ACIOLI, Porfírio Cezar Passos. Efeitos da acupuntura e da eletroacupuntura sobre o estresse oxidativo e a inflamação decorrentes da torção/distorção do testículo em ratos. 2014. 68 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-08-19T13:51:40Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-08-19T13:52:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-19T13:52:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) Previous issue date: 2014 / The efects of acupuncture (Ac) and Electroacupuncture (EAc) were evaluated using an experimental rat model of ischemia/reperfusion (IR) of the testis. In Traditonal Chinese Medicine, these forms of therapies are used in the promotion of organic equilbrium, through stimulation of specifc neurotransmiters producing nerve pathways, resulting in a analgesic and anti-nflammatory autonomic regulatory. response. In the study, 30 male Wistar rats, 279.6g average weight (230-30 g) were randomly divided into five groups. Al rats received intraperitoneal anesthesia (Ketamine 10 90mgKgXilazina mgKg), at the begining of the experiment, before the detorsion and at the end of the experiment. G1 group was submited to torsion of the testicle (TT), two complete turns (720º) with immediate detorsion (sham). The other groups (G2IR, G3Ac, G4EAc2 and G5EAc10) were submited to TT during 3 hours, folowed by detorsion and reperfusion during 4 hours. Five minutes before the detorsion Ac (G3Ac) or EAc (G4EAc2, G5EAc10) was aplied, under anesthesia, for 5 minutes. Next the testis was detorsioned and reperfused for 4 hours. At the end blod samples the right testicle were colected. Evaluated parameters included determination of reduced Glutathione (GSH), Malonaldehyde (MDA), Myeloperoxidase (MPO) and histopathology of the testicle. EAc (2 and 10 Hz) promoted signifcant increase in concentrations of GSH in plasma and in the rat estis of G4-G5, compared to the control G1. Ac did not alter signifcantly the concentrations of GSH in the G3 group compared to the G1. There was signifcant increase of MDA in tisue in groups G4-G5 and plasma MDA in al groups, compared to the G1. EAc (2 Hz and 10 Hz) signifcantly decreased the activity of MPO in the testis of rats subjected to TT (G4-G5), compared to the control G1. No signifcant diferences were observed in the activity of MPO comparing groups G4-G5 to group G1. It is concluded that EAc stimulation (2 and 10 Hz) atenuates oxidative stres and inflammatory response in rats subjected to testicular torsion/detorsion. / Os efeitos da Acupuntura (Ac) e da Eletroacupuntura (EAc) foram avaliados utilzando um modelo experimental de isquemia/reperfusão (I/R) do testículo em rato. Na Medicina Tradicional Chinesa, esas formas de terapias são utilzadas na promoção do equilíbrio orgânico, mediante estímulo de vias nervosas produtoras de neurotransmisores específicos, resultando em uma resposta anti-nflamatória, analgésica e reguladora autonômica. No experimento, 30 ratos Wistar machos, peso médio 279,6 g (230-30g) foram distribuídos aleatoriamente em cinco grupos. Todos os ratos receberam anestesia intraperitonial (Cetamina 90mg/Kg+Xilazina 10 mg/Kg), no inicio do experimento, antes da destorção e ao término do experimento. O grupo G1 foi submetido à torção do testículo (TT), duas voltas completas (720º) com imediata destorção (sham). Os demais grupos (G2IR, G3Ac, G4EAc2 e G5EAc10) foram submetidos à TT durante 3 horas, seguido de destorção e reperfusão durante 4 horas. Cinco minutos antes da destorção procedeu-se à aplicação da Ac (G3Ac) ou EAc (G4EAc2, G5EAc10), sob anestesia por 5 minutos. Findo ese tempo realizou- se à destorção do testículo e permitu-se a reperfusão por 4 horas. Ao término foram coletadas amostras de sangue arterial e de tecido (testículo direito). Parâmetros avaliados incluíram determinação de Glutationa (GSH) reduzida, Malonaldeído (MDA), Mieloperoxidase (MPO) e histopatologia do testículo. A EAc (2 e 10Hz) promoveu aumento signifcante nas concentrações de GSH no plasma e no testículo dos ratos dos grupos G4-G5, comparados ao controle G1. A Ac não alterou signifcativamente as concentrações de GSH no grupo G3 comparado ao G1. Houve aumento signif cante do MDA tecidual nos grupos G4-G5 e do MDA plasmático em todos os grupos, comparados ao G1. A EAc (2Hz e 10Hz) diminuiu signifcativamente a atividade da MPO no testículo dos ratos submetidos à torção do testículo (grupos G4-G5), comparados ao controle G1. Não foram observadas diferenças signifcantes na atividade da MPO comparando-se os grupos G4-G5 ao grupo G1. Conclui-se que a aplicação de EAc de 2/10Hz promove proteção local e sistêmica sobre o estrese oxidativo e diminuição da resposta inflamatória em ratos sadios submetidos a torção/destorção do testículo.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2015-06-02T04:09:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333892.pdf: 1813800 bytes, checksum: 65c3b590b1332ae1fa1e5346ae3530bf (MD5) Previous issue date: 2015 / As doenças vasculares cerebrais isquêmicas representam uma importante causa de mortalidade no Brasil e no mundo, sendo ainda responsáveis por consideráveis índices de morbidade. A diminuição do fluxo sanguíneo para o encéfalo ocasiona a ativação de diferentes vias bioquímicas e celulares que resultam em danos celulares através da toxicidade causada, principalmente, pelo acúmulo de glutamato na fenda sináptica. Uma das organelas celulares que é afetada pela isquemia cerebral é a mitocôndria, devido ao aumento dos níveis de espécies reativas de oxigênio e de nitrogênio, ocasionando estresse oxidativo, despolarização da membrana mitocondrial e interrupção da síntese de ATP. Estes eventos resultam em diminuição do fornecimento energético para a célula e liberação de fatores pró-apoptóticos, podendo levar à morte celular. Nos últimos anos, nosso grupo de pesquisa tem estudado os efeitos da guanosina, um nucleosídeo endógeno, como agente neuroprotetor durante eventos de isquemia/reoxigenação cerebral. Desta forma, o objetivo deste estudo foi investigar o efeito neuroprotetor da guanosina sobre o dano oxidativo e bioenergético em fatias de hipocampo de ratos submetidas à privação de glicose e oxigênio seguida por reoxigenação, um modelo de isquemia cerebral in vitro. Também avaliamos se os mecanismos de proteção promovidos pela guanosina dependem da atividade das enzimas óxido nítrico sintase. Nossos resultados demonstraram que a guanosina proporcionou neuroproteção para fatias de hipocampo de ratos submetidas à isquemia in vitro, impedindo o aumento da produção de espécies reativas de oxigênio e de nitrogênio, dentre estas de óxido nítrico e peroxinitrito; preveniu a perda do potencial de membrana mitocondrial e reverteu a queda dos níveis de ATP e de lactato ocasionado pela isquemia. Também observamos que o uso de inibidores das enzimas óxido nítrico sintase, principalmente da isoforma neuronal desta enzima, fornecem proteção celular para o tecido isquêmico, similar ao observado com a guanosina. No entanto, o efeito neuroprotetor da guanosina não depende diretamente da atividade das enzimas óxido nítrico sintase. De maneira geral, os resultados obtidos neste trabalho contribuem para o entendimento da neuroproteção promovida pela guanosina e o efeito das enzimas óxido nítrico sintase na isquemia cerebral experimental.<br> / Abstract: Ischemic cerebrovascular diseases are among the major causes of mortality in Brazil and in the world, and they are also responsible for considerable rise in morbidity. The decreased blood flow to the brain causes the activation of different biochemical pathways in the cell, resulting in damage through the toxicity caused mainly by an accumulation of glutamate in the synaptic cleft. Mitochondria is one of the cell organelles that is most affected by cerebral ischemia due to increased levels of reactive oxygen and nitrogen species, causing oxidative stress, loss of the mitochondrial membrane potential and disruption of ATP synthesis. These events may lead to cell death, since energy supply will be decreased and pro-apoptotic factors will be released. In recent years, our research group has studied the effects of guanosine, an endogenous nucleoside, as a neuroprotective agent during cerebral ischemia/reoxygenation events. Thus, the aim of this study was to investigate the neuroprotective effect of guanosine on oxidative damage and bioenergetics in hippocampal slices of rats subjected to oxygen and glucose deprivation (OGD) followed by reoxygenation, a model of cerebral ischemia in vitro. We also assess whether the protection promoted by guanosine depends on the activity of the enzymes nitric oxide synthase. Our results demonstrated that guanosine provided neuroprotection to hippocampal slices of rats subjected to OGD, preventing the increased production of reactive oxygen and nitrogen species. Guanosine also prevented the loss of mitochondrial membrane potential and reversed the fall in ATP and lactate levels caused by ischemia. The use of inhibitors of nitric oxide synthase enzymes, especially the neuronal isoform of this enzyme, provides cellular protection for ischemic tissue, which was similar to that seen with guanosine. However, the neuroprotective effect of guanosine does not depend on the activity of nitric oxide synthase. The results obtained in this study contribute to the understanding of the effects of guanosine and the nitric oxide synthase enzymes in experimental cerebral ischemia.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:49:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 juliana_borges_ioc_dout_2014.pd: 2349301 bytes, checksum: b550a4f2f1d76e63939f364df742e2b7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Sabe-se que o exercício físico agudo reduz a lesão tecidual e a morte celular decorrentes de eventos de isquemia e reperfusão (IR) e infarto agudo do miocárdio. Porém, os mecanismos envolvidos nessa resposta cardioprotetora não são claros. Evidências recentes indicam que os receptores opióides podem estar envolvidos nesse processo. No entanto, além de não se saber especificamente o subtipo de receptor opióide envolvido, são escassos estudos que se debruçaram sobre a relação entre a cardioproteção induzida pelo exercício e opióides. Dessa forma o objetivo da tese foi investigar a participação dos receptores opióides e seus subtipos na cardioproteção induzida pelo exercício físico aeróbio após lesão de IR em ratos. Além disso, buscou-se estabelecer de que forma outros possíveis mecanismos estariam relacionados com a cardioproteção. Para tal, ratos wistar foram submetidos a dois protocolos de isquemia reperfusão: in vivo e ex vivo (Langendorff). Em ambos os protocolos, animais realizaram 4 sessões de exercício físico (60 min/sessão a 70% do VO2máx). Foram medidos os parâmetros hemodinâmicos, área de infarto, densidade capilar estrutural, a expressão proteica de cada subtipo de receptor opióide, e a expressão gênica da capacidade antioxidativa e da proteína de choque térmico 72 (HSP 72). Foi verificado tanto no protocolo ex vivo quanto no in vivo, que o grupo que se exercitou apresentou menor área de infarto e melhor função hemodinâmica comparado ao grupo controle Após o tratamento com naloxona, um antagonista não \2013 seletivo para receptores opióides, o efeito cardioprotetor do exercício foi parcialmente bloqueado. Além disso, no protocolo in vivo, foi demonstrado que o exercício não alterou a densidade capilar estrutural do ventrículo esquerdo e a expressão gênica de enzimas antioxidantes, medida através de RT-PCR quantitativo. Os níveis de RNAm de HSP 72 estavam reduzidos no grupo exercitado. Foi verificado também que o bloqueio farmacológico dos receptores opióides delta, mas não do kappa e do mu, aboliu o efeito cardioprotetor do exercício físico. No entanto, a expressão proteica dos receptores opióides delta e kappa do grupo exercitado estavam reduzidas em relação ao grupo controle. Em conclusão, nossos resultados sugerem que mesmo poucas sessões de exercício físico podem proporcionar cardioproteção contra lesões por IR, que não está relacionada a angiogênese, aumento na expressão gênica miocárdica de HSP 72 e enzimas antioxidantes, mas sim ao sistema de opióides, e mais especificamente aos receptores delta / t is known that acute exercise reduces tissue dama ge and cell death resulting from events of ischemia and reperfusion (IR) and acute myocardial infarction. H owever, the mechanisms involved in this cardioprote ctive effect are unclear. Recent evidences indicate that opioid receptors may be involved in this response. Nevertheless, besides not knowing specifically what subtype of opioid receptor are associated to cardioprotection, there are few studies which have examined the relationship between exercise-induced cardioprotection and opioids. So, the objective of the thesis was to investigate the involvement of op ioid receptors and its subtypes in exercise-induced card ioprotection after IR injury in rats. Furthermore, w e aimed to establish how other possible mechanisms would be re lated to cardioprotection. To do so, wistar rats were submitted to two different protocols of IR: in vivo and ex vivo (Langendorff). In both, animals performed 4 sessions of aerobic exercise (60 min/session at 70% of VO 2max ). Hemodynamics, infarct size, structural capillary density, protein expression of each opioid receptor subtype and gene expression of antioxidant capacit y and heat shock protein 72 (HSP 72) were measured. It was obs erved in both in vivo and ex vivo protocols that the exercised group presented significant smaller infarc t size and greater hemodynamic function compared to control group. After the treatment with naloxone, a non-sel ective opioid receptor antagonist, the cardioprotect ive effect of exercise was partially annulled. Furthermore, in vivo protocol showed that exercise did not alter left ve ntricle structural capillary density and gene expression of antioxidant enzymes, measured through quantitative RT-PCR. The HSP 72 mRNA levels were reduced in exercised gr oup. It was also shown that pharmacological blockad e of delta opioid receptors, but not kappa and mu, aboli shed the exercise-induced cardioprotection. However , protein expression of delta and kappa opioid receptors in e xercised group was significant reduced compared to control group. In conclusion, our results suggest that even short-term aerobic exercise promotes cardioprotect ion against IR injury, which is not associated to angiogenesis, increased myocardial gene expression of HSP 72 and antioxidant enzymes, but to opioid system, and more sp ecifically to delta opioid receptors.

BARROS, Marcos Aurélio Pessoa. Pré-condicionamento com l-alanil glutamina sobre o estresse oxidativo e inflamação em enxertos de pacientes submetidos ao transplante de fígado. 2014. 103 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-02-13T12:18:43Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_mapbarros.pdf: 1202243 bytes, checksum: 10cb5a26f17e7179755aa6a7fce52c26 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-02-13T12:20:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_mapbarros.pdf: 1202243 bytes, checksum: 10cb5a26f17e7179755aa6a7fce52c26 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-13T12:20:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_mapbarros.pdf: 1202243 bytes, checksum: 10cb5a26f17e7179755aa6a7fce52c26 (MD5) Previous issue date: 2014 / In liver transplantation, ischemia/reperfusion may cause serious injury to the graft. The aim of this study was to evaluate the effects of preconditioning with L-alanyl-glutamine in graft protection in patients undergoing liver transplantation. 33 patients undergoing liver transplantation at the Walter Cantídio University Hospital (HUWC) of the Federal University of Ceará (UFC), from 05/22/13 to 12/11/2013 were evaluated. A prospective, double-blind, divided into two groups was performed. In glutamine group was administered 50 g of L-alanyl glutamine, 40 minutes before the start of cold ischemia, the control group, saline solution was administered. Donor age, degree of graft steatosis, warm ischemia time (WIT), cold ischemia time (CIT), MELD score, graft survival, and receptor mortality were evaluated. Graft biopsies were performed at the beginning of donor surgery at the beginning of warm ischemia and at the end of transplantation. With these samples, MDA (malondialdehyde), HSP70, NFkB, SOD and glutathione were measured. In multiple organ donor, were measured AST, ALT, bilirubin and INR. The same parametheas in the receiver, were measured on admission in the hospital at the beginning of warm ischemia, at the end of transplantation in the 1st postoperative day (POD), in the 3 rd, the 5th, on the 7th and 30th POD. There was no difference between the two groups with respect to donor age, receiver age, CIT, WIT, MELD and degree of steatosis. The results of serum tests were similar in both groups. In the Glutamine group, MDA in the grafting did not increase at the beginning of warm ischemia and impairment occurred at the end of transplantation. This phenomenon did not occur in the control group. Glutathione, SOD, HSP70, NFkB were similar in both groups. This study suggests that preconditioning with glutamine minimizes the effects of oxidative stress caused by ischemia and reperfusion, with decreased lipid peroxidation in the graft of patients undergoing liver transplantation. / No transplante hepático, a lesão de isquemia / reperfusão pode ocasionar severo dano ao enxerto. O objetivo deste estudo é avaliar os efeitos do pré-condicionamento com L-alanil-glutamina na proteção do enxerto nos pacientes submetidos ao transplante de fígado. Foram avaliados 33 pacientes submetidos a transplante hepático no Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC) da Universidade Federal do Ceará (UFC), no período de 22/05/13 à 11/12/2013. Foi realizado um estudo prospectivo, duplo cego, com dois grupos. No grupo glutamina, foram administrados 50 gramas de L-alanil glutamina, por injeção direta na veia porta dos doadores, 40 minutos antes do início da isquemia fria e no grupo controle, foi administrada solução salina. Foram avaliados a idade do doador, grau de esteatose do enxerto, tempo de isquemia quente (TIQ), tempo de isquemia fria (TIF), escore MELD, sobrevida do enxerto e mortalidade operatória do receptor. Biopsias do enxerto foram realizadas no início da cirurgia do doador, no início da isquemia quente e no final do transplante. Com essas amostras, foram dosados as concentrações hepáticas de MDA (malanodialdeído), HSP70, NFkB, SOD e glutationa. No doador de múltiplos órgãos, foram dosados no sangue, AST, ALT, INR e bilirrubinas. No receptor, foram dosados no sangue, AST, ALT, INR e bilirrubinas, na admissão no hospital, no início da isquemia quente, no final do transplante, no 1º dia pós-operatório (PO), no 3º PO, no 5º PO, no 7º PO e no 30º PO. Não houve diferença entre os dois grupos com relação à idade do doador, idade do receptor, TIQ, TIF, MELD e grau de esteatose. Os resultados dos exames séricos foram semelhantes nos dois grupos. No grupo glutamina, MDA no enxerto, não apresentou diferença no início da isquemia quente, entretanto, ocorreu diminuição no final do transplante. Esse fenômeno não ocorreu no grupo controle. A glutationa, SOD, HSP70, NFkB foram semelhantes nos dois grupos. Este estudo sugere que o pré-condicionamento com L-Alanil glutamina miniminiza os efeitos do estresse oxidativo causados pela isquemia e reperfusão, com a redução da peroxidação lipídica no enxerto dos pacientes submetidos ao transplante hepático.

GALVÃO, Rita Izabel Monteiro. Tenoxicam: uma possível alternativa terapêutica no tratamento das doenças vasculares cerebrais isquêmicas. 2003. 157 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2003. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-14T12:19:39Z No. of bitstreams: 1 2003_dis_rimgalvão.pdf: 3624979 bytes, checksum: 846d0a046b715db04fd6a582cdf17909 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-14T16:02:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2003_dis_rimgalvão.pdf: 3624979 bytes, checksum: 846d0a046b715db04fd6a582cdf17909 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-14T16:02:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2003_dis_rimgalvão.pdf: 3624979 bytes, checksum: 846d0a046b715db04fd6a582cdf17909 (MD5) Previous issue date: 2003 / The present work shows effects of tenoxicam (TXC ) in rats submitted to transient cerebral ischemia. Male aged Wistar rats (250-450g) were submitted to the both common carotid arteries occlusion with aneurysmal clips to induce ischemia. At the end of 45 min of bilateral carotid arteries occlusion (BCAO), blood flow was restored by releasing the clips and the incision was closed with a single suture. After 1h or 24h of reperfusion, the rats were decapitated, brains dissected and hippocampi removed for measurements of MPO activity, nitrite , monoamine , glutamate/aspartate, ATP, lactate and piruvate levels. The animals were divided in 5 groups (N=4-10): 1) sham-operated, 2) BCAO, 3) BCAO + TXC 2.5mg/kg, 4) BCAO + TXC10mg/kg and 5) sham-operated + TXC 10mg/kg . The TXC administration was made after 45 minutes of BCAO. The histological analysis were made and showed significant changes on group 2 in comparison with group 1 (p<0.05, Kruskal-Wallis and Dunn’ test). The use of TXC showed a tendency of decrease these alterations. The MPO activity in the group 2 was significantly greater than that in the group 1 (p< 0.0001, ANOVA and Tukey). The treatment with TXC reduced the MPO activity to control levels (p<0.0001, ANOVA and Tukey). There was increased levels of nitrite in the group 2 in comparison with group 1 (p<0.05), and the treatment with TXC failed to attenuate the ischemic levels. The hippocampal levels of DA were increased after ischemia when compared with group 1 (p<0.01, Anova e Dunnett ) and were reverted with TXC in both doses (p<0.01, Anova e Dunnett). Hippocampal level from group 2 of both glutamate and aspartate were higher than group 1 (p < 0.05 , ANOVA , Dunnett’s Test). Ischemia-induced elevations in glutamate and aspartate were not attenuated with TXC . The ATP levels have showed decreases in the group with 1 h of reperfusion in comparison with 24 h . The lactate levels were increased in the 24 h reperfusion’s group in relation of 1 h. These results indicated more metabolic damage in aged rats. So, the neuroprotective role of TXC is possibly through the anti-inflammatory action with inhibition of cyclooxygenase activity, and interfering on the inflammatory process of post-ischemic reperfusion. The TXC, therefore, could be a possible therapeutic alternative on stroke treatment like an adjunct drug associated with, for example, a thrombolitic. / O presente estudo avaliou a possível proteção do tenoxicam ( txc ), um antiinflamatório não esteróide, em um modelo experimental de isquemia-reperfusão. Foram utilizados ratos machos com idade acima de 1 ano Wistar (200-450g), submetidos à oclusão das artérias carótidas comuns por 45 min e decapitados 1h ou 24 h após a isquemia, para a retirada do cérebro e dissecção dos hipocampos . Os animais foram divididos em 5 grupos : 1) Isquemia ; 2) Isquemia + txc 2,5mg/Kg IP; 3) Isquemia + txc 10mg/Kg IP ; 4) Controle falso-operado e 5) controle + txc 10 mg/kg I.P. A análise histológica revelou alteração significativa no grupo 1 em relação ao 4 usando-se uma escala de escores variando de 0 a 3. O uso do txc revela uma tendência para reversão das lesões. A atividade da enzima mieloperoxidase mostrou aumento significativo no grupo 1 em relação ao 4 revertidos para valores de controle com o uso de dose única de txc (2,5 ou 10 mg/kg, i.p.). Os níveis de nitrito também aumentaram no grupo 1 e com o uso do txc houve tendência para atenuação desses valores. Houve aumento nos níveis de dopamina no grupo 1 que foi revertido com o uso do txc em ambas as doses . Os níveis de glutamato se elevaram no grupo 1 mesmo após 24 h de reperfusão que sugere um maior dano da excitotoxicidade nos animais idosos. Os níveis de ATP na reperfusão por 1 h foram inferiores em relação aos de 24 h, refletindo ainda lesão mesmo no início da reperfusão. Os níveis de lactato aumentaram nos grupos 3 e 5 reperfundidos por 24 h em relação aos de 1 h , sugerindo maior dano metabólico nos animais idosos. Os níveis de piruvato diminuíram na reperfusão por 24 h em relação aos de 1 h, refletindo uma normalização da atividade da enzima piruvato-desidrogenase, restabelecendo a taxa metabólica desse substrato. O possível papel neuroprotetor do txc na reversão dos danos secundários à reperfusão na lesão isquêmica é associado à sua ação anti-inflamatória, inibindo a atividade da COX e reduzindo a cascata inflamatória desencadeada no processo isquêmico, com redução da infiltração de células inflamatórias, inibição indireta da produção de citocinas e quimocinas e redução da produção de radicais livres e lesão neuronal. O txc pode ser portanto uma possível alternativa no tratamento de doenças vasculares cerebrais isquêmicas, como uma terapia adjuvante por exemplo ao uso de trombolíticos.

CAMPELO, Marcio Wilker Soares. Pré-condicionamento com nitrosil rutênio promove neuroproteção cerebral envolvendo proteína quinase em ratos in vivo. 2015. 141 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-07T15:32:50Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_mwscampelo.pdf: 2314614 bytes, checksum: 20fbc0cb698fb89be1c2e8a3d848f064 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-07T16:06:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_mwscampelo.pdf: 2314614 bytes, checksum: 20fbc0cb698fb89be1c2e8a3d848f064 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-07T16:06:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_mwscampelo.pdf: 2314614 bytes, checksum: 20fbc0cb698fb89be1c2e8a3d848f064 (MD5) Previous issue date: 2015 / Background and purpose - The NO donors can decrease neuronal injury during cerebral ischemia and reperfusion (I/R) by increasing the blood flow to the brain. The objective of this study is to study whether a new nitrosyl ruthenium complex makes some effect during I/R and if involves protein kinases. Methods - Used 180 male rats, Wistar rats, with an average weight of 290.27 g, distributed 6 groups: Sham 1h, saline + ischemia/reperfusion 1h, Ru-bpy ischemia/reperfusion 1h, Sham 24h, saline + ischemia/reperfusion 24h, Ru-bpy ischemia/reperfusion 24h. Used global cerebral ischemia model incomplete, with occlusion of bilateral common carotid artery and administration of SF or Rut-bpy in their respective groups by intraperitoneal way. At the end of the experiment, the animals were decapitated and the brain removed to be evaluated to the area of injury by histology with H&E, immunohistochemistry, quantification of brain swelling, nitrite, immunoassay for kinases. During the experiment (phase of ischemia and first hour of reperfusion) PAM of animals was monitored. Results: Decreased number of neurons reds and edema in brain tissue in animals preconditioned with nitrosyl ruthenium. PAM variation was lower in animals treated with Ru-bpy the end of ischemia and early reperfusion. Inhibition of NF-kB. Activates the kinase protein Akt, Erk 1/2, p70S6 and CREB, with inhibition of JNK protein.Conclusion: The Rut-bpy has protective effect during neuronal event of I/R supported by 24h and keeping PAM more stable during the beginning of reperfusion. Involving the protein kinase. / Introdução e objetivo: Doadores de NO (óxido nítrico) podem diminuir a lesão neuronal durante a isquemia/reperfusão (I/R) cerebral experimental por aumento do fluxo sanguíneo cerebral. O objetivo deste estudo foi avaliar se um novo doador de NO complexo nitrosil rutênio (Ru-bpy) apresenta algum efeito durante I/R e se envolve proteínas quinases. Método: Foram utilizados 180 ratos machos, da linhagem Wistar, com peso médio de 290.27 g, distribuídos 6 grupos: Sham 1h, solução salina + isquemia/reperfusão 1h, Ru-bpy + isquemia/reperfusão 1h, Sham 24h, solução salina + isquemia/reperfusão 24h, Ru-bpy + isquemia/reperfusão 24h. Utilizado o modelo de isquemia cerebral global incompleta, com oclusão da artéria carótida comum bilateral e administração do SF ou Rut-bpy em seus respectivos grupos via intraperitoneal 30 minutos antes do inicio do pinçamento das carótidas comuns. Após 30 minutos de isquemia. No final do experimento os animais foram decapitados e o cérebro retirado para ser avaliado à área de lesão por histologia com H&E, imunohistoquímica, quantificação de edema cerebral, nitrito, imunoensaio para quinases. Durante o experimento (fase de isquemia e primeira hora de reperfusão) a pressão artérial média (PAM) dos animais foi monitorizada. Resultados: Diminuição do número de neurônios eosinofílicos e do edema no tecido cerebral nos animais pré-condicionados com nitrosil rutênio. A variação da PAM foi menor nos animais tratados com Ru-bpy ao final da isquemia e início da reperfusão. Inibição do NF-kB. Ativação das proteínas quinase AKT, P70S6, ERK 1/2 e CREB, com inibição da proteína JNK. Conclusão: O Rut-bpy tem efeito protetor neuronal durante evento de I/R sustentado por 24h mantendo a PAM mais estável durante o início da reperfusão. Envolvendo a via das proteínas quinases.

A isquemia cerebral (IC) ainda é uma das principais causas de mortalidade e deficiência adquirida em humanos. A maioria dos sobreviventes necessita de assistência médica contínua, o que significa que é preciso investigar as vias que levam à reparação e à recuperação da função cerebral atingida. O conhecimento de mecanismos que atuam na fase de recuperação oferece uma maior janela temporal para atuação farmacológica. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar o envolvimento das alterações do metabolismo energético, do sistema glutamatérgico e de parâmetros astrocitários após indução de isquemia focal permanente (FPI) in vivo. Ratos Wistar machos adultos (90 dias) foram divididos em dois grupos: Sham e Isquemia. A isquemia foi induzida por termocoagulação, enquanto os animais Sham foram submetidos apenas à craniotomia. Análises ex vivo foram realizadas em ambos os hemisférios cerebrais, separadamente. Após 2 dias, a isquemia aumentou a captação e a oxidação de glicose, glutamato e lactato no hemisfério ipsilateral à lesão. Tanto a captação de glutamato quanto a oxidação de lactato se mostraram aumentadas também no hemisfério contralateral no mesmo período, indicando que o lactato derivado do glutamato possa ser responsável por manter o metabolismo cerebral logo após FPI. A Análise da captação de [18F]FDG em microPET mostrou que, in vivo, a captação de glicose ipsilateral está prejudicada, sugerindo que a insuficiência de fluxo sanguíneo na região está por trás dessa alteração. A análise por Real Time PCRq mostrou que a expressão de mRNA dos transportadores GLAST e GLT-1 estava diminuída no hemisfério isquêmico. A expressão de GLT-1 também estava diminuída no hemisfério contralateral nos dois tempos analisados, indicando uma regulação diferente para esse transportador. O imunoconteúdo de GLAST mostrou diminuição contralateral, contribuindo para a hipótese de que a GFAP pode ser importante para reter esse transportador na membrana plasmática. Após 2 dias, foi observado um aumento de MCT4 contralateral, enquanto que o MCT2 encontrava-se diminuído. Os níveis proteicos de MCT4 continuaram elevados após 9 dias no hemisfério contralateral, com aumento também no ipsilateral, sugerindo que esse transportador tem um papel mais ativo a curto e a médio prazos após IC. A análise de parâmetros astrocitários por imunohistoquímica demonstrou reatividade na área de peri-infarto e um maior conteúdo de GFAP. O aumento do número de processos centrais primários é o maior responsável pela forma mais radial da astroglia reativa. Em conjunto, nossos resultados sugerem que o metabolismo energético possa estar regulado de forma a conter a expansão do insulto isquêmico e, assim, auxiliar a recuperação metabólica após indução de lesão isquêmica. Além disso, destacamos o envolvimento do lactato como um substrato energético essencial para recuperação do dano isquêmico e, também, para iniciar os mecanismos de compensação no hemisfério contralateral. / Cerebral ischemia (IC) is still a leading cause of death and acquired deficiency in humans. Most survivors need further medical care, which makes essential the investigation of mechanisms that lead to brain repair and recovery. Considering that knowledge of the mechanisms behind brain repair and recovery offers a greater time window for pharmacological manipulation of potential therapeutic targets, the aim of this work was to investigate the involvement of changes in the energy metabolism, glutamatergic system and astrocytic parameters in an animal model of focal permanent ischemia (FPI). Adult male Wistar rats (90 days) were divided in 2 groups: Sham and Ischemia. FPI was induced surgically by themocoagulation, while sham animals were only submitted to craniotomy. Ex vivo analyses were performed in both brain hemispheres separately. At 2 days post-FPI, brain ischemia significantly increased ipsilateral uptake and oxidation of glucose, glutamate and lactate. Interestingly, glutamate uptake and lactate oxidation were also contralateraly augmented, indicating that glutamate-derived lactate may be responsible for maintaining brain metabolism after focal ischemia. MicroPET evaluation showed that in vivo [18F]FDG uptake is impaired, indicating that blockage of cerebral blood flow may be the reason for diminished uptake when compared to the ex vivo analyses. RT-PCRq analysis showed that mRNA expression of glutamate transporters GLAST and GLT-1 was reduced in the ischemic hemisphere. The expression of GLT-1 was also reduced in the contralateral hemisphere in both time points analyzed, indicating a different regulation for this transporter. GLAST immunocontent by western blot showed a contralateral decrease 9 days after FPI, contributing to the possibility that GFAP can be important to retain this transporter in the plasma membrane. We also observed an increase in MCT4 protein levels in the contralateral hemisphere, while MCT2 was decreased, 2 days following FPI. MCT4 levels were still elevated at 9 days, also showing ipsilateral increase, suggesting that this transporter has a more active role in both short and medium term after IC. The analysis on astrocytic parameters presented greater reactivity in the peri-infarct area and a higher content of GFAP in the areas analyzed. Morphological changes, especially due to increased number of primary central processes, are responsible for most radially reactive astroglia. Together, our results suggest that energy metabolism may be regulated to contain the expansion of the ischemic insult and thus help the metabolic recovery after ischemic injury. In addition, we point out the involvement of lactate as an essential energy substrate for the recovery of ischemic damage, and also to start the compensation mechanisms in the contralateral hemisphere.

Pacientes que sobrevivem a uma parada cardíaca ou a um AVE demonstram uma alta incidência de prejuízos neurológicos como resultado do dano neuronal isquêmico tardio. Uma intervenção farmacológica apropriada durante a janela terapêutica entre o recomeço do fluxo sanguíneo normal e o início do dano neuronal seria de grande benefício, porém as abordagens experimentais atuais são limitadas neste sentido. Ao longo da última década, dados provenientes de muitos estudos apoiam a ideia que estrógenos promovem efeitos neuroprotetores em uma variedade de doenças neurodegenerativas, incluindo a isquemia cerebral global. O potente hormônio feminino 17-β-estradiol (E2) é neuroprotetor em uma variedade de modelos celulares e animais de isquemia, contudo os paraefeitos inerentes a sua terapêutica não permitem seu uso em larga escala. Considerando a estrutura e mecanismo de ação similares dos fitoestrogênios no SNC, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos neuroprotetores de coumestrol, um potente isoflavonóide com alta afinidade de ligação por ambos os receptores de estrogênio (ERs) e alto potencial antioxidante, contra a neurodegeneração geralmente encontrada em eventos isquêmicos. Nós demonstramos aqui que coumestrol foi hábil em resgatar a morte neuronal na subárea CA1 hipocampal induzida pela isquemia global em ratas fêmeas em uma avaliação de sobrevivência celular, incluindo 24h pós-isquemia, e que esta neuroproteção parece ser mediada através dos ERs. Em um próximo passo, avaliamos se a pré-administração de coumestrol poderia reverter a atividade da bomba de Na+/K+-ATPase, cuja atividade se encontra prejudicada após insultos isquêmicos, e se sua ação seria igualmente efetiva quando administrado em ratos machos. A análise demonstrou que coumestrol foi eficiente em restaurar a atividade da Na+/K+-ATPase em todos os tempos avaliados, incluindo 24h pós-isquemia. A efetividade em prevenir a morte neuronal em ratos machos foi igualmente observada em todos os tempos de administração, incluindo 24h pós-isquemia. As correspondências neuroprotetoras no tempo de 24h na neuroproteção sugerem um possível mecanismo pelo qual coumestrol possa estar agindo para promover neuroproteção em longo prazo. Sabendo que a morte neuronal tardia na isquemia global está associada com a redução na expressão de GluR2 na região CA1 pouco antes do início da morte celular, examinamos o possível papel de coumestrol na expressão de GluR2 em camundongos machos em três diferentes tempos pós-isquemia. O evento isquêmico reduziu os níveis proteicos de GluR2 hipocampais em todos os tempos avaliados e o tratamento com coumestrol foi efetivo em prevenir essa redução. Adicionalmente, estando consciente que a excitotoxicidade é um dos mecanismos celulares ligados à neurodegeneração associada à isquemia, buscou-se determinar se coumestrol poderia promover neuroproteção in vitro, contra a excitotoxicidade induzida por NMDA em culturas neuronais hipocampais. Nós observamos que coumestrol promoveu neuroproteção, porém somente quando sua administração foi perto do evento excitotóxico. Atribuímos esta inabilidade em conferir neuroproteção em longo prazo devido à presença do inibidor de células gliais presente na cultura neuronal, que limita a proliferação glial em 10% ou menos, sugerindo o sistema glial como um importante coadjuvante no contexto da neuroproteção em longo prazo conferida por coumestrol. Estendendo nossa investigação para uma avaliação comportamental, examinamos se coumestrol poderia ser igualmente eficaz em prevenir os déficits de memória presentes após um insulto isquêmico. A análise histológica confirmou a neuroproteção promovida pela administração de coumestrol como esperado, e sua terapêutica foi bem sucedida em reverter os déficits de memória promovidos pela isquemia global. Portanto, esses resultados coletivos indicam que coumestrol desperta novas perspectivas dentro da terapêutica da isquemia global e abre novas possibilidades na investigação no contexto dos acidentes vasculares encefálicos. / Patients who survive cardiac arrest or stroke demonstrate a high incidence of neurological impairment as a result of delayed ischemic neuronal damage. Proper pharmacological intervention during the therapeutic window between the resumption of normal blood flow and the onset of neuronal damage would be of great benefit, but the current experimental approaches have yielded only limited success. Over the last decade, data from many studies support the idea that estrogens provide neuroprotective effects in a variety of neurodegenerative diseases, including cerebral global ischemia. The potent feminizing hormone 17-β-estradiol (E2) is neuroprotective in a host of cell and animal models of stroke, however the side effects inherent its therapeutics doesn’t allow its use in a large scale. Considering the similar structure of phytoestrogens and its similar actions within the CNS, the aim of this study was verify the neuroprotective effects of coumestrol, a potent isoflavonoid with high binding affinities for both estrogen receptors (ERs) and significant antioxidant activity, against neurodegeneration usually observed in global ischemic events. We demonstrate here that coumestrol was able to rescue neuronal death in the hippocampal CA1 subfield induced by global ischemia in female rats in a cell survival evaluation, including 24h after ischemia, and its neuroprotective actions seems to be through the ERs. In a next step, we evaluated if coumestrol pre-administration could rescue the Na+/K+-ATPase activity that is found severely impaired after ischemic insults, and if its administration would be equally neuroprotective in male rats. The analysis showed that coumestrol was able to reverse the Na+/K+-ATPase activity in all times of evaluation, including 24h after ischemia. The effectiveness in preventing neuronal death in male rats was also observed in all time-points evaluated, including 24h after ischemia. These two 24h correspondence in neuroprotection suggests one possible mechanism by which coumestrol could be acting to afford neuroprotection in a long term. Knowing that the delayed neuronal death in global ischemia is associated with a reduced GluR2 expression in CA1 hippocampal field just before the cell death onset, we examined the possible role of coumestrol at the level of GluR2 expression of male mice in three different time-points after ischemia. The ischemic event induced high suppression of GluR2 in all evaluated times and coumestrol pre-treatment was able in preventing this reduction. In addition, being aware that excitotoxicity is one of the cellular mechanisms linked to cerebral ischemic neurodegeneration, we sought to determine if coumestrol could be neuroprotective in vitro as well, against a NMDA-induced excitotoxicity in hippocampal neuronal culture. We observed that coumestrol was skilled to afford neuroprotection only when its administration was next to the excitotoxic event. We attribute this longest reach inability of neuroprotection due the glial inhibitor present in the neuronal culture, which limits the glial cells proliferation in 10% or less, suggesting the glial system as an important adjuvant in the context of the coumestrol longer therapeutic window. Extending our investigation in a behavior assessment, we examined if the coumestrol could be also virtuous in preventing the memory deficits present after an ischemic insult. The histological analysis confirmed the reduction in neuronal loss afforded by coumestrol administration as expected, and its pre ischemic administration was able to rescue the memory impairment promoted by the global ischemia. Therefore, our collective results indicate that coumestrol spread new perspectives in the context of global ischemia therapeutics and unlock new possibilities for the stroke investigation.

A isquemia cerebral é uma das principais causas de morte no mundo, sendo decorrente de uma interrupção transitória ou permanente do fluxo sanguíneo, podendo levar à massiva morte neuronal. Um dos eventos neurotóxicos relacionados à isquemia é o aumento excessivo da concentração de glutamato extracelular, o que leva a hiperestimulação do sistema glutamatérgico (excitotoxicidade) podendo assim desencadear uma cascata de eventos intracelulares nos neurônios culminando em sua morte. Nos últimos anos, o nucleosídeo guanosina tem ganhado atenção dos pesquisadores devido ao seu potencial efeito neuroprotetor frente a insultos envolvendo excitotoxicidade. Na maioria dos experimentos in vivo no qual foram observados efeitos neuroprotetores, a guanosina foi administrada sistemicamente, apresentando considerável variabilidade na magnitude de seus efeitos entre os animais. Dado que a guanosina é uma molécula endógena, podendo ser rapidamente metabolizada via sistêmica até alcançar o cérebro, novas vias de administração devem ser exploradas a fim de maximizar seus efeitos neuroprotetores. A administração pela via intranasal tem se mostrado uma excelente alternativa visto que a boa perfusão da mucosa nasal fornece um excelente local para uma rápida absorção de drogas e transporte para o cérebro via líquido cefalorraquidiano (liquor). Neste sentido, nesta dissertação avaliamos o perfil farmacocinético da administração intranasal de guanosina e seu potencial neuroprotetor em um modelo de isquemia do córtex parietal cerebral por termocoagulação em ratos. Desta maneira, investigamos a concentração de guanosina e seus metabólitos em diferentes estruturas cerebrais, além do liquor e plasma após administração de diferentes doses, volumes de injeção e tempos após injeção intranasal de guanosina pelos métodos de CLAE e de quantificação de radioatividade. Houve diferenças significativas na concentração de purinas presentes nas estruturas analisadas (bulbo, córtex e hipocampo) além do liquor e do plasma. Observamos uma proporcionalidade entre o aumento significativo de radioatividade em relação ao aumento da concentração e do volume. Além disso, comparamos os parâmetros, acima citados, de animais que receberam administração de guanosina pela via intranasal ou intraperitoneal ou não receberam guanosina, apresentando diferenças significativas entre os grupos analisados. A indução isquêmica causou prejuízo sensoriomotor e lesão cerebral nos animais, os quais foram revertidos pelo tratamento com guanosina. Além disso, diferenças significativas na concentração das purinas foram observadas no plasma e no liquor desses animais as quais podem estar envolvidas tanto com o dano nos animais isquêmicos quanto com o efeito neuroprotetor da guanosina. Assim, este trabalho é o pioneiro mostrando a viabilidade da administração intranasal de guanosina, além de reforçar o efeito neuroprotetor da mesma frente a um modelo de isquemia. / Cerebral ischemia is a major cause of death worldwide is caused by a transient or permanent interruption of blood flow and can lead to massive neuronal death. One of neurotoxic events related to ischemia is the excessive increase in the extracellular concentration of glutamate, which leads to hyperstimulation of the glutamatergic system (excitotoxicity) thus triggering a cascade of intracellular events culminating in neurons death. In recent years, the guanosine nucleoside has claimed researchers attention because of its potential neuroprotective effect against insults involving excitotoxicity. In most in vivo experiments in which guanosine presented neuroprotective effects, it was administered systemically, resulting in considerable variability in the magnitude of their effects. Since guanosine is an endogenous molecule being rapidly metabolized systemically before to reach the brain, new routes of administration should be explored in order to maximize their neuroprotective effects. The intranasal route has proven to be an excellent alternative because the good perfusion of the nasal mucosa provides a great via for a quick absorption for drug transport to the brain via cerebrospinal fluid (CSF). In this sense, this thesis evaluated the pharmacokinetic profile of intranasal administration of guanosine and its potential neuroprotective in a model of cerebral ischemia in parietal cortex by thermocoagulation in rats. Thus, we investigated the concentration of guanosine and its metabolites in different brain structures, as well as CSF and plasma after administration of different doses, injection volumes and times after intranasal injection of guanosine by HPLC methods and quantification of radioactivity. There were significant differences in the concentration of purines present in the analyzed structures (cerebral bulb, cortex and hippocampus) plus CSF and plasma. We observed proportionality between the significant increase of radioactivity in relation to the increased concentration and volume. Furthermore, we analyzed these parameters in the plasma and CSF of rats which received intranasally or intraperitoneally injection of guanosine and with those that did not receive it, showing significant differences between these groups. The ischemic induction caused sensorimotor deficit and brain injury, which were reversed by guanosine treatment. Moreover, significant differences in the concentration of purines were observed in plasma and CSF of the animals which can be related with both the ischemic damage as well as with the neuroprotective effect of guanosine. In conclusion, this work is the pioneer showing the viability of intranasal administration of guanosine, in addition to reinforcing the potential neuroprotective effect of guanosine.

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