Este estudo avaliou a ocorrência de leveduras do gênero Candida sp além dos principais microrganismos periodontopatogênicos e enterobactérias na saliva, em mucosa e no biofilme aderido à prótese total, correlacionando com aspectos clínicos e condição de higiene bucal de 90 indivíduos edêntulos e portadores de prótese total, por meio de métodos moleculares (PCR). Espécimes clínicos intrabucais foram coletados desses indivíduos após avaliação das condições sócio-econômicas e comportamentais. A microbiota bucal dos pacientes foi caracterizada por meio da obtenção de amostras de biofilme aderido às próteses totais, mucosa e saliva, as quais foram processadas, por meio de PCR. As inter-relações entre os diferentes microrganismos foram determinadas por meio dos testes de Qui-quadrado e Mann-Whitney. Verificaram-se diferenças na ocorrência de Prevotella intermedia e Enterobacteriaceae na saliva dos pacientes edêntulos, o mesmo ocorrendo com Enterobacteriaceae, Camphylobacter rectus e gênero Pseudomonas no biofilme aderido às próteses totais. As condições de higiene bucal e estado de conservação da prótese total precários favoreceram a ocorrência de leveduras do tipo Candida sp, em especial Candida albicans, em níveis estatisticamente significante nas amostras de mucosa e biofilme aderido à prótese total, tornando este dispositivo protético um potencial reservatório de leveduras e bactérias entéricas que podem ser de relevância na patogênese das infecções oportunistas. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT: The aim of this study was to evaluate the occurrence of major periodontopathogenic microorganisms and Enterobacteriaceae and biofilm adhered to the denture, mucosa and saliva in 90 edentulous subjects with complete dentures, using molecular methods (PCR). Clinical specimens were collected from these individuals after assessing the socio-economic circumstances and behavioral. The oral microbiota of patients was characterized by obtaining samples of the biofilm adhered to the dental prothesis and saliva, for detection of major pathogens using PCR. The possibility of inter-relationships between different microorganisms was determined using the chi-square test and Mann-Whitney test. There were differences in the occurrence of Prevotella intermedia and Enterobacteriaceae in the saliva of edentulous patients, likewise, Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Camphylobacter rectus and the biofilm attached to denture patients. The conditions for oral hygiene and stat of preservation of prosthesis total precarious favored the occurrence of yeasts of the Candida sp, particularly Candida albicans, statistically significant levels in samples of mucosa and biofilm acceded to total prosthesis, prothetic device, making it a potential reservoir of enteric bacteria and yeasts that may be of relevance in the pathogenesis of opportunistic infections.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-10T17:03:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Tese-EstebanVidal.pdf: 4190760 bytes, checksum: 17c0cf2ae4a482df143d454d5c00288d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T17:03:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Tese-EstebanVidal.pdf: 4190760 bytes, checksum: 17c0cf2ae4a482df143d454d5c00288d (MD5) Previous issue date: 2012-05-18 / Durante o processo fermentativo de elaboração de Cachaça, a leveduraSacharomyces cerevisiaeproduz uma serie de compostos com propriedadesorganolépticas, destacando-se por a sua importância os álcoois superiores. A suaformação depende de numerosos fatores, sendo a fonte e a concentração de nitrogênioum dos mais importantes. Nos últimos anos tem sido frequente o acréscimo de sais deamônio paramelhorar o desempenho fermentativo em alambiques artesanais. Nestecontexto científico e industrial, com o fim de determinar o efeito desta suplementaçãonutricional na formação dos álcoois superiores, e por consequência no perfilorganoléptico, analisamosao nível transcritômico e metabólico a produção de álcooissuperiores pela linhagem industrial deS. cerevisiaeJP1, empregada na produção deaguardente de cana, e pela linhagem de laboratório CEN.PK113, usada como referência,durante culturas em meio mineral com diferentes fontes de nitrogênio na forma de amônio(como sal de sulfato), leucina, isoleucina, valina, triptofano e fenilalanina. Os resultadoscinéticos (μmax,td) e parâmetros fermentativos (consumo de glicose, e produção deacetato e etanol) mostraram o melhor desempenho fermentativo para o meio sulfato deamônio e valina, e estes superiores aos obtidos para os cultivos em leucina, isoleucina efenilalanina. Já a cultura com triptofano apresentou um crescimento deficiente. Istoconfirmaria a prática usual dos produtores de cachaça de adicionar sulfato de amôniopara evitar problemas de baixo rendimento. A produção dos álcoois superiores atingiuníveis de entre 300 a 1000μg/L nos cultivos em aminoácidos como fonte de nitrogênio,enquanto foi observada umabaixa produção (<8μg/L) nos meios com amônio. Pelaprodução dos álcoois superiores, pode-se observar que o catabolismo de aminoácidosramificados e aromáticos seguiu principalmente a via de Ehrlich. O rendimento deconversão dos aminoácidos adicionados aos álcoois correspondentes foi calculado nointervalo de 0,0042 a 0,0092%. Surpreendentemente, no meio com isoleucina foiverificada a produção de 3-metil-butanol entre 30 e 50 μg/L, composto derivado daleucina. A análise de transcrição gênica sugere que esta produção inusitada 3-metil-butanol pode ser resultado da síntese de novo do aminoácido leucina a partir do piruvato,e da aparente regulação temporal diferencial dos níveis de transcrição dos genes da viade Ehrlich. Ao mesmo tempo, sugerimos que a compartimentalização exercida pelamitocôndria e a atividade global das alfa-ceto ácidos descarboxilases sejam as principaiscausa da produção de álcoois superiores em meios nos quais não está presente oaminoácido precursor. / During the fermentation process for Cachaça fabrication, the yeastSaccharomyces cerevisiae produces a series of organoleptic compounds, highlighting thehigher alcohols. Its formation depends on numerous factors, being the source and anitrogen concentration one of the most important. In recent years, it has often been usualthe addition of ammonium salts to improve the fermentation performance in craft stills. Inthis scientific and industrial context, with the aim of determine the effect of this nutritionalsupplementation in the formation of higher alcohols, and consequently in the flavor profile,we analyzed at transcriptomic and metabolic level the higher alcohols production of theindustrial strain of S. cerevisiae JP1, used in the production of sugar cane, and thereference laboratory strain CEN.PK113, in mineral medium cultures with different nitrogensources in the form of ammonium (as sulfate salt), leucine, isoleucine, valine, tryptophanand phenylalanine. The kinetic results (μmax,td), and fermentation parameters (glucoseconsumption, and ethanol and acetate production) showed for the medium ammoniumsulfate and valine the best performance, resulting in higher valor those obtained by thecultivation of leucine, isoleucine and phenylalanine. Already, tryptophan cultured showedpoor growth. This will confirms the usual practice of cachaça producers of addingammonium sulfate to avoid yield problems. The production of higher alcohols reachedlevels between 300 to 1000μg/L in amino acids cultures, while in medium with ammoniumwas low production (8μg/L). For this reason, we noted that the catabolism of branchedand aromatic aminoacids mainly follows the Ehrlich pathway. The yield of conversion ofthe amino acid added to the corresponding alcohols was calculated in the range 0.0042 to0.0092%. Surprisingly, it was observed in isoleucine medium the production of 3-methylbutanol from30 to 50μg/L, the leucine derivative compound. Analysis of genetranscription suggests that this unusual production of 3-methyl-butanol can be the result ofde novo synthesis of leucine from pyruvate, and for the apparent temporal differentialregulationof Ehrlich ́s genes transcription levels. At the same time, it is suggested that thecompartmentalization exerted by mitochondria and the global activity of alpha-keto acidsdescarboxilases are the main cause of formation of higher alcohols in cultures where isabsent the amino acid precursor.

Dissertação(mestrado) - Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós–Graduação em Oceanografia Biológica, Instituto de Oceanografia, 2011. / Submitted by Cristiane Gomides (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2013-12-16T13:10:23Z No. of bitstreams: 1 rubens.pdf: 37071078 bytes, checksum: e7a36c0d198f25aa295e0031caf953d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Sabrina Andrade (sabrinabeatriz@ibest.com.br) on 2013-12-18T18:04:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rubens.pdf: 37071078 bytes, checksum: e7a36c0d198f25aa295e0031caf953d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-18T18:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rubens.pdf: 37071078 bytes, checksum: e7a36c0d198f25aa295e0031caf953d7 (MD5) Previous issue date: 2011 / No estuário da Lagoa dos Patos são escassos os trabalhos sobre a comunidade fúngica. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de leveduras em duas áreas de marismas e os fatores abióticos que afetam sua distribuição espacial e temporal. O estudo foi realizado durante o inverno (Agosto) de 2009 e o verão (Fevereiro) de 2010 em duas enseadas rasas no estuário da Lagoa dos Patos, com diferentes níveis de eutrofização. As amostras foram coletadas em marismas dominadas por duas espécies macrófitas emersas: Juncus kraussii e Scirpus olneyi. Nos locais de coleta foram analisados os parâmetros abióticos e coletadas amostras de sedimento, água intersticial e de vegetação. Foi realizado o isolamento das leveduras do sedimento através de diluição em meio de cultivo. A identificação dos isolados foi feita através da análise de caracteres morfológicos e testes fenotípicos de metabolismo através do Sistema Vitek II. Foram isoladas 73 leveduras classificadas em 09 gêneros, com predominância de Ascomycotas. Entretanto, 10 destes isolados de leveduras não identificados e 02 isolados leveduriformes foram identificados como microalgas do gênero Prototheca. Dentre os gêneros de leveduras encontrados, houve uma predominância de leveduras do gênero Candida (n=20), seguidos por Rhodotorula (n=14), Yarrowia (n=07), Cryptococcus (n=06), Clavispora (n=04), Issatchenkia (n=03), Pichia (n=03), Torulaspora (n=03) e Kluyveromyces (n=01). O maior número de leveduras foi isolado em temperatura mais alta, no ambiente menos eutrofizado, em condições com maiores concentrações de nutrientes dissolvidos e no sedimento dominado por detrito de J. kraussii. / In the Patos Lagoon estuary few studies have been conducted on the fungal community. The aim of this study was to determine the occurrence of yeasts and the environments factors that affect their spatial and temporal distribution. The study was conducted during the winter (August) of 2009 and summer (February) 0f 2010 in two shallow bays of the Patos Lagoon estuary with different eutrophication level. The samples were collected in salt marsh areas dominated by two emerged macrophytes species: Juncus kraussii and Scirpus olneyi. Abiotic parameters were analyzed in the field and sediment samples, interstitial water and vegetation were collected. Yeasts were isolated from the sediment by dilution using the culture medium method. The identification of isolates was performed according to morphological characteristics and through metabolic tests using the Vitek II system. Seventy and three yeasts were isolated and classified in 09 genera with the predominance of Ascomycota. However, 10 of these isolated yeasts were unidentified and 02 yeast-like organisms, were identified as microalgae of the genera Prototheca. Among the identified genera of yeasts, there was a predominance of the genera Candida (n=20), followed by Rhodotorula (n=14), Yarrowia (n=07), Cryptococcus (n=06), Clavispora (n=04), Issatchenkia (n=03), Pichia (n=03), Torulaspora (n=03) e Kluyveromyces (n=01). Highest number of isolates was found in higher temperature, less polluted environment, in water with higher dissolved nutrient concentrations and in sediment dominated by detritus of Juncus kraussii. Key-words:

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2017-12-21T18:16:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) ROBERTA NATALIE DE ANDRADE SANTOS. PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA. CCS. 2015.pdf: 1373345 bytes, checksum: f76aaf8bcdf21a02ff91593619eb1d87 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-21T18:16:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) ROBERTA NATALIE DE ANDRADE SANTOS. PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA. CCS. 2015.pdf: 1373345 bytes, checksum: f76aaf8bcdf21a02ff91593619eb1d87 (MD5) Previous issue date: 2015-11-17 / CAPES / Objetivou-se verificar a presença de infecções fúngicas orais em pacientes com carcinoma epidermóide oral e associa-las ao sexo, idade e características clínicas dos pacientes estudados. Foram selecionados 20 pacientes em tratamento no Hospital de Câncer de Pernambuco, que não usavam medicação antifúngica, necessitavam que suas lesões orais fossem submetidas a biópsia incisional e não haviam iniciado o tratamento antineoplásico, no período de maio de 2014 a abril de 2015. Anamnese e exame clínico foram realizados. Dados sobre idade, sexo, endereço, local da lesão, estadiamento clínico, qualidade da higienização oral, tabagismo, etilismo e sintomatologia dolorosa foram coletados. Biópsias incisionais das lesões orais foram realizadas, obtendo-se 20 amostras teciduais segmentadas para exame histopatológico e micológico. Neste, as amostras foram imersas em KOH a 20% e encaminhadas para exame direto em microscópio óptico. Os testes estatísticos Exato de Fisher e o de independência da razão de verossimilhança foram utilizados. A maioria dos pacientes selecionados eram homens (n=15, 75%) na sexta década de vida (n=16, 80%), residentes da região metropolitana do Recife (n= 13, 65%), tabagistas e etilistas (n=15, 75%), e possuíam uma higienização oral insatisfatória (n=12, 60%). A maioria dos tumores estudados localizou-se na língua (n=10, 50%), foram classificados num estádio avançado (n=17,55%) e histopatologicamente bem diferenciados (n=13,65%). Radioterapia e quimioterapia associadas foram os tratamentos mais recomendados (n=11, 55%). 35% das amostras (n=7) apresentaram estruturas fúngicas que sugeriram a presença de infecção. A associação entre infecções fúngicas e a idade foi significativa (p<0,05, Exato de Fisher). Não foram observadas associações significativas entre a presença de infecções fúngicas e as demais variáveis, como também, entre as variáveis estadiamento e sintomatologia. Indivíduos tabagistas e etilistas, na sexta década de vida e com higiene oral deficiente devem ser vistos como população vulnerável ao câncer de boca. Ações que visem à prevenção e o diagnóstico precoce desse tumor são necessárias. Em pacientes com idade a partir dos 58 anos, a presença de infecções fúngicas orais deve ser investigada. / The objective was to verify the presence of oral fungal infections in patients with oral squamous cell carcinoma and associates them to sex, age and clinical characteristics of the patients. We selected 20 patients at the Pernambuco Cancer Hospital, who did not use antifungal medication needed their oral lesions were subjected to biopsy and had not started the anticancer treatment, from May 2014 to April 2015. Anamnese and clinical examination were performed. Data on age, sex, address, place and length of the lesion, clinical staging, quality of oral hygiene, smoking, alcoholism and pain symptoms were collected. Incisional biopsies of the oral lesions were performed, yielding 20 segmented tissue samples for histological and mycological. In this, the samples were immersed in 20% KOH and forwarded to direct examination under an optical microscope. Statistical tests Fisher Exact and the independence of the likelihood ratio were used. Most selected patients were men (n = 15, 75%) in the sixth decade of life (n = 16, 80%), residents of the metropolitan area of Recife (n = 13, 65%), smokers and drinkers (n = 15, 75%), and had a poor oral hygiene (n = 12, 60%). Most of the tumors studied were located on the tongue (n = 10, 50%) were classified in an advanced stage (n = 17,55%) and were well differentiated histologically (N = 13.65%). Radiation and chemotherapy associated were the most recommended treatments (n = 11, 55%). 35% of samples (n = 7) showed fungal structures which suggested the presence of infection. The association between fungal infections and age was significant (p <0.05). No significant associations were observed between the presence of fungal infections and other variables, as well as among the variables staging and symptoms. Smokers and drinkers, in the sixth decade of life and poor oral hygiene should be seen as vulnerable to oral cancer. Actions aimed at prevention and early diagnosis of this tumor are required. In patients aged from 58 years, the presence of oral fungal infections should be investigated.

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-08-29T11:24:56Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1361685 bytes, checksum: 6cf508d911e3f6c1ff5a61ecf5b8b708 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T11:24:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1361685 bytes, checksum: 6cf508d911e3f6c1ff5a61ecf5b8b708 (MD5) Previous issue date: 2017-07-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A conservação de frutos in natura com qualidade é primordial para reduzir as perdas no período após a colheita, devido à recorrente contaminação por fungos patogênicos. No entanto, a forma usual de controle por fungicidas e agentes químicos vem causando danos ao meio ambiente, à saúde humana e selecionando linhagens de patógenos resistentes. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito antagonista da levedura Kluyveromyces marxianus e seu mecanismo de ação contra o fitopatógeno Botrytis cinerea. Os resultados obtidos mostram que K. marxianus é capaz de secretar simultaneamente enzimas hidrolases envolvidas na degradação da ultra-estrutura da parede celular fúngica. O extrato protéico secretado foi testado contra os substratos Azocaseína e ρ-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo e apresentou atividades de glicosidase e proteásica para todas as linhagens testadas. O sequenciamento, por espectrometria de massas, das proteínas majoritárias que foram visualizadas em SDS-PAGE identificou vinte e sete proteínas, sendo 13 delas classificadas como hidrolases. Entre as hidrolases foram identificadas 4 β-glicanases, 4 glicosidases, uma protease aspártica, uma endoquitinase e uma inulinase. Quando se avaliou o efeito do extrato enzimático secretado por K. marxianus sobre a ultra-estrutura da parede celular de Saccharomyces cerevisiae foi observado um dano substancial, causando deformações celulares e redução da viabilidade da população de células. Neste trabalho foi observada a atividade de antagonismo da K. marxianus in vitro e in vivo utilizando conhecidos alvos do patógeno Botrytis cinerea: morangos e uvas de mesa. Os resultados obtidos dos testes de antagonismo in vitro mostram que em cultivo simultâneo K. marxianus inibe 88% a germinação de esporos de B. cinerea (p-valor 0,0003) nas primeiras 12h, sugerindo que, além da competição por nutrientes, a inibição do crescimento micelial esteja relacionada com a capacidade de secretar enzimas líticas exibidas pela levedura antagonista. Os resultados dos testes in vivo em uvas não mostraram atividade de antagonismo da K. marxianus contra B. cinerea. Os resultados dos testes in vivo em morangos sugerem que a habilidade de secretar enzimas líticas fazem da K. marxianus um agente potencial para o controle biológico de B. cinerea. / The conservation of fresh fruits is essential to reduce losses in the post-harvest period due to recurrent pathogenic fungi contamination. However, the usual way of control, which is by using fungicide and chemical agents, has been causing damage to the environment, human health and selecting strains resistant to pathogens. Thus, the aim of this study was to evaluate the effects of the antagonist yeast Kluyveromyces marxianus and its mechanism of action against the phytopathogen fungus Botrytis cinerea. The results show that K. marxianus is able of simultaneously secreting hydrolyses enzymes, which are involved in the degradation of the ultra structure of the fungal cell wall. Recently, our group has identified a β-1-3(4)-glucanase secreted by K. marxianus and defined the best cultivation conditions for glucanases secretion. The secreted protein extract was tested against the substrates Azocasein and p-nitrophenyl-β- D-glucopyranoside, and it showed glycosidase and protease activities for all examined strains. The mass spectrometry sequencing of the major proteins that were visualized on the SDS- PAGE identified twenty seven proteins, thirteen of them being classified as hydrolases. Among the hydrolases, four β-glucanases, four glycosidases, one aspartic protease, one endoquitinase and one inulinase were identified. When the effect of the enzymatic extract secreted by K. marxianus was evaluated against the ultra structure of S. cerevisiae cell wall, a substantial damage was observed, which caused cell deformations and reduction of cell populations viability. In this study, it was observed the antagonist activity of K. marxianus in vitro and in vivo using known targets of the B cinerea: strawberries and table grapes. The results obtained from the in vitro antagonist testes show that the simultaneous cultivation of K. marxianus and spores of B. cinerea inhibit spores germination by 88% (p-valor 0,0003) during the first 12 hours. The simultaneous cultivation with fungal mycelium of B. cinerea suggests that, in addition to nutrient competition, the inhibition of mycelium growth may be related to the ability of the antagonist yeast to secrete lytic enzymes. The results of the in vivo tests on strawberries suggest that the ability of secreting lytic enzymes makes K. marxianus a potential agent for the biological control of B. cinerea.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4418_1.pdf: 199158 bytes, checksum: 3e22c5e3ca9d2a383a48ee3e7a0338b2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2002 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Com o objetivo de isolar, identificar e caracterizar amostras de leveduras quanto a fatores de patogenicidade, foram coletadas 16 amostras de solo e 16 amostras de água nos meses de dezembro/2000 e fevereiro/2001, correspondendo ao período de verão e junho e julho/2001, correspondendo ao período de inverno, considerando a baixa-mar e preamar. As amostras foram coletadas em superfície e profundidade, sendo 20 cm para o solo e 1m para a água. Foi utilizado 50g de solo e suspenso em 90 ml de água destilada esterilizada. Dessa suspensão 0,5 ml foram semeados em triplicata em Sabouraud extrato de levedura, acrescido de cloranfenicol, contidos em placas de Petri. Nas mesmas condições de semeio foram utilizados 0,5ml de água. Foram isoladas 58 amostras de leveduras distribuídas em 4 gêneros e 31 espécies: Candida (19), Brettanomyces (3), Rhodotorula (4) e (5) de Trichosporon. A frequência de ocorrência demonstrou que Brettanomyces bruxellensis pode ser considerada abundante em solo de superfície na praia de Casa Caiada. Para as características de patogenicidade observou-se que das 58 amostras testadas 44 cresceram a 37ºC, apresentando bom crescimento, tanto quanto à temperatura ambiente; na detecção da atividade fosfolipásica e proteásica 7 e 3 amostras apresentaram atividade enzimática positiva, respectivamente

Orientador: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira / Dissertação (mestrado) - Universidade EStadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T07:34:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zeidler_AneFernandaBeraldi_M.pdf: 15352916 bytes, checksum: 8a3454e1ab7cf3b1ea1dded67030f592 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A demanda por processos alternativos para produção de compostos químicos tem aumentado nas ultimas décadas em decorrência da necessidade da utilização de fontes renováveis e do desenvolvimento de processos menos agressivos ao meio ambiente. Nesse contexto os processos de fermentação microbiana são cada vez mais considerados passiveis de serem empregados industrialmente. A produção de monômeros petroquímicos por via biológica tem sido tema de diversos estudos e, dentre os compostos produzidos por fermentação, ácidos e alcoóis de três e quatro carbonos estão entre as moléculas mais promissoras. O glicerol, alem de ser utilizado na fabricação de diversos produtos, tem tido sua utilização estudada como substrato para biotransformação em compostos mais reduzidos e de maior valor agregado, como precursores de polímeros. A produção de glicerol por via fermentativa em leveduras já foi estudada, entretanto, sempre são utilizados organismos de laboratório, mais suscetíveis a estresses. A utilização de leveduras selvagens, mais robustas, isoladas de processos industriais de fabricação de etanol, pode resultar em maiores rendimentos de glicerol e maior adaptabilidade ao processo industrial. Com o intuito de aumentar a produção de glicerol foram deletados os genes: ADH1 e TPI1 na linhagem industrial de S. cerevisiae PE-2 (JAY270). Essas deleções foram realizadas por recombinação homologa em linhagens haplóides de diferentes mating-type. Essas linhagens foram cruzadas gerando mutantes diplóides para cada um dos genes e para o duplo mutante. Alem disso, a complementação do gene ADH1, estudada através da construção e inserção de um plasmídeo, foi bem sucedida: apos a complementação, os mutantes ?adh1 alcançaram um rendimento em etanol significativamente igual ao da linhagem selvagem. As deleções dos genes ADH1 e TPI1 geraram os resultados esperados, aumentando a produção de glicerol e diminuindo a de etanol, modificando assim o perfil de produção de metabolitos das linhagens. As linhagens selvagens apresentaram rendimentos em glicerol ao redor de 0,01 g glicerol/g glucose, rendimento esperado para linhagens de levedura produtoras de etanol. As linhagens ?adh1 apresentaram um aumento de aproximadamente 10 vezes no rendimento em glicerol, chegando a 0,24 gramas de glicerol por grama de glucose. A linhagem que apresentou maior rendimento foi a AZY773, linhagem industrial com os genes ADH1 e TPI1 deletados, atingindo um rendimento de 0,38 gramas de glicerol por grama de glucose. A linhagem de laboratório com a mesma modificação teve um rendimento de 0,31 gramas de glicerol por grama de glucose, significativamente menor que o rendimento da linhagem industrial. Demonstrou-se neste trabalho, portanto, que a produção de glicerol metabólico com altos rendimentos para bioconversão em compostos mais reduzidos pode ser conseguida através de modificações metabólicas e do uso de organismos robustos. / Abstract: In the past few decades the demand for alternative processes for the production of chemical compounds has increased due to the need for utilization of renewable resources and development of less harming processes to the environment. In this context, large scale microbial fermentative processes are being considered as a viable alternative. The production of petrochemical monomers through biological pathways has been a major research theme and, among the compounds produced by fermentation, three and four carbon acids and alcohols are among the most promising molecules. Glycerol, besides being used for the manufacture of several products, has had its utilization studied as substrate for biotransformation into more reduced and higher added value compounds, e. q. polymers precursors. Glycerol production by yeast fermentation has already been studied, but, only in laboratory strains, which are more stress sensitive. The utilization of wild yeasts, more robust, isolated from the fuel ethanol production process, may result in higher glycerol yields and better adaptability to industrial processes. Aiming to increase glycerol production the ADH1 and TPI1 genes from PE-2 (industrial strain of S. cerevisiae) were deleted through homologue recombination in haploid strains of different mating-types. These strains were mated generating diploid mutants for ?adh1, ?tpi and ?adh1?tpi1 deletions. Complementation of ADH1 gene, carried out through the construction of a plasmid, was successful in allowing the ?adh1 strains to reach ethanol yields as high as the one reached by wild strains. ADH1 and TPI1 deletion increased glycerol and decreased ethanol production, modifying the strains'metabolite production profile, as expected. The wild strains presented glycerol yields of 0,01 g of glycerol per g of glucose, which is a regular yield for ethanol producing yeasts. ?adh1 strains presented a tenfold increase in glycerol yield, reaching 0,24 g of glycerol per g of glucose. AZY773 strain, industrial strain with both ADH1 and TPI1 genes deleted, presented the highest glycerol yield, reaching 0,38 g of glycerol per g of glucose. The laboratory strain with the same genetic modification yielded 0.3 g of glycerol per g of glucose, significantly lower than the industrial strain. This work demonstrated that metabolic glycerol production with high yields for bioconversion in more reduced compounds may be reached through metabolic modification and utilization of robust organisms. / Mestrado / Genetica de Microorganismos / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Jose Francisco Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T23:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariano_PriscilladeLaetSan'Ana_D.pdf: 1702939 bytes, checksum: 0dccafa4ba01badcfb8fc5a7d8d8592a (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A preservação de microrganismos é um importante recurso para a manutenção e conservação de espécies microbianas em laboratórios clínicos, técnicos e de pesquisa. Diferentes métodos de armazenamento de espécies de leveduras em laboratório foram descritos, objetivando principalmente, melhores resultados quanto à manutenção da viabilidade e das propriedades celulares por tempos prolongados. Métodos ideais de armazenamento de leveduras e outros microrganismos necessitam promover a sobrevida das células, bem como a pureza da cultura e a estabilidade de suas características. Alguns pesquisadores, no entanto, têm mencionado a ocorrência de alterações fenotípicas e/ou genotípicas em amostras mantidas em laboratório, as quais podem influenciar estudos, tipagem e a aplicabilidade destes organismos nos diversos setores. Há, portanto, uma necessidade de estudos adicionais que avaliem a estabilidade das propriedades das amostras de leveduras após serem mantidas em laboratório por diferentes métodos. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência de métodos de manutenção laboratorial de leveduras sobre as suas características morfológicas e bioquímicas. Para isso, foram testadas seis cepas padrão de leveduras do gênero Candida, sendo quatro espécies de interesse médico e duas de interesse industrial, submetidas a cinco diferentes métodos de armazenamento, a saber: transferências seriadas em meio sólido, óleo mineral, água destilada, congelamento em glicerol a -70ºC e liofilização. As amostras foram caracterizadas fenotipicamente antes de serem armazenadas, e após o armazenamento em diferentes intervalos de tempos por um período de 18 meses. Foram avaliadas as características das colônias em meio CHROMagar Candida®, micromorfologia em ágar fubá, assimilação e fermentação de carboidratos, produção de proteinases e fosfolipases, teste de crescimento a 45°C e crescimento em meio hipertônico. O DNA das amostras foi extraído nos tempos zero, 06, 12 e 18 meses, para análise genotípica por Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD), utilizando-se dois diferentes primers para cada cepa. Os resultados obtidos mostraram que todos os métodos de conservação avaliados permitiram a manutenção da viabilidade das amostras durante todo o período analisado (18 meses). A exceção ocorreu com a amostra de Candida dubliniensis que perdeu sua viabilidade em óleo mineral após 12 meses de conservação. Não foram observadas alterações fenotípicas nos resultados dos testes morfológicos e bioquímicos, após a preservação laboratorial através de todos os métodos utilizados no estudo. Entretanto, variações não estáveis foram observadas para algumas amostras nos testes de produção de fosfolipases e proteinases, e para o crescimento em meio hipertônico. Tais variações não estavam relacionadas com uma condição específica de manutenção da cepa e o resultado alterado foi reversível em testes subseqüentes. Alterações no padrão de RAPD não foram detectadas em pelo menos duas reações independentes para cada um dos primers testados. Os resultados obtidos demonstram que os métodos de conservação aplicados neste estudo permitem a manutenção da estabilidade das características fenotípicas e genotípicas relacionadas aos testes aplicados, em amostras de leveduras preservadas durante o período avaliado. Desta forma, a aplicabilidade do ponto de vista técnico ou de pesquisa não é inviabilizada para amostras preservadas por estes métodos. Cepas destinadas ao uso em finalidades específicas devem ser testadas individualmente quanto ao método de conservação mais indicado / Abstract: The maintenance of microorganisms is useful to preserve microbial species in clinical, technical and research laboratories. Different methods to yeast stocking are available in order to obtain long time viability and stability of cell properties. The best methods to store microorganisms need to provide the cell survival as well as purity and stability of their properties. Some researches, however, have mentioned phenotypic and/or genotytpic changes in laboratorial samples, which may influence yeast typing, studies and the applications of those organisms in different areas. Therefore, additional studies are needed to evaluate the yeast samples properties stability after stocking through different methods. The aim of this study was to evaluate the influence of the yeast storage methods in terms of their morphological and biochemistry characteristics. Candida spp. standard strains, four of medical importance and two industrial species were evaluated. Those strains were submitted to five storage methods: serial transferences in agar medium, mineral oil, distilled water, freeze with glycerol at -70ºC and freeze-drying. The samples were characterized with phenotypic techniques before being stocked, and after that in different periods of time up to 18 months. It was tested the characteristics of the colonies in CHROMagar Candida® medium, micromorphology in corn meal agar, carbohydrates assimilation and fermentation, phospholipases and proteinases production in solid medium, growth test in 45ºC and growth test in hypertonic medium. In addition, the DNA extraction of all samples was carried out in time zero, 6, 12 and 18 months, in order to posterior genotypic analyses by Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) using two different primers for each strain. The results showed that all yeast preservation methods tested were able to maintain the viability of the samples during the period of the study, except the strain Candida dubliniensis stocked in mineral oil, which not survived after 12 months in these conditions. It was not observed phenotypic alterations in the results of morphological and biochemistry tests after laboratorial preservation with all used methods. However, some non stable variations were observed in phospholipase and proteinase production and in the hypertonic growth for some samples. Such variations were not related to one specific maintenance method and the altered result could be reversible in subsequent tests. Changes in the RAPD pattern were not detected in, at least, two independent reactions for both tested primers. The results showed that the maintenance methods applied in this study were able to preserve the stability of the phenotypic and genotypic characteristics, in all yeast samples stocked during the analyzed period of time. Therefore, the technical and research applicability of the samples are not unfeasible when they are preserved with those methods. Strains designated to use for specific purposes must be tested individually, in order to select the best preservation method / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Silvio Roberto Andrietta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-29T02:43:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Steckelberg_Claudia_D.pdf: 4836930 bytes, checksum: 7c6daf30b9b5d3ad064233e438e76664 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Nos últimos anos, houve um aumento significativo de trabalhos que buscam entender a dinâmica de população de leveduras habitante das domas de fermentação alcoólica. Os trabalhos gerados elucidaram questões importantes. Entre elas quais seriam as características básicas para que uma levedura permanecesse em um dado processo. Seguindo este contexto este trabalho teve como finalidade contribuir para o conhecimento das características das cepas de leveduras dominantes dos processos fermentativos industriais das destilarias brasileiras. Buscou-se neste trabalho, descrever os atributos de desempenho fermentativo e composição celular de 19 cepas isoladas de vários processos instalados em diferentes regiões do Brasil e com características particulares. Os atributos estudados foram: capacidade fermentativa; taxonomia numérica; tolerância ao etanol; teores de: trealose, proteínalaminoácido, e ácidos graxos. Com objetivo de comparação dos atributos estudados, avaliou-se uma cepa destinada a indústria de panificação assim como uma isolada de um processo de produção de álcool instalado em território Indiano. Os resultados mostraram que em relação às características fermentativas as cepas embora estejam colocadas em 17 grupos diferentes todas se apresentam como boas fermentativas. Em relação à taxonomia numérica foram classificadas 20 das 22 analisadas. Sendo 8 classificadas como Saccharomyces chevalieri, 5 como Saccharomyces coreanus e 7 como Saccharomyces cerevisiae. Se for considerado a classificação segundo BARNET (1992) todas elas são representantes de S. cerevisiae. Em relação à tolerância ao etanol existe uma faixa que varia entre 0,166 e 0,653 11M. A faixa da concentração de trealose na massa celular abrange concentrações que variam 0,47 a 6,3%. No que diz respeito a quantidade de proteína, essa mostra uma variação de 10% da cepa que apresenta uma maior quantidade para que apresenta a menor. As leveduras que apresentaram maior valor de produção específica de massa celular foram também as que apresentaram uma menor quantidade de material protéico. Em relação à distribuição de aminoácidos nesta proteína, os resultados mostram que todas se apresentam dentro do perfil esperando para linhagens de S. cerevisae. Todas cepas testadas apresentaram os ácidos graxos C-12:0 (ac.láurico), C-14:0 (ac.mirístico), C-16:0 (ac.palmítico) , C-16:1 (ác.palmitoleíco), C-18:0 (ac.esteárico) e C-18:1 (ac.oleíco) em sua composição. Alguma cepas apresentaram ainda o ácido graxo insaturado C14:1 (ac.miristoleíco). Os ácidos graxos insaturados (C-16:1 e C-18:1) são os de maior abundância no material graxo que compõe as cepas testadas, que segundo alguns autores estão vinculados com a tolerância das cepas ao etanol. Alguns indícios de relação entre o teor de ácidos graxos C-16:1 e C-18:1 e a tolerância ao etanol pode ser observado, mas uma correlação exata não pôde ser determinada. A partir da compilação dos dados obtidos neste trabalho é possível afirmar que as cepas isoladas dos diversos processos fermentativos apresentaram variações comportamentais e de composição celular. Entretanto quando se avalia o parâmetro de capacidade fermentativa, todas as cepas são classificadas como adequadas para o processo de fermentação alcoólica. Isto confirma a hipótese que, embora as leveduras apresentem características fermentativas semelhantes, pois do contrário não poderiam estar presentes em um ambiente hostil, como é o das domas de fermentação, cada processo seleciona sua própria linhagem, e que a mesma é provavelmente habitante natural da matéria-prima que a unidade processa / Abstract: In the past years, there has been a significant increase in studies seeking to understand the dynamics of the yeast population inhabiting alcoholic fermentation vats. The studies generated have elucidated important issues. Among them, which would be the basic characteristics for a strain to remain in a processo Following this context, this study has had the purpose of enhancing the knowledge on the characteristics of the dominant strains of industrial fermentation processes of Brazilian distilleries. This study has sought to describe the fermentative performance attributes and the cellular makeup of 19 strains, with particular characteristics, isolated from several processes installed in different regions of Brazil. The attributes studied were: fermentative capacity; Numerical Taxonomy; tolerance to ethanol, and contents of trehalose, protein/amino acids, and fatty acids. In order to compare the attributes studied, one strain assigned to the baking industry as well as one isolated from an alcohol production process installed in the Indian territory were evaluated. The results have shown that ali strains have presented good fermentative characteristics in spite of being divided in 17 different groups. As for the numerical taxonomy, 20 out of the 22 strains analyzed have been classified, of which 8 have been classified as Saccharomyces chevalieri, 5 as Saccharomyces coreanus and 7 as Saccharomyces cerevisiae. If the classification according to BARNET (1992) is considered, ali of them are representative of S. cerevisiae. As for ethanol tolerance, there is a variable range between 0.166 and 0.653 11M. The trehalose concentration level in the cellular mass encompasses concentrations varying from 0.47 to 6.3%. With regard to the amount of protein, this sample has shown a 10% variation of the strain presenting the highest amount to the one presenting the lowest. The strains presenting the highest value of specific cellular mass production were also the ones showing the lowest amount of proteinie material. As for the amino-aeid distribution in this protein, the results have shown that ali of them were within the expeeted profile for S. cerevisae strains. Ali strains tested presented the following fatty aeids in their makeup: C-12:0 (laurie acid), C-14:0 (myristie aeid), C-16:0 (palmitie acid), C-16:1 (palmitoleie aCid), C-18:0 (stearic acid), and C-18:1 (oleie aeid). Some strains have also presented the C14:1 (myristoleic aeid) unsaturated fatty acid. The C-16: 1 and C-18: 1 unsaturated fatty aeids are the most plentiful in the fatty material composing the strains tested and, according to some authors, they are linked to the tolerance of the strains to ethanol. Some indications as for relationship between the content of C-16:1 and C­18: 1 fatty acids and the tolerance to ethanol may be notieed, even though an exaet correlation has not been able to be determined. From the compilation of the data obtained in this study, it is possible to state that the strains isolated from several fermentation processes have shown behavioral and cellular makeup variations. However, when the fermentative capacity parameter is evaluated, ali strains are classified as suitable for the alcoholic fermentation processo This fact confirms the hypothesis that, although some strains have similar fermentative eharacteristics, since, otherwise, they could not inhabit a hostile environment such as the one in the fermentation vats, each process selects its own strain, and such strain is probably a natural inhabitant of the raw-material of the unit processing it / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T12:53:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anibal_PaulaCristina_M.pdf: 2168298 bytes, checksum: 97eb6e5c3daa9ef33ad620dedafac901 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A cavidade oral abriga uma complexa comunidade de microrganismos que podem estar aderidos aos dentes, à mucosa epitelial ou formando biofilme. A maioria desses microrganismos são comensais, com uma minoria causando infecções oportunistas. Dentre esses microrganismos, encontramos as leveduras do gênero Candida, principalmente em indivíduos imunocomprometidos; o principal agente etiológico da cárie dental Streptococcus mutans e, apesar da presença controversa, o patógeno oportunista Staphylococcus aureus. Diante do desenvolvimento de resistência aos antimicrobianos, há uma grande preocupação relacionada a qual tipo de tratamento utilizar no combate às infecções provocadas por esses microrganismos. O emprego de extratos brutos de plantas tem merecido a atenção de pesquisadores de vários países, já que podem inibir o crescimento bacteriano e fúngico por diferentes mecanismos quando comparados aos antimicrobianos, justificando a pesquisa em questão. As plantas utilizadas nesta pesquisa foram a Mentha piperita, Rosmarinus officinalis, Tabebuia avellanedae, Arrabidaea chica, Syzygium cumini e Punica granatum, extraídas com os solventes diclorometano e metanol, os quais foram eliminados em rotaevaporador, para a obtenção dos extratos brutos, a fim de se avaliar sua concentração inibitória mínima (CIM) frente a essas cepas de microrganismos. Os resultados obtidos revelaram-se promissores com as espécies de Candida testadas, principalmente com o extrato metanólico, cuja inibição apresentou atividade com alta sensibilidade das leveduras, porém essa mesma atividade não ocorreu entre as bactérias. Esses dados indicam a necessidade da ampliação do conhecimento sobre as espécies de plantas com potencial antimicrobiano, além de se testar extratos mais purificados e com propriedades farmacológicas ativas contra organismos microbianos. De qualquer forma, estes resultados nos levam a considerar esses extratos vegetais como fontes valiosas para a descoberta de novas moléculas bioativas empregadas para o tratamento alternativo no combate aos agentes microbianos, principalmente àqueles resistentes às drogas antifúngicas e antibacterianas convencionais / Abstract: The oral cavity is a source of a complex microorganisms community that may adhere to teeth, epithelial mucosa or form biofilms. Most of these strains are thought to be commensal, and a small number cause opportunistic infections. Among these microorganisms Candida yeast is the most commom in immunocompromised patients; Sretptococcus mutans is regarded as the primary etiologic agent of dental caries and, although considered controversial the presence, Staphylococcus aureus is also mentioned as an opportunistic pathogen in the oral cavity. Considering the frequent use of antifungal and antibiotics as antimicrobial agents, the development of resistance to these drugs has become an important and worrying factor for the treatment of the infections caused by these microorganisms. The use of crude plants extracts has been a researcherâ?¿s concern from all over the world, since they may inhibit the bacteria and fungi growing by different mechanisms present in the conventional antimicrobials, becoming an important source of investigation. The plants used in this research were Mentha piperita, Rosmarinus officinalis, Tabebuia avellanedae, Arrabidaea chica, Syzygium cumini and Punica granatum, extracted with dichloromethane and methanol solvents, followed by a minimal inhibitory concentration (MIC) evaluation. The data obtained with Candida strains were promising, specially with the methanolic extract that showed activity in a higher sensibility, but the same activity did not occur among the bacterias. This information increases our knowledge of the crude plants extracts effect against microbial organisms. Nevertheless, the results of this study indicated that these extracts are a promising source for the alternative treatment against the microbial agents, specially for those resistant to the conventional antimicrobial agents / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental