Orientador: Jaime Aparecido Cury / Dissertação (mestrado)- Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piraciaba / Made available in DSpace on 2018-07-22T15:07:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peres_PauloEdelvarCorrea_M.pdf: 4032215 bytes, checksum: 9466284a4ef67d323b96cd6ed39c70d8 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Fenilmetilsulfonilflúor (PMSF) é um inibidor de proteases amplamente utilizado em pesquisas. Entretanto, durante sua ação, ele libera íon flúor o qual pode ter efeitos indiretos em enzimas, na formação de película e no esmalte dental. Quarenta e nove blocos (4x4mm) polidos de esmalte bovino foram utilizados. Inicialmente, dureza superficial do esmalte (DSE) foi determinada, após o que os blocos foram submetidos a uma solução desmineralizante (ácido láctico 0,05 M, pH 5,0 , 50 % saturado em relação à hidroxiapatita e contendo carbopol 907 a 0,2 %) para provocar uma lesão superficial de cárie. A DSE foi novamente determinada e os blocos foram divididos casualmente em 5 grupos para serem submetidos aos seguintes tratamentos: I = Saliva humana estimulada (SHE) ; II = SHE contendo PMSF a 10,0 'mu'M ; III = SHE contendo PMSF a 50,0 'mu'M ; IV = SHE contendo PMSF a 100,0 'mu'M e V = SHE contendo 1,0 ppm F. Durante 12 dias estes blocos permaneceram, diariamente, 22h nas salivas de acordo com os tratamentos, e por 2h na solução desmineralizante (ciclagens de pH). As salivas foram trocadas 2x/dia e a solução desmineralizante após o 6° dia. A DSE (Knoop) foi novamente medida, sendo feitas sempre 05 indentações a cada 100 'mu'M de distância, com uma carga de 50 g por 5 seg, utilizando-se um microdurômetro Shimadzu HMV 2000. Flúor incorporado no esmalte (FIE) foi também determinado, removendo-se 05 camadas de esmalte com HCL 0,5 M e as análises de íon flúor foram realizadas com eletrodo específico Orion 96-09 e analisador de íons EA 940. Determinou-se também, a liberação de íon flúor do PMSF (100 'mu'M) pela ação da saliva. Os resultados mostraram que o PMSF liberou íon flúor e em 10 min/37°C a concentração na saliva aumentou de 0,078 para 1,732 ppm F. Calculou-se a % de recuperação da DSE (remineralização sendo os resultados (média + erro padrão) para os grupos de I a V, respectivamente de : 10,7 + 1,97 A; 30,8 + 2,90 B; 43,5 + 5,07 B,C ; 54,5 + 6,59 C; e 43,2 + 5,82 B,C. Os resultados de FIE na 1a camada foram: 2544,8 + 203,7 A; 6281,0 + 429,9 B; 13732,7 + 1372,8 C ; 13719,0 + 1552,1 Ce 11650,3 + 1394,2 C, sendo que médias seguidas de letras distintas difereJp estatisticamente (p <0,05). Concluiu-se que o PMSF libera íon flúor quando em contato com a saliva, o qual não só remineraliza e incorpora flúor no esmalte como poderá ter efeitos indiretos em outras pesquisas nas quais ele é utilizado com a finalidade de inibir enzimas proteolíticas / Abstract: Phenylmethylsulfonylfluoride (PMSF) is a widely used protease inhibitor that by releasing fluoride may have indirect effect on enzymes, pellicle formation and dental enamel. The objective of this research was to study the effect of PMSF on enamel remineralization through saliva action. Forty nine flat bovine enamel blocks (4x4mm) were used. Surface microhardness (SMH) was initially determined in the sound enamel. These enamel blocks were partially demineralized in 0.05 M lactic acid, 50% saturated hydroxiapatite sol. at pH 5.0 containing Carbopol 0.2%, during 16h at 37°C. SMH was determined again; the enamel blocks were randomly allocated in 5 groups and submitted to the following treatments: 1= Human Stimulated Saliva (HSS); II= HSS containing 10.0 'mu'M PMSF; III= HSS containing 50.0 'mu'M PMSF; IV= HSS containing 100.0 'mu'M PMSF and V= HSS containing 1.0 ppm F. The enamel blocks were submitted to a pH-cycling model for 12 days, kept 2h in demineralizing solution and 22h in HSS. The saliva was changed twice/day and the demineralizing sol. after the 6th day. The Knoop SMH was again determined. Enamel fluoride uptake was determined by removing 5 layers of enamel With 0.5 M HCL. Fluoride released from PMSF (100.0 'mu'M) through saliva action was determined. For the Knoop SMH analysis a microhardness tester SHIMADZU HMV -2000 was utilized and for the fluoride analysing, specific electrode ORlON 96-09 was utilized. The results showed that PMSF, releases fluoride and after 10 minutes at 37°C, the fluoride concentration in saliva increased significantly from 0.078 to 1.732 ppm F. The % of Knoop SMH recovery (mean + SE) was calculated; the results for the groups I to V were respectively: 10.7 '+ or -'1.97A; 30.8 '+ or -'2.90B; 43.5 '+ or -' 5.07B,C; 54.5 '+ or -' 6.59C; and 43.2 '+ or -' 5.82B,C. The results (mean '+ or -' SE) of enamel fluoride uptake (ppm) at the 1st layer were: 2544.8 '+ or -' 203.7A; 6281.0 '+ or -' 429.9B; 13732.7 '+ or -' 1372.8C; 13719.0 '+ or -' 1552.1C; and 11650.3 '+ or -' 1394.2C. Means followed by different letters are statistically significant (p<0.05). In conclusion, PMSF releases fluaride when in contact with saliva, which not only enhances remineralization and enamel fluoride uptake but may also have indirect effects on other researches where PMSF is used as protease inhibitor / Mestrado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Mestre em Odontologia

Orientador: Sergio Marangoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T17:22:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_JoseAntonioda_M.pdf: 9541917 bytes, checksum: add850a1bcd914f9e54f920e79088cf3 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Os inibidores foram isolados de TOI em sementes de Copaifera langsorffii, conhecida vulgarmente por Copaíba, uma árvore nativa do Brasil da subfamília Caesalpinoideae da família Leguminosae. A fração TOI foi purificada a partir de precipitação com sulfato de amônio, cromatografia em uma coluna de troca-iônica em OEAE-Sepharose e coluna de afinidade em Sepharose- Trypsina. TOI apresentou-se homogêneo em gel de poliacrilamida-SOS 12,5%, com uma massa molecular aparente de 24 kOa em condições não reduzidas, e 12 kOa em condições reduzidas com OIT. A massa molecular relativa estimada por filtração em gel em uma coluna Superdex-75, sistema FPLC, confirmou os resultados obtidos em PAGE-SOS. TOI tem um Ki de 1,2nM para a enzima tripsina bovina mostrando uma alta afinidade. No entanto, TOI não mostrou atividade inibitória para quimotripsina. O estudo da estequiometria do complexo TOI-tripsina revelou que este inibe tripsina na razão molar de 1: 1. O complexo TripsinaTOI foi eluído na cromatografia de filtração em gel com um tempo de retenção equivalente a uma massa molecular relativa de 39 kOa. Evidenciou-se também que TOI é ativo na sua forma monomérica e não na sua forma dimérica. A Focalização Isoelétrica de TOI revelou a presença de duas bandas de proteínas, ambas coradas para inibidor de tripsina com pls de 6,45 e 7,35, indicando dois inibidores em TO!. Os inibidores de TOI, designadas por TOI-I e TOI-II, foram isoladas em coluna de fase reversa C18 /lBondapack, em Sistema HPLC Walters. Foi observado em gel de Tricina 16,5% uma diferença mínima na massa molecular aparente, sendo aproximadamente 12 e 10 kOa para TOI-I e TOI-1I respectivamente. O sequenciamento N-terminal dos inibidores de TOI revelou a presença da sequência consenso observada nos inibidores de tripsina tipo Kunitz para TOI-I, contudo, pesquisas nos banco de dados de proteínas não revelou nenhuma homologia para TOI-II. TOI mostrou alta estabilidade para diferentes condições de pH, temperatura e concentração de OTT, indicando um possível número elevado de pontes de dissulfeto na estrutura molecular. TOI não foi degradado proteoliticamente na digestibilidade in vitro pelas proteases encontradas no intestino médio do gorgulho Callosobruchus maculatus, e demonstrou um efeito deletério no desenvolvimento dos insetos, sugerindo que TOI atua como um fator antinutritivo e prejudica o desenvolvimento de Callosobruchus maculatus / Abstract: Two inhibitors have been isolated de TOI fraction in seeds of Copaifera langsorffii, ordinarily known as Copaíba, one Brazilian native tree of the Caesalpinoideae subfamily of Leguminosae family. The fraction TOI was purified by ammonium sulfate preeipitation, ion-exehange ehromatography on OEAE-Sepharose and affinity ehromatography on trypsin-Sepharose. TOI presented homogeneity in PAGE-SOS geI12,5%, with apparent moleeular mass of 24 and 12 kOa in non-and reduetion condition, respeetively. The relative moleeular mass determined by FPLC gel filtration on a Superdex 75 eolumn, eonfirmed on the results in PAGE-SOS. TOI have Ki of 1,2nM to bovine trypsin enzyme showing high affinity. However, no inhibition was found for quimotrypsin. The stoiehiometrie study of the trypsin-TOI eomplex evideneed that inhibitor is aetive for trypsin at 1: 1 molar ratio. The trypsin- TOI eomplex was eluted on a gel filtration ehromatography with retention time equivalent a relative moleeular mass of the 39kOa. Evidenced too, that TOI is active on enzyme trypsin on its monomerie form and not dimerie one. The isoelectrie foeusing of TOI demonstrated the presenee of two proteie bands, with isoelectrie point between 6.45 e 7,35, indicating two inhibitors in TOI. These inhibitors of TOI, designated for TOI-I and TOI-II, was isolated by reversed - phase HPLC on a J.L-Bondapaek column (Waters System) and was observed in Trieine-gel 16,5% one minimal differenee on apparent moleeular mass, of approximately 12 and 10 kOa for TOI-I and TOI-1I respectively. N-terminal sequeneing of the inhibitors of TOI, demonstrated the presenee of the eonsensus sequenee present in the soybean Kunitz-Type trypsin inhibitor for TOI-I, however, protein database searehes did not reveal any homology to TOI-II. The TOI showed high stability to pH different eonditions, temperature and amount of OTT, indicating one elevated number of disulfides bonds in a moleeular strueture. The TOI was not proteolytically degraded on a in vitro digestibility by midgut proteinases of the gorgulho Callosobruchus maculatus and demonstrated one deleterious effect on a insect's development, suggesting that TOI acts like toxie factor and deereased survival of Callosobruchus maculatus / Mestrado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Luiz Carlos Dias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-01T22:42:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_AndreaAparecida_M.pdf: 4392747 bytes, checksum: 011567683515d42454f97fa6739e2fc8 (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado

Orientador : Jose Camillo Novello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T23:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_MariaBetaniadeOliveira_D.pdf: 5487305 bytes, checksum: de469730a17c2b1b7458c448fc40fba2 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As lectinas constituem um grupo de proteínas que possuem a capacidade de se ligarem, específica e reversivelmente, a determinados carboidratos. Identificadas em vegetais e animais, são também encontradas em venenos ofídicos. O objetivo deste trabalho é analisar a influência da lectina de Crotalaria paulina e lectina do veneno de serpente Bothrops jararacussu sobre a atividade proteolítica da microbiota cariogênica em placa bacteriana supragengival, em cárie de dentina e cárie de cemento, fazendo uso do teste BANA. Uma colher de dentina (1 mg) foi usada para coleta de 90 amostras: 30 - placa bacteriana supragengival, 30 - cárie de dentina ativa e 30 - cárie de cemento. Estas amostras foram colocadas em 2 mL de uma solução tampão (pH 7.2), sendo agitadas por 30 segundos em 250 mL foram adicionados: A) 250 mL de lectina vegetal de Crotalaria paulina 0,12% + 250 mL BANA 1.67 mmol/L + 250 mL de água destilada; B) 250 mL de lectina do veneno de Bothrops jararacussu 0,12% + 250 mL BANA 1.67 mmol/L + 250 mL de água destilada; C) 250 mL de lectina vegetal de Crotalaria paulina 0,12% + 250 ULL BANA 1.67 mmol/L + 250 mL de N-acetil D-galactosamina a 25mM; D) 250 mL de lectina do veneno da Bothrops jararacussu 0,12% + 250 mL BANA 1.67 mmol/L + 250 mL de lactose a 0,8 mM. As misturas foram incubadas por 18 horas a 37°C e a cor foi desenvolvida pela adição de 50 µL de Fast Gamet a 0,1%. A absorbância foi analisada espectrofotometricamente a 510 nm. Testes estatísticos (t-test) foram realizados para se determinar diferenças significativas entre as absorbâncias dos testes e controles. A absorbância média dos grupos de CrpL [0.375 (±0.028)] e BJcuL [0.442 (±0.057)] foi inferior a dos controles [0.860 (±0.056)] [0.753 (±0.058)] em placa bacteriana supragengival (p < 0.001). A absorbância média dos grupos de CrpL [0.471 (±0.044)] e BJcuL [0.563 (±0.035)] foi inferior do que os controles em dentina cariada (p < 0.001). A absorbância média dos grupos de CrpL [0.684 (±0.027)] e BJcuL [0.789 (±0.046)] foi similar aos controles em cemento cariado, não apresentando diferença significativa.Conclui-se que a CrpL e BJcuL pode inibir a atividade proteolítica presente em amostras humanas de placa bacteriana supragengival e cárie de dentina / Abstract: Lectins are polyvalent carbohydrate-binding proteins which agglutinate red blood cells. Identified in plants and animals, have also been found in snake venoms. The purpose of this study was to measure inhibition of proteolytic activity in supragingival plaque, coronal and root dentinal caries samples by CrpL e BJcuL. A standardized excavator ( 1 mg wet weight) was used to collect the samples (30 supragingival plaque; 30 - coronal caries; 30 - root caries) which were placed in 2 mL of a buffering solution (pH 7,2). The samples were vortexed for 30 seconds and 250 µL were added to: A) 250 µL CrpL 0,12% + 250 µL BANA 1.67 mmol/L + 250 µL distilled water; B)250 µL BJcuL 0,12% + 250 µL BANA 1.67 mmol/L + 250 µL distilled water; C) 250 µL CrpL 0,12% + 250 µL BANA 1.67 mmol/L + 250 µL N-acetil-D-galactosamine 25 mM; D) 250 µL BJcuL 0,12% + 250 µL BANA 1.67 mmol/L + 250 µL lactose 0.8 mM. The mixtures were incubated for 18 hours at 37°C and color was developed by the addition of 50 µL of 0,1% Fast Garnet. The absorbance at 510 nm was recorded spectrophotometrically. Independent t-tests were employed to determine differences between mean optical densities of the experimental groups and controls.The mean absorbance of CrpL group [0.375 (±0.028)] and BJcuL group [0.442 (±0.057)] was significantly different than 0.860 (±0.056) and 0.753 (±0.058) control groups (p < 0.001) in supragingival plaque samples. The mean absorbance of CrpL group [0.471 (±0.044)] and BJcuL group [0.563 (±0.035)] was significantly different than 0.860 (±0.056) and 0.753 (±0.058) control group (p < 0.001) in coronal caries. The mean optical density of CrpL group [0.684 (±0.027)] and BJcuL [0.789 (±0.046)] wasn't significantly different than 0.742 (±0.030) and 0.753 (±0.058) control groups. It is concluded that CrpL and BJcuL can inhibit proteolytic activity present in human supragingival plaque and coronal caries / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

MONTEIRO JUNIOR, José Edvar. Detecção de inibidores de proteinases cisteínicas em raízes de feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] e avaliação de sua atividade sobre o nematóide das galhas Meloidogyne javanica. 2007. xx, 107 f. : Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-30T13:05:54Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_jemonteirojunior.pdf: 3368722 bytes, checksum: 6db6741733e59f2f818b4ae00227e385 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-11T23:30:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_jemonteirojunior.pdf: 3368722 bytes, checksum: 6db6741733e59f2f818b4ae00227e385 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-11T23:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_jemonteirojunior.pdf: 3368722 bytes, checksum: 6db6741733e59f2f818b4ae00227e385 (MD5) Previous issue date: 2007 / Detection of cysteine proteinase inhibitors in cowpea[Vigna unguiculata(L.) Walpers] roots as well as the accumulation of inhibitors enriched fractions throughammonium sulfate precipitation followed by reversed-phase liquid chromatography were in this present work accomplished. Fractions containing higher levels of cysteine proteinase inhibitor activity were selected and subjected to evaluation of its ability of to suppress the mobility of second stage juveniles (J2) of the root-knot nematode Meloidogyne javanica, race 1. In addition, the nematicidal effect of these fractions was also tested. When the mobility parameter was analyzed the ammonium sulfate precipitated F 30/60 fraction, at a dose of 40 μg of proteins, it shown to be the most potent of all tested samples at 24 h after incubation. However, regarding to mortality the both picks, PIHPLC and PIIHPLC, obtained from the HPLC step were the more actives causing a percentage of killing nematodes of 95.0 % and 94.2 %, respectively when the most potent doses of these picks were compared. Moreover, FITC-coupled F 30/60 fraction was used in light-flu orescence microscopy experiments in order to answer the following basic questions: 1) the observed effects on mobility and mortality will be related to the binding of the proteins in the nematode? And 2) If yes, this interaction is performed with the gut or surface nematode, or yet in the both structures? F 30/60 fraction appears to be incorporated by juveniles and specifically bind to the region corresponding to the gut of nematodes at 6 h after incubation, while at 24 h after incubation the fluorescent complex appears to be widespread along the whole body of the nematode, as observed by light-fluorescence microscopy. These results, all together, suggest the possible use of the inhibitors present in cowpea roots as a potential biological tool in the control of the root-knot nematode, M. javanica. / A detecção de inibidores de proteinases cisteínicas em raízes de feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walpers] bem como o acúmulo de frações ricas nestes inibidores por meio de precipitação com sulfato de amônio seguida de cromatografia líquida de fase reversa foram realizados no presente trabalho. Frações contendo os maiores níveis de atividade de inibidores de proteinases cisteínicas foram selecionadas e sujeitas à avaliação de sua habilidade em suprimir a mobilidade de juvenis de segundo estágio (J2) do nematóide das galhas Meloidogyne javanica, raça 1. Em adição o efeito nematicida destas também foi avaliado. Quanto ao parâmetro mobilidade, a fração F 30/60 precipitada com sulfato de amônio, numa dose de 40 µg de proteínas, mostrou ser a mais potente de todas as amostras testadas, às 24 h de incubação. No entanto, com relação à mortalidade ambos os picos PIHPLC e PIIHPLC, obtidos dos passos de HPLC, foram os mais ativos causando um percentual de mortes de nematóides de 95,0 e 94,7 %, respectivamente, quando as doses mais potentes destes picos foram comparadas. Além disso, a fração F 30/60 acoplada a FITC foi usada em experimentos de microscopia de luz-fluorescência para responder as seguintes questões: 1) Estariam os efeitos observados sobre a mobilidade e mortalidade relacionados à ligação das proteínas no nematóide? e 2) Se sim, esta interação é realizada com a superfície do nematóide ou seu intestino, ou com ambas estruturas? A fração F 30/60 parece ser incorporada pelos juvenis e ligar-se especificamente à região correspondente ao intestino dos nematóides às 6 h após incubação, enquanto que às 24 h após incubação o complexo fluorescente parece se dispersar ao longo de todo o corpo do nematóide, como observado pela microscopia de luz-fluorescência. Estes resultados, somados, sugerem o possível uso dos inibidores presentes em raízes de feijão-de-corda como ferramentas biológicas potenciais no controle do nematóide das galhas, M. javanica.

Orientador: Saulo Santesso Garrido / Banca: Reinaldo Marchetto / Banca: Fillipe Vieira Rocha / Resumo: O presente trabalho descreve o estudo de um mimético da proteína CcdB, o CcdBSG-2, para verificar a possibilidade de formação de um complexo metálico com o lantanídeo Térbio (III) e com o íon metálico Cobre (II), bem como avaliar o potencial dos complexos em inibir a atividade das enzimas bacterianas DNA-girase e Topoisomerase IV. Este peptídeo foi sintetizado pela metodologia de síntese em fase sólida (SPFS), purificado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e identificado por espectrometria de massas (LC/ESI-MS). Posteriormente o peptídeo foi complexado com 3 equivalentes molares de Cu(II) e Tb(III) e acompanhou-se as alterações nos espectros de absorção e emissão de fluorescência do peptídeo e espectroscopia de luminescência após a adição dos metais. Estes mesmos estudos espectroscópicos foram realizados em função do tempo para verificar o intervalo necessário para a formação de cada complexo metal-peptídeo. Foram realizados também estudos de caracterização estrutural por espectroscopia de dicroísmo circular, avaliando o peptídeo na presença e ausência dos metais. Para avaliar o potencial de inibição dos peptídeos, utilizou-se ensaios de eletroforese em gel de agarose frente as enzimas DNA girase e Topoisomerase IV e ensaios de crescimento bacteriano em meio líquido frente as bactérias Escherichia coli enterohemorrágica e Staphylococcus aureus. Ambos os testes para avaliar o potencial de inibição mostraram que os metalopeptídeos Tb(III)-CcdBSG-2 e Cu(II)-CcdBS... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work describes the study of a mimetic of the protein CcdB, the CcdBSG-2, to verify the possibility of formation of a metallic complex with the lanthanide Terbium(III) and with the metallic ion Copper (II), as well as to evaluate the potential of the complexes in inhibiting the activity of bacterial enzymes DNA-gyrase and Topoisomerase IV. This peptide was synthesized by the methodology of solid phase peptide synthesis (SPPS), purified by high performance liquid chromatography (HPLC) and identified by mass spectrometry (LC / ESI-MS). Later the peptide was complexed with 3 molar equivalents of Cu (II) and Tb (III), followed by changes in the spectra of absorption and emission of fluorescence of the peptide and luminescence spectroscopy after the addition of the metals. These same spectroscopic studies were performed as a function of time to verify the interval required for the formation of each metal-peptide complex. Structural characterization studies were also performed by circular dichroism spectroscopy, evaluating the peptide in the presence and absence of metals. To evaluate the inhibition potential, electrophoresis and bacterial growth assays were used in liquid medium against the peptides produced. Both tests to assess the inhibition potential showed that theTb (III) -CcdBSG-2 and Cu (II) -CcdBSG-2 metallopeptides exhibit about three times greater activity than the CcdBSG-2 peptide in the absence of the metal. These important results indicate that the increas... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A Protease do Vírus da Imunodeficiência Humana Tipo 1 (HIV-1 PR, EC 3.4.23.16) é um alvo macromolecular de grande importância no desenvolvimento de fármacos na terapia da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). As maiores indústrias farmacêuticas do mundo concentram inúmeros esforços em estudos acerca desta proteína, que desde a introdução do saquinavir (Invirase&#174) na terapêutica em 1995, tem se mantido como um alvo fundamental para a descoberta de novos fármacos anti-HIV. A protease do vírus HIV-1 possui uma história rica de enorme sucesso no processo de descoberta e desenvolvimento de fármacos. A Química Medicinal moderna, de forte caráter multidisciplinar, fornece um arsenal de alternativas e estratégias racionais úteis no processo de planejamento de novos fármacos. Uma das tecnologias muito empregadas com sucesso é o estudo das relações quantitativas entre a estrutura e atividade (QSAR) para conjuntos de dados padrões. Os estudos de QSAR visam identificar e quantificar no complexo campo de modelagem as relações entre a estrutura e atividade de uma série de moléculas. Na presente dissertação de mestrado, foram realizados estudos de QSAR bi- (2D) e tridimensionais (3D) empregando, respectivamente, as técnicas holograma QSAR (HQSAR) e a análise comparativa dos campos moleculares (CoMFA), visando à geração de modelos preditivos para um conjunto de inibidores da protease do HIV-1. Os modelos gerados, associados às informações obtidas pelos mapas de contribuição 2D e de contorno 3D, são guias químico-medicinais úteis no planejamento de novos inibidores mais potentes e seletivos da protease do HIV-1. / The Human Immunodeficiency Virus Type 1 Protease (HIV-1 PR, EC 3.4.23.16) is a macromolecular target of great importance for the therapy of the Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). Major pharmaceutical companies around the world concentrate several efforts on studies concerning this enzyme, which since saquinavir (Invirase&#174) reached the market in 1995, has maintained its status as a fundamental target for anti-HIV drug discovery. HIV-1 protease has a rich history of enormous success in the drug discovery and development process. The strong multidisciplinary character of modern Medicinal Chemistry supplies an arsenal of useful rational strategies for the design of new drugs. One such technology is quantitative structure-activity relationships (QSAR), which has been successfully applied in a number of settings. QSAR studies aim to identify and quantify the relations between structure and activity of series of bioactive molecules organized within standard data sets. In the present master\'s dissertation, 2D and 3D QSAR studies were performed employing the hologram QSAR (HQSAR) and comparative molecular field analysis (CoMFA) techniques, respectively, in order to generate predictive models for a large set of HIV-1 PR inhibitors. The final models along with the information obtained from the 2D contribution and 3D contour maps should be useful in the design of new inhibitors with increased potency and selective within the chemical diversity of the data set.

Orientador: André Sampaio Pupo / Banca: Fernando Maurício Francis Abdalla / Banca: Carlos Allan Cândido Dias Júnior / Banca: Maria de Fátima Magalhães Lázari / Banca: Flávia Heberler-Barbosa Trovão / Resumo: As catecolaminas endógenas adrenalina e noradrenalina controlam importantes funções fisiológicas através da ativação de 1A-ARs, que são receptores com 7 domínios transmembrana os quais ativam proteínas G. Muitos agonistas de 1-ARs são utilizados na terapêutica, principalmente por conta de seu efeito vasoconstritor, porém, a taquifilaxia observada com a oximetazolina, um agonista de 1-ARs da classe das imidazolinas, é um efeito adverso importante e pode ser observado principalmente com a utilização de descongestionantes nasais por períodos de tempo prolongado. No presente estudo, investigamos a participação de PKC e GRK2 nos processos de fosforilação, dessensibilização e internalização de 1A-ARs induzidos pelos agonistas noradrenalina e oximetazolina. Segundo os resultados obtidos, a oximetazolina, mas não a fenilefrina, induziu taquifilaxia nas contrações de artéria caudal de rato. Além disso, 1A-ARs ativados pela oximetazolina são fosforilados principalmente pela GRK2, seguida de rápida dessensibilização e internalização. Já 1A-ARs ativados pela noradrenalina são fosforilados principalmente pela PKC, sem dessensibilização nem rápida internalização. Esses resultados em conjunto demonstram que a oximetazolina e a noradrenalina regulam os 1A-ARs através de diferentes mecanismos, envolvendo diferentes quinases / Abstract: The endogenous cathecolamines epinephrine and norepinephrine control important physiological functions through activation of 1A-ARs, which are 7-transmembrane receptors that activate G proteins. Several 1-ARs agonists are therapeutically useful in reason of its vasoconstrictor effects; however, tachyphylaxis in the vasoconstrictor effects of nasal decongestant containing oxymetazoline, an imidazoline 1-ARs agonist, is an important adverse effect observed after prolonged treatment. On the present study, we investigated the roles of PKC and GRK2 on the 1A-AR phosphorylation, desensitization and internalization process after receptor activation by norepinephrine and oxymetazoline. The results show that oxymetazoline, but not phenylephrine, induce tachyphylaxis in contractions of rat tail artery. Moreover, 1A-ARs activated by oxymetazoline are phosphorylated predominantly by GRK2, followed by rapid desensitization and internalization whereas 1A-ARs activated by norepinephrine are phosphorylated predominantly by PKC and not followed by desensitization or rapid internalization. These results show that norepinephrine and oxymetazoline regulate 1A-ARs through different mechanisms, involving different protein kinases / Doutor

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Banca: Rodrigo Cardoso de Oliveira / Banca: Luiz Carlos da Silva Filho / Banca: Noeli Pereira Rocha / Banca: Carlos Alan Candido Doas Junior / Resumo: Apocinina é o mais empregado inibidor de NADPH oxidase, um complexo multienzimático capaz de catalisar a redução unieletrônica do oxigênio molecular ao radical ânion superóxido. Apesar de controvérsias sobre sua seletividade, a apocinina tem sido utilizada como um das mais promissoras drogas em diversos modelos experimentais de inflamação. Neste estudo nosso objetivo foi caracterizar as características antioxidantes, pró-oxidantes e antinociceptivas da apocinina e dos compostos estruturalmente relacionados vanilina e ácido vanílico. Descobrimos que estes compostos são relativamente fracos como antioxidantes. Por outro lado, a apocinina e a vanilina, mas não o ácido vanílico mostraram significativas características pró-oxidantes. No que diz respeito aos efitos antinociceptivos em ratos, a administração oral de 100 mg/Kg de apocinina, vanilina e ácido vanílico, uma hora antes dos testes, foi capaz de reduzir significativamente o edema da pata provocada por carragenina e a dor no teste de formalina (fase inflamatória) A apocinina foi também capaz de reduzir o efeito nociceptivo induzido por capsaicina, cinamaldeído, mentol e glutamato. Utilizando antagonistas específicos, descobrimos que a via serotonérgica, mas não a via mediada por óxido nítrico está envolvida no mecanismo de antinocicepção da apocinina. Concluímos que não há relação entre as propriedades antioxidantes, pró-oxidantes, inibição de NADPH oxidase e os efeitos antinociceptivos estudados. Assim, os efeitos farmacológicos obtidos para a apocinina é uma confirmação de que este composto fitoquímico é muito mais do que um inibidor de NADPH oxidase. Estudos adicionais deverão ser realizados, mas as propriedades antiinflamatórias e antinociceptivas obtidas neste trabalho e os efeitos já descritos na literatura é um indicativo que esta molécula simples e barata se tornará um real anti-inflamatório e/o analgésico / Abstract: Apocynin is the most employed inhibitor of NADPH oxidase, a multienzymatic complex capable of catalyzing the one-electron reduction of molecular oxygen to the superoxide anion. Despite controversies about its selectivity, apocynin has been used as one of the most promising drugs in several experimental models of inflammatory diseases. In this study our aim was to characterize the antioxidant, pro-oxidant and antinociceptive properties of apocynin and the structurally-related compounds vanillin and vanillic acid. We found that apocynin, vanillin and vanillic acid are poor antioxidants. Conversely, apocynin and vanillin, but not vanillic acid, showed significant pro-oxidant characteristics. Regarding antinociceptive effects in rats, the oral administration of 100 mg/Kg of apocynin, vanillin and vanillic, one hour before the tests, was able to reduce significantly the paw edema pain provoked by carrageenan and the pain in the formalin test (inflammatory phase). Apocynin was also able to reduce the nociceptive effect induced by capsaicin, cinnamaldehyde, menthol and glutamate. By using specific antagonists, we found that serotonergic, but not the nitric oxide pathway seems to be involved in the mechanism of antinociception of apocynin. In conclusion, there is no relationship between antioxidant, pro-oxidant, inhibition of NADPH oxidase and the antinociception effects observed in these studies. Hence, the pharmacological effects obtained for apocynin is a confirmation that this phytochemical is much more than an NADPH oxidase inhibitor. Additional studies must be done, but the anti-inflammatory and antinociceptive properties of apocynin obtained in this work and the effects described in the literature are indicative that this simple and inexpensive molecule will become a real anti-inflammatory and analgesic drugs / Doutor

A liga AA2024-T3 é uma liga de alumínio extensivamente empregada na indústria aeronáutica, cujo segundo elemento principal da liga é o cobre. A presença de partículas intermetálicas provoca baixa resistência à corrosão por pites. Com o intuito de prevenir a corrosão, vários tratamentos de superfície têm sido avaliados, entre os quais os filmes sol-gel têm grande destaque. O objetivo deste trabalho é a obtenção, desenvolvimento e caracterização de filmes de acetato de celulose (AC) combinado com tetraetilortosilicato (TEOS) para proteção contra a corrosão da liga de alumínio AA2024-T3 em NaCl 0,05 mol L-1. Além disso, foi investigado o efeito da quantidade relativa entre AC e TEOS sobre o comportamento eletroquímico da liga metálica revestida. Diferentes inibidores de corrosão forma incorporados na matriz AC e TEOS. As propriedades anticorrosivas da liga com os filmes foram estudadas usando espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE) durante sete dias de imersão no meio corrosivo. A composição química dos filmes foi determinada por espectroscopia de infravermelho (FT-IR), enquanto a morfologia foi examinada através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Verificou-se que revestimentos obtidos a partir de soluções contendo 70% (m/m) de TEOS e 30% (m/m) de AC e 1.10-3 mol L-1 nitrato de cério propiciaram melhor a resistência à corrosão da liga AA2024 para tempos prolongados de imersão. / The aluminum alloy 2024-T3 is extensively employed in the aerospace industry and copper is the second alloying element. The presence of intermetallic particles causes low resistance to localized corrosion. In order to prevent the corrosion, several surface treatments have been evaluated, being sol-gel films the most prominent. The aim of this work is to obtain, develop and characterize films of cellulose acetate (AC) combined with tetraethylortosilicate (TEOS) for corrosion protection of aluminum alloy 2024-T3 in NaCl 0.05 mol L-1 solution. In addition, the effect of the AC and TEOS ratio on the electrochemical behavior of the coated metal surface was investigated. Different corrosion inhibitors were incorporated into the sol-gel solution. The anticorrosive properties of the alloy with the films were studied using electrochemical impedance spectroscopy in different immersion times. The chemical structure of the films was determined by infrared spectroscopy, while the morphological was examined by scanning electron microscopy. It was verified that the coatings obtained from solutions containing 70% (w/w) of TEOS, 30% (w/w) of cellulose acetate and 1.10-3 mol L-1 of cerium nitrate provided the best corrosion resistance to AA2024-T3 for prolonged immersion times.