Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:20Z : No. of bitstreams: 1 000836310.pdf: 967833 bytes, checksum: db8efbe114a6ff1e6b599cb19ceb1798 (MD5) / O abdome agudo é relatado como uma das principais enfermidades que acometem os equinos, constituindo uma das urgências mais frequentes dentro da medicina equina. As compactações são afecções mais comuns de abdome agudo, sendo caracterizadas pela distensão intestinal decorrente da estagnação do bolo fecal no intestino, podendo ocorrer mais comumente no ceco ou cólon. Diversas alterações nos parâmetros hemostáticos de equinos com abdome agudo são descritas, sendo mais comuns estudos em animais com afecções graves. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi, mediante análises seriadas, avaliar e comparar o perfil hemostático em conjunto com o hematológico, de equinos que apresentam compactação de cólon maior submetidos ao tratamento medicamentoso com animais sadios, com o intuito de melhor compreender os transtornos hemostáticos decorrentes do quadro. Para isso, foram realizados exames hematológicos (eritrograma e leucograma) e hemostáticos (plaquetograma, fibrinogênio plasmático, TP e TTPA) em 20 equinos adultos, sendo dez com compactação de cólon maior de tratamento medicamentoso (GD) e dez hígidos (GC). Os animais foram avaliados em quatro momentos (T0-T72), a cada 24 horas. Nos resultados, verificou-se que no eritrograma o aumento do RDW no GD foi associado a um possível aumento no consumo de oxigênio durante a reação inflamatória. O leucograma apresentou alterações compatíveis com a situação de estresse e dor apresentados pelos animais do GD na admissão e com a possível reação inflamatória desencadeada pelas lesões na microvasculatura. A diminuição gradativa apresentada pelo fibrinogênio foi associada a uma possível resolução da obstrução e diminuição da inflamação ou ao consumo da proteína durante o processo hemostático. No TP houve aumento no GD em comparação ao GC nos momentos T0, T24 e T48. No TTPA houve aumento considerável no momento T0 do GD. Nas condições... / The acute abdomen is reported as one of the major diseases that affect horses, constituting one of the most common emergency in equine medicine. The impactions are one of the most common forms of acute abdomen, being characterized by intestinal distention due to the stagnation of fecal mass in the intestine, and can most commonly occur in the cecum or colon. Several changes in hemostatic parameters of horses with acute abdomen are described, more common animal studies with serious diseases. In this context, the objective of this work was by serial analysis, evaluate and compare the hemostatic profile in conjunction with hematologic horses presenting large colon impactation submitted to medication treatment with healthy animals, in order to better understand the hemostatic disorders arising from the framework. For this, blood tests were performed (erythrocyte and leukocyte count) and hemostatic (platelet parameters, plasma fibrinogen, PT and APTT) in 20 adult horses, ten with medical treatment of large colon impactation (GD) and ten healthy (GC). The animals were evaluated in four stages (T0-T72), every 24 hours. In the results, it was found that the erythrocyte increased RDW in GD was associated with a possible increase in oxygen consumption during the inflammatory reaction. The leucocyte count showed changes consistent with the situation of stress and pain presented by the animals of GD on admission and with the possible inflammatory reaction triggered by injury in the microvasculature. The gradual reduction presented by fibrinogen was associated with a possible resolution of the obstruction and decreased inflammation or consumption of protein during the hemostatic process. In PT there was an increase in DG compared to GC at T0, T24 and T48. In the APTT there was considerable increase in DG T0 time. The conditions in which this study was conducted, we conclude that leukocyte changes were compatible with stress caused by obstruction ...

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-07Bitstream added on 2015-01-26T13:30:22Z : No. of bitstreams: 1 000797249_20150903.pdf: 551884 bytes, checksum: 6f249a087df5eb16de47f2472dd301e1 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-09-03T13:12:49Z: 000797249_20150903.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-03T13:13:21Z : No. of bitstreams: 1 000797249.pdf: 3130829 bytes, checksum: b6ad1f9fa1251f1ff059a82f758f9992 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH) oxidases são complexos multienzimáticos associados à membrana celular cuja principal função é catalisar a redução de oxigênio molecular a ânion superóxido (O2 •-). Em leucócitos, este é o mecanismo primário pelo qual estas células produzem espécies reativas de oxigênio (EROs), as quais estão envolvidas tanto nos mecanismos de defesa imune inato, quanto em processos oxidativos deletérios característicos de muitas patologias de cunho crônico inflamatório. Neste trabalho apresentamos os resultados obtidos e proposta de mecanismo de inibição do complexo NADPH oxidase por um conjunto de ésteres alquílicos sintéticos derivados do ácido protocatecúico, sendo este último um ácido fenólico presente em diversas plantas e com destacada capacidade antiradicalar. Nossa hipótese foi de que o aumento da hidrofobicidade provocado pela esterificação do ácido protocatecúico poderia facilitar o seu acesso à membrana celular e assim alterar seus efeitos biológicos. Esta hipótese se confirmou, pois muito mais do que melhorar a sua capacidade anti-radicalar (modelos in vitro), a esterificação provocou uma melhora significativa na capacidade de inibição do complexo NADPH oxidase em leucócitos (modelos ex vivo). Este efeito se propagou às EROs decorrentes de ânion superóxido e produzidas por leucócitos como peróxido de hidrogênio e ácido hipocloroso, sem entretanto alterar a sua capacidade fagocítica. Cabe frisar que não se trata de ação supressora sobre estas EROs, mas sim efetiva inibição de sua formação, o que foi demonstrado pelos diversos controles empregados. A esterificação do ácido protocatecúico também causou efetiva melhora na capacidade deste como inibidor das citocinas TNF-a e IL-10 produzidas por leucócitos mononucleares de sangue periférico. Considerando a baixa toxicidade e baixo custo de síntese desses ésteres, propomos que os mesmos ... / Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidases are multienzymatic complexes associated to the cell membranes whose main function is to catalyze the reduction of molecular oxygen to superoxide (O2 •-). In leukocytes, this is the primary mechanism through which these cells produce reactive oxygen species (ROS), which are involved in both the innate immune defense mechanisms and deleterious oxidative processes, which characterizes many chronic inflammatory diseases. In this thesis we present the results and proposed mechanism of inhibition of the NADPH oxidase complex by a group of synthetic alkyl esters derived from protocatechuic acid, a phenolic acid present in many plants with detached antiradical capacity. Our hypothesis was that the increase in hydrophobicity caused by esterification of protocatechuic acid could facilitate their access to the cell membrane and thereby alter their biological effects. This hypothesis was confirmed, since not only its anti-radical activity was increased (in vitro models), but also caused a significant improvement in their ability to inhibit NADPH oxidase complex in leukocytes (ex vivo models). This effect has spread to ROS derived from superoxide anion and produced by leukocytes such as hydrogen peroxide and hypochlorous acid, without altering their phagocytic capacity. It must be emphasize that the observed cellular effects were not due to simple suppressive action on ROS, but effective inhibition of its formation, which was demonstrated by the various control experiments. The esterification of protocatechuic acid also caused improvement in their capacity as inhibitor of TNF-a and IL-10 production by peripheral blood mononuclear leukocytes. Considering the low toxicity and low cost of synthesis of these esters, we suggest that they could be used in in vivo models as promising anti-inflammatory ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-28Bitstream added on 2014-06-13T18:56:56Z : No. of bitstreams: 1 soares_lk_me_jabo.pdf: 616158 bytes, checksum: 2557b02f58af18928da051514b8e5c20 (MD5) / Na tentativa de minimizar os possíveis efeitos colaterais causados pelos glicocorticóides, a imunoterapia tem sido estudada e aplicada por intermédio da estimulação do sistema imunológico. Dentre as alternativas o Saccharomyces cerevisiae tem sido estudado amplamente quanto aos seus efeitos imunomodulatórios, bem como o emprego da β-glucana tendo em vista sua habilidade de ativar mecanismos de defesa no hospedeiro, estimulando o sistema hematopoiético. Nesse sentido o intuito deste ensaio foi avaliar a capacidade imunomoduladora da β- Glucana e do Saccharomyces cerevisae por meio de parâmetros hematológicos, avaliação da toxicidade pela análise bioquímica e avaliação do perfil eletroforético em Ratus da linhagem Wistar imunossuprimidos após a administração experimental de Dexametasona. Foi possivél constatar o aumento dos leucócitos e estimulação das proteínas de fase aguda nos grupos tratados com as suplementações, de forma benéfica, após indução do quadro clinico de leucopenia induzida / Attempting to minimize possible side effects caused by glicocorticosteroids, immunotherapy has been studied and applied through immune system stimulation. Among alternatives the Sacharomyces cerevisiae has been widely studied regarding its immunomodulatory effects, as well as the use of β-glucane because of its ability to activate defense mechanisms in the host, stimulating the hematopoietic system. Therefore the reason of this test is to evaluate the β –glucane and Sacharomyces cervisiae immunomodulatory capacity through hematologic parameters, toxicity evaluation by biochemical analysis and electrophoretic profile evaluation in Ratus (Wistar bloodline) immunosuppressed after experimental administration of Dexametasona. It has been possible to verify the leucocite growing and high phase protein stimulation in the groups treated with supplementation, beneficially, after inducing clinical condition of leukopenia

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Resumo: Na tentativa de minimizar os possíveis efeitos colaterais causados pelos glicocorticóides, a imunoterapia tem sido estudada e aplicada por intermédio da estimulação do sistema imunológico. Dentre as alternativas o Saccharomyces cerevisiae tem sido estudado amplamente quanto aos seus efeitos imunomodulatórios, bem como o emprego da β-glucana tendo em vista sua habilidade de ativar mecanismos de defesa no hospedeiro, estimulando o sistema hematopoiético. Nesse sentido o intuito deste ensaio foi avaliar a capacidade imunomoduladora da β- Glucana e do Saccharomyces cerevisae por meio de parâmetros hematológicos, avaliação da toxicidade pela análise bioquímica e avaliação do perfil eletroforético em Ratus da linhagem Wistar imunossuprimidos após a administração experimental de Dexametasona. Foi possivél constatar o aumento dos leucócitos e estimulação das proteínas de fase aguda nos grupos tratados com as suplementações, de forma benéfica, após indução do quadro clinico de leucopenia induzida / Abstract: Attempting to minimize possible side effects caused by glicocorticosteroids, immunotherapy has been studied and applied through immune system stimulation. Among alternatives the Sacharomyces cerevisiae has been widely studied regarding its immunomodulatory effects, as well as the use of β-glucane because of its ability to activate defense mechanisms in the host, stimulating the hematopoietic system. Therefore the reason of this test is to evaluate the β -glucane and Sacharomyces cervisiae immunomodulatory capacity through hematologic parameters, toxicity evaluation by biochemical analysis and electrophoretic profile evaluation in Ratus (Wistar bloodline) immunosuppressed after experimental administration of Dexametasona. It has been possible to verify the leucocite growing and high phase protein stimulation in the groups treated with supplementation, beneficially, after inducing clinical condition of leukopenia / Mestre

Orientador: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Coorientador: Deborah Penteado Martins Dias / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Banca: Angélica Trazzi Bento de Morais / Resumo: O abdome agudo é relatado como uma das principais enfermidades que acometem os equinos, constituindo uma das urgências mais frequentes dentro da medicina equina. As compactações são afecções mais comuns de abdome agudo, sendo caracterizadas pela distensão intestinal decorrente da estagnação do bolo fecal no intestino, podendo ocorrer mais comumente no ceco ou cólon. Diversas alterações nos parâmetros hemostáticos de equinos com abdome agudo são descritas, sendo mais comuns estudos em animais com afecções graves. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi, mediante análises seriadas, avaliar e comparar o perfil hemostático em conjunto com o hematológico, de equinos que apresentam compactação de cólon maior submetidos ao tratamento medicamentoso com animais sadios, com o intuito de melhor compreender os transtornos hemostáticos decorrentes do quadro. Para isso, foram realizados exames hematológicos (eritrograma e leucograma) e hemostáticos (plaquetograma, fibrinogênio plasmático, TP e TTPA) em 20 equinos adultos, sendo dez com compactação de cólon maior de tratamento medicamentoso (GD) e dez hígidos (GC). Os animais foram avaliados em quatro momentos (T0-T72), a cada 24 horas. Nos resultados, verificou-se que no eritrograma o aumento do RDW no GD foi associado a um possível aumento no consumo de oxigênio durante a reação inflamatória. O leucograma apresentou alterações compatíveis com a situação de estresse e dor apresentados pelos animais do GD na admissão e com a possível reação inflamatória desencadeada pelas lesões na microvasculatura. A diminuição gradativa apresentada pelo fibrinogênio foi associada a uma possível resolução da obstrução e diminuição da inflamação ou ao consumo da proteína durante o processo hemostático. No TP houve aumento no GD em comparação ao GC nos momentos T0, T24 e T48. No TTPA houve aumento considerável no momento T0 do GD. Nas condições... / Abstract: The acute abdomen is reported as one of the major diseases that affect horses, constituting one of the most common emergency in equine medicine. The impactions are one of the most common forms of acute abdomen, being characterized by intestinal distention due to the stagnation of fecal mass in the intestine, and can most commonly occur in the cecum or colon. Several changes in hemostatic parameters of horses with acute abdomen are described, more common animal studies with serious diseases. In this context, the objective of this work was by serial analysis, evaluate and compare the hemostatic profile in conjunction with hematologic horses presenting large colon impactation submitted to medication treatment with healthy animals, in order to better understand the hemostatic disorders arising from the framework. For this, blood tests were performed (erythrocyte and leukocyte count) and hemostatic (platelet parameters, plasma fibrinogen, PT and APTT) in 20 adult horses, ten with medical treatment of large colon impactation (GD) and ten healthy (GC). The animals were evaluated in four stages (T0-T72), every 24 hours. In the results, it was found that the erythrocyte increased RDW in GD was associated with a possible increase in oxygen consumption during the inflammatory reaction. The leucocyte count showed changes consistent with the situation of stress and pain presented by the animals of GD on admission and with the possible inflammatory reaction triggered by injury in the microvasculature. The gradual reduction presented by fibrinogen was associated with a possible resolution of the obstruction and decreased inflammation or consumption of protein during the hemostatic process. In PT there was an increase in DG compared to GC at T0, T24 and T48. In the APTT there was considerable increase in DG T0 time. The conditions in which this study was conducted, we conclude that leukocyte changes were compatible with stress caused by obstruction ... / Mestre

Orientador : Valdecir Farias Ximenes / Coorientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Patricia Palmeira Daenekas Jorge / Banca: Alexander Batista Duharte / Banca: Maria Luiza Zeraik / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Resumo: Nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH) oxidases são complexos multienzimáticos associados à membrana celular cuja principal função é catalisar a redução de oxigênio molecular a ânion superóxido (O2 •-). Em leucócitos, este é o mecanismo primário pelo qual estas células produzem espécies reativas de oxigênio (EROs), as quais estão envolvidas tanto nos mecanismos de defesa imune inato, quanto em processos oxidativos deletérios característicos de muitas patologias de cunho crônico inflamatório. Neste trabalho apresentamos os resultados obtidos e proposta de mecanismo de inibição do complexo NADPH oxidase por um conjunto de ésteres alquílicos sintéticos derivados do ácido protocatecúico, sendo este último um ácido fenólico presente em diversas plantas e com destacada capacidade antiradicalar. Nossa hipótese foi de que o aumento da hidrofobicidade provocado pela esterificação do ácido protocatecúico poderia facilitar o seu acesso à membrana celular e assim alterar seus efeitos biológicos. Esta hipótese se confirmou, pois muito mais do que melhorar a sua capacidade anti-radicalar (modelos in vitro), a esterificação provocou uma melhora significativa na capacidade de inibição do complexo NADPH oxidase em leucócitos (modelos ex vivo). Este efeito se propagou às EROs decorrentes de ânion superóxido e produzidas por leucócitos como peróxido de hidrogênio e ácido hipocloroso, sem entretanto alterar a sua capacidade fagocítica. Cabe frisar que não se trata de ação supressora sobre estas EROs, mas sim efetiva inibição de sua formação, o que foi demonstrado pelos diversos controles empregados. A esterificação do ácido protocatecúico também causou efetiva melhora na capacidade deste como inibidor das citocinas TNF-a e IL-10 produzidas por leucócitos mononucleares de sangue periférico. Considerando a baixa toxicidade e baixo custo de síntese desses ésteres, propomos que os mesmos ... / Abstract: Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidases are multienzymatic complexes associated to the cell membranes whose main function is to catalyze the reduction of molecular oxygen to superoxide (O2 •-). In leukocytes, this is the primary mechanism through which these cells produce reactive oxygen species (ROS), which are involved in both the innate immune defense mechanisms and deleterious oxidative processes, which characterizes many chronic inflammatory diseases. In this thesis we present the results and proposed mechanism of inhibition of the NADPH oxidase complex by a group of synthetic alkyl esters derived from protocatechuic acid, a phenolic acid present in many plants with detached antiradical capacity. Our hypothesis was that the increase in hydrophobicity caused by esterification of protocatechuic acid could facilitate their access to the cell membrane and thereby alter their biological effects. This hypothesis was confirmed, since not only its anti-radical activity was increased (in vitro models), but also caused a significant improvement in their ability to inhibit NADPH oxidase complex in leukocytes (ex vivo models). This effect has spread to ROS derived from superoxide anion and produced by leukocytes such as hydrogen peroxide and hypochlorous acid, without altering their phagocytic capacity. It must be emphasize that the observed cellular effects were not due to simple suppressive action on ROS, but effective inhibition of its formation, which was demonstrated by the various control experiments. The esterification of protocatechuic acid also caused improvement in their capacity as inhibitor of TNF-a and IL-10 production by peripheral blood mononuclear leukocytes. Considering the low toxicity and low cost of synthesis of these esters, we suggest that they could be used in in vivo models as promising anti-inflammatory ... / Doutor

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Coorientador: Paula Alessandra Di Filippo / Banca: Antônio Sérgio Ferraudo / Banca: André Escobar / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Rafael Resende Faleiros / Resumo: As proteínas de fase aguda são glicoproteínas sintetizadas pelos hepatócitos e surgem precocemente na circulação sanguínea durante processos inflamatórios. Assim, o estudo objetivou identificar, diferenciar, quantificar, avaliar e comparar as proteínas séricas de fase aguda em equinos com cólica de ocorrência natural e naqueles submetidos à obstrução intestinal experimental e correlacioná-las com o leucograma destes animais. Utilizaram-se 27 equinos adultos, 12 animais atendidos junto ao Hospital Veterinário "Governador Laudo Natel" (FCAV/Unesp) no período de julho de 2010 à julho de 2013 para tratamento de abdômen agudo, sobreviventes ou não, e 15 animais submetidos a obstrução intestinal experimental de intestino delgado ou grosso. Foram colhidas amostras de sangue total com anticoagulante, para realização do leucograma, e sem anticoagulante para realização do eletroforetograma em SDS-PAGE imediatamente antes da laparotomia (M0), após o procedimento cirúrgico (M1) e, diariamente, até o sétimo dia pós-operatório, com exceção do sexto dia (M2, M3, M4, M5, M6 e M7). Para análise dos dados utilizou-se o método estatístico multivariado com análise de fatores. Os equinos com cólica natural apresentaram padrão de resposta inflamatória mais intensa que os equinos submetidos à obstrução experimental. Os equinos submetidos à obstrução experimental apresentaram, ainda, resposta inflamatória ao modelo de obstrução instituído. As proteínas de fase aguda tiveram maior participação na variabilidade da resposta inflamatória que o leucograma e, somente quando avaliou-se a influência do tempo em cada grupo, observou-se correlação entre as proteínas de fase aguda e o leucograma. As proteínas de fase aguda alfa-1 glicoproteína ácida, haptoglobina e ceruloplasmina mostraram-se eficientes marcadores da resposta inflamatória e suas alterações podem ser utilizadas como indicadores prognósticos e do ... / Abstract: The acute phase proteins are glycoproteins synthesized by hepatocytes and appear early in the bloodstream during inflammatory processes. The study aimed to identify, differentiate, measure, evaluate and compare the acute phase serum proteins in horses with naturally occurring colics and those undergoing experimental intestinal obstruction and correlate them with the leukon count in these animals. From the 27 adult horses studied 12 were treated in the Veterinary Hospital "Governor Laudo Natel" (FCAV / UNESP) from July 2010 to July 2013 for acute abdomen, survivors or not, and 15 animals were subjected to experimental small or large intestinal obstruction. Samples were obtained from whole blood with anticoagulant, to perform the WBC, and without anticoagulant to perform the SDS-PAGE electrophoretogram immediately before laparotomy (MO), after surgery (M1), and daily until the seventh day after surgery, except the sixth day (M2, M3, M4, M5, M6 and M7). For data analysis the multivariate statistical method with exploratory factor analysis was used. The horses with naturally occurringg colic showed intense inflammatory patterns that horses undergoing experimental intestinal obstruction. The horses undergoing experimental intestinal obstruction had also inflammatory obstruction established the model. The acute phase proteins had greater participation in the variability of the inflammatory response than the WBC and only when the influence of time in each group was evaluated there was a correlation between acute phase proteins and WBC. The acute phase protein alpha 1-acid glycoprotein, haptoglobin and ceruloplasmin were effective markers of the inflammatory response and its changes can be used as prognostic and time course indicators of acute abdomen in horses / Doutor

A Doença de Pompe (DP), também conhecida como Doença de Armazenamento do Gligogênio Tipo II, é uma doença lisossômica de depósito (DLD) causada pela deficiência da enzima α-glicosidase ácida (GAA). A GAA catalisa a clivagem das ligações glicosídicas α-1,4 e α-1,6 da molécula de glicogênio, e sua deficiência gera um acúmulo intralisossomal de glicogênio em vários tecidos. Esse acúmulo é expressivo no tecido muscular, e com isso surge o aparecimento dos sintomas clínicos. Clinicamente, a DP manifesta-se através de um amplo espectro de fenótipos, que apresentam em comum a ocorrência de fraqueza muscular progressiva. O diagnóstico da DP é realizado através da medida da atividade enzimática em células sanguíneas e tecidos ou por análise da mutação gênica. O padrão-ouro para o diagnóstico é a medida da atividade da GAA em amostras de fibroblastos e, embora este tipo de diagnóstico seja definitivo, amostras de sangue também estão sendo utilizadas. A medida da atividade das enzimas lisossomais vem sendo atualmente realizada em amostras de sangue impregnado em papel filtro (SPF) como método de triagem neonatal e de populações de alto risco. Sabendo que a Terapia de Reposição Enzimática para DP já está disponível e melhora a sobrevida dos pacientes, o diagnóstico precoce da DP é essencial, deve ser adequado e de fácil acesso para que o tratamento inicie cedo e seja mais eficaz. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar algumas caracteristicas bioquímicas e cinéticas da enzima em amostras de leucócitos totais e SPF de modo a observar as diferenças quanto ao seu comportamento, entre controles e pacientes, estabelecer valores de coeficientes de variação para as técnicas e observar o efeito do uso de diferentes concentrações do inibidor acarbose. A GAA de pacientes com DP mostrou um comportamento diferente do observado em controles saudáveis em termos dos parâmetros analisados (Km, Vmax, estabilidade térmica), em leucócitos totais. Em SPF, GAA mostrou um comportamento diferente do observado nos controles saudáveis em termos de pH ótimo e estabilidade térmica; e valores de Km e Vmax para GAA foram estabelecidos somente em SPF de controles saudáveis. O uso do inibidor acarbose é essencial para a análise enzimática da GAA em amostras de leucócitos totais e SPF por inibir seletivamente a isoenzima MGA e assim, garantir o diagnóstico da DP. Os valores de coeficiente de variação estabelecidos para as técnicas em leucócitos e SPF estão dentro do aceitável e expressam boa precisão e reprodutibilidade das técnicas. A técnica fluorimétrica usando o substrato 4- Metilumbeliferil-α-D-glicopiranosideo em leucócitos é confiável podendo ser utilizada para diagnóstico definitivo e padrão da Doença de Pompe; em SPF, pode contribuir para melhorar a triagem desta doença, diferenciando pacientes com PD de indivíduos normais, tornando o processo de investigação e diagnóstico mais preciso e confiável. / Pompe disease (PD), also known as Glycogen Storage Disease Type II, is a lysosomal storage disorder (LSD) caused by the deficiency of the acid α-glucosidase enzyme (GAA). GAA catalyzes the cleavage of the glycosidic bonds α-1,4 and α-1,6 of the glycogen molecule, and when GAA activity is deficient glycogen accumulates intralysosomally in several tissues. This accumulation is significant in muscle tissue, which leads to the onset of clinical symptoms. Clinically, PD is manifested through a wide escpectro phenotypes, which have in common the occurrence of progressive muscle weakness. PD is diagnosed by measuring GAA activity in blood cells and tissues or by gene mutation analysis. The gold standard for diagnosis is the measurement of GAA activity in fibroblast samples and although this diagnosis is definitive, blood samples are also being used. Lysosomal enzyme activity currently has been measured in dried blood spot (DBS) samples as a method for screening newborns and high-risk populations. Since enzyme replacement therapy is already available for PD and improves patient life expectancy, the early PD diagnosis is crucial and must be appropriate and easily available so that the treatment can be initiated early and be more effective. Thus, this study aimed to evaluate some biochemical and kinetic characteristics of the enzyme in samples of total leukocytes and DBS in order to observe the differences in behavior between controls and patients, establish values of coefficients of variation for the techniques and observe the effect of using different concentrations of inhibitor acarbose. GAA from PD patients showed a different behavior from that observed in healthy controls in terms of the analyzed parameters (Km, Vmax, thermal stability) in total leukocytes. In DBS, GAA showed a different behavior from that observed in healthy controls in terms of optimum pH and thermal stability. Km and Vmax values for GAA were established only in DBS healthy controls. The use of acarbose inhibitor is essential for enzymatic analysis of GAA in total leukocyte and DBS samples for selectively inhibiting MGA isozyme and thereby secures the diagnosis of PD. The coefficients of variation values established for techniques in leukocytes and DBS are acceptable, precise, and can be appropriately reproduced. The fluorimetric technique using 4- methylumbelliferyl-α-D-glucopyranoside substrate in leukocytes is reliable and can be used for definitive diagnosis of Pompe disease; in DBS, can help to improve the screening of this disease, differentiating PD patients from normal individuals, making the research process and more accurate and reliable diagnosis.

O presente estudo teve por objetivo avaliar quantitativa e qualitativamente os fagócitos presentes no leite de búfalas (Bubalus bubalis) hígidas criadas nos Estado de São Paulo. Para tal, o experimento foi subdividido em três etapas, designadas capítulos, conforme os objetivos: (1) determinar e estudar a celularidade do leite de búfalas hígidas; (2) estabelecer metodologia adequada para a recuperação das células somáticas do leite de búfalas, possibilitando a avaliação in vitro; (3) descrever e avaliar as provas de atividade fagocítica das células presentes no leite de búfalas hígidas, através de testes de mensuração direta (espraiamento e fagocitose de partículas de Zymosan) e por testes indiretos, que mensuram os metabólitos de oxigênio gerados na “explosão respiratória”. Foram colhidas 132 amostras de leite de 35 búfalas hígidas (sem alterações ao exame físico da glândula mamária, bem como resultado da prova de CMT e exame microbiológico negativos). Após as avaliações do CMT, da CCS, da contagem diferencial, da viabilidade celular, do exame bacteriológico, dos testes de fagocitose, de espraiamento e da liberação de peróxido de hidrogênio, concluiu-se que: (1) os resultados das contagens de células somáticas, microscópica e automática, foram semelhantes, mas a predominância celular diferiu conforme a técnica empregada, sendo identificadas percentualmente mais células mononucleares na lâmina de suspensão celular citocentrifugada, e mais polimorfonucleares no leite submetido à técnica de Prescott e Breed; o leite diluído e citocentrifugado permitiu melhor avaliação da morfologia celular sendo identificados: 61,1% de monócitos e macrófagos; 32,9% de neutrófilos; 5,3% de linfócitos e 0,7% de eosinófilos; os fagócitos mononucleares apresentaram uma acentuada plasticidade na estrutura, com variados padrões morfológicos; (2) a baixa celularidade do leite necessitou maiores volumes da amostra mas, o aumento do volume da amostra aumenta a concentração celular obtida, mas não de forma ilimitada pois pode passar a comprometer a viabilidade das mesmas pelo excesso de manipulação e tempo exigidos pelas amostras mais volumosas; não foi necessária a elicitação, sendo possível a recuperação de 2 x 106 células viáveis/mL de leite de búfalas hígidas com 500 mL de leite, no mínimo; (3) os macrófagos aderidos espraiaram significativamente, além de apresentarem correlação com outro marcador de ativação celular, no caso, a liberação de peróxido de hidrogênio; mais da metade dos macrófagos aderidos fagocitaram partículas de Zymosan; os fagócitos mantêm sua capacidade de liberar peróxido de hidrogênio, espontaneamente ou não, em grau máximo, com uma significativa variação entre amostras / The aim of this study was to make a quantitative and a qualitative evaluation of phagocytes from healthy buffaloes (Bubalus bubalis) milk bred in Sao Paulo state. For this purpose, the experiment was divided in three parts, called chapters, as specific objectives: (1) establish and study the cellularity of healthy buffaloes milk; (2) establish an adequate method for the recuperation of somatic cells from buffaloes milk, making possible an in vitro evaluation; (3) standardize and evaluate the phagocytic activity tests of cells from healthy buffaloes milk, through direct measurement methods (spreading and phagocytosis of Zymosan particles) and indirect methods, which measure the oxygen metabolites from the respiratory burst. Milk samples (n=132) of healthy 35 buffaloes (without alterations on the physical examination of the mammary gland, and also negative results on CMT and microbiologic exams) were obtained. After the evaluations of CMT, SCC, differential cells count, cellular viability, bacteriologic exam, phagocytic tests, spreading and hydrogen peroxide liberation, the conclusions were: (1) the results of somatic cells count, microscopic and automatic, were similar but the cellular predominance differed with the utilized method, being percentually identified more mononuclear cells on slide of cytocentrifugation cellular suspension and more polymorphonuclear on milk submitted to the Prescott and Breed methods; the diluted and cytology by cytocentrifugation of milk permitted a best evaluation of the cellular morphology, being identified: 61.1% of monocytes and macrophages; 32.9% of neutrophils; 5.3% of lymphocytes and 0.7% of eosinophils; mononuclear phagocytes showed a high plasticity on structure with many morphological patterns; (2) a lower cellularity on milk requires higher quantities of the samples but an increase on sample volume increases cellular concentrations obtained, not on an unlimited way because it can compromise the cells viability with the excess of manipulation and time required by the biggest samples; it was not necessary the elicitation, being possible the recuperation of 2 x 106 viable cells/mL on milk of healthy buffaloes with 500 mL of milk minimum (3) adherent macrophages spreaded and were correlated with hydrogen peroxide release; majority of adherent macrophages phagocyted Zymosan particles; milk phagocytes showered a high oxidative metabolism, undependably of PMA stimulation, but with a great individual variation.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1561_1.pdf: 1595927 bytes, checksum: 1617d45005e50c47b4fb2baeb931d6ec (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cissus sicyoides L. tem origem na República Dominicana e popularmente é utilizada em diversas doenças, como a epilepsia, derrame cerebral, bem como, em abscessos e no tratamento do diabetes mellitus do tipo 2 . Esta espécie apresenta atividades antiinflamatórias e anti-reumáticas, antiepiléptico, antihipertensivo, antitérmico e antidiabético. O objetivo desta pesquisa foi estudar a atividade citotóxica e antineoplásica nos tumores experimentais Sarcoma 180 e Carcinoma de Ehrlich do extrato hidroalcoólico de Cissus sicyoides, como também avaliar a ação adjuvante do imunmodulador imunoglucan® (glucana -1,3-D-glicopiranose), produzido pelo laboratório Hebron. O extrato hidoalcoólico de Cissus sicyoides não demonstrou atividade citotóxica, mas apresentou uma inibição de 48,7 e 62% no crescimento tumoral para o Sarcoma -180 e de 69 e 84,4% para o Carcinoma de Ehrlich. nas doses de 300 e 600mg/kg respectivamente. Quando feito o uso do Imunoglucan® não foi observada melhora da atividade antitumoral. Estudos hematológicos indicaram que o extrato apresentou um intenso efeito quimiotático nas 24 horas, em relação ao numero de leucócitos na cavidade peritoneal dos animais. Também foi verificado um aumento na quantidade de linfócitos devido à presença do extrato nas 24 horas. Estes resultados demonstraram o potencial antitumoral do extrato hidroalcoólico das folhas de Cissus sicyoides através estimulação/ atração de células linfóides para o local estimulado sugerindo que a atividade antitumoral pode está intimamente relacionada com a ativação da linhagem linfóide