O objetivo desta metanálise foi avaliar os efeitos da suplementação com levedura (Saccharomyces cerevisiae) sobre o ganho de peso médio diário e o consumo de matéria seca (CMS) de bovinos de corte. Os critérios para inclusão considerados foram ensaios aleatórios, suplementação com levedura Saccharomyces cerevisiae em comparação com um tratamento controle e que avaliassem o GMD e CMS. Os dados foram extraídos dos artigos relevantes a partir de um protocolo pré-definido. Uma metanálise de efeitos aleatórios foi conduzida para cada indicador separadamente com as médias do grupo controle e tratado. Foram utilizadas 12 publicações que relatam 22 estudos e 22 ensaios em 1161 bovinos analisados. Os níveis de heterogeneidade entre estudos foram elevados, variado entre 92 e 99%. Não foram observados efeitos (MD=-2,849 g, p=0,492) da inclusão de leveduras sobre o GMD. Contudo, observou-se redução no CMS (MD=-0,885 kg, p=0,023) para o grupo tratado. O GMD foi maior quando os níveis de volumoso da dieta ficaram entre 30 e 50% (MD=641,08 g, p=0,001) e diminuiu quando os níveis eram entre 51 e 75% (MD= -2,90 g, p=0,000). Quando o teor de FDN foi superior a 60% o uso de levedura diminuiu o GMD em 406,94 g (p=0,034). Foi observada uma redução no CMS nos bovinos manejados em sistema de confinamento (MD= -0,97, p=0,019) quando suplementados com levedura. Animais Bos taurus apresentaram maior CMS quando não suplementados, enquanto que os Bos indicus, apresentaram maior CMS suplementados com levedura (MD= -1,70 kg, p=0,000 e MD= 2,38 kg, p=0,000, respectivamente). Assim, a suplementação de bovinos de corte com Saccharomyces cerevisiae não apresentou efeitos sobre o GMD, contudo, melhorou a conversão alimentar devido à redução no CMS. / The purpose of this meta-analysis was to evaluate the effects of yeast supplementation (Saccharomyces cerevisiae) on average daily weight gain (ADG) and dry matter intake (DMI) in beef cattle. Inclusion criteria were complete and randomized trials, supplementation with yeast Saccharomyces cerevisiae compared with no supplementation, which measure ADG or DMI. Data were extracted from relevant paper onto pre-defined protocols. A meta-analysis of random effects was conducted for each indicator separately with the mean of control and treated groups. A total of 12 publications reporting 22 studies and 22 trials in 1161 cattle was analysed. The heterogeneity between studies was high, ranged from 92 to 99%. No effects (MD= -2.849 g, p= 0.492) were observed in ADG with the inclusion of yeast in the diet. However, there was a reduction on DMI (MD= -0.885 kg, p= 0.023) for the group treated. The ADG increased when the forage level in the diet was between 30 and 50% (MD= 641.08 g, p= 0.001), and decreased when the level was between 51 and 75% (MD= -2.90 g, p= 0.000). Over 60% of NDF, the use of yeast in the diet decreased the ADG by 406.94 g (p= 0.034). Animals handled in feedlot showed a reduction in the DMI (MD= -0.97 g, p= 0.019) when received yeast as a supplementation. The non-use of yeast in the diet increased the DMI (MD= -1.70 kg, p= 0.000) in Bos taurus cattle group, while Bos indicus group showed higher DMI (MD= 2.38 kg, p= 0.000) when received yeast as a supplementation. The supplementation with Saccharomyces cerevisiae in the diet for beef cattle had no effect on ADG; however, improve feed conversion due to the reduction in DMI.

Submitted by gracianygarciamestra@gmail.com (gracianygarciamestra@gmail.com) on 2016-04-04T18:37:44Z No. of bitstreams: 1 Graciany_Garcia.pdf: 921895 bytes, checksum: bd45dc3e7ee4305b8a89c5ad98fe0101 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-04-06T16:46:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 garcia_g_me_jabo.pdf: 921895 bytes, checksum: bd45dc3e7ee4305b8a89c5ad98fe0101 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-06T16:46:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 garcia_g_me_jabo.pdf: 921895 bytes, checksum: bd45dc3e7ee4305b8a89c5ad98fe0101 (MD5) Previous issue date: 2016-03-07 / Cachaça is the second most widely consumed alcoholic beverage in Brazil, obtained by distillation of sugarcane wine, having its quality affected by the raw material, fermentation conditions and productive process. With the growing demand of the consumer market for quality cachaça, the search for the improvement in relation to the progress of the technical-scientific knowledge has been intensified. The physical chemical treatment of the juice is a technology that qualifies the beverage. This study aimed is to evaluate the performance of two types of yeast (selected CA-11 and the pressed) and the influence of the physical-chemical treatment of sugarcane juice on the secondary compounds and the interference of the same in the quality of the beverage. The experiment was carried out in 2014/2015, using a variety of SP83-2847 cane grown in Pitangueiras-SP region. The trial design was done in blocks with 9 repetitions, 3 cycles with 3 repetitions, where the primary treatment was the clarified juice and not clarified and secondary the two types of yeast. It has assessed the viability of the cells and shoots and the index of budding along the fermentation. In the wine was determined the total acidity, pH, ARRT, alcoholic content, glycerol, efficiency fermentative and mineral composition. In distillates was analyzed total aldehydes, volatile acidity, total esters, methanol, acrolein, ethyl carbamate, furfuraldehyde and hydroxymethylfurfural, higher alcohols, alcohol sec. butyl and n-butanol, all determined by GC and HPLC. The use of CA-11 yeast combined with the juice treatment process, has indicated highest cell viability index and lower alcohol concentrations and congeners coefficient higher in relation to others. All results were lower than the limits allowed by Brazilian law. The results obtained suggest that the use of selected strains with the prior treatment of the juice enables better performance of the fermenting yeasts, resulting in distillate with appropriate physico-chemical standards and with quality. / A cachaça é a segunda bebida alcoólica mais consumida no Brasil, obtida pela destilação do vinho de cana-de-açúcar, tendo sua qualidade afetada pela matéria-prima, condições da fermentação e processo produtivo. Com a crescente exigência do mercado consumidor por cachaça de qualidade, intensificou-se a busca pelo aprimoramento em relação ao avanço do conhecimento técnico-científico. O tratamento físico químico do caldo é uma tecnologia que pode qualificar a bebida. Objetivou-se avaliar o desempenho de dois tipos de fermento (selecionado CA-11 e o prensado) e a influência do tratamento físico-químico do caldo de cana sobre os compostos secundários e a interferência dos mesmos na qualidade da bebida. O experimento foi realizado na safra 2014/2015, utilizando a variedade de cana SP83- 2847 cultivada na região de Pitangueiras-SP. O delineamento experimental utilizado foi feito em blocos com 9 repetições, sendo 3 ciclos com 3 repetições, onde o tratamento primário foi o caldo clarificado e não clarificado e o secundário os dois tipos de fermento. Avaliou-se a viabilidade das células e de brotos e o índice de brotamentos ao longo da fermentação. No vinho determinou-se acidez total, pH, ARRT, teor alcoólico, glicerol, eficiência fermentativa e composição mineral. Nos destilados foram analisados aldeídos totais, acidez volátil, ésteres totais, metanol, acroleína, carbamato de etila, furfural e hidroximetilfurfural, álcoois superiores, álcool sec. butílico e n-butanol, todos determinados por cromatografia gasosa e HPLC. O emprego do fermento CA-11 aliado ao processo de tratamento do caldo indicaram maior índice de viabilidade celular e menores concentrações de álcoois superiores e coeficiente de congêneres em relação aos demais. Todos os resultados foram abaixo dos limites permitidos pela legislação brasileira. Os resultados obtidos sugerem que a utilização de cepas selecionadas com o prévio tratamento do caldo possibilita melhor desempenho das leveduras fermentadoras, resultando em destilados com padrões físico-químicos adequados e de qualidade.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-29Bitstream added on 2014-06-13T19:50:07Z : No. of bitstreams: 1 lorenzeti_nc_me_arafcf.pdf: 478832 bytes, checksum: aa88049abeadff1fda69c6fe7e47be78 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A indústria de suco de laranja produz ao final do processo um subproduto denominado “liquor” de laranja, gerado na operação de prensagem do bagaço, que após concentrado, é adicionado ao farelo de polpa cítrica peletizado (CPP) para a elaboração de ração animal. A indústria brasileira de cerveja, por sua vez, tem descartado anualmente cerca de 160 milhões de litros de fermento, que são utilizados no máximo cinco vezes e ainda apresentam boa viabilidade (percentual de células mortas inferior a 5%). Considerando, portanto, as vantagens que poderão advir do aproveitamento do fermento de descarte da indústria cervejeira na aguardente de “liquor” de laranja, bem como a necessidade de melhor conhecer a qualidade dessa bebida, foi objetivo do presente trabalho caracterizar o perfil sensorial e avaliar o processo de obtenção e a aceitabilidade de aguardentes de “liquor” de laranja, obtidas pela fermentação com leveduras de descarte da indústria cervejeira, bidestilação em alambiques de cobre e de aço inoxidável, e envelhecimento em ancorotes de carvalho (5 L) durante 6 meses. O perfil sensorial das aguardentes, após o envelhecimento, foi determinado utilizando-se a Análise Descritiva Quantitativa (ADQ). Os resultados relativos à fermentação confirmaram ser viável a utilização do fermento de descarte da indústria cervejeira na produção da aguardente de “liquor” de laranja, já que praticamente todo o açúcar presente no “liquor” (7,7%) foi consumido. Os teores de acidez volátil não diferiram significativamente (p  0,05) entre as amostras bidestiladas em alambiques de cobre e de aço inox, porém diferiram (p  0,05) entre as amostras após o envelhecimento, havendo neste processo um aumento significativo (p  0,05) nos valores de acidez das aguardentes. A ADQ foi conduzida por uma equipe de 10 julgadores... / The orange juice industry produces at the end of the process a by-product called orange press liquor, obtained from the pressing of the orange pulp, which is further concentrated and then added to the pelletized citric pulp crumb (CPP), used as animal feed. The Brazilian brewery industry also disposes annually 160 millions liters of still usable yeast (95% effective cells), replaced after 5 fermentation loads are done. So considering the possibility of using the disposable yeast from the brewery industry to produce the orange press liquor spirit and the necessity to know better this beverage quality, this project aimed to establish the sensory profile and evaluate the production process and the acceptance of the orange press liquor spirits, obtained by fermentation with disposable yeast from the brewery industry, bidistillation in copper and stainless steel pot stills and aging for 6 months in miniature (5 liters) oak casks. The sensory profile of spirits, after maturation, was established by Quantitative Descriptive Analysis (QDA). The results obtained during fermentation confirmed that the use of the disposable yeast from the brewery industry to produce orange press liquor spirit is viable, based on the almost absolute consumption of the sugar contained in the orange press liquor (7,7%). The volatile acidity was not significantly different (p  0.05) between bidistilled samples in copper and stainless steel pot stills, however it was different (p ≤ 0.05) between the samples after maturation, process that increased significantly (p ≤ 0.05) the acidity of the spirits. The QDA was developed by 10 judges, trained e selected according to their discriminating capability, repeatability and consensus with the others judges... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-28Bitstream added on 2014-06-13T19:29:24Z : No. of bitstreams: 1 aragon_cc_me_arafcf.pdf: 397051 bytes, checksum: e29ac6a4f5baf629041e6e9442044f9e (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / No presente trabalho, a atividade da enzima glicerol quinase (GK; EC 2.7.1.30; ATP: glicerol 3-fosfotransferase), proveniente de extratos de levedura seca de panificação, foi otimizada. A melhor preparação enzimática da GK foi obtida por rompimento celular com esferas de vidro, durante sete minutos, com lise de 54,2% das células. O extrato celular foi parcialmente purificado com 1% de sulfato de estreptomicina, antes da precipitação com igual volume de solução a 30% (m/v) de polietilenoglicol 3350, e posteriormente dialisado. A atividade máxima da GK foi obtida em pH 10,0, a 60ºC e 50mM de substrato, por metodologia clássica. A enzima apresentou alta estabilidade térmica ― a atividade foi completamente mantida até 50ºC, durante uma hora ― e em pH entre 6,0 e 8,0. Além disso, manteve-se estável, por quatro meses, a 4°C, na presença de azida de sódio 0,05% e cloreto de cobalto 10mM, e, por até oito meses, com o extrato liofilizado. Calculados pelos métodos de Lineweaver-Burk, Hanes-Woolf e Eadie-Hofstee, o valor da constante de Michaelis (Km) da enzima variou entre 1,99mM e 3,11mM, e a Vmax, entre 1,14U/mL e 1,19U/mL. Utilizou-se a metodologia de superfície de resposta (MSR) para melhor definição dos parâmetros da reação enzimática, observando-se valores ótimos de atividades a temperaturas entre 52ºC e 56ºC, pH entre 10,2 e 10,5 e concentração de substrato de 150mM a 170mM. A MSR mostrou-se adequada para modelar a reação e maximizar a atividade da glicerol quinase. Este método, de baixo custo, dosa a glicerol quinase em uma seqüência de reações, sendo de grande importância para diversas indústrias, como a de alimentos, açúcar e álcool. / In the present study, the activity of the enzyme glycerol kinase (GK; EC 2.7.1.30; ATP: glycerol 3-phosphotransferase) from dry baker´s yeast, was optimized. The best enzymatic preparation of GK was obtained by cell disruption with glass beads, for seven minutes, with 54.2% of lysed cells. Cell extract was partially purified with 1% of streptomycin sulphate, before the precipitation with equal volume of a 30% solution (m/v) of polyethylene glycol 3350, and then it was dialyzed. The maximum activity of GK was obtained with pH 10.0, at 60ºC and 50mM of substrate, by the classic methodology. The enzyme presented high thermal stability ― the activity was completely maintained up to 50ºC, during one hour ― and at pH between 6.0 and 8.0. Besides, it was stable, for four months, at 4°C, in the presence of sodium azide 0.05% and cobalt chloride 10mM, and, for up to eight months, with the lyophilized extract. The value of the Michaelis constant (Km) of the enzyme was calculated by the methods of Lineweaver-Burk, Hanes-Woolf and Eadie-Hofstee,and it varied between 1.99mM and 3.11mM, and Vmax, between 1.14U/mL and 1.19U/mL. Response surface methodology (RSM) was used for better definition of the parameters of the enzymatic reaction, being observed higher activity values at temperatures between 52ºC and 56ºC, pH between 10.2 and 10.5 and substrate concentration from 150mM to 170mM. RSM showed to be an adequate approach for modeling the reaction and maximizing the glycerol kinase activity. This low cost method doses glycerol kinase in a sequence of reactions, being of great importance for many industries, like food, sugar and alcohol.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1393937 bytes, checksum: d627ac6102daffc287744ec3395e1fd3 (MD5) Previous issue date: 2013-08-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Flocculent yeasts are useful in fermentation processes because they can be easily separated from the fermentation mash reducing costs with cell separation equipment. The flocculation phenotype is not often found in native yeasts, including the species Kluyveromyces marxianus which has a high biotechnological potential due to its ability to assimilate a variety of substrates, ferment at higher temperatures and present a high growth rate. This work aimed at the construction of flocculent strains of K. marxianus with potential to ferment agro-industrial residues. The cassettes used in the construction of flocculent strains of K. marxinaus were amplified from 4 different flocculent strains of Saccharomyces cerevisiae, each strain has a cassette consisting of the URA3 gene as a selection mark and a flocculation gene FLO under control of the constitutive promoter TDH3 (URA3-TDH3p-FLO) and each of these strains contains a different flocculation gene (FLO1, FLO5, FLO9 and FLO10). In order to obtain an auxotrophic mutant strain of K. marxinaus UFV-3, the URA3 gene of this strain was amplified and cloned. Then a fragment of its coding region was removed yielding an inactive gene (URA3Δ), which was used in the transformation of K. marxinaus UFV-3. Due to the impossibility to obtain an auxotrophic strain of K. marxinaus UFV-3, we used the CBS 6556 strain auxotrophic for uracil. This strain was transformed by electroporation using the cassettes from S. cerevisiae. We obtained 4 flocculent strains of K. marxianus CBS 6556 that were selected by growth in medium without uracil. By carrying out the phenotypic analysis of the transformants, it was found that all the strains were flocculants; however, the flocculation degree was different between the 4 strains. The fermentation characteristics of the flocculent strains of K. marxianus were evaluated by using glucose, lactose and glucose/lactose as carbon and energy source and it was found that the strain transformed with the cassette containing the gene FLO9 (KMCBSFLO9) was the strain that showed the best fermentative performance preserving its ability to flocculation. In order to verify the influence of flocculation phenotype in the alcohol tolerance, the KMCBSFLO9 strain, the less flocculant strain (KMCBSFLO10) and the no-flocculant strain (KMCBSΔURA3) were cultured in the presence of different concentrations of ethanol. The results showed that the flocculent and no-flocculant strains present higher cell viability after 12 hours of culture in the presence of different concentrations of ethanol. / Leveduras floculantes são de grande utilidade em processos fermentativos, pois são separadas facilmente do mosto de fermentação. Diminuindo os custos associados á etapa de separação das células. O fenótipo de floculação não é encontrado com frequência em leveduras nativas, incluindo a espécie Kluyveromyces marxianus a qual apresenta alto potencial biotecnológico devido a sua hablilidade de assimilar um amplo espectro de substratos, apresentar uma alta taxa de crescimento e ser termotolerante. Este trabalho teve como objetivo a construção de linhagens floculantes de K. marxianus com potencial para fermentar resíduos agroindustriais. Os cassetes utilizados na construção das linhagens floculantes de K. marxinaus foram amplificados de 4 linhagens floculantes de Saccharomyces cerevisiae que possuem, cada uma, um cassete constituído pelo o gene URA3 como marca de seleção e por um gene de floculação FLO, sob o controle do promotor constitutivo TDH3 (URA3-TDH3p-FLO). Sendo que cada uma dessas linhagens contém um gene de floculação diferente (FLO1, FLO5, FLO9 E FLO10). A fim de obter um mutante auxotrófico da linhagem de K. marxinaus UFV-3 o gene URA3 desta linhagem foi amplificado, clonado e um fragmento da sua região codificadora foi retirado obtendo-se um gene inativo URA3Δ que foi utilizado na transformação da K. marxinaus UFV-3. Neste trabalho não foi possível obter uma linhagem de K. marxinaus UFV-3 auxotrófica para uracila, por isso utilizamos a linhagem CBS 6556 já auxotrófica para uracila. Esta linhagem foi transformada por eletroporação utilizando os cassetes FLO obtendo-se 4 diferentes linhagens floculantes de K. marxianus CBS 6556 que foram selecionadas em meio sem uracila. A análise fenotípica dos transformantes mostrou que que todas as linhagens eram floculantes, contudo, o grau de floculação variou entre as 4 linhagens. Avaliou-se o perfil fermentativo das linhagens floculantes de K. marxianus utilizando glicose, lactose e glicose mais lactose como fonte de carbono e energia. Foi verificado que a linhagem transformada com o cassete contendo o gene FLO9 (KMCBSFLO9) apresentou melhor capacidade fermentativa e manteve sua capacidade de floculação. Com a finalidade de verificar a influência do fenótipo de floculação na viabilidade celular em resposta ao etanol a linhagem de KMCBSFLO9, assim como da linhagem menos floculante (KMCBSFLO10), e a não floculante (KMCBSΔURA3) foram cultivadas na presença de diferentes concentrações de etanol. Os resultados demonstraram que tanto a linhagem não floculante como as duas linahgens floculantes se mostraram resistentes ao etanol.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 296265 bytes, checksum: fff0d31dcfb787cbad09aea84f7e3bac (MD5) Previous issue date: 2003-07-21 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Growth kinetics and metabolism of isolated yeast UFV-3 from intestinal microbiota of newly born pigs, was studied in the perspective of its use as probiótic. Main culture conditions were suggested in medium YPD. Temperature and pH were inestigated respectively in the range of 28 45 ºC and 3.8 5.5. The yeast UFV-3 has shown optimal growth at pH of 4.7 and temperature of 40 ºC. Growth kinetics was evaluated in three aeration levels: aerobe, microaerobe and anaerobe. The cellular yield was 0.03 g.mmol-1, 0.02g.mmol-1 and 0.01g.mmol-1 in aerobe, microaerobe and anaerobe respectively. Effects of the aeration levels on the oxide-reductive metabolism were analyzed by the ethanol, glycerol and organic acids production. Ethanol final concentration reached 120 mmol.L-1, 174 mmol.L-1, and 101 mmol.L-1 respectively for aerobe, microaerobe and anaerobe conditions. Production yield coefficient for conversion of glucose into ethanol were 1.1 mmol.mmol-1, 1.6 mmol.mmol-1, and 1.7 mmol.mmol-1 respectively for aerobe, microaerobe and anaerobe conditions. Glycerol was produced in concentrations of 11 mmol.L-1 and 10 mmol.L-1 and 7 mmol.L-1 in aerobe, microaerobe and anaerobe respectively. Production yield coefficient for conversion of glucose into glycerol were 0.10 mmol.mmol-1, 0.09 mmol.mmol-1 and 0.11 mmol.mmol-1 respectively for aerobe, microaerobe and anaerobe conditions. Metabolites as propionic, lactic and succinic acids were detected in trace concentrations. Acetic acid was not detected in none of the studied aeration levels. / A cinética de crescimento e metabolismo da levedura UFV-3 isolada da microbiota intestinal de leitões recém-nascidos foi estudada na perspectiva de sua utilização como probiótico. As principais condições de cultivo foram sugeridas em meio YPD. Temperatura e pH foram investigados na faixa de 28 45 ºC e 3.8 5.5. A levedura UFV-3 apresentou pH ótimo de crescimento de 4.7 e temperatura de 40 ºC. A cinética de crescimento foi avaliada em três níveis de aeração: aerobiose, microaerobiose e anaerobiose. O coeficiente de rendimento celular foi de 0.03 g.mmol-1, 0.02g.mmol-1 e 0.01g.mmol-1 nas condições de aerobiose, microaerobiose e anaerobiose respectivamente. Os efeitos dos níveis de aeração no metabolismo oxido-redutivo foram analisados pela produção de etanol, glicerol e ácidos orgânicos. A concentração final de etanol alcançou 120 mmol.L-1, 174,03 mmol.L-1 e 101 mmol.L-1 para as condições de aerobiose, microaerobiose e anaerobiose respectivamente. O coeficiente de rendimento de produto da conversão de glicose em etanol foram 1.1 mmol.mmol-1, 1.6 mmol.mmol-1 e 1.7 mmol.mmol-1 para as respectivas condições de aerobiose, microaerobiose e anaerobiose. Glicerol foi produzido em concentrações de 11 mmol.L-1, 10mmol.L-1 e 7 mmol.L-1 nas condições de aerobiose, microaerobiose e anaerobiose respectivamente. O coeficiente de rendimento de produto da conversão de glicose em glicerol foram 0.10 mmol.mmol-1, 0.09 mmol.mmol-1 e 0.11 mmol.mmol-1 para as respectivas condições de aerobiose, microaerobiose e anaerobiose. Traços de concentrações de metabólitos como ácido propiônico, acido lático, e acido succínico foram detectados. Ácido acético não foi detectado em nenhum dos níveis de aeração estudados.

Submitted by Luriany Pompeo Ferraz (luriany@hotmail.com) on 2018-05-10T13:54:38Z No. of bitstreams: 1 Tese Luriany Pompeo Ferraz.pdf: 2121530 bytes, checksum: dbc5ecaf4e4d278a002ba09e3ed9af57 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-05-10T18:09:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ferraz_lp_dr_jabo.pdf: 2121530 bytes, checksum: dbc5ecaf4e4d278a002ba09e3ed9af57 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-10T18:09:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ferraz_lp_dr_jabo.pdf: 2121530 bytes, checksum: dbc5ecaf4e4d278a002ba09e3ed9af57 (MD5) Previous issue date: 2018-04-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O fenômeno killler é característico de leveduras que produzem e excretam proteínas ou glicoproteínas que são inibidoras de células microbianas sensíveis. A estabilidade e atividade das toxinas killer são altamente sensíveis a fatores como pH, temperatura de incubação das leveduras, composição e propriedades físico-químicas do meio e concentração de células sensíveis. Sporobolomyces koalae é uma nova espécie de levedura com potencial para produção de toxina killer. No intuito de se conhecer mais sobre as funções desse microrganismo no ecossistema, esse trabalho teve por objetivos: (i) detectar a atividade killer do precipitado proteico de S. koalae, (ii) caracterizar bioquimicamente e funcionalmente o precipitado proteico S. koalae, (iii) purificar parcialmente a toxina killer produzida por S. koalae e, finalmente, (iv) verificar sua ação antagônica sobre Geotrichum citri-aurantii e Penicillium digitatum, patógenos que ocorrem na póscolheita de citros. Pelos resultados obtidos neste trabalho, foi possível detectar a presença de atividade killer no precipitado proteico da levedura S. koalae contra células sensíveis da levedura Saccharomyces cerevisiae NCYC 1006. O precipitado proteico da levedura apresenta várias proteínas com diferentes tamanhos moleculares e, parte dessas proteínas é positiva para atividade de β1,3-glucanase, quitinase e protease, podendo ser uma dessas enzimas ou, o sinergismo entre elas, o responsável pelo fator killer da levedura. A funcionalidade de suas proteínas para atividade killer aumenta em pH 4.9 e em uma faixa de temperatura de 22 °C a 27 °C e, o melhor agente precipitante das proteínas da levedura foi o etanol 80%. A purificação parcial das proteínas, que constituem o precipitado proteico de S. koalae, mostrou a existência de aproximadamente quatro bandas proteicas em uma das frações de purificação, Fração 1, com tamanhos aproximados que variaram de 8 a 65 kDa. A atividade killer, presente no precipitado proteico da levedura S. koalae, não apresenta ação antagônica sobre Geotrichum citri-aurantii e Penicillium digitatum. / The killer phenomenon is characterized by yeasts that produce and excrete proteins or glycoproteins that are inhibitors of sensitive microbial cells. The stability and activity of killer toxins are highly sensitive to the factors such as pH, the temperature of incubation of yeasts, composition and physical-chemical properties of the medium and concentration of sensitive cells. Sporobolomyces koalae is a new species of yeast with potential for killer toxin production. In order to know more about the functions of this microorganism in the ecosystem, this work had as objectives: (i) to detect the killer activity of the S. koalae protein precipitate, (ii) to characterize biochemically and functionally the S. koalae protein precipitate, (iii) to partially purify the killer toxin produced by S. koalae, and, finally, (iv) to verify its antagonistic action on Geotrichum citri-aurantii and Penicillium digitatum, pathogens that occur in the postharvest of citrus. By the results obtained in this work, it was possible to detect the presence of killer activity in the protein precipitate of S. koalae against sensitive cells of Saccharomyces cerevisiae NCYC 1006. The protein precipitate from yeast has several proteins with different molecular sizes and some of these proteins are positive for β1,3-glucanase, chitinase and protease activity. It may be one of these enzymes or synergism between them, the responsible for the killer factor. The functionality of their proteins for killer activity increases at pH 4.9 and a temperature range of 22 oC to 27 oC and the best precipitant of protein from yeast was ethanol (80%). Partial purification of the proteins showed the existence of approximately 4 protein bands in one of the purification fractions, Fraction 1, with approximate sizes ranging from 8 to 65 kDa. The killer activity, present in the protein precipitate of yeast S. koalae, did not present antagonistic action on G. citri-aurantii and P. digitatum. / FAPESP: 14/25067-3

Resumo: No presente trabalho, a atividade da enzima glicerol quinase (GK; EC 2.7.1.30; ATP: glicerol 3-fosfotransferase), proveniente de extratos de levedura seca de panificação, foi otimizada. A melhor preparação enzimática da GK foi obtida por rompimento celular com esferas de vidro, durante sete minutos, com lise de 54,2% das células. O extrato celular foi parcialmente purificado com 1% de sulfato de estreptomicina, antes da precipitação com igual volume de solução a 30% (m/v) de polietilenoglicol 3350, e posteriormente dialisado. A atividade máxima da GK foi obtida em pH 10,0, a 60ºC e 50mM de substrato, por metodologia clássica. A enzima apresentou alta estabilidade térmica ― a atividade foi completamente mantida até 50ºC, durante uma hora ― e em pH entre 6,0 e 8,0. Além disso, manteve-se estável, por quatro meses, a 4°C, na presença de azida de sódio 0,05% e cloreto de cobalto 10mM, e, por até oito meses, com o extrato liofilizado. Calculados pelos métodos de Lineweaver-Burk, Hanes-Woolf e Eadie-Hofstee, o valor da constante de Michaelis (Km) da enzima variou entre 1,99mM e 3,11mM, e a Vmax, entre 1,14U/mL e 1,19U/mL. Utilizou-se a metodologia de superfície de resposta (MSR) para melhor definição dos parâmetros da reação enzimática, observando-se valores ótimos de atividades a temperaturas entre 52ºC e 56ºC, pH entre 10,2 e 10,5 e concentração de substrato de 150mM a 170mM. A MSR mostrou-se adequada para modelar a reação e maximizar a atividade da glicerol quinase. Este método, de baixo custo, dosa a glicerol quinase em uma seqüência de reações, sendo de grande importância para diversas indústrias, como a de alimentos, açúcar e álcool. / Abstract: In the present study, the activity of the enzyme glycerol kinase (GK; EC 2.7.1.30; ATP: glycerol 3-phosphotransferase) from dry baker's yeast, was optimized. The best enzymatic preparation of GK was obtained by cell disruption with glass beads, for seven minutes, with 54.2% of lysed cells. Cell extract was partially purified with 1% of streptomycin sulphate, before the precipitation with equal volume of a 30% solution (m/v) of polyethylene glycol 3350, and then it was dialyzed. The maximum activity of GK was obtained with pH 10.0, at 60ºC and 50mM of substrate, by the classic methodology. The enzyme presented high thermal stability ― the activity was completely maintained up to 50ºC, during one hour ― and at pH between 6.0 and 8.0. Besides, it was stable, for four months, at 4°C, in the presence of sodium azide 0.05% and cobalt chloride 10mM, and, for up to eight months, with the lyophilized extract. The value of the Michaelis constant (Km) of the enzyme was calculated by the methods of Lineweaver-Burk, Hanes-Woolf and Eadie-Hofstee,and it varied between 1.99mM and 3.11mM, and Vmax, between 1.14U/mL and 1.19U/mL. Response surface methodology (RSM) was used for better definition of the parameters of the enzymatic reaction, being observed higher activity values at temperatures between 52ºC and 56ºC, pH between 10.2 and 10.5 and substrate concentration from 150mM to 170mM. RSM showed to be an adequate approach for modeling the reaction and maximizing the glycerol kinase activity. This low cost method doses glycerol kinase in a sequence of reactions, being of great importance for many industries, like food, sugar and alcohol. / Orientador: Maristela de Freitas Sanches Peres / Coorientador: Edwil Aparecida de Lucca Gattás / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Rubens Monti / Mestre

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:01:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ClaudioDM_DISSERT.pdf: 902689 bytes, checksum: 9281415acd8fbe6a15da6b807a1d9ff7 (MD5) Previous issue date: 2010-09-10 / Among the main challenges in the beer industrial production is the market supply at the lowest cost and high quality, in order to ensure the expectations of customers and. consumers The beer fermentation stage represents approximately 70% of the whole time necessary to its production, having a obligatoriness of strict process controls to avoid becoming bottleneck in beer production. This stage is responsible for the formation of a series of subproducts, which are responsible for the composition of aroma/bouquet existing in beer and some of these subproducts, if produced in larger quantities, they will confer unpleasant taste and odor to the final product. Among the subproducts formed during the fermentation stage, total vicinal diketones is the main component, since it is limiting for product transfusion to the subsequent steps, besides having a low perception threshold by the consumer and giving undesirable taste and odor. Due to the instability of main raw materials quality and also process controls during fermentation, the development of alternative forms of beer production without impacting on total fermentation time and final product quality is a great challenge to breweries. In this work, a prior acidification of the pasty yeast was carried out, utilizing for that phosphoric acid, food grade, reducing yeast pH of about 5.30 to 2.20 and altering its characteristic from flocculent to pulverulent during beer fermentation. An increase of six times was observed in amount of yeast cells in suspension in the second fermentation stage regarding to fermentations by yeast with no prior acidification. With alteration on two input variables, temperature curve and cell multiplication, which goal was to minimize the maximum values for diketones detected in the fermenter tank, a reduction was obtained from peak of formed diacetyl and consequently contributed to reduction in fermentation time and total process time. Several experiments were performed with those process changes in order to verify the influence on the total fermentation time and total vicinal diketones concentration at the end of fermentation. This experiment reached as the best production result a total fermentation time of 151 hours and total vicinal diketone concentration of 0.08 ppm. The mass of yeast in suspension in the second phase of fermentation increased from 2.45 x 106 to 16.38 x 106 cells/mL of yeast, which fact is key to a greater efficiency in reducing total vicinal diketones existing in the medium, confirming that the prior yeast acidification, as well as the control of temperature and yeast cell multiplication in fermentative process enhances the performance of diketones reduction and consequently reduce the total fermentation time with diketones concentration below the expected value (Max: 0.10 ppm) / Dentre os principais desafios que se apresentam no mercado industrial de produ??o de cerveja nos dias atuais, podemos citar o abastecimento do mercado com o menor custo poss?vel e com qualidade, visando garantir as expectativas dos clientes e consumidores. A etapa de fermenta??o da cerveja representa aproximadamente 70% de todo o tempo necess?rio para sua produ??o, tendo uma obrigatoriedade de rigorosos controles de processo, para n?o se tornar gargalo da produ??o de cerveja. Essa etapa ? respons?vel pela forma??o de uma s?rie de subprodutos, os quais, ao mesmo tempo em que s?o determinantes da composi??o do buqu? de aromas existentes na cerveja, se produzidos em maior quantidade, podem passar para o produto final sabor e odor desagrad?veis. Dentre esses subprodutos, as dicetonas vicinais totais constituem o principal componente, uma vez que, al?m de serem limitantes quanto ? trasfega do produto para as etapas subsequentes, possuem um baixo limiar de percep??o pelo consumidor e passam sabor e odor desagrad?veis. Devido ? instabilidade da qualidade das mat?rias primas principais e dos controles de processo durante a fermenta??o, o desenvolvimento de formas alternativas de produ??o de cerveja com impactos positivos no tempo total de fermenta??o e na qualidade do produto final, ? um grande desafio dentro das cervejarias. Neste trabalho, foi realizada uma acidifica??o pr?via do fermento pastoso, utilizando-se, para isso, ?cido fosf?rico, grau aliment?cio e reduzindo-se o pH do fermento de aproximadamente 5,30 para 2,20. Al?m disso, com intuito de minimizar os valores m?ximos encontrados de dicetonas totais no tanque fermentador, foram alteradas duas vari?veis de entrada: a curva de temperatura e a multiplica??o celular. Obtiveram-se, como melhores resultados, o tempo total de fermenta??o de 151 horas e concentra??o de dicetonas totais de 0,08 ppm. Desta forma, foi confirmado que a acidifica??o pr?via do fermento, bem como o controle de temperatura e multiplica??o celular no processo fermentativo, aumentam a performance do processo atrav?s da redu??o das dicetonas totais e conseq?entemente, a redu??o do tempo total de fermenta??o com concentra??o de dicetonas abaixo do valor esperado (Max: 0,10 ppm)

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-04-24T18:20:13Z No. of bitstreams: 1 AntonioDeAnchietaCamaraJunior_DISSERT.pdf: 21070528 bytes, checksum: bc9c34ff6fd37e4d09b586b82e55c977 (MD5) / Approved for entry into archive by Monica Paiva (monicalpaiva@hotmail.com) on 2017-04-24T18:29:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AntonioDeAnchietaCamaraJunior_DISSERT.pdf: 21070528 bytes, checksum: bc9c34ff6fd37e4d09b586b82e55c977 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T18:29:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntonioDeAnchietaCamaraJunior_DISSERT.pdf: 21070528 bytes, checksum: bc9c34ff6fd37e4d09b586b82e55c977 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Mol?culas bioativas tais como flavonoides, antioxidantes e vitaminas podem ser incorporadas a produtos aliment?cios com apelo funcional. No entanto, flavonoides lipossol?veis como a fisetina possuem biodisponibilidade reduzida quando submetidos ao pH do trato gastrointestinal humano. Nesse caso, a microencapsula??o desse tipo de bioativo em c?lulas de levedura Saccharomyces cerevisiae atrav?s de choque osm?tico ? uma estrat?gia promissora para proteger e transportar essas subst?ncias in vivo. Contudo, at? o presente n?o havia sido relatado estudo quantitativo sobre esse processo. Desse modo, este trabalho avaliou a efici?ncia do processo de encapsula??o (EE) e o teor de fisetina internalizada (FI) nas c?lulas da levedura atrav?s de dois m?todos de quantifica??o: (1) cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE) e (2) espectrofotometria UV-Vis?vel. Os par?metros operacionais foram determinados por meio do delineamento composto central rotacional 23. As vari?veis analisadas foram a concentra??o de fisetina (C), a press?o osm?tica de desidrata??o (P) e a temperatura do processo (T). A caracteriza??o das c?lulas foi realizada atrav?s de microscopia confocal a laser (MCL), microscopia eletr?nica de varredura (MEV) e viabilidade celular. Os melhores resultados foram obtidos pelo m?todo 2 nas condi??es dos pontos centrais (C = 2,00 mg.mL-1, P = 30 MPa e T = 25 ?C), onde a EE = 33,30 % e teor de FI = 1,20 mg. Os ensaios de MCL mostraram que a etapa de lavagem com etanol, indispens?vel no m?todo 1, influenciou negativamente a EE e o teor de FI. As imagens em alta resolu??o capturadas pela MEV mostraram que o choque osm?tico n?o afetou a estrutura encapsulante do envelope celular da levedura. A manuten??o das c?lulas em solu??es com P ? 30 MPa reduziu ligeiramente a viabilidade celular (84 % vi?veis) e a compara??o com a amostra controle n?o mostrou diferen?a significativa (p.< 0,05). Os resultados encontrados demonstram o forte potencial do uso das leveduras como matrizes encapsulantes para componentes bioativos sens?veis. Estes resultados demonstram que essa t?cnica pode ser aplicada com sucesso na produ??o de produtos aliment?cios com alto teor de compostos bioativos. / Mol?culas bioativas tais como flavonoides, antioxidantes e vitaminas podem ser incorporadas a produtos aliment?cios com apelo funcional. No entanto, flavonoides lipossol?veis como a fisetina possuem biodisponibilidade reduzida quando submetidos ao pH do trato gastrointestinal humano. Nesse caso, a microencapsula??o desse tipo de bioativo em c?lulas de levedura Saccharomyces cerevisiae atrav?s de choque osm?tico ? uma estrat?gia promissora para proteger e transportar essas subst?ncias in vivo. Contudo, at? o presente n?o havia sido relatado estudo quantitativo sobre esse processo. Desse modo, este trabalho avaliou a efici?ncia do processo de encapsula??o (EE) e o teor de fisetina internalizada (FI) nas c?lulas da levedura atrav?s de dois m?todos de quantifica??o: (1) cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE) e (2) espectrofotometria UV-Vis?vel. Os par?metros operacionais foram determinados por meio do delineamento composto central rotacional 23. As vari?veis analisadas foram a concentra??o de fisetina (C), a press?o osm?tica de desidrata??o (P) e a temperatura do processo (T). A caracteriza??o das c?lulas foi realizada atrav?s de microscopia confocal a laser (MCL), microscopia eletr?nica de varredura (MEV) e viabilidade celular. Os melhores resultados foram obtidos pelo m?todo 2 nas condi??es dos pontos centrais (C = 2,00 mg.mL-1, P = 30 MPa e T = 25 ?C), onde a EE = 33,30 % e teor de FI = 1,20 mg. Os ensaios de MCL mostraram que a etapa de lavagem com etanol, indispens?vel no m?todo 1, influenciou negativamente a EE e o teor de FI. As imagens em alta resolu??o capturadas pela MEV mostraram que o choque osm?tico n?o afetou a estrutura encapsulante do envelope celular da levedura. A manuten??o das c?lulas em solu??es com P ? 30 MPa reduziu ligeiramente a viabilidade celular (84 % vi?veis) e a compara??o com a amostra controle n?o mostrou diferen?a significativa (p.< 0,05). Os resultados encontrados demonstram o forte potencial do uso das leveduras como matrizes encapsulantes para componentes bioativos sens?veis. Estes resultados demonstram que essa t?cnica pode ser aplicada com sucesso na produ??o de produtos aliment?cios com alto teor de compostos bioativos.