RODRIGUES, Felipe Augusto Rocha. Estudo das propriedades citotóxica, genotóxica e antitumoral de um benzil-isotiocianato isolado de Moringa oleifera (Moringaceae). 2010. 142 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-26T11:59:47Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_farrodrigues.pdf: 7433234 bytes, checksum: 7cace7d3ba0455e3f11ead05da57543d (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-26T12:23:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_farrodrigues.pdf: 7433234 bytes, checksum: 7cace7d3ba0455e3f11ead05da57543d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-26T12:23:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_farrodrigues.pdf: 7433234 bytes, checksum: 7cace7d3ba0455e3f11ead05da57543d (MD5) Previous issue date: 2010 / Moringa oleifera Lam. é uma planta tropical com grande importância por seus usos medicinais. Vários compostos já foram isolados de diferentes partes da planta, e dentre as atividades farmacológicas podemos destacar a antitumoral. Este trabalho determinou, inicialmente, a atividade citotóxica, por MTT, do composto 4-(4′-O-acetil-α-L-ramnopiranosiloxi)benzil isotiocianato (MFLC-1), frente a linhagem leucêmica de HL-60 e células mononucleadas isoladas de sangue periférico (CMSP) após 24h de incubação. O composto mostrou-se ativo contra células tumorais de HL-60 e CMSP, onde apresentou uma ligeira seletividade para as células tumorais. Os estudos acerca do mecanismo de ação da atividade citotóxica foi aprofundado em células HL-60 após 24 horas de incubação com e sem pré-incubação com α-tocoferol (40μM) através dos seguintes ensaios: 1- Mensuração do estresse oxidativo através do TBARS; 2- Coloração por May-Grunwald-Giemsa; 3- Avaliação da integridade de membrana, viabilidade celular e concentração de células; 4- Determinação do conteúdo de DNA nuclear da célula; 5- Determinação da externalização da fosfatidilserina em células HL-60; 6- Determinação da ativação de caspases iniciadoras (-8 e -9) e efetoras (-3 e -7). O composto induziu estresse oxidativo, diminuiu o número de células e a viabilidade celular e induziu ativação de caspases iniciadoras (8 e 9) e efetoras (3 e 7). Na análise das células coradas por May-Grunwald-Giemsa, podemos observar características morfológicas sugestivas de morte celular por apoptose seguida de necrose secundária na maior concentração (1,4μg/mL). Quando pré-incubamos as células de HL-60 com α-tocoferol (40μM), todas as características, tanto bioquímicas quanto morfológicas, são suprimidas indicando um importante papel do estresse oxidativo na indução de morte celular promovida pelo composto MFLC-1. A genotoxicidade do MFLC-1 foi determinada em células HL-60 e CMSP após 24h de incubação, onde observamos a formação de ligações cruzadas (cross-links) no DNA, o que foi revertido pela exposição das células tratadas a proteinase K. Dessa forma, observamos um aumento do índice de dano ao DNA com o aumento da concentração, indicando a formação de cross-link do tipo DNA-proteína. Também observamos que o composto é mais genotóxico para as células tumorais que as normais. O efeito antitumoral (in vivo) do MFLC-1 foi analisado em camundongos transplantados com o tumor Sarcoma 180 e tratados nas doses de 25 e 50 mg/Kg/dia por via intraperitoneal. A inibição do crescimento tumoral foi de 55,11% e 71,58% nas doses testadas de 25 e 50mg/Kg, respectivamente. A análise histopatológica dos órgãos dos animais mostrou que MFLC-1 provoca efeitos tóxicos moderados, principalmente no fígado e no baço, mas esses podem ser considerados como reversíveis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:32:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 318270.pdf: 3642332 bytes, checksum: bdee1a16252bb2f6286cc9d22aa6a8de (MD5) Previous issue date: 2013 / As leucemias agudas são desordens heterogêneas do sistema hematopoiético caracterizadas pela expansão clonal de uma população de células neoplásicas malignas que sofrem bloqueio maturativo quanto à sua diferenciação. O tratamento mais efetivo para as leucemias, a quimioterapia, está associado a altas taxas de recidiva e a elevados índices de morbidade e mortalidade. Estudos demonstram que as chalconas e seus derivados possuem atividade citotóxica e apresentam potencial para o desenvolvimento de novos fármacos. Assim, o objetivo do presente estudo é a busca por novos compostos a partir de três chalconas sintéticas derivadas do 1- e do 2-naftaldeído que tenham atividade contra células leucêmicas com pouco ou nenhum efeito em células normais. Entre os compostos avaliados, a chalcona A1 apresentou resultados mais promissores e foi selecionada para estudos posteriores. Para os ensaios de citotoxicidade, as células K562, Jurkat, U937, Kasumi, NB4 e CEM foram incubadas com a chalcona A1 em concentrações crescentes por 24, 48 e 72 h. A viabilidade celular foi determinada pelo método do MTT, onde se observou que o composto reduziu a viabilidade celular das seis linhagens de forma dependente da concentração e do tempo de incubação. A fim de verificar a efetividade do composto em um modelo de tumor sólido, foram utilizadas células de adenocarcinoma de cólon humano HT-29. Os resultados demonstram que a chalcona A1 também apresentou citotoxicidade de forma dependente do tempo e da concentração, porém com CI50 mais elevada em comparação às linhagens leucêmicas. Para avaliar a seletividade do composto para células tumorais, a chalcona foi incubada com fibroblastos humanos de medula óssea (JMA) e com células mononucleadas de indivíduos saudáveis. A chalcona A1 não reduziu significativamente a viabilidade celular em ambos os modelos. A apoptose foi confirmada pela observação morfológica após coloração com brometo de etídio e laranja de acridina, pelo ensaio de fragmentação do DNA e por citometria de fluxo pelo método da Anexina V. A investigação do efeito no ciclo celular mostrou que o composto A1 causou bloqueio significativo em diferentes fases nas seis linhagens avaliadas. A fim de investigar os mecanismos pelos quais o composto causou morte celular, investigou-se o efeito da chalcona A1 no potencial mitocondrial e na expressão das proteínas survivina e KI-67 nas células K562, Jurkat e Kasumi, e das proteínas Bcl-2, Bax, FasR, AIF e caspase-3 nas linhagens K562 e Jurkat. Os resultados demonstraram que o composto reduziu o potencial mitocondrial, diminuiu a expressão da proteína antiapoptótica Bcl-2 e aumentou a expressão da proteína pró-apoptótica Bax, sugerindo que o mecanismo de morte celular envolve a via intrínseca. Na linhagem Jurkat, foi observado também aumento de FasR, o que indica o envolvimento da via extrínseca. Além disso, o mecanismo de ação da chalcona A1 envolve o aumento da expressão da caspase-3 e a diminuição da expressão da proteína antiapoptótica survivina e do marcador de proliferação celular KI-67. Em experimentos ex vivo, a chalcona A1 reduziu a viabilidade de células mononucleadas de oito pacientes portadores de diferentes tipos de leucemia aguda, o que confirma os resultados de citotoxicidade encontrados in vitro <br>

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:17:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 325597.pdf: 1891302 bytes, checksum: 73e6e93a7ecfb558a85d9aac97cd3495 (MD5) Previous issue date: 2013 / O câncer é caracterizado pelo crescimento desordenado de células anormais em tecidos e órgãos, podendo vir a espalhar-se por outras regiões do organismo. As células neoplásicas adquiriram a propriedade de proliferação além dos limites normais e de resistência à apoptose. O entendimento dos mecanismos moleculares de morte das células tumorais se faz necessário para o avanço em direção ao desenvolvimento de compostos antineoplásicos com maior citotoxicidade e maior seletividade para as células tumorais. A utilização de modelos celulares de leucemia na busca de novas terapias antitumorais torna-se interessante, uma vez que as linhagens celulares possibilitam a obtenção de resultados mais rápidos na prospecção de novos agentes antitumorais. Estudos anteriores demonstram que os sais de isotiourônio (SIs) apresentam atividade antibacteriana, antifúngica e antinflamatória, porém pouco ainda se sabe sobre uma possível atividade antitumoral. As tiazinodionas (TDs) são análogos das tiazolidinedionas, conhecidas pela atividade antihiperglicêmica já bem caracterizada e mais recentemente tem sido descrita a atividade antitumoral em diversos tipos de câncer como cólon, mama, pulmão. Diante deste cenário, o objetivo desse trabalho foi pesquisar novos potenciais agentes antileucêmicos a partir de sais de isotiourônio e tiazinodionas e investigar o mecanismo de morte celular induzida por estes compostos. Observou-se que os sais de isotiourônio MF 04, MF05, MF06, MF07 e MF08 apresentaram concentração citotóxica para 50% das células (CC50) na faixa de 3 a 12 µM com índice de seletividade = 2 para as células de leucemia. Além disso, esses compostos parecem induzir à morte celular através da indução do estresse metabólico com produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e perda do potencial de membrana mitocondrial. O composto MF08 que apresentou a menor CC50 e maior índice de seletividade em células de leucemia, além de causar alterações morfológicas que sugerem morte celular por mitose catastrófica. Por esse motivo, novos compostos derivados desse SI foram sintetizados, mas os mesmos apresentaram atividade inferior à molécula de origem. As tiazinodionas 1a e 1g apresentaram CC50 de 35 e 28 µM respectivamente e índice de seletividade em torno de 3. O mecanismo de morte envolvido na ação das tiazinodionas está relacionado a produção de EROs, perda de potencial de membrana mitocondrial e alteração nos níveis de cálcio intracelular sugerindo um estresse de retículo endoplasmático e ativação das caspases-12 e -3 culminando em apoptose. Considerando os compostos testados, ambas as classes mostram-se promissoras para estudos pré-clínicos.<br> / Abstract : Cancer is characterized by abnormal growth of normal cells in tissues and organs that can spread to other regions. Neoplastic cells acquired the property of proliferation beyond normal limits and apoptosis resistance. It is important to better understand the molecular mechanisms of tumoral cell death in order to promote the development of new antineoplastic compounds with higher toxicity and selectivity. Leukemia cell models in new antitumoral research are interesting due to their easy handling and feasibility. Previous studies showed that isothiouronium salts presented antibacterial, antifungal and anti-inflammatory activities, but the antitumoral activity is still unclear. The thiazinediones are thiazolidinediones analogs wich have its antihyperglycemic activity well characterized and recent studies presented their antitumoral activity in several types of cancer as colon, breast and lung. In this scenario, the aim of this work was to investigate new potential antileukemic agents by isothiouronium salts and thiazolidinediones derivatives and explore the cell death mechanism induced by them.. It was observed that isothiouronium salts MF 04, MF05, MF06, MF07 and MF08presented a range of 3 to 12µM of the cytotoxic concentration to reach 50% of cell death (CC50) and a selectivity index of = 2 to leukemia cells. Furthermore, these compounds seem to induce cell death by metabolic stress with reactive oxygen species production (ROS) and loss of mitochondrial membrane potential. Compound MF08 presented the lowest CC50 and higher selectivity index in leukemia cells and morphologic alterations suggest that it may induce mitotic catastrophe cell death pathway. Therefore novel compounds derived from MF08 where synthetized but it was observed inferior activity compared to original molecule. Thiazinediones 1a and 1g presented CC50 of 35 and 28µM respectively and selectivity index nearby 3. The mechanism of action of thiazinediones is related to ROS production, loss of mitochondrial membrane potential and calcium imbalance suggesting a endoplasmic reticulum stress and caspases -12 and 3 activation culminating in apoptosis cell death. Considering the tested compounds, both groups seem to be promising to further pre-clinical trials.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T05:28:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 208366.pdf: 815423 bytes, checksum: ec812f1ce0f5b909e707ec36b6207424 (MD5)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T06:20:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T00:59:30Z : No. of bitstreams: 1 183506.pdf: 3172236 bytes, checksum: d0f26079bd5b4a9bb6a659d1c2b0c9bb (MD5) / O presente trabalho avaliou, através de técnicas moleculares, bioquímicas e farmacológicas, o efeito citotóxico do óxido nítrico (NO) e do taxol sobre células linfoblásticas leucêmicas. Foi investigado o envolvimento do NF-kB e a importância da glutationa na citotoxicidade causada pelo NO e pelo taxol. Os resultados obtidos, demonstraram que o efeito citotóxico do NO e do taxol sobre células leucêmicas linfoblásticas parecem atuar em vias muito semelhantes, ou seja, ambos apresentaram ações independentes de alterações no citoesqueleto, inibiram a atividade do NF-kB e depletaram os níveis de glutationa (GSH). Além disso, quando associados, apresentaram efeito citotóxico sinérgico. Sendo assim, concluímos que o NO e o taxol, além de diminuírem os níveis de glutationa intracelular, o que sensibiliza as células aos danos oxidativos e nitrosativos, também impedem o restabelecimento dos níveis normais de GSH intracelular, através da inibição da atividade do NF-kB.

Resumo não disponível.

O presente estudo propõe-se a investigar as possíveis manifestações da somatose infantil em pacientes do Hospital da Criança Santo Antônio portadores de Leucemia Linfoblástica Aguda. Utilizamos o método psicanalítico de estudo com casos para a escuta psicanalítica de dois casos escolhidos: o caso 1, filha única de quatro anos de idade uma família que reside na região da serra; recebeu o diagnóstico de LLA aos dois anos e nove meses, sem recidivas e com bom prognóstico. O caso 2, menino com sete anos de idade, com dois irmãos mais velhos e um mais moço, família residente na grande Porto Alegre; recebeu diagnóstico de LLA aos três anos, duas recidivas após o diagnóstico e um prognóstico reservado. A partir de nosso instrumental teórico conceitual concebemos a somatose como efeito da ação do mecanismo denominado foraclusão local. Este mecanismo é conseqüência do emassamento ou compactação entre os significantes primordiais S1 e S2. Em ambos os casos estudados, encontramos nas histórias subjetivas dos participantes a presença de significantes envolvidos no desencadeamento e no curso da doença.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-10-04T15:58:08Z No. of bitstreams: 1 2016_JulianaCarvalhoRochaAlvesdaSilva.pdf: 855628 bytes, checksum: 823ea873caefea29e8d4a65f4c6465a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-16T17:57:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JulianaCarvalhoRochaAlvesdaSilva.pdf: 855628 bytes, checksum: 823ea873caefea29e8d4a65f4c6465a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T17:57:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JulianaCarvalhoRochaAlvesdaSilva.pdf: 855628 bytes, checksum: 823ea873caefea29e8d4a65f4c6465a6 (MD5) / A leucemia linfoide crônica (LLC) é uma doença linfoproliferativa que resulta no acúmulo de células B monoclonais na medula óssea, sangue periférico, linfonodos e baço. O diagnóstico dessa doença costuma ocorrer após os 70 anos de idade, sendo mais frequente em homens do que em mulheres. Além disso, esta é a leucemia mais prevalente nos países ocidentais. Embora a etiologia da doença seja desconhecida, alguns fatores prognósticos são bem conhecidos como a expressão da proteína ZAP-70, alta contagem de células malignas (leucocitose) associado ao tempo de duplicação linfocitária e alterações cariotípicas específicas ou aquisição de cariótipo complexo (3 ou mais alterações cariotípicas). Atualmente, a fisiopatologia de diversos tipos de neoplasias tem sido relacionada a mecanismos epigenéticos. Nesse sentido, foi demonstrado que a expressão das enzimas Histona Metiltransferases (HMTs) das famílias Euchromatic Histone-Lysine N-Methyltransferase (EHMT) e Suppressor Of Variegation (SUV) podem estar relacionadas à instabilidade genômica e ao pior prognóstico de alguns tipos de câncer. Considerando essas associações, investigamos nesse trabalho a expressão dos genes membros das famílias EHMT e SUV em pacientes com LLC e associamos esses achados a marcadores de prognóstico, como: expressão da proteína ZAP-70, cariótipo e leucometria desses pacientes. Nesse trabalho, observamos que a baixa expressão do gene SUV39H1 está associada à aquisição de anormalidades citogenéticas em pacientes com LLC. A expressão elevada de SUV39H2 está associada à baixa contagem de plaquetas e a um maior número de casos com alterações cariotípicas. A baixa expressão de SUV4-20H1 está relacionada com maior leucometria, enquanto que a baixa expressão de SUV4-20H2 está associada à expressão elevada de ZAP-70. EHMT1 se mostrou com expressão elevada nas amostras de LLC, enquanto que EHMT2, embora não tenha apresentado expressão diferencial entre LLC e pacientes saudáveis, está associado à aquisição de cariótipo complexo nessa doença. Nossos dados evidenciam que as famílias de metiltransferases SUV e EHMT estão associadas à aquisição de indicadores de mau prognóstico na LLC, como contagem de plaquetas, maior número de células malignas, expressão de ZAP-70 e aquisição de cariótipo complexo. Esses dados contribuem para a área de epigenética e câncer, podendo servir de base para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas que visem controlar processos epigenéticos na LLC. / Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a lymphoproliferative disease that results in accumulation of monoclonal B cells in bone marrow, peripheral blood, lymph nodes and spleen. The diagnosis of LLC occurs, normally, after 70 years, affects slightly more men and this disease is the most common leukemia in Western countries. Although the etiology of the CLL is unknown, some prognostic factors are well known as the expression of ZAP-70, the high quantity of malignant cells (leukocytosis) associated with lymphocyte duplicating time and karyotype changes or acquisition of complex karyotype (three or more karyotype alterations). Currently, the pathophysiology of various types of cancers has been linked to epigenetic mechanisms. In this line, it was shown that the expression of the enzymes histone methyl Transferases (HMTs) of Euchromatic Histone-Lysine N-Methyltransferase (EHMT) and Suppressor Of Variegation (SUV) families may be related to genomic instability and to bad prognosis markers of some cancers. Considering these associations, we investigated in this study the expression of EHMT and SUV members in CLL samples. Furthermore, we investigated the association of gene expression analysis and prognosis markers, like: ZAP-70 expression, karyotype and white blood cell count of these patients. In this study, we found that low expression of SUV39H1 gene is associated with the presence of cytogenetic abnormalities in patients with CLL. The high expression of SUV39H2 is associated with low platelet count and with the presence of cytogenetic abnormalities. Low SUV4-20H1 expression is related to the accumulation of leukocytes, while the low SUV4-20H2 expression influences the expression of ZAP-70. EHMT1 was high expressed in LLC, while EHMT2 was associated with the presence of complex karyotype in this disease. Our data clearly show that the methyltransferases SUV and EHMT influence generally in CLL, being associated with the presence of bad prognosis markers in this disease, including platelet count, accumulation of malignant cells, expression of ZAP-70 and abnormal karyotype. These results may provide the basis for the development of new therapeutic strategies to prevent CLL progression.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-09T13:02:39Z No. of bitstreams: 1 2016_LuisAugustoMunizTelles.pdf: 1997639 bytes, checksum: 223339f23582f5f901c01296f18f5dac (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-06T14:24:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LuisAugustoMunizTelles.pdf: 1997639 bytes, checksum: 223339f23582f5f901c01296f18f5dac (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T14:24:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LuisAugustoMunizTelles.pdf: 1997639 bytes, checksum: 223339f23582f5f901c01296f18f5dac (MD5) / A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é a neoplasia com maior prevalência na infância. Melhorias muito expressivas no prognóstico da doença têm sido apresentadas nas últimas décadas, alcançando-se taxas de cura em torno de 90% em alguns casos. No entanto, a doença ainda apresenta mau prognóstico em pacientes adultos ou menores de um ano. A compreensão das neoplasias tem sido reinterpretada à luz do advento da epigenética como uma nova área do conhecimento. Constituindo um padrão de herança informacional que não depende de alterações na cadeia primária de DNA, a epigenética tem aberto o caminho para novas possibilidades de tratamento do câncer. As metiltransferases de lisina, em particular, têm estado em foco devido aos crescentes relatos de envolvimento na regulação da expressão de oncogenes ou genes supressores de tumor, bem como devido ao desenvolvimento de fármacos cujos alvos são estas mesmas enzimas. A família de metiltransferases SETD possui alguns membros que já foram descritos como tendo relacionamento com o câncer. No entanto, SETD4 ainda carece de mais profunda caracterização. Nesse sentido, este trabalho teve como objetivo descrever o perfil de transcrição de SETD4 em amostras clínicas de aspirado de medula óssea por meio de qPCR e verificar a sua relação com a leucemogênese por meio de análise de correlação com fatores clínicos e com a transcrição de outros genes. Também foi realizada uma análise exploratória de dados de expressão e transcrição disponíveis em bancos de bioinformática on-line. Foi verificado que SETD4 encontra-se com transcrição aumentada no grupo de amostras clínicas neoplásicas em relação às amostras não-neoplásicas de nossa coorte, exibindo aumento transcricional de cerca de 5.4 vezes. Durante o tratamento quimioterápico, os pacientes exibiram redução da transcrição da metiltransferase, revelando correlação com a queda no número de linfoblastos na medula óssea no 29° dia de indução quimioterápica. SETD4 teve sua transcrição fortemente correlacionada com a de duas outras metiltransferases: SETMAR e SMYD2. Foi detectada transcrição aumentada de SETD4 em dados obtidos por microarranjo e RNA-seq de outras neoplasias em plataformas disponíveis de dados públicos. Além disso, amplificações e deleções de número de cópias do gene parecem influenciar negativamente a sobrevida dos pacientes de leucemia mieloide aguda, e câncer de estômago, enquanto o nível aumentado de transcrição parece ter o mesmo efeito em LLA. Também verificamos que SETD4 apresenta mutações no domínio SET e Rubs-subs-bind que têm o potencial de impactar sua função enzimática. Juntos, estes resultados apontam para essa metiltransferase como uma enzima que pode ter um papel importante na leucemogênese e demais processos de carcinogênese, constituindo um atraente alvo terapêutico e farmacológico. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most prevalent cancer in childhood. Very significant improvements in the prognosis of the disease have been made in recent decades, with cure rates being achieved around 90% in some cases. However, the disease still has poor prognosis in adult patients or children with less than one year. The understanding of cancer has been reinterpreted in the light of the advent of epigenetics as a new area of knowledge. Constituting a pattern of informational inheritance that does not depend on changes on primary chain of DNA, epigenetics has opened the way to new possibilities of cancer treatment. Lysine methyltransferases, in particular, have been in focus due to the increasing reports of its involvement in the regulation of oncogene or tumor suppressor gene expression, as well as to the development of drugs targeting those same proteins. The SETD methyltransferase family has some members who have been described as being related to cancer. Despite all these efforts, SETD4 still lacks deeper characterization. Therefore, this study aimed to describe SETD4 transcription profile in clinical samples of bone marrow aspirate by qPCR and to assess its relationship with leukemogenesis by means of correlation analysis with clinical factors and transcription of other genes during chemotherapy. An exploratory analysis of data available at online bioinformatics platforms was also performed. It was found that SETD4 transcription is upregulated in the neoplastic group of clinical samples relative to non-neoplastic samples, exhibiting an increase of approximately 5.4 times. During chemotherapy, patients exhibited reduced methyltransferase transcription, showing correlation with the decrease in the number of lymphoblasts in the bone marrow. SETD4 was highly correlated with the transcription of two other methyltransferases: SETMAR and SMYD2. Upregulated transcription of SETD4 was detected in data obtained by microarray and RNA-seq of other neoplasias in public data platforms. Moreover, gene copy number amplifications and deletions seems to have a negative influence on survival of acute myeloid leukemia and gastric cancer patients while upregulation of transcription in ALL seems to have the same effect. We also verified that SETD4 presents mutations in SET and Rubs-subs-bind domains that may have an impact on its enzymatic function. Together, these results point to this methyltransferase as an enzyme that may play a role in leukemogenesis and other carcinogenesis processes, constituting an attractive therapeutic and pharmacological target.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-07-08T14:33:33Z No. of bitstreams: 1 2015_RenataPaulaCoppinideAlmeida.pdf: 1664573 bytes, checksum: 51ea0723acf2145b26ea30df349b2848 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-17T14:06:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_RenataPaulaCoppinideAlmeida.pdf: 1664573 bytes, checksum: 51ea0723acf2145b26ea30df349b2848 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-17T14:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_RenataPaulaCoppinideAlmeida.pdf: 1664573 bytes, checksum: 51ea0723acf2145b26ea30df349b2848 (MD5) / A leucemia linfóide aguda (LLA) é uma neoplasia maligna de linfócitos, caracterizada pelo acúmulo de células sanguíneas imaturas na medula óssea. Um dos medicamentos utilizados no tratamento da LLA é a enzima L-Asparaginase. Algumas linhagens de células tumorais não são capazes de produzir asparagina, assim, a redução dos níveis plasmáticos do aminoácido implica na inibição da síntese de proteínas das células leucêmicas. Atualmente, estão disponíveis apenas enzimas de origem bacteriana para serem utilizadas na clínica, o que reflete na grande taxa de efeitos adversos relacionados ao tratamento. Neste sentido, a busca por novas fontes de L-Asparaginase torna-se imprescindível. O presente trabalho teve como objetivo principal avaliar a produção de L-Asparaginase por fungos filamentosos isolados do bioma Cerrado brasileiro. Inicialmente, foi realizada a padronização do preparo da amostra e da metodologia para determinação da atividade enzimática, onde foram utilizadas a enzima padrão (Sigma-Aldrich) e a cepa de um conhecido produtor de L-Asparaginase, o Aspergillus terreus. Posteriormente, foram isolados 42 cepas fúngicas a partir do bioma Cerrado brasileiro. Das 42 cepas isoladas, 22 apresentaram halo vermelho, o que pode indicar a produção de L-Asparaginase. Essas 22 espécies foram cultivadas em meio líquido e apenas 10 apresentaram resultados positivos para produção enzimática. Em seguida, as 3 melhores cepas produtoras foram cultivadas em diferentes condições de cultivo a fim de melhorar a produção de L-Asparaginase. Com relação às fontes de carbono, a utilização de glicose foi essencial para a produção enzimática. A L-Prolina parece ser a fonte de nitrogênio mais eficaz para que a produção de L-Asparaginase ocorra. Foram encontrados ainda, diferentes valores de pH ótimos de cultivo pelas diferentes cepas fúngicas. / Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a malignant neoplasm of lymphocytes, characterized by the accumulation of immature blood cells in the bone marrow. One of the drugs used in the treatment of ALL is L-Asparaginase enzyme. Some tumor cell lines are not capable of producing asparagine thus the reduction of plasma levels of amino acids involves the inhibition of protein synthesis of leukemic cells. Currently, the only enzymes available for use in the clinic are of bacterial origin, which reflects the high rate of adverse effects related to treatment. In this way, the search for new sources of L-Asparaginase becomes indispensable. This study is aimed at evaluating the production of L-Asparaginase by isolated filamentous fungi of the brazilian savanna biome. Initially, the standardization of sample preparation was performed as well as the methodology for determining the enzymatic activity where the standard enzyme (Sigma-Aldrich) and the Aspergillus terreus, which is a known L-Asparaginase strain producer, were used. Subsequently, 42 fungal strains from the brazilian savanna were isolated and a screening to assess the ability of the same for the production of L-Asparaginase was performed through the halo test. Out of the 42 isolated stains, 22 species showed red halo, which may indicate the production of L-Asparaginase. These 22 species were cultivated in the liquid medium under controlled agitation and temperature and only 10 were positive for enzyme production. Then, the top 3 producing strains were grown in different culture conditions to improve the production of L-Asparaginase. Regarding the carbon sources, glucose utilization was essential for enzyme production. L-Proline seems to be the most effective source of nitrogen for producing L-Asparaginase. In addition, were found different optimum pH values of the different fungal strains cultivation.