Made available in DSpace on 2012-05-07T14:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000021.pdf: 7148485 bytes, checksum: d3a3aca355db988afba0a31f293e9c1e (MD5) Previous issue date: 2008 / O diagnóstico precoce da leishmaniose visceral (LV) é importante para evitar danos severos que podem levar o paciente à morte. Neste contexto, os métodos moleculares vêm sendo desenvolvidos com destaque para a tecnologia da reação em cadeia da polimerase (PCR). Recentemente, a PCR apresentou um significativo avanço em sua tecnologia; é a PCR quantitativa em tempo real (qPCR). Objetivouse desenvolver e avaliar um sistema baseado em qPCR para o diagnóstico da infecção por Leishmania infantum em cães, bem como efetuar uma análise comparativa com a PCR convencional utilizada no Serviço de Referência em Leishmanioses de Pernambuco. Com base na seqüência NCBI Z35273.1 de L. infantum disponível no BLAST-NCBI foram desenhados primers específicos para o complexo L. donovani. A combinação dos primers gerou sistemas de detecção, sendo o sistema Linf 1 B o mais promissor. A curva-padrão foi gerada resultando em limite de detecção de 10 fg de DNA genômico de L. infantum (7x10-2 parasitas), e = 0.9417, R2= 0.931 e slope= -3.47. O sistema desenvolvido foi avaliado em sangue de cães positivos e negativos para leishmaniose visceral canina, apresentando sensibilidade de 100 por cento e especificidade de 83,33 por cento. A análise comparativa com o PCR convencional mostrou que, utilizando-se amostras de sangue, o qPCR é mais sensível (sensibilidade PCR= 23,8 por cento, qPCR= 100 por cento). Em relação à especificidade, apesar da PCR convencional ter apresentado valor de 100 por cento, as análises por meio dos intervalos de confiança e o teste 2? mostraram que os dois testes (PCR convencional e qPCR) são equivalentes. Desta forma, conclui-se que os resultados obtidos para o sistema de qPCR, em amostra de sangue de cães e, a análise comparativa com a PCR convencional (RV1/RV2), sugerem sua utilização nas rotinas de diagnóstico da infecção por L. infantum

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-19T17:20:40Z No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-19T17:20:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) é uma zooantroponose sistêmica de importância reconhecida em saúde pública, 90% dos casos no novo mundo são oriundos do Brasil. Os cães domésticos e as raposas são considerados como os principais reservatórios. A persistência da Leishmania em áreas endêmicas e o insucesso das medidas de prevenção, dirigidas exclusivamente ao reservatório canino, sugerem que outros animais podem ter importância na manutenção do ciclo de transmissão da LV. OBJETIVO: Avaliar potenciais reservatórios para LV numa área endêmica, utilizando método de biologia molecular quantitativo (PCR real-time). MÉTODOS: Foram estudados animais domésticos (bovinos, equídeos, caprinos e ovinos) e animais silvestres (marsupial), no município de Salinas da Margarida, Bahia, de 2007 a 2009. Todos os animais domésticos de produção mantidos e/ou pernoitando nas áreas urbanas do município foram incluídos. Os marsupiais foram capturados com armadilha animal modelo Tomahawk colocadas no peridomicílio das residências onde ocorreram casos de LV humana e/ou canina na localidade de Encarnação. Nos animais domésticos de produção foi coletado apenas amostra de sangue periférico e nos marsupiais, além de sangue, foi obtida uma amostra de pele através de biópsia da orelha. Em todas as amostras foi realizado PCR real-time para investigar a presença de DNA do parasito e estimar a carga parasitária. Os primers e sondas utilizados foram selecionados em gene SSU rRNA, que aparece 160 vezes no genoma de Leishmania spp. e é altamente conservado entre as espécies de Leishmania. RESULTADOS: No total, foram avaliados 80 animais domésticos (20 bovinos, 33 equídeos, 20 caprinos e 7 ovinos) e 103 marsupiais, todos da espécie Didelphis albiventris. Cinco bovinos foram positivos no teste de PCR real-time com carga parasitária variando de 12,7 a 183,5 parasitos/mL. Apenas um marsupial apresentou amostra de sangue positiva (6,0 parasitos/mL). Todos os demais animais testaram negativo. CONCLUSÃO: A técnica de PCR real-time pode ser uma ferramenta útil para avaliar o papel de potenciais reservatórios domésticos e silvestres para LV. A execução do PCR real-time é menos trabalhosa e mais prática do que a realização do teste de xenodiagnóstico, além disso, ela poder ser automatizada, permitindo a análise de grande número de amostras em estudos epidemiológicos. A detecção de carga parasitária de Leishmania em sangue de bovinos, em quantidade comparável à encontrada em cães, sugere que eles podem ser reservatórios para LV. A relativa abundância de bovinos nas áreas endêmicas para LV, assim como as evidências da preferência alimentar do vetor por estes animais, ressaltam a importância do papel que os bovinos podem ter na transmissão da LV. Mais trabalhos são necessários para elucidar estas questões. / Visceral leishmaniasis (VL) is a systemic zooantroponose of public health relevance, 90% of cases in the new world are from Brazil. Domestic dogs and foxes are considered the main reservoirs. The persistence of Leishmania in endemic areas and the failure of preventive measures, directed exclusively to the canine reservoir, suggest that other animals may be important in maintaining the transmission cycle of Leishmania. OBJECTIVE: To investigate potential reservoirs for VL in an endemic area, using molecular biology quantitative method (real-time PCR). METHODS: We studied domestic animals (cattle, horses, goats and sheeps) and wildlife (marsupial), in the city of Salinas da Margarida, Bahia, from 2007 to 2009. All livestock animals maintained and/or staying overnight in the urban areas of the municipality were included. The marsupials were captured with Tomahawk model animal traps placed outside the home of homes where there were human and/or dog VL cases in the locality of the Encarnação. In livestock animals, we collected only a sample of peripheral blood and in marsupials, in addition to blood we also collected a sample of ear skin biopsy. In all samples we carried out real-time PCR to detect the presence of parasite DNA and to estimate the parasite load. The primers and probes used were selected on SSU rRNA gene, which appears 160 times in the genome of Leishmania spp. and is highly conserved among species of Leishmania. RESULTS: In total, 80 livestock animals were evaluated (20 cattle, 33 horses, 20 goats and 7 sheep), and 103 marsupials, all Didelphis albiventris. Five cattle were positive by real-time PCR with parasite load ranging from 12.7 to 183.5 parasites/mL. Only one marsupial had a positive blood sample (6.0 parasites/mL). All other animals tested negative. CONCLUSION: The real-time PCR technique can be a useful tool for assessing the potential role of domestic and wild reservoir for LV. The implementation of real-time PCR is less laborious and more practical than the test of xenodiagnosis, in addition, it can be automated, allowing for the analysis of large number of samples in epidemiological studies. Detection of Leishmania parasite load in the blood of cattle, in an amount comparable to that found in dogs, suggests that they may be reservoirs for VL. The relative abundance of cattle in endemic areas for VL, as well as evidence of vector feeding preference for these animals, highlight the important role that cattle may exert in the transmission of VL. More research is needed to clarify these issues.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-01T18:14:31Z No. of bitstreams: 1 Melissa Moura Abbehusen Estudo da imunogenicidade de vacinas de....pdf: 867164 bytes, checksum: 4ef801f12d349f64700eea900fccfc9b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T18:14:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melissa Moura Abbehusen Estudo da imunogenicidade de vacinas de....pdf: 867164 bytes, checksum: 4ef801f12d349f64700eea900fccfc9b (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A Proteína ácida ribossomal de Leishmania infantum (L. infantum) - LiP0 é um componente estrutural da subunidade maior do ribossomo e já foi descrita como um antígeno imunodominante, que participa na síntese de outras proteínas e é capaz de induzir resposta imune humoral específica em soro de pacientes e cães infectados com Leishmania chagasi (L. chagasi). Mycobacterium smegmatis (M. smegmatis), é uma micobactéria oportunista, que apresenta crescimento rápido e uma poderosa capacidade adjuvante, já sendo utilizado como vetor de expressão para diversos antígenos. Neste trabalho avaliamos a capacidade imunoprotetora do Mycobacterium smegmatis recombinante (rM.smegmatis) expressando o gene que codifica a LiP0, bem como o plasmídeo e/ou proteína LiP0 utilizando estratégia homóloga (composta de plasmídeo de DNA) e heteróloga (composta de plasmídeo de DNA adicionado a proteína recombinante e CpG), contra a infecção causada por L. chagasi em hamsters. Hamsters foram imunizados e posteriormente infectados com L. chagasi por via endovenosa. Os animais imunizados com a micobactéria, apesar de apresentarem resposta imune humoral anti-M. smegmatis, não produziram anticorpo contra LiP0, que só foram detectados no soro dos animais que receberam a estratégia heteróloga de imunização. Na análise de citocinas, observou-se que os animais imunizados com rM.smegmatis LiP0 apresentaram maior concentração de IFN-γ e menor quantidade de TGF-ß e IL-10 quando comparado aos grupos controle, sugerindo uma resposta Th1. Em diferentes momentos após o desafio, o grau de proteção avaliado pela carga parasitária em órgãos alvo, foi estimado por ensaio de diluição limitante. Nenhuma diferença foi observada na carga parasitaria do baço, fígado e linfonodo em hamsters imunizados ou controles em todos os pontos da avaliação, sugerindo que a LiP0, não protegeu hamsters imunizados tanto com o Mycobacterium expressando o gene que codifica a proteína, nem como vacina de DNA utilizando a estratégia homóloga ou heteróloga contra infecção por L.chagasi. / The acid ribosomal protein of Leishmania infantum (L. infantum) - LiP0 is a structural component of the ribosomal subunit and it was described as an immunodominant antigen recognized either by serum of patients and dogs infected by Leishmania chagasi (L. chagasi) and cooperates in the synthesis of other proteins. Mycobacterium smegmatis (M. smegmatis) is a opportunistic bacteria, which presents rapid growth, is a potent adjuvant and has been used as carrier of antigens in several different experimental models of immunoprotection. In this work we evaluate the immunoprotective capacity of recombinant M. smegmatis (rM. smegmatis) carrying the gene of LiP0 and the DNA or protein of LiP0 using homologous strategy (composed of plasmid DNA) and heterologous (consisting of plasmid DNA and recombinant protein more CpG) to immunize hamsters against infection by L. chagasi. The immunized animals produced anti-M.smegmatis antibodies but they did not produce antibody against LiP0, detected only in animals who received the heterologous strategy of vaccination. In the analysis of cytokines, we observed that animals immunized with rM.smegmatis LiP0 had higher concentration of IFN-γ and lower amounts of TGF-ß and IL-10 compared to control groups, suggesting a Th1 response. At different times after challenge, the degree of protection, evaluated by parasite load in the target organs, was estimated by limiting dilution assay. No difference was observed in the parasite load in the spleen, liver and lymph node between immunized hamsters and controls at all points of evaluation. There was no protection in animals immunized with rM. smegmatis expressing the acidic ribosomal protein gene, suggesting that LiP0 did not protect hamsters immunized with either Mycobacterium expressing the gene encoding the protein or DNA as a vaccine strategy using homologous or heterologous against infection L.chagasi.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-29T21:19:29Z No. of bitstreams: 1 Simone de Souza Oliveira Avaliação de estratégia otimizada para triagem....pdf: 656689 bytes, checksum: 2248d68384fab994772907132553ea61 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-29T21:19:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simone de Souza Oliveira Avaliação de estratégia otimizada para triagem....pdf: 656689 bytes, checksum: 2248d68384fab994772907132553ea61 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A Leishmaniose Visceral Humana (LVH) é uma das seis endemias mundiais de prioridade da OMS. São registrados anualmente cerca de 500 mil casos novos, destes 90% ocorrem em cinco países: Bangladesh, Índia, Nepal. Sudão e Brasil. O cão doméstico é considerado o principal reservatório no ambiente urbano e o responsável pela persistência da doença. OBJETIVO: Avaliar a eficácia de estratégia otimizada para triagem e eliminação de cães soropositivos no controle e prevenção da LVH. MÉTODOS: Foi realizado um estudo de ensaio comunitário, com crianças entre 6 meses a 12 anos de idade, residentes numa região endêmica para LVH, dividida aleatoriamente em duas áreas: área de intervenção (triagem e eliminação de cães a cada sete meses) e área controle. A população do estudo foi acompanhada por um período de 30 meses. O desfecho principal foi infecção por Leishmania, definida como soroconversão por teste imunoenzimático, que era realizado em inquéritos soroepidemiológicos a intervalos de 15 meses, aproximadamente. RESULTADOS: Foram incluídas inicialmente 1206 crianças. No final do primeiro período (15 meses), após dois ciclos da intervenção, a incidência de soroconversão na área da intervenção não diferiu significativamente da incidência na área controle (RR=1,59; IC 95% 0,85-2,97). No entanto, no final do segundo período (30 meses), depois de quatro ciclos da intervenção, a incidência de soroconversão foi menor na área da intervenção (RR=0,23; IC 95% 0,08 - 0,65). CONCLUSÃO: A intervenção não foi eficaz no primeiro período do estudo, mas, no final do segundo período ela reduziu a taxa de soroconversão. Assim, a eficácia da intervenção foi dependente do número de ciclos de triagens realizadas. É possível que as limitações e deficiências dessa estratégia sejam minimizadas com a repetição dos ciclos e que a persistência da intervenção por mais tempo permita que os benefícios se acumulem e sejam alcançados os resultados dessa medida de controle da LVH. / Human visceral leishmaniasis is within the six worldwide OMS’s priority endemic diseases. About 500 thousand new cases are recorded annually around the world, 90% of them in five countries: Bangladesh, India, Nepal, Sudan and Brazil. Domestic dogs are the most important reservoir host at urban area and the cause of HVL persistence. OBJECTIVE: Measure the efficiency of optimal strategy for screening and elimination of seropositive dogs in HVL control and prevention. METHODS: a screening study in a HVL endemic area, 1206 children between 6 months and 12 years old were included in this study. They were living in two different areas: area of intervention (dog screening and elimination every seven months) and a control area. The studied population was accompanied for a period of 30 months. The parameter to verify the efficacy of the chosen strategy was the seroconversions detected by ELISA, defined as immunoenzymatic test in seroepidemiologic surveys conducted about every 15 months. RESULTS: By the end of the first period (15 months), after two intervention cycles the seroconversions incidence at the intervention area wasn’t statistically different of the control area. However at the end of second period (30 months), after four intervention cycles, its incidence was lower at the intervention area. CONCLUSIONS: the intervention wasn’t effective on the study first period, but, by the end of the second period it reduced the seroconversion rate.Therefore the intervention efficacious was dependent of the number of screening cycles performed. Possibly, the limitations and deficiencies of this strategy would be minimized by cycle repetition and longer period of intervention, allowing benefits to accumulate and the results for this procedure to be reached.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-07-18T16:05:02Z No. of bitstreams: 2 Orlando Marcos Farias de Sousa, Estudo da infecção... 2013.pdf: 3775180 bytes, checksum: 1eb7cab3c5ef08df5a81ec9219afacbc (MD5) Orlando Marcos Farias de Sousa, Estudo da infecção... 2013.pdf: 3775180 bytes, checksum: 1eb7cab3c5ef08df5a81ec9219afacbc (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-18T16:05:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Orlando Marcos Farias de Sousa, Estudo da infecção... 2013.pdf: 3775180 bytes, checksum: 1eb7cab3c5ef08df5a81ec9219afacbc (MD5) Orlando Marcos Farias de Sousa, Estudo da infecção... 2013.pdf: 3775180 bytes, checksum: 1eb7cab3c5ef08df5a81ec9219afacbc (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / No município de Camaçari, considerado área endêmica para leishmaniose visceral (LV), foi realizado estudo objetivando determinar a influência das variáveis climáticas sobre a flutuação mensal da população flebotomínica e a taxa de infecção natural desses flebotomíneos por Leishmania infantum. Para o levantamento entomológico foram realizadas capturas sistemáticas de flebotomíneos utilizando armadilhas tipo HP, tanto no peri como no intradomicílio. As residências foram selecionadas em bairros pertencentes a zona urbana orla e zona urbana sede, onde casos humanos de LV no foram registrados município. As capturas foram realizadas entre dezembro de 2011 e novembro de 2012. A relação entre pluviosidade, umidade relativa do ar e temperatura e a proporção de flebotomíneos foi calculada utilizando o coeficiente de Spearman. Para o estudo da infecção natural dos flebotomíneos foi utilizada a técnica de qPCR. Os pools avaliados foram compostos por flebotomíneos da mesma espécie, distribuídos pelas residências, ás quais foram investigadas no intra e peridomicilio. Além disso, os pools foram distribuídos de acordo com os 12 meses de coleta. Os resultados mostraram que a fauna flebotomínica é diversificada, sendo composta por quatro gêneros com ocorrência de cinco espécies. Espécimes de interesse epidemiológico foram encontrados com predominância para a espécie Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (98,4%). Foi observada correlação positiva entre a densidade de flebotomíneos e a variável pluviosidade na zona urbana sede durante o período de coleta (r = 0,66, p <0,02). A correlação entre as variáveis bioclimáticas e a densidade dos flebotomíneos também foi avaliada em bairros que se destacaram individualmente pela densidade de flebotomíneos, sendo encontrado correlação positiva para a variável umidade relativa do ar (r = 0,58 p <0,04) e associação similar para a variável precipitação durante o período de coleta (r = 0,67 p <0,01). As análises moleculares mostraram infecção natural por Leishmania infantum em 10 pools de 78 de pools de Lutzomyia longipalpis analisados. Estes achados aliados à presença do vetor competente da LV, Lutzomyia longipalpis em elevada proporção, e os estudos das variáveis climáticas alertam para a necessidade de vigilância epidemiológica e constituem em ferramenta útil para o planejamento de medidas de controle contra LV no município de Camaçari. / In Camaçari city, considered an endemic area for visceral leishmaniasis (VL), the study was conducted aiming to determine the climatic variables influence on the sandflies monthly fluctuation and the natural infection rates by Leishmania infantum in the sandflies. The entomological inventory was performed with sandflies systematic captures using HP traps, both in peridomiciliar well as in intradomiciliar. The residences were selected in districts belonging to the coastline urban zone and headquarters urban zone, where human cases of VL were recorded in the city. Captures were performed between December 2011 and November 2012. The correlation between the number of sandflies and the different climatic variables was calculated using Spearman's coefficient. The sandfly natural infection was evaluated by qPCR technique. Pools reviews were composed by sand flies of the same species, distributed among households, which were investigated in peridomiciliare and intradomiciliare. Additionally, pools were distributed according to the 12-month sampling. The results showed that the phlebotomine fauna is diverse, consisting of four genera and five species. Specimens of epidemiological interest were found predominantly for Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (98.4%). In addition, a positive correlation between sandfly density and pluviosity at headquarters urban zone was observed during the collection period. (r = 0.66, p <0.02). The correlation between bioclimatic variables and density of sandflies was also evaluated in neighborhoods that stood out individually by the sandfly density. A positive correlation was observed for the variable relative humidity during the collection period (r = 0.58 p <0.04) and similar association for precipitation variable in the same period (r = 0.67 p <0.01). Molecular analysis showed natural infection by Leishmania infantum in 10 pools of 78 pools of Lutzomyia Longipalpis analyzed. In summary, these findings combined with the presence of VL competent vector, Lutzomyia Longipalpis in high density, and studies of climate variables warn of the need for epidemiological surveillance and constitute a useful tool for planning control measures against VL in Camaçari. Keis

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:39:30Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) lilian_nascimento_ipec_dout_2012.pdf: 11773852 bytes, checksum: 9ad71852b1c498a40fac78e3aacc2a0a (MD5) lilian_nascimento_ipec_dout_2012.pdf.txt: 134129 bytes, checksum: 8b9796bdb9c63ac5f6e402b7415a47e7 (MD5) lilian_nascimento_ipec_dout_2012.pdf.jpg: 1525 bytes, checksum: a60802c425a9ae7d9f39a8ad44377192 (MD5) Previous issue date: 2014-05-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, Brasil / Em decorrência da importância que o cão doméstico exerce frente à manutenção do ciclo de transmissão da leishmaniose visceral (LV), uma das estratégias de controle da doença é a eliminação de cães soropositivos. No entanto, até o início deste trabalho, ainda não havia sido realizado um estudo de acurácia diagnóstica com tamanho amostral expressivo do ensaio imunoenzimático (EIE) disponível no Brasil para diagnóstico de leishmaniose visceral canina (LVC). Neste estudo foi avaliada a acurácia, reprodutibilidade e a validação do EIE para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina (EIE-LVC) produzido pelo Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Foram incluídos 802 cães de áreas endêmicas captados por vigilância ativa e em Centros de Controle de Zoonoses (CCZ). Para o estudo de confiabilidade toda a amostra foi analisada de forma mascarada e em duplicata e 167 amostras foram repetidas também em outro laboratório (CCZ-Belo Horizonte). Foram considerados cães com LVC os que apresentaram diagnóstico parasitológico positivo com isolamento de Leishmania (Leishmania) chagasi ou imunofluorescência indireta (IFI) e reação em cadeia da polimerase (PCR) positivos. A confiabilidade das observações intraobservador foi excelente, com coeficiente de correlação intraclasse (CCI) de 0,98 (Intervalo de Confiança - IC 95% 0,98;0,99) para toda amostra e excelentes coeficientes de correlação de concordância de Lin Para a confiabilidade entreobservadores, o resultado também foi excelente. Os parâmetros de acurácia calculados para as duas aferições realizadas com toda amostra (N=802) indicaram sensibilidade de 89,9% (IC 95% 86,5;92,7) e 87,6% (IC 95% 83,9;90,7) para a 1ª e 2ª aferições, respectivamente, e especificidade de 89,4% (IC 95% 86,0;92,2) e 91,6% (IC 95% 88,5;94,1). A acurácia foi alta independente da condição clínica do cão com áreas sobre a curva ROC (Receiver Operating Characteristic) grandes variando de 0,94 a 0,92, e como esperado, os valores preditivos positivos aumentaram com a piora da condição clínica do cão. O desempenho do teste EIELVC o credencia para o diagnóstico em população de cães suspeitos de LVC / Due to the importance of domestic dog carries forward to the maintenance of the cycle transmission of visceral leishmaniasis, one of the strategies of disease control is the elimination of seropositive dogs. However, until the beginning of this work, had not been a study of diagnostic accuracy with expressive sample size available in Brazil for an enzyme immunoassay (EIA) for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL). We evaluated the accuracy, reproducibility and validation of EIA for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis (EIE-LVC) produced by the Immunobiological Technology Institute (Bio-Manguinhos). We included 802 dogs from endemic areas captured by active surveillance and Zoonosis Control Centers (ZCC). For the study of reliability, tests were performed in duplicate and masked for entire sample and 167 samples were also repeated in another laboratory (ZCC-Belo Horizonte). We considered those dogs with CVL showed positive parasitological diagnosis with isolation of Leishmania (Leishmania) chagasi or indirect immunofluorescence and polymerase chain reaction positive. The reliability of intraobserver was excellent, with intraclass correlation coefficient (ICC) of 0.98 (confidence interval - 95% CI 0.98, 0.99) for the entire sample and excellent Lin's concordance correlation coefficients. The reliability between observers was still excellent. Accuracy parameters calculated for the two measurements taken with all serum sample (N = 802) showed a sensitivity of 89.9% (95% CI 86.5,92.7) and 87.6% (95% CI 83.9,90.7) for the 1st and 2nd measurements, respectively, and a specificity of 89.4% (95% CI 86.0,92.2) and 91.6% (95% CI 88.5,94.1). Accuracy was high regardless of the clinical condition of the dog with areas under the Receiver Operating Characteristic (ROC) curve ranging from 0.94 to 0.92, and as expected the positive predictive values increased with worsening clinical condition of the dog. The performance EIE-LVC enable the diagnosis in a population of dogs suspected of CVL.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T14:17:29Z No. of bitstreams: 1 Tese_MiriamNogueiraBarbosa.pdf: 4081639 bytes, checksum: 6948e224189055ff20882287acf132c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T14:18:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_MiriamNogueiraBarbosa.pdf: 4081639 bytes, checksum: 6948e224189055ff20882287acf132c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T14:18:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_MiriamNogueiraBarbosa.pdf: 4081639 bytes, checksum: 6948e224189055ff20882287acf132c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T14:18:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_MiriamNogueiraBarbosa.pdf: 4081639 bytes, checksum: 6948e224189055ff20882287acf132c7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O estudo, desenvolvido no período de 2010 a 2012, visou implantar e avaliar uma estratégia de organização de serviços de saúde para prevenção e controle da leishmaniose visceral (LV) no Município de Ribeirão das Neves - MG. A estratégia teve como eixo norteador a integração dos serviços de assistência, controle de zoonoses e epidemiologia, por meio da criação de uma equipe de coordenação (EC) e teve o técnico de enfermagem (TE) como um elo importante do trabalho. A EC participou do processo de implantação e avaliação da estratégia, que consistiu em: análise de contexto organizacional; reorganização da assistência aos casos da doença com definição de portas de entrada e divulgação de fluxogramas; reorganização da vigilância com definição de fluxos, análise e divulgação de dados; formação por meio de oficina de um TE por serviço de saúde para atuar como referência da prevenção e controle da doença; intervenção na comunidade por meio de quatro visitas domiciliares realizadas por agentes de saúde, que constaram em aplicação de questionário sobre a LV aos responsáveis pelos domicílios, inspeção sanitária e diálogo a respeito da doença com o morador. A análise dos questionários e dos dados da inspeção sanitária foi realizada entre a primeira e última visita. Foi realizado estudo qualitativo para contribuir na compreensão da influência dos fatores de contexto na implantação da estratégia. Avaliou-se o grau de implantação da estratégia nas dimensões de estrutura e processo. Os dados foram coletados a partir da aplicação de questionários a médicos, enfermeiros, agentes de saúde e TE; grupos focais; análise de banco de dados, entre outros. Observou-se que o sistema de saúde apresentava ausência de fluxos, de protocolos, de apoio diagnóstico e equipes de saúde incompletas. Foi observado baixo conhecimento da população sobre a doença e falta de sistematização de atividades de prevenção na rotina de trabalho dos agentes de saúde. No período de estudo, houve aumento significativo de notificações de casos de LV e redução do intervalo entre a notificação do caso e início do tratamento. Na intervenção na comunidade, observou-se aumento significativo do percentual de acerto dos moradores nos questionários e melhoria da condição sanitária. O grau de implantação da estratégia mostrou-se adequado em relação à estrutura física, atuação da EC, planejamento, formação dos TEs e intervenção na comunidade, mas foi considerado crítico em relação a recursos humanos, cujos efeitos repercutem diretamente na qualidade da atenção à saúde. / The study, conducted during the period of 2010-2012, aimed to implement and evaluate a strategy of health services organizations for prevention and control of visceral leishmaniasis (VL) in Ribeirão das Neves - MG. The strategy had as a guideline the integration of care services, zoonosis control and Epidemiology through the creation of a coordination team (CT) and had the practical nurse (PN) as an important work link. The CT took part in the implementation process and evaluation of the strategy which consisted of: analyzing the organizational context; reorganization of assistance to cases of disease with gateways definition and divulgation of flow diagrams; reorganization of the surveillance with flow definition, analysis and divulgation of data; training through a PN by health service to act as a reference of prevention and control of disease; community intervention through four home visits by health workers, which were included a questionnaire about the VL to the heads of householders, sanitary inspection and dialogue about the disease with the resident. The analysis of the questionnaires and the health inspection data was carried out between the first and last visit. Qualitative study was conducted to contribute to the understanding the influence of context factors in the implantation. It was evaluated the degree of strategy implementation in the dimensions of structure and process with data collected from questionnaires to doctors, nurses, health workers and PN; focus groups, analysis of the database, among others. It was observed low knowledge of the population about the disease and lack of systematic prevention activities in the routine work of health workers. During the study period there was a significant increase of reported cases of VL and gap reduction between the case notification and treatment. In the community intervention there was a significant increase in the percentage of correct answers in the questionnaires of residents and improvement of sanitary condition. The degree of implementation of the strategy proved to be adequate in relation to the physical structure, CT actuation, planning, training of PNs and intervention in the community, but was considered critical in relation to human resources which the effects affects directly in the quality of health care.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T16:26:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MariaVitóriaAssumpçãoMourão (1).pdf: 1293649 bytes, checksum: 77059bdd9914c6dfe5771a713c8af94b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T16:26:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MariaVitóriaAssumpçãoMourão (1).pdf: 1293649 bytes, checksum: 77059bdd9914c6dfe5771a713c8af94b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T16:26:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MariaVitóriaAssumpçãoMourão (1).pdf: 1293649 bytes, checksum: 77059bdd9914c6dfe5771a713c8af94b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T16:26:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MariaVitóriaAssumpçãoMourão (1).pdf: 1293649 bytes, checksum: 77059bdd9914c6dfe5771a713c8af94b (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, observa-se aumento dos casos de leishmaniose visceral (LV) nos últimos anos, associado à alta letalidade. É necessária a identificação de indicadores sensíveis e específicos que reconheçam precocemente a gravidade e possibilitem intervenção imediata e adequada. O objetivo do presente estudo prospectivo foi correlacionar parâmetros clínicos e laboratoriais e carga parasitária à evolução da LV em crianças. Foram incluídas 48 crianças com diagnóstico de LV, internadas no Hospital Infantil João Paulo II, em Belo Horizonte, de junho de 2010 a junho de 2011. Os pacientes foram avaliados clinicamente e tiveram amostras de sangue periférico coletadas antes (T0), entre 10 e 15 dias (T1) e entre 40 e 60 dias (T2) após início do tratamento. Nestas amostras, a carga parasitária foi quantificada por PCR quantitativa em tempo real (qPCR), sendo o gene alvo a SSU rRNA de Leishmania. Evolução grave foi definida como internação em UTI ou administração de amina vasoativa, ventilação mecânica ou hemotransfusão. As manifestações clínicas mais observadas à admissão foram febre, palidez e hepatosplenomegalia, associado à pancitopenia, elevação das aminotransferases hepáticas e hipoalbuminemia. A positividade da RIFI e dos testes rápidos Kalazar Detect® e Diamed-IT Leish® foi de 66,7%, 85,4% e 100%, respectivamente. Observou-se elevada positividade (100%) em exames de PCR convencional em sangue periférico e aspirado de medula óssea. Como tratamento específico, administrou-se Glucantime® em 45,8%, anfotericina B desoxicolato em 35,5%, anfotericina B lipossomal em 8,3% e associação de anfotericina B lipossomal e Glucantime® em 10,4% dos pacientes. Considerou-se que 56,2% das crianças apresentaram evolução grave, mas sem nenhum óbito. Em T2, todos apresentavam melhora clínica. A classificação por critérios de gravidade proposta pelo Ministério da Saúde em 2006 foi aplicada à admissão, não apresentando boa acurácia para detecção de casos com evolução grave. O qPCR apresentou bom desempenho e foi positivo em todas as crianças em T0. Observou-se variação ampla da carga parasitária em T0, não correlacionada a características clínicas e laboratoriais, a critérios de gravidade e escores preditores de óbito à admissão e à evolução grave durante a internação. Redução significativa do número de cópias do fragmento gênico foi constatada em T1 e T2, que não variou de acordo com a medicação usada. Identificaram-se como fatores de risco para evolução grave idade menor do que 12 meses, taquidispneia, infecção, hepatomegalia volumosa, anemia, plaquetopenia e hipoalbuminemia à admissão. / In Brazil, there is an increasing number of cases of visceral leishmaniasis (VL) in recent years, associated to a high case-fatality rate. It is necessary to identify sensitive and specific clinical factors that may prompt to adequate and immediate intervention. The purpose of this prospective study was to correlate clinical and laboratory parameters and parasite load with clinical outcome in children with VL. Forty-eight children diagnosed with VL and hospitalized in Hospital Infantil João Paulo II, in Belo Horizonte, Brazil, were included from June 2010 to June 2011. The patients were assessed clinically and peripheral blood samples were obtained before (T0), from 10 to 15 (T1) and from 40 to 60 days (T2) after starting treatment. In these samples, the parasite load was quantified by real-time quantitative PCR (qPCR) using as molecular target the SSU rRNA gene of Leishmania. Severe outcome was defined as admission in intensive care unit, administration of vasoactive amines, mechanical ventilation or blood transfusion. The most frequently observed features were fever, pallor and hepatosplenomegaly associated with pancytopenia, elevated liver aminotransferases and hypoalbuminemia. The positivity of IFAT and of the rapid tests Kalazar Detect® and Diamed-IT Leish® was 66,7%, 85,4% e 100%, respectively. There was a high positive rate (100%) in conventional PCR in peripheral blood and bone marrow aspirates. The drugs used for specific therapy were Glucantime® in 45,8%, amphotericin B deoxycholate in 35,5%, liposomal amphotericin B in 8,3% and combination of liposomal amphotericin B and Glucantime® in 10,4% of the patients. It was considered that 56,2% of the children presented severe outcome but no deaths occurred. At T2, all patients had clinical improvement. The classification of severity proposed by the Ministry of Health in 2006, applied at admission, showed low accuracy for detection of severe cases. The quantitative PCR assay presented high performance and was positive in all children in T0. There was a wide variation in parasite load at T0 and no correlation was observed with clinical and laboratory features, with severity at admission and with severe outcome. Significant decrease in the number of copies of the gene fragment was found in T1 and T2, which did not vary according to the drug used. The identified risk factors for severe outcome were children younger than 12 months and the presence of tachydyspnea, infection, hepatomegaly, anemia, thrombocytopenia and hypoalbuminemia at admission.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-05-12T13:35:17Z No. of bitstreams: 1 Juliana Coelho Santos Isotipo...2014.pdf: 500362 bytes, checksum: 4c5dbf54877a6ef41cbbca30b73e6cde (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-05-12T13:35:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Juliana Coelho Santos Isotipo...2014.pdf: 500362 bytes, checksum: 4c5dbf54877a6ef41cbbca30b73e6cde (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-12T13:35:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Coelho Santos Isotipo...2014.pdf: 500362 bytes, checksum: 4c5dbf54877a6ef41cbbca30b73e6cde (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil. / Neste estudo foi analisada a distribuição de isotipos de imunoglobulinas IgG1, IgG2 e IgE envolvidas na resposta a Leishmania no soro e a expressão de mRNA para IFN-g e IL-4 in situ no baço de cães naturalmente infectados com L.infantum com diferentes perfis de susceptibilidade ou resistência à doença. A atividade sérica de anticorpos do isotipo IgG1 contra Leishmania tendeu a ser maior nos animais com teste cutêneo da Leishmanina negativo e com parasitismo esplênico (grupo infectado potencialmente susceptível, 0,424±0,401) que nos outros grupos: com teste cutêneo da Leishmanina positivo e ausência de parasitismo esplênico (grupo infectado potencialmente resistente, 0,226±0,114), ou com ambos teste cutêneo da Leishmanina e cultura esplênica positivos (grupo em fase indeterminada da doença, 0,234±0,125) ou com ambos os parâmetros negativos (grupo potencialmente não infectado, 0,159±0,044). Essa diferença não foi, contudo estatisticamente significante (ANOVA, P=0,1450). IgG2 específica anti-Leishmania foi maior (ANOVA P=0,0001) no grupo infectado potencialmente susceptível (1,324±0,322) que nos demais grupos: em fase indeterminada da doença (0,930±0,383, P=0,05), infectado potencialmente resistente (0,916±0,401, P=0,05) e potencialmente não infectado (média 0,299±0,151, P=0,001). Foi também maior nos grupos infectado potencialmente resistente e com infecção em fase indeterminada que no grupo de animais potencialmente não infectado. Não houve diferenças entre os grupos (ANOVA p=0,4) nos resultados séricos de IgE anti-Leishmania; o grupo potencialmente susceptível (0,749±0,485) tendeu a apresentar valores médios mais elevados que os grupos potencialmente resistente (0,518±0,161), ou com doença em fase indeterminada (média 0,591±0,331) ou potencialmente não infectados (0,530±0,121), essas diferenças foram intensificadas pela alta atividade de anticorpos do isotipo IgE anti-Leishmania em um dentre os 11 animais examinados, não sendo estatisticamente significante (ANOVA, P=0,4668). Não foram observadas diferenças na expressão de mRNA para IFN-g e IL-4 no baço de animais não infectados ou naturalmente infectados com L. nfantumi com (a) teste cutêneo da Leishmanina positivo e cultura esplênica negativa ou com (b) teste cutêneo da Leishmanina negativo e parasitismo esplênico. Observou-se uma preponderância de anticorpos da subclasse IgG2 em animais com parasitismo esplênico independente da resposta ao teste cutêneo da Leishmanina. Tais resultados sugerem que a polarização da resposta imune a Leishmania pode variar em diferentes compartimentos como sangue e baço. / We analyzed the distribution immunoglobulin isotypes IgG1, IgG2 and IgE involved in the response to Leishmania and the mRNA expression for IFN-g and IL-4 in situ in the spleen of dogs naturally infected with IgG1 antibody anti-Leishmania serum activity was higher in animals with negative Leishmanin skin test and splenic parasitism (infected and potencially susceptible to VL group, 0,424±0,401) than in other groups: positive Leishmanin skin test and negative splenic parasitism (infected and potentially resistant to VL group, 0,226±0,114), or both positive Leishmanin skin test and slpenic parasitism (infected with undefined susceptibility status group, 0234±0,125) or both negative parameters (non-infected group, 0159±0,044). This difference however was not statistically significant (ANOVA, P=0145). Specific IgG2 anti-Leishmania was higer (ANOVA P=0,0001) in infected and potencially susceptible to VL group (1,324±0,322) than in the other groups: infected with undefined susceptibility status (0,930±0,383, P=0,05), infected and potencially resistant to VL (0,916±0,401, P=0,05) and non infected group (0,299±0,151, P=0,001). Was also higher in infected and potencially resistant to VL and infected with undefined susceptibility status groups than in group of non-infected animals. There was no significant differences (ANOVA p=0,4) between different groups in seric IgE anti-Leishmania, infected and potencially susceptible to VL group (0,749±0,485) showed media higher than in infected and potencially resistant to VL group (0,518±0,161), or in infected with undefined susceptibility status group (0,591±0,331) or non-infected group (0,530±0,121), these differences were intensified for the higher IgE antibody activity in one between 11 examined animals, although this was not statistically significant (ANOVA, P=0,4668). There was no difference in IL-4 or IFN-g mRNA expression in the spleen among groups of animals non-infected or naturally infected with L. infantum, with (a) strong LST and negative spleen culture for the parasite or with (b) negative LST and parasite in the spleen We could observe an interesting preponderance of antibodies from the IgG2 class in animals with splenic parasitism independently of the LST response. Our results suggest that the polarity of immune response to Leishmania may vary in different compartments such as blood and spleen.

Made available in DSpace on 2015-10-16T12:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monique_campos_ini_mest_2014.pdf: 312415 bytes, checksum: 120ed5a2ca6efa0020e1e67a2556df00 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) representa um importante problema de saúde pública no Brasil. Podem acometer os seres humanos e mamíferos silvestres e domésticos, sob a forma de doenças infecciosas crônicas com uma ampla gama de manifestações clínicas. O diagnóstico laboratorial é requerido para confirmar a suspeita clínica. Atualmente as técnicas moleculares baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) têm demonstrado alta especificidade e sensibilidade. Na literatura existem diversos relatos da utilização da PCR com diferentes tipos de material clínico, alvos moleculares, conservação das amostras. Alguns autores consideram amostras congeladas mais vantajosas em relação às amostras fixadas em formol e embebidas em parafina (FFPE). No entanto, muitos pesquisadores defendem a importância das amostras FFPE devido à facilidade de conservação e possibilidade de utilização da PCR em estudos retrospectivos. O objetivo desse projeto foi avaliar a acurácia da qPCR realizada em amostras de pele íntegra congelada e parafinada. Trata-se de um estudo de validação, com 50 amostras de tecido congelado e 50 de tecido parafinado, provenientes de cães da cidade de Belém-PA. De cada animal foram coletados fragmentos de pele íntegra, sendo um dos fragmentos congelado e outro conservado por parafinização. As amostras de pele íntegra analisadas foram coletadas da região escapular utilizando punch de 3 mm. A qPCR foi orientada para alvos do kDNA da espécie Leishmania infantum A extração de DNA de amostras de pele íntegra FFPE foi realizada com o \201Ckit\201D comercial QIAamp® DNA FFPE Tissue (Qiagen, Califórnia, USA) de acordo com as recomendações do fabricante e para as amostras de tecido congelado foi utilizado o \201Ckit\201D IllustraTM Tissue & Cells Genomicprep Mini spin (GE Healthcare), seguindo as recomendações contidas no \201Ckit\201D. Os resultados obtidos demonstraram índices de sensibilidade e especificidade para as amostras FFPE de 63,7% e de 77,8%. Para as amostras congeladas foram de 100% e 45,9%, respectivamente. O índice Kappa obtido foi considerado fraco. A recuperação/concentração de DNA nas amostras FFPE foi baixa, mas os resultados obtidos indicam sensibilidade e especificidade moderados, demonstrando que é possível o diagnóstico da leishmaniose visceral canina com amostras FFPE / Visceral leishmaniasis (VL) is a significant public health problem in Brazil. It affects humans, wild and domestic mammals, in the form of chr onic infectious disease with a wide range of clinical manifestations. Laboratory diagnosis is required to confirm the clinical suspicion of VL. Currently, molecular techniques based on polymerase chain reaction (PCR) have shown high specificity and sensitivity. Some authors consider more advantageous the use of frozen samples in PCR due to the better quality of DNA, in relation to that of fixed in formalin and embedded in paraffin (FFPE) samples. Howeve r, many researchers argue describe the importance of FFPE samples, due to the facility of conservation and the possibility of using PCR in retrospective studies. The aim of this study was to evaluate the accuracy of the quantitative polymerase chain reaction (qPCR) performed on intact frozen and FFPE skin samples. This is a validation study with 50 fr esh tissue samples and 50 FFPE tissues of dogs from Belém-PA. From each animal fragments of intact skin were collected, being one of the frozen fragments and another saved by paraffinization. The samples analyzed were collected from intact skin of the scapular region us ing a 3 mm punch. The qPCR was oriented targets kDNA of Leishmania infantum . The DNA extraction from FFPE samples of normal skin was performed with the QIAamp ® DNA FFPE Tissu e kit (Qiagen, California, USA) "kit" business according to the manufacturer's recomme ndations and for samples of frozen tissue the "kit" used was IllustraTM Tissue & Cells Genomicprep Mini spin (GE Healthcare), according to the manufacturer's recommendations in "kit". The results showed sensitivity and specificity for FFPE samples of 63.7 % and 77.8 %. For frozen samples were 100% and 45.9 %, respectively. The Kappa index obtained was considered weak. The recovery/concentration of DNA in FFPE samples was low, but the results indicate moderate sensitivity and specificity, demonstrating that it is possible th e diagnosis of canine visceral leishmaniasis from FFPE samples.