Orientador: Ana Gabriela Sálvio / Resumo: A Doença Enxerto Contra o Hospedeiro (DECH) é uma das principais complicações em pacientes pós transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH), onde as células T do doador agridem os tecidos do receptor resultando em uma das principais causas de mortalidade e morbidade. Ocorre em cerca de metade dos pacientes que realizaram transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH). A pele é um dos órgãos mais acometidos. A DECH é dividida da forma aguda (DECH-a) e crônica (DECH-c), de acordo com o tempo de aparecimento dos achados clínicos e histopatológicos. A DECH de pele é classificada em graus variados, de I a IV, de acordo com o comprometimento. O presente estudo teve como objetivo avaliar a incidência de DECH-a cutânea entre os pacientes submetidos ao TCTH alogênico, aparentado, no Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP. Também foi objetivo do estudo a análise do perfil destes pacientes, a incidência e o impacto da doença na mortalidade precoce nos 100 primeiros dias pós TCTH. Os procedimentos metodológicos envolveram análise retrospectiva de dados retirados de planilhas do setor administrativo do Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP, contendo informações de 1113 pacientes que estiveram internados para a realização de transplante de medula óssea alogênico, aparentado, no período de agosto de 1996 a dezembro de 2013. Foram incluídos 582 pacientes cujas as doenças eram de linhagem mielóide - as ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-21Bitstream added on 2014-06-13T19:36:20Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_wa_me_jabo.pdf: 654248 bytes, checksum: 619fb98a9565e57850118d52b19f5a0b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No hospedeiro bovino o nível de resistência ao carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus varia de acordo com a raça sendo os fenótipos contrastantes herdáveis. O presente trabalho explora esses fenótipos a fim de estabelecer os perfis das respostas imunes, humoral e inflamatória, correlacionados com resistência em raça zebuína (Nelore) e susceptibilidade em raça taurina (HPB). Os animais foram expostos a infestação natural pelo R.(B.) microplus e amostras de soros foram coletadas em pontos estratégicos da cinética das infestações. Os níveis de imunoglobulinas totais (IgG1 e IgG2), bem como os de anticorpos IgG1, IgG2 e IgE anti-extrato de ovo, anti-extrato de larva não alimentada e anti-saliva foram determinados. Elementos da resposta inflamatória, como as principais proteínas de fase aguda e óxido nítrico, também foram dosados. Os resultados obtidos mostram que as infestações muito intensas, em hospedeiros suscetíveis, são capazes de modular os níveis séricos de IgG1 e IgG2 total, diminuindo-os significativamente em relação aos níveis observados durantes infestações menores. Também modulam negativamente a produção de todos os anticorpos específicos IgG1 e IgG2 avaliados a nível sistêmico. Bovinos susceptíveis ao carrapato produzem níveis mais altos de anticorpos IgE para todos os antígenos. O fenótipo susceptivel de infestação se diferencia pela maior freqüência do alótipo de IgG?2a, herdado por herança Mendeliana co-dominante. Animais suscetíveis, quando infestados, produzem níveis mais altos da proteína de fase aguda a1- glicoproteína ácida, de padrão anti-inflamatório, enquanto que animais resistentes produziram relativamente mais proteínas de fase aguda pró-inflamatórias, haptoglobina e amilóide sérica A. Em ambas as raças não houve diferença nos níveis de transferrina e óxido nítrico sistêmico, porém a produção de ambos é influenciada pelos níveis de infestação. / In bovine hosts resistance to the cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, varies according to the breed, being the phenotypes of infestations inherited. The present work exploits these contrasting phenotypes in order to determine the profile of the humoral, inflammatory and acute phase responses that are correlated with resistance seen in a zebuine breed (Nelore) and susceptibility seen in a taurine breed (Holstein). Bovines were exposed to natural infestations with R.(B.) microplus and they presented, as expected, different levels of infestation that also varied in intensity according to the season of the year. Samples of sera were collected at strategic points during the kinetics of different cycles of infestations. The levels of total serum IgG1 and IgG2 immunoglobulins, as well as those of IgG1, IgG2 and IgE anti-egg extracts, anti-unfed larvae extracts and anti-saliva antibodies were measured. Components of the inflammatory response, nitric oxide, as well as acute phase proteins, were also measured. The results show that very intense infestations in ticksusceptible bovines modulate the serum levels of IgG1 and IgG2, which are significantly diminished relative to those observed during less intense infestations. Intense infestations also modulate the production of all specific IgG1 and IgG2 antibodies. Susceptible animals produced more specific IgE, suggesting that this isotype does not participate in resistance against ticks. The susceptible cattle also have a higher frequency of IgG?2a , which are encoded by Mendelian co-dominant alleles. When infested susceptible animals produced higher levels of the anti-inflammatory acute phase protein, a1-acid glycoprotein, whereas resistant animals produced relatively higher levels of the pro-inflammatory proteins, haptoglobin and serum amyloide A.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work aimed to evaluate control strategies of hairy fleabane (Conyza bonariensis) and also study the arthropods associated with this weed. For this, the work was divided into three chapters. The Chapter I aimed to evaluate the selectivity of herbicides with potential use to control hairy fleabane on forming species winter pastures, which are: oats, black oats, ryegrass and tetraploid ryegrass. Experiments were conducted under greenhouse conditions and evaluated the phytotoxicity of plants and production of shoot dry matter (SDM). The treatments were: 2,4-D amine (806 and 1612 g a.i. ha-1), metsulfuron-methyl (2.4 and 4.8 g a.i. ha-1); clorimuronethyl (20 and 40 g a.i. ha-1); imazetaphyr (350 and 700 g a.i. ha-1); diclosulam (16.8 and 33.6 g a.i. ha-1); saflufenacil (35 and 70 g a.i. ha-1) and flumioxazin (50 and 100 g a.i. ha-1), and the control. According to the results obtained, the selectivity of herbicides is species cultivated dependent and it is important to know the botanical composition of pasture before applying any herbicide. In Chapter II aimed to evaluate the combination effect of the herbicides glyphosate and saflufenacil at different doses on the control of hairy fleabane plants. The treatments consisted of doses that followed the logarithmic scale, and used the herbicides glyphosate and saflufenacil both applied alone and in mixture. Were evaluated the visual control and the SDM production of hairy fleabane plants. The results indicate that there is a synergistic relationship between the herbicide glyphosate and saflufenacil. Also, the association of saflufenacil and glyphosate is effective in controlling glyphosate-resistant hairy fleabane. The addition of the herbicide glyphosate with saflufenacil, besides improve control, prevents the occurrence of regrowth of hairy fleabane plants. In Chapter III, hairy fleabane plants were collected fortnightly in Boa Vista and Sao Vicente Incra South in order to evaluate the arthropods associated with this weed. The results show that hairy fleabane takes an important role as an alternative host of important pests of the soybean, such bugs and caterpillars, and too natural enemies. / Este trabalho teve como objetivo avaliar estratégias de controle de buva (Conyza bonariensis) e também estudar a artropodofauna associada a esta planta daninha. Para isso, o trabalho foi dividido em três capítulos. O capítulo I teve como objetivo avaliar a seletividade de herbicidas de uso potencial para o controle de buva sobre espécies formadoras de pastagens de inverno, sendo elas: aveia branca, aveia comum, azevém comum e azevem tetraplóide. Para isso, foram conduzidos experimentos em casa de vegetação e avaliada a fitointoxicação de plantas e a produção de massa de matéria seca da parte aérea (MMSPA). Os tratamentos avaliados foram: 2,4-D amina (806 e 1612 g i.a. ha-1); metsulfuron-methyl (2,4 e 4,8 g i.a. ha-1); clorimuron-ethyl (20 e 40 g i.a. ha-1); imazetaphyr (350 e 700 g i.a. ha-1); diclosulam (16,8 e 33,6 g i.a. ha-1); saflufenacil (35 e 70 g i.a. ha-1) e flumioxazin (50 e 100 g i.a. ha-1), além da testemunha. De acordo com os resultados obtidos, a seletividade dos herbicidas testados é dependente da espécie que está sendo cultivada, sendo importante se conhecer a composição botânica da pastagem antes de se aplicar qualquer herbicida. No capítulo II, objetivou-se avaliar o efeito da associação dos herbicidas glifosato e saflufenacil, em diferentes doses sobre o controle de plantas de buva. Os tratamentos foram compostos por doses que seguiram a escala logarítmica, sendo utilizados os herbicidas glifosato e saflufenacil tanto em aplicação isolada quanto em mistura. Foram avaliados o controle visual (%) e a produção de MMSPA das plantas de buva. Os resultados obtidos apontam que: existe uma relação sinérgica entre os herbicidas glifosato e saflufenacil; a associação de saflufenacil e glifosato é eficiente no controle de buva resistente ao herbicida glifosato e; a adição de glifosato ao herbicida saflufenacil, além de melhorar o controle, previne a ocorrência de rebrote de plantas de buva. No capítulo III, foram realizadas amostragens quinzenais de plantas de buva em Boa Vista do Incra e São Vicente do Sul afim de se avaliar a artropodofauna associada à esta planta daninha. Os resultados mostram que a buva assume importante função como hospedeiro alternativo de pragas importantes da cultura da soja, tais como espécies de percevejos e lagartas, assim como de inimigos naturais.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2281509 bytes, checksum: 8e44475ccbcd12f91301ea5e4fda8830 (MD5) Previous issue date: 2013-03-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Plants are engaged in a continuous co-evolutionary struggle for dominance with their pathogens and the outcomes of these interactions are of particular importance to human activities, as they can have dramatic effects on agricultural systems (Dodds & Rathjen, 2010). Recently, the convergence of molecular studies of plant immunity and pathogen infection strategies is revealing an integrated picture of the plant pathogen interaction (Mukhtar et al., 2011) in which the pathogen effectors interaction converge onto highly connected subgroups of proteins, named hubs. A well-defined hub form plant immune system network corresponds to CSN5A protein, a catalytic subunit of the COP9 signalosome acting as a key regulator in several basic cellular processes. Consistent with the prediction that different effectors from different pathogens target similar connections in plant-pathogen interaction network, it has been shown, independently, that the protein C2 from geminivirus, a DNA virus that infects a wide variety of agronomic crops, interacts to CNS5A (Lozano- Duran et al, 2011). Additionally, it was shown that NIG and the immune receptor NIK, both targets of geminivírus NSP, interact to CSN5A (Machado, 2011; Mukhtar et al., 2011). Based on this information, it is expected that the hub CNS5A is a functional element in the geminivirus-host interaction network. Recently, it was reported that NIG, a cellular partner of CSN5A, also interacts with a unknown function protein, encoded by the locus AT2G41020 in yeast (Machado, 2011). As a possible component from geminivirus-host interaction network converging to CSN5A, AT2G41020 may interact directly or indirectly with virulence factors in defense response or compatibility. The objectives of this research involved biochemical characterization of the protein encoded by the locus AT2G4102, designated AtWWP1, and identification of its possible interactions with viral proteins and host factors. In silico analysis of tWWP1 predicted structure revealed the presence of two WW domains, and a C-terminal domain highly conserved between homologous in plant and animals. Furthermore, it has been shown that AtWWP1 is a nuclear protein capable of forming nuclear bodies via the conserved C-terminal domain. Coimmunoprecipitation and BiFC assays demonstrated that AtWWP1 interacts in vivo with the cytoplasmic protein NIG, redirecting it to nuclear bodies. In order to explore the formative activity of nuclear bodies AtWWP1, the interaction between AtWWP1 and a second protein partner AtMBD2 (methyl CG binding domaincontaining protein) was characterized in vivo. The ability to form nuclear bodies as interaction with AtMBD2 were mapped AtWWP1 occuring via its domain and C-terminal conserved, substantiating the argument that this region of AtWWP1 is responsible for the formation of nuclear bodies. Colocalization assays have shown that nuclear bodies contained in AtWWP1 are distinct from those formed by proteins involved in RNA splicing, but colocalized with nuclear bodies containing CDKC2. Furthermore, it was demonstrated that AtWWP1 does not bind to RNA, but exhibits a binding activity to DNA. These characteristics imply that AtWWP1 should be involved with basic nuclear functions. As a component of a functional hub in geminivirus-host interaction network, it is important to assess whether the viral infection would affect the nuclear bodies formed by AtWWP1. / Estudos moleculares envolvendo o sistema imune de plantas e a infecção por patógenos revelaram um panomara integrado de interações plantapatógeno em que as interações dos efetores de virulência convergem para subconjuntos de proteínas do hospedeiro altamente interconectadas e designadas hubs. Um hub funcional e bem definido do sistema imune de plantas corresponde a interconexões convergentes para a proteína CNS5A que constitui a subunidade catalítica do complexo COP9 signalosome, um regulador chave de diversos processos celulares básicos. Consistente com a previsão de que efetores de diferentes patógenos devem alvejar similares conexões na rede de interações planta-patógeno, foi demonstrado, independentemente, que a proteína C2 de geminivírus, um vírus de DNA que infecta uma grande variedade de culturas agronômicas, interage com a proteína CNS5A. Além disso, foi também demonstrado que tanto a proteína NIG, quanto o receptor imune NIK, ambos alvos da proteína NSP de geminivírus, também interagem com CNS5A. Baseado nestas informações, prevê-se que a interconexão (hub) representada por CNS5A seja um elemento funcional na interação geminivírus-hospedeiro. Recentemente, foi identificado que, além de interagir com CSN5A, a proteína NIG também interage com uma proteína de função desconhecida codificada pelo locus AT2G41020, em leveduras . Como possível componente da rede de interações geminivírus-hospedeiro que converge em CNS5A, AT2G41020 pode interagir direta ou indiretamente com fatores de virulência em resposta de defesa ou de compatibilidade. Sendo assim, os objetivos principais dessa investigação envolveram caracterização bioquímica da proteína codificada pelo locus AT2G41020 e identificação de possíveis interações com proteínas virais e fatores do hospedeiro. Análise in silico da estrutura predita da proteína codificada pelo lócus At2G41020, designada AtWWP1, revelou a presença de dois domínios WW e um domínio C-terminal altamente conservado entre proteínas homólogas de espécies vegetais e animais. Além disso, foi demonstrado que a proteína AtWWP1 é uma proteína nuclear capaz de formar corpos subnucleares via o domínio C-terminal conservado. Ensaios de coimunoprecipitação e BiFC demonstraram que AtWWP1 interage in vivo com a proteína citoplasmática NIG promovendo o seu redirecionamento para corpos nucleares. Com a finalidade de explorar a atividade formadora de corpos nucleares de AtWWP1, a interação entre AtWWP1 e uma segunda proteína parceira AtMBD2 (proteína contendo um domínio de interação com CG metilado) foi caracterizada in vivo. Tanto a capacidade de formar corpos nucleares quanto a interação com AtMBD2 foram mapeadas em AtWWP1 e ocorrem via seu domíno C-terminal conservado, substanciando o argumento de que esta região de AtWWP1 é responsável pela formação de corpos subnucleares. Ensaios de co-localização demonstraram que os corpos nucleares contidos em AtWWP1 são distintos daqueles formados por proteínas envolvidas em splicing do RNA; porém co-localizam com corpos nucleares contendo CDKC2. Além disso, foi demonstrado que AtWWP1 não liga a RNA, mas exibe uma atividade de ligação ao DNA. Estas características implicam que AtWWP1 deve estar envolvida com funções nucleares básicas. Como componente de um hub funcional na interação geminivírus-hospedeiro, torna-se relevante avaliar se a infecção viral afetaria os corpos nucleares formados por AtWWP1.

Submitted by ANA LETICIA SGAVIOLLI null (ana.lsgaviolli@sp.senac.br) on 2016-10-25T21:37:48Z No. of bitstreams: 1 Submissão - 25.10.16.pdf: 954213 bytes, checksum: f27af9c710378005f768acd829e6aae3 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-11-01T19:55:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 serignolli_als_me_bot.pdf: 954213 bytes, checksum: f27af9c710378005f768acd829e6aae3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-01T19:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 serignolli_als_me_bot.pdf: 954213 bytes, checksum: f27af9c710378005f768acd829e6aae3 (MD5) Previous issue date: 2016-09-02 / A Doença Enxerto Contra o Hospedeiro (DECH) é uma das principais complicações em pacientes pós transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH), onde as células T do doador agridem os tecidos do receptor resultando em uma das principais causas de mortalidade e morbidade. Ocorre em cerca de metade dos pacientes que realizaram transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH). A pele é um dos órgãos mais acometidos. A DECH é dividida da forma aguda (DECH-a) e crônica (DECH-c), de acordo com o tempo de aparecimento dos achados clínicos e histopatológicos. A DECH de pele é classificada em graus variados, de I a IV, de acordo com o comprometimento. O presente estudo teve como objetivo avaliar a incidência de DECH-a cutânea entre os pacientes submetidos ao TCTH alogênico, aparentado, no Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP. Também foi objetivo do estudo a análise do perfil destes pacientes, a incidência e o impacto da doença na mortalidade precoce nos 100 primeiros dias pós TCTH. Os procedimentos metodológicos envolveram análise retrospectiva de dados retirados de planilhas do setor administrativo do Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP, contendo informações de 1113 pacientes que estiveram internados para a realização de transplante de medula óssea alogênico, aparentado, no período de agosto de 1996 a dezembro de 2013. Foram incluídos 582 pacientes cujas as doenças eram de linhagem mielóide - as mielopatias malignas (Leucemia Mieloide Aguda, Leucemia Mieloide Crônica, Síndrome Mielodisplásica e Doença Mieloproliferativa Crônica) para que o grupo pesquisado se tornasse homogêneo em termos de drogas e condicionamento. Esses 582 pacientes englobaram 2 grupos: pacientes que apresentaram DECH-a exclusiva de pele e pacientes que não apresentaram nenhum tipo de DECH. Todos os dados foram revisados e submetidos a análise estatística univariada e multivariada. Na análise univariada, observa-se maior sobrevida em 10 anos para os indivíduos com DECH-a de pele grau I e II (p=0.039) e para os transplantados com células de Medula Óssea (0.018). Essa significância estatística foi mantida na análise multivariada. A principal causa da mortalidade nos primeiros 100 primeiros dias do transplante foi a recidiva da doença de base, sendo a DECH aguda responsável por 6% dos óbitos nesse período. Não houve diferença significativa para os outros dados pesquisados. Conclui-se então que uma escolha adequada de doadores, além do uso de fonte de medula óssea como principal escolha para realização de transplante de medula óssea, podem diminuir a incidência de DECH-a de pele, além de aumentar a sobrevida dos pacientes transplantados. / Graft versus host disease (GVHD) is a major complication occurred in patients posttransplantation hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), where the donor's T cells attack the recipient's tissues resulting in a major cause of mortality and morbidity.This is a recurrent and severe event, which occurs in about half of patients who underwent hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), the skin is one of the most affected organs. GVHD is divided as acute (GVHD) and chronic (chronic GVHD), according to the time, clinical and histopathological findings. This study aimed to evaluate the incidence of GVHDskin among patients undergoing allogeneic HSCT, akin in Marrow Transplant Service Bone Amaral Carvalho Hospital, Jaú / SP, the profile of this patient and the impact of the disease in early mortality in the first 100 days after HSCT. The methodological procedures involved retrospective analysis of data from spreadsheets in the administrative sector of the Bone Marrow Transplant Service, Hospital Amaral Carvalho - Jau, containing information of 1,113 patients who were hospitalized for performing allogeneic bone marrow transplantation, related in the period August 1996 to December 2013. to equalize the analysis were included only 582 patients whose diseases were of myeloid lineage - malignant myelopathy (Acute myeloid Leukemia, Chronic myeloid Leukemia, Myelodysplastic Syndrome and Chronic myeloproliferative disease) so that the study group became homogeneous in terms of drugs and conditioning. These 582 patients were divided into 2 groups: patients with GVHDexclusive skin and patients without any GVHD. All data were reviewed and subjected to statistical analysis. In univariate analysis, there is greater survival at 10 years for patients with GVHD to skin grade I and II (p = 0.039) and the transplanted cells Bone Marrow (0018). This significance was maintained in multivariate analysis. The main cause of mortality in the first 100 early days of transplantation was the recurrence of the underlying disease, and acute GVHD responsible for 6% of deaths in this period. There was no significant difference for the other surveyed data. It was concluded that a suitable choice of donors, and the use of bone marrow source as the primary choice for bone marrow transplantation, can reduce the incidence of GVHD, the skin, and increase the survival rate of transplant patients.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA080.pdf: 1326677 bytes, checksum: 58057ce0c8eb68eed4a42da002d7ab29 (MD5) Previous issue date: 2010-10-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The trypanosomiasis is enzootic caused by several species of the genus Trypanosoma. It is a hemoflagellate widely distributed and of great veterinary importance, because infects a wide variety of mammals. Trypanosoma evansi is the causative agent of disease popularly known as surra , which has great economic importance in Africa, Asia and South America. These protozoa possess digenetic life cycles. When the parasites move from vector to host they suffer a heat shock. The HSPs are found in several pathogens, where the heat shock is a natural event of their biology. The heat shock response is a homeostatic mechanism that protects cells from the deleterious effects of environmental stress. The HSPs have a key role in intracellular work such as DNA replication, cell division, transcription, translation, functions in membrane transport proteins as well as providing assistance to correct protein folding nascent and unfolded by stress accumulation. This work aimed to amplify the HSP10 gene, to be able, afterwards, to observe its expression in trypanosomatids. Rats Wistar were infected with T. evansi, the parasites were purified, the DNA and RNA extraction was made, beyond the reverse transcriptase, PCR, transformation into E. coli DH5α and sequencing of clones. The bands that corresponded to the size of HSP10 gene were selected for clone. The constructions of the inserts selected were subjected to sequencing to verify the correct construction of the clones. The sequencing analysis showed that the sequence obtained has a homology of 40% corresponding to HSP10 hypothetical T. brucei. This is one of the first papers that attempted to identify a gene family of HSPs in T. evansi, that should be used as a chemotherapeutic target / A tripanossomíase é uma enzootia ocasionada por diversas espécies do gênero Trypanosoma. Este é um hemoflagelado amplamente distribuído e de grande importância veterinária, pois infecta uma grande variedade de mamíferos. O Trypanosoma evansi é o agente causador da doença denominada popularmente como surra, que possui grande importância econômica na África, Ásia e América do Sul. Estes protozoários possuem ciclos de vida digenéticos. Quando os parasitos passam do vetor para o hospedeiro estes acabam sofrendo um choque térmico. As HSPs são encontradas em uma variedade de patógenos, onde o choque térmico é um evento natural de sua biologia. A resposta de choque térmico é um mecanismo homeostático que protege as células dos efeitos deletérios do estresse ambiental. As HSPs possuem um papel fundamental no trabalho intracelular como replicação de DNA, divisão celular, transcrição, tradução, funções nas membranas, transporte de proteínas, além de darem assistência correta ao enovelamento de proteínas nascentes e desenoveladas pelo acúmulo de estresse. Este trabalho teve como intuito amplificar o gene da HSP10, para que seja possível futuramente observar sua expressão nos tripanosomatídeos. Ratos Wistar foram infectados com T. evansi, os parasitos foram purificados, efetuou-se a extração de DNA e RNA, além da transcrição reversa, PCR, transformação em E. coli DH5α e o seqüenciamento dos clones. As bandas que corresponderam ao tamanho do gene HSP10 foram selecionadas para clonagem. As construções dos insertos selecionados foram submetidos ao sequenciamento a fim de verificar a construção correta dos clones. A análise do seqüenciamento demonstrou que a sequência obtida possui uma homologia de 40% correspondente a HSP10 hipotética de T. brucei. Este é um dos primeiros trabalhos que buscam identificar um gene da família das HSPs em T. evansi, que poderá ser usado como alvo quimioterápico

Orientador: Sergio Antonio De Bortoli / Banca: Ricardo Antonio Polanczyk / Banca: Ana Carolian Pires Veiga / Resumo: Este estudo objetivou determinar a influência de diferentes razões de número de ovos de Corcyra cephalonica, no desenvolvimento gregário e solitário de Trichogramma pretiosum, bem como avaliar os desempenhos biológicos e morfométricos de insetos que se desenvolveram de forma solitária e gregária. Foram oferecidas a uma fêmea de T. pretiosum, quatro diferentes densidades de ovos do hospedeiro alternativo C. cephalonica separadamente (5, 10, 20 e 30) por três dias consecutivos (dias 1, 2 e 3). Colocou-se uma fêmea, em tubo cilíndrico de fundo chato (8 cm × 2 cm), em contato com uma cartela contendo ovos do hospedeiro e uma gotícula de mel como alimento. A cartela foi trocada diariamente até a fêmea completar o terceiro dia de vida. Foram avaliadas as porcentagens de parasitismo, emergência de ovos parasitados, e o número de adultos emergidos por ovo, para cada uma das densidades. Em outra etapa, foram realizados testes com os descendentes de T. pretiosum provenientes da emergência de adultos solitários e gregários. Foi oferecido um único ovo hospedeiro exposto à oviposição por 1 dia, para uma única fêmea parasitoide, e individualizado em tubo de plástico (7,5 cm × 1 cm) contendo uma gotícula de mel. Foram avaliadas as porcentagens de parasitismo, de emergência e a longevidade de adultos, além de parâmetros morfométricos dos descendentes gregários e solitários. A relação mais baixa de hospedeiros apresentou 90% de ovos parasitados com a fêmea na idade de um dia, sendo que 68,7% ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to determine the influence of different reasons of Corcyra cephalonica eggs, in gregarious and solitary development of Trichogramma pretiosum and evaluate the biological and morphometric performances of these. We were offered to one female parasitoids, four different densities of eggs of the factitious host C. cephalonica (5, 10, 20 and 30) for three days consecutive (days 1, 2 and 3). The female was placed in cylindrical tube (8 cm × 2 cm) in contact with a paperboard containing eggs of the host and a droplet of honey as food. This paperback was changed daily until the female complete the third day of life. The parasitism were evaluated, emergency of parasitized eggs and the number of emerged adults per egg for each offered densities. In another step, tests were performed with the descendants of parasitoids from the emergency solitary and gregarious adults. A single host egg oviposition exposed for one day in individual plastic tubing (7.5 cm × 1 cm) having a honey drop offered. The parasitism were evaluated, emergency and longevity of adults, and morphometric parameters of gregarious and solitaries progenies. The lower ratio hosts showed 90% of parasitized eggs with the female at the age of one day, and 68.7% of these have emerged. The development up two individuals per egg host was observed in all densities during the three-day supply of eggs, and the emergence of one individual was predominant. Adults emerging from solitary parasitize 20.5% more than gregarious and longevity of both did not differ significantly. The body size and the last posterior left tibia was significantly different, being 0.09 mm and 0.03 mm, respectively, higher in solitary adults. Host of different densities, it was possible to significantly lower the ratio, the more adults emerging from an egg C. cephalonica, with the same biological and morphometric ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Elisa San Martin Mouriz Savani / Banca: Valéria Marçal Félix de Lima / Resumo: A leishmaniose visceral é uma doença em franca expansão no Brasil e que tem a participação de algumas espécies animais na manutenção de seu ciclo. Este trabalho objetivou investigar a presença de Leishmania spp. em morcegos de área endêmica para leishmaniose visceral e investigar a participação destes animais como possíveis reservatórios desta zoonose. Avaliou-se a presença de DNA dos parasitas, por meio da PCR, em amostras de baço e pele de 375 quirópteros originários de 19 cidades do Estado de São Paulo, Brasil, áreas endêmicas e com transmissão intensa para leishmaniose visceral. A amplificação de kDNA de Leishmania spp. por PCR foi positiva em 4,53% dos quirópteros, sendo que a maior positividade foi observada em amostras de baço (94,1%) e dois animais foram positivos tanto para amostras de pele como de baço; a presença de DNA do gene SSU 18S rRNA de Trypanosoma spp., também investigada, foi positiva em 4,53% das amostras sendo 23,5% positivas somente na amostra de baço, 76,5% somente na amostra de pele. Um animal apresentou positividade tanto para Leishmania spp. como para Trypanosoma spp. Os resultados indicam a ocorrência de Leishmania spp. em quirópteros da área endêmica para leishmaniose visceral, indicando a possibilidade de serem reservatórios desta zoonose / Abstract: Visceral leishmaniasis is a disease with increasing incidence in Brazil and that has some animal species contributing to its maintenance. This study aimed at investigating the presence of Leishmania spp. in bats from an endemic area for visceral leishmaniasis, in order to assess its participation as possible potential reservoirs for this zoonosis. We collected spleen and skin samples of 375 bats from 19 cities in the State São Paulo, Brazil, areas of intense visceral leishmaniasis transmission. kDNA Leishmania ssp. amplification by PCR was positive in 4.53% bats and a higher positivity was seen in spleen samples (94.1%); two bats were positive for both skin and spleen samples. Trypanosoma spp. genomic DNA amplification was also investigated and 4.53% of the samples were positive, 23.5% of these were positive only for spleen, 76.5% for skin. One bat was positive for both Leishmania spp. and Trypanosoma spp. DNA amplification. These results demonstrate the occurrence of Leishmania spp. in bats from endemic area for visceral leishmaniasis, indicating the possibility of these being reservoirs of this zoonosis / Mestre

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-03-07T13:37:49Z No. of bitstreams: 4 Dissertação - Aparecido Ferreira de Souza - 2017 - Parte 01.pdf: 17508857 bytes, checksum: 1d04cb16c6e33e54fe0304cecb5e491b (MD5) Dissertação - Aparecido Ferreira de Souza - 2017 - Parte 02.pdf: 14162361 bytes, checksum: b19921eb48893ef7a1aa4ddc2a2e1553 (MD5) Dissertação - Aparecido Ferreira de Souza - 2017 - Parte 03.pdf: 17178000 bytes, checksum: aaf5cfd215078190a7900eafd1e47790 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-03-07T15:14:15Z (GMT) No. of bitstreams: 4 Dissertação - Aparecido Ferreira de Souza - 2017 - Parte 01.pdf: 17508857 bytes, checksum: 1d04cb16c6e33e54fe0304cecb5e491b (MD5) Dissertação - Aparecido Ferreira de Souza - 2017 - Parte 02.pdf: 14162361 bytes, checksum: b19921eb48893ef7a1aa4ddc2a2e1553 (MD5) Dissertação - Aparecido Ferreira de Souza - 2017 - Parte 03.pdf: 17178000 bytes, checksum: aaf5cfd215078190a7900eafd1e47790 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-07T15:14:15Z (GMT). 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Paracoccidioides spp., a complex of thermodymorphic pathogenic fungi, are the etiological agents of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis endemic in Latin America. Paracoccidioides spp. are able to use hemoglobin in a receptor(PbRbt5)-mediated process. However experimental evidence points to the existence of a complex system with the presence of other proteins. In the present work, we demonstrated the similarity between PAAG_02225 (PbPga7), from Paracoccidioides lutzii, and the sequence of the heme/hemoglobin receptor Pga7 from Candida albicans, and expressed PbPga7 in Escherichia coli. Due to the presence of rare codons in P. lutzii sequence, compared to the codons preferably used by Escherichia coli, chemical synthesis of the gene was employed. The expression of PbPga7 protein opens perspectives for PbPga7 characterization. In addition, nanoUPLC-MSE was employed to analyze P. lutzii cell wall proteome. We observed that the treatment of fungus with hemoglobin promotes induction of potential adhesins and defense-related enzymes against reactive oxygen species. These data indicate that these proteins may be important for the pathogen to access hemoglobin by adhering and lysing erythrocytes, besides counteracting the toxicity generated by heme/hemoglobin released from erythrocytes, allowing the uptake and use of these molecules. The results obtained in the present work reinforce the complexity of the interaction event between pathogen and host and, in addition, contribute to broaden the understanding of the biology of Paracoccidioides spp. / O Ferro (Fe) é um metal indispensável para a maioria dos sistemas biológicos e é alvo de competição em interações patógeno-hospedeiro. Em humanos, a maioria do Fe encontra-se complexada ao cofator heme, presente na hemoglobina, uma molécula que é explorada por patógenos como uma fonte de Fe. Paracoccidioides spp., um complexo de fungos patogênicos termodimórifocos, são agentes etiológicos da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica endêmica na América Latina. Paracoccidioides spp. é hábil em utilizar hemoglobina por um processo mediado por receptor (PbRbt5). Contudo, evidências experimentais apontam para a existência de um sistema complexo com a presença de outras proteínas. No presente trabalho, foi demonstrada a similaridade de PAAG_02225 (PbPga7), de Paracoccidioides lutzii, com a sequência do receptor de heme/hemoglobina Pga7 de Candida albicans. A expressão heteróloga de PbPga7 foi realizada em Escherichia coli. Devido a presença de códons raros na sequência de P. lutzii, comparados aos códons utilizados preferencialmente por E. coli, a síntese química do gene foi empregada. A expressão da proteína PbPga7 abre perspectivas para estudos de caracterização da mesma. Adicionalmente, nanoUPLC-MSE foi utilizada para analisar o proteoma de parede celular de P. lutzii. Observou-se que o tratamento do fungo com hemoglobina promove a regulação positiva de potenciais adesinas e enzimas relacionadas com a defesa contra espécies reativas de oxigênio. Estes dados indicam que estas proteínas podem ser importantes para que o patógeno possa acessar a hemoglobina, aderindo e lisando eritrócitos, além de contrapor a toxicidade gerada pelo heme/hemoglobina liberados, permitindo a captação e utilização dessas moléculas. Os resultados obtidos no presente trabalho reiteram a complexidade do evento de interação entre patógeno e hospedeiro e, adicionalmente, contribuem para a ampliação do entendimento da biologia de Paracoccidioides spp.

Eimeria maxima é uma das principais espécies que causam a coccidiose aviária. Visando uma maior compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na esporulação de oocistos de E. maxima, o perfil da expressão gênica em oocistos não esporulados, parcialmente esporulados e esporulados foi avaliado utilizando a técnica ORESTES. As 20.149 leituras geradas foram pré-processadas, agrupadas, anotadas empregando-se a plataforma Egene e em seguida, analisadas estatisticamente. Um total de 1.207 contigs e 2091 singlets foi gerado. Cerca de 72% dos transcritos foram classificados como proteínas hipotéticas, 20% eram similares a proteínas de função conhecida e 8% eram proteínas conservadas. Após a análise estatística, 32% dos transcritos foram classificados como diferencialmente expressos, dos quais, a maioria (65%) era estágio-específica. Para validação dos perfis de expressão obtidos por ORESTES, a expressão diferencial de um pequeno conjunto de genes foi quantificada por RT-qPCR. Os resultados demonstraram boa correlação entre as duas técnicas. / Eimeria maxima is one of the most important causing agents of poultry coccidiosis. Aiming at obtaining a better understanding of the molecular mechanisms involved in oocyst sporulation of E. maxima, the gene expression profiles of unsporulated, sporulating (sporoblast phase) and sporulated oocyst were studied using the ORESTES methodology. The 20,149 reads generated were pre-processed, grouped, annotated employing the platform Egene and statistically analyzed. A total of 1207 contigs and 2091 singlets were generated. About 72% of the transcripts were classified as hypothetical proteins, 20% were similar to proteins of known function and 8% were conserved proteins. After statistical analysis, 32% of the transcripts were classified as differentially expressed of which 65% were stage-specific. For ORESTES validation, the differential expression was quantified by RT-qPCR to a small set of genes. The results demonstrated a good correlation between the two techniques studied.