A Doença de Pompe (DP), também conhecida como Doença de Armazenamento do Gligogênio Tipo II, é uma doença lisossômica de depósito (DLD) causada pela deficiência da enzima α-glicosidase ácida (GAA). A GAA catalisa a clivagem das ligações glicosídicas α-1,4 e α-1,6 da molécula de glicogênio, e sua deficiência gera um acúmulo intralisossomal de glicogênio em vários tecidos. Esse acúmulo é expressivo no tecido muscular, e com isso surge o aparecimento dos sintomas clínicos. Clinicamente, a DP manifesta-se através de um amplo espectro de fenótipos, que apresentam em comum a ocorrência de fraqueza muscular progressiva. O diagnóstico da DP é realizado através da medida da atividade enzimática em células sanguíneas e tecidos ou por análise da mutação gênica. O padrão-ouro para o diagnóstico é a medida da atividade da GAA em amostras de fibroblastos e, embora este tipo de diagnóstico seja definitivo, amostras de sangue também estão sendo utilizadas. A medida da atividade das enzimas lisossomais vem sendo atualmente realizada em amostras de sangue impregnado em papel filtro (SPF) como método de triagem neonatal e de populações de alto risco. Sabendo que a Terapia de Reposição Enzimática para DP já está disponível e melhora a sobrevida dos pacientes, o diagnóstico precoce da DP é essencial, deve ser adequado e de fácil acesso para que o tratamento inicie cedo e seja mais eficaz. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar algumas caracteristicas bioquímicas e cinéticas da enzima em amostras de leucócitos totais e SPF de modo a observar as diferenças quanto ao seu comportamento, entre controles e pacientes, estabelecer valores de coeficientes de variação para as técnicas e observar o efeito do uso de diferentes concentrações do inibidor acarbose. A GAA de pacientes com DP mostrou um comportamento diferente do observado em controles saudáveis em termos dos parâmetros analisados (Km, Vmax, estabilidade térmica), em leucócitos totais. Em SPF, GAA mostrou um comportamento diferente do observado nos controles saudáveis em termos de pH ótimo e estabilidade térmica; e valores de Km e Vmax para GAA foram estabelecidos somente em SPF de controles saudáveis. O uso do inibidor acarbose é essencial para a análise enzimática da GAA em amostras de leucócitos totais e SPF por inibir seletivamente a isoenzima MGA e assim, garantir o diagnóstico da DP. Os valores de coeficiente de variação estabelecidos para as técnicas em leucócitos e SPF estão dentro do aceitável e expressam boa precisão e reprodutibilidade das técnicas. A técnica fluorimétrica usando o substrato 4- Metilumbeliferil-α-D-glicopiranosideo em leucócitos é confiável podendo ser utilizada para diagnóstico definitivo e padrão da Doença de Pompe; em SPF, pode contribuir para melhorar a triagem desta doença, diferenciando pacientes com PD de indivíduos normais, tornando o processo de investigação e diagnóstico mais preciso e confiável. / Pompe disease (PD), also known as Glycogen Storage Disease Type II, is a lysosomal storage disorder (LSD) caused by the deficiency of the acid α-glucosidase enzyme (GAA). GAA catalyzes the cleavage of the glycosidic bonds α-1,4 and α-1,6 of the glycogen molecule, and when GAA activity is deficient glycogen accumulates intralysosomally in several tissues. This accumulation is significant in muscle tissue, which leads to the onset of clinical symptoms. Clinically, PD is manifested through a wide escpectro phenotypes, which have in common the occurrence of progressive muscle weakness. PD is diagnosed by measuring GAA activity in blood cells and tissues or by gene mutation analysis. The gold standard for diagnosis is the measurement of GAA activity in fibroblast samples and although this diagnosis is definitive, blood samples are also being used. Lysosomal enzyme activity currently has been measured in dried blood spot (DBS) samples as a method for screening newborns and high-risk populations. Since enzyme replacement therapy is already available for PD and improves patient life expectancy, the early PD diagnosis is crucial and must be appropriate and easily available so that the treatment can be initiated early and be more effective. Thus, this study aimed to evaluate some biochemical and kinetic characteristics of the enzyme in samples of total leukocytes and DBS in order to observe the differences in behavior between controls and patients, establish values of coefficients of variation for the techniques and observe the effect of using different concentrations of inhibitor acarbose. GAA from PD patients showed a different behavior from that observed in healthy controls in terms of the analyzed parameters (Km, Vmax, thermal stability) in total leukocytes. In DBS, GAA showed a different behavior from that observed in healthy controls in terms of optimum pH and thermal stability. Km and Vmax values for GAA were established only in DBS healthy controls. The use of acarbose inhibitor is essential for enzymatic analysis of GAA in total leukocyte and DBS samples for selectively inhibiting MGA isozyme and thereby secures the diagnosis of PD. The coefficients of variation values established for techniques in leukocytes and DBS are acceptable, precise, and can be appropriately reproduced. The fluorimetric technique using 4- methylumbelliferyl-α-D-glucopyranoside substrate in leukocytes is reliable and can be used for definitive diagnosis of Pompe disease; in DBS, can help to improve the screening of this disease, differentiating PD patients from normal individuals, making the research process and more accurate and reliable diagnosis.

A Virola surinamensis, também conhecida como ucuúba branca, é muito difundida na floresta amazônica e, popularmente, usada no tratamento de erisipelas, cólicas e dispepsias. Estudos experimentais demonstraram atividades anti-parasitárias de diferentes componentes da planta contra Schistosoma mansoni, Plasmodium falciparum, Leishmania donovani e Trypanosoma cruzi. Com a possibilidade de utilização farmacológica da planta evidencia-se a necessidade de avaliar os possíveis efeitos sobre o sistema hematopoético. O presente trabalho teve por objetivo verificar os efeitos da grandisina, uma lignana extraída da Virola surinamensis, sobre o sistema hematopoético, em camundongos. Para tanto, foram avaliados os seguintes parâmetros: números globais de eritrócitos, leucócitos e plaquetas no sangue periférico, celularidade na medula óssea e baço (utilizando câmara de Neubauer); contagem diferencial de leucócitos no sangue periférico e medula óssea (em extensões coradas com May-Grünwald/ Giemsa); caracterização da população de linfócitos da medula óssea e baço (por imunocitoquímica). A grandisina, em dose única de 100?g/g de peso corpóreo induziu, no sangue periférico, diminuição significativa do número de leucócitos totais, linfócitos e neutrófilos, após 7 e 14 dias, e redução significativa do número de monócitos, após 14 dias do tratamento. Houve uma tendência de aumento do número de células nucleadas da medula óssea após 7 dias da administração da substância, com aumento significativo após 14 dias do tratamento, mas não ocorreu nenhuma alteração na celularidade do baço. Foi observado aumento das células da linhagem linfocítica e monocítica em evolução, na medula óssea, após 7 e 14 dias do tratamento, enquanto no sangue periférico, o número de linfócitos e monócitos continuaram reduzidos. A grandisina, na dose de 100?g/g de peso corpóreo, por cinco dias, provocou uma redução no número de leucócitos, linfócitos, monócitos e neutrófilos no sangue periférico após 7 dias do tratamento. Houve uma tendência de redução do número de leucócitos, linfócitos e monócitos, com redução significativa do número de neutrófilos, após 14 dias da administração da substância. O número de células da medula óssea reduziu, após 7 e 14 dias do tratamento. Quanto a celularidade do baço, não foi observado qualquer alteração. Ocorreu ainda uma redução no número de células mononucleares e polimorfonucleares em evolução na medula óssea, após 7 e 14 dias do tratamento. No experimento de dose única, a imunohistoquímica dos sedimentos medulares mostrou uma tendência de diminuição do número de Linfócitos T totais, Linfócitos T imaturos e Linfócitos B, após 14 dias do tratamento. No experimento de dose seriada houve redução destas populações de linfócitos, após 7 e 14 dias do tratamento, somente na medula óssea. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que a dose de 100?g/g de peso corpóreo, tanto em dose única como seriada, causa importantes alterações nas células sanguíneas indicando que, para o uso terapêutico, doses inferiores a estas devem ser avaliadas. / Virola surinamensis, also known as ucuuba branca, is widespread in the Amazon forest and, popularly, used in the treatment of erysipelas, colic and dyspepsia. Experimental studies have shown antiparasitic activities of different components of the plant against Schistosoma mansoni, Plasmodium falciparum, Leishmania donovani and Trypanosoma cruzi. The potential pharmacological use of the plant points towards the need to evaluate the possible effects on the hematopoietic system. The present work aims to verify the effects of grandisin, a lignan extracted from Virola surinamensis, on the hematopoietic system of mice. The following parameters were evaluated: the number of erythrocytes, leukocytes and platelets on peripheral blood, cell counts on bone marrow and spleen (with Neubauer chamber); differential leukocyte count on peripheral blood and bone marrow (on smears stained with May-Grünwald/Giemsa); the characterization of lymphocytes on bone marrow and spleen (by immunocytochemistry). The grandisin in a single dose of 100?g/g of body weight induced, on peripheral blood, significant decrease in the total count of leukocytes, lymphocytes and neutrophils, after 7 and 14 days and a significant decrease in the number of monocytes, after 14 days of treatment. A tendency in the increase of nucleated bone marrow cells occurred after 7 days of administration of the substance, with a significant increase after 14 days of treatment, but no alteration in the spleen cells occurred. An increase in the cells of lymphocytic and monocytic lineages was observed in evolution, in bone marrow after 7 and 14 days of treatment whereas in peripheral blood the number of lymphocytes and monocytes maintained low. Grandisin, administered during five consecutive days with a daily dose of 100?g/g of body weight, caused a decrease in the number of leukocytes, lymphocytes, monocytes and neutrophils in peripheral blood after 7 days of treatment. A tendency of decrease in the number of leukocytes, lymphocytes and monocytes occurred with a significant decrease in the number of neutrophils, after 14 days of administration of the substance. The number of bone marrow cells decreased after 7 and 14 days of treatment. For the spleen cells no alterations were observed. A decrease in the number of mononuclear and polimorfonuclear cells in evolution on bone marrow after 7 and 14 days of treatment was observed. In a single dose experiment, the immunocytochemistry of medullar sediments showed a tendency of decrease in the total number of T lymphocytes, T immature lymphocytes and B lymphocytes after 14 days of treatment. The serial dose caused a decrease in the population of lymphocytes after 7 and 14 days of treatment in bone marrow. The results obtained in this study demonstrated that the dose of 100?g/g of body weight, either in single or in serial doses, cause important alterations on blood cells indicating that for therapeutic use inferior doses must be evaluated.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-17Bitstream added on 2015-04-09T12:48:27Z : No. of bitstreams: 1 000814326.pdf: 359070 bytes, checksum: 6c4f05f013b9c86649717ad6dd9be440 (MD5) / As proteínas de fase aguda são glicoproteínas sintetizadas pelos hepatócitos e surgem precocemente na circulação sanguínea durante processos inflamatórios. Assim, o estudo objetivou identificar, diferenciar, quantificar, avaliar e comparar as proteínas séricas de fase aguda em equinos com cólica de ocorrência natural e naqueles submetidos à obstrução intestinal experimental e correlacioná-las com o leucograma destes animais. Utilizaram-se 27 equinos adultos, 12 animais atendidos junto ao Hospital Veterinário Governador Laudo Natel (FCAV/Unesp) no período de julho de 2010 à julho de 2013 para tratamento de abdômen agudo, sobreviventes ou não, e 15 animais submetidos a obstrução intestinal experimental de intestino delgado ou grosso. Foram colhidas amostras de sangue total com anticoagulante, para realização do leucograma, e sem anticoagulante para realização do eletroforetograma em SDS-PAGE imediatamente antes da laparotomia (M0), após o procedimento cirúrgico (M1) e, diariamente, até o sétimo dia pós-operatório, com exceção do sexto dia (M2, M3, M4, M5, M6 e M7). Para análise dos dados utilizou-se o método estatístico multivariado com análise de fatores. Os equinos com cólica natural apresentaram padrão de resposta inflamatória mais intensa que os equinos submetidos à obstrução experimental. Os equinos submetidos à obstrução experimental apresentaram, ainda, resposta inflamatória ao modelo de obstrução instituído. As proteínas de fase aguda tiveram maior participação na variabilidade da resposta inflamatória que o leucograma e, somente quando avaliou-se a influência do tempo em cada grupo, observou-se correlação entre as proteínas de fase aguda e o leucograma. As proteínas de fase aguda alfa-1 glicoproteína ácida, haptoglobina e ceruloplasmina mostraram-se eficientes marcadores da resposta inflamatória e suas alterações podem ser utilizadas como indicadores prognósticos e do ... / The acute phase proteins are glycoproteins synthesized by hepatocytes and appear early in the bloodstream during inflammatory processes. The study aimed to identify, differentiate, measure, evaluate and compare the acute phase serum proteins in horses with naturally occurring colics and those undergoing experimental intestinal obstruction and correlate them with the leukon count in these animals. From the 27 adult horses studied 12 were treated in the Veterinary Hospital Governor Laudo Natel (FCAV / UNESP) from July 2010 to July 2013 for acute abdomen, survivors or not, and 15 animals were subjected to experimental small or large intestinal obstruction. Samples were obtained from whole blood with anticoagulant, to perform the WBC, and without anticoagulant to perform the SDS-PAGE electrophoretogram immediately before laparotomy (MO), after surgery (M1), and daily until the seventh day after surgery, except the sixth day (M2, M3, M4, M5, M6 and M7). For data analysis the multivariate statistical method with exploratory factor analysis was used. The horses with naturally occurringg colic showed intense inflammatory patterns that horses undergoing experimental intestinal obstruction. The horses undergoing experimental intestinal obstruction had also inflammatory obstruction established the model. The acute phase proteins had greater participation in the variability of the inflammatory response than the WBC and only when the influence of time in each group was evaluated there was a correlation between acute phase proteins and WBC. The acute phase protein alpha 1-acid glycoprotein, haptoglobin and ceruloplasmin were effective markers of the inflammatory response and its changes can be used as prognostic and time course indicators of acute abdomen in horses

Resumo:Em humanos, a imunossupressão que ocorre em pacientes urêmicos está associada com a disfunção dos neutrófilos causada pelas toxinas urêmicas. O p-cresol se acumula no sangue de pacientes com insuficiência renal crônica (IRC) promovendo a inibição do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. O presente trabalho teve como objetivo mensurar as concentrações plasmáticas de p-cresol em cães hígidos e com IRC e testar a hipótese de que o p-cresol livre causa disfunção neutrofílica. Para tal, foi quantificada a concentração plasmática de p-cresol por cromatografia de fase líquida (HPLC) em cães hígidos e com IRC no estágio IV. Também foi avaliado in vitro o efeito específico do p-cresol sobre o metabolismo oxidativo e a taxa de apoptose de neutrófilos de cães hígidos, considerando-se a maior concentração plasmática desta toxina observada in vivo em cães com IRC. Neutrófilos isolados de 20 cães saudáveis foram incubadas em meio de RPMI puro ou enriquecido com p-cresol e com plasma de cães com IRC. O metabolismo oxidativo dos neutrófilos foi avaliado por citometria de fluxo capilar utilizando as sondas hidroetidina e 2′,7′- diacetato de diclorofluoresceína com ou sem estímulos de acetato miristato de forbol e n-formil-metionil-leucilfenilalanina. A apoptose e a viabilidade dos neutrófilos foi quantificada em citômetro de fluxo capilar utilizando sistema Anexina V-PE, com ou sem estímulo de camptotecina. Cães com IRC apresentaram in vivo o quadro de estresse oxidativo e aumento do p-cresol plasmático. A maior concentração do p-cresol causou disfunção neutrofílica in vitro. Conclui-se que p-cresol pode estar envolvido com quadro de estresse oxidativo in vivo e que sua alta concentração diminua a viabilidade e leve a uma redução da produção de espécies reativas de oxigênio / Abstract:In humans, the immunosuppression observed in uremic patients is associated with the neutrophil dysfunction caused by uremic toxins. P-cresol accumulates in the blood of patients with chronic renal failure (CRF) promoting the inhibition of neutrophil oxidative metabolism. This study aimed to measure the plasma concentrations of p-cresol in dogs with CRF and test the hypothesis that free p-cresol causes neutrophil dysfunction. To this end, plasma concentration of p-cresol was determined using high pressure liquid chromatography (HPLC) in dogs presenting stage IV of CRF. The in vitro specific effect of p-cresol on the oxidative metabolism and apoptosis rate of neutrophils from healthy dogs was also evaluated, considering the highest plasma concentration of this toxin observed on the in vivo measurement of dogs with CRF. Isolated neutrophils from 20 healthy dogs were incubated in RPMI medium alone, supplemented with p-cresol or plasma from dogs with CRF. Neutrophil oxidative metabolism was assessed by capillary flow cytometry using the probes hydroethidine and 2',7'- dichlorofluorescein diacetate with or without stimulus with phorbol myristate acetate and N-formyl-methionyl-leucylphenylalanine. Apoptosis and viability of neutrophils were quantified also in capillary flow cytometry using Annexin V-PE system with or without stimulus with camptothecin. Dogs with CRF presented oxidative stress and increased plasma levels of p-cresol, the higher concentration of p-cresol caused in vitro neutrophil dysfunction. It can be concluded that p-cresol may be involved with in vivo oxidative stress that its higher concentration decreases the viability and lead to a reduced production of reactive oxygen species / Orientador:Paulo Cesar Ciarlini / Banca:Wagner Luis Ferreira / Banca:Alvaro José dos Santos Neto / Mestre

Resumo:Recentemente, foi relatado que na insuficiência renal crônica (IRC) canina ocorre estresse oxidativo e que a disfunção dos neutrófilos está associada ao aumento da apoptose. Dentre as muitas toxinas urêmicas que se concentram na IRC, há evidências em humanos de que as guanidinas inibem o metabolismo oxidativo dos neutrófilos, afetando a sua função bactericida. Uma revisão sistemática foi realizada sobre a relação entre os compostos guanidínicos e os neutrófilos em cães. Verificou-se que a literatura, sobre este tema, é escassa e contraditória, de modo que, foi investigado no presente estudo a relação entre a concentração de guanidina plasmática, a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos de cães com IRC. Aditivamente, foi investigado "in vitro" o efeito isolado do composto ácido guanidinoacético (AGA) sobre a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos de cães sadios. Foi possível comprovar que o grande aumento da guanidina plasmática observado em cães com IRC não está associado à alteração do metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos. O AGA inibiu o metabolismo oxidativo de neutrófilos de cães sadios sem afetar a viabilidade dessas células / Abstract:It has been recently reported that in canine chronic renal failure (CRF) there occurs oxidative stress, and that neutrophil dysfunction is associated with the increase of apoptosis. Among the many uremic toxins found in higher concentrations due to CRF, there is evidence - in humans - that guanidines inhibit the oxidative metabolism of neutrophils, affecting their bactericidal function. In this study, a systematic review of the relationship between guanidine compounds and neutrophils in dogs was undertaken. It was found that the literature on this subject is scarce and conflicting, which prompted this investigation of the relationship between the plasmatic concentration of guanidine, the production of superoxide, and the apoptosis of neutrophils in dogs with CRF. Morever, the effect of the isolated compound guanidine acetic acid (GAA) on the production of superoxide and on neutrophil apoptosis in healthy dogs was investigated in vitro. It was possible to verify that the large increase of plasmatic guanidine observed in dogs with CRF is not associated with the altered oxidative metabolism and the apoptosis of the neutrophils. The GAA inhibited the oxidative metabolism of the neutrophils in healthy dogs without affecting the viability of these cells / Orientador:Paulo Cesar Ciarlini / Banca:Fabiano Antonio Cadioli / Banca:Aureo Evangelista Santana / Mestre

VANDERLEI, E. S. O. Atividades antinociceptiva e antiinflamatória da lectina da alga marinha verde Caulerpa cupressoides (Vahl) C. Agardh var. lycopodium em animais. 2008. 82 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-12-02T20:53:03Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_esovanderlei.pdf: 1029234 bytes, checksum: 9ea5856f18103aa625610594cb7595ff (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-15T20:25:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_esovanderlei.pdf: 1029234 bytes, checksum: 9ea5856f18103aa625610594cb7595ff (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-15T20:25:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_esovanderlei.pdf: 1029234 bytes, checksum: 9ea5856f18103aa625610594cb7595ff (MD5) Previous issue date: 2008 / The search of new alternative compounds in the control of the pain and inflammation, with minima collateral effects, it has been aroused from marine algae. The aim of this work was to investigate the potential antinociceptive and anti-inflammatory of the lectin from the green marine alga Caulerpa cupressoides (Vahl) C. Agardh var lycopodium (CcL) in animals. The CcL, presenting haemagglutinating activity against trypsin-treated erythrocytes from rabbit, was purified by application of crude extract on ion exchange chromatography on DEAE-cellulose followed by affinity chromatography on Sephadex G-100 column. To proceed, it was used in the nociception and inflammation assays, using male Swiss mice and male Wistar rats, respectively. CcL was administered 30 min before each nocigenic challenge, that is, before the injection i.p of acetic acid 0.8% (10 l/ml), of the intraplantar injection of 1% formalin (20 L/paw) or of the Hot Plate test (511 ºC), and compared to non treated animals or to pre-treated by Indomethacin or Morphine, both at 5 mg/kg; s.c. It was observed that the LCc (3, 9 or 27 mg/kg) reduced significantly the number of writhes induced by acetic acid 37.2%; 53.5% e 86.0%, respectively. CcL (27 mg/kg) also reduced (p<0.05) the 1st phase (neurogenic) and the 2nd phase (inflammatory) observed after administration of the formalin (45.3% and 86.3%, respectively). However, the CcL (27 mg/kg) was not capable to reduce the nociception evaluated by Hot Plate test, compared to morphine. The antinociceptive effects were abolished when the CcL was pre-incubated with mucin (2 mg/ml), inhibitory glycoprotein of its haemagglutinating activity. Therefore, it is suggested that the antinociceptive activity of the CcL can be predominant by inhibition of peripheric mechanisms. After this, was realized the assays of neutrophil migration for peritoneal cavity by Carrageenan (Cg-type λ; 700 µg/cavity or paw), where was observed that the administration of the CcL (9 mg/kg) 30 min before Cg reduced the neutrophil counts significantly by 65.9%. Finally, the CcL (9 mg/kg) was administered daily in male mice for 7 days and in the 8th, blood samples were collected for and transaminases (TGO and TGP) dosages, and organs remotion to evaluate the of the organ weight /body weight relation. It was observed that CcL not caused hepatic or renal alterations, because it was not determined significant changes in the activities of TGO (Saline=29,44±3,193; CcL=36,00±21,98 U/l) and TGP (Saline=13,59±3,373; CcL=17,64±2,676 U/l) and urea levels (Saline=224,3±10,84; CcL=270,0±24,00 U/l). In addition, it was not determined significant variation on the wet weight of the organs: liver (Saline=5,23±0,195; CcL=6,02±0,100), kidney (Saline=0,840±0,015; CcL=0,851±0,065) and heart (Saline=0,568±0,055; CcL=0,639± 0,039). In summary, we conclude that the CcL has peripheral antinociceptive and anti-inflammatory properties and may be an important tool and candidate for new complementary studies. / A busca de novos compostos alternativos no controle da dor e da inflamação, com mínimos efeitos colaterais, tem despertado o interesse pelas algas marinhas. O objetivo desse trabalho foi investigar o potencial antinociceptivo e antiinflamatório da lectina da alga marinha verde Caulerpa cupressoides (Vahl) C. Agardh var. lycopodium (LCc) em animais. A LCc, apresentando atividade hemaglutinante contra eritrócitos tripsinizados de coelho, foi obtida a partir da aplicação do extrato protéico total em procedimentos cromatográficos de troca-iônica em coluna de DEAE-celulose e de afinidade em coluna de Sephadex G-100. A seguir, foi utilizada nos ensaios de nocicepção e inflamação, usando camundongos Swiss e ratos Wistar, respectivamente. A LCc foi administrada 30 min antes de cada estímulo nocigênico, ou seja, antes da injeção i.p. de ácido acético a 0,8% (10 µl/ml), da injeção intraplantar da formalina a 1% (20 µl/pata) ou do teste da Placa Quente (51±1 ºC), e seu efeito comparado a dos animais não tratados (Salina) ou pré-tratados s.c. com Indometacina ou Morfina, ambas a 5 mg/kg. Observou-se que a LCc (3, 9 e 27 mg/kg; i.v.) reduziu significantemente o número de contorções abdominais induzidas por ácido acético em 37,2%; 53,5% e 86,0%, respectivamente. LCc (27 mg/kg) também reduziu (p<0,05) a fase 1 (neurogênica) e a fase 2 (inflamatória) induzidas pela formalina, em 45,3% e 86,3%, respectivamente. A LCc (27 mg/kg), entretanto, não foi capaz de reduzir a nocicepção avaliada no teste da Placa Quente, quando comparada à morfina. Para confirmar a atividade da LCc, verificou-se que os efeitos antinociceptivos foram abolidos quando a LCc foi pré-incubada com a glicoproteína mucina (2 mg/ml), inibidora de sua atividade hemaglutinante. Sugere-se, portanto, que a atividade antinociceptiva observada foi, de fato, devido à LCc e que essa atividade ocorra predominante via inibição de mecanismos periféricos. Em seguida, realizou-se o ensaio da migração de leucócitos na cavidade peritoneal induzida por Carragenina (Cg-tipo λ ; 700 µg/cavidade), onde se observou que a administração da LCc (9 mg/kg; i.v.) 30 min antes da Cg, reduziu significativamente a contagem do número de neutrófilos em 65,9%. Finalmente, a LCc (9 mg/kg), foi administrada em camundongos machos Swiss diariamente por 7 dias e no 8º dia amostras sanguíneas foram coletadas para dosagens séricas de uréia e transaminases (TGO e TGP), e remoção de órgãos para avaliação da relação peso órgão/peso corporal. Observou-se que a LCc não causou alterações hepáticas ou renais, visto que não determinou alterações, de forma significante, nas atividades das transaminases TGO (Salina=29,44±3,193; LCc=36,00±21,98 U/l) e TGP (Salina=13,59±3,373; LCc=17,64±2,676 U/l), nem dos níveis de uréia (Salina=224,3±10,84; LCc=270,0±24,00 U/l), além de não determinar variação significante do peso úmido dos respectivos órgãos: fígado (Salina=5,23±0,195; LCc=6,02±0,100), rim (Salina=0,840±0,015; LCc=0,851±0,065) e coração (Salina=0,568±0,055; LCc=0,639± 0,039). Em resumo, conclui-se que a LCc possui propriedades antinociceptiva e antiinflamatória periférica, podendo ser uma ferramenta importante e candidata a novos estudos complementares.

Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-02-07T11:46:40Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ImagemCorporalMarcadores.pdf: 1647156 bytes, checksum: e1126250f70301b5a007ed719158e245 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-02-11T14:31:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ImagemCorporalMarcadores.pdf: 1647156 bytes, checksum: e1126250f70301b5a007ed719158e245 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-11T14:31:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ImagemCorporalMarcadores.pdf: 1647156 bytes, checksum: e1126250f70301b5a007ed719158e245 (MD5) Previous issue date: 2012 / A obesidade, um grave problema de saúde pública, em todo o mundo, vem atingindo as variadas faixas etárias, inclusive a pediátrica. O distúrbio é associado a um conjunto de doenças, tais como hipertensão arterial, dislipidemia aterogênica e diabetes mellitus do tipo 2, que compõem a Síndrome Metabólica (SM). A presença de SM na idade pediátrica, em decorrência dos múltiplos fatores de risco cardiovascular que a compõem, está associada a um maior risco de manifestações prematuras no adulto. Recentemente vários estudos têm apresentado evidências de que além do estresse metabólico (caracterizado por anormalidades no metabolismo de lipídios e de glicose), o estresse inflamatório constitui importante mecanismo patogênico da SM. No entanto poucos estudos têm explorado esta relação em adolescentes. Em vista disso, este estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar a prevalência dos componentes da SM e sua associação com a proteína C reativa (PCR) e leucócitos em adolescentes de 11 a 15 anos de idade, matriculados em escolas privadas e públicas do município de Alegre, Espírito Santo. Dos voluntários do estudo foram obtidos os seguintes dados: idade, sexo, peso, altura (para cálculo do índice de massa corporal, circunferência da cintura, percentual de gordura corporal), hemograma completo (série branca e série vermelha), lipidograma, glicemia de jejum, insulinemia, PCR e pressão arterial. Para caracterizar a SM foram utilizados os pontos de corte e os fatores de risco preconizados pela I Diretriz de Prevenção da Aterosclerose na Infância e Adolescência da Sociedade Brasileira de Cardiologia. A amostra foi composta por 524 adolescentes, sendo 247 do gênero masculino e 277 do gênero feminino. A idade média foi 13 anos. O excesso de peso estava presente em 29,6% dos adolescentes e 25,7% apresentavam circunferência da cintura aumentada. Na avaliação bioquímica, 27,2% dos adolescentes apresentavam-se com hipercolesterolemia, 21,8% com hipertrigliceridemia, 49,5% com concentrações diminuídas de colesterol HDL, 18,7% com colesterol LDL elevado, 14,2% com hiperglicemia, 15,1% com hiperinsulinemia e 12,0% dos adolescentes com concentrações de PCR consideradas de alto risco. Adolescentes com maiores concentrações de triacilgliceróis, circunferência da cintura e percentual de gordura corporal apresentaram maiores médias para as populações de leucócitos e linfócitos. A presença da SM foi verificada em 16%, a resistência à insulina em 12,9% e mais de 49% dos adolescentes apresentaram pelo menos 2 componentes da SM. A hipertensão foi observada em 6,5%. Foi encontrada uma associação positiva significativa entre concentrações de PCR e pressão arterial sistólica, glicose e colesterol HDL, independentemente da idade, da composição corporal e do IMC. A única variável associada significativamente aos leucócitos foi o percentual de gordura corporal. Conclui-se que a população estudada apresenta alta prevalência de fatores de risco clássicos para as doenças cardiovasculares, para o diabetes do tipo 2 e para a Síndrome Metabólica. ___________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Obesity, a serious public health problem, widely found around the world, has been affecting various age groups, including children. The disorder is associated with a set of diseases such as hypertension, atherogenic dyslipidemia, and diabetes mellitus type 2, comprising the Metabolic Syndrome (MS). The presence of MS in the pediatric age, as a result of multiple cardiovascular risk factors that comprise it, is associated with an increased risk of premature manifestations in adults. Recently, several studies have presented evidence that in addition to metabolic stress (characterized by abnormalities in lipid and glucose metabolism), the inflammatory stress is an important pathogenic mechanism of MS. However few studies have explored this relationship in adolescents. This study was developed to evaluate the prevalence of MS components and their association with C-reactive protein (CRP) and leukocytes in adolescents from 11 to 15 years old, enrolled in private and public schools in the municipality of Alegre, Espírito Santo. From the volunteers were obtained the following data: age, sex, weight, height (to calculate body mass index), waist circumference, body fat percentage, complete blood count, lipid profile, fasting glucose, insulin, CRP and blood pressure. No specific criterion was used to characterize the MS, but the cutoffs and the risk factors recommended by the I Guidelines for the Prevention of Atherosclerosis in Children and Adolescents of the Brazilian Society of Cardiology. The sample consisted of 524 adolescents, 247 males and 277 females. The mean age was 13 years. Overweight was present in 29.6% of adolescents and 25.7% had increased waist circumference. In biochemical analyzes, we found 27,2% adolescents with hypercholesterolemia, 21,8% with hypertriglyceridemia, 49,5% with decreased serum concentrations of HDL cholesterol, 18,7% with elevated LDL cholesterol, 14,2% with hyperglycemia, 15,1% with hyperinsulinemia and 12.0% of adolescents with CRP concentrations considered as high risk. Adolescents with higher concentrations of triglycerides, waist circumference and percentage body fat had higher average values for leukocytes. MS was observed in 16%, insulin resistance in 12.9% and over 49% of adolescents had at least two components of MS. The hypertension was observed at 6.5%. A positively and significant association between CRP and systolic blood pressure, glucose and HDL cholesterol, independent of age, body composition and BMI was observed. Only body fat percentage was significantly associated with leukocytes. We conclude that the studied population has a high prevalence of classic risk factors for cardiovascular disease, for type 2 diabetes and the metabolic syndrome.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:02:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-21. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:28Z : No. of bitstreams: 1 000848868.pdf: 401988 bytes, checksum: 08ca73724d8938b9b116d34fb50815a0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / In humans, the immunosuppression observed in uremic patients is associated with the neutrophil dysfunction caused by uremic toxins. P-cresol accumulates in the blood of patients with chronic renal failure (CRF) promoting the inhibition of neutrophil oxidative metabolism. This study aimed to measure the plasma concentrations of p-cresol in dogs with CRF and test the hypothesis that free p-cresol causes neutrophil dysfunction. To this end, plasma concentration of p-cresol was determined using high pressure liquid chromatography (HPLC) in dogs presenting stage IV of CRF. The in vitro specific effect of p-cresol on the oxidative metabolism and apoptosis rate of neutrophils from healthy dogs was also evaluated, considering the highest plasma concentration of this toxin observed on the in vivo measurement of dogs with CRF. Isolated neutrophils from 20 healthy dogs were incubated in RPMI medium alone, supplemented with p-cresol or plasma from dogs with CRF. Neutrophil oxidative metabolism was assessed by capillary flow cytometry using the probes hydroethidine and 2',7'- dichlorofluorescein diacetate with or without stimulus with phorbol myristate acetate and N-formyl-methionyl-leucylphenylalanine. Apoptosis and viability of neutrophils were quantified also in capillary flow cytometry using Annexin V-PE system with or without stimulus with camptothecin. Dogs with CRF presented oxidative stress and increased plasma levels of p-cresol, the higher concentration of p-cresol caused in vitro neutrophil dysfunction. It can be concluded that p-cresol may be involved with in vivo oxidative stress that its higher concentration decreases the viability and lead to a reduced production of reactive oxygen species

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:35Z : No. of bitstreams: 1 000848874.pdf: 475629 bytes, checksum: 8f3083521bd5dbb20833e54b2e295e0b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / It has been recently reported that in canine chronic renal failure (CRF) there occurs oxidative stress, and that neutrophil dysfunction is associated with the increase of apoptosis. Among the many uremic toxins found in higher concentrations due to CRF, there is evidence - in humans - that guanidines inhibit the oxidative metabolism of neutrophils, affecting their bactericidal function. In this study, a systematic review of the relationship between guanidine compounds and neutrophils in dogs was undertaken. It was found that the literature on this subject is scarce and conflicting, which prompted this investigation of the relationship between the plasmatic concentration of guanidine, the production of superoxide, and the apoptosis of neutrophils in dogs with CRF. Morever, the effect of the isolated compound guanidine acetic acid (GAA) on the production of superoxide and on neutrophil apoptosis in healthy dogs was investigated in vitro. It was possible to verify that the large increase of plasmatic guanidine observed in dogs with CRF is not associated with the altered oxidative metabolism and the apoptosis of the neutrophils. The GAA inhibited the oxidative metabolism of the neutrophils in healthy dogs without affecting the viability of these cells

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-14Bitstream added on 2014-06-13T19:01:28Z : No. of bitstreams: 1 godoy_av_dr_jabo.pdf: 494650 bytes, checksum: d27d9898dce60f32a0eece2e8cdaf032 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve como objetivos avaliar seqüencial e temporalmente o quadro leucocitário de dez cães portadores de linfoma em remissão, submetidos à alta dose de ciclofosfamida, durante o uso do estimulador de colônia de granulócitos (GCSF, filgrastine) seguido ou não do transplante autólogo de medula óssea (TMO), bem como quantificar células CD34+ no sangue periférico dos referidos cães. Para tal avaliação foram utilizados três grupos experimentais, sendo o grupo 1 (G1) formado por cinco animais em remissão de linfoma que passaram por alta dose de ciclofosfamida e TMO seguido do uso de G-CSF; o grupo 2 (G2) formado por cinco animais em remissão de linfoma que sofreram alta dose de ciclofosfamida seguida do uso de G-CSF e o grupo 3 (G3) formado por dez animais saudáveis que receberam apenas o G-CSF. O transplante consistiu na colheita de medula óssea, preparo e congelamento da bolsa que continha células medulares em suspensão, condicionamento do paciente com 500mg/m2 de ciclofosfamida, infusão das células hematopoéticas e aplicação do G-CSF. Para avaliar a recuperação hematopoética pós-transplante foi realizado leucograma e análise citométrica do sangue nos dias 7, 8, 9, 10 e 11 após condicionamento. O nadir médio dos neutrófilos segmentados (NS) no grupo com transplante de medula óssea (G1) foi 425 NS/mL, e no grupo sem TMO (G2) foi 637,4 NS/μL e ocorreu sete dias após alta-dose de quimioterápico em ambos os grupos. A duração média da neutropenia foi de três dias. Nenhum animal apresentou febre ou sepse após a alta dose de ciclofosfamida. A dose de 5μg/kg/dia durante quatro dias de filgrastine foi insuficiente na mobilização adequada de células CD34+ nos três grupos estudados, sendo necessários novos estudos para este propósito. Desta maneira, pode-se comprovar o fato de que o uso do G-CSF leva a reduções significativas na incidência... / The aims of this research were to provide an analysis of several counts of leucocytes values in dogs with lymphoma in remission phase, undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, during treatment with granulocyte colonystimulating factor (G-CSF, filgrastine), followed or not by autologous bone marrow transplantation (BMT), as well to quantify CD34+ cells of peripheral blood from that dogs. For this purpose, three experimental groups were considered. Five dogs in clinical remission undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide and BMT, followed by G-CSF use were included in group 1 (G1), while group 2 (G2) was consisted by five dogs undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, followed by G-CSF. Group 3 (G3) was composed of ten healthy dogs undergone to GCSF only. Transplantation consisted of bone marrow harvest, managing and freezing bags containing lifted marrow cells, cyclophosphamide conditioning (500mg/m2), hematopoietic cells infusion and treatment with G-CSF. After transplantation, hematopoietic recovery was evaluated by means of leukograms and flow cytofluorimetrical analysis on days 7, 8, 9, 10 and 11 after conditioning. Mean nadir neutrophil (NS) counts in group undergone transplantation (G1) was 425 NS/mL versus 637,4 NS/μL in group without BMT (G2). Nadir was observed on the seventh day after high-dose chemotherapy in both groups and neutropenia mean time was three days. Fever or sepsis was not observed in any dog after high-dose cyclophosphamide. Four days of filgrastine treatment in dose of 5μg/Kg, daily, was not enough to mobilize CD34+ cells appropriately in three groups analyzed, requiring new studies for this purpose. Considering these results, it is possible to conclude that G-CSF significantly reduces the incidence, severity and duration of neutropenia