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Avaliação da expressão de hepcidina e produção de IL-6 por monócitos de indivíduos idosos / Evaluation of hepcidin expression and IL-6 production by monocytes in elderlyJulise Cunha Miranda 11 August 2009 (has links)
Anemia em idosos está relacionada ao aumento da morbidade e mortalidade desta população. As causas das anemias em idosos podem ser divididas em três grupos: anemia das doenças crônicas (ADC), anemia por deficiência de nutrientes, na qual se inclui a anemia por deficiência de ferro (ADF) e anemias de causas não-identificadas. A hepcidina constitui uma importante ligação entre defesa primária, inflamação e metabolismo do ferro. A hepcidina é induzida, principalmente, pela interleucina-6 (IL-6), atua como regulador negativo da absorção de ferro e é mediadora da retenção de ferro por monócitos e macrófagos durante inflamação ou infecção. Estudos recentes têm demonstrado o papel da produção desse hormônio por monócitos na homeostase do ferro, num modelo autócrino e parácrino. O presente trabalho teve por objetivo geral correlacionar os níveis de IL-6 produzidos por monócitos em cultura e a expressão de hepcidina em monócitos de indivíduos com ADC, com inflamação sem anemia, ADF e com anemias não-identificadas e, por objetivos específicos, verificar a eficiência de parâmetros hematológicos clássicos em avaliar o status férrico de idosos; comparar os níveis de IL-6 produzidos por células monocíticas em cultura, nos diferentes grupos de estudo, e relacioná-los com os parâmetros utilizados para caracterização das anemias; comparar os níveis de expressão de hepcidina em células monocíticas, nos diferentes grupos de estudo, e relacioná-los com o estado inflamatório e com os parâmetros utilizados para caracterização das anemias. Para isso, os pacientes foram avaliados através de parâmetro bioquímicos (glicemia, creatinina sérica, -glutamil transferase, proteínas totais e albumina, por método colorimétrico e proteína C-reativa, por imunoturbidimetria ultra-sensível) e hematológicos (hemograma completo, utilizando o contador de células Micros 45 ABX®, França, e extensão sangüínea corada por Leishman, ferritina sérica, por método imunoquimioluminescente, receptor de transferrina solúvel, por ensaio imunoenzimático e cálculo do índice sTfR/log ferritina). A determinação dos níveis de IL-6 foi feita por imunoensaio enzimático quantitativo em sobrenadante de cultura de monócitos e a dos níveis de expressão do RNAm da hepcidina em monócitos pela Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (RT-PCR). Os níveis séricos de ferritina estavam estatisticamente diminuídos na população com ADF, embora sem atingir os valores preconizados para diagnóstico de deficiência de ferro. Os níveis de receptor de transferrina solúvel (sTfR) e o índice sTfR/log ferritina estavam elevados em pacientes com ADF, porém, o índice não aumentou a sensibilidade da medida do receptor para pacientes idosos. Estes resultados obtidos sugerem que valores de normalidade para níveis de ferritina e índice receptor-ferritina devem ser revistos para a população idosa. Houve aumento da concentração de IL-6 em sobrenadante de cultura de monócitos no grupo Inflamação quando comparado com o grupo Anemia. Os níveis de IL-6 correlacionaram-se positivamente com os níveis da proteína C-reativa e número de leucócitos da população em estudo, porém, não houve correlação com os níveis de RNAm de hepcidina expressos por monócitos. A expressão de RNAm de hepcidina em monócitos mostrou correlação positiva com os níveis séricos de ferritina, porém, não foi diferente entre os grupos de estudo. / Anemia in elderly is associated with increased morbidity and mortality in this population. The causes of anemia in elderly can be divided into three groups: anemia of chronic diseases (ACD), anemia of nutrients deficiency, which include iron deficiency anemia (IDA) and unexplained anemias. Hepcidin is an important link between primary defense, inflammation and iron metabolism. The hepcidin is mainly induced by the Interleukin-6 (IL-6), it acts as a negative regulator of iron absorption and it is mediating of iron retention by monocytes and macrophages during inflammation or infection. Recent studies have been demonstrating the role of this hormone production by monocytes in the iron homeostasis, in autocrine and paracrine fashion. The general objective of this study was to correlate the levels of monocyte-derived IL-6 in culture and the monocyte hepcidin mRNA expression in patients with ACD, with inflammation without anemia, IDA and with unexplained anemias. The specific objectives are to verify the efficiency of classic haematological parameters in evaluating the iron status in elderly; to compare the levels of monocyte-derived IL-6 in culture, in different study groups, and to relate them with the parameters used for anemias characterization; to compare the levels of monocyte hepcidin mRNA expression, in different study groups, and to relate them with the inflammatory state and with the parameters used for anemias characterization. For that, the patients were evaluated by biochemical parameter (blood glucose, serum creatinine, -glutamyl transferase, total proteins and albumin, by colorimetric method and high-sensitivity C-reactive protein, measured by immunoturbidimetric assay) and hematological (complete blood count, using the cells accountant Micros 45 ABX®, and peripheral blood film for Leishmans staining morphology, serum ferritin level by immuno-quimioluminescent assay, soluble transferrin receptor, by Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) and sTfR/log ferritin index). The determination of IL-6 levels was performed by quantitative ELISA in monocyte culture supernatants and monocyte hepcidin mRNA levels by Real-Time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Although serum ferritin levels were statistically decreased in IDA population, it did not reach the values recommended for diagnosis of iron deficiency. The soluble transferrin receptor (sTfR) levels and the sTfR/log ferritin index were significantly higher in IDA group, however, the index did not increase the sensibility of the sTfR measure for elderly. These results suggest that normality values for ferritin levels and sTfR/log ferritin index should be reviewed for elderly population. There was increase of levels of monocyte-derived IL-6 in culture in Inflammation group compared with Anemia group. The IL-6 levels were positively correlated with C-reactive protein levels and leukocyte number of the patients, however, there was not correlation with monocyte hepcidin mRNA levels. The monocyte hepcidin mRNA levels showed positive correlation serum ferritin levels, however, it was not different between the study groups.
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Avaliação da aterosclerose subclínica em portadores de HDL-colesterol marcadamente elevado / Evaluation of subclinical atherosclerosis in individuals with markedly elevated HDL-cholesterolLaurinavicius, Antonio Gabriele 28 March 2016 (has links)
O HDL-c é um fator de risco cardiovascular negativo e sua concentração plasmática apresenta relação inversa com a incidência de eventos cardiovasculares. Entretanto, as evidências relativas ao grupo de indivíduos com níveis de HDL-c acima do percentil 95 da população geral ainda são escassas e o impacto da hiperalfalipoproteinemia (HALP) sobre o risco cardiovascular continua representando motivo de controvérsia na literatura médica. Alguns estudos em populações específicas associam a HALP a aumento do risco cardiovascular. Ao mesmo tempo, outros estudos identificaram populações de indivíduos hipoalfalipoproteinêmicos com marcada longevidade. Assim, demonstrou-se aparente dissociação entre níveis de HDL-c e risco cardiovascular em determinadas populações, reconduzível a aspectos disfuncionais da HDL. O objetivo do presente estudo foi verificar o papel da HALP na determinação do risco cardiovascular; comparar a prevalência de doença cardiovascular subclínica, avaliada por meio da quantificação ultrassonográfica da Espessura Íntimo-Medial Carotídea (EIMC), entre portadores de HDL-c >= 90mg/dL (grupo HALP) e portadores de concentrações de HDL-c atualmente consideradas normais (entre 40 e 50mg/dL para os homens e entre 50 e 60mg/dL para as mulheres); e avaliar características e função da HDL em portadores de HALP por meio do estudo de sua composição, de sua capacidade de efluxo de colesterol, e de sua atividade anti-inflamatória e antioxidante, correlacionando estas características com a presença de doença cardiovascular subclínica avaliada por meio da determinação da EIMC, da Velocidade de Onda de Pulso (VOP) e da presença de Calcificação Arterial Coronariana (CAC) avaliada pela TCMD. Para responder estas perguntas, o presente estudo foi articulado em dois braços: Braço 1: Análise da coorte do estudo ELSA com o objetivo de determinar a prevalência de HALP em uma população geral; definir o perfil demográfico, antropométrico e metabólico dos portadores de HALP; e comparar a prevalência de doença vascular subclínica deste grupo com controles da mesma coorte com níveis normais de HDL-colesterol. Braço 2: Recrutamento de 80 voluntários hígidos e portadores de HALP para avaliação da correlação entre presença de doença vascular subclínica, e aspectos estruturais e funcionais da HDL. Em seus dois braços, o estudo levou a quatro conclusões principais: 1) Níveis marcadamente elevados de HDL-c estão associados a menor espessura íntimo-medial carotídea quando comparados a níveis de HDL-c considerados normais pelas diretrizes vigentes. Embora portadores do fenótipo HALP apresentem, como grupo, um perfil metabólico mais favorável que o encontrado em indivíduos com HDL-c normal, a associação entre EIMC e HALP foi independente dos fatores de risco tradicionais, indicando que a menor prevalência destes últimos em portadores de HDL-c marcadamente elevado justifica apenas parcialmente a menor prevalência de doença vascular subclínica neste grupo; 2) Embora a HALP se apresente como um fenótipo ateroprotetor, há indivíduos com níveis marcadamente elevados de HDL-c que evoluem com doença cardiovascular, clínica ou subclínica. Neste contexto, nossos resultados indicam correlação entre os três métodos avaliados para estudar doença vascular subclínica em portadores de HALP: EIMC, VOP e CAC; 3) Os fatores de risco tradicionais continuam exercendo seu peso na determinação do risco cardiovascular em portadores de HALP. Idade, tabagismo, hipertensão arterial, hipertrigliceridemia e altos níveis de LDL-c apresentaram associação estatisticamente significativa com a presença de doença vascular subclínica no grupo estudado; 4) A avaliação da composição e da função da HDL em portadores de HALP pode permitir identificar indivíduos especificamente mais suscetíveis à aterosclerose. Nossos resultados indicam que, em particular, a atividade anti-inflamatória da HDL, avaliada pela capacidade de inibição da produção de IL-6; o efluxo de colesterol e a capacidade de transferência de triglicérides apresentaram associação independente com menor espessura íntimo-medial carotídea em portadores de HALP, enquanto níveis mais altos de Apo A-IV se associaram a maior grau de doença cardiovascular subclínica / HDL-c is a negative cardiovascular risk factor and its plasma concentration is inversely related to the incidence of cardiovascular events. However, evidence of benefit among subjects with HDL-c levels above the 95th percentile of the general population is still scarce and the impact of hyperalphalipoproteinemia (HALP) on cardiovascular risk continues to represent matter of debate in the medical literature. Some studies with specific populations indicated an increased cardiovascular risk associated with HALP. In addition, other reports identified groups of patients with marked hypoalphalipoproteinemia and longevity. Hence, there could be a dissociation between HDL-c levels and cardiovascular risk in certain populations, possibly due to dysfunctional HDL particles. The aim of this study was to investigate the role of HALP phenotype in determining cardiovascular risk; to compare the prevalence of subclinical cardiovascular disease, assessed by ultrasound measurement of Carotid Intima-Media Thickness (CIMT) among patients with HDL-c >= 90mg/dL (HALP group) and patients with HDL-c currently considered normal (40-50mg/dL for men and 50-60mg/dL for women); and to evaluate HDL functionality in patients with HALP through the study of its composition, its cholesterol efflux capacity, and its anti-inflammatory and antioxidant activity; correlating those characteristics with the presence of subclinical cardiovascular disease assessed by CIMT, Pulse Wave Velocity (PWV) and Coronary Artery Calcification (CAC). To answer these questions, the present study was articulated into two arms: Arm 1: ELSA-Brasil study cohort analysis in order to assess HALP prevalence in a general population, defining demographic, anthropometric and metabolic profile of HALP individuals; and comparing the prevalence of subclinical vascular disease among HALP subjects with controls with normal HDL-c. Arm 2: Recruitment of 80 healthy volunteers with HALP to study the correlation between subclinical vascular disease and HDL functionality in this group. Our study led to four main conclusions: 1) markedly elevated HDL-c is associated with lower CIMT compared to the control group with normal HDL-c levels. Although individuals with HALP display a more favorable metabolic profile than subjects with normal HDL-c, the association between CIMT and HALP was independent of traditional risk factors, indicating that the lower prevalence of subclinical vascular disease in this group is only partially justified by the lower prevalence of cardiovascular risk factors; 2) Although HALP can be regarded as an atheroprotective phenotype, there are individuals with markedly elevated levels of HDL-c who develop cardiovascular disease. Our results indicate good correlation of the three methods here adopted to study subclinical vascular disease among HALP patients: CIMT, VOP and CAC; 3) Traditional risk factors continue to exert their weight in determining cardiovascular risk in patients with HALP. Age, smoking, hypertension, hypertriglyceridemia and high levels of LDL-c were significantly associated with the presence of subclinical vascular disease among HALP individuals; 4) the assessment of the HDL composition and functionality in patients with HALP may allow to identify individuals specifically more susceptible to atherosclerosis. Our results indicate that, in particular, cholesterol efflux capacity, the anti-inflammatory activity of HDL, and triglyceride transfer capacity were independently associated with lower CIMT in HALP individuals, while higher levels of Apo A-IV were associated with a greater burden of subclinical cardiovascular disease
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Avaliação da aterosclerose subclínica em portadores de HDL-colesterol marcadamente elevado / Evaluation of subclinical atherosclerosis in individuals with markedly elevated HDL-cholesterolAntonio Gabriele Laurinavicius 28 March 2016 (has links)
O HDL-c é um fator de risco cardiovascular negativo e sua concentração plasmática apresenta relação inversa com a incidência de eventos cardiovasculares. Entretanto, as evidências relativas ao grupo de indivíduos com níveis de HDL-c acima do percentil 95 da população geral ainda são escassas e o impacto da hiperalfalipoproteinemia (HALP) sobre o risco cardiovascular continua representando motivo de controvérsia na literatura médica. Alguns estudos em populações específicas associam a HALP a aumento do risco cardiovascular. Ao mesmo tempo, outros estudos identificaram populações de indivíduos hipoalfalipoproteinêmicos com marcada longevidade. Assim, demonstrou-se aparente dissociação entre níveis de HDL-c e risco cardiovascular em determinadas populações, reconduzível a aspectos disfuncionais da HDL. O objetivo do presente estudo foi verificar o papel da HALP na determinação do risco cardiovascular; comparar a prevalência de doença cardiovascular subclínica, avaliada por meio da quantificação ultrassonográfica da Espessura Íntimo-Medial Carotídea (EIMC), entre portadores de HDL-c >= 90mg/dL (grupo HALP) e portadores de concentrações de HDL-c atualmente consideradas normais (entre 40 e 50mg/dL para os homens e entre 50 e 60mg/dL para as mulheres); e avaliar características e função da HDL em portadores de HALP por meio do estudo de sua composição, de sua capacidade de efluxo de colesterol, e de sua atividade anti-inflamatória e antioxidante, correlacionando estas características com a presença de doença cardiovascular subclínica avaliada por meio da determinação da EIMC, da Velocidade de Onda de Pulso (VOP) e da presença de Calcificação Arterial Coronariana (CAC) avaliada pela TCMD. Para responder estas perguntas, o presente estudo foi articulado em dois braços: Braço 1: Análise da coorte do estudo ELSA com o objetivo de determinar a prevalência de HALP em uma população geral; definir o perfil demográfico, antropométrico e metabólico dos portadores de HALP; e comparar a prevalência de doença vascular subclínica deste grupo com controles da mesma coorte com níveis normais de HDL-colesterol. Braço 2: Recrutamento de 80 voluntários hígidos e portadores de HALP para avaliação da correlação entre presença de doença vascular subclínica, e aspectos estruturais e funcionais da HDL. Em seus dois braços, o estudo levou a quatro conclusões principais: 1) Níveis marcadamente elevados de HDL-c estão associados a menor espessura íntimo-medial carotídea quando comparados a níveis de HDL-c considerados normais pelas diretrizes vigentes. Embora portadores do fenótipo HALP apresentem, como grupo, um perfil metabólico mais favorável que o encontrado em indivíduos com HDL-c normal, a associação entre EIMC e HALP foi independente dos fatores de risco tradicionais, indicando que a menor prevalência destes últimos em portadores de HDL-c marcadamente elevado justifica apenas parcialmente a menor prevalência de doença vascular subclínica neste grupo; 2) Embora a HALP se apresente como um fenótipo ateroprotetor, há indivíduos com níveis marcadamente elevados de HDL-c que evoluem com doença cardiovascular, clínica ou subclínica. Neste contexto, nossos resultados indicam correlação entre os três métodos avaliados para estudar doença vascular subclínica em portadores de HALP: EIMC, VOP e CAC; 3) Os fatores de risco tradicionais continuam exercendo seu peso na determinação do risco cardiovascular em portadores de HALP. Idade, tabagismo, hipertensão arterial, hipertrigliceridemia e altos níveis de LDL-c apresentaram associação estatisticamente significativa com a presença de doença vascular subclínica no grupo estudado; 4) A avaliação da composição e da função da HDL em portadores de HALP pode permitir identificar indivíduos especificamente mais suscetíveis à aterosclerose. Nossos resultados indicam que, em particular, a atividade anti-inflamatória da HDL, avaliada pela capacidade de inibição da produção de IL-6; o efluxo de colesterol e a capacidade de transferência de triglicérides apresentaram associação independente com menor espessura íntimo-medial carotídea em portadores de HALP, enquanto níveis mais altos de Apo A-IV se associaram a maior grau de doença cardiovascular subclínica / HDL-c is a negative cardiovascular risk factor and its plasma concentration is inversely related to the incidence of cardiovascular events. However, evidence of benefit among subjects with HDL-c levels above the 95th percentile of the general population is still scarce and the impact of hyperalphalipoproteinemia (HALP) on cardiovascular risk continues to represent matter of debate in the medical literature. Some studies with specific populations indicated an increased cardiovascular risk associated with HALP. In addition, other reports identified groups of patients with marked hypoalphalipoproteinemia and longevity. Hence, there could be a dissociation between HDL-c levels and cardiovascular risk in certain populations, possibly due to dysfunctional HDL particles. The aim of this study was to investigate the role of HALP phenotype in determining cardiovascular risk; to compare the prevalence of subclinical cardiovascular disease, assessed by ultrasound measurement of Carotid Intima-Media Thickness (CIMT) among patients with HDL-c >= 90mg/dL (HALP group) and patients with HDL-c currently considered normal (40-50mg/dL for men and 50-60mg/dL for women); and to evaluate HDL functionality in patients with HALP through the study of its composition, its cholesterol efflux capacity, and its anti-inflammatory and antioxidant activity; correlating those characteristics with the presence of subclinical cardiovascular disease assessed by CIMT, Pulse Wave Velocity (PWV) and Coronary Artery Calcification (CAC). To answer these questions, the present study was articulated into two arms: Arm 1: ELSA-Brasil study cohort analysis in order to assess HALP prevalence in a general population, defining demographic, anthropometric and metabolic profile of HALP individuals; and comparing the prevalence of subclinical vascular disease among HALP subjects with controls with normal HDL-c. Arm 2: Recruitment of 80 healthy volunteers with HALP to study the correlation between subclinical vascular disease and HDL functionality in this group. Our study led to four main conclusions: 1) markedly elevated HDL-c is associated with lower CIMT compared to the control group with normal HDL-c levels. Although individuals with HALP display a more favorable metabolic profile than subjects with normal HDL-c, the association between CIMT and HALP was independent of traditional risk factors, indicating that the lower prevalence of subclinical vascular disease in this group is only partially justified by the lower prevalence of cardiovascular risk factors; 2) Although HALP can be regarded as an atheroprotective phenotype, there are individuals with markedly elevated levels of HDL-c who develop cardiovascular disease. Our results indicate good correlation of the three methods here adopted to study subclinical vascular disease among HALP patients: CIMT, VOP and CAC; 3) Traditional risk factors continue to exert their weight in determining cardiovascular risk in patients with HALP. Age, smoking, hypertension, hypertriglyceridemia and high levels of LDL-c were significantly associated with the presence of subclinical vascular disease among HALP individuals; 4) the assessment of the HDL composition and functionality in patients with HALP may allow to identify individuals specifically more susceptible to atherosclerosis. Our results indicate that, in particular, cholesterol efflux capacity, the anti-inflammatory activity of HDL, and triglyceride transfer capacity were independently associated with lower CIMT in HALP individuals, while higher levels of Apo A-IV were associated with a greater burden of subclinical cardiovascular disease
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Expressão dos receptores Toll-like em carcinoma espinocelular de orofaringe / Expression of Toll-like receptor in oropharynx squamous cell carcinomaTobouti, Priscila Lie 22 February 2016 (has links)
Nos últimos anos, notou-se aumento da incidência de carcinoma espinocelular de orofaringe (CECOF) associado ao HPV. Sabe-se que CECOF associado ao HPV apresenta melhor prognóstico do que CECOF não infectado por HPV. Inúmeros estudos em carcinoma cervical demonstram alterações de TLRs, isto provavelmente devido às associações das oncoproteínas E6 e E7 com estes receptores. Em humanos, existem 10 TLRs identificados, os quais colaboram na resposta imune contra bactérias, fungos e vírus, bem como colaboram na promoção ou regressão do tumor. Esta influência do TLR na carcinogênese tem sido alvo de inúmeros estudos devido à ligação entre inflamação e o câncer. O presente trabalho teve como objetivo verificar diferenças na expressão e função de receptores Toll-like em carcinoma espinocelular de orofaringe (CECOF). Para tal, foram utilizados trinta e sete espécimes diagnosticados como CECOF e a expressão imuno-histoquímica das proteínas p16 e TLR4 analisadas. Duas linhagens de CECOF HPV16 + e duas CECOF HPV-. foram utilizadas para análise da expressão de TLR1-10, IL-6 e IL-8, por qPCR. A detecção dos principais TLRs (TLR1, TLR2, TLR6 e TLR4) foi feita por citometria de fluxo. Para ativação da via de sinalização de TLR2, e posterior análise da expressão de IL6 e IL8, as células foram estimuladas com peptidoglicano. Para verificar a expressão e função de TLR4, as células foram estimuladas com LPS e LPS UP para posterior análise de IL-6 e IL-8, por ELISA. Os resultados demonstraram diferenças na expressão gênica de TLR1 e TLR6 entre as linhagens HPV- e o grupo HPV+ e diferenças na expressão proteica de TLR9. TLR2 apresentou aumento da expressão proteica em todas as linhagens e demonstra desencadeamento da resposta imune, com secreção de IL6 e IL8 nas linhagens HPV- (SCC72 e SCC89) e em uma das linhagens HPV+ (SCC2). Interessantemente, TLR4 não apresentou diferenças significativas na expressão gênica e proteica. Entretanto, as linhagens HPV+ não demonstraram resposta pró-inflamatória mesmo quando estimuladas com LPS e LPS ultra puro, agonista específico de TLR4. Assim, este trabalho contribui para estabelecer o perfil da expressão dos receptores Toll-like em linhagens celulares de CECOF HPV- e HPV+, e aponta para alterações ocorridas na via de sinalização mediada por TLR4. Além disso, nossos resultados abrem portas para futuros estudos na avaliação de alterações causadas no sistema imune inato pelo HPV, em carcinomas espinocelulares de orofaringe. / The incidence of HPV- associated oropharynx squamous cell carcinoma (OPSCC) has increased in recent years. HPV- associated OPSCC has a better prognosis than OPSCC not infected with HPV. In cervical carcinoma, HPV oncoproteins E6 and E7 influence the expression of Toll-like receptors (TLR). To date, 10 TLRs have been identified in humans and many are important for the detection of bacteria, fungi and viruses, as well as regression and tumor promotion. This influence of TLR in carcinogenesis has been the subject of numerous studies, due to the connection between inflammation and cancer. This study aimed to determine differences in the expression and function of Toll-like receptor in OPSCC. Thirty-seven tumours were selected and immunohistochemistry for p16 and TLR4 was performed. Two HPV16-associated OPSCC and two OPSCC not associated to HPVcell lines were used. qPCR was performed to analyze the expression of TLR1-10, IL-6 and IL-8. The detection of the main TLRs (TLR1, TLR2, TLR6 and TLR4) was performed by flow cytometry. For activation of the TLR2-signaling pathway and subsequent analysis of IL6 and IL8 expression, cells were stimulated with peptidoglycan. To verify the expression and function TLR4 cells were stimulated with LPS and LPS UP and subsequent analysis of IL-6 and IL-8 by ELISA. The results showed differences in the expression of TLR1 and TLR6 between the HPV- group and the HPV+ group and differences in protein expression of TLR9. TLR2 has increased protein expression in all cell lines and demonstrates the trigger of the immune response, with the secretion of IL6 and IL8 in HPV- cell lines (SCC72 and SCC89) and one HPV+ cell line (SCC2). Interestingly, TLR4 showed no significant differences in gene and protein expression. However, HPV+ cell lines showed no pro-inflammatory response even when stimulated with LPS and LPS UP, a specific agonist of TLR4. This work helps to establish the profile of the expression of Toll-like receptors in OPSCC (SCC72 and SCC89) and HPV- associated OPSCC (SCC2 and SCC90), in vitro, and points to changes in the signaling pathway mediated by TLR4. In addition, our results open new avenues for future studies to assess changes in the innate immune system caused by HPV in oropharynx carcinomas.
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Célula muscular esquelética resistente à insulina apresenta resposta alterada à IL-6 no metabolismo de carboidrato, mas não no de lipídio. / Insulin-resistant skeletal muscle cell shows altered response to IL-6 on carbohydrate metabolism but not on lipid metabolism.Guimarães, Daniella Esteves Duque 23 March 2012 (has links)
A interleucina-6 (IL-6) é uma citocina com dupla função na sensibilidade à insulina. O objetivo desse estudo foi investigar o efeito da IL-6 durante 1 e 24 horas no metabolismo de células musculares resistentes à insulina. Em células de indivíduos saudáveis, 1 hora de exposição à IL-6 aumentou a síntese de glicogênio e a captação de glicose além de pJAK2 e pSTAT3, mas não em células de diabéticos tipo 2. Diferentemente, a IL-6 aumentou a oxidação de ácido graxo em ambos os grupos. Por outro lado, em células musculares da linhagem L6, a IL-6, em 24 horas, reduziu a síntese de glicogênio e a captação de glicose em condições normais, mas não em células resistentes à insulina. Além de reduzir pJak2, pStat3 e pAkt. A IL-6 aumentou oxidação de ácido graxo e pACC em ambos os grupos. Sendo assim, células musculares resistentes à insulina apresentam uma resposta alterada ao efeito da IL-6. Nessas células, o efeito dessa citocina está abolido no metabolismo de carboidratos mas permanece efetivo no lipídico. / Interleukin-6 (IL-6) is a cytokine with a dual role in modulating insulin sensitivity. The aim of this study was to investigate the effect of IL-6 exposure for 1 hour and 24 hours on metabolism of insulin-resistant skeletal muscle cells. In muscle cells from healthy subjects, 1 hour of exposure to IL-6 increased glycogen synthesis, glucose uptake, pJAK2 and pSTAT3, which were not observed in muscle cells of type 2 diabetic subjects. In contrast, IL-6 increased fatty acid oxidation in cells from both groups. On the other hand, in skeletal muscle cell line L6, IL-6 for 24 hours reduced glycogen synthesis and glucose uptake in normal conditions, which were not observed in insulin-resistant L6 cells. In addition, pJak2, pStat3 and pAkt were reduced in insulin-resistant cells. In contrast, IL-6 increased fatty acid oxidation and pACC in both groups. Therefore, insulin resistant skeletal muscle cells have an altered response to the effect of IL-6. On these cells, the effect of IL-6 is abolished on carbohydrate metabolism, while remaining effective on lipid metabolism.
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PGC-1 alfa como regulador inflamatório na esteato-hepatite não-alcoólica / PGC-1 alpha in regulating inflammatory in nonalcoholic steatohepatitisBarroso, Wermerson Assunção 22 March 2016 (has links)
A doença hepática gordurosa não-alcoólica (NAFLD, do inglês) é a manifestação clínica hepática da síndrome metabólica, cuja incidência aumenta consideravelmente em todo o mundo. A NAFLD pode progredir para um estado de esteatohepatite não-alcoólica (NASH, do inglês), caracterizado por inflamação hepatocelular, com ou sem fibrose. Dados na literatura mostram que o coativador-1 alfa do receptor ativado por proliferadores de peroxissoma gama (PGC-1alfa), além de estar envolvido em diversos processos metabólicos, representa uma estratégia terapêutica promissora na modulação da inflamação. Neste projeto investigamos as alterações inflamatórias no fígado induzida por dieta hiperlipídica e o papel do PGC-1alfa nesse processo. Camundongos C57black/6 receberam dieta hiperlipídica contendo 30% de gordura por 10 semanas. O peso dos animais foi avaliado semanalmente. Após a eutanásia, o tecido adiposo intra-abdominal (retroperitoneal e periepididimal) foi coletado e pesado. Analisamos o perfil glicêmico e lipídico sérico e expressão de genes envolvidos no metabolismo glicêmico e lipídico. Avaliou-se também o aspecto histológico e a inflamação do tecido hepático por quantificação das citocinas IL-6, TNF-alfa e IL-1beta. A dieta rica em gordura conduziu a um aumento dos depósitos de gordura intra-abdominal, hiperglicemia e hiperlipidemia. Os animais também apresentavam esteatohepatite, com aumento de citocinas pró-inflamatórias e diminuição na expressão de PGC-1alfa no tecido hepático. O envolvimento do PGC-1alfa na produção de mediadores inflamatórios por hepatócitos foi avaliado em células HepG2 utilizando RNA de interferência (RNAi). O knockdown da expressão de PGC-1alfa causou aumento na expressão e liberação de IL-6 em hepatócitos via aumento na fosforilação de IkBalfa e consequente ativação do NFkB. Portanto, nossos dados mostram que o PGC-1alfa inibe a produção de mediadores inflamatórios (IL-6) em hepatócitos, e fornecem novas evidências das conexões existentes entre as vias metabólicas e imunes / Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is the liver clinical manifestation of the metabolic syndrome, whose incidence increases considerably around the world. NAFLD may progress to a state of non-alcoholic steatohepatitis, characterized by hepatocellular inflammation, with or without fibrosis. Data in the literature show that the peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha (PGC-1alfa), a protein involved in various metabolic processes, represents a promising therapeutic strategy in the modulation of inflammation. In this project, we investigate the inflammatory changes in the liver induced by high fat diet and the role of PGC-1alfa in this process. C57black/6 mice were fed a high fat diet containing 30% fat for 10 weeks. The weight of the animals was measured weekly. After euthanasia, the intra-abdominal adipose tissue (retroperitoneal and periepididymal) was collected and weighed. We have analyzed the glycemic and serum lipid profile and expression of genes involved in glucose and lipid metabolism. We also assessed liver morphology by HE staining and inflammation by quantification of the cytokines IL-6, TNF-alfa and IL-1beta. The high fat diet led to an increase in intra-abdominal fat deposits, hyperglycemia and hyperlipidemia. Animals also presented steatohepatitis, an increased proinflammatory cytokines and decreased PGC-1alfa expression in the hepatic tissue. The involvement of PGC-1alfa on inflammatory mediators production by hepatocytes was evaluated in HepG2 cells using RNA interference (RNAi). The knockdown of PGC-1alfa expression caused an increase in IL6 expression and release by hepatocytes via the increase in the IkBalfa phosphorylation and subsequent activation of NFkB. Therefore, our data show that PGC-1alfa inhibits the production of inflammatory mediators (IL-6) in hepatocytes and provide further evidence of the connections between the metabolic and immune pathways
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PGC-1 alfa como regulador inflamatório na esteato-hepatite não-alcoólica / PGC-1 alpha in regulating inflammatory in nonalcoholic steatohepatitisWermerson Assunção Barroso 22 March 2016 (has links)
A doença hepática gordurosa não-alcoólica (NAFLD, do inglês) é a manifestação clínica hepática da síndrome metabólica, cuja incidência aumenta consideravelmente em todo o mundo. A NAFLD pode progredir para um estado de esteatohepatite não-alcoólica (NASH, do inglês), caracterizado por inflamação hepatocelular, com ou sem fibrose. Dados na literatura mostram que o coativador-1 alfa do receptor ativado por proliferadores de peroxissoma gama (PGC-1alfa), além de estar envolvido em diversos processos metabólicos, representa uma estratégia terapêutica promissora na modulação da inflamação. Neste projeto investigamos as alterações inflamatórias no fígado induzida por dieta hiperlipídica e o papel do PGC-1alfa nesse processo. Camundongos C57black/6 receberam dieta hiperlipídica contendo 30% de gordura por 10 semanas. O peso dos animais foi avaliado semanalmente. Após a eutanásia, o tecido adiposo intra-abdominal (retroperitoneal e periepididimal) foi coletado e pesado. Analisamos o perfil glicêmico e lipídico sérico e expressão de genes envolvidos no metabolismo glicêmico e lipídico. Avaliou-se também o aspecto histológico e a inflamação do tecido hepático por quantificação das citocinas IL-6, TNF-alfa e IL-1beta. A dieta rica em gordura conduziu a um aumento dos depósitos de gordura intra-abdominal, hiperglicemia e hiperlipidemia. Os animais também apresentavam esteatohepatite, com aumento de citocinas pró-inflamatórias e diminuição na expressão de PGC-1alfa no tecido hepático. O envolvimento do PGC-1alfa na produção de mediadores inflamatórios por hepatócitos foi avaliado em células HepG2 utilizando RNA de interferência (RNAi). O knockdown da expressão de PGC-1alfa causou aumento na expressão e liberação de IL-6 em hepatócitos via aumento na fosforilação de IkBalfa e consequente ativação do NFkB. Portanto, nossos dados mostram que o PGC-1alfa inibe a produção de mediadores inflamatórios (IL-6) em hepatócitos, e fornecem novas evidências das conexões existentes entre as vias metabólicas e imunes / Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is the liver clinical manifestation of the metabolic syndrome, whose incidence increases considerably around the world. NAFLD may progress to a state of non-alcoholic steatohepatitis, characterized by hepatocellular inflammation, with or without fibrosis. Data in the literature show that the peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha (PGC-1alfa), a protein involved in various metabolic processes, represents a promising therapeutic strategy in the modulation of inflammation. In this project, we investigate the inflammatory changes in the liver induced by high fat diet and the role of PGC-1alfa in this process. C57black/6 mice were fed a high fat diet containing 30% fat for 10 weeks. The weight of the animals was measured weekly. After euthanasia, the intra-abdominal adipose tissue (retroperitoneal and periepididymal) was collected and weighed. We have analyzed the glycemic and serum lipid profile and expression of genes involved in glucose and lipid metabolism. We also assessed liver morphology by HE staining and inflammation by quantification of the cytokines IL-6, TNF-alfa and IL-1beta. The high fat diet led to an increase in intra-abdominal fat deposits, hyperglycemia and hyperlipidemia. Animals also presented steatohepatitis, an increased proinflammatory cytokines and decreased PGC-1alfa expression in the hepatic tissue. The involvement of PGC-1alfa on inflammatory mediators production by hepatocytes was evaluated in HepG2 cells using RNA interference (RNAi). The knockdown of PGC-1alfa expression caused an increase in IL6 expression and release by hepatocytes via the increase in the IkBalfa phosphorylation and subsequent activation of NFkB. Therefore, our data show that PGC-1alfa inhibits the production of inflammatory mediators (IL-6) in hepatocytes and provide further evidence of the connections between the metabolic and immune pathways
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Expressão dos receptores Toll-like em carcinoma espinocelular de orofaringe / Expression of Toll-like receptor in oropharynx squamous cell carcinomaPriscila Lie Tobouti 22 February 2016 (has links)
Nos últimos anos, notou-se aumento da incidência de carcinoma espinocelular de orofaringe (CECOF) associado ao HPV. Sabe-se que CECOF associado ao HPV apresenta melhor prognóstico do que CECOF não infectado por HPV. Inúmeros estudos em carcinoma cervical demonstram alterações de TLRs, isto provavelmente devido às associações das oncoproteínas E6 e E7 com estes receptores. Em humanos, existem 10 TLRs identificados, os quais colaboram na resposta imune contra bactérias, fungos e vírus, bem como colaboram na promoção ou regressão do tumor. Esta influência do TLR na carcinogênese tem sido alvo de inúmeros estudos devido à ligação entre inflamação e o câncer. O presente trabalho teve como objetivo verificar diferenças na expressão e função de receptores Toll-like em carcinoma espinocelular de orofaringe (CECOF). Para tal, foram utilizados trinta e sete espécimes diagnosticados como CECOF e a expressão imuno-histoquímica das proteínas p16 e TLR4 analisadas. Duas linhagens de CECOF HPV16 + e duas CECOF HPV-. foram utilizadas para análise da expressão de TLR1-10, IL-6 e IL-8, por qPCR. A detecção dos principais TLRs (TLR1, TLR2, TLR6 e TLR4) foi feita por citometria de fluxo. Para ativação da via de sinalização de TLR2, e posterior análise da expressão de IL6 e IL8, as células foram estimuladas com peptidoglicano. Para verificar a expressão e função de TLR4, as células foram estimuladas com LPS e LPS UP para posterior análise de IL-6 e IL-8, por ELISA. Os resultados demonstraram diferenças na expressão gênica de TLR1 e TLR6 entre as linhagens HPV- e o grupo HPV+ e diferenças na expressão proteica de TLR9. TLR2 apresentou aumento da expressão proteica em todas as linhagens e demonstra desencadeamento da resposta imune, com secreção de IL6 e IL8 nas linhagens HPV- (SCC72 e SCC89) e em uma das linhagens HPV+ (SCC2). Interessantemente, TLR4 não apresentou diferenças significativas na expressão gênica e proteica. Entretanto, as linhagens HPV+ não demonstraram resposta pró-inflamatória mesmo quando estimuladas com LPS e LPS ultra puro, agonista específico de TLR4. Assim, este trabalho contribui para estabelecer o perfil da expressão dos receptores Toll-like em linhagens celulares de CECOF HPV- e HPV+, e aponta para alterações ocorridas na via de sinalização mediada por TLR4. Além disso, nossos resultados abrem portas para futuros estudos na avaliação de alterações causadas no sistema imune inato pelo HPV, em carcinomas espinocelulares de orofaringe. / The incidence of HPV- associated oropharynx squamous cell carcinoma (OPSCC) has increased in recent years. HPV- associated OPSCC has a better prognosis than OPSCC not infected with HPV. In cervical carcinoma, HPV oncoproteins E6 and E7 influence the expression of Toll-like receptors (TLR). To date, 10 TLRs have been identified in humans and many are important for the detection of bacteria, fungi and viruses, as well as regression and tumor promotion. This influence of TLR in carcinogenesis has been the subject of numerous studies, due to the connection between inflammation and cancer. This study aimed to determine differences in the expression and function of Toll-like receptor in OPSCC. Thirty-seven tumours were selected and immunohistochemistry for p16 and TLR4 was performed. Two HPV16-associated OPSCC and two OPSCC not associated to HPVcell lines were used. qPCR was performed to analyze the expression of TLR1-10, IL-6 and IL-8. The detection of the main TLRs (TLR1, TLR2, TLR6 and TLR4) was performed by flow cytometry. For activation of the TLR2-signaling pathway and subsequent analysis of IL6 and IL8 expression, cells were stimulated with peptidoglycan. To verify the expression and function TLR4 cells were stimulated with LPS and LPS UP and subsequent analysis of IL-6 and IL-8 by ELISA. The results showed differences in the expression of TLR1 and TLR6 between the HPV- group and the HPV+ group and differences in protein expression of TLR9. TLR2 has increased protein expression in all cell lines and demonstrates the trigger of the immune response, with the secretion of IL6 and IL8 in HPV- cell lines (SCC72 and SCC89) and one HPV+ cell line (SCC2). Interestingly, TLR4 showed no significant differences in gene and protein expression. However, HPV+ cell lines showed no pro-inflammatory response even when stimulated with LPS and LPS UP, a specific agonist of TLR4. This work helps to establish the profile of the expression of Toll-like receptors in OPSCC (SCC72 and SCC89) and HPV- associated OPSCC (SCC2 and SCC90), in vitro, and points to changes in the signaling pathway mediated by TLR4. In addition, our results open new avenues for future studies to assess changes in the innate immune system caused by HPV in oropharynx carcinomas.
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Avaliação clínica, microbiológica, imunológica e genética em pacientes com implantes osseointegradosMelo, Rafaela Fernanda [UNESP] 16 September 2009 (has links) (PDF)
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melo_rf_dr_arafo.pdf: 606373 bytes, checksum: 12056dceba1a7f6dbd020e29b732d781 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi o de avaliar possíveis interações clínicas, microbiológicas, imunológicas e genéticas que possam influenciar o sucesso de implantes osseointegrados. Foram avaliados 47 implantes, em 47 pacientes, sendo 31 em condições de saúde (G I) e 16 com perimplantite (G II) e 47 dentes, dos quais 31 estavam sadios e eram dos pacientes com implantes sadios (G III) e 16 dentes sadios dos pacientes com perimplantite (G IV). Foi realizado exame clínico completo em todos os implantes e dentes selecionados. Amostras de fluido crevicular perimplantar/gengival do sítio com maior profundidade de sondagem foram coletadas. A avaliação das bactérias A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, P. intermedia, P. nigrescens e T. forsythia foi realizada pela técnica de PCR e, a quantificação das citocinas IL-1β e IL-6 foi realizada pelo teste ELISA. Células da mucosa bucal foram coletadas para avaliação dos polimorfismos IL1B+3954, IL1B-511 e IL6-174. A avaliação estatística dos parâmetros clínicos SS, SUP, PS e NI revelaram que os implantes do grupo G II apresentaram piores condições clínicas em comparação ao grupo G I. O grupo G II também apresentou piores condições clínicas que o grupo G IV para PS e NI. A análise microbiológica revelou que a bactéria A. actinomcetemycomitans não estava presente em nenhum sítio avaliado. P. intermedia também não foi encontrada no grupo G II. As bactérias estudadas apresentaram proporções semelhantes em todos os grupos avaliados, não havendo diferença entre os grupos. Na análise da concentração de IL-1β e IL-6, não houve diferenças significativas entre os grupos. A população estudada está em Equilíbrio de Hardy-Weinberg. Os polimorfismos estudados não demonstraram predominância dos alelos e dos genótipos. Nenhum polimorfismo foi associado à condição de doença. / The aim of the present study was to evaluate clinical, microbiological, immunological and genetics parameters in patients with implant loaded at least for one year. It was examined 47 implants and teeth in 47 patients. Thirty one of those implants were healthy implants (G I), sixteen had peri-implantits (G II) and, 31 healthy teeth was from patients with healthy implants (G III) and 16 healthy teeth from patients with peri-implantits (G IV). Clinical parameters were recorded from all implants and teeth. Gingival crevicular fluid from the highest pocket depth was collected to evaluate the presence of A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, P. intermedia, P. nigrescens e T. ForsythiaI and to evaluate the concentration of interleukin-1β and interleukin-6. Cells from buccal mucosa were collected for genomic DNA extraction and analyze the polymorphism IL-1B +3954, IL-1B -511 e IL-6 -174. G II demonstrated worst results for PD, BPD, Sup and NI when compared to G I and, when compared with G IV it was worst for PD and NI. Microbiological did not detect A. actinomycetemcomitans in any of the sites analysed and, P. intermedia was not detected in G II. Bacteria analyzed was present in same proportion in all analyzed sites showing, no differences between groups. There was no difference in the concentration of IL-1β an IL-6 detected between groups. The population studied was in Hardy-Weinberg Equilibrium. There was no differences in the alleles and polymorphism distribution on the studied population.
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Reação tecidual e detecção de Interleucina-6 promovida por cimentos à base de silicato de cálcio no subcutâneo de ratos / Tissue reaction and detection of interleukin-6 promoted by calcium silicate based sealers in rat subcutaneousSaraiva, Juliana Alcarás [UNESP] 15 March 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-03-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi avaliar a reação tecidual promovida pelos cimentos endodônticos MTA Plus e MTA Fillapex em comparação ao AH Plus, usado como padrão “ouro”, e ao Endofill, considerado como controle positivo, no subcutâneo de ratos. Foram utilizados 100 animais e em cada foi inserido no tecido subcutâneo dorsal um tubo de polietileno preenchido com MTA Plus, MTA Fillapex, AH Plus, Endofill ou vazio (grupo controle). Após 7, 15, 30 e 60 dias, os tubos implantados e os tecidos circundantes foram removidos, fixados e incluídos em parafina. Nos cortes corados com HE, a densidade de volume de células inflamatórias (VvCI) e fibroblastos (VvFb) foi estimada nas cápsulas. Imuno-histoquímica para detecção de interleucina-6 (IL-6) foi realizada e a densidade numérica de células imunopositivas foi computada. O conteúdo de colágeno birrefringente nas cápsulas foi quantificado nos cortes corados com picrosirius e analisados sob luz polarizada. Os dados foram analisados pelo ANOVA e teste de Tukey (p≤0,05). Aos 7 dias, as cápsulas apresentaram reação inflamatória moderada. Em todos os grupos, a VvCI e as células imunopositivas para IL-6 reduziram significantemente de 7 para 60 dias. Aos 60 dias, o número de células imunopositivas para IL-6 foi significantemente reduzido nos grupos MTA Plus e MTA Fillapex em comparação ao AH Plus; diferenças significantes na VvCI entre MTA Plus, MTA Fillapex, AH Plus e grupo controle não foram observadas, enquanto que o Endofill exibiu a maior VvCI. A redução da VvCI foi paralela ao aumento do conteúdo de colágeno nas cápsulas de todos os grupos, exceto no Endofill. Portanto, o MTA Plus, MTA Fillapex e AH Plus induziram uma resposta que culmina na regressão da inflamação e formação de uma cápsula fibrosa com o decorrer do tempo. Considerando que a imunoexpressão para IL-6 reduziu significativamente nos grupos MTA Plus e MTA Fillapex, é possível sugerir que estes cimentos endodônticos possam favorecer a regressão da lesão periapical. / We evaluated the tissue reaction promoted by MTA Plus, MTA Fillapex, AH Plus and Endofill in the rat subcutaneous. Polyethylene tubes filled with MTA Plus, MTA Fillapex, AH Plus or Endofill were implanted in the rat subcutaneous. In the control group (CG), empty tubes were implanted. After 7, 15, 30 and 60 days, the tubes surrounded by connective tissue were paraffin-embedded. In HE-stained sections, the volume density of inflammatory cells (VvIC) and fibroblasts (VvFb) was estimated in the capsules. Immunohistochemistry (IH) for interleukin-6 (IL-6) was performed, and the number of IL-6-immunolabeled cells was obtained. The birefringent collagen content was quantified in picrosirius-red-stained sections under polarized light. Data were analyzed by ANOVA and Tukey tests (p≤0.05). At 7 days, capsules showed moderate inflammatory reaction, and VvIC and IL-6-immunolabeled cells were similar either in the capsules adjacent to the sealers or in CG. In all groups, VvIC and IL-6 IH reduced significantly from 7 to 60 days. At 60 days, IL-6 IH was reduced significantly in MTA Plus and MTA Fillapex in comparison to AH Plus; no difference was found in the VvIC among MTA Plus, MTA Fillapex, AH Plus and CG whereas Endofill exhibited the highest VvIC. The reduction in VvIC was parallel to an increase in the collagen content in the capsules of in all groups, except Endofill. MTA Plus, MTA Fillapex and AH Plus induce a response that culminates in the regression of inflammation and formation of a fibrous capsule over time. Considering that IL-6 immunoexpression significantly reduced in the MTA Plus and MTA Fillapex groups, it is possible to suggest that these endodontic sealers may favor the regression of the periapical lesion.
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