Introdução: Dentre as diversas formas modificadas da lipoproteína de baixa densidade (LDL), a LDL eletronegativa, LDL (-), contribui para o processo aterosclerótico, promovendo o recrutamento leucocitário para a intima arterial e modulando a resposta inflamatória. Mimotopos são moléculas que podem se ligar à porção variável de um anticorpo, a enzimas ou a receptores. Os peptídeos mimotopos da LDL (-) são moléculas capazes de mimetizar a conformação de epítopos expostos apenas quando a LDL sofre modificações in vivo. Objetivo: Avaliar os efeitos de peptídeos mimotopos da LDL(-), previamente selecionados pela técnica de phage display e denominados p1A3 e p2C7, em células endoteliais e macrófagos. Metodologia: Avaliou-se a atividade dos peptídeos mimotopos sobre a expressão de RNAm de genes relacionados tanto à ativação quanto à disfunção endotelial, assim como a atividade citotóxica e a captação dos peptídeos por células endoteliais (HUVEC, HAEC e EA.Hy 926). Verificou-se também a atividade pró-inflamatória dos peptídeos em cultura primária de macrófagos murinos derivados da medula óssea (BMDM), investigando-se a ativação do complexo proteico inflamassoma, assim como a internalização dos peptídeos por essas células, utilizando citometria de fluxo e microscopia confocal. Resultados: As células endoteliais e os macrófagos internalizaram os peptídeos mimotopos p1A3 e p2C7. Nos macrófagos houve inibição (50%) da internalização dos peptídeos p1A3 e p2C7 na presença de brefeldina A, indicando que esses peptídeos são majoritariamente captados por endocitose independente de clatrina. Nas células HAEC, observou-se 25% de inibição da captação de ambos os peptídeos se bloqueando o receptor scavenger LOX-1 com anticorpo anti-LOX-1. Quanto à atividade citotóxica, observou-se acentuada redução na atividade mitocondrial das células endoteliais EA.Hy 926 e HAEC apenas com o peptídeo p1A3, não sendo observada citotoxicidade para os macrófagos tanto para p1A3 quanto p2C7 nas concentrações estudadas (12,5 a 200 ug/mL). Nos macrófagos, o peptídeo p2C7 induziu o aumento da expressão de RNAm de genes relacionados com a polarização para o fenótipo M1 (iNOS, TNF-α, IL-1α) e da produção de •NO, assim como, a ativação do sinal 1 (transcricional) do complexo proteico inflamassoma, o que também se observou para a LDL (-). O peptídeo p1A3 modulou a expressão gênica da linhagem HAEC, diminuindo a expressão de RNAm dos genes relacionados à proliferação celular (VEGFr1 e 2, TGFβ, PDGFβ e eNOS). Conclusão: Os peptídeos mimotopos p1A3 e p2C7 interagem com as células endoteliais e macrófagos de maneiras distintas. O p2C7 induz uma resposta pró-inflamatória em macrófagos, mimetizando a LDL (-), sugerindo assim, que esse peptídeo possa atuar como um DAMP (padrão molecular associado ao perigo) importante para o processo inflamatório da placa aterosclerótica. / Introduction: Among the different subtypes of modified low-density lipoprotein (LDL), the electronegative LDL [LDL (-)] contributes to the progression of atherosclerosis, promoting leukocyte recruitment into the arterial intima and modulating the inflammatory response. Mimotopes are molecules capable of binding to the variable portion of an antibody, to enzymes or receptors. The mimotope peptides of LDL (-) are molecules mimicking the conformation of epitopes exposed only when LDL undergoes in vivo changes. Objective: To evaluate the effects of two mimotope peptides of LDL (-), previously selected the by phage display and called p1A3 and p2C7, on endothelial cells and macrophages. Methodology: We evaluated the activity of the mimotope peptides on gene mRNA expression related to both the activation and endothelial dysfunction as well as the cytotoxic activity and uptake of peptides by endothelial cells (HUVEC, HAEC and EA.Hy 926). It was also investigated the pro-inflammatory activity of the peptides on murine primary macrophage derived from bone marrow (BMDM), evaluating the activation of the protein complex inflammasome, as well as the internalization of peptides by these cells by flow cytometry and confocal microscopy. Results: The endothelial cells and macrophages internalized both peptides. In macrophages, brefeldin A inhibited the internalization of p1A3 and p2C7 around 50%, indicating that these peptides are mostly taken up by clathrin-independent bulk endocytosis. In HAEC it was observed a 25 % inhibition of the uptake of both peptides by blocking the LOX scavenger receptor with an anti-LOX-1 antibody. In relation to cytotoxicity, a reduction on mitochondrial activity was induced by p1A3 peptide only in endothelial cells (EA.Hy 926 and HAEC). No cytotoxic activity was observed for p2C7 peptide in macrophages or endothelial cells at the studied concentration range (12.5 to 200 µg/mL). In macrophages, the p2C7 peptide increased mRNA expression of genes related to the polarization to M1 phenotype (iNOS, TNF-α and IL-1α) and of •NO production, as well as, protein complex signal 1 activation (transcriptional) what was also observed for LDL (-). The p1A3 peptide modulated the expression of genes related with cell proliferation (VEGFr1 e 2, TGF?β, PDGFβ and eNOS) in HAEC. Conclusion: The mimotope peptides p2C7 and p1A3 interact with the endothelial cells and macrophages by different ways. The p2C7 induces a pro-inflammatory response in macrophages, mimicking LDL (-), thus suggesting that this peptide can act as a DAMP (Damage-associated molecular pattern) important in the inflammatory process of atherosclerotic plaque.

A obesidade é considerada uma doença crônica e multifatorial, onde eventos como a inflamação de baixa intensidade e as modificações oxidativas estão presentes. A elevada prevalência de obesidade tem impacto direto no desenvolvimento precoce de diabetes mellitus, hipertensão e outros fatores de risco cardiovasculares. Esse perfil tem motivado a identificação de biomarcadores precoces, sendo o monitoramento da lipoproteína de baixa densidade oxidada (LDLox) e lipoproteína de baixa densidade eletronegativa [LDL(-)] potenciais candidatos. Diante do exposto, o objetivo deste estudo foi realizar a análise comparativa e de correlação entre o conteúdo de LDLox e [LDL(-)] em adolescentes. Foram selecionados 137 adolescentes de ambos sexos, com faixa etária de 10 a 19 anos e regularmente em matriculados em escolas públicas da cidade de São Paulo. O peso, altura e circunferência da cintura (CC) foram avaliados. Após jejum (12h-15h) foi coletada uma amostra de sangue e, a partir do plasma, foram realizadas as seguintes análises: glicose, insulina, perfil lipídico, apolipoproteína (AI e B), ácidos graxos não esterificados, tamanho de HDL, atividade da CETP e LDL(-) e LDLox. Os resultados encontrados foram analisados por meio do programa SPSS 15.0, considerando valor de significância de p< 0,05. Os 137 adolescentes foram distribuídos em dois grupos: 71 no Eutrófico (51,82%) e 66 no Obeso (48,18%), segundo a classificação do IMC. 48 (35,04%) dos adolescentes eram do sexo masculino e 89 (64,96%) do sexo feminino, com idade média de 14,2 (2,3) anos. Em relação à CC, observou-se que essa confirmou a classificação feita pelo IMC. Observou-se também uma maior prevalência de hipertensão (65% p = 0,011) e obesidade (64,7% p=0,041) nos antecedentes familiares do grupo Obeso quando comparado ao grupo Eutrófico. Os adolescentes obesos apresentaram maiores valores de triglicerídeos, HDL, APO B, CETP, insulina e LDL(-) e LDLox, quando comparados aos eutróficos. Perfil inverso foi observado para Apo AI. O conteúdo de LDLox e LD(-) variou significativamente em função do IMC. Entretanto, essas partículas de LDLs não se correlacionaram entre si, embora tenham apresentado associação com outros parâmetros cardiometabólicos. Os resultados obtidos confirmam o impacto negativo da obesidade sobre os parâmetros cardiometabólicos de adolescentes e, apesar do conteúdo de LDLox e LDL(-) ter aumentado em função do IMC, essas partículas parecem ser estruturalmente distintas. Essa possibilidade foi reforçada pelas diferentes associações dessas partículas com outros marcadores bioquímicos. / Obesity is considered a chronic and multifactorial disease, where events such as low intensity inflammation and oxidative modifications are present. The high prevalence of obesity has a direct impact on the early development of diabetes mellitus, hypertension and other cardiovascular risk factors. This profile has motivated the identification of early biomarkers, and monitoring the oxidized low density lipoprotein (oxLDL) and electronegative low-density lipoprotein [LDL (-)] are potential markers. The aim of this study was to conduct a comparative analysis and correlation between the content of oxLDL and [LDL (-)] in adolescents. We selected 137 adolescents of both sexes, aged 10-19 years, enrolled in public schools in the city of São Paulo. The weight, height, waist circumference (WC) were assessed. After fasting (12-15h) samples of blood were collected and from plasma were performed the following analyzes: glucose, insulin, lipid profile, apolipoprotein (AI and B), NEFA, HDL size, CETP activity and LDL (-) and oxLDL. The results were analyzed by using SPSS 15.0 considering significant value of p <0.05. The 137 adolescents were divided into two groups: 71 Normal Weight (51.82%) and 66 Obese (48.18%), according to BMI classification. 48 (35.04%) of the adolescents were male and 89 (64.96%) females with a mean age of 14.2 (2.3) years. Regarding the CC observed, it confirmed the classification made by BMI. There was a higher prevalence of hypertension (65% p = 0.011) and obesity (64.7% p = 0.041) in the family history group Obese when compared to normal weight. Obese adolescents had higher triglyceride, HDL, APO B, CETP, insulin and LDL (-) and oxLDL, compared to normal weight. Reverse profile was observed for Apo AI. The content of oxLDL and LDL (-) varied significantly according to BMI. However, these LDL particles were not correlated with each other, although they showed cardiometabolic combination with other parameters. The results confirm the negative impact of obesity on cardiometabolic parameters of teenagers and although the content of oxLDL and LDL (-) increased as a function of BMI, these particles appear to be structurally distinct. This possibility was reinforced by different associations of these particles with other biochemical markers.

A obesidade é considerada uma doença crônica e multifatorial, onde eventos como a inflamação de baixa intensidade e as modificações oxidativas estão presentes. A elevada prevalência de obesidade tem impacto direto no desenvolvimento precoce de diabetes mellitus, hipertensão e outros fatores de risco cardiovasculares. Esse perfil tem motivado a identificação de biomarcadores precoces, sendo o monitoramento da lipoproteína de baixa densidade oxidada (LDLox) e lipoproteína de baixa densidade eletronegativa [LDL(-)] potenciais candidatos. Diante do exposto, o objetivo deste estudo foi realizar a análise comparativa e de correlação entre o conteúdo de LDLox e [LDL(-)] em adolescentes. Foram selecionados 137 adolescentes de ambos sexos, com faixa etária de 10 a 19 anos e regularmente em matriculados em escolas públicas da cidade de São Paulo. O peso, altura e circunferência da cintura (CC) foram avaliados. Após jejum (12h-15h) foi coletada uma amostra de sangue e, a partir do plasma, foram realizadas as seguintes análises: glicose, insulina, perfil lipídico, apolipoproteína (AI e B), ácidos graxos não esterificados, tamanho de HDL, atividade da CETP e LDL(-) e LDLox. Os resultados encontrados foram analisados por meio do programa SPSS 15.0, considerando valor de significância de p< 0,05. Os 137 adolescentes foram distribuídos em dois grupos: 71 no Eutrófico (51,82%) e 66 no Obeso (48,18%), segundo a classificação do IMC. 48 (35,04%) dos adolescentes eram do sexo masculino e 89 (64,96%) do sexo feminino, com idade média de 14,2 (2,3) anos. Em relação à CC, observou-se que essa confirmou a classificação feita pelo IMC. Observou-se também uma maior prevalência de hipertensão (65% p = 0,011) e obesidade (64,7% p=0,041) nos antecedentes familiares do grupo Obeso quando comparado ao grupo Eutrófico. Os adolescentes obesos apresentaram maiores valores de triglicerídeos, HDL, APO B, CETP, insulina e LDL(-) e LDLox, quando comparados aos eutróficos. Perfil inverso foi observado para Apo AI. O conteúdo de LDLox e LD(-) variou significativamente em função do IMC. Entretanto, essas partículas de LDLs não se correlacionaram entre si, embora tenham apresentado associação com outros parâmetros cardiometabólicos. Os resultados obtidos confirmam o impacto negativo da obesidade sobre os parâmetros cardiometabólicos de adolescentes e, apesar do conteúdo de LDLox e LDL(-) ter aumentado em função do IMC, essas partículas parecem ser estruturalmente distintas. Essa possibilidade foi reforçada pelas diferentes associações dessas partículas com outros marcadores bioquímicos. / Obesity is considered a chronic and multifactorial disease, where events such as low intensity inflammation and oxidative modifications are present. The high prevalence of obesity has a direct impact on the early development of diabetes mellitus, hypertension and other cardiovascular risk factors. This profile has motivated the identification of early biomarkers, and monitoring the oxidized low density lipoprotein (oxLDL) and electronegative low-density lipoprotein [LDL (-)] are potential markers. The aim of this study was to conduct a comparative analysis and correlation between the content of oxLDL and [LDL (-)] in adolescents. We selected 137 adolescents of both sexes, aged 10-19 years, enrolled in public schools in the city of São Paulo. The weight, height, waist circumference (WC) were assessed. After fasting (12-15h) samples of blood were collected and from plasma were performed the following analyzes: glucose, insulin, lipid profile, apolipoprotein (AI and B), NEFA, HDL size, CETP activity and LDL (-) and oxLDL. The results were analyzed by using SPSS 15.0 considering significant value of p <0.05. The 137 adolescents were divided into two groups: 71 Normal Weight (51.82%) and 66 Obese (48.18%), according to BMI classification. 48 (35.04%) of the adolescents were male and 89 (64.96%) females with a mean age of 14.2 (2.3) years. Regarding the CC observed, it confirmed the classification made by BMI. There was a higher prevalence of hypertension (65% p = 0.011) and obesity (64.7% p = 0.041) in the family history group Obese when compared to normal weight. Obese adolescents had higher triglyceride, HDL, APO B, CETP, insulin and LDL (-) and oxLDL, compared to normal weight. Reverse profile was observed for Apo AI. The content of oxLDL and LDL (-) varied significantly according to BMI. However, these LDL particles were not correlated with each other, although they showed cardiometabolic combination with other parameters. The results confirm the negative impact of obesity on cardiometabolic parameters of teenagers and although the content of oxLDL and LDL (-) increased as a function of BMI, these particles appear to be structurally distinct. This possibility was reinforced by different associations of these particles with other biochemical markers.

Introdução: Dentre as diversas formas modificadas da lipoproteína de baixa densidade (LDL), a LDL eletronegativa, LDL (-), contribui para o processo aterosclerótico, promovendo o recrutamento leucocitário para a intima arterial e modulando a resposta inflamatória. Mimotopos são moléculas que podem se ligar à porção variável de um anticorpo, a enzimas ou a receptores. Os peptídeos mimotopos da LDL (-) são moléculas capazes de mimetizar a conformação de epítopos expostos apenas quando a LDL sofre modificações in vivo. Objetivo: Avaliar os efeitos de peptídeos mimotopos da LDL(-), previamente selecionados pela técnica de phage display e denominados p1A3 e p2C7, em células endoteliais e macrófagos. Metodologia: Avaliou-se a atividade dos peptídeos mimotopos sobre a expressão de RNAm de genes relacionados tanto à ativação quanto à disfunção endotelial, assim como a atividade citotóxica e a captação dos peptídeos por células endoteliais (HUVEC, HAEC e EA.Hy 926). Verificou-se também a atividade pró-inflamatória dos peptídeos em cultura primária de macrófagos murinos derivados da medula óssea (BMDM), investigando-se a ativação do complexo proteico inflamassoma, assim como a internalização dos peptídeos por essas células, utilizando citometria de fluxo e microscopia confocal. Resultados: As células endoteliais e os macrófagos internalizaram os peptídeos mimotopos p1A3 e p2C7. Nos macrófagos houve inibição (50%) da internalização dos peptídeos p1A3 e p2C7 na presença de brefeldina A, indicando que esses peptídeos são majoritariamente captados por endocitose independente de clatrina. Nas células HAEC, observou-se 25% de inibição da captação de ambos os peptídeos se bloqueando o receptor scavenger LOX-1 com anticorpo anti-LOX-1. Quanto à atividade citotóxica, observou-se acentuada redução na atividade mitocondrial das células endoteliais EA.Hy 926 e HAEC apenas com o peptídeo p1A3, não sendo observada citotoxicidade para os macrófagos tanto para p1A3 quanto p2C7 nas concentrações estudadas (12,5 a 200 ug/mL). Nos macrófagos, o peptídeo p2C7 induziu o aumento da expressão de RNAm de genes relacionados com a polarização para o fenótipo M1 (iNOS, TNF-&#945;, IL-1&#945;) e da produção de &#8226;NO, assim como, a ativação do sinal 1 (transcricional) do complexo proteico inflamassoma, o que também se observou para a LDL (-). O peptídeo p1A3 modulou a expressão gênica da linhagem HAEC, diminuindo a expressão de RNAm dos genes relacionados à proliferação celular (VEGFr1 e 2, TGF&#946;, PDGF&#946; e eNOS). Conclusão: Os peptídeos mimotopos p1A3 e p2C7 interagem com as células endoteliais e macrófagos de maneiras distintas. O p2C7 induz uma resposta pró-inflamatória em macrófagos, mimetizando a LDL (-), sugerindo assim, que esse peptídeo possa atuar como um DAMP (padrão molecular associado ao perigo) importante para o processo inflamatório da placa aterosclerótica. / Introduction: Among the different subtypes of modified low-density lipoprotein (LDL), the electronegative LDL [LDL (-)] contributes to the progression of atherosclerosis, promoting leukocyte recruitment into the arterial intima and modulating the inflammatory response. Mimotopes are molecules capable of binding to the variable portion of an antibody, to enzymes or receptors. The mimotope peptides of LDL (-) are molecules mimicking the conformation of epitopes exposed only when LDL undergoes in vivo changes. Objective: To evaluate the effects of two mimotope peptides of LDL (-), previously selected the by phage display and called p1A3 and p2C7, on endothelial cells and macrophages. Methodology: We evaluated the activity of the mimotope peptides on gene mRNA expression related to both the activation and endothelial dysfunction as well as the cytotoxic activity and uptake of peptides by endothelial cells (HUVEC, HAEC and EA.Hy 926). It was also investigated the pro-inflammatory activity of the peptides on murine primary macrophage derived from bone marrow (BMDM), evaluating the activation of the protein complex inflammasome, as well as the internalization of peptides by these cells by flow cytometry and confocal microscopy. Results: The endothelial cells and macrophages internalized both peptides. In macrophages, brefeldin A inhibited the internalization of p1A3 and p2C7 around 50%, indicating that these peptides are mostly taken up by clathrin-independent bulk endocytosis. In HAEC it was observed a 25 % inhibition of the uptake of both peptides by blocking the LOX scavenger receptor with an anti-LOX-1 antibody. In relation to cytotoxicity, a reduction on mitochondrial activity was induced by p1A3 peptide only in endothelial cells (EA.Hy 926 and HAEC). No cytotoxic activity was observed for p2C7 peptide in macrophages or endothelial cells at the studied concentration range (12.5 to 200 &#181;g/mL). In macrophages, the p2C7 peptide increased mRNA expression of genes related to the polarization to M1 phenotype (iNOS, TNF-&#945; and IL-1&#945;) and of &#8226;NO production, as well as, protein complex signal 1 activation (transcriptional) what was also observed for LDL (-). The p1A3 peptide modulated the expression of genes related with cell proliferation (VEGFr1 e 2, TGF?&#946;, PDGF&#946; and eNOS) in HAEC. Conclusion: The mimotope peptides p2C7 and p1A3 interact with the endothelial cells and macrophages by different ways. The p2C7 induces a pro-inflammatory response in macrophages, mimicking LDL (-), thus suggesting that this peptide can act as a DAMP (Damage-associated molecular pattern) important in the inflammatory process of atherosclerotic plaque.

Introdução: A obesidade é um importante problema de Saúde Pública e, segundo a Organização Mundial da Saúde, representa uma epidemia global. É considerada uma doença crônica, multifatorial, que depende não só de fatores genéticos e fisiopatológicos, mas também de variáveis culturais, sociais e psicológicas associadas à quantidade e a qualidade da alimentação. Nesse contexto, os adolescentes como foco de mudanças fisiológicas, anatômicas e sociais se tornam um grupo com elevada frequência de fatores de risco associados à obesidade. Objetivo: Avaliar o papel da lipoproteína de baixa densidade eletronegativa [LDL(-)], da proteína transportadora de éster de colesterol (CETP) e da resistência à insulina (RI) no risco cardiometabólico de adolescentes. Métodos: Foram recrutados adolescentes de ambos os sexos, com faixa etária de 10 a 19 anos e, regularmente matriculados em escolas da cidade de São Paulo. Medidas antropométricas, tais como, peso, altura, circunferência da cintura (CC) e composição corporal foram avaliadas, e classificadas considerando sexo e idade. Após jejum (12-15h), foi coletada uma amostra de sangue e a partir do plasma foram realizadas as seguintes análises: glicose, insulina e cálculo do HOMA, perfil lipídico, apolipoproteína A-I e B, atividade da paraoxonase 1 (PON1), ácidos graxos livres (AGL), atividade da CETP e LDL(-). Os resultados obtidos foram analisados por meio dos testes qui-quadrado, Kappa, Kolmogorov-Smirnov, t-student, ANOVA, Mann-Whitney, Kruskal-Wallis, Bonferroni e de tendência linear, com valor de significância de p< 0,05. Resultados: Os adolescentes eutróficos apresentaram menor atividade de CETP e conteúdo de LDL(-) em relação àqueles com excesso de peso. O IMC apresentou associação positiva e linear com o CT/HDL-C, TG/HDL-C, ApoB/ApoA-I, LDL(-) e LDL(-)/CT. Perfil inverso foi observado para HDL-C e ApoA-I. A CC mostrou associação positiva com TG, CT/HDL-C, LDL-C/HDL-C, TG/HDL-C, ApoB/ApoA-I, LDL(-), LDL(-)/CT e CETP. Associação negativa foi observada entre CC e HDL-C e ApoA-I. Após o ajuste pela atividade da CETP, associações entre o HDL-C, LDL-C/HDL-C, CT/HDLC e LDL(-)/LDL-C com o IMC ou CC foram modificadas. Ao ajustarmos pela concentração de LDL(-), nenhuma associação sofreu alteração, o que sugere um mecanismo independente para a regulação dessa partícula durante a obesidade.Ao analisarmos os adolescentes segundo CC, verificamos que os adolescentes com CCALTA apresentaram elevado IMC, por cento de gordura corporal, pressão arterial sistólica, conteúdo de insulina, HOMA, TG, TG/HDL-C, CT/HDL-C, LDL-C/HDL-C, ApoB/ApoA-I, AGL, LDL(-), LDL(-)/CT e atividade da CETP, quando comparados aqueles com CCBAIXA. Perfil inverso foi observado para por cento de massa magra, HDL-C, ApoA-I, HDL/ApoA-I e PON-1. Quando classificados segundo HOMA (resistente à insulina - RI e sensível à insulina - SI), os adolescentes RI mostraram um impacto negativo sobre o IMC, CC, por cento de gordura corporal, pressão arterial, TG e TG/HDL-C, e resultado inverso para por cento de massa magra e PON1. O índice de risco cardiovascular proposto mostrou que o grupo CCALTA-RI = CCALTA-SI > CCBAIXA-RI = CCBAIXASI. Conclusões: Portanto, a concentração de LDL(-) e a atividade da CETP associada à obesidade, principalmente abdominal, alteram o risco cardiometabólico de adolescentes / Introduction: Obesity is a major public health problem and, according to World Health Organization, represents a global epidemic. It is considered a chronic, multifactorial disease, which depends not only of genetic and pathophysiology factors, but also of cultural, social and psychological associated with diet profile variables. In this context, adolescents as the focus of physiological, anatomical and social changes become a group with high frequency of risk factor for obesity. Objective: To evaluate the role of the electronegative low-density lipoprotein [LDL(-)] concentration, cholesteryl ester transfer protein (CETP) activity and insulin resistance on cardiometabolic risk of adolescents. Methods: We recruited adolescents of both sexes, aged 10 to 19 years and enrolled in schools in the city of São Paulo. Anthropometric measurements such as weight, height, waist circumference (WC) and body composition were evaluated and classified according to sex and age. After fasting (12-15h) was analyzed from plasma: glucose, insulin and HOMA, lipid profile, apolipoprotein A-I and B, paraoxonase 1 activity (PON1), non-esterified fatty acids (NEFA), CETP activity and LDL(-). The results were analyzed by chi-square, Kappa, Kolmogorov-Smirnov, t-student, ANOVA, Mann-Whitney, Kruskal-Wallis, Bonferroni and linear tendency test, with p< 0.05. Results: The subjects with normal weight had lower CETP activity and content of LDL(-) than excess weight adolescents. BMI showed positive and linear association with TC/HDL-C, TG/HDL-C, ApoB/ApoA-I, LDL(-) and LDL(-)/TC. Profile opposite was observed for HDL-C and ApoA-I. The WC was positively associated with TG, TC/HDL-C, LDL-C/HDL-C, TG/HDL-C, ApoB/ApoA-I, LDL(-), LDL(-)/CT and CETP. Negative association was observed between WC and HDL-C and ApoA-I. After adjustment for CETP, associations between HDL-C, LDL-C/HDL-C, TC/HDL-C and LDL(-)/LDL-C with BMI or WC were modified. Adjustment for LDL(-) content was not able to change these associations, suggesting an independent mechanism for regulation of the levels of this particle during obesity. Analysis second WC, it was found that adolescents 10 with WCHIGH showed higher BMI, per cent body fat, systolic blood pressure, insulin, HOMA, TG, TG/HDL-C, TC/HDL-C, LDL-C/HDL-C, ApoB/ApoA-I, NEFA, LDL(-), LDL(-)/TC and CETP activity than WCLOW group. Profile opposite was observed for per cent lean body mass, HDL-C, ApoA-I, HDL/ApoA-I and PON-1. When it classified according to HOMA (insulin resistant IR and insulin sensitive IS), IR group showed a negative impact on BMI, WC, per cent body fat, blood pressure, TG and TG/HDL-C, and contrary result for per cent mass lean and PON1. The cardiovascular risk index propose showed that WCHIGH IR = WCHIGH IS > WCLOW IR = WCLOW IS group. Conclusions: Therefore, LDL(-) content and CETP activity associated with obesity, mainly abdominal, alter the cardiometabolic risk of adolescents

Introdução: A obesidade é um importante problema de Saúde Pública e, segundo a Organização Mundial da Saúde, representa uma epidemia global. É considerada uma doença crônica, multifatorial, que depende não só de fatores genéticos e fisiopatológicos, mas também de variáveis culturais, sociais e psicológicas associadas à quantidade e a qualidade da alimentação. Nesse contexto, os adolescentes como foco de mudanças fisiológicas, anatômicas e sociais se tornam um grupo com elevada frequência de fatores de risco associados à obesidade. Objetivo: Avaliar o papel da lipoproteína de baixa densidade eletronegativa [LDL(-)], da proteína transportadora de éster de colesterol (CETP) e da resistência à insulina (RI) no risco cardiometabólico de adolescentes. Métodos: Foram recrutados adolescentes de ambos os sexos, com faixa etária de 10 a 19 anos e, regularmente matriculados em escolas da cidade de São Paulo. Medidas antropométricas, tais como, peso, altura, circunferência da cintura (CC) e composição corporal foram avaliadas, e classificadas considerando sexo e idade. Após jejum (12-15h), foi coletada uma amostra de sangue e a partir do plasma foram realizadas as seguintes análises: glicose, insulina e cálculo do HOMA, perfil lipídico, apolipoproteína A-I e B, atividade da paraoxonase 1 (PON1), ácidos graxos livres (AGL), atividade da CETP e LDL(-). Os resultados obtidos foram analisados por meio dos testes qui-quadrado, Kappa, Kolmogorov-Smirnov, t-student, ANOVA, Mann-Whitney, Kruskal-Wallis, Bonferroni e de tendência linear, com valor de significância de p< 0,05. Resultados: Os adolescentes eutróficos apresentaram menor atividade de CETP e conteúdo de LDL(-) em relação àqueles com excesso de peso. O IMC apresentou associação positiva e linear com o CT/HDL-C, TG/HDL-C, ApoB/ApoA-I, LDL(-) e LDL(-)/CT. Perfil inverso foi observado para HDL-C e ApoA-I. A CC mostrou associação positiva com TG, CT/HDL-C, LDL-C/HDL-C, TG/HDL-C, ApoB/ApoA-I, LDL(-), LDL(-)/CT e CETP. Associação negativa foi observada entre CC e HDL-C e ApoA-I. Após o ajuste pela atividade da CETP, associações entre o HDL-C, LDL-C/HDL-C, CT/HDLC e LDL(-)/LDL-C com o IMC ou CC foram modificadas. Ao ajustarmos pela concentração de LDL(-), nenhuma associação sofreu alteração, o que sugere um mecanismo independente para a regulação dessa partícula durante a obesidade.Ao analisarmos os adolescentes segundo CC, verificamos que os adolescentes com CCALTA apresentaram elevado IMC, por cento de gordura corporal, pressão arterial sistólica, conteúdo de insulina, HOMA, TG, TG/HDL-C, CT/HDL-C, LDL-C/HDL-C, ApoB/ApoA-I, AGL, LDL(-), LDL(-)/CT e atividade da CETP, quando comparados aqueles com CCBAIXA. Perfil inverso foi observado para por cento de massa magra, HDL-C, ApoA-I, HDL/ApoA-I e PON-1. Quando classificados segundo HOMA (resistente à insulina - RI e sensível à insulina - SI), os adolescentes RI mostraram um impacto negativo sobre o IMC, CC, por cento de gordura corporal, pressão arterial, TG e TG/HDL-C, e resultado inverso para por cento de massa magra e PON1. O índice de risco cardiovascular proposto mostrou que o grupo CCALTA-RI = CCALTA-SI > CCBAIXA-RI = CCBAIXASI. Conclusões: Portanto, a concentração de LDL(-) e a atividade da CETP associada à obesidade, principalmente abdominal, alteram o risco cardiometabólico de adolescentes / Introduction: Obesity is a major public health problem and, according to World Health Organization, represents a global epidemic. It is considered a chronic, multifactorial disease, which depends not only of genetic and pathophysiology factors, but also of cultural, social and psychological associated with diet profile variables. In this context, adolescents as the focus of physiological, anatomical and social changes become a group with high frequency of risk factor for obesity. Objective: To evaluate the role of the electronegative low-density lipoprotein [LDL(-)] concentration, cholesteryl ester transfer protein (CETP) activity and insulin resistance on cardiometabolic risk of adolescents. Methods: We recruited adolescents of both sexes, aged 10 to 19 years and enrolled in schools in the city of São Paulo. Anthropometric measurements such as weight, height, waist circumference (WC) and body composition were evaluated and classified according to sex and age. After fasting (12-15h) was analyzed from plasma: glucose, insulin and HOMA, lipid profile, apolipoprotein A-I and B, paraoxonase 1 activity (PON1), non-esterified fatty acids (NEFA), CETP activity and LDL(-). The results were analyzed by chi-square, Kappa, Kolmogorov-Smirnov, t-student, ANOVA, Mann-Whitney, Kruskal-Wallis, Bonferroni and linear tendency test, with p< 0.05. Results: The subjects with normal weight had lower CETP activity and content of LDL(-) than excess weight adolescents. BMI showed positive and linear association with TC/HDL-C, TG/HDL-C, ApoB/ApoA-I, LDL(-) and LDL(-)/TC. Profile opposite was observed for HDL-C and ApoA-I. The WC was positively associated with TG, TC/HDL-C, LDL-C/HDL-C, TG/HDL-C, ApoB/ApoA-I, LDL(-), LDL(-)/CT and CETP. Negative association was observed between WC and HDL-C and ApoA-I. After adjustment for CETP, associations between HDL-C, LDL-C/HDL-C, TC/HDL-C and LDL(-)/LDL-C with BMI or WC were modified. Adjustment for LDL(-) content was not able to change these associations, suggesting an independent mechanism for regulation of the levels of this particle during obesity. Analysis second WC, it was found that adolescents 10 with WCHIGH showed higher BMI, per cent body fat, systolic blood pressure, insulin, HOMA, TG, TG/HDL-C, TC/HDL-C, LDL-C/HDL-C, ApoB/ApoA-I, NEFA, LDL(-), LDL(-)/TC and CETP activity than WCLOW group. Profile opposite was observed for per cent lean body mass, HDL-C, ApoA-I, HDL/ApoA-I and PON-1. When it classified according to HOMA (insulin resistant IR and insulin sensitive IS), IR group showed a negative impact on BMI, WC, per cent body fat, blood pressure, TG and TG/HDL-C, and contrary result for per cent mass lean and PON1. The cardiovascular risk index propose showed that WCHIGH IR = WCHIGH IS > WCLOW IR = WCLOW IS group. Conclusions: Therefore, LDL(-) content and CETP activity associated with obesity, mainly abdominal, alter the cardiometabolic risk of adolescents

A modificação oxidativa da LDL possui um papel crucial na patogênese da aterosclerose que é uma das principais causas de mortalidade nos pacientes renais crônicos. Uma subfração de LDL modificada in vivo, denominada LDL eletronegativa (LDL-), é formada a partir de modificações da parte protéica (ApoB100) e lipídica (fosfolípides, triglicérides e colesterol) da LDL induzidas por diversos mecanismos. A LDL (-) tem menor afinidade pelos receptores da LDL, é citotóxica para células endoteliais e apresenta atividade pró-inflamatória, quando comparada à LDL nativa. Com o objetivo de investigar as alterações do estado nutricional relacionadas à formação da LDL(-) nos pacientes renais crônicos, analisou-se neste estudo as concentrações plasmáticas de LDL(-), anticorpos IgG anti-LDL(-) e seus imunocomplexos em pacientes sob hemodiálise (HD, n=25) ou sob diálise peritoneal (DP, n=11) e indivíduos saudáveis (grupo controle, n=10), relacionando-as ao perfil lipídico e às concentrações plasmáticas de &#945;-tocoferol e ascorbato. Os resultados mostraram que a concentração de LDL(-) foi maior (p&#60;0.01) nos pacientes hemodialisados (575,6&#177;233,1&#181;g/mL) quando comparados aos pacientes submetidos à diálise peritoneal (223,4&#177;117,5 &#181;g/mL) e aos controles (54,9&#177;33,3&#181;g/mL). Os níveis de anticorpos IgG anti-LDL(-) foram mais elevados (p&#60;0,00001) nos controles (O,36&#177;0,09&#181;g/mL), quando comparados aos pacientes DP (0,28&#177;0,12&#181;g/mL) e HD (0,2&#177;0,1 &#181;g/mL). As concentrações dos imunocomplexos no grupo controle (0,35&#177;0,20&#181;g/mL) foram significativamente maiores comparadas às dos grupos HD (0,15&#177;0,07&#181;g/mL) e DP (0,22&#177;0,07&#181;g/mL). Não houve diferença das concentrações plasmáticas de ascorbato e de alfa-tocoferol (normalizada pela concentração de colesterol) nos grupos estudados. A maioria da população estudada estava eutrófica, segundo o índice de massa corpórea (IMG). Conclui-se que as concentração de LDL(-) nos pacientes HD e DP foram significativamente mais elevadas, enquanto os níveis de anticorpos IgG anti-LDL(-) foram menores, nos pacientes HD e DP comparados ao grupo controle. As análises de correlação demonstraram que os valores de prega cutânea tricipital (PCT) se correlacionaram diretamente com as concentrações plasmáticas dos imunocomlexos (r= 0,37; p= 0,01) e inversamente com as concentrações plasmáticas de LDL(-) (r= - 0.37; p= 0,018). As concentrações plasmáticas dos anticorpos anti-LDL(-) se correlacionaram diretamente com os valores do IMC (r= 0,83 p=0,00001) e da circunferência da cintura (r= 0,75 p= 0,0001). / A minimally modified form of LDL, with structural ApoB100 modification and lower affinity by LDL receptors, has been described in blood plasma. This circulating modified form of LDL, named electronegative LDL, LDL(-), has increased negative charge, higher cytotoxicity and pro-inflammatory activity as compared to the native LDL. This LDL-is poorly described in hemodialysis and there is no study in peritoneal dialysis patients. Thus, the purpose of this study was to evaluate the relation of the nutritional status with the amount of electronegative LDL (LDL-), its autoantibodies and immune complexes (IC) in dialysed patients. LDL(-), its autoantibodies and IC were determined by ELISA in chronic kidney disease (CKD) patients undergoing hemodialysis (HD) or peritoneal dialysis (PD) and compared to subjects without CKD (controls). Nutritional status, lipid profile and plasma concentrations of alpha-tocopherol, ascorbate and immune complexes (IC) were also evaluated. Results are expressed as median of LDL-(&#181;g/mL) and anti-LDL(-) IgG (OD405 nm). The concentrations of LDL(-) were higher in HD patients (575.6&#177;233.1 &#181;g/mL) as compared to PD (223.4&#177;117.5&#181;g/mL) and control groups (54.9&#177;33.3&#181;g/mL) (p&#60;0.01). The anti-LDL(-) IgG auto-antibodies were elevated in controls (0.36&#177;0.09&#181;g/mL) in relation to PD patients (0.28&#177;0.12&#181;g/mL) and HD patients (0.2&#177;0.1 &#181;g/mL) , (p&#60;0.00001). A negative correlation was observed between anti¬-LDL(-)lgG and LDL(-) levels (r = -0.43; P = 0.003) in the studied groups. The concentrations of le in the control group (0.35&#177;0.20&#181;g/mL) were higher compared with HD (0.15&#177;0.07&#181;g/mL) and PD (0.22&#177;0.07&#181;g/mL) groups. No differences were found for the plasma levels of ascorbate and alpha-tocopherol (normalized by cholesterol concentration) among the studied groups The body mass index (BMI) was normal in the majority of the studied subjects. The highest LDL(-) concentrations were found in HD patients, and for the first time, we showed that PD patients also have high levels of LDL(-) when compared with non-CKD subjects. The levels of anti-LDL(-) IgG in CKD patients were lower compared to controls. The correlation analysis showed that the values for triceps skin fold were positively correlated with blood plasma concentrations of IC (r= 0.37; p=0.01) and negatively correlated with LDL(-) concentrations (r= - 0.37; P 0.018). The concentrations of anti-LDL(-) autoantibodies were directly ·correlated with BMI (r= 0.83 p=0.00001) and waist circunference (r= 0.75 p= 0.0001).

A modificação oxidativa da LDL possui um papel crucial na patogênese da aterosclerose que é uma das principais causas de mortalidade nos pacientes renais crônicos. Uma subfração de LDL modificada in vivo, denominada LDL eletronegativa (LDL-), é formada a partir de modificações da parte protéica (ApoB100) e lipídica (fosfolípides, triglicérides e colesterol) da LDL induzidas por diversos mecanismos. A LDL (-) tem menor afinidade pelos receptores da LDL, é citotóxica para células endoteliais e apresenta atividade pró-inflamatória, quando comparada à LDL nativa. Com o objetivo de investigar as alterações do estado nutricional relacionadas à formação da LDL(-) nos pacientes renais crônicos, analisou-se neste estudo as concentrações plasmáticas de LDL(-), anticorpos IgG anti-LDL(-) e seus imunocomplexos em pacientes sob hemodiálise (HD, n=25) ou sob diálise peritoneal (DP, n=11) e indivíduos saudáveis (grupo controle, n=10), relacionando-as ao perfil lipídico e às concentrações plasmáticas de &#945;-tocoferol e ascorbato. Os resultados mostraram que a concentração de LDL(-) foi maior (p&#60;0.01) nos pacientes hemodialisados (575,6&#177;233,1&#181;g/mL) quando comparados aos pacientes submetidos à diálise peritoneal (223,4&#177;117,5 &#181;g/mL) e aos controles (54,9&#177;33,3&#181;g/mL). Os níveis de anticorpos IgG anti-LDL(-) foram mais elevados (p&#60;0,00001) nos controles (O,36&#177;0,09&#181;g/mL), quando comparados aos pacientes DP (0,28&#177;0,12&#181;g/mL) e HD (0,2&#177;0,1 &#181;g/mL). As concentrações dos imunocomplexos no grupo controle (0,35&#177;0,20&#181;g/mL) foram significativamente maiores comparadas às dos grupos HD (0,15&#177;0,07&#181;g/mL) e DP (0,22&#177;0,07&#181;g/mL). Não houve diferença das concentrações plasmáticas de ascorbato e de alfa-tocoferol (normalizada pela concentração de colesterol) nos grupos estudados. A maioria da população estudada estava eutrófica, segundo o índice de massa corpórea (IMG). Conclui-se que as concentração de LDL(-) nos pacientes HD e DP foram significativamente mais elevadas, enquanto os níveis de anticorpos IgG anti-LDL(-) foram menores, nos pacientes HD e DP comparados ao grupo controle. As análises de correlação demonstraram que os valores de prega cutânea tricipital (PCT) se correlacionaram diretamente com as concentrações plasmáticas dos imunocomlexos (r= 0,37; p= 0,01) e inversamente com as concentrações plasmáticas de LDL(-) (r= - 0.37; p= 0,018). As concentrações plasmáticas dos anticorpos anti-LDL(-) se correlacionaram diretamente com os valores do IMC (r= 0,83 p=0,00001) e da circunferência da cintura (r= 0,75 p= 0,0001). / A minimally modified form of LDL, with structural ApoB100 modification and lower affinity by LDL receptors, has been described in blood plasma. This circulating modified form of LDL, named electronegative LDL, LDL(-), has increased negative charge, higher cytotoxicity and pro-inflammatory activity as compared to the native LDL. This LDL-is poorly described in hemodialysis and there is no study in peritoneal dialysis patients. Thus, the purpose of this study was to evaluate the relation of the nutritional status with the amount of electronegative LDL (LDL-), its autoantibodies and immune complexes (IC) in dialysed patients. LDL(-), its autoantibodies and IC were determined by ELISA in chronic kidney disease (CKD) patients undergoing hemodialysis (HD) or peritoneal dialysis (PD) and compared to subjects without CKD (controls). Nutritional status, lipid profile and plasma concentrations of alpha-tocopherol, ascorbate and immune complexes (IC) were also evaluated. Results are expressed as median of LDL-(&#181;g/mL) and anti-LDL(-) IgG (OD405 nm). The concentrations of LDL(-) were higher in HD patients (575.6&#177;233.1 &#181;g/mL) as compared to PD (223.4&#177;117.5&#181;g/mL) and control groups (54.9&#177;33.3&#181;g/mL) (p&#60;0.01). The anti-LDL(-) IgG auto-antibodies were elevated in controls (0.36&#177;0.09&#181;g/mL) in relation to PD patients (0.28&#177;0.12&#181;g/mL) and HD patients (0.2&#177;0.1 &#181;g/mL) , (p&#60;0.00001). A negative correlation was observed between anti¬-LDL(-)lgG and LDL(-) levels (r = -0.43; P = 0.003) in the studied groups. The concentrations of le in the control group (0.35&#177;0.20&#181;g/mL) were higher compared with HD (0.15&#177;0.07&#181;g/mL) and PD (0.22&#177;0.07&#181;g/mL) groups. No differences were found for the plasma levels of ascorbate and alpha-tocopherol (normalized by cholesterol concentration) among the studied groups The body mass index (BMI) was normal in the majority of the studied subjects. The highest LDL(-) concentrations were found in HD patients, and for the first time, we showed that PD patients also have high levels of LDL(-) when compared with non-CKD subjects. The levels of anti-LDL(-) IgG in CKD patients were lower compared to controls. The correlation analysis showed that the values for triceps skin fold were positively correlated with blood plasma concentrations of IC (r= 0.37; p=0.01) and negatively correlated with LDL(-) concentrations (r= - 0.37; P 0.018). The concentrations of anti-LDL(-) autoantibodies were directly ·correlated with BMI (r= 0.83 p=0.00001) and waist circunference (r= 0.75 p= 0.0001).