Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-18Bitstream added on 2014-06-13T19:42:29Z : No. of bitstreams: 1 akinaga_j_dr_botib_parcial.pdf: 68136 bytes, checksum: 63ef0cbc915c8aa41f833dd0c4a86b5b (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:50Z: akinaga_j_dr_botib_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:36Z : No. of bitstreams: 1 000714063.pdf: 501451 bytes, checksum: 105a66a9ea99849e798ced498018eeef (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As catecolaminas endógenas adrenalina e noradrenalina controlam importantes funções fisiológicas através da ativação de 1A-ARs, que são receptores com 7 domínios transmembrana os quais ativam proteínas G. Muitos agonistas de 1-ARs são utilizados na terapêutica, principalmente por conta de seu efeito vasoconstritor, porém, a taquifilaxia observada com a oximetazolina, um agonista de 1-ARs da classe das imidazolinas, é um efeito adverso importante e pode ser observado principalmente com a utilização de descongestionantes nasais por períodos de tempo prolongado. No presente estudo, investigamos a participação de PKC e GRK2 nos processos de fosforilação, dessensibilização e internalização de 1A-ARs induzidos pelos agonistas noradrenalina e oximetazolina. Segundo os resultados obtidos, a oximetazolina, mas não a fenilefrina, induziu taquifilaxia nas contrações de artéria caudal de rato. Além disso, 1A-ARs ativados pela oximetazolina são fosforilados principalmente pela GRK2, seguida de rápida dessensibilização e internalização. Já 1A-ARs ativados pela noradrenalina são fosforilados principalmente pela PKC, sem dessensibilização nem rápida internalização. Esses resultados em conjunto demonstram que a oximetazolina e a noradrenalina regulam os 1A-ARs através de diferentes mecanismos, envolvendo diferentes quinases / The endogenous cathecolamines epinephrine and norepinephrine control important physiological functions through activation of 1A-ARs, which are 7-transmembrane receptors that activate G proteins. Several 1-ARs agonists are therapeutically useful in reason of its vasoconstrictor effects; however, tachyphylaxis in the vasoconstrictor effects of nasal decongestant containing oxymetazoline, an imidazoline 1-ARs agonist, is an important adverse effect observed after prolonged treatment. On the present study, we investigated the roles of PKC and GRK2 on the 1A-AR phosphorylation, desensitization and internalization process after receptor activation by norepinephrine and oxymetazoline. The results show that oxymetazoline, but not phenylephrine, induce tachyphylaxis in contractions of rat tail artery. Moreover, 1A-ARs activated by oxymetazoline are phosphorylated predominantly by GRK2, followed by rapid desensitization and internalization whereas 1A-ARs activated by norepinephrine are phosphorylated predominantly by PKC and not followed by desensitization or rapid internalization. These results show that norepinephrine and oxymetazoline regulate 1A-ARs through different mechanisms, involving different protein kinases

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-31Bitstream added on 2014-06-13T19:44:10Z : No. of bitstreams: 1 000757746.pdf: 1927597 bytes, checksum: 54d5961ec9abfb730ff68a427c6b569c (MD5) / Desordens orais potencialmente malignas como a Queilite Actínica (QA) e neoplasias malignas como os Carcinomas Epidermoides (CE) apresentam comportamentos biológicos variáveis em função de diversos fatores teciduais que levam a desregulação do metabolismo celular. As Metaloproteinases de Matriz (MMP), endopeptidases responsáveis pela degradação dos componentes da matriz extracelular, podem estar relacionadas com o comportamento biológico dos carcinomas. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão imuno-histoquímica da MMP-2 e da MMP-9 e dos Inibidores Teciduais de Metaloproteinases (TIMP) 1 e 2 na QA e nos CE de lábio e de língua e relacionar os resultados com as características histopatológicas das lesões com uma possível relação entre a QA e o CE de lábio. Para tanto, neste estudo foram analisados 35 casos de QA em lábio inferior, 32 casos de CE primário em lábio inferior e 34 casos de CE primário em língua, todos com diagnóstico clínico e histopatológico, do Ambulatório da Disciplina de Propedêutica Estomatológica e da Disciplina de Patologia Bucal, da Faculdade de Odontologia do Instituto de Ciência e Tecnologia, São José dos Campos – UNESP, respectivamente. O grupo controle contou com 16 casos, sem alteração clínica ou histopatológica no tecido epitelial e sem inflamação, provenientes de biópsias realizadas na mesma instituição para confirmação do diagnóstico de hiperplasia fibrosa ou mucocele.Os resultados foram submetidos à análise estatística. Pode-se observar que, em nossas amostras de QA e de CE de lábio e de língua, a MMP-2 e seu regulador, a TIMP-2, encontra-se subexpressa, assim como a MMP-9 e seu inibidor, a TIMP-1. A expressão de MMP-9 não mostrou diferença estatisticamente significativa entre os casos de QA e de CE, no entanto não se pode negar o claro aumento de expressão de MMP-9 nas lesões de QA quando estas são comparadas as lesões ao grupo controle. Portanto.... / Potentially malignant oral disorders as actinic cheilitis (QA) and neoplastic as squamous cell carcinomas (EC) of the lip and tongue, exhibit biological behavior that varies with several factors, such as genetic changes that lead to dysregulation of cellular metabolism. The aim of this study was to evaluate the expression of matrix metalloproteinases (MMPs) 2 and 9 and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP) 1 and 2, using the technique of immunohistochemistry. MMPs are responsible for endopeptidase degradation of the extracellular matrix. Was investigated in QA and CE lip and tongue, the presence and activity of these proteolytic enzymes and a possible relationship between that and the transition from QA to EC lip; besides trying to relate the results with pathologic features and compare the found between the groups. For both the study included 35 cases of QA in the lower lip, 32 CE primary lip and 34 CE of tongue with clinical and histopathological diagnosis of Ambulatory Discipline Propedeutics Stomatological and Oral Pathology, Faculty of Dentistry Institute Science and Technology, São José dos Campos - UNESP, respectively. The control group was consisted of 16 patients without clinical or histopathological changes in the epithelial tissue and without inflammation; this material came from biopsies performed to confirm the diagnosis of other pathologies, such as fibrous hyperplasia and mucocele. The data collected in the morphometric were analyzed and subjected to statistical analysis. The study concluded that both MMP-2 as their regulator TIMP-2 are low expression in our samples of Actinic cheilitis, lip squamous cell carcinoma and squamous cell carcinoma of tongue, and that MMP-9 its main inhibitor, TIMP-1 also are understated in all our samples and that although statistically not significant, the expression of MMP-9 was found in AK lesions when compared to the control group.....

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2014-11-10T11:57:25Z : No. of bitstreams: 1 000774001_20160318.pdf: 264096 bytes, checksum: 6e2970cff91cc77b54f37c6186d5d1c9 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-03-18T13:35:52Z: 000774001_20160318.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-18T13:36:33Z : No. of bitstreams: 1 000774001.pdf: 1875190 bytes, checksum: 4616b89c47bf26ee8db5092a2d60a256 (MD5) / Neste trabalho foi estudada a eficiência de inibidores voláteis de corrosão (VCI) aplicados na proteção contra a corrosão do aço CFF (chapa fina a frio). Para avaliar os inibidores foram determinadas as resistências de polarização e alguns parâmetros cinéticos empregando as técnicas de curvas de polarização cíclica (CPP), espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS) e Polarização linear (PL). Também foi investigada a influência do sobrepotencial catódico nas curvas de polarização e o efeito do pH próximo à superfície do eletrodo nos parâmetros cinéticos, por meio de medidas simultâneas dos valores de pH empregando um eletrodo de W/WOx. Os inibidores avaliados foram: etanolamina (ETA), ciclohexilamina (CHA), diciclohexilamina (DCHA), ácido caprílico (H-CAP), caprilato de sódio (Na-CAP), caprilato de etanolamina (ETA-CAP), caprilato de ciclohexilamina (CHA-CAP) e caprilato de diciclohexilamina (DCHA-CAP). Estes inibidores foram dissolvidos e estudados nas soluções: a) NaCl 0,1 mol L-1 e b) tampão borato (TB) + NaCl 0,1 mol L-1 (pH 6,7). Os resultados obtidos mostraram que os parâmetros das curvas de Tafel dependem do sobrepotencial catódico aplicado no início das curvas de polarização, pois alteram o valor do pH na superfície do eletrodo devido às reações de redução do oxigênio e da água, que produzem hidroxilas, além de remover o filme de óxidos. Observou-se que estes efeitos são minimizados nas medidas utilizando-se solução tampão. A eficiência dos inibidores não apresenta variação significativa entre as diferentes técnicas eletroquímicas. No entanto, as eficiências destes inibidores variam conforme o pH da solução de NaCl 0,1 mol L-1 ou TB + NaCl 0,1 mol L-1, mostrando que as aminas protonadas não foram eficientes, enquanto as aminas desprotonadas passivam a superfície do eletrodo devido ao aumento do pH da solução (> 11,7). Os caprilatos de aminas foram eficientes tanto... / In this work, the efficiency of volatile corrosion inhibitors (VCI), applied to the protection against corrosion of CFF steel, was studied. In order to evaluate the inhibitors, it was determined the polarization resistances and some kinetic parameters by using the following electrochemical techniques: cyclic polarization curves, electrochemical impedance spectroscopy (EIS), and linear polarization. In addition, it was investigated the influence of cathodic overpotential on the polarization curves and the effect of pH close to the electrode surface on the kinetic parameters. The latter was conducted by means of simultaneous measurements of the pH values employing a W/WOx electrode. The evaluated inhibitors were: ethanolamine (ETA), cyclohexylamine (CHA), dicyclohexylamine (DCHA), caprylic acid (H-CAP), sodium caprylate (Na-CAP), ethanolamine caprylate (ETA-CAP), cyclohexylamine caprylate (CHA-CAP), dicyclohexylamine caprylate (DCHA-CAP). These inhibitors were dissolved and studied in the following solutions: a) 0.1 mol L-1 NaCl and b) borate buffer (BB) + 0.1 NaCl mol L-1. The obtained results showed that the parameters of Tafel curves depend on the cathodic overpotential applied in the beginning of the polarization curves. These parameters alter the pH on the electrode surface due to the oxygen reduction and water reactions which produce hydroxyls ions besides removing the oxides film. It was noticed that these effects are minimized when a buffer solution is employed. The inhibitors efficiency does not show a significant variation with respect to the different used electrochemical techniques. However, the inhibitors efficiency varies as a function of the used solution pH (0.1 mol L-1 NaCl or BB + 0.1 NaCl mol L-1) showing that the protonated amines were not efficient while the unprotonated amines passivate the electrode surface owing to an increase in the solution pH (> 11.7). The amines caprylates were efficient on both NaCl and BB...

Objetivo: Avaliar os efeitos da tadalafila, um inibidor da fosfodiesterase tipo 5, nos valores teciduais renais de malondialdeído (produto da lipoperoxidação celular), nos níveis séricos de uréia e creatinina e na histologia renal em suínos submetidos à isquemia-reperfusão renal em rim único. Material e métodos: Doze suínos Large-White foram submetidos à uninefrectomia seguida por isquemia-reperfusão renal contralateral e separados aleatoriamente em dois grupos com ou sem tratamento com tadalafila 20 mg via oral. Foram analisados os resultados de lipoeroxidação, histologia e função renal. Resultados: Os valores teciduais de Malondialdeído (MDA) foram significativamente superiores no grupo não tratado com tadalafila (p<0,05), quando comparados ao grupo de animais tratados com o fármaco. Houve diferença estatística nos estudos histológicos, tendo ocorrido mais vacuolização e infiltrado polimorfonuclear intersticial no grupo não tratado com tadalafila. Não houve diferença significativa nas dosagens séricas de uréia e creatinina. Conclusão: Nosso estudo sugere, pela primeira vez na literatura, que a tadalafila tem um efeito protetor na isquemia e reperfusão renal em suínos, como evidenciado pelos resultados da lipoperoxidação e pelos estudos histológicos.

O aumento da incidência de cepas de Mycobacterium tuberculosis resistente a múltiplas drogas tornou urgente a necessidade de novos agentes terapêuticos para o tratamento da tuberculose. A via do ácido chiquímico é essencial para a sobrevivência deste organismo, o que torna suas enzimas interessantes alvos para o desenvolvimento de novos medicamentos. A enzima corismato sintase (MtCS) foi identificada no genoma de M. tuberculosis por homologia de seqüência. Esta enzima catalisa a síntese NADH- e FMN-dependente de ácido corísmico, precursor de aminoácidos aromáticos, naftoquinonas, menaquinonas e micobactinas. Este trabalho descreve a clonagem, super-expressão e purificação até a homogeneidade da MtCS recombinante. As medidas das atividades das reações de corismato sintase e de NADH:FMN oxidoredutase comprovaram a bifuncionalidade da MtCS. A atividade de flavina redutase foi caracterizada, mostrando a existência de um complexo estável entre FMNOX e MtCS. Efeitos isotópicos primários de deutério e de solvente foram realizados, e sugerem etapas distintas para a transferência do próton e para a transferência do hidreto, com o último contribuindo mais fortemente para a etapa limitante da reação. Os resultados descritos aqui auxiliarão no desenho racional de novos agentes contra tuberculose. / The emergence of multi-drug resistance Mycobacterium tuberculosis has created an urgent need for new agents to treat tuberculosis. The enzymes of shikimate pathway are attractive targets to the development of these agents, since experimental evidence that this pathway is essential for M. tuberculosis has been reported. Chorismate synthase (MtCS) has been identified by sequence homology in the genome of M. tuberculosis. This enzyme catalyzes the NADH- and FMN-dependent synthesis of chorismate, a precursor of aromatic amino acids, naphthoquinones, menaquinones, and mycobactins. In the present work, we describe MtCS cloning, overexpression and purification of recombinant protein to homogeneity. The bifunctionality of MtCS was determined by measurements both chorismate synthase and NADH:FMN oxidoreductase activities. The flavin reductase activity was characterized, showing the existence of a stable complex between FMNox and MtCS. Primary deuterium and solvent kinetic isotope effects are described and suggest distinct steps for hydride and proton transfers, with the former being more rate-limiting. These results should pave the way for the rational design of antitubercular agents.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2016-04-08T20:09:40Z No. of bitstreams: 1 2015_LeandroAndradeMoreira_Parcial.pdf: 6982675 bytes, checksum: d56bd63a60664bf7c16d7128208787ee (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-09T13:18:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LeandroAndradeMoreira_Parcial.pdf: 6982675 bytes, checksum: d56bd63a60664bf7c16d7128208787ee (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-09T13:18:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LeandroAndradeMoreira_Parcial.pdf: 6982675 bytes, checksum: d56bd63a60664bf7c16d7128208787ee (MD5) / O alcaloide indólicobufotenina (5-hidróxi-N,N-dimetiltriptamina) tem sido encontrado em diversas fontes vegetais e animais e, recentemente, vem despertando grande atenção desde a sua detecção em vários fluídos corporais humanos. Esse trabalho descreve um protocolo eficiente para o isolamento da bufotenina de sementes de espécies de Anadenanthera (A. peregrina eA. colubrina), árvores amplamente distribuídas no cerrado brasileiro, e descreve o uso deste alcaloide como matéria-prima apropriada para síntese de vários derivados indólicos com potencial bioativo. A análise química da fração oleaginosa revelou que a composição principal de ácidos graxos insaturados (ácidos oleico e linoleico) sugere elevado valor nutricional das sementes de Anadenanthera. A conversão da bufotenina nos derivados triptamínicosiodeto de 5-hidróxi-N,N,N-trimetiltriptamina (bufotenidina), N,N-dimetiltriptamina (DMT) e 5-metóxi-N,N-dimetiltriptamina (MDMT) foirealizada através deuma rota sintética simplicada e inovadora. Além disso, foi relatado ummétodofácil paraaconversão da bufotenina em um complexo aminoborano inédito. A partir do complexo bufotenina aminoborano foram sintetizados oito dímeros e um derivado oxindólico inéditos. A caracterização estrutural da bufotenina, dos derivados triptamínicos, e oxindólico bem como dos dímeros bis-indólicos foi realizada por CG-MS, FT-IR, RMN 1H e 13C (uni-dimensionais) e HRESI/MS. A bufotenina, bufotenidina e quatros dímeros indólicos foram avaliados como inibidores da acetilcolinesterase (AChE) pelo método da enzima imobilizada em bioreatores capilares acoplados a espectroscopia de massa (AChE-ICERs/LC-MS). Por meio desse estudo, bufotenidina e três dos dímeros testados apresentaram elevada percentagem de inibição da AChE, com destaque para 1,3-bis-((5-metóxi-3-(2-(N,N-dimetil)etilamino)-1H-indol-1-il)propano que exibiu 92,23% de atividade inibitória, maior que a galantamina (90,81 %). / The indole alkaloid bufotenine (5-hydroxy-N,N-dimethyltryptamine) has been found in several vegetal and animal sources, and recently has been attracted great interest since its detection in humans body fluids. This work describes an effortless and efficient protocol for isolation of bufotenine from seeds of Anadenanthera species (A. peregrina andA.colubrina), widespread trees in the Brazilian cerrado, and proposes the utilization of this alkaloid as suitable starting material for the synthesis of various potential bioactive indole derivatives. The analyses of the oleaginous fractions revealed that the main fatty acid composition (oleic and linoleic) indicates the nutritional value of the Anadenanthera seeds. The conversion of the bufotenine tryptamine derivatives into 5-hydroxy-N,N,N-trimethyltryptamine iodide (bufotenidine), N-dimethyltryptamine N,N-dimethyltryptamine (DMT), 5-methoxy-N,N-dimethyltryptamine (MDMT) was accomplished through an innovative and short synthetic pathway. Furthermore, it was reported an effortless methodology for conversion of the bufotenine into the inherit amineborane complex. Starting from bufotenine-amineborane complex eight new dimers and an oxindole derivative were synthesized. The structural characterization of bufotenine, tryptamine and oxindole derivatives as well as the bis-indole dimers was accomplished by GC-MS, FT-IR, 1H and 13C NMR (uni and two-dimensional) and HRESI/MS. Thebufotenine, bufotenidine andfour dimerswere evaluatedas inhibitorsof the acetylcholinesterase (AChE)by immobilized capillary enzyme reactor-tandem mass spectroscopy (AChE-ICERs/LC-MS) method. Through this study the tested bufotenidine and three dimers showed great percentage of the AchE inhibition, highlighting for propane-1,3-diylbis(5-methoxy-1H-indole-1,3-diyl))bis(N,N-dimethylethan-1-amine which exhibited 92,23% of inhibitory activity, higher than the galantamine (90,81 %).

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Física, Programa de Pós-Graduação em Física, 2017. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-20T16:38:43Z No. of bitstreams: 1 2017_NádiaMeloBorges.pdf: 7243878 bytes, checksum: b3014e3c4560fc6a4a0b56d8c0e5eb0d (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-20T19:35:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_NádiaMeloBorges.pdf: 7243878 bytes, checksum: b3014e3c4560fc6a4a0b56d8c0e5eb0d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-20T19:35:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_NádiaMeloBorges.pdf: 7243878 bytes, checksum: b3014e3c4560fc6a4a0b56d8c0e5eb0d (MD5) Previous issue date: 2018-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / A doença de Alzheimer é a forma mais comum de demência irreversível entre as pessoas idosas. A diminuição dos níveis de acetilcolina no cérebro de pacientes com a doença está relacionada com a fisiopatologia da doença. A hipótese colinérgica é baseada no aumento do nível de acetilcolina pela inibição reversível da enzima acetilcolinesterase. O objetivo principal deste trabalho é abordar o desempenho de métodos de triagem virtuais com base no ligante e na estrutura da proteína afim de encontrar novos candidatos a inibidores da acetilcolinesterase. Além disso, um protocolo foi desenvolvido para identificar e propor novos inibidores promissores da AChE a partir do banco de dados ZINC com 10 milhões de compostos disponíveis comercialmente. Neste sentido, busca por similaridade 3D usando similaridade por forma e eletrostática além do método de docagem para uma série de compostos foram utilizados para recuperar inibidores da AChE a partir de uma coleção de banco de dados. Simulação por dinâmica molecular foi realizada para estudar os melhores compostos docados. Alguns resíduos importantes foram identificados como indispensáveis para formação do duplo modo de interação entre os compostos selecionados e o sítio de interação da enzima. Todos os resultados indicam o relevante uso do método de similaridade eletrostática combinado com estratégias de docagem para identificar novos possíveis inibidores, e sete novas estruturas foram selecionadas como potentes candidatos anticolinesterásicos. / Alzheimer's disease is the most common cause of irreversible dementia among the elderly. The decrease of acetylcholine levels in the brain of patients with the disease is related to the pathophysiology of the disease. The cholinergic hypothesis is based on increasing the level of acetylcholine by the reversible inhibition of the enzyme acetylcholinesterase. The main purpose of this study is to address the performance of virtual screening methods based on ligands and the protein structure of acetylcholinesterase in order to retrieve novel hAChE inhibitors. In addition, a protocol was developed to identify novel hit compounds and propose new promising AChE inhibitors from ZINC database with 10 million commercially available compounds. In this sense, 3D similarity searches using Rapid Overlay of Chemical Structures and similarity analysis through comparison of electrostatic overlay of docked hits were used to retrieve AChE inhibitors from collected databases. Molecular dynamics simulation of 100 ns was carried out to study the best docked compounds from similarity search. Some key residues are identified as crucial for the dual binding mode of inhibitor with interaction site. All results indicated the relevant use of EON and docking strategy for identifying novel hit compounds as promising potential anticholinesterase candidates, and seven new structures were selected as potential hAChE inhibitors.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-05Bitstream added on 2014-06-13T19:36:48Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_msf_me_jabo.pdf: 289970 bytes, checksum: 690be387700029389cd1e264f81060e0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O sistema imunológico de bezerros consolida-se com a ingestão do colostro, alimento rico em imunoglobulinas que são proteínas responsáveis por transferir imunidade aos bezerros. A eficiência dessa transferência é influenciada por uma série de fatores, dentre eles a integridade das imunoglobulinas a serem absorvidas. No colostro estão naturalmente presentes os inibidores de tripsina, capazes de preservar as imunoglobulinas da ação de enzimas proteolíticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade dos inibidores de tripsina da soja na transmissão da imunidade passiva de bezerras da raça Holandesa, por meio da análise das concentrações de imunoglobulina G (IgG) e proteína total (PT) e atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) sérica. Foram utilizadas 18 bezerras recém-nascidas alimentadas com colostro (T1), colostro adicionado de inibidor de tripsina purificado Sigma tipo I-S (50 mg) (T2) e provenientes da fração albumina da soja 1,08 g (T3). As amostras de sangue foram colhidas por venopunção da veia jugular com 1, 12, 24, 36 e 48 h após o nascimento, sendo a primeira colheita realizada antes do fornecimento do colostro. O colostro apresentou teor de gordura de 3,2 a 7,2 %, de proteína total de 14,10 a 19,52 %, representada por 7,84 a 9,44 % pelas proteínas do soro (PS). A atividade dos inibidores de tripsina variou de 0,766 a 0,945 mg de tripsina inibida.mL-1. Não houve influencia dos tratamentos (p>0,05%) para os parâmetros analisados, porém houve efeito (p<0,05%) do período de amostragem, com aumento nas concentrações de IgG, GGT e PT a partir da 0h com respectivos valores médios de 0,68 g.dL-1; 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1, com pico de absorção às 24 h: 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 e 7,54 g.dL-1, respectivamente, indicando transmissão adequada de imunidade passiva. A adição dos... / The calves’ immune system is consolidated by the ingestion of colostrum, which is rich in immunoglobulin, the proteins that are responsible for transfering the immunity to the calves. This transferring efficacy is influenced by a series of facts, among them the immunoglobulin’s integrity to be absorbed. Trypsin inhibitors are naturally present on the colostrum and they are able to preserve the immunoglobulin from the proteoclastic enzyme actions. The aim of this work was to evaluate the potentiality of soya Trypsin inhibitor on the passive immunity of the Holstein female calves, by evaluating the concentration of immunoglobulin G (IgG) and total protein (PT) as well as Gammaglutamil transferase (GGT) activity in serum. Eighteen newborn female calves were taken and they were fed with colostrums (T1), colostrums with purified trypsin inhibitor I-S Sigma (50mg), (T2) and colostrums with soya albumin fraction 1.08 g (T3). Blood samples were collected by jugular veined punch within 1, 12, 24, 36 and 48 hours after they were born, the first collection was done before the colostrums was given. Colostrums have presented 3.2% to 7.2 % of fat contents; 14, 10% to 19, 52 % of total protein represented by 7, 84% to 9, 44 % of serum protein (PS). Trypsin inhibitor activities have varied from 0,766 mg to 0,945 mg of inhibited trypsin mL-1. There was no influence of the treatments (p>0,05%) for the analyzed parameters, however, there was (p<0,05%) a significant effect for the period of collection, with an increase on IgG, GGT and, PT concentrations from 0h with the respective medium values of 0,68g.dL- 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1. The absorption pick was at 24 h: with 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 and 7,54 g.dL-1 means, respectively for IgG, GGT and PT, indicating an adequate transmission of passive immunity. The addition of soya Trypsin... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Maria Beatriz Beber Kamozaki null (maria.kamozaki@ict.unesp.br) on 2017-01-20T12:46:41Z No. of bitstreams: 1 Tese Final impressão.pdf: 5601023 bytes, checksum: c194d9b1ef2e3281f88141631e69352d (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-24T17:01:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 kamozaki_mbb_dr_sjc.pdf: 5601023 bytes, checksum: c194d9b1ef2e3281f88141631e69352d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-24T17:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 kamozaki_mbb_dr_sjc.pdf: 5601023 bytes, checksum: c194d9b1ef2e3281f88141631e69352d (MD5) Previous issue date: 2016-12-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste trabalho, foi avaliar a influência de agentes antiproteolíticos, imediatamente e após 12 meses, na cimentação adesiva. Foram utilizadas as porções coronárias de 64 molares humanos hígidos. As amostras foram divididas aleatoriamente em 4 grupos, de acordo com o tratamento da dentina: CT (grupo controle); CXL (grupo clorexidina); EGCG (grupo epigalocatequina-3-galato); AT (grupo antocianina). Para a restauração, foram confeccionados cilindros em resina composta Filtek Z350 XT. Após o condicionamento ácido da dentina, as soluções antiproteolíticas foram aplicadas e mantidas sobre a superfície por 60 s, em seguida as restaurações foram cimentadas às amostras com o adesivo Adper Single Bond 2 + cimento resinoso Variolink II. Todos os grupos foram subdivididos de acordo com o tempo de armazenamento em água destilada para o ensaio mecânico: I (Imediato = após 24 h); A (Armazenado = após 12 meses). As amostras foram cortadas em palitos e submetidas ao teste de microtração. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de ANOVA a 2 fatores, seguido do teste de Tukey (α=5%). Foram encontradas diferenças para os fatores Tratamento (p=0,03) e Armazenamento (p=0,00). Os valores em MPa de média e desvio padrão para interação entre os fatores Tratamento X Armazenamento, foram: CT.I: 42.56 (±7,60) A; EGCG.I: 39.6 (±8,99) A; CLX.I: 39.37 (±9,44) A; AT.I: 38.69 (±8,65) A; CT.A: 31.85 (±6,96) A; AT.A: 31.29 (±4,89) AB; EGCG.A: 30.94 (±9,91) AB; CLX.A: 18.68 (±4,53) B. Foram confeccionadas duas amostras adicionais de cada grupo para avaliação descritiva da microdureza knoop de subsuperfície e avaliação qualitativa da interface adesiva em MEV. Conclui-se que as soluções de EGCG e AT foram capazes de manter a estabilidade da resistência de união após 12 meses de armazenamento e que a solução de CLX afetou negativamente os valores de resistência de união comparado aos demais subgrupos. / The aim of this study was to evaluate immediately and longitunally the antiproteolytic agent influence to adhesive cementation. Were used 64 coronary portion of sound human molars. The samples were divided into 4 groups according to the dentin treatment: CG (Control group); CLX (chlorhexidine group); EGCG (epigallocatechin-3-gallate group); AT (anthocyanin group). Cylindrical composite blocks were prepared using a resin composite Filtek Supreme for the restorations. The solutions were applied on the acid-etched dentin and were kept for 60 s. The resin composite blocks were cemented with the adhesive system Adper Single Bond 2 + resin cement Variolink II. All groups were subdivided according to the storage time in distilled water for mechanical testing: I (Immediate = after 24 h); S (Stored = after 12 months). Samples were cut into beams and tested in a universal testing machine at a crosshead speed of 0.5 mm/min until failure. The data were submitted to two-way ANOVA, followed by the Tukey test (α = 5%). Significant differences were found for the Treatment factor (p = 0.03) and Storage factor (p = 0.00). The mean values and standard deviation for interaction between the factors Treatment X Storage, were CG.I: 42.56 (± 7.60) A; EGCG.I: 39.6 (± 8.99) A; CLX.I: 39.37 (± 9.44) A; AT.I: 38.69 (± 8.65) A; CG.S: 31.85 (± 6.96) A; AT.S: 31.29 (± 4.89) AB; EGCG.S: 30.94 (± 9.91) AB; CLX.S: 18.68 (± 4.53) B. Two additional samples from each group were confectioned to descriptive analyses of microhardness knoop of dentin subjacent to the bonding interface and a qualitative interface evaluation with SEM (scanning electron microscope). It can be conclude that EGCG and AT solutions were able to maintain the bond strength stability after 12 months of storage and CLX solution adversely affect the bond strength values compared to other subgroups.

Submitted by Thiago Revers Dreyer null (thiagodreyer@ibb.unesp.br) on 2017-04-04T11:18:09Z No. of bitstreams: 1 TRD_BGA_2017.pdf: 7791379 bytes, checksum: 154e659667a667384ebe6ba28bf8319e (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-12T16:35:48Z (GMT) / Submitted by Thiago Revers Dreyer null (thiagodreyer@ibb.unesp.br) on 2017-04-12T17:09:46Z No. of bitstreams: 1 TRD_BGA_2017_2.pdf: 20492814 bytes, checksum: 4a99fda2f26876a945d368c7191f1ae5 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-12T17:22:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dreyer_tr_dr_bot.pdf: 20492814 bytes, checksum: 4a99fda2f26876a945d368c7191f1ae5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T17:22:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dreyer_tr_dr_bot.pdf: 20492814 bytes, checksum: 4a99fda2f26876a945d368c7191f1ae5 (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Envenenamento por serpentes é um importante problema de saúde pública em vários países tropicais e subtropicais, pois além da mortalidade, pode resultar em sequelas permanentes como consequência de danos locais, representando assim um grande desafio à terapia utilizando antivenenos. As proteínas fosfolipases A2 (PLA2s) e fosfolipases A2 homólogas de venenos têm um papel fundamental na complexa patogênese da necrose do músculo esquelético e seus mecanismos de ação são apenas parcialmente entendidos. Por isso, a busca por inibidores e da completa descrição do mecanismo de ação das PLA2s e PLA2s homólogas representam assuntos amplamente abordados no campo acadêmico-científico. Para o melhor entendimento desses mecanismos e a busca por novas moléculas inibidoras, o entendimento dos processos de reconhecimento molecular de pequenos ligantes e macromoléculas biológicas é fundamental e requer a completa caracterização da energética de ligação desses agentes e da correlação entre os dados termodinâmicos e cinéticos com as estruturas moleculares envolvidas na ligação. Para tanto, a calorimetria de titulação isotérmica (ITC) é a metodologia mais utilizada com este fim. Nesse trabalho, nossos objetivos foram: i) determinar os parâmetros termodinâmicos de moléculas candidatas a inibidores da atividade miotóxica de PLA2s homólogas: bothropstoxina-I (BthTX-I) e moojenitoxina I (MjTX-I) e II (MjTX-II), purificadas do veneno de serpentes do gênero Bothrops e (ii) caracterizar a interação entre as componentes ácida (CA) e básica (CB) da crotoxina, obtida do veneno da serpente Crotallus durissus terrificus. As serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus são as principais responsáveis por acidentes ofídicos na América Latina e estas proteínas apresentam alta proporção do volume nestes venenos. Foi verificado por ITC que o ácido chicórico, composto vegetal atualmente extraído de várias plantas, que bloqueou a atividade miotóxica in vitro, se liga ao dímero de BthTX-I na proporção estequiométrica de 1:1 com média afinidade de ligação ( = 8.47±1.26 μM). Foi verificado ainda que o processo de ligação é entálpica e entropicamente favoráveis ( 3,97±0,14 kcal/mol, 2,83 kcal/mol). Entretanto para apresentar energia livre semelhante à já apresentadas para outros inibidores virais ainda seria necessário diminuir a energia de ligação na ordem de -10 kcal/mol. Em relação às interações dos íons Zn2+ com a BthTX-I, a titulação se apresentou predominantemente exotérmica e a isoterma de ligação foi melhor ajustada considerando-se 3 eventos de ligação (F-test, p<0.05), sendo que os íons Zn2+ tem baixa afinidade pela proteína ( = 83,3±25,4, 62,1±25,1 e 300,0±104,3 μM). Em função da baixa afinidade, o íon não se apresenta como um bom inibidor, mas tem sua importância na explicação dos mecanismos estruturais da BthTX-I. A suramina, quando titulada à MjTX-I e MjTX-II, apresentou afinidade de ligação moderada-alta ( =0,56±0,23 e 0,6±0,1 μM, respectivamente) e complexos termogramas, em ambos casos, com grandes variações entálpicas, com processos endo e exotérmico ocorrendo durante a titulação. Em ambos os casos foi sugerido que esse comportamento demonstra processos de oligomerização com formação de dímeros e tetrâmeros, nos casos da MjTX-I e MjTX-II respectivamente. Nos experimentos calorimétricos realizados com os componentes da crotoxina, CA e CB, foi sugerido pelo termograma e isotermas obtidos que a CA é capaz de dissociar o tetrâmero formado por CB para formar a crotoxina. Ambos os eventos apresentaram afinidades de dissociação do tetrâmero e complexação da CA/CB da ordem de submicrmolar enquanto o primeiro evento é entropicamente guiado enquanto o segundo é entalpicamente guiado. / Envenomation by snakebites is an important public health problem in many tropical and subtropical countries that, in addition to mortality, can result in permanent sequelae as a consequence of local damage, which represents a major challenge to antivenom therapy. Venom phospholipases A2 (PLA2s) and PLA2s-like proteins play an important role in the complex pathogeneis of skeletal muscle necrosis and their precise mechanism of action is only partially understood. Therefore, the search for inhibitors and the complete description of the mechanism of action of the PLA2s and PLA2s-like represent a wide covered issues in the academic and scientific fields. For a better understanding of these mechanisms and the search for new inhibitory molecules, the understanding of the molecular recognition processes of small ligands and biological macromolecules is fundamental and requires the complete characterization of the binding energy of these agents and of the correlation between thermodynamic and molecular structures involved in the binding. For this purpose, isothermal titration calorimetry (ITC) is the most used methodology. In this work, our objectives were: (i) to determine the thermodynamic parameters of molecules candidates for inhibitors of myotoxic activity of PLA2s-like proteins: bothropstoxin-I (BthTX-I) and moojenitoxin-I (MjTX-I) and II (MjTX-II), purified from snake venoms of the bothropic genus and (ii) characterize the thermodynamics of the interaction between the acidic (CA) and basic (CB) components of the crotoxin, purified from the venom of Crotallus durissus terrificus. Snakes of the genera Bothrops and Crotalus are the main responsible for ophidian accidents in Latin America and these proteins have a high proportion of the volume of these venoms. It was verified by ITC that chicoric acid, a vegetal compound extracted from several plants that blocks myotoxic acitivity of BthTX-I in vitro, binds to BthTX-I dimer at the stoichiometric ratio of 1:1 with medium binding affinity ( =8.47±1.26 μM). It was also verified that the binding process is enthalpic and entropically driven ( 3.97±0.14 kcal/mol, 2.83 kcal/mol). However, for the chicoric acid to have free energy similar to that already shown by other viral inhibitors, it would still be necessary to decrease its binding energy in the order of -10 kcal/mol. In relation to the interactions of the Zn2+ ions with BthTX-I, the titration was predominantly exothermic and the binding isotherm was better adjusted considering 3 binding events (F-test, p<0.05), with Zn2+ ions having low affinity for the protein ( = 83.3±25.4, 62.1±25.1 and 300.0±104.3 μM). Due to the low affinity, the ion does not present itself as a good inhibitor, but was important to explain the structural myotoxic mechanisms of Lys49-PLA2s. Suramine, when titrated to MjTX-I and MjTX-II, had moderate to high binding affinity ( = 0.56±0.23 and 0.6±0.1 μM, respectively) and complex thermograms in both cases, with large enthalpic variations with endo and exothermic processes occurring during the titration. In both cases, it was suggested that their behavior demonstrates oligomerization processes with formation of dimers or tetramers, in the cases of MjTX-I and MjTX-II, respectively. In the calorimetric experiments performed with the components of crotoxin, CA and CB, it was suggested by the thermogram and isotherms obtained that CA is able to dissociate the tetramer formed by CB to form the crotoxin. Both events showed dissociation affinities of the tetramer and complexation of the CA/CB in the submicromolar range, being the first event entropically driven while the second is entalpically driven. / FAPESP: 2013/24705-3 / FAPESP: 2015/17286-0