Orientador: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Resumo: Embora o Programa Nacional de Imunização (PNI) do Brasil seja reconhecidamente bem-sucedido, pouco se conhece a cobertura vacinal em adultos no país. Essa lacuna do conhecimento é especialmente extensa no caso dos adultos não idosos. Com o objetivo de contribuir para o conhecimento de prevalência e preditores de adesão a vacinas estratégicas para adultos, realizamos um inquérito domiciliar em área urbana de Botucatu, Estado de São Paulo, Brasil. Ao todo, 758 indivíduos adultos foram incluídos. Aplicou-se questionário abordando uso de vacinas, bem como fatores demográficos, comorbidades e opiniões/atitudes relacionadas à imunização. Dados do questionário foram complementados e/ou corrigidos conforme informações coletadas pela Secretaria Municipal de Saúde de Botucatu. Escolhemos como desfechos de interesse a vacinação em dia contra difteria e tétano, hepatite B, influenza e sarampo/caxumba/rubéola (vacina tríplice viral). Foi realizado georreferenciamentoin loco dos domicílios. Análise de preditores envolveu modelos uni e multivariados de regressão logística. Em nossos achados, a adesão/atualização para imunização foi baixa para tétano (37%). Essa adesão esteve associada a sexo feminino e idade mais baixa. Quanto à vacina contra hepatite B, esta foi de 77% nos grupos para os quais está indicada, tendo o sexo feminino como único preditor independente. A vacinação contra influenza foi mais baixa em idosos (58%) que em outros grupos. Já para a tríplice viral, an... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Even though Brazilian governmental program for immunization is considered a particular example of success in public health, little is known about vaccine coverage among adults. This is especially true for those at younger age. Our study aimed at contributing to the knowledge of the prevalence and predictors of adherence to vaccination among adults. We conducted a population-based suvey in the city of Botucatu, São Paulo State, Brazil. A total of 758 subjects were enrolled. A questionnaire addressed issues concerning immunization, demographics, comorbidities and opinions/attitudes regarding vaccines. Georreferencing of households was performed. Results of the questionnaire were complemented and/or corrected according to information obtained in the Botucatu Municipal Health Department. We chose as outcomes of interest vaccination against tetanus/diphtheria, hepatitis B, influenza and mumps/measles/rubella (MMR). We found low prevalence of updated tetanus vaccination (37%), and it was independently associated with female gender and younger age. As for hepatitis B. coverage was 77% in the target group (adults under 50). Influenza coverage was lower among elderly (58%) as compared to other groups to whom this vaccine is recommended. MMR coverage was 61% among women at reproductive ave. with no identifiable predictors. Maps presenting Kernel estimates of outcome density showed varied patterns of hot spots for different vaccines, as well as between vaccinated and non-vaccinated subjects. However, we found no association of living close to Healthcare Basic Units to adherence to immunization. Our data suggest that males and elderly people should be focused by policies aiming at increasing adherence to immunization among adults. / Mestre

Toxinas termo-lábeis expressas por Escherichia coli enterotoxigênica (LT-I, LT-IIa e LT-IIb) são adjuvantes sistêmicos e de mucosa. Essas proteínas apresentam reduzida identidade (<14%) em suas subunidades B e ligação a receptores distintos, o que pode resultar em propriedades biológicas diferenciais. O objetivo do trabalho foi avaliar a resposta imune induzida pela toxina LT-IIa e seu pentâmero B (LT-IIaB) administradas pelas vias transcutânea e intradérmica. Inicialmente as proteínas foram expressas em E. coli, purificadas e avaliadas quanto à funcionalidade in vitro. Numa segunda etapa, as propriedades imunomoduladoras de LT-IIa e LT-IIaB, imunogenicidade e atividade adjuvante, foram avaliadas em modelo murino. A resposta imune (humoral e celular) induzida contra ovalbumina (OVA), aplicada como antígeno, foi determinada. Os resultados demonstram que as atividades adjuvantes induzidas por LT-IIa e LT-IIaB variam de acordo com a via de inoculação e que as holotoxinas LT-I e LT-IIa induzem graus de inflamação e ativação de resposta imune distintos em camundongos. / Heat-labile toxins expressed by enterotoxigenic Escherichia coli (LT-I, LT-IIa and LT-IIb) are potent systemic and mucosal adjuvants. These proteins have low identity (<14%) in their B subunits and bind to different receptors, which may result in differential biological properties. The objective of this work was to evaluate the immune response induced by LT-IIa toxin and its pentameric B subunit (LT-IIaB) delivered by transcutaneous and intradermic routes. Initially the proteins of interest were expressed in recombinant E. coli strains, purified and tested for functionality in vitro. In a second moment, the immunomodulatory properties of LT-IIa and LT-IIaB, immunogenicity and adjuvant activity, were evaluated in mouse model. The humoral and cellular immune responses induced against ovalbumin (OVA) used as antigen were determined. The results show that the adjuvant activity of LT-IIa and its B pentamer depends on the route of inoculation and that LT-I and LT-IIa differ both on induction of inflammation and activation of immune responses in mice.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:04:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos, Silvana.pdf: 1374305 bytes, checksum: 77f10539cefd889f796d4266c623b502 (MD5) Previous issue date: 2005-12-22 / This is a descriptive study carried out in Higher Education Institutions (HEI) at the State of Goiás Andergraduating students from the last term/grade of courses in the health field took part in this study We aimed at characterizing the exposure to biohazards among andergraduating students from courses in the health area within the State of Goiás; identifying the vaccinal profile of the andergraduating students; characterizing HEI performance on orienting students towards vaccination against immune-preventable diseases of major importance to health professionals (HP) and verifying on students who vaccinated against Hepatitis B the procedure of anti-HBs exam and its outcome A sample test was carried out and with the support of the software Epi-info version 2004 we scored n=651 corresponding to 54% of the population with reliability interval of 95% The research ethic-legal aspects were observed Data was collected by questionnaires validated by three jurors Its application ocurred in a classroom setting Database was structured and processed in the program Epi-info version 2004 and data was presented in figures tables and analysed through descriptive statistics 777 (68,5%) graduating students enrolled on the last grade in 2005 participated in this study Aged between 20 and 55 years mean 34,7 years of age and 83,6% between 20 and 30 years of age Females are predominant with 73,8% 25,4% of graduating students had already been exposed to biological material 64,2% were exposed to sharp instruments together with contact with bloody skin and/or body fluids Among those who were involved in accidents only 35,2% reported them Students showed greater adherence to anti-hepatitis B vaccine referied by 84,9% and only 34,0% took the anti-Hbs tests 73,0% of them called themselves respondents and 10,0% of them did not know about it There was also 46,8% adherence to vaccine against diphtheria and tetanus and 25,8% of adherence to anti-yellow-fever vaccine 92,0% of students affirmed having been oriented about immunization 94,8% recognize anti-hepatitis B as recommendable vaccine to HP 77,3% for anti-diphtheria and tetanus and 48,3 % of accounts suggest anti-yellow-fever vaccine Data sources for the graduating students about recommended vaccine to HP were curricular discipline with 32,3% followed by the college direction with 13,6% of accounts Although HEI in the State of Goiás have been addressing this issue they do so in a fragmented and little consistent way We consider it critical for HEI to set urgently a policy of vaccine establishment before clinical practice as well as to reflect about prevention, and control of infection aiming at interdisciplinarity and above all the quality of teaching which will be reflected on the health professionals profile / Estudo descritivo realizado em Instituições de Ensino Superior (IES) do Estado de Goiás Fizeram parte do estudo graduandos do último ano/semestre dos cursos da área de saúde Objetivou caracterizar a exposição a material biológico entre os graduandos de cursos da área de saúde no Estado de Goiás; Identificar o perfil vacinal destes graduandos; caracterizar a atuação das IES na orientação do graduando quanto à vacinação às doenças imunopreveníveis de importância para os profissionais da área de saúde (PAS) e verificar nos graduandos vacinados contra hepatite B a realização e a resposta do exame anti-Hbs Realizamos o teste piloto e com auxílio do software Epi-info versão 2004 calculamos um n=651, o que corresponde a 54,0 % da população com intervalo de confiabilidade de 95% Foram observados os aspectos ético-legais da pesquisa Os dados foram obtidos por meio de questionário que foi validado por três juízes A aplicação do instrumento foi em sala de aula O banco de dados foi estruturado e processado no programa Epi-info versão 2004 e os dados apresentados em figuras e tabelas e analisados por meio de estatística descritiva Participaram do estudo 777 (68,5%) dos graduandos matriculados no último ano em 2005 Idade entre 20 e 55 anos média de 34,7 anos moda 23 anos e 83,6% entre 20 a 30 anos O sexo feminino é o predominante com 73,8% Já haviam sido expostos a material biológico 25,4% dos graduandos quanto ao tipo de acidente 64,2% afirmaram terem se acidentado tanto com perfurocortantes quanto com exposição de pele e mucosas Dentre os que se envolveram em acidentes somente 35,2% os notificaram Os graduandos apresentaram maior adesão às vacinas anti-hepatite B que foi referida por 84,9% e apenas 34,0% realizaram o teste anti-HBs; destes 73,0% referiram ser respondedores e 10,0% não sabiam Houve também adesão às vacinas anti-difteria e tétano por 46,8% e anti-amarílica por 25,8% dos graduandos Afirmaram terem sido orientados sobre imunização 92,0% dos estudantes Reconhecem como vacinas recomendadas aos PAS: a anti- hepatite B em 94,8% a anti-difteria e tétano em 77,3% e anti-amarílica em 48,3% das citações As fontes de informação aos graduandos sobre as vacinas recomendadas aos PAS foram: disciplina curricular com 32,3% seguida pela direção da faculdade com 13,6% das citações Embora as IES no Estado de Goiás estejam abordando esta temática a fazem de forma fragmentada e pouco consistente Consideramos imprescindível que as IES estabeleçam com urgência uma política de instituição das vacinas antecedendo a prática clínica e repensem o ensino sobre a prevenção e controle de infecção visando a interdisciplinaridade e principalmente a qualidade do ensino o que refletirá no perfil dos profissionais da área de saúde

Toxinas termo-lábeis expressas por Escherichia coli enterotoxigênica (LT-I, LT-IIa e LT-IIb) são adjuvantes sistêmicos e de mucosa. Essas proteínas apresentam reduzida identidade (<14%) em suas subunidades B e ligação a receptores distintos, o que pode resultar em propriedades biológicas diferenciais. O objetivo do trabalho foi avaliar a resposta imune induzida pela toxina LT-IIa e seu pentâmero B (LT-IIaB) administradas pelas vias transcutânea e intradérmica. Inicialmente as proteínas foram expressas em E. coli, purificadas e avaliadas quanto à funcionalidade in vitro. Numa segunda etapa, as propriedades imunomoduladoras de LT-IIa e LT-IIaB, imunogenicidade e atividade adjuvante, foram avaliadas em modelo murino. A resposta imune (humoral e celular) induzida contra ovalbumina (OVA), aplicada como antígeno, foi determinada. Os resultados demonstram que as atividades adjuvantes induzidas por LT-IIa e LT-IIaB variam de acordo com a via de inoculação e que as holotoxinas LT-I e LT-IIa induzem graus de inflamação e ativação de resposta imune distintos em camundongos. / Heat-labile toxins expressed by enterotoxigenic Escherichia coli (LT-I, LT-IIa and LT-IIb) are potent systemic and mucosal adjuvants. These proteins have low identity (<14%) in their B subunits and bind to different receptors, which may result in differential biological properties. The objective of this work was to evaluate the immune response induced by LT-IIa toxin and its pentameric B subunit (LT-IIaB) delivered by transcutaneous and intradermic routes. Initially the proteins of interest were expressed in recombinant E. coli strains, purified and tested for functionality in vitro. In a second moment, the immunomodulatory properties of LT-IIa and LT-IIaB, immunogenicity and adjuvant activity, were evaluated in mouse model. The humoral and cellular immune responses induced against ovalbumin (OVA) used as antigen were determined. The results show that the adjuvant activity of LT-IIa and its B pentamer depends on the route of inoculation and that LT-I and LT-IIa differ both on induction of inflammation and activation of immune responses in mice.

Alguns estudos têm proposto que os acidente ofídicos em crianças estão associados a maior gravidade e ao maior risco de desenvolvimento de complicações comparados aos acidentes em adultos. Este estudo retrospectivo descreve as características de acidentes causados por serpentes do gênero Bothrops admitidos no Hospital Vital Brazil/Instituto Butantan/SP (HVB/IB) e compara a gravidade, e necessidade de soroterapia antiveneno e o risco para o desenvolvimento de complicações entre crianças (menores de 13 anos) e adultos. Trata-se de uma coorte histórica que utilizou dados de prontuários do arquivo do HVB/IB de dezembro de 1999 a junho de 2003. Foram incluídos no estudo pacientes que trouxeram a serpente ou apresentavam manifestações clínicas ou laboratoriais compatíveis com envenenamento botrópico. Não foi observada diferença estatisticamente significante na freqüência da gravidade dos envenenamentos, no número de ampolas administradas e na freqüência de complicações entre os dois grupos estudados. O estudo sugere que os acidentes ofídicos causados por serpentes do gênero Bothrops apresentam gravidade semelhante na avaliação admissional e evolução com a mesma proporção de complicações em crianças quando comparados aos acidentes em adultos / Some studies propose that the level of severity of the accidents caused by snakes in children can be associated with a stronger envenoming and a higher risk of later complication if compared to the same accidents in adults. This retrospective study aim to describe the caracteristics of snakebites acidents of the genus Bothrops, and compare their severities, necessity of antivenom, and the risk of developing later complications between children (less than 13 years) and adults, all the accidents where admitted at Hospital Vital Brazil/Instituto Butantan/SP, Brazil (HVB). This retrospective cohort study was carried out by using HVB\'s records of snakebite victims, from December 1999 to June 2003. Patients included were those who brought the snake and/or have the clinical or laboratorial presence of abnormalities compatible with Bothrops envenoming. No statistic differences were found between the two groups of this study concerning the severity of envenoming, number of antivenom vials and the frequency of complications. This study suggests that snakebite accidents are similar between adults and children. Age is not supposed to be a predictor of complication in such accidents

Bacillus subtilis é uma bactéria gram positiva de solo, não patogênica, não colonizadora de tecidos, naturalmente transformável e formadora de esporos utilizada como modelo de estudo de bactérias gram-positivas. Essas características acarretam em vantagens para a produção de proteases de interesse industrial e para utilização como veículo de antígenos vacinais, porém a falta de vetores induzíveis torna sua utilização como ferramenta biológica pouco explorada. No presente trabalho descrevemos a construção de diferentes vetores capazes de expressar os antígenos subunidade B da toxina termo-lábil (LTB) e subunidade estrutural da fímbria CFA/I (CFAB) de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) e avaliamos seu potencial vacinal. Foi avaliada a imunogenicidade de linhagens capazes de expressar LTB sob o controle de diferentes promotores: PgsiB (induzido em condições de estresse), PlepA (promotor constitutivo) e Pspac (induzido pela adição de IPTG) e em diferentes locais da célula (ancorada à parede celular ou secretada para o meio externo). Avaliamos ainda a imunogenicidade de linhagens capazes de co-expressar LTB e a listeriolisina O (LLO) de Listeria monocytogenes. O antígeno CFAB foi produzido no citoplasma ou ancorado à parede celular de B. subtilis em condições de estresse e as linhagens bacterianas administradas sozinhas ou conjuntamente com a toxina termo-lábil (LT) como adjuvante de mucosa. Camundongos imunizados com células ou esporos de B. subtilis recombinantes desencadearam respostas de anticorpos sistêmicos e secretados específicos para os antígenos (LTB e CFAB), não alterados pela adição do adjuvante. A expressão de LLO causou a supressão da resposta de anticorpos específicos para o antígeno LTB. Os resultados obtidos demonstram a viabilidade do uso de B. subtilis como veículo vacinal. / Bacillus subtilis is a gram positive, generally regarded as safe and spore forming soil bacteria used as a model for genetic and phisiological studies. This safety status allow its use as host for production of industrial protases and its application as vaccine vehicles, however the lack of epissomal inducible expression systems disable the exploration of this organism as a biotechnologic tool. In this work we describe the construction of epissomal vectors able to express the B subunit of the heat-labile toxin (LTB) and the structural subunit of the CFA/I fimbrae (CFAB) from the enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). We evaluate strains able to express LTB under the control of three promoters: PgsiB (stress inducible), PlepA (constitutive) e Pspac (IPTG inducible) and allowing the expression of LTB secreted or anchored to the cell wall We also evaluate the immunogenicity of strains able to co-express LTB and the listeriolysin O (LLO) from Listeria monocytogenes. CFAB was expressed in the cytoplasm or anchored to the cell wall and administred alone or with the mucosal adjuvant LT. Mice immunized both with cells or spores elicited secreted and systemic specific antibodies responses, which were not altered by the addition of the adjuvant LT. LLO expression suppressed the antibodies responses against LTB. The data shows the ability of B. subtilis to be used as vaccine vehicle.

O Vírus Respiratório Sincicial Humano (HRSV) é um dos patógenos mais importantes do trato respiratório. Analisamos as interações das proteínas virais nucleoproteína (N), fosfoproteína (P) e matriz (M) em células HEK-293T. N interage com as proteínas celulares Hsp70, PRMT5 e WDR77; P com Hsp70 e Tropomiosina; e M com Nucleofosmina e Tropomiosina. Cada gene celular foi co-expresso em bactérias com um gene viral possibilitando a co-precipitação das proteínas. Analisamos a interação entre Hsp70 e N ou P, confirmando sua ocorrência em bactérias. Com um conjunto de proteínas mutantes, definimos que as interações são através dos amino terminais de N e P, ou do carboxi terminal de P, e do domínio amino terminal de Hsp70. Superexpressão de Hsp70 por transfecção provocou efeito de estímulo sobre a replicação de HRSV. Imunizações em camundongos com vacinas de DNA para N e P mostraram a indução de resposta celular e humoral. Ensaios de desafio resultaram em redução da carga viral após imunização com N, indicando potencial para sua aplicação em formulação vacinal. / Human respiratory syncytial virus (HRSV) is one of the most important pathogens of the respiratory tract. We analyzed the interactions of viral nucleoprotein (N), phosphoprotein (P) and matrix (M) in HEK-293T. N interacts with the cellular proteins Hsp70, PRMT5 and WDR77; P interacts with Hsp70 and Tropomyosin; and M with Nucleophosmin and Tropomyosin. Each cellular gene was co-expressed with a viral gene in bacteria allowing co-precipitation of proteins. Hsp70 co-expression with N or P proteins confirmed that these interactions also occur in bacteria. Using a set of mutants we found that the N and P amino terminus, P carboxy terminus, and Hsp70 amino terminal domain participate in the interactions. The overexpression of Hsp70 by transfection resulted in stimulation of HRSV replication. Mice immunization with N and P showed that DNA vaccines were capable of inducing humoral and cellular response. In challenge assays it was possible to detect significant virus titer reduction in animals immunized with N, indicating its potential for a vaccine formulation.

Streptococcus mutans é o principal agente etiológico da cárie dental humana, uma doença infecciosa para a qual não há vacina disponível. A influência dos sistemas de transporte ABC na virulência bacteriana suporta seu uso como alvos vacinais. Em S. mutans a proteína ligadora de fosfato (PstS) influencia a expressão de fatores de virulência. A proposta deste trabalho foi caracterizar uma estratégia vacinal de mucosa anti-cárie baseada na proteína PstS como antígeno alvo. Inicialmente, a forma recombinante da proteína foi obtida em E. coli. A caracterização biofísica revelou uma estrutura secundária estável, semelhante a outras proteínas ligadoras e capaz de interagir com seu ligante. Epítopos antigênicos conservados foram identificados na proteína recombinante pela reatividade com soro anti-S. mutans. A proteína rPstS foi imunogênica por via sublingual, combinada ou não à LTK4R e anticorpos rPstS-específicos interferiram na colonização oral in vivo por S. mutans. Os resultados indicam que a proteína rPstS pode ser explorada em estratégias vacinais contra a cárie. / Streptococcus mutans is the main etiological agent of human dental caries, an infectious disease for which there is no vaccine available. The influence of ABC transport systems in bacterial virulence supports its use as vaccine targets. In S. mutans the phosphate binding protein (PstS) influences the expression of virulence traits. The purpose of this work was characterizing an anti-caries mucosal vaccine based on the PstS protein as target antigen. First, a recombinant form of the protein was obtained in E. coli. The biophysical characterization showed a stable secondary structure, similar to other binding proteins and able to interact with its ligand. Conserved antigenic epitopes were identified in the recombinant protein by reactivity with anti- S. mutans serum. The rPstS protein was immunogenic by the sublingual route in combination or not with LTK4R and rPstS-specific antibodies interfered with S. mutans oral colonization in vivo. The results indicated that the recombinant PstS protein can be exploited in vaccine strategies against dental caries.

Embora faltem evidências diretas da relação causal entre a vacinação recente e o desenvolvimento da anemia hemolítica imunomediada (AHIM) em cães, pode ser identificada uma associação temporal entre elas. Constituem-se em objetivos deste trabalho avaliar: a presença de imunoglobulinas (IgG e IgM) e complemento (C3>) na superfície eritrocitária e o potencial do estímulo mitogênico de membranas eritrocitárias autólogas sobre os linfócitos periféricos de cães nos momentos pré-vacinal (imediatamente antes da vacinação com vacinas polivalente e antirrábica) e pós-vacinal (28 a 38 dias após a imunização). Vinte e um cães adultos e hígidos, machos e fêmeas, foram submetidos à anamnese, exame físico e avaliações laboratoriais nos dois momentos do estudo. O teste da antiglobulina direta (n=15) foi realizado com o reagente de Coombs polivalente, nas diluições de 1:2 a 1:8. A detecção de imunoglobulinas (IgG, IgM) e complemento (C3) na superfície de eritrócitos por citometria de fluxo (n=21) foi realizada utilizando anticorpos anti-IgG de cão produzido em ovelha cadeia pesada, anti-IgM produzido em cabra e anti-C3 de cão produzido em cabra, todos conjugados com fluoresceína de isotiocianato (FITC). As células mononucleares do sangue periférico foram isoladas por gradiende, marcadas com CFSE e estimuladas com Concanavalina A (ConA) e com membranas eritrocitárias autólogas em duas concentrações (ME1 e ME2). Foi utilizado o Índice de Proliferação (IP) como indicador da proliferação celular, obtido pela divisão das intensidades de fluorescência obtidas por citometria de fluxo das amostras basal e estimulada. As comparações das variáveis \"hemácias marcadas com anti-Ig/C3\" e \"IP de linfócitos\" foram realizadas utilizando-se o t-Student para amostras pareadas. As comparações dos IP de linfócitos frente aos diferentes antígenos (Con A, ME1 e ME2) foram realizadas por meio da ANOVA com medidas repetidas. Quando houve diferença significante entre os índices, foram realizadas comparações múltiplas (teste de Bonferroni). Foi considerado um nível de significância de 5%. Observou-se que os cães se encontravam em boas condições de saúde, nos dois momentos do estudo, com as variáveis hematológicas e bioquímicas mantidas próximas entre si e resultado do teste da antiglobulina direta negativo (n=21). A porcentagem de hemácias marcadas com IgG e IgM nos momentos pré-vacinal (1,06±0,49% e 1,42±1,59%) e pós-vacinal (0,83±0,56% e 1,35±1,71%) não foi alterada, com p=0,261 e p=0,699, respectivamente. A porcentagem de hemácias com C3 na superfície no momento pós-vacinação (0,40±0,38%) foi, em média, menor do que no momento pré-vacinação (0,71±0,33%), com p=0,019. Os índices de proliferação obtidos com a ConA, ME1 e ME2 no momento pré-vacinal (2,15±0,83; 1,03±0,07; 1,05±0,11) e pós- vacinal (2,13±0,58; 1,02±0,05; 1,02±0,05) não se modificaram, com p=0,935; p=0,845 e p=0,222, respectivamente. Em ambos os momentos, os índices de proliferação celular observados com o uso de ConA foram, em media, maiores do que os índices com ME1 e ME2 (p<0,001). A baixa porcentagem de hemácias com IgG, IgM ou C3 na superfície e a ausência de resposta proliferativa dos linfócitos quando estimulados com membranas eritrocitárias, indicam que, neste experimento, não houve nenhuma evidência de que o estímulo vacinal pudesse estar relacionado ao desenvolvimento da AHIM. / Despite the lack of evidence regarding a causal link between recent vaccination and development of immune mediated hemolytic anemia (IMHA) in dogs, a temporal association between them has been identified in some cases. The aim of this study was to evaluate: the presence of immunoglobulins (IgG and IgM) and complement (C3) on the surface of red blood cells and the potential for mitogenic stimulation of peripheral lymphocytes against autologous red blood cell membranes on dogs at pre-vaccination (immediately prior to vaccination with polyvalent and anti-rabies vaccines) and post-vaccination (after 28 and 38 days after vaccination). Twenty-one healthy adult dogs (both males and females) were subjected to physical examination and complementary laboratory exams in the aforementioned two instances of the study (i.e. pre-vaccination and post-vaccination). Direct antiglobulin test (n=15) was performed using the polyvalent Coombs reagent in 1:2 to 1:8 dilutions. Immunoglobulins (IgG, IgM) detection and identification of complement (C3) on the surface of red blood cells were done by flow cytometry (n=21) using antibodies anti-dog IgG heavy chain produced in sheep, anti-dog IgM produced in goat and anti-dog C3 produced in goat - all in conjunction with fluorescein isothiocyanate (FITC). The peripheral blood mononuclear cells were isolated by gradient, labeled with CFSE and stimulated with concanavalin A (Con A) and autologous erythrocyte membranes in two concentrations (EM1 and EM2). The Proliferation Index (PI), used as an indicator of cell proliferation, was obtained by dividing the fluorescence intensities of basal and stimulated samples, both obtained by flow cytometry. A comparison was made between the variables \"labeled red blood cells with anti-Ig/C3\" and \"PI lymphocyte\" using the paired Student\'s t-test. Comparisons of PI lymphocytes to different antigens (Con A, EM1 and EM2) were performed using ANOVA of repeated measures. Whenever significant differences between the indices were found, multiple comparisons (Bonferroni test) were then performed. A 5% significance level was considered. At the two instances of the study, dogs were presented in good health status with both hematological and biochemical variables kept close together and negative results for direct antiglobulin test (n=21). The percentage of red blood cells labeled with IgG and IgM in the pre-vaccination (1.06±0.49% and 1.42±1.59%) and post-vaccination (0.83±0.56% and 1.35±1.71%) were kept similar, with p=0.261 and p=0.699, respectively. The percentage of erythrocytes with C3 on the surface at the time post-vaccination (0.40±0.38%) was on average lower than in the pre-vaccination (0.71±0.33%), p=0.019. The proliferation index obtained with ConA, ME1 and ME2 in the pre-vaccination (2.15±0.83, 1.03±0.07, 1.05±0.11) and post-vaccination (2.13±0.58, 1.02±0.05, 1.02±0.05) did not differ significantly, with p=0.935, p=0.845 and p=0.222, respectively. In both instances, rates of cell proliferation observed with the use of ConA were, on average, higher than the rates with ME1 and ME2 (p<0.001). The low percentage of erythrocytes with IgG, IgM or C3 on the surface and the absence of lymphocyte proliferative response when stimulated with erythrocyte membranes, indicate that, at least in this experiment, there is no evidence of any association between vaccine stimulation and development of IMHA in dogs.

OBJETIVO: Avaliar a cobertura vacinal aos 12 e aos 24 meses de vida, em Curitiba e seus distritos sanitários (DS) e investigar a associação entre esquema vacinal incompleto e fatores individuais da criança e da mãe e contextuais, especialmente os relacionados aos serviços públicos de saúde. METODOLOGIA: Trata-se de estudo transversal com crianças residentes em Curitiba e nascidas em 2002. As fontes de dados foram: i) o Sistema de Informação de Nascidos Vivos (SINASC); ii) o prontuário eletrônico municipal; iii) inquérito domiciliar para casos com registro incompleto. Foi utilizado o software RECLINK II para a linkage dos bancos de dados. A investigação de fatores associados aos desfechos de interesse foi efetuada por meio da análise bivariada e análise de regressão logística multinível (software MLwiN 2.0). RESULTADOS: A amostra abrangeu 2637 crianças, a cobertura vacinal no município foi de 95,3 por cento aos 12 meses e 90,3 por cento aos 24 meses, observando-se pequena variação nas coberturas entre distritos; 0,2 por cento a 0,9 por cento das vacinas foram aplicadas em datas ou intervalos inferiores aos preconizados e 2,8 por cento a 32,2 por cento após o período recomendado; 98 por cento das crianças têm cadastro no prontuário eletrônico do município, 97,7 por cento recebeu ao menos uma dose de vacina na rede municipal de saúde e 73,3 por cento realizou consulta médica nestas unidades; as crianças com três ou mais consultas em unidade básicas/ESF apresentam melhor situação vacinal. Entre as crianças com acompanhamento nas unidades de saúde, estimou-se entre 4 por cento e 7,3 por cento as oportunidades perdidas de imunização. Na análise multivariada mostraramse independentemente associadas ao esquema vacinal incompleto aos 12 meses: ter mãe adolescente (OR=2,8); a ordem de nascimento (ser o 2º ou 3º filho com OR=7,3 e ser 4º filho em diante com OR=22,2) já considerando a interação com outras variáveis; número inadequado de consultas de pré-natal (OR=2,6); ter efetuado menos de 3 de consultas médicas em unidade básica/ESF no ano (OR=2,2). Para esquema vacinal incompleto aos 24 meses mostraram-se independentemente associadas: a ordem de nascimento (ser 2º ou 3º filho com OR=2,5 e ser o 4º filho em diante com OR=5,3); número inadequado de consultas de pré-natal (OR=1,8); número inferior a 3 de consultas médicas no ano em unidade básica/ESF (OR=1,5) e ter cadastro provisório ou não ter cadastro na US básica (OR=1,7) e inversamente associado a idade materna de 35 anos e mais (OR=0,6). Embora a análise bivariada aponte melhor situação vacinal entre crianças atendidas em US que adotada plenamente a Estratégia de Saúde da Família e em distritos sanitários de estrato socioeconômico mais pobre a análise multivariada não revelou associação. CONCLUSÕES: Os resultados apontam a importância de políticas públicas na promoção da equidade em saúde e permitem a identificação de fatores associados que devem ser considerados no aperfeiçoamento de programas de imunização. / OBJECTIVE: Evaluate the immunization coverage at 12 and 24 months of life, in Curitiba and their health districts, as well as to analyse the influence of child and maternal individual and contextual factors, particulary those related to public health services and their influence on vaccination status. METHODOLOGY: A cross sectional study was led with children that are resident in Curitiba, born in 2002. The data sources were: i) the liveborn information system (SINASC); ii) the municipal electronic medical record; iii) home interviewing for cases with incomplete records. It was used the software RECLINK II to make the databases linkage. It was performed bivariate analysis and multilevel logistic regression analysis (MLwiN 2.0 software) to investigate factors associated to interest outcomes. RESULTS: For a final sample of 2637 children the immunization coverage in Curitiba was 95.3 per cent at 12 months and 90.3 per cent at 24 months, with a low variation between the sanitary districts; The adequacy evaluation of the doses shows 0.2 per cent to 0.9 per cent of vaccine applied in dates or ranges lower than the recommended and 2.8 per cent to 32.2 per cent later than the recommended. Most children (98.8 per cent ) have municipal electronic medical record, 97.7 per cent have at least one dose of vaccine applied in the municipal health computerized network, 73.3 per cent had medical consultation in these health units, and children with three or more consultations in basic units / ESF have better vaccine status. Among children monitored by health units, has been estimated in 4 per cent and 7.3 per cent the missed opportunities for immunization. The multivariate analysis shows, independently associated to the incomplete vaccine status at 12 months: teenager mother (OR= 2.8); birth order (OR= 7.3 for 2nd and 3rd child and OR=22.2 after the 4th child) already considering interactions with other variables; inadequate number of prenatal consultation (OR=2.6); the number of medical consultations in basic units / ESF lower than 3 per year (OR=2.2). For the incomplete vaccine status at 24 months arises as independently associated: the birth order (OR=2.5 for the 2nd and 3rd child; OR=5.3 after the 4th child); inadequate number of prenatal consultation (OR=1,8); the number of medical consultations in basic health units / ESF lower than 3 per year (OR=1.5) and have temporary register or none register when compared with definitive register (OR=1.7) and inversely associated to mothers aged 35 years and more (OR=0,6). Although the bivariate analysis point better vaccination status among children linked to a health unit where the Family Health Strategy is completely adopted and in health districts of worst socioeconomic stratum, multivariate analysis revealed no association. CONCLUSIONS: The study results shows the relevance of public policies in promoting health equity and identify associated factors that must be considered in the improvement of immunization programs