Orientador: Pedro Luis Rodrigues de Moraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T20:56:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbosa_TiagoDomingosMouzinho_M.pdf: 28594434 bytes, checksum: 7ab8cdc3ad35bf304dd87cde551b4f76 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Como resultado do estudo taxonômico das espécies da família Lauraceae procedentes do município de Santa Teresa, localizado na meso região Central Espírito-Santense, estado do Espírito Santo, dentro do bioma da floresta atlântica, foram descritas, a partir da coleção completa de Lauraceae do herbário MBML, com cerca de 682 exsicatas, 73 espécies - 56 espécies identificadas em nível específico, mais quatro como affinis, e 13 como morfo-espécies ainda não reconhecidas -, pertencentes a 14 gêneros: Aiouea (duas espécies), Aniba (uma espécie), Beilschmiedia (três espécies), Cinnamomum (cinco espécies), Cryptocarya (seis espécies), Endlicheria (uma espécie), Licaria (duas espécies), Mezilaurus (uma espécie), Nectandra (cinco espécies), Ocotea (39 espécies), Persea (cinco espécies) e Phyllostemonodaphne, Rhodostemonodaphne e Williamodendron com uma espécie cada. Além da descrição das espécies, são apresentadas chaves dicotômicas para identificação de gêneros e espécies, discussões e comentários sobre morfologia, taxonomia, distribuição geográfica, dados fenológicos, usos e nomes populares, bem como fotografias das espécies / Abstract: This study provides a taxonomic study of the species of the family Lauraceae from the municipality of Santa Teresa, located in central part of the Espírito Santo state in the Atlantic Forest biome. A total of 73 species belonging to 14 genera - 56 species identified at specific level, four more as affinis, and 13 as morphospecies not yet recognized, were described based on the complete collection of the family deposited in the herbarium MBML with about 680 vouchers: Aiouea (2 spp.), Aniba (1 sp.), Beilschmiedia (3 spp.), Cinnamomum (5 spp.), Cryptocarya (6 spp.), Endlicheria (1 sp.), Licaria (2 spp.), Mezilaurus (1 sp.), Nectandra (5 spp.), Ocotea (39 spp.), Persea (5 spp.), Phyllostemonodaphne (1 sp.), Rhodostemonodaphne (1 sp.) and Williamodendron (1 sp.). In addition to species description, dichotomous keys to identify genera and species, comments on the morphology, taxonomy, geographical range, phenology, use, vernacular names, and photographs of the species are provided / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Biologia Vegetal

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dayana.pdf: 3157488 bytes, checksum: 02c3800a366a84e1594552f5c234969c (MD5) Previous issue date: 2013-08-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The lauraceae family stands out for its species with great economic importance, among then Aniba rosaeodora Ducke, used in the essential oil extraction. Its essential oil is made up mainly of linalool, used as a fixative in perfumery. The byproducts of the rosewood extraction are generally employed as an energy source for heating boilers in their own plants. These byproducts contain substances with high potencial for use as biobased. The present work aims to study the byproducts of extraction of Aniba rosaeodora Ducke essential oil to enable a better understanding of the metabolites found in the byproducts, as well as better use of raw material by industry. Branches and leaves of Aniba rosaeodora were collected in the Reserva Ducke. The solid and liquid byproducts of industrial oil extraction of A. rosaeodora were obtained in partnership with Magaldi Agro Industrial Ltda. The collected branches were submited to six different methods of alkaloids extraction. Among then, three were selected due the yield obtained, the quality and the practicality of the methods. These three selected methodologies were applied to the industrial solid byproducts. The alkaloidal fracions obtained were analysed by mass spectrometry to compare the alkaloidal profiles. The liquid byproducts were centrifuged to obtain the oily fractions, which were analysed by gas chromatography coupled to flame ionization detector and a mass spectrometer. An aliquote of hydrolate was lyophilized and another aliquote was subjected to experiments with XAD-4 resin, in order to obtain concentrated fractions of organic substances present in hydrolate. These samples were analysed by mass spectrometry in a similar way to alkaloidal fractions obtained of solid byproducts. The chemical alkaloidal profiles obtained by mass spectrometry of alkaloid fractions showed peaks consistent with the alkaloids anibine, duckein and reticuline. Others peaks detected were consistent with coclaurine, N-methylcoclaurine, boldine and norboldine, already reported in Lauraceae. Among the alkaloids detected, the anibine, reticuline and N-methylcoclaurine were observed with higher relative abundance in the mass spectra. The oily fractions obtained from hydrolates showed constituents in common with the essential oil, with differences in the concentrations of these substances. The oily fractions showed linalool as majoritary substance, besides the α-terpineol and geraniol. The fractions obtained from lyophilized hydrolates and XAD-4 resin experiments showed complex composition, suggesting the presence of several substances. Some of alkaloidal fractions obtained from industrial byproducts have shown promise in relation to cytotoxic activity. There were also observed antimicrobial activity of alkaloidal fractions obtained from industrial byproducts and anibine against Bacillus subtilis. The results showed that the byproducts present the same alkaloids found in A. rosaeodora, indicating that the industrial extraction of the essential oil did not cause significant degradation of these molecules. Thus the byproducts of extraction of A. rosaeodora essential oil can be potencial sources of new products, promoting the best use of raw material. / A família Lauraceae destaca-se por apresentar espécies com grande importância econômica, dentre elas Aniba rosaeodora Ducke, utilizada na extração de óleo essencial. Seu óleo essencial é formado majoritariamente por linalol, utilizado como fixador na perfumaria. Os subprodutos da extração do pau-rosa são geralmente empregados como fonte de energia para o aquecimento das caldeiras nas próprias usinas. Estes subprodutos contêm substâncias com grande potencial de aproveitamento como bioprodutos. O presente estudo tem como objetivo estudar os subprodutos da extração do óleo essencial de Aniba rosaeodora Ducke a fim de possibilitar um maior conhecimento dos metabólitos encontrados nos subprodutos, assim como um melhor aproveitamento da matéria prima utilizada pela indústria. Galhos e folhas de Aniba rosaeodora foram coletados na Reserva Ducke. Os subprodutos sólidos e líquidos da extração industrial do óleo essencial de A. rosaeodora foram obtidos em parceria com a Magaldi Agro Industrial Ltda. Os galhos coletados foram submetidos a seis metodologias diferentes de extração de alcaloides. Dentre estas, três foram selecionadas devido aos rendimentos obtidos, a qualidade das frações e a praticidade dos métodos. As três metodologias selecionadas foram aplicadas ao subproduto sólido industrial. As frações alcaloídicas obtidas foram analisadas por espectrometria de massas para a comparação dos perfis alcaloídicos. Os subprodutos líquidos foram centrifugados para a obtenção das frações oleosas, as quais foram analisadas por cromatografia em fase gasosa acopladas a detectores de ionização de chamas e espectrômetro de massas. Uma alíquota do hidrolato foi liofilizada e outra foi submetida a experimentos com resinas XAD-4, visando à obtenção de frações concentradas das substâncias orgânicas presentes no hidrolato. Essas amostras foram analisadas por espectrometria de massas de forma similar às frações alcaloídicas obtidas do subproduto sólido industrial. Os perfis químicos obtidos por espectrometria de massas das frações alcaloídicas mostraram picos compatíveis com os alcaloides anibina, duckeina e reticulina, já relatados nesta espécie. Outros picos detectados foram compatíveis com coclaurina, N-metilcoclaurina, boldina e norboldina, que já são relatados em Lauraceae. Dentre os alcaloides detectados, a anibina, reticulina e N-metilcoclaurina foram observados com maior abundância relativa nos espectros de massa. As frações oleosas obtidas dos hidrolatos mostraram constituintes em comum com o óleo essencial, com diferenças nas concentrações dessas substâncias. As frações oleosas apresentaram o linalol como substância majoritária, além do α-terpineol e geraniol. As frações obtidas do hidrolato liofilizado e do experimento com a resina XAD-4 mostraram-se complexas, sugerindo a presença de diversas substâncias. Algumas das frações alcaloídicas obtidas dos subprodutos industriais mostraramse promissoras em relação a atividade citotóxica. Foi observada também atividade antimicrobiana das frações alcaloídicas obtidas do subproduto industrial e da anibina frente ao Bacillus subtilis. Os resultados obtidos mostraram que os subprodutos apresentam os mesmos alcaloides encontrados na espécie A. rosaeodora, indicando que a extração industrial do óleo essencial não causa degradação significativa dessas moléculas. Sendo assim os subprodutos da extração do óleo essencial de A. rosaeodora podem ser possíveis fontes de novos produtos, promovendo o melhor uso da matéria prima.

Embriões somáticos de Ocotea catharinensis foram utilizados como modelo para a investigação da via biossintética para a formação de neolignanas com esqueleto benzofurânico, através do uso de precursores marcados com 13C e análise dos produtos por RMN de 13C. Isotopômeros de L-[13C]-fenilalanina administrados aos embriões, foram incorporados às neolignanas 5\'-metoxiporosina e armenina B . Entre os precursores intermediários, o acetato de [8-13C]-coniferila, preparado a partir da condensação de Knoevenagel seguido de várias etapas, foi incorporado na neolignana 5\'-metoxiporosina. No ensaio de bioconversão utilizando frações proteicas das culturas dos embriões de O. catharinensis, o acetato de coniferila foi convertido em isoeugenol que, junto com o eugenol, seriam os precursores hipotéticos para a formação dessas neolignanas. A análise filogenética de diversas espécies de Lauraceae indicou a proximidade entre espécies do gênero Ocotea, produzindo como principais metabólitos lignanas e neolignanas. Foi obtida a seqüência parcial do gene de proteína dirigente em O. catharinensis e O. macrophylla e a análise filogenética baseada na homologia das seqüências de proteína dirigente de Ocotea e de espécies de diferentes gêneros, indicaram um clado distinto formado para espécies de Ocotea. Estes dados dão suporte para a proposta de que neolignanas di-hidrobenzofurânicas seriam oriundas do acoplamento oxidativo entre unidades de E-isoeugenol e 5-metóxi-eugenol, com possível participação de proteína dirigente na regio- e estereoespecificidade das reações de dimerização . Baseando-se nestes resultados foi possível propor algumas etapas envolvidas na biossíntese de neolignanas. / Somatic embryos of Ocotea catharinensis were used as model to investigate the biosynthetic pathway of benzofuran neolignans formation by means of feeding precursors followed by analysis with 13C NMR. Isotopomers of L-[13C]-phenylalanine were administered to embryos and incorporated into di-hydrobenzofuran neolignans. Among the intermediate precursors, [8-13C]-coniferyl acetate, prepared by Knoevenagel and several steps, was incorporated in the neolignan 5\'-methoxyporosin. The studies of bioconversion using protein fraction obtained from the embryogenic cultures, the precursor coniferyl acetate was converted into isoeugenol, which together eugenol, is one of the putative precursors to the neolignans formation. Phylogenetic analysis of several species of Lauraceae indicated the proximity of Ocotea species producing lignans and neolignans as the main metabolites. A partial sequence of the dirigent protein gene from O. catharinensis and O. macrophylla were obtained and the phylogenetic analysis based on homology of dirigent protein sequences from Ocotea and from different plant genus indicated a distinct clade formed by Ocotea species. These findings support the hypothesis that the dihydrobenzofuran neolignans would be derived from the oxidative coupling between E- isoeugenol and 5- methoxy-eugenol and the dirigent protein would be involved in the regio- and stereospecificity of the dimerization reactions. Thus, it was possible to suggest some of the steps involved in the biosynthesis of neolignans.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / A depressÃo à uma doenÃa recorrente e incapacitante cujo tratamento clÃnico està relacionado com modulaÃÃes nos sistemas monoaminÃrgicos em diversas Ãreas cerebrais. A riparina II (ripII), alcamida isolada do fruto verde de Aniba riparia, apresentou previamente efeito antidepressivo em modelos comportamentais. Dessa forma, objetivando investigar o potencial antidepressivo da ripII, foram realizados experimentos comportamentais como o teste do nado forÃado, suspensÃo da cauda e campo aberto. Para avaliar o envolvimento do sistema monoaminÃrgico, os animais foram prÃ-tratados com antagonistas especÃficos para receptores 5-HT1A, 5-HT2A/2C e 5-HT3 de serotonina (5-HT), D1 e D2 de dopamina (DA) e a1 e a2 de noradrenalina (NA) no teste do nado forÃado. AlÃm disso, os animais previamente tratados com ripII e submetidos ao teste do nado forÃado tiveram as Ãreas cerebrais hipocampo, corpo estriado e cÃrtex prÃ-frontal retiradas para detecÃÃo dos nÃveis de monoaminas em HPLC eletroquÃmico ou para realizaÃÃo dos experimentos de estresse oxidativo, para o qual foram investigadas a atividade enzimÃtica da superÃxido dismutase, quantificaÃÃo dos nÃveis de glutationa reduzida (GSH) e nitrito/nitrato, alÃm do grau de lipoperoxidaÃÃo. A ripII foi administrada agudamente, por via oral, na dose de 50 mg/kg, em todos os testes realizados. Os resultados mostraram que a ripII apresentou efeito antidepressivo nos modelos de nado forÃado e suspensÃo da cauda sugerindo que este efeito seja especÃfico, uma vez que os animais nÃo apresentaram alteraÃÃes na atividade locomotora no teste do campo aberto. Na avaliaÃÃo dos sistemas monoaminÃrgicos, os resultados mostraram que os antagonistas SCH23390 (D1), sulpirida (D2), prazosina (a1), NAN-190 (5-HT1A) e ondansentron (5-HT3) reverteram o tempo de imobilidade da ripII no nado forÃado sugerindo a participaÃÃo desses receptores para o efeito antidepressivo da substÃncia, enquanto nÃo houve alteraÃÃo deste efeito na presenÃa dos antagonistas ioimbina (a2) e ritanserina (5-HT2A/2C) sugerindo a nÃo participaÃÃo desses receptores no efeito da droga. A administraÃÃo prÃvia de ripII, antes do nado forÃado, reverteu o aumento nos nÃveis de peroxidaÃÃo lipÃdica, mas aumentou os nÃveis de GSH em hipocampo, corpo estriado e cÃrtex prÃ-frontal. Em conclusÃo, o estudo sugere uma aÃÃo moduladora, exercida por ripII, sobre o funcionamento dos sistemas noradrenÃrgico, dopaminÃrgico e serotonÃrgico, em nÃvel central, como mecanismo para o efeito antidepressivo no teste do nado forÃado, bem como a participaÃÃo de propriedades antioxidantes diretas ou indiretas dessa droga, atravÃs da capacidade de modificar a resposta ao estresse oxidativo neuronal. / Depression is a disabling and recurrent disease whose clinical treatment is related to modulations in monoaminergic systems in various brain areas. Riparina II (ripII), alkamide isolated from unripe fruit of Aniba riparia, has shown previously antidepressant-like effects in animal behavioral models. Thus, in order to investigate the potential antidepressant ripII, behavioral experiments were performed as the forced swim, tail suspension and open field tests. To assess the involvement of monoaminergic system, animals were pretreated with specific antagonists to 5-HT1A-, 5-HT2A/2C-, and 5-HT3-serotonin (5-HT) receptors, to D1- and D2-dopamine (DA) receptors and to 1- and 2-noradrenaline (NA) receptors in the forced swimming test. Furthermore, animals pretreated with ripII and submitted to the forced swim test had their brain areas such as hippocampus, striatum and prefrontal cortex removed for detection of monoamine levels in HPLC electrochemical or to carry out the experiments of oxidative stress. In the oxidative stress assays we investigated enzymatic activities of superoxide dismutase, measured the levels of reduced glutathione (GSH) and nitrite/nitrate, and lipid peroxidation degree. RipII was acutely administered orally at a dose of 50 mg/kg in all tests. The results showed that ripII presented antidepressant effect on the forced swim and tail suspension tests suggesting that this effect is specific, since the animals showed no changes in locomotor activity in open field test. In the evaluation of monoaminergic systems, the results showed that the antagonists SCH23390 (D1), sulpiride (D2), prazosin (1), NAN-190 (5-HT1A) and ondansentron (5-HT3) reversed the immobility time of ripII on the forced swim test suggesting the involvement of these receptors for the antidepressant effect of ripII, while no change of this effect in the presence of the antagonists yohimbine (2) and ritanserin (5-HT2A/2C) was observed, suggesting non-participation of these receptors on the drug effect. The prior administration of ripII before the forced swimming, reversed the increased levels of lipid peroxidation and increased levels of GSH in hippocampus, striatum and prefrontal cortex. In conclusion, the study suggests a modulating action exerted by ripII on the functioning of the noradrenergic, dopaminergic and serotonergic levels in the brain, as a mechanism for the antidepressant effect in the forced swimming test, as well as the participation of direct or indirect antioxidant properties of this drug through the ability to modify the neuronal response to oxidative stress.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-18T14:50:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Nilma S. Fernandes.pdf: 6082028 bytes, checksum: de37a4a2f24939ff1f4b11c41513d404 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-18T14:50:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Nilma S. Fernandes.pdf: 6082028 bytes, checksum: de37a4a2f24939ff1f4b11c41513d404 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T14:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Nilma S. Fernandes.pdf: 6082028 bytes, checksum: de37a4a2f24939ff1f4b11c41513d404 (MD5) Previous issue date: 2017-05-29 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lauraceae family species are rich in bioactive compounds, including alkaloids, with high pharmaceutical potential, such as activities against Leishmania amazonensis and Trypanosoma cruzi. These protozoa are, respectively, etiological agents of cutaneous Leishmaniasis and Chagas’ disease, which affect millions of people in underdeveloped and developing countries. Current therapeutic options available for treatment of these infections have severe side effects and low efficacy, for this reason, the development of effective and less toxic chemotherapeutic agents is extremely important. In order to find bioactive plant compounds with potential against these parasites, we performed an in vitro screening with ethanolic extracts of 12 species of Lauraceae against T. cruzi and L. amazonensis. Furthermore, a new molecular approach had been proposed to identify molecular drug targets in L. mexicana. The most active extracts were submitted to acid-base partition and the fractions have been evaluated. The bioguided assay led to isolation of 6 alkaloids. A new indole alkaloid isolated from A. panurensis, 3-methoxy-2-oxa-4,10b-diaza-1,3,6a,10c-tetrahydrofluoranthene-3,5-diol, had moderate activity against the three forms of T. cruzi and Leishmania amazonensis promastigotes. It was also shown that this alkaloid induces morphological and biochemical modifications in L. amazonensis promastigotes, impairing cytokinesis and generating cells with multiple nuclei and flagella. The compounds tested in this thesis show potential for modifications to its structure to improve activity and could potentially be tested in other parasites. The second chapter of the thesis aims to validate an inducible overexpression approach for L. mexicana, which could be used to generate an overexpression library. The results demonstrated for the first time the expression of an endogenous L. mexicana kinase (CRK3). Furthermore, a new system to inducible overexpression had been produced. This new molecular tool is suitable for all life cycle stages and could be used as a tool for drug discovery and to understand the complex biology of the parasite. The phytochemical and molecular approaches used here resulted in original data wich will help the discovery for new molecules against the trypanosomatids. / Espécies pertencentes à família Lauraceae são ricas em alcaloides e outras substâncias bioativas com alto potencial farmacêutico, inclusive atividades contra os tripanosomatídeos Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi. Esses são, respectivamente, protozoários agentes etiológicos de leishmaniose e doença de Chagas, doenças que afetam milhões de pessoas em países subdesenvolvidos e em desenvolvimento. As opções terapêuticas disponíveis atualmente para o tratamento de infecções causadas por esses parasitos têm severos efeitos colaterais e baixa eficácia, sedo a busca por novos fármacos de extrema importância. No sentido de buscar substâncias bioativas de plantas com potencial farmacêutico, foi realizada triagem in vitro utilizando extratos etanólicos de 12 espécies de Lauraceae contra T. cruzi e L. amazonensis a fim de encontrar os extratos mais promissores. Ainda, foi proposto a geração de uma ferramenta molecular para utilização na busca por substâncias ativas frente a L. mexicana. Os extratos mais ativos foram submetidos à partição ácido-base e as frações alcaloídicas avaliadas. A partir desse ensaio bioguiado, 6 alcaloides forem isolados e a atividade in vitro frente aos tripanosomatídeos avaliada. O alcaloide indólico 3-metoxi-2-oxa-4,10b-diaza-1,3,6a,10c-tetrahidrofluorantano-3,5-diol foi ativo contra T. cruzi e L. amazonensis. Este alcaloide induz alterações morfológicas e bioquímicas em promastigotas de L. amazonensis, atuando na divisão celular, com bloqueio na citocinese, processo autofágico e consequente colapso celular e morte. Já os resultados obtidos na parte final, com foco na ferramenta molecular para busca por substâncias, foi demonstrado pela primeira vez a superexpressão induzida de proteína endógena neste protozoário. Ainda, foi gerado modelo de superexpressão de proteínas que poderá ser utilizado para analisar as alterações fenotípicas, inferir funções de proteínas, ensaios para busca de fármacos, bem como compreender a complexa biologia de L. mexicana. As duas abordagens utilizadas resultaram em dados inéditos que permitem a continuação tanto dos trabalhos fitoquímicos quanto os moleculares, a fim de buscar novos fármcos frente aos tripanosomatídeos utilizados.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:02:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joelma Moreira.pdf: 4509931 bytes, checksum: bba95bccb3eff996782f9bce07ed8f0a (MD5) Previous issue date: 2009-10-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The Amazon is one of the largest possessors of plant biodiversity on the planet. The constituents of the flora have enormous potential in the pharmaceutical, cosmetics, perfumes and essences, among others. This study aimed to search for Amazonian species of the Lauraceae potentially useful both therapeutically and commercially, holding alkaloidal composition or aromatic potential. The selected species were collected in Adolpho Ducke Forest Reserve, for this study were: Aniba panurensis, Aniba rosaeodora, Dicypellium manausense, Endlicheria chalisea, Licaria cannella angustata, Licaria martiniana, Mezilaurus duckei, Mezilaurus itauba, Ocotea nigrescens, Ocotea splendens, Rhodostemonodaphne negrensis, Rhodostemonodaphne parvifolia, Pleurothyrium vasquezii e Sextonia rubra. Of the species selected the ones with some chemical study are A. rosaeodora, A. panurensis and M. itauba. The essential oils were obtained by hydrodistillation and analyzed for their chemical composition (GC-FID, GC-MS and 1H NMR), where the -caryophyllene was the major constituent of most oils: leaves of A. panurensis (33.5%), D. manausense (39.5%), M. itauba (51.8%), O. nigrescens (37.9%) and O. splendens (51.0%); leaves and branches of L. martiniana (41.7% and 21.4%, respectively) and R. parvifolia (41.3% and 16.2%, respectively). For the other major oils constituents were caryophyllene epoxide, santalenone, -eudesmol, -pinene, germacrene D, p-cymene, -elemene, -copaene and linalool (89.4%) which is the main substance found in species A. rosaeodora. When testing inhibitory activity of free radicals, all essential oils showed inhibition of free radical DPPH qualitatively. However, quantitative analyses of active concentrations were very high, exceeding 700 g/mL. Only the essential oils of branches of L. martiniana and leaves of M. duckei and R. parvifolia showed inhibitory activity of acetylcholinesterase. Tests of platelet inhibition resulted in little potential antiplatelet agent with inhibition below 20%. Extracts of the genus Aniba, Licaria, Mezilaurus, Ocotea and Rhodostemonodaphne obtained by extraction with ethanol 100%, were subjected to phytochemical screening in which the presence of phenols, tannins, flavanones, saponins, steroids and alkaloids were shown to be frequent. The ethanol extracts of the species of A. panurensis, S. rubra and L. martiniana showed the highest antioxidant activity against DPPH free radical. The acetylcholinesterase inhibitory activity was higher in extracts of the Aniba and Licaria genus. Extracts of the Licaria genus were showed better activities against tumor cells SF-295 (human glioblastoma), HCT-8 (human colon) and MDAMB-435 (human breast). And for the bioassays against Leishmania amazonensis and Trypanosoma cruzi extract of leaves of A. panurensis showed the best activity (67 g/mL e 79 g/mL, respectively). The extracts that showed better biological activities should be fractionated for the isolation of active principles and retested / A Amazônia é uma das maiores detentora da biodiversidade vegetal do planeta. Os constituintes de sua flora apresentam enorme potencial nas indústrias farmacêuticas, de cosméticos, perfumes e essências, dentre outras. O presente trabalho teve por objetivo a pesquisa de espécies amazônicas da família Lauraceae potencialmente úteis tanto terapeuticamente quanto comercialmente, que possuam composição alcaloídica ou potencial aromático. As espécies selecionadas, coletadas na Reserva Florestal Adolpho Ducke, para este estudo foram: Aniba panurensis, Aniba rosaeodora, Dicypellium manausense, Endlicheria chalisea, Licaria cannella angustata, Licaria martiniana, Mezilaurus duckei, Mezilaurus itauba, Ocotea nigrescens, Ocotea splendens, Rhodostemonodaphne negrensis, Rhodostemonodaphne parvifolia, Pleurothyrium vasquezii e Sextonia rubra. Das espécies selecionadas as únicas que possuem algum estudo químico são A. rosaeodora, A. panurensis e M. itauba. Os óleos essenciais foram obtidos através de hidrodestilação e analisados quanto suas composições químicas (CG-DIC, CG-EM e RMN de 1H), em que o -cariofileno foi o constituinte majoritário da maioria dos óleos: folhas de A. panurensis (33,5%), D. manausense (39,5%), M. itauba (51,8%), O. nigrescens (37,9%) e O. splendens (51,0%); folhas e galhos de L. martiniana (41,7% e 21,4%, respectivamente) e R. parvifolia (41,3% e 16,2%, respectivamente). Para os demais óleos os principais constituintes foram epóxido de cariofileno, santalenona, -eudesmol, -pineno, germacreno D, p-cimeno, -elemeno, -copaeno, e o linalol (89,4%) que é a principal substância encontrada na espécie A. rosaeodora. Nos ensaios de atividade inibidora de radicais livres, todos os óleos essenciais apresentaram inibição do radical livre DPPH qualitativamente. Entretanto, na análise quantitativa as concentrações ativas foram muito altas, superiores a 700 g/mL. Apenas os óleos essenciais dos galhos de L. martiniana e das folhas de M. duckei e R. parvifolia apresentaram atividade inibidora de acetilcolinesterase. Os ensaios de inibição plaquetária resultaram em pouco potencial antiagregante plaquetário, com inibição inferior a 20%. Os extratos brutos, dos gêneros Aniba, Licaria, Mezilaurus, Ocotea e Rhodostemonodaphne, obtidos por extração com etanol 100%, foram submetidos a uma triagem fitoquímica na qual a presença de fenóis, taninos condensados, flavanonas, saponinas, esteróides e alcalóides mostraram-se frequente. Os extratos etanólicos das espécies de A. panurensis, S. rubra e L. martiniana foram os que mostraram maior atividade antioxidante frente ao radical livre DPPH. A atividade inibidora de acetilcolinesterase foi maior nos extratos dos gêneros Aniba e Licaria. Os extratos do gênero Licaria foram os que apresentaram melhores atividades contras as células tumorais SF-295 (glioblastoma humano), HCT-8 (cólon humano) e MDAMB-435 (mama humana). E para os bioensaios contra Leishmania amazonensis e Trypanosoma cruzi o extrato das folhas de A. panurensis foi o que apresentou melhor atividade (67 g/mL e 79 g/mL, respectivamente). Os extratos que apresentaram melhores atividades biológicas deverão ser fracionados para o isolamento dos princípios ativos e novamente testados

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-09-08T14:41:47Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4202915 bytes, checksum: 1c2a779e58421553c719ffcf96bb4380 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T14:41:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4202915 bytes, checksum: 1c2a779e58421553c719ffcf96bb4380 (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The Lauraceae family consists of about 70 genera and 2.500 species, with tropical and subtropical distribution. In Brazil, comprises 400 species in 25 genera. Among these, we highlight the Ocotea genus with about 350 species. This study aimed to carry out the phytochemical study Ocotea duckei Vattimo and Ocotea gardneri (Meisn) Mez, as well as to assess the antimicrobial activity and antileishman of isolated chemical constituents. For this, the plant material was subjected to extraction processes, partition and chromatography methods to isolate the chemical constituents. The chemical structures of the compounds were determined by spectroscopic methods and comparisons with literature data. Chromatographic fractionation of the dichloromethane phase Ocotea gardneri resulted in the isolation of triterpene 2,6,10,15,19,23-hexamethyl-2,6,10,14,18,22-tetracosahexeno (squalene) of 3, 4, 5 trimethoxybenzaldehyde and glycosylated sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside the ethyl acetate phase was isolated flavone steroid 3,5,7,3 ', 4'-pentaidroxiflavona (quercetin) and two flavonols 2- (3, 4-dihydroxyphenyl) -4H-chromene-3,5,7-triol (epicatechin) and 2- (3,4-dihydroxyphenyl) -4H-chromene-3,5,7-triol (epicatechin). All compounds are first reported in this species. To obtain the fraction of total alkaloids (FAT), the crude ethanolic extract of leaves of Ocotea duckei underwent alkaloid march and then the chromatographic fractionation, resulting in the isolation of reticulin and N- oxide reticulin alkaloid, which is reported for the first time in the genus. Further, the FAT was analyzed by LC-MS and GC-MS. LC-MS allowed the identification of reticulin alkaloids, coclaurina, discretamina, tetrahidrocolumbamina and N-oxide reticulin. The FAT analysis by GC-MS allowed the identification of metilreticulina metilcoclaurina and alkaloids. Of these alkaloids, only reticulin was identified to FAT leaves in previous studies. Flavonoids isolates were evaluated for antimicrobial activity by microdilution technique, compared to strains of S. mutans, P. aeruginosa and S. aureus. Quercetin presented a MIC of 83.5 mg / mL against S. aureus and catechin one MIC of 400 mg / mL against the P. aeruginosa. The reticulin alkaloids and reticulin N-oxide were subjected to MTT reduction method to evaluate the activity antileihmania front of L. amazonensis, and they did not show activity / A família Lauraceae é constituída por aproximadamente 70 gêneros e 2500 espécies, com distribuição tropical e subtropical. No Brasil, compreende 400 espécies distribuídas em 25 gêneros. Dentre esses, destacamos o gênero Ocotea, com cerca de 350 espécies. O presente trabalho teve como objetivo realizar o estudo fitoquímico de Ocotea duckei Vattimo e Ocotea gardneri (Meisn) Mez, bem como, avaliar a atividade antimicrobiana e antileishmania dos constituintes químicos isolados. Para isto, o material botânico foi submetido a processos de extração, partição e métodos cromatográficos para isolamento dos constituintes químicos. As estruturas químicas dos compostos foram determinadas por métodos espectroscópicos e comparações com modelos da literatura. O fracionamento cromatográfico da fase diclorometano de Ocotea gardneri resultou no isolamento do triterpeno 2,6,10,15,19,23-hexametil-2,6,10,14,18,22-tetracosahexeno (esqualeno), do 3,4,5 trimetóxibenzaldeído e do esteroide glicosilado sitosterol-3-O-β-D-glicopiranosídeo Da fase acetato de etila foi isolada a flavona 3,5,7,3’,4’-pentaidroxiflavona (quercetina) e dois flavonóis 2 - (3,4-di-hidroxifenil) - 4H-cromeno-3,5,7-triol (epicatequina) e 2- (3,4-di-hidroxifenil) -4H-cromeno-3,5,7-triol (epicatequina). Todos os compostos estão sendo relatados pela primeira vez na espécie. Para obtenção da fração de alcaloides totais (FAT), o extrato etanólico bruto das folhas de Ocotea duckei foi submetido à marcha de alcaloides e, posteriormente, ao fracionamento cromatográfico, resultando no isolamento dos alcaloides reticulina e N-óxido de reticulina, sendo este relatado pela primeira vez no gênero. Ainda, a FAT foi analisada por LC-MS e por CG-MS. A LC-MS permitiu a identificação dos alcaloides reticulina, coclaurina, discretamina, tetrahidrocolumbamina e N-óxido de reticulina. A análise da FAT por CG-MS permitiu a identificação dos alcaloides metilreticulina e metilcoclaurina. Destes alcaloides, apenas a reticulina havia sido identificada para FAT das folhas, em estudos anteriores. Os flavonoides isolados foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana pela técnica de microdiluição, frente às cepas de S. mutans, P. aeruginosa e S. aureus. A quercetina apresentou uma CIM de 83,5 μg/mL frente à S. aureus e a catequina uma CIM de 400 μg/mL frente à P. aeruginosa. Os alcaloides reticulina e N-óxido de reticulina foram submetidos ao método de redução de MTT para avaliação da atividade antileihmania frente à L. amazonensis, e estes não apresentaram atividade.

Os óleos essenciais das folhas e galhos de quatro indivíduos de O. porosa e três de N. megapotamica foram avaliados durante doze meses através das técnica CG-EM e CG-DIC. Os compostos majoritários encontrados nos óleos voláteis das folhas de O. porosa foram durante esse período α-pineno, β-pineno, mirceno, nerolidol e espatulenol, enquanto nos galhos predominavam nerolidol, óxido de cariofileno, α-muurolol, β-eudesmol e o espatulenol, apenas em dois dos quatro indivíduos estudados. Em N. megapotamica, foram observadas diferenças quanti e qualitativas entre os indivíduos para os óleos das folhas e apenas quantitativas para os dos galhos. Nas folhas os componentes majoritários foram α-santaleno, trans-α-bergamoteno, β-santaleno, γ-amorfeno, biciclogermacreno e alohimachalol para os indivíduos 1 e 2, enquanto no indivíduo 3 predominavam o δ-elemeno e muurola-4, 10 (14)-dien-1-β-ol. Nos galhos desta espécie os componentes majoritários identificados no indivíduo 1 foram α-santaleno, espatulenol, α-muurolol, e 5 iso cedranol; α-santaleno, guaiol, 5 iso cedranol e α-bisabolol, no indivíduo 2; no indivíduo 3 predomina o α-muurolol. A análise dos componentes ao longo dos meses mostrou que os componentes dos óleos estudados não apresentaram uma variação estatisticamente significativa, a variabilidade entre os indivíduos foi maior que aquela observada com a sazonalidade. Os óleos estudados não apresentam atividade fungitóxica para C. sphaerospermum, C. cladosporioides, A. Níger, C. albicans e também não foram ativos frente às bactérias E. coli e P. aeruginosa, somente frente a S. aureus foi observada atividade antibacteriana. / Essential oils extracted from leaves and stems of four individuals of O. porosa and N. megapotamica were evaluated during a period of 12 months using GC/MS and GC/FID techniques. During this period the major compounds found in the volatile oils of O. porosa leaves were α-pinene, β-pinene, myrcene, nerolidol, spathulenol, whereas in stems were nerolidol, caryophyllene oxide, α-muurolol, β-eudesmol and spathulenol, only in two out of the four studied individuals. Among the N. megapotamica specimens qualitative and quantitative differences were observed in the leaf oils but only quantitative in the case of stems. In the leaves of individuals 1 and 2 the major compounds were α-santalene, trans-α- bergamotene, β-santalene, &$947;-amorphene, bicyclogermacrene and alo-himachalol, while for individual 3 δ-elemene and muurola-4, 10 (14)-diene-1-β-ol were predominant. In the stems of this species, the major compounds identified were α-santalene, spathulenol, α-muurolol and 5 iso cedranol in the individual 1; α-santalene, guaiol, 5 iso cedranol and α-bisabolol in individual 2; and was the predominant compound α-muurolol in individual 3. The chemical composition of the essential oils, during the analyzed period, did not present a statistically significant variation. Variability among individuals was higher than the one observed with seasonality. The studied oils did not present fungitoxic activity for C. sphaerospermum, C. cladosporioides, A. niger, C. albicans and were also not active against the Gram-negative bacteria E. coli e P. aeruginosa. However, both oils presented some activity against the Gram-positive bacterium S. aureus.

O gênero Ocotea Aubl. (Lauraceae), amplamente distribuído no estado do Rio Grande do Sul, foi investigado visando a análise química dos óleos voláteis e a avaliação in vitro das atividades anti-inflamatória, antioxidante e antifúngica dos óleos obtidos. Foram coletadas quatro espécies de Ocotea (O. acutifolia, O. indecora, O. puberula e O. silvestris) em diversas localidades do Rio Grande do Sul. A composição química foi determinada por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas, onde os óleos apresentaram predominância de sesquiterpenos. Não foi observada a presença de monoterpenos nas espécies estudas, exceto para uma das coletas realizadas para O. indecora, cujo óleo apresentou 16% de monoterpenos hidrocarbonetos, representados em especial por beta-pineno. Para uma das espécies, O. acutifolia, foi observada a predominância de um diterpeno no óleo. A atividade anti-inflamatória foi realizada pelo método da câmara de Boyden, sendo que nenhum óleo analisado apresentou atividade. Na avaliação da atividade antioxidante, esta foi determinada pela reação com 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH) por espectrofotometria. Apenas o óleo de O. silvestris foi testado, e o resultado foi negativo para essa atividade. A avaliação da atividade antifúngica foi realizada através da concentração inibitória mínima e os óleos voláteis testados apresentaram uma inibição no crescimento da cepa de Candida parapsilosis numa concentração de 500 μg/mL. / The genus Ocotea Aubl. (Lauraceae), widely distribuited in the state of Rio Grande do Sul, was investigated aiming to chemical analysis of volatile oils and in vitro evaluation of anti-inflammatory, antioxidant and antifungal activities of the obtained oils. Four species of Ocotea (O. acutifolia, O. indecora, O. puberula and O. silvestris) were collected from different localities of Rio Grande do Sul. The chemical compositions was determined by gas chromatography coupled to mass spectrometry, where the oils showed a predominance of sesquitepenes. O. indecora, except for, it was observed the absence of monoterpenos in the studied species. In this species, the oil presents 16% hydrocarbon monoterpenos represented in particular beta-pinene. For one species, O. acutifolia, the predominance of a diterpene in the oil was observed. The anti-inflamatory activity was evalued by the Boyden Chamber method, and this activity was observed for the tested oils. In the evaluation of antioxidant activity, this was determined by reaction with 2,2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH) by spectrophotometry method. In this test only the oil, O. silvestris was tested and the result was negative for this activity. The evaluation of antifungal activity was performed by minimum inhibitory concentration and volatile oils tested showed an inhibition in the growth of Candida parapsilosis strain at a concentration of 500 μg/mL.

O gênero Ocotea Aubl. (Lauraceae), amplamente distribuído no estado do Rio Grande do Sul, foi investigado visando a análise química dos óleos voláteis e a avaliação in vitro das atividades anti-inflamatória, antioxidante e antifúngica dos óleos obtidos. Foram coletadas quatro espécies de Ocotea (O. acutifolia, O. indecora, O. puberula e O. silvestris) em diversas localidades do Rio Grande do Sul. A composição química foi determinada por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas, onde os óleos apresentaram predominância de sesquiterpenos. Não foi observada a presença de monoterpenos nas espécies estudas, exceto para uma das coletas realizadas para O. indecora, cujo óleo apresentou 16% de monoterpenos hidrocarbonetos, representados em especial por beta-pineno. Para uma das espécies, O. acutifolia, foi observada a predominância de um diterpeno no óleo. A atividade anti-inflamatória foi realizada pelo método da câmara de Boyden, sendo que nenhum óleo analisado apresentou atividade. Na avaliação da atividade antioxidante, esta foi determinada pela reação com 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH) por espectrofotometria. Apenas o óleo de O. silvestris foi testado, e o resultado foi negativo para essa atividade. A avaliação da atividade antifúngica foi realizada através da concentração inibitória mínima e os óleos voláteis testados apresentaram uma inibição no crescimento da cepa de Candida parapsilosis numa concentração de 500 μg/mL. / The genus Ocotea Aubl. (Lauraceae), widely distribuited in the state of Rio Grande do Sul, was investigated aiming to chemical analysis of volatile oils and in vitro evaluation of anti-inflammatory, antioxidant and antifungal activities of the obtained oils. Four species of Ocotea (O. acutifolia, O. indecora, O. puberula and O. silvestris) were collected from different localities of Rio Grande do Sul. The chemical compositions was determined by gas chromatography coupled to mass spectrometry, where the oils showed a predominance of sesquitepenes. O. indecora, except for, it was observed the absence of monoterpenos in the studied species. In this species, the oil presents 16% hydrocarbon monoterpenos represented in particular beta-pinene. For one species, O. acutifolia, the predominance of a diterpene in the oil was observed. The anti-inflamatory activity was evalued by the Boyden Chamber method, and this activity was observed for the tested oils. In the evaluation of antioxidant activity, this was determined by reaction with 2,2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH) by spectrophotometry method. In this test only the oil, O. silvestris was tested and the result was negative for this activity. The evaluation of antifungal activity was performed by minimum inhibitory concentration and volatile oils tested showed an inhibition in the growth of Candida parapsilosis strain at a concentration of 500 μg/mL.