. Conclui-se que o inóculo advindo do ar é mais importante para o início de epidemias de requeima, que aquele em restos de cultura. / Tomato and potato late blight, caused by Phytophthora infestans, is one of the most important diseases of these crops in Brazil. Despite its importance, little is known about inoculum dynamics in tropical/subtropical areas, particularly in Brazil. The objectives of this study were: to determine survival period of P. infestans on stems, leaflets, and tomato fruits buried or not in soil; to assess the specificity of P. infestans to different hosts, mainly towards solanaceous species commonly found in Brazil and to study aerial inoculum (sporangia) temporal dynamics. Survival of P. infestans associated with tomato plant parts under greenhouse and field conditions was less than 100 and 35 days, respectively. Under greenhouse, pathogen structures were more promptly identified on crop debris kept on dry than on wet soil conditions. Isolates of two clonal lineages of P. infestans, US-1 and BR-1, isolated from tomato or potato, respectively, were inoculated on 43 plant species. Only two species, Petunia hybrida and Nicotiana benthamiana, were susceptible to P. infestans. Sporangia were monitored by Rotorod and Burkard spore traps and also by tomato and potato trap plants. Sporangia were captured in most weeks throughout 2004 and in the first two weeks of 2005. Most airborne inoculum captured with the Burkard trap was between 6:00 and 18:00 h. Airborne inoculum is abundant and is more important to late blight outbreaks than inoculum produced in crop debris. / Dissertação importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-29Bitstream added on 2014-06-13T19:24:02Z : No. of bitstreams: 1 frangioni_dss_dr_botfca.pdf: 2302780 bytes, checksum: a3bab8cdfaa8a760d70900c13de09d8d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O gênero Potyvirus é um dos maiores dentre os vírus de planta com genoma composto por RNA. O genoma dos potyvirus codifica um único polipeptídeo que é processado por três proteinases virais que originam todas as proteínas necessárias para complementar o ciclo da infecção. A proteína HC-Pro (Helper Component proteinase) é uma dessas proteínas multifuncionais que está envolvida na amplificação do genoma, transmissão por afídeo, movimento sistêmico e local, supressão do silenciamento gênico e proteólise. Nesse trabalho, foi realizada a substituição funcional de parte da região codificadora da HC-Pro do Lettuce mosaic virus (LMV) com a porção correspondente à HC-Pro do Potato virus Y (PVY), com o objetivo de melhor compreender os papéis dessa proteína no ciclo de infecção dos potyvirus. O LMV e o PVY diferem tanto em patogenicidade quanto em círculo de hospedeiros. O LMV infecta, principalmente, espécies da família Asteraceae (alface) enquanto o PVY infecta Solanaceae. Para avaliar o efeito de tal substituição na infectividade, dois vírus quiméricos foram construídos: um clone infeccioso de LMV contendo a HC-Pro selvagem do PVY (estendendo-se dos aminoácidos 1 a 352) e um segundo clone contendo a HC-Pro de PVY com mutação no motivo conservado IGN (mutado para RPN). Os vírus recombinantes e o LMV selvagem foram inoculados via biobalística em folhas de plântulas de alface cv. Trocadero (suscetível ao LMV). A presença e a natureza das progênies virais... / The genus Potyvirus is one of the largest genera of plant RNA viruses. The potyvirus genome encodes a single polypeptide that is processed by three viral proteinases to yield all viral proteins needed for the infection cycle. One of these proteins is the multifunctional helper component proteinase (HC-Pro), which is involved in genome amplification, aphid transmission, local and systemic movement, suppression of gene silencing and proteolysis. To gain further understanding of the roles of this protein in the Potyvirus life cycle, the functional replacement of the HC-Pro coding region of Lettuce mosaic virus (LMV) with its corresponding counterpart of Potato virus Y (PVY) was performed. These viruses differ both in pathogenicity and in host range. LMV infects mainly Asteraceae while PVY infects Solanaceae. To assess the functional requirement of a homologous HC-Pro in infectivity, two different chimeric viruses were constructed i. e: a full-length LMV containing a wild type PVY HC-Pro (1aa to 352aa) and a full-length LMV containing a PVY HC-Pro with a mutation in the IGN motif (exchanged to RNP). The chimeras, and wild type LMV, were inoculated by biolistic in young lettuce plants. The presence and nature of viral progenies were checked by RT-PCR amplification followed by sequencing. All recombinant viruses were infectious and displayed systemic infection although the symptoms were weak when compared to the wild type LMV. The viruses accumulation were evaluated by differential cycles in the RT-PCR. The LMV wild type was amplified by 30 cycles while the chimerics viruses needed 40 cycles. Therefore this result indicating that the chimeric viruses titer were lower than LMV wild type. The results 4 described here demonstrated that the main biological functions of HC-Pro can be accomplished by heterologous protein.