Submitted by Inácio de Oliveira Lima Neto (inacio.neto@inpa.gov.br) on 2018-01-30T12:57:01Z No. of bitstreams: 2 Diana Vieira Brito.pdf: 3554087 bytes, checksum: 965a5a8e72d0c0e6a8b6ef8339bd4aad (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-30T12:57:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Diana Vieira Brito.pdf: 3554087 bytes, checksum: 965a5a8e72d0c0e6a8b6ef8339bd4aad (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Sex differentiation is a fundamental step that profoundly affects the physiological, morphological and behavioral traits for species reproduction to be succeeded. In highly eusocial bees, another developmental process also takes place to increase species reproductive success: morphological specialization of some females for reproduction (queens), and others for colony maintenance functions (workers). The aim of this thesis was to investigate the molecular basis of sex and caste determination in the Amazonian stingless bee Melipona interrupta, and a possible interaction between them. Two genes from sex determination pathway were characterized in this study: feminizer (fem) and double sex (dsx). Candidate gene approach was used to identify genes related to caste determination. Relation between these genes and caste determination was identified by analyzing their response to manipulation of Juvenile Hormone (JH) titers, which have a major role in queen differentiation of highly eusocial insects, during caste divergence period (last larval instar). Moreover, expression of two genes involved in JH metabolism – mfe (biosynthesis) and jhe (degradation) – was analyzed in social organization context. About sex determination, it was found that Mi-fem pre-mRNA is sex-specifically spliced in a way which only the female splice variant encodes the full-length protein. Higher expression levels of Mi-fem were observed in embryos, which is the stage when sex is determined in insects. Furthermore, it was observed that JH induces an increase in Mi-fem expression during caste divergence period. A method for functional analysis of Mi-fem was also tested in M. interrupta. Parental RNA interference (pRNAi) was used for silencing fem in embryos, but it was not possible to confirm the knockdown. Sex-specific transcripts of Mi-dsx transcripts were also characterized and full-cDNA sequence was obtained. These transcripts encode protein isoforms with differences in their C-terminal domain. These results provide support for the conserved regulatory function of fem and dsx in Melipona bees and demonstrate a significant correlation between key elements of sex and caste determination pathways. About caste determination, five genes belonging to growth-related signaling or regulatory pathways with large phenotypic effects in development were found to be related to caste determination of M. interrupta in this study. Two genes from Insulin/Insulin-Like Signaling (IIS) pathway were responsive to JH (InR1 and InR2), but in opposite directions. DNA methyltransferase 3 (Dnmt3) gene, which is a key feature of epigenetic regulation, and yolk protein vitellogenin gene (Vg) were also found to be related to caste differentiation in M. interrupta. Furthermore, dsx expression was increased by high JH levels, which corroborates previous findings with fem. Besides being the first study to identify regulatory genes related to caste determination in Melipona, these findings give a hint about social strategy used by these bees to achieve high eusociality without relying on a nutrition-based phenotypic plasticity. Finally, analysis of JH metabolism genes revealed that only the expression of JH catabolism related gene jhe is correspondent to overall expected fluctuation of JH titers during larval development. In adult workers, comparison between mfe and jhe expression with recent findings about JH titers in another Melipona species indicated that JH might be playing alternative roles in social organization of workers of stingless bees. Taken together, these results provide a basis for further analysis functional about these sex- and caste-related genes to unveil mechanisms underlying these developmental processes. Also, findings here of a close link between sex and caste determination pathway, which points to sex determination pathway as a potential basis for the evolution of morphological specialization of castes. / A diferenciação sexual é uma etapa crucial do desenvolvimento que afeta profundamente os aspectos morfológicos, fisiológicos e comportamentais para que a reprodução das espécies seja bem-sucedida. Nas abelhas altamente eussociais, outro processo do desenvolvimento também está relacionado ao aumento do sucesso reprodutivo: a especialização morfológica de algumas fêmeas para a reprodução (rainhas), e de outras para a manutenção das colônias (operárias). O objetivo desta tese foi investigar a base molecular da determinação do sexo e da casta na abelha Melipona interrupta e uma possível interação entre ambas as vias. Dois genes da via de determinação do sexo foram caracterizados: feminizer (fem) e double sex (dsx). A abordagem de genes candidatos foi utilizada para a identificação de genes relacionados a determinação das castas, cuja relação foi deduzida por meio da análise de suas respostas à manipulação dos níveis de Hormônio Juvenil (HJ), o qual tem um papel central na diferenciação das rainhas. Além disso, a expressão de dois genes envolvidos no metabolismo do HJ – mfe (biossíntese) e jhe (degradação) – foi analisada no contexto de organização social. Observou-se que o pré-mRNA do gene Mi-fem sofre um splicing alternativo sexo-específico, de modo que apenas a variante específica das fêmeas codifica a proteína completa. Os níveis mais altos de expressão do fem foram observados na fase embrionária, na qual o sexo é determinado. Além disso, foi observado que o JH induz um aumento na expressão do Mi-fem no período de divergência entre as castas. Um método para a análise funcional do fem também foi testado em M. interrupta. O RNA de interferência parental (pRNAi) foi usado para silenciar o fem nos embriões, mas não foi possível confirmar o knockdown. Os transcritos sexo-específicos do Mi-dsx também foram caracterizados e a sequência completa do cDNA foi obtida. Esses transcritos codificam isoformas proteicas que apresentam diferenças nos seus domínios C-terminal. Esses resultados fornecem suporte às funções regulatórias conservadas do fem e dsx e demonstram um link entre os elementos-chave das vias de determinação do sexo e da casta. Cinco genes candidatos pertencentes a vias de sinalização de crescimento celular ou vias regulatórias com amplos efeitos fenotípicos no desenvolvimento apresentaram uma relação com a determinação das castas em M. interrupta. A expressão de dois genes da via Insulin/Insulin-Like (IIS) foi alterada em resposta ao HJ (InR1 e InR2), mas em sentidos opostos. Também foi observado que os genes codificadores da enzima DNA metiltransferase 3 (Dnmt3), a qual é um elemento chave na regulação epigenética, e da proteína do vitelo vitelogenina (Vg) apresentam uma relação com a diferenciação das castas. Ademais, a expressão do dsx foi aumentada pelos altos níveis de HJ, o que corrobora os resultados anteriores sobre o fem. Além desse ser o primeiro estudo a identificar genes regulatórios relacionados a determinação das castas em Melipona, esses resultados dão uma ideia sobre a estratégia social usada por essas abelhas para alcançarem a alta eussocialidade sem depender de uma plasticidade baseada em nutrição. Finalmente, a análise de genes relacionados ao metabolismo de HJ revelou que as flutuações nos títulos de HJ durante o desenvolvimento larval parecem ser reguladas pela via catabólica. Nas operárias adultas, a comparação do perfil de expressão do mfe e jhe com achados recentes sobre a titulação de HJ em outra espécie de Melipona forneceu indícios de que o HJ pode estar desempenhando papéis alternativos na organização social das operárias. Tomados em conjunto, esses resultados proveem uma base para análises mais aprofundadas sobre os processos de determinação do sexo e da casta. Além disso, as evidências encontradas aqui de uma conexão entre as vias de determinação do sexo e da casta apontam para a via de determinação do sexo como uma potencial base para a evolução da especialização morfológica entre as castas.

Orientador: Guilherme Duarte Rossi / Resumo: A possibilidade da evolução da resistência dos insetos à maioria dos inseticidas disponíveis e a necessidade por moléculas específicas para o manejo de organismos alvos e não tóxicas ao meio ambiente guiam a contínua busca por novos compostos com atividade inseticida. No presente trabalho, investigamos o potencial da actinobactéria Streptomyces sp. ENT-21 como fonte de moléculas inseticidas sobre lagartas de Diatraea saccharalis (Fabricius) (Lepidoptera: Crambidae), uma importante praga da cana-de-açúcar. Um extrato quitinolítico foi produzido a partir do cultivo de Streptomyces sp. ENT-21 em meio contendo quitina. Este extrato foi fracionado por filtração molecular (Sephadex G25) e separado em amostras proteicas e não proteicas. Os efeitos do extrato quitinolítico bruto e fracionado sobre a taxa de mortalidade e peso das lagartas de D. saccharalis foram avaliados. A adição do extrato quitinolítico bruto de Streptomyces sp. ENT-21 à dieta artificial resultou em 100% de mortalidade das lagartas de D. saccharalis. Após fracionamento a amostra não proteica resultou em maior mortalidade e redução do peso das lagartas em relação à fração proteica. Esses dados sugerem que a atividade quitinolítica não seja o principal modo de ação responsável pela atividade inseticida do extrato quitinolítico. Os dados também sugerem um possível efeito sinérgico entre os composto proteicos e não proteicos presentes no extrato bruto de Streptomyces sp. ENT-21. / Abstract: Insect resistance to most of the available insecticides and the requirement for specific molecules for pest management and safe to the environment guide a continuous search of new insecticidal compounds. In this work, we investigated the potential of the actinobacterium Streptomyces sp. ENT-21 as a source of insecticidal molecules against larval Diatraea saccharalis (Fabricius) (Lepidoptera: Crambidae), an important sugarcane pest. The chitinolytic extract was prepared by cultivating Streptomyces sp. ENT-21 in a chitin containing medium. This extract was fractionated using molecular filtration (Sephadex G25) forming protein and non-protein fractions. The effects of the crude chitinolytic extract as well of the fractions were evaluated over the development of D. saccharalis larvae in bioassays conducted using artificial diet. The addition of the crude chitinolytic extract to the artificial diet used for rearing larval D. saccharalis resulted in 100% of larval mortality. A non-protein fraction resulted in a higher mortality rate and weight reduction over surviving larvae than the protein fraction, suggesting that the chitinolytic activity present in the protein fraction is not the main mode of action involved in the insecticidal activity of the chitinolytic produced extract. Results also suggest a possible synergic effect among protein and non protein compounds in the crude chitinolytic extract from Streptomyces sp. ENT-21. / Mestre

Mestre -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 2002.

Submitted by Lara Oliveira (lara@ufersa.edu.br) on 2017-09-27T20:20:31Z No. of bitstreams: 1 KamilaBS_DISSERT.pdf: 1933631 bytes, checksum: b4f5cb1700d6b3ab6d0fffa1d4370bad (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-10-27T13:05:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KamilaBS_DISSERT.pdf: 1933631 bytes, checksum: b4f5cb1700d6b3ab6d0fffa1d4370bad (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-10-27T13:05:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KamilaBS_DISSERT.pdf: 1933631 bytes, checksum: b4f5cb1700d6b3ab6d0fffa1d4370bad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-27T13:09:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KamilaBS_DISSERT.pdf: 1933631 bytes, checksum: b4f5cb1700d6b3ab6d0fffa1d4370bad (MD5) Previous issue date: 2017-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / 2017-09-27 / As flutuações sazonais nas chuvas e disponibilidade de alimento são consideradas os principais estímulos desencadeadores da reprodução nas aves de ambientes semiáridos e áridos. Neste estudo avaliamos a relação entre as chuvas, disponibilidade de alimento e período reprodutivo de aves insetívoras em uma floresta seca neotropical. Coletamos os dados no período de outubro de 2015 a outubro de 2016. Capturamos as aves com redes de neblina a cada 14 dias para obter os dados reprodutivos. Para a coleta de artrópodes utilizamos três tipos de armadilhas, janela, queda e aparelho de sucção. O pico de aumento no número de artrópodes das armadilhas de janela e da sucção ocorreu 28 dias antes do pico de chuva. Nas armadilhas de queda o número de indivíduos teve seu pico de abundância no período seco, 112 dias antes do pico de chuva, depois disso declinou e permaneceu oscilando em baixa densidade. A amostragem da biomassa manteve o mesmo padrão que a contagem de indivíduos. Não houve correlação significativa entre o número de artrópodes e a precipitação acumulada de 14 dias, porém esta correlação ocorreu quando considerada a biomassa das armadilhas de janela e sucção. Houve correlação significativa entre a porcentagem de indivíduos reproduzindo e a precipitação acumulada de 14 dias, no entanto, esta correlação não foi detectada entre a precipitação e abundância de artrópodes. A hipótese sobre relação entre a sazonalidade na disponibilidade de alimento e período de incubação e cuidado dos filhotes, não foi validada. Apesar disto, a coincidência entre o maior pico de abundância de alimento e pico de registros de placa, considerando um time lag na relação, indica ter havido alguma relação da abundância de artrópodes com o período de engorda das aves e posterior investimento em reprodução pelos adultos. Além disto, a ausência de relação entre artrópodes e placas e a constatada relação entre chuvas e placas indicou que esta última não foi totalmente mediada pela abundância de artrópodes. Outros mediadores como a cobertura vegetal, a qual atua na proteção dos ninhos, e a própria redução no estresse hídrico, que favorece a produção dos ovos, podem ter sido responsáveis pela ligação entre chuvas e reprodução

Orientador: Pitágoras da Conceição Bispo / Banca: Sérgio Nascimento Stampar / Banca: Lucas Silveira Lecci / Resumo: Plecoptera compreende uma ordem de insetos aquáticos com aproximadamente 3500 espécies conhecidas, sendo distribuídas em 16 famílias. No Brasil são registradas apenas duas famílias, sendo Gripopterygidae e Perlidae. Neste trabalho foram estudadas as espécies de Perlidae da Serra de Paranapiacaba, incluindo os Parques Estaduais Carlos Botelho (PECB), Intervales (PEI) e Turístico do Alto Ribeira (PETAR), Estado de São Paulo. Com o objetivo de integrar o conhecimento taxonômico ao molecular, obtendo identificações de adultos e a associação adulto-ninfa utilizando DNA Barcode. Foram registradas 14 espécies, sendo Anacroneuria representado por nove espécies: A. boraceiensis, A. debilis, A. fiorentini, A. flintorum, A. iporanga, A. itajaimirim, A. polita, A. subcostalis e A. tupi. Kempnyia por quatro espécies: K. auberti, K. colossica, K. flava e K. neotropica. Macrogynoplax por apenas uma espécie: M. veneranda. Foram realizados dois novos registros (Anacroneuria debilis e A. fiorentini), duas descrições de imaturos (A. flintorum e A. tupi) e uma sinonimização (Kempnyia petersorum). Adicionalmente, é fornecida uma chave de identificação de adultos da região / Abstract: Plecoptera comprises an order of aquatic insects with aproximately 3500 species, distributed in 16 families. In Brazil, only two families are recorded, being Gripopterygidae and Perlidae. In this work, were studied the species of Perlidae from Paranapiacaba mountains, including the Carlos Botelho State Park (PECB), Intervales State Park (PEI), and Alto Ribeira Tourist State Park (PETAR), São Paulo State. With the objective of integrating the taxonomic knowledge to the molecular, obtaining identifications of adults and the adult-nymph association using the DNA Barcode. Were recorded fourteen species, being Anacroneuria represented by nine species: A. boraceiensis, A. debilis, A. fiorentini, A. flintorum, A. iporanga, A. itajaimirim, A. polita, A. subcostalis and A. tupi. Kempnyia by four species: K. auberti, K. colossica, K. flava and K. neotropica. Macrogynoplax by only one species: M. veneranda. Were made two new records (Anacroneuria debilis and A. fiorentini), two descriptions of nymphs (A. flintorum and A. tupi), and one synonymization (Kempnyia petersorum). In addition, a key is provided for the identification of adults from the region / Mestre

Orientador: Guilherme Duarte Rossi / Banca: Ana Maria Guidelli Thuler / Banca: Fernando Luis Cônsoli / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Resumo: Os parasitoides são insetos que utilizam outros insetos para se desenvolverem e completarem seu ciclo imaturo de desenvolvimento. Os parasitoides podem manipular a fisiologia e afetar o crescimento e desenvolvimento de seus hospedeiros, o que frequentemente resulta na morte de suas vítimas. Durante o parasitismo de Cotesia flavipes Cameron, 1891 (Hymenoptera: Braconidae) sobre Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae), teratócitos são liberados após eclosão da larva do parasitoide no interior do hospedeiro e esses teratócitos produzem um transcrito que codifica uma serpina (CfSerpina). As serpinas são inibidores de serino proteases muitas vezes associadas à regulação da cascata de ativação de profenoloxidases em fenoloxidases, enzimas relacionadas com a melanização de corpos estranhos no hospedeiro. O presente estudo foi conduzido para investigar a função biológica da CfSerpina e avaliar seu potencial biotecnológico como agente de controle de D. saccharalis após ingestão. A CfSerpina foi produzida em sistema heterólogo em células de E. coli BL 21, purificada em coluna de níquel-sepharose e quantificada pelo método de Bradford para posterior detecção por Western blot. A proteína foi produzida em quantidades suficientes para a realização da avaliação biológica e biotecnológica. Após os ensaios, verificou-se que a CfSerpina não pode ser associada à inibição da ativação da cascata de profenoloxidases na hemolinfa de D. saccharalis. Além disso, a exploração b... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Parasitoids are insects which use other insects to develop and complete their immature cycle. Parasitoids can manipulate the physiology and affect the growth and development of their hosts, which often results in the death of their victims. During parasitism of Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) by the parasitoid Cotesia flavipes Cameron, 1891 (Hymenoptera: Braconidae) teratocytes are released after the eclosion of parasitoid larvae inside the host and these teratocytes produce a transcript that encodes a putative serpin (CfSerpin). Serpins are serine proteases inhibitors often associated with the regulation of the activation of prophenoloxidases into phenoloxidases, enzymes responsible for melanization of foreign bodies in the host. The study was conducted to investigate the biological function of CfSerpin, as well to evaluate its biotechnological potential to disrupt the development of D. saccharalis larvae after ingestion. CfSerpin was produced in a heterologous system using E. coli BL 21 cells, purified on a nickel-sepharose column, quantified by the Bradford method, and detected by Western blot. Purified CfSerpin was produced in sufficient amount for biological and biotechnological evaluation. CfSerpin could not be associated with the inhibition of activation of prophenoloxidases cascade in the host insect hemolymph. In addition, biotechnological exploitation of CfSerpin as a toxic protein after ingestion did not resulted in the disruption of... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O grupo willistoni de Drosophila é o grupo de espécies mais bem representado nas comunidades neotropicais de insetos da família Drosophilidae. Ele é constituído por 6 espécies crípticas e por 19 não crípticas e a este grupo de espécies é atribuída origem no Brasil Central, em associação com habitats de florestas quentes e úmidas. Drosophila willistoni, tida como a remanescente do ancestral comum, chama particularmente a atenção dentro do grupo, por possuir uma grande "versatilidade ecológica" diversas vezes comprovada, o que se expressa pela capacidade de exploração bem sucedida de diversos tipos de ambientes, tais como matas, formações abertas, cidades, bem como de diferentes tipos de substratos alimentares e de criação. Sua distribuição geográfica vai desde o sul dos Estados Unidos (Flórida) e México na América do Norte, até o norte da Argentina na América do Sul. Além desta versatilidade ecológica, e talvez subjacente a ela, D. willistoni apresenta uma grande variabilidade genética expressa através de diferentes marcadores genéticos já estudados, tais como polimorfismo cromossômico para inversões paracêntricas e polimorfismo enzimático. Tendo em vista este panorama, o presente trabalho teve como objetivo amplo fazer uma busca no genoma de D. willistoni, no sentido de encontrar alguma indicação para explicar esta variabilidade genética e versatilidade ecológica em nível de DNA repetitivo. A primeira tentativa que realizamos de isolar e caracterizar este tipo de DNA em D. willistoni está descrita no capítulo 4, onde verificamos que as seqüências que compõe os telômeros desta espécie são muito divergentes do modelo D. melanogaster. Partimos, então, para o passo seguinte da investigação descrito no capítulo 2, que seria isolar seqüências repetitivas do genoma de D. willistoni. Nossos resultados iniciais demonstraram a existência de um padrão sexoespecífico na clivagem do DNA genômico de machos e fêmas com as enzimas de restrição AluI e HaeIII. À medida que foi sendo investigado este padrão, levounos à descrição de um fenômeno biológico tido como inexistente no genoma de D. melanogaster: a metilação. Isolamos e seqüenciamos parcialmente 44 clones que consideramos ser segmentos do genoma de D. willistoni que estão envolvidos neste processo de metilação, sendo que identificamos entre estas o gene ribossomal 18S. No capítulo 3 aprofundamos estas investigações referentes à metilação e concluímos que no genoma de D. willistoni ocorrem compartimentos metilados, tais como ocorre em Molusca, Cnidários e outros animais e um destes compartimentos corresponde à uma parte dos genes ribossomais. A partir destes resultados nosso trabalho propõe uma mudança num conceito estabelecido no Gênero Drosophila sobre metilação. Nós estamos demonstrando que este mecanismo epigenético de controle da expressão gênica existe no genoma de D. willitoni e que, portanto, ela estaria fazendo parte do grupo de organismos que tem o seu DNA fracionalmente metilado. / The Drosophila willistoni species group is the most abundant in Neotropical assemblies. It is native from Central Brazil and is constituted by 6 sibling and 19 non-sibling species, living in association with hot and humid forests. In this group, Drosophila willistoni call special attention because it have a recognized great “ecological versatility”, expressed by the ability to explore several types of environments, as forests, open formations, cities and to breed in several types of substrates. Its geographical distribution comprehends since Florida, in the South of United States of America and Mexico, until the North of Argentina, in South America. Besides this ecological versatility, D. willistoni also presents an ample genetic variability detected by several genetic markers, exemplified by the chromosomal polymorphism for paracentric inversions and the enzymatic polymorphism. Considering this scenario, the present study have the main objective to make a molecular screening in the genome of D. willistoni, trying to found some clue that could explain such genetic and ecological variability at the level of repetitive DNA. The results of our first attempt to isolate and to characterize this type of DNA in D. willistoni are described in Chapter 4, where we verify that the telomeric sequences of this species are very divergent of those occurring in the modelspecies D. melanogaster. The next step of our investigation was to isolate repetitive sequences of the D. willistoni’s genome. This attempt is described in Chapter 2 and our results showed sex-specific patterns of cleavage of genomic DNA of males and females with the restriction enzymes AluI e HaeIII. These results demonstrated by the first time, the existence of a phenomenon not found in D. melanogaster: the metylation in the genome of D. willistoni. Isolating and partially sequencing 44 clones considered by us as segments of the genome of D willistoni involved in the mechanism of methylation, we found the 18S ribosomal gene among them. In Chapter 3, we continued the investigations about methylation in the genome of D. willistoni and concluded that in this species, as occurs in the genomes of other animals, as Mollusca and Cnidaria, exists methylated compartments, and that one of these compartments, correspond to part of the ribosomal genes. Considering all our findings, we propose a change in the previously established concept about lack of methylation in the Genus Drosophila. We demonstrated that this epigenetic mechanism of control of gene expression exists in the genome of D. willistoni, and so, this species needs to be considered as member of the group of organisms which have its DNA fractionally methylated.

MORAIS, J. G. L. Comportamento de genótipo de feijão-de-corda sob infestação de pragas. 2007. 52 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia)- Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-04-29T17:48:00Z No. of bitstreams: 1 2007_Disser_JoaoGutemberg.pdf: 180094 bytes, checksum: 2904b51145ef8cbfe6b43019ae645e66 (MD5) / Rejected by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br), reason: Refazer o nome do arquivo on 2013-04-29T20:25:43Z (GMT) / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-04-29T20:26:47Z No. of bitstreams: 1 2007_Disser_jglmoraes.pdf: 180094 bytes, checksum: 2904b51145ef8cbfe6b43019ae645e66 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-04-29T20:27:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_Disser_jglmoraes.pdf: 180094 bytes, checksum: 2904b51145ef8cbfe6b43019ae645e66 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T20:27:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_Disser_jglmoraes.pdf: 180094 bytes, checksum: 2904b51145ef8cbfe6b43019ae645e66 (MD5) Previous issue date: 2007 / The black aphid (Aphis craccivora Koch, 1854), leafhopper (Empoasca sp.), and cowpea curculio (Chalcodermus bimaculatus Fiedler, 1936) are importants pests of cowpea in northeast of Brazil, for their direct and indirect effects. The aim of this research was to value the behaviour of cowpea genotypes, in field and greenhouse conditions. Treatments were applied to plants in a randomized complete block design separated in the time. The treatments were disposed in five rows (four linear meters), with 0,8m theyselves, and 0,2m between plants. The samples were realizated, at random, with 3 rows in the experimental unit. Data were transformed using the formule (x + 0,5)1/2, submitted to variance analisys, and means were separated by Tukey test at 5% of error. The evaluations were realizated weekly. The experimental unit consisted of 10 for parcel, from where were quantified the insects, in case of black aphid and leafhopper, and damage in pods for cowpea curculio. / O pulgão-preto (Aphis craccivora Koch, 1854), a cigarrinha-verde (Empoasca sp.) e o manhoso (Chalcodermus bimaculatus Fiedler, 1936) são importantes pragas do feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] em várias regiões do Nordeste do Brasil, por lhe causarem danos diretos e indiretos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o comportamento de genótipos de feijão-de-corda, em condições de campo e sob infestação natural de pragas, quanto à sua preferência de ataque. Para isto, efetuou-se um ensaio em delineamento em blocos ao acaso, cujas repetições variaram, no tempo, de acordo com a praga a ser avaliada. As avaliações eram realizadas semanalmente. Os tratamentos foram dispostos em parcelas constituídas de cinco fileiras de quatro metros lineares, cada, espaçadas entre si de 0,80m e com cinco plantas por metro linear. Em cada amostragem, avaliavam-se cinco plantas, aleatoriamente, dentro da área útil da parcela (três fileiras centrais). Os dados foram submetidos a uma análise de variância e as médias foram separadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade de erro. Constatou-se que: em condições de campo os genótipos estudos são igualmente preferidos pelo pulgão-preto, porém em condições protegidas, a cultivar Epace-10 apresenta-se menos preferida ao ataque do afídeo; a cultivar Vita-7 apresenta resistência do tipo não-preferência ao ataque da cigarrinha-verde; os genótipos Epace-10, Paulistinha, Pitiúba e BRS Marataoã são menos preferidos para alimentação e postura do manhoso em relação à cultivar BR 17-Gurguéia.

OLIVEIRA, A. S de. Purificação e caracterização de inibidores de tripsina de sementes de Pithecellobium dumosun e seus efeitos. 222 f. 2007. Tese (Doutorado em Bioquímica)- Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T17:10:50Z No. of bitstreams: 1 2007_tes_asdeoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) / Rejected by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br), reason: descrição on 2013-05-20T19:18:25Z (GMT) / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T19:18:50Z No. of bitstreams: 1 2007_tes_asdeoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T19:19:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_tes_asdeoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-20T19:19:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_tes_asdeoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) Previous issue date: 2007 / Five Kunitz-type trypsin inhibitors (JB1, JB2, JB3-1, JB3-2 and JB4) were purified from Pithecellobium dumosum seeds, a tree of the sub-family Mimosoideae, by TCA precipitation, affinity chromatography on immobilized trypsin-Sepharose and reverse phase HPLC using Vydac C-18 column. The five inhibitors had Mr between 18 and 20 kDa with a single polypeptide chain as determined by SDS-PAGE with and without reduction. JB1, JB3-1 and JB3-2 had Mr of 19.70, 19.69 and 19.69 kDa, respectively, by MALDI-TOF. JB2 and JB4 had Mr of 18.08 and 20.85, respectively, by SDS-PAGE. The N-terminal sequences of JB1, JB3-1 and JB3-2 showed identity with others Kunitz-type inhibitors. The five inhibitors were stable over a wide range of temperature and pH. The inhibition of trypsin by JB1, JB2 and JB4 was competitive. JB1, JB2, JB3-1 and JB3-2 showed Ki values of 3.56 x 10-8 M, 1.65 x 10-8 M, 4.20 x 10-8 M, 2.88 x 10-8 M, respectively, against bovine trypsin. In comparison with others inhibitors JB4, with Ki of 5.70 x 10-10 M, showed a high affinity toward trypsin. Among the inhibitors purified only JB4 inhibited chymotrypsin activity. The activities of elastase and bromelain were not inhibited for these inhibitors. The inhibition of JB1, JB2, JB3-1 and JB3-2 on papain varied between 32.93 to 48.82% of inhibition and was indicative of its bifunctionality with exception of JB4 that inhibited this activity in 9.9%. The papain inhibition by JB1 and JB2 were noncompetitive type and the Kivalues were 7.6 x 10-7 and 5.1 x 10-7 M, respectively. In vitro assays against digestive proteinases from Lepidoptera, Diptera and Coleoptera pests were carried out. These inhibitors were effective towards trypsin-like digestive enzymes of the insect in different degrees. The digestive enzymes from Zabrotes subfasciatus and Ceratitis capitata were inhibited by JB1 in 68.87 and 65.53% respectively, and Callosobruchus maculatus, Alabama argillaceae and Plodia intepunctella enzymes were inhibited in the range of 29.18 to 44.35%. Digestive enzymes from Z. subfasciatus, C. maculatus and C. capitata were inhibited by JB2 in the range of 70.04 to 74.54%, and the enzymes of A. argillaceae and P. intepunctella were suppressed in 13.58 and 48.67%, respectively. Trypsin-like activities of larval from Z. subfasciatus were suppressed in 67.33 and 56.93% by JB3-1 and JB3-2, respectively, and the activities of C. maculatus, A. argillaceae, P. intepunctella and C. capitata were inhibited by these inhibitors in the range of 5.17-49.00%. JB4 inhibited around 54.53 to 66.15% the digestive enzymes of C. maculatus, Z. subfasciatus and A. argillaceae and the digestive enzymes from P. intepunctella and C. capitata larvae in 8.97% and 37.47%, respectively. The inhibition of trypsin-like and papain-like proteinases of several insects suggested that these inhibitors may affect the growth and survival of these insect pests when incorporated into artificial diet and their bifunctionality are indicative that these inhibitors could be strong candidates to plant management programs cross transgenia. / Cinco inibidores de tripsina da família Kunitz (JB1, JB2, JB3-1, JB3-2 e JB4) foram purificados de sementes de Pithecellobium dumosum, uma árvore da subfamília Mimosoideae, por precipitação com ácido tricloroácetico (TCA), cromatografia de afinidade sobre tripsina imobilizada em Sepharose e coluna de fase reversa em sistema de CLAE. Os cinco inibidores possuem massa molecular entre 18 e 20 kDa formados por uma cadeia polipeptídica como determinado por SDS-PAGE na presença ou ausência de -mercaptoetanol. JB1, JB3-1 e JB3-2 têm massas moleculares de 19,70, 19,69 e 19,69 kDa, respectivamente, por MALDI-TOF. JB2 e JB4 têm massa molecular de 18,08 e 20,85 kDa, respectivamente. A seqüência N-terminal de JB1, JB3-1 e JB3-2 mostrou identidade com outros inibidores da família Kunitz. Os cinco inibidores foram estáveis às variações de temperatura e pH. A inibição da tripsina por JB1, JB2 e JB4 foi do tipo competitivo. JB1, JB2, JB3-1 e JB3-2 tiveram Kis de 3,56 x 10-8 M, 1,65 x 10-8 M, 4,20 x10-8 M, 2,88 x 10-8 M, respectivamente para a tripsina bovina. Em comparação com os outros inibidores JB4, com Ki de 5,70 x 10-10 M, apresentou maior afinidade para tripsina. Entre os inibidores purificados apenas JB4 inibiu moderadamente a atividade da quimotripsina. A atividade da elastase e bromelaína não foi inibida efetivamente por esses inibidores. A inibição de JB1, JB2, JB3-1 e JB3-2 sobre a papaína variaram entre 32,93 a 48,82% e foi indicativo de sua bifuncionalidade, com exceção de JB4 que inibiu fracamente essa atividade (9,93% de inibição). A inibição da papaína por JB1 e JB2 foi do tipo não competitiva e os valores de Ki foram de 7,6 x 10-7 e 5,1 x 10-7 M, respectivamente. Ensaios in vitro sobre as proteinases digestórias de Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram feitos. Esses inibidores foram efetivos para enzimas digestórias semelhantes à tripsina desses insetos em diferentes graus. As enzimas digestivas de Zabrotes subfasciatus e Ceratitis capitata foram inibidas por JB1 em 68,87 e 65,53%, respectivamente, e as enzimas de Callosobruchus maculatus, Alabama argillaceae e Plodia interpunctella foram inibidas entre 29,18 e 44,35%. Enzimas digestórias de Z. subfasciatus, C. maculatus e C. capitata foram inibidas por JB2 entre 70,04 e 74,54% e as enzimas de larvas de A argillaceae e P. interpunctella foram suprimidas em 13,58 e 48,67%, respectivamente. A atividade semelhante à tripsina de larvas de Z. subfasciatus foi suprimida em 67,33 e 56,93% por JB3-1 e JB3-2, respectivamente, e a atividade de C. maculatus, A argillaceae, P. interpunctella e C. capitata foram suprimidas por esses inibidores entre 5,17 e 49,00%. JB4 inibiu entre 54,53 a 66,15 % as enzimas digestivas de C. maculatus, Z. subfasciatus e A argillaceae e inibiu as enzimas digestivas de larvas de P. intepunctella e C. capitata em 8,97 e 37,47%, respectivamente. A inibição de proteinases semelhantes à tripsina e à papaína presentes no intestino de vários insetos sugere que esses inibidores possam afetar o crescimento e sobrevivência desses insetos pragas quando incorporados em sementes artificiais e esta bifuncionalidade é indicativo de que estes inibidores possam ser fortes candidatos para os programas de melhoramento de plantas via transgenia.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-25T13:00:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2438121 bytes, checksum: 254e4736b353b33dece0ddecd4cd997e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T13:00:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2438121 bytes, checksum: 254e4736b353b33dece0ddecd4cd997e (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os Hemiptera são insetos hemimetábolos distribuídos dentre quatro subordens monofiléticas, Sternorrhyncha, cujas relações Auchenorrhyncha filogenéticas e são Heteroptera. estudadas: Estes Coleorrhyncha, insetos apresentam diversificados hábitos alimentares que variam dentre a fitofagia, zoofagia, dentritivoria, hematofagia e onivoria. Devido a esta variedade de hábitos e o conhecimento da filogenia dos táxons superiores do grupo, os hemípteros tornam-se interessantes modelos de estudos comparativos do intestino. Analisando-se a compartimentalização da digestão e a produção de enzimas no intestino médio de insetos foi levantada a hipótese de que características deste órgão eram semelhantes entre espécies relacionadas filogeneticamente mesmo que estas apresentassem diferentes hábitos alimentares. Estudos comparativos visando investigar esta questão sob o viés morfológico ainda eram ausentes na literatura. Devido a isso, com o objetivo de testar, sob o ponto morfológico, a hipótese de que a evolução do intestino médio em insetos é mais relacionada à proximidade filogenética das espécies que ao hábito alimentar, analisamos a ultraestrutura das células digestivas do intestino médio em Hemiptera levando-se em conta seus diferentes hábitos alimentares e filogenia. Esta análise evidenciou que em Hemiptera as células digestivas do intestino médio são polifuncionais responsáveis pela produção e secreção de enzimas, absorção de nutrientes, reserva de nutrientes, neutralização de compostos tóxicos e osmorregulação. Além disso, as células digestivas são similares, apresentando em todas as espécies, membrana perimicrovilar, microvilosidades, núcleo bem desenvolvido e estruturas de reserva, apesar dos diferentes hábitos alimentares apresentados por estas. Portanto, a ultraestrutura das células digestivas em Hemiptera é mais relacionada à proximidade filogenética das espécies. / Hemiptera are hemimetabolus insects distributed among four monophyletic suborders whose phylogenetic relationships are studied: Coleorrhyncha, Sternorrhyncha, Auchenorrhyncha and Heteroptera. These insects present diverse feeding habits that vary of the phytophagia, zoophagy, detritivore, hematophagy and omnivorism. Due to this variety of diets and the high level phylogeny of the group, Hemiptera become interesting models of midgut comparative studies. Analyzing the compartmentalization of digestion and enzymes production in the insects midgut, was raised the hypothesis that these characteristics were similar among phylogenetically related species even if these presented different eating habits. Comparative studies aiming to investigate this question under the morphological point still were absent in the literature. In order to test the morphological hypothesis that the evolution of the midgut in insects is more related to the phylogenetic proximity of the species than to the diet, we analyzed the ultrastructure of the Hemiptera midgut digestive cells taking into account their different eating habits and phylogenetic relationships. This analysis evidenced that in Hemiptera midgut digestive cell were polyfunctional been responsible for the production and secretion of enzymes, nutrient absorption, nutrient reserve, neutralization of toxic compounds and osmoregulation. In addition, the digestive cells are similar, presenting in all species, perimicrovilar membrane, microvilli, well developed nucleus and reserve structures, in spite of the different alimentary habits presented by these. Therefore, the ultrastructure of the digestive cells in Hemiptera is more related to the phylogenetic proximity of the species.