WILKE, Diego Veras. Estudo do potencial anticâncer de substâncias obtidas do zoantídeo protopalythoa variabilis Duerden, 1898 (cnidaria, anthozoa) encontrado no litoral cearense. 2009. 171 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009 / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-08T12:05:07Z No. of bitstreams: 1 2009_tese_dvwilke.pdf: 8954157 bytes, checksum: e4676ac1ebcf8cd0f15ae28fb4821066 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-11T15:30:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_tese_dvwilke.pdf: 8954157 bytes, checksum: e4676ac1ebcf8cd0f15ae28fb4821066 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-11T15:30:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_tese_dvwilke.pdf: 8954157 bytes, checksum: e4676ac1ebcf8cd0f15ae28fb4821066 (MD5) Previous issue date: 2009 / Cancer is one of the biggest health problems in all over the world and causes a great amount of death of children and adults. Despite success of several cancer therapies, the ideal anticancer drug is not available yet and the numerous side effects are a limiting point. The natural products research, although recent, has shown often a variety of new chemical structures and potent biological activities. Cytotoxic compounds with possible cancer chemotherapy application are commonly isolated from marine organisms. Two within four marketed drugs from marine sources are used for cancer chemotherapy. Besides small weight molecules, the polysaccharides biological response modifiers also have showing to be a promising field as adjuvant in traditional chemotherapy. Cnidarians together with sponges, ascidians, mollusks and algae form the most promising marine group. The zoanthid Protopalythoa variabilis (Cnidaria, Anthozoa) is found in coastline of whole world, however its pharmacological potential have never been investigated before. The antitumor potential of compounds from P. variabilis from Ceará coast was evaluated in this work. The chemical fractionation guided by the cytotoxicity on four tumor cell lines (HL-60, leukemia; HCT-8, colon; SF-295, central nervous system and MDA-MB-435, melanoma) from crude hydroalcoholic extract yield two new lipidic -amino acids (1a/1b) in mixture from hexane fraction and five fractions (EtOAc-P-1-5) containing sterols signals from ethyl acetate fraction. 1a/1b showed a mean inhibitory concentration mean (IC50) of 85 ng/mL against cell lines tested, whereas EtOAc-P-4, the most powerful of EtOAc derivatives fractions, showed a mean IC50 of 117.5 ng/mL. This was the first report of lipidic amino acids obtained from natural sources and also the first cytotoxic data for this class of compounds. The cytotoxic investigation of 1a/1b and EtOAc-P-4 on HL-60 cells showed treated-cells dead by apoptosis with critical involvement of intrinsic pathway. Protein-bound sulfated polysaccharides (PPV) with high molecular mass were obtained from residue of the hydroalcoholic extract. PPV did not showed cytotoxicity on tumor cell lines in vitro, however it induced 50% of tumor growth inhibition on melanoma B-16 bearing-mice. No toxic evidences were observed in histopathology analysis as well as in biochemical and hematological parameters, however circulating monocytes increased with PPV treatment. In addition peritoneal macrophages investigated in vitro confirmed that PPV is a biological response modifier. The PPV-induced macrophage activation stimulated the release of nitric oxide and cytokines IL-1 and IL-6, but did not do TNF-. This work showed that P. variabilis is a rich source of antitumor compounds, having both small cytotoxic molecules and polysaccharides biological response modifiers with antitumor activity in vivo. / O câncer é um dos principais problemas mundiais de saúde e uma das causas mais importantes de morbidade e mortalidade em crianças e adultos. Apesar do sucesso no tratamento de diversos tipos de tumor, ainda não se chegou ao fármaco ideal e as terapias existentes nem sempre alcançam resultados satisfatórios além de induzir muitos efeitos colaterais. A pesquisa em produtos naturais marinhos (PNM), embora recente, tem revelado uma enorme diversidade de estruturas químicas, muitas vezes inéditas e com potente atividade biológica. Moléculas citotóxicas, com potencial aplicação na quimioterapia do câncer, são freqüentemente isoladas dos organismos marinhos e dos quatro fármacos oriundos de PNM comercializados atualmente, dois são utilizados na quimioterapia do câncer. Além dos metabólitos secundários, o estudo de polissacarídeos modificadores da resposta biológica para imunoterapia adjuvante também vem surgindo como uma área bastante promissora. Os cnidários juntamente com esponjas, ascídias, moluscos e algas compõem o grupo de representantes marinhos quimicamente mais prolíficos. O zoantídeo Protopalythoa variabilis (Cnidaria, Anthozoa) é encontrado no litoral do mundo inteiro, porém o seu potencial farmacológico nunca foi investigado anteriormente. O potencial antitumoral de substâncias obtidas do P. variabilis encontrado no litoral cearense foi avaliado neste trabalho. O fracionamento guiado pela citotoxicidade de 4 linhagens de células tumorais (HL-60, leucemia; HCT-8, cólon; SF-295, sistema nervoso central e MDA-MB-435, melanoma) do extrato hidroalcoólico bruto (EHB) rendeu uma mistura de alfa-aminoácidos lipídicos (1a/1b) inéditos a partir da fração hexano e 5 frações (AcOEt-P-1-5) contendo sinais compatíveis com esteróides da fração acetato de etila. Os 1a/1b apresentaram uma média de concentração inibitória média (CI50) nas linhagens testadas de 85 ng/mL, enquanto a AcOEt-P-4, mais ativa dentre as derivadas da AcOEt exibiu uma média de CI50 de 117,5 ng/mL. Essa foi a primeira vez que alfa-aminoácidos lipídicos foram obtidos de uma fonte natural e também que o potencial citotóxico de compostos dessa classe é demonstrado. O estudo da citotoxicidade dos 1a/1b e da AcOEt-P-4, na linhagem leucêmica HL-60, revelou que estas amostras devem sua atividade à indução de apoptose com via intrínseca desempenhando um importante papel. A partir do resíduo do EHB do P. variabilis, foram obtidos polissacarídeos sulfatados ligados a proteínas (PPV). O PPV não apresentou citotoxicidade contra as células tumorais in vitro, porém induziu 50% de inibição do crescimento tumoral em camundongos transplantados com a linhagem B-16 (melanoma). As análises dos parâmetros bioquímicos, hematológicos e histopatológicos indicaram que o PPV não apresentou toxicidade nos animais e aumentou a proliferação de monócitos. Estudos adicionais com macrófagos peritoneais in vitro confirmaram que o PPV é um modificador da resposta biológica. A ativação dos macrófagos pelo PPV induziu a produção de óxico nítrico, e das citocinas IL-1 e IL-6, mas não TNF-alfa. O presente trabalho mostrou que a espécie P. variabilis é uma rica e profícua fonte de compostos com potencial antitumoral a ser explorada, possuindo tanto metabólitos citotóxicos capazes de induzir apoptose em células tumorais diretamente, quanto macromoléculas imunomoduladoras com atividade antitumoral in vivo.

Resumo: Pseudomonas aeruginosa e uma bacteria gram-negativa responsavel por diversas doencas e manifestacoes clinicas. Sua virulencia permite a infeccao e colonizacao de individuos pertencentes a grupos de risco, como imunocomprometidos, queimados e portadores de fibrose cistica. O presente estudo visa o desenvolvimento de uma vacina a base de Lipopolissacarideo (LPS), antigeno consagrado em diversos protocolos de imunizacao. Este antigeno foi conjugado a proteina, constituindo uma vacina conjugada. Vacinas conjugadas sao imunogenos nao-proteicos que, ao serem ligados a uma proteina, adquirem uma nova propriedade: geracao de memoria imunologica. A proteina utilizada no estudo e o toxoide tetanico (toxina inativada do Clostridium tetani, TT). Ainda, capacita neonatos e criancas a interagirem com um antigeno contra o qual nao responderiam normalmente. A tecnica de conjugacao utilizada foi a aminacao redutiva direta, avaliada como simples e de baixo custo. Atraves da adaptacao do protocolo de Shen e colaboradores, foi possivel conjugar o Lipopolissacarideo ao toxoide tetanico (LPS-TT). Avaliou-se a resposta in vivo atraves de aplicacoes intraperitoneais do imunogenos em camundongos Swiss, atraves de dois protocolos: o primeiro avalia a formacao de anticorpos anti-pseudomonas pela imunizacao com LPS, LPS e TT ou LPS-TT. O segundo avalia a formacao de anticorpos utilizando LPS, LPS e TT, ou LPS-TT apos aplicacao intraperitoneal de bacterina (celula inativada de P. aeruginosa). Os grupos que foram imunizados com LPS e TT e LPS-TT (20 e 40 ƒÊg/ml) apresentaram resposta de anticorpos aglutinantes superior ao controle LPS.

DEUS, Samira Rêgo Martins de. Estudo dos procedimentos quanto à conservação das vacinas do programa nacional de imunização em Teresina-PI. 2011. 101 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-26T11:31:53Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_srmdeus.pdf: 692691 bytes, checksum: ccd2d48bde52f17fb29efc8dc621ef4f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-08-06T11:51:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_srmdeus.pdf: 692691 bytes, checksum: ccd2d48bde52f17fb29efc8dc621ef4f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T11:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_srmdeus.pdf: 692691 bytes, checksum: ccd2d48bde52f17fb29efc8dc621ef4f (MD5) Previous issue date: 2011 / Vaccination represents one of the most beautiful and successful advances in medicine. Importantly, the principles and standards for vaccine storage are decisive factors in the effectiveness of the same, without which the vaccine would have no effect. This study aimed to evaluate the conservation of biological process of the National Immunization Program (NIP) in rooms of vaccine from the urban area of Teresina-PI. This was an epidemiological study conducted in 53 rooms of vaccine distributed by the Regional Health as follows: 20 in the central-north zone, 19 in the south zona and 14 in the east zone, considering the period between September 2008 and February 2009 . The results showed that in the halls of vaccine from noth central zone, only 60% had adequate size and stainless steel bench, only 35% had gurneys, 30% were not far from heat and sunlight, 95% did not work on schedule full and on the training employees, 10% of these had no training in vaccine, BCG 40%, 95% in the cold chain and 80% in adverse effects. In the halls of vaccine from the South zone only 26.3% had a stainless steel countertop, 36.8% had adequate size, 32% had gurneys, 21.1% were not far from heat and sunlight, washing cooler was not performed as recommended by the NIP in 26.3% of the rooms, at 31.6% was not done the proper organization of immunosuppressive in the insulated box, 85.9% were not working full time and the training of officials, 21, 1% had no training in vaccine, 57.9% in BCG, 100% in the cold chain and 89.5% in adverse effects. In the halls of vaccine from the East zone was seen that all had adequate size, 50% were stainless steel countertop, 43% had gurneys, 71.4% were not monitored the temperature of the coolers and 64% did not work full time and about training of officials, all had more than 2 years who had been trained in vaccine, 36% had no training in BCG, 93% in the cold chain and adverse effects. This study concludes that for vaccination activities to achieve results consistent with the desired, it is necessary beyond vaccination campaigns, a capacitation (empowering training) of health workers in vaccine, but also the monitoring of processes that involve handling these substances. / A vacinação representa um dos mais belos e bem sucedidos avanços da medicina. É importante destacar que os princípios e as normas de conservação das vacinas são fatores determinantes na eficácia das mesmas, sem os quais as vacinas não teriam nenhum efeito. Este trabalho teve como objetivo avaliar o processo de conservação dos imunobiológicos do Programa Nacional de Imunização (PNI) nas salas de vacina da zona urbana de Teresina-PI. Tratou-se de um estudo epidemiológico realizado em 53 salas de vacina, distribuídas por Regional de Saúde da seguinte forma: 20 na zona centro-norte, 19 na zona sul e 14 na zona leste, no período de setembro de 2008 a fevereiro de 2009. Os resultados mostraram que nas salas de vacina da zona Centro-Norte apenas 60% possuíam tamanho adequado e bancada de inox; somente 35% dispunham de macas; 30% não estavam distantes de calor e incidência de luz solar; 95% não funcionavam em horário integral e quanto à capacitação dos funcionários, 10% destes não possuíam capacitação em sala de vacina, 40% em BCG, 95% em rede de frio e 80% em efeitos adversos. Nas salas de vacina da zona Sul somente 26,3% possuía bancada de inox; 36,8% tinham tamanho adequado; 32% dispunham de macas, 21,1% não estavam distantes de calor e incidência de luz solar; a lavagem do refrigerador não era realizada conforme preconizado pelo PNI em 26,3% das salas; em 31,6% não era feito a organização adequada de imunos na caixa térmica; 85,9% não funcionavam em horário integral e quanto a capacitação dos funcionários, 21,1% não possuíam capacitação em sala de vacina, 57,9% em BCG, 100% em rede de frio e 89,5% em efeitos adversos. Nas salas de vacina da zona Leste foi visto que todas possuíam tamanho adequado; 50% tinham bancada de inox; 43% dispunham de macas; 71,4% não monitoravam a temperatura das caixas térmicas; 64% não funcionavam em horário integral e quanto a capacitação dos funcionários, todos tinham mais de 2 anos que haviam sido capacitados em sala de vacina, 36% não possuíam capacitação em BCG, 93% em rede de frio e em efeitos adversos. Pode-se concluir com este estudo que para que as atividades de vacinação atinjam resultados coerentes com o desejado, faz-se necessário além das altas coberturas, uma capacitação dos profissionais que atuam em sala de vacina, como também, o monitoramento dos processos que envolvem a manipulação dessas substâncias.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-04T12:59:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Roberta de Souza.pdf: 853378 bytes, checksum: 0de50af1648d273a68c02c2289e077a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T12:59:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Roberta de Souza.pdf: 853378 bytes, checksum: 0de50af1648d273a68c02c2289e077a5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Doença de elevada prevalência e morbidade na infância, a asma tem início, geralmente, em idade precoce com exacerbações recorrentes de tosse e sibilância, podendo ocasionar danos às vias aéreas e remodelamento brônquico desde os primeiros meses de vida. Não obstante, diagnosticar asma em lactentes e pré-escolares é difícil, visto que o diagnóstico diferencial é amplo e muitos métodos diagnósticos não se encontram disponíveis nesta faixa etária. Crianças menores de três anos de vida que manifestam pelo menos três episódios de sibilância são denominadas lactentes sibilantes recorrentes e apresentam risco elevado de persistência dos sintomas. Crises de sibilância, comumente desencadeadas por infecções respiratórias, associadas à história pessoal ou familiar de atopia é consistente com o padrão típico de asma na infância. A sensibilização aos alérgenos é um importante marcador de atopia. Desta forma, este estudo objetivou realizar uma revisão da literatura acerca da sensibilização atópica no diagnóstico precoce de asma na infância, especialmente em lactentes; comparar a ocorrência de sensibilização aos alérgenos em lactentes sibilantes recorrentes e não sibilantes; comparar os níveis séricos de IgE total e de eosinófilos em sangue periférico nos dois grupos e verificar os fatores de risco para asma peculiares à população do estudo. Foram investigados 113 indivíduos oriundos dos ambulatórios de alergia e imunologia clínica, de pediatria e de puericultura do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco, divididos em dois grupos: 65 lactentes sibilantes recorrentes com média de idade de 14,8 ± 5,2 meses e 48 lactentes saudáveis com média de idade de 15,2 ± 5,1 meses. Entre os sibilantes, a média de idade de início dos sintomas foi de 8 ± 5,6 meses. O gênero masculino foi o mais prevalente (63%) no primeiro grupo. Sensibilização aos antígenos inaláveis e alimentares prevaleceu no grupo dos sibilantes (17%) em relação aos não sibilantes (2,1%) (p = 0,011). Crianças com sensibilização aos antígenos apresentaram 12,4 vezes mais chance de ser sibilante do que as crianças não sensibilizadas (OR=12,45; IC 95%: 1,28-19,11). O alérgeno inalável mais frequente foi a Blomia tropicalis e não houve sensibilização combinada aos aeroalérgenos e a alimentos no mesmo paciente. O Asthma Predictive Index – API (Índice Preditivo para Asma) foi positivo em 81,5% e 44,8% dos sibilantes e controles respectivamente com diferença estatisticamente significante (p < 0,001; OR=5,57; IC 95%: 2,23 – 7,96). Eosinofilia ≥ 4% e nível de IgE sérica total ≥ 100 UI/mL também foram mais observados no primeiro grupo (46,2% x 18,8% e 47,6% x 29,8%, respectivamente) com diferença significante entre os grupos caso e controle (p = 0,002 e p = 0,059, respectivamente). Observou-se neste estudo maior ocorrência de positividade aos marcadores de atopia no grupo dos lactentes sibilantes quando comparado ao dos não sibilantes. Com a identificação desses marcadores o diagnóstico de asma em crianças pequenas pôde ser norteado por parâmetros mais objetivos fornecendo mais subsídios para a adoção de medidas terapêuticas medicamentosas, além de direcionar medidas de controle ambiental, reduzindo a exposição de crianças susceptíveis para persistência de sibilância.

Orientador: Irineu Jose Barsanti de Camargo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T19:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_SaradeJesus_M.pdf: 5123580 bytes, checksum: 565df21d4a810796dd5900117b5e60e8 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: A resistência precoce é um processo através do qual o hospedeiro, previamente sensibilizado por estoques de baixa virulência do T. cruzi, responde em um curto período de tempo, com diminuição da parasitemia e maior sobrevida, ao desafio com formas e doses altamente virulentas do parasita. As investigações sobre a indução da resistência precoce demonstraram que se trata de um mecanismo de caráter específico. Isto porque, essa forma de resistência é mais eficiente quando induzida por cepas homólogas do que por cepas heterólogas, e não altera o curso de infecções provocadas por outros grupos de microorganismos. O estudo da patogenia dos estoques envolvidos na resistência precoce, mostrou que além de apresentarem diferentes graus de virulência, essas cepas são capazes de induzir diferentes graus de alterações, nas proporções das células do sangue periférico e dos órgãos linfóides do hospedeiro vertebrado. O estoque da cepa Y mantido em cultura de células induz baixa parasitemia e 100% de sobrevida no hospedeiro, não provocando alterações histopatológicas nos primeiros 3 dias da infecção. O estoque de T. cruz; provenientes de animais SPF, mantidos isolados de outros patógenos, induz um nível de parasitemia maior que os estoques de cultura, sobrevida de 15 ± 2 dias, e poucas alterações no baço dos animais infectados. Já o estoque de parasitas provenientes de animais mantidos em biotério convencional, induz parasitemia elevada, linfopenia e alterações na estrutura do timo e baço, induzindo a morte dos animais em aproximadamente 10 dias. O estudo comparativo dos efeitos da administração do plasma filtrado desses três tipos de estoques, em camundongos normais, mostrou que somente o plasma de animais infectados com parasitas mantidos em biotério convencional é capaz de induzir alterações histopatológicas no hospedeiro. Esses dados sugerem a presença de outro microorganismo, agindo conjuntamente com o T. cruzi, provavelmente um coronavírus relacionado ao M.H.V3 / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A imunização genética com um DNA plasmidial, contendo o gene que codifica a proteína 2 da superfície de amastigotas (ASP-2), é capaz de proteger parte dos camundongos altamente suscetíveis A/Sn contra uma infecção letal pelo Trypanosoma cruzi. Com base neste resultado, a hipótese central desta tese foi a de que se poderia melhorar racionalmente a eficácia da vacinação contra a infecção experimental pelo T. cruzi, utilizando diferentes formulações vacinais e/ou esquemas de vacinações. Para tal, empregaram-se protocolos de imunização e reforço homólogo ou heterólogo, usando DNA plasmidial, proteínas recombinantes, e vírus recombinantes da ASP-2 de T. cruzi. Inicialmente, testou-se se o reforço heterólogo com a proteína ASP-2 recombinante aumentava a eficácia da vacinação com o DNA plasmidial (pIgSPCl.9). Este protocolo não se mostrou mais eficaz, mas abriu a possibilidade de que a imunização com a proteína ASP-2 recombinante pudesse ser utilizada como um protocolo vacinal alternativo. Com esta abordagem, descreveu-se que a administração de 3 doses de uma proteína recombinante (GST-P4P7), representando os aminoácidos 261-500 da ASP-2 em fusão com a glutationa S-transferase, na presença dos adjuvantes alum e CpG ODN 1826, era capaz de induzir altos níveis de proteção. Neste modelo experimental, observou-se que a imunidade protetora foi de longa duração e dependente dos linfócitos CD8 específicos para o epítopo imunodominante TEWETGQI. Determinou-se também que o adjuvante CpG ODN 1826 melhorou a eficácia da imunidade protetora, e que linfócitos T CD4 específicos são importantes para a indução dos linfócitos CD8 protetores. Como o protocolo de vacinação com a proteína recombinante GST-P4P7 exigia o uso de três doses, testou-se então a possibilidade de que um adenovírus recombinante, expressando a ASP-2 (AdASP-2), pudesse ser utilizado num protocolo de imunização e reforço homólogo ou heterólogo (somente duas doses). Na comparação dos protocolos de vacinação homólogos ou heterólogos com pIgSPCl.9 e AdASP-2, observou-se que, nos animais A/Sn, tanto a imunização homóloga quanto a heteróloga, usando o AdASP-2, proporcionaram um alto grau de imunidade protetora contra a infecção pelo T. cruzi. Os estudos utilizando o protocolo heterólogo (pIgSPCl.9 seguido por AdASP-2), que protege 80-100% dos camundongos, mostraram que a imunidade era de longa duração e dependente dos linfócitos T CD4 e CD8. Esta imunidade protetora se correlacionou com a atividade citotóxica específica in vivo, antes do desafio com o T. cruzi. Com base nestes resultados, analisou-se a imunidade protetora após a vacinação heteróloga em camundongos com deficiência de um importante mediador da citotoxicidade, a perforina. Os animais deficientes (KO) da expressão de perforina vacinados se mostraram suscetíveis à infecção experimental. Uma análise da resposta imune celular destes camundongos mostrou que eles apresentavam uma menor produção de IFN-γ por esplenócitos re-estimulados in vitro, na presença do antígeno recombinante. Na análise dos linfócitos T CD8 específicos observou-se que havia: i) uma expansão numérica normal; ii) uma redução numérica significativa dos linfócitos multifuncionais, capazes de expressar simultaneamente IFN-γ/CD107a e IFN-γ/TNF-α.; iii) baixa citotoxicidade in vivo; iv) baixa expressão de CD44 e de KLRG-1. Por fim, para definir a importância relativa do IFN-γ e da citotoxicidade na proteção contra a infecção pelo T. cruzi após a vacinação heteróloga, camundongos IFN-γ KO foram imunizados com pIgSPCl.9 seguido por AdASP- 2. Estes animais apresentaram um alto grau de citotoxicidade in vivo, mas nenhuma imunidade protetora detectável. Em resumo, ao longo deste trabalho obtiveram-se evidências que confirmam a hipótese inicial de que, utilizando diferentes formulações vacinais e/ou esquemas de vacinações, se poderia melhorar racionalmente a eficácia da vacinação contra a infecção experimental pelo T. cruzi. Pela utilização de depleções in vivo e de animais geneticamente deficientes, definiu-se a importância dos linfócitos T CD4 e CD8, da perforina e do IFN-γ na imunidade gerada pela vacinação com a ASP-2 de T. cruzi. Acredita-se que os dados obtidos no decorrer desta tese serviram para: i) uma melhor compreensão dos mecanismos imunológicos de resistência à infecção pelo T. cruzi e dos seus antígenos alvos; ii) o desenvolvimento de vacinas recombinantes contra infecções por protozoários intracelulares em geral e, especificamente, contra a doença de Chagas; iii) o desenvolvimento de vacinas recombinantes capazes de induzir uma potente resposta imune mediada por linfócitos T. / Genetic immunization with plasmidial DNA containing the gene encoding the amastigote surface protein 2 (ASP-2) protects part of the highly susceptible A/Sn mice against a lethal challenge with Trypanosoma cruzi. Based on these results, in this thesis, we tested the hypothesis that the efficacy of the vaccination against T. cruzi experimental infection could be rationally improved by the use of different vaccine formulations and/or vaccinations strategies. For that purpose, we employed homologous or heterologous priming and boosting strategies, with plasmidial DNA, recombinant proteins, and adenovirus expressing T. cruzi ASP-2. Initially, we tested whether boosting with a recombinant protein of ASP-2 could improve the efficacy of the priming vaccination with plasmidial DNA (pIgSPCl.9). This protocol was not more efficient, but opened the possibility that the immunization with the recombinant protein could be used as an alternative vaccine strategy. Using this approach, we described that the administration of 3 doses of a recombinant protein representing the amino acids 261-500 of ASP-2 in fusion o the gluthatione Stransferase (GST-P4P7), in the presence of the adjuvants alum and CpG ODN 1826, was capable of eliciting high levels of protective immunity. In this experimental model, protective immunity was: i) long-lasting; and ii) dependent on the effector CD8 T lymphocytes specific for the immunodominant epitope TEWETGQI. We also established that the adjuvant CpG ODN 1826 improved the efficacy of protective immunity, and that CD4 T lymphocytes were important for the induction of protective CD8 T cells. Because the vaccination strategy employing the recombinant protein GST-P4P7 required 3 doses, we tested the possibility that a recombinant adenovirus expressing ASP-2 (AdASP-2) could be used in a homologous or heterologous priming and boosting protocol with two doses only. By comparing homologous or heterologous priming and boosting with pIgSPCl.9 and AdASP- 2, we found that homologous or heterologous immunizations with AdASP-2 led to a high degree of protective immunity against T. cruzi infection, in highly susceptible A/Sn mice. Follow up studies using the heterologous priming and boosting strategy (pIgSPCl.9 followed by AdASP-2), which protects 80-100% of the mice, showed that protective immunity was long-lived and dependent on the activation of CD4 or CD8 T cells. Protective immunity correlated with antigenspecific in vivo cytotoxic activity prior to the challenge with T. cruzi. Based on this observation, we evaluated the protective immunity following the heterologous vaccination in mice genetically deficient for an important mediator of cytotoxicity, perforin. Vaccinated perforin knock-out (KO) mice were extremely susceptible to the experimental infection. The analyses of the immune response of these mice showed that their splenocytes produced less IFN-γ when re-stimulated in vitro with recombinant antigen. Analysis of specific CD8 T lymphocytes showed: i) a normal numeric expansion; ii) a significantly lower frequency of polyfunctional cells expressing simultaneously IFN-γ/CD107a or IFN-γ/TNF-α.; iii) lower in vivo cytotoxicity; iv) lower expression of CD44 and KLRG-1. Finally, to define the relative importance of IFN-γ and cytotoxic T lymphocytes in the protection against T. cruzi infection following heterologous vaccination, IFN-γ KO mice were immunized with pIgSPCl.9 followed by AdASP-2. These mice developed a high level of in vivo cytotoxicity, but no detectable protective immunity. In summary, during this work we gathered evidences that confirmed our initial hypothesis that we could rationally improve the efficacy of vaccination against T. cruzi experimental infection using different vaccine formulations and/or vaccination strategies. Using in vivo depletions and KO mice, we defined the importance of CD4 cells, CD8 cells, perforin and IFN-γ during immunity generated by vaccination with ASP-2 of T. cruzi. We believe that our findings will provide: i) a better understanding of the immunologic mechanisms and the target antigens during the resistance to T. cruzi infection; ii) to aid the development of recombinant vaccines against intra-cellular parasitic protozoan infections in general and Chagas’ disease, specifically; iii) to aid the development of recombinant vaccines capable of eliciting potent immune response mediated by T lymphocytes. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A região C-terminal da proteína 1 de superfície de merozoítas de Plasmodium (MSP119) vem sendo estudada como um dos principais alvos para desenvolvimento de uma vacina contra malária. Estudos têm demonstrado a imunogenicidade desta região em vacinações experimentais utilizando proteínas recombinantes na presença de adjuvantes fortes. No presente estudo, consideramos a possibilidade da utilização de proteínas recombinantes baseadas na sequência da MSP119 para imunização de camundongos por uma via de mucosa. Também geramos novas proteínas recombinantes de fusão da MSP119 com a flagelina (proteína do flagelo de Salmonella enterica Typhimurium), com o intuito de aumentar a imunogenicidade deste antígeno. Avaliamos inicialmente a capacidade de atuação das moléculas toxina colérica (CT), toxina termo-lábil de E. coli (LT) e do oligodeoxinucleotídeo CpG ODN 1826 como adjuvantes em imunizações de camundongos pela via de mucosa intranasal, utilizando como antígenos as proteínas recombinantes baseadas na MSP119 de P. vivax His6PvMSP119 ou His6PvMSP119-PADRE (contendo o epítopo “helper” universal PADRE). Quando administradas na presença dos adjuvantes CT ou LT, ambas foram altamente imunogênicas pela via intranasal, induzindo altos títulos de anticorpos, maiores do que quando utilizamos o CpG ODN 1826 como adjuvante. A adição do CpG ODN 1826 em imunizações na presença de CT foi capaz de aumentar a resposta específica de IgG2c. Nossos resultados demonstraram que CT e LT são adjuvantes potentes de mucosa em imunizações com antígenos recombinantes de malária, e que o CpG ODN 1826 pode ser utilizado como ferramenta de modulação da resposta imune nestas imunizações. Subsequentemente, expressamos em bactérias E. coli uma proteína recombinante contendo a sequência da PvMSP119-PADRE fusionada à flagelina FliC de S. enterica Typhimurium (His6FliC-PvMSP119-PADRE). Demonstramos que essa proteína de fusão retém as propriedades antigênicas da PvMSP119 e a capacidade da flagelina de ativar o receptor TLR5 da imunidade inata. A imunização de camundongos utilizando somente esta proteína recombinante de fusão induziu altos títulos de anticorpos, além de células específicas produtoras de IFN-g medidas no baço dos animais imunes. A adição de CpG ODN 1826 nas imunizações foi capaz de imunomodular a resposta de anticorpos, aumentando os títulos de IgG2c. Além disso, os soros dos camundongos imunizados foram capazes de reconhecer os parasitas por imunofluorescência indireta (IFA). Estes resultados demonstraram uma nova classe de antígenos candidatos à vacina contra malária, com atividade adjuvante intrínseca e capaz de estimular respostas imunológicas humoral e celular específicas, quando administrada sozinha ou na presença de outros adjuvantes. Por fim, expressamos em bactérias E. coli uma proteína recombinante contendo a sequência da MSP119 de P. falciparum (PfMSP119) fusionada à flagelina FliC de S. enterica Typhimurium (His6FliC-PfMSP119). Demonstramos que esta proteína de fusão retém a capacidade da flagelina de ativar o receptor TLR5 da imunidade inata. A imunização de camundongos com somente esta proteína recombinante de fusão induziu altos títulos de anticorpos, além de células produtoras de IFN-g específicas contra a PfMSP119. A adição de adjuvantes como CpG ODN 1826 ou Quil-A (saponina de Quillaja saponaria) nas imunizações com a proteína recombinante de fusão foi capaz de imunomodular a resposta de anticorpos, aumentando os títulos de IgG2c, bem como de potencializar a resposta celular medida pela produção de IFN-g contra a PfMSP119. Os soros de coelhos imunizados com a His6FliC-PfMSP119 sem a adição de nenhum adjuvante apresentaram altos títulos de anticorpos específicos contra a PfMSP119, que foram capazes de inibir o crescimento do parasita in vitro. Esses resultados sugerem a estratégia de fusão de antígenos de plasmódios como uma alternativa viável de desenvolvimento de uma vacina barata e eficaz contra a malária. / The C-terminal region of Plasmodium merozoite surface protein 1 (MSP119) is being studied as one of the main targets for the development of a vaccine against malaria. Several studies have shown high imunogenicity of this region in experimental immunizations when injected in the presence of strong adjuvant formulations. In the present study we evaluate the possibility of using recombinant proteins based on the sequence of MSP119 to immunize mice by a mucosal route. Also, we generate new recombinant proteins consisting in the genetic fusion of the MSP119 to the flagellin FliC (flagellar protein of Salmonella enterica Typhimurium), to increase the immunogenicity of the antigen. Initially, we evaluated the capacity of the molecules cholera toxin (CT), heat-labile E. coli enterotixin (LT) or CpG ODN 1826, to act as adjuvants in mucosal intranasal immunization of mice with the recombinant proteins His6PvMSP119 or His6PvMSP119-PADRE (containing the universal T helper epitope PADRE). When administered in the presence of CT or LT, both recombinant proteins were highly immunogenic by the intranasal route. CpG ODN 1826 was less efficient as adjuvant by this route. The addition of CpG ODN 1826 in CT adjuvanted immunizations increased the specific IgG2c titers. These results showed that CT and LT are potent mucosal adjuvants in immunizations with recombinant malaria antigens and that CpG ODN 1826 can, in this case, be used as a tool to modulate the pattern of the immune response. Subsequently, we expressed a recombinant protein consisting of the sequence of PvMSP119-PADRE genetically fused to FliC (His6FliC-PvMSP119- PADRE). We showed that this fusion protein preserved the antigenic properties of PvMSP119 and the ability of flagellin to activate TLR5. The immunization of mice using this recombinant fusion protein induced high titers of specific antibodies and the presence of antigen-specific IFN-g producing cells in the spleen. The addition of CpG ODN 1826 in the vaccine formulations modulated the immune response by augmenting the specific titers of IgG2c. In addition, sera from immunized mice recognized the parasite in indirect immunofluorescence assay (IFA). Our results provided a new class of malaria vaccine formulation with intrinsic adjuvant property capable of stimulating specific humoral and cellular immune responses when administered alone or in the presence of other adjuvants. Finally, we expressed a recombinant protein containing the sequence of Plamodium falciparum MSP119 (PfMSP119) fused to FliC (His6FliC-PfMSP119). This fusion protein retained the capacity of flagellin to activate TLR5. Immunization of mice with the His6FliC-PfMSP119 alone induced high titers of specific antibodies and IFN-g producing cells. The addition of adjuvants such as CpG ODN 1826 or Quil-A (saponin of Quillaja saponaria) increased the levels of IgG2c and the cellular immune response, measured by the IFN-g secretion by immune spleen cells in culture. In addition, sera from immunized rabbits recognized the parasites in IFA and inhibited parasite growth in vitro. These results provide evidences that the fusion of malaria antigens to flagellin is an inexpensive and viable alternative for the development of a malaria vaccine. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientadora: Drª. Liliana Müller Larocca / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação Mestrado Profissional em Enfermagem. Defesa: Curitiba, 05/12/2016 / Inclui referências : f.84-88 / Área de concentração: Prática profissional de enfermagem / Linha de pesquisa: Políticas e práticas de Educação, saúde e enfermagem / Resumo: Este trabalho teve como objetivo identificar a ocorrência de perdas evitáveis de imunobilógicos notificadas no período de 2011 a 2015 em um município da 2ª RS - Metropolitana do Paraná. Com esta informação o seguinte passo, foi conhecer o processo de trabalho da Enfermagem nas atividades relacionadas à rede de frio de imunobiológicos na instância local (sala de vacina) assim como as estratégias de enfrentamento à estas perdas. Trata-se de um estudo de caso do tipo exploratório documental (fase I) com abordagem quantitativa, e de campo (fase II) com abordagem qualitativa com análise do discurso para compreensão dos dados. O município de Colombo foi identificado na base de dados por ter apresentado a maior quantidade de perdas evitáveis de imunobiológicos notificados no período estudado. Porém devido a transição dos sistemas de informação em imunização a maioria dos municípios não transmitiu a informação contendo as doses de vacinas desprezadas por causas evitáveis. Das ocorrências de perdas evitáveis de imunobiológicos a que mais se destacou foi a perda por validade vencida com mais de 87 mil doses desprezadas. Em campo, os dados foram obtidos por meio de entrevistas semiestruturadas aplicadas à 54 profissionais de enfermagem que exercem atividades na sala de vacinação, sendo que destes, nove são enfermeiros, 40 são técnicos de enfermagem e 5 são auxiliares de enfermagem. A análise do discurso foi realizada em três etapas, sendo que na primeira emergiram oito figuras: organização da sala de vacinas, aplicação de vacinas, quebra de frasco, falta de energia elétrica, procedimento inadequado, falha no equipamento de refrigeração, depredação do patrimônio, validade vencida. Na segunda elaboramos as frases temáticas que geraram duas grandes categorias: Processo de Trabalho e Perdas Evitáveis de Vacinas. A partir da categorização das frases temáticas podemos identificar que a perda de vacinas por validade vencida se sobressaiu em relação às demais, com relato de 46% dos entrevistados, e que segundo os profissionais, isto acontece devido ao fato do recebimento dos imunobiológicos ser com data de validade próxima ao vencimento, fator que não está sob responsabilidade da instância local. Sendo o profissional de Enfermagem responsável pelas ações de imunização, desde a conservação até a administração das vacinas, foi extremamente relevante conhecer de que forma a prática cotidiana da equipe de Enfermagem enfrenta as perdas evitáveis de imunobiológicos, tanto para análise do processo de trabalho, como para subsidiar os gestores da rede de frio no que tange a capacitação de pessoal em sala de vacinação. Neste caso, podemos observar que o processo de trabalho da equipe de Enfermagem nas salas de vacinas do município, pode não estar relacionado com o número de doses desprezadas por validade vencida. Concluímos que são necessários novos estudos neste domínio, uma vez que o mesmo é de responsabilidade integral da equipe de Enfermagem e há escassez de literatura a respeito de perdas vacinais, o que dificultou a discussão dos achados por meio de um amplo diálogo com o estado da arte. Palavras-chave: Enfermagem. Imunização. Rede de Frio. / Abstract: This study objectified to identify the occurrence of preventable losses of immunobiologicals reported in the period between 2011 and 2015 in a municipality from the 2nd Metropolitan Health Region of Paraná State, Brazil. With this information, the following step was to know Nursing work process on the related activities to the cold-chain for immunobiologicals at local level (vaccination room), as well as the strategies to cope with those losses. It is an exploratory documented (phase 1) case study with quantitative approach, and qualitative field approach (phase 2) by means of discourse analysis for data understanding. The municipality of Colombo, Paraná State (Brazil) was identified in the Sistema de Informação de Apuração de Imunobiológicos (Immunobiologicals Investigation Information System) database as the one with the largest amount of preventable vaccine losses reported during the studied period. However, due to the transition of vaccination information systems, most municipalities did not report information on discarded vaccination doses for preventable causes. From the occurrences of preventable immunobiological losses, expiration date of over 87 thousand doses stood out. Field data were gathered by means of semi-structured interviews applied to 54 Nursing professionals performing tasks in the vaccination room. Among those, 9 are nurses, 40 are nursing technicians and 5 are nursing assistants. Discourse analysis was held in three steps, with 8 figures emerging from the first one: organization of the vaccination room, vaccine administration, bottle break, power outage, inadequate procedure, cooling equipment failure, facility depredation, expiration date. In the second step, we elaborated thematic phrases, which generated two large categories: Work Process and Preventable Vaccine Losses. From the categorization of the thematic phrases, we can identify that vaccine losses for expiration date stood out of the others, reported by 46% of the participants, and according to the professionals, that is due to the fact that immunobiologicals are received near the expiration date, not being under local level responsibility. As Nursing professionals are held responsible for the immunization tasks, from vaccine storage to administration, it was extremely relevant to know the way that Nursing team's daily practice copes with preventable losses of vaccines, not only for the analysis of the work process, but also for grounding cold chain managers in relation to staff qualification for the vaccination room. In this case, we can observe that Nursing team's work process in the vaccination room of the municipality may not be associated with the number of discarded doses due to the expiration date. We concluded that further studies are deemed necessary in this realm, as the Nursing team is held totally responsible, and literature is scarce on vaccine losses, which made discussion of the findings difficult for scarcity of current studies. Key words: Nursing. Immunization. Cold Chain.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7280_Julia Assis Pinheiro.pdf: 31553 bytes, checksum: 448a27d7cb01aae2bde508e8512df522 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / O presente projeto pretende avaliar a proteção de duas diferentes vacinas comercialmente disponíveis para proteção contra leishmaniose visceral na proteção contra leishmaniose tegumentar americana (LTA) em cães de município endêmico para enfermidade. Para tanto, serão selecionados pela técnica sorológica de ELISA 70 cães soronegativos para LTA (1,0% da população canina) no município de Íuna, Espírito Santo, sendo posteriormente divididos em dois grupos de igual número e vacinados com três doses segundo orientação dos fabricantes (Leishmune®;FORT DODGE Saúde Animal Ltda / Leish-Tec®;Hertape Calier Saúde Animal S.A.). Semestralmente, estes animais serão monitorados clinicamente e sorologicamente para verificar proteção contra desenvolvimento de LTA. Espera-se que ambas vacinas protejam significativamente os cães vacinados frente a infecção para Leishmania (Viannia) braziliensis.

Orientador: Luiz Jacintho da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T08:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sa_FlavioCesarde_D.pdf: 3261054 bytes, checksum: 7f58d9910d94240956e0118fba5b66f2 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A população de trabalhadores das áreas de Saúde e Educação mostrou-se estratégica para a obtenção do controle da rubéola e da síndrome da rubéola congênita, nos países que adotaram políticas de controle destas doenças, há várias décadas. Na proposta que fundamentou a introdução da vacina tríplice viral na rotina de vacinação de crianças com 15 meses de idade, no Estado de São Paulo, a Secretaria de Saúde reforçou a necessidade de controlar e vacinar tal população "u. objetivando a proteção direta das mulheres e, indiretamente, a diminuição na disseminação do vírus por serem esses profissionais importantes agentes propagadores da infecção na comunidade¿. Para avaliar a real necessidade de controlar esse grupo, após a introdução da vacina contra a rubéola no Estado de São Paulo, foram examinados trabalhadores das áreas de Saúde e Educação Pré-escolar do município de Paulínia, SP. De um total de 764 funcionários, em atividade durante o período deste trabalho, 647 (84,6%) participaram do mesmo. Destes, 342 (52,9%) concordaram em realizar uma prova de inibição da hemaglutinação (HAI) a fim de detectar anticorpos contra rubéola. O resultado mostrou que 97,4% dos examinados tinham sorologia positiva para a doença, apresentando títulos de HAI> 1:8. Com base neste resultado, concluiu-se que a população de trabalhadores dos sistemas de Saúde e Educação não se constitui em reservatório do vírus e nem é estratégica, no Estado de São Paulo, para o controle da rubéola e da síndrome da rubéola congênita. Foi feita, também, uma análise da estratégia de controle da rubéola e da síndrome da rubéola congênita no Estado de São Paulo / Abstract: The health workers and the workers in educational intitutions are a strategic population for the rubella controI, as was evidenced in the countries that adopted programs of controI of this disease. When the state of São Paulo (BraziI) started the rubella controI program, in 1992, the program proposed the immunization of this specific population, aiming the protection of the individuals and the controI of the virus circulation among these institutions. In order to avaliate the real need of this measures, this study examins the whole population of health and education workers of the town of Paulínia, São Paulo. From 764 workers, 647 (84,6%), tooke part in the study. 342 of these submitted to a sorology (HAI) to determinate one's immune state against rubella. We've found a seropositivity of 97,4% (HAI > 1 :8). With this results; we concluded that this population isn't strategic for the rubella controI in the state of São Paulo, and, probabily, in Brazil. We also made an analysis of the strategy of rubella controI adopted by the Health autorities in São Paulo / Doutorado / Saude Coletiva / Doutor em Medicina